第一篇：中藥化學(xué)和天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講稿講解
防己中生物堿的提取、分離與鑒定
[適用對象]——藥學(xué)、藥劑、環(huán)境、中藥、中藥國際交流、中藥 知識產(chǎn)權(quán)、中藥制藥工程、中藥資源專業(yè) [實(shí)驗(yàn)學(xué)時]——24
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
學(xué)習(xí)生物堿類成分的一般提取分離法，通過實(shí)驗(yàn)要求：
（1）掌握生物堿的溶劑提取法和粉防己堿與防己諾林堿的分離方法。（2）熟悉生物堿的一般理化性質(zhì)。
（3）熟悉粉防己堿和防己諾林堿的檢識方法。
（4）掌握回流法、萃取法、結(jié)晶法等的基本操作過程及注意事項。
二、實(shí)驗(yàn)原理
本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)粉防己堿和防己諾林堿游離時難溶于水，易溶于氯仿，成鹽后易溶于水，難溶于氯仿的性質(zhì)提取得到總生物堿。再利用兩者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分離。
三、儀器設(shè)備
（單口，雙口）圓底燒瓶，冷凝管，鐵架臺，分液漏斗，三角燒瓶，濾紙，微量抽濾器，布氏漏斗，層析槽，毛細(xì)管等。
四、相關(guān)知識點(diǎn)
防己為防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。總生物堿含量約為1.5~2.3%，主要為粉防己堿和防己諾林堿。
1、粉防己堿（tetrandrine），又稱漢防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量約為1%，為無色針狀結(jié)晶（乙醚），mp.217~218℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有機(jī)溶劑，幾乎不溶于水和石油醚。粉防己堿 R=CH3 防己諾林堿 R=H
2、防己諾林堿（fangchinoline），又稱漢防己乙素，分子式C37H40N2O6，在
防己中的含量約為0.5%，六面體粒狀結(jié)晶（丙酮），mp.237~238℃。溶解度與粉防己堿相似，但因較粉防己堿多一個酚羥基，故極性較粉防己堿稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己堿，可利用此性質(zhì)相互分離。
五、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）總生物堿的提取
稱取粉防己粗粉150克，置1000ml圓底燒瓶中，加95%乙醇以浸透并蓋沒生藥為度（約需400ml）。水浴加熱回流1小時（加熱期間振搖數(shù)次），濾出提取液，藥渣再加95%乙醇以浸沒為度（約需300ml），如上法再熱提一次，濾出提取液，最后將瓶內(nèi)藥渣倒在布氏漏斗上抽濾壓干，藥渣棄去。合并兩次乙醇提取液，放冷后如有絮狀物析出，再抽濾一次，澄清液回收乙醇，濃縮至糖漿狀無乙醇味為止，得乙醇總提取物。
（二）生物堿的分離
1、親脂性生物堿和親水性生物堿的分離
糖漿狀總提取物移至大三角燒瓶中，逐漸加入1%鹽酸稀釋，充分?jǐn)嚢枋股飰A溶解，不溶物呈樹脂狀析出，直至加酸水溶液不再發(fā)生混濁為止（約需300ml），靜置，傾出上清液，瓶底的樹脂狀雜質(zhì)以1%鹽酸少量分次洗滌，直至洗液對生物堿沉淀試劑反應(yīng)微弱時為止。
合并洗液和濾液，靜置片刻，抽濾得澄清濾液，置1000ml三角燒瓶中，滴加濃氨水至PH9左右，此時親脂性叔胺堿游離析出（如有發(fā)熱現(xiàn)象，設(shè)法冷卻），待溶液冷后，移至1000ml的分液漏斗中，加氯仿150ml振搖萃取。分取氯仿層，氨堿性水溶液再以新鮮氯仿萃取數(shù)次，每次用氯仿100ml，直至氯仿抽提液的生物堿反應(yīng)微弱時止（檢查時取少量氯仿抽提液置表面皿上，待溶劑揮干，殘留物中加稀鹽酸數(shù)滴使溶解，再加生物堿沉淀試劑試之），合并氯仿液。
此氯仿液中含親脂性叔胺堿，氯仿萃取過的氨堿性水溶液含親水性季銨堿。后者取出少量，加鹽酸酸化至PH4~5，滴加雷氏銨鹽飽和水溶液，觀察有無沉淀出現(xiàn)。
2、親脂性堿中酚性和非酚性堿的分離
氯仿萃取液合并約（300~400ml）移至1000ml的分液漏斗中，以2%氫氧化鈉水溶液40ml一次，萃取2次，氯仿液再用水20ml一次，洗滌2次。分取氯仿層，加無水碳酸鉀脫水干燥，過濾，濾液常壓下回收氯仿。將氯仿全部蒸去，殘留溶劑去瓶塞后揮干，得粗總非酚性生物堿。
2%氫氧化鈉提取液合并后取出少量，加鹽酸酸化后進(jìn)行生物堿反應(yīng)。
附注：防己諾林堿雖有酚羥基但不溶于氫氧化鈉水溶液中，因而和非酚性生物堿一起在氯仿層中。
3、叔胺生物堿的純化
在盛有非酚性生物堿的圓底燒瓶中，加丙酮加熱溶解，過濾，用熱丙酮洗滌濾紙，濾液、洗液合并，回收丙酮至適量，放冷，加塞靜置待結(jié)晶析出。析出完全后抽濾收集。母液再濃縮重復(fù)收集，尚可得結(jié)晶。合并數(shù)次結(jié)晶即為粉防己堿和防己諾林堿的混合物。
4、粉防己堿和防己諾林堿的分離
苯冷浸法：取上述結(jié)晶狀混合物堿稱重，置于50ml三角瓶中，加5倍量的苯冷浸，時時振搖，冷浸半小時后，過濾分開苯溶液和苯不溶物。
苯溶液回收苯至盡，殘留物以丙酮重結(jié)晶，得細(xì)針狀結(jié)晶，為粉防己堿。苯不溶物待揮發(fā)去殘留的苯后，也用丙酮重結(jié)晶，可得粒狀結(jié)晶，為防己諾林堿。
（三）生物堿的一般鑒定方法
1、沉淀反應(yīng)
（1）碘化汞鉀試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液1ml，加碘化汞鉀試劑（Mayer氏試劑）1~2滴，出現(xiàn)白色或類白色沉淀者為陽性反應(yīng)，表示有生物堿存在。
（2）碘化鉍鉀試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液1ml，加碘化鉍鉀試劑（Dragendorff氏試劑）1~2滴，出現(xiàn)棕黃至棕紅色沉淀者為陽性反應(yīng)，表示有生物堿存在。（3）碘—碘化鉀試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液1ml，加碘—碘化鉀試劑（Wangner氏試劑）1~2滴，生成褐色至暗褐色沉淀者為陽性反應(yīng)，表示有生物堿存在。（4）雷氏銨鹽試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液（PH4~5）1ml，加雷氏銨鹽試劑數(shù)滴，生成黃紅色沉淀者為陽性反應(yīng)，表示有生物堿存在。
（5）苦味酸試驗(yàn)：取樣品的中性溶液1ml，加苦味酸的飽和水溶液1~2滴，生成黃色沉淀者為陽性反應(yīng)，表示有生物堿存在。
2、薄層色譜
吸附劑：中性氧化鋁（Ⅲ級）干法制版 樣品：（1）粉防己堿（2）防己諾林堿
（3）總提取物（均以氯仿溶解）展開劑：氯仿—丙酮—苯（3：1：4）
顯色劑：噴以改良碘化鉍鉀試劑（干法鋪板顯色時，要在溶劑未干前噴顯色劑，否則氧化鋁粉末易飛散，使薄層破壞）。
（四）實(shí)驗(yàn)流程），濾液 藥渣（棄去）
回收（沸石）乙醇至無醇味（雷氏銨鹽試驗(yàn)）
水分2次洗滌，無水（酚性堿）碳酸鉀干燥后，濾過 沉淀反應(yīng) 回收氯仿
加丙酮30ml，加熱溶解，濾過 濃縮至適量，過夜析晶，抽濾
加丙酮加熱溶解，趁熱過濾加丙酮加熱溶解，趁熱過濾 濾液 濾液
放置析晶，濾過，干燥放置析晶，濾過，干燥 粉防己堿（針狀結(jié)晶）防己諾林堿（粒狀結(jié)晶）
六、實(shí)驗(yàn)報告要求
應(yīng)包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程、數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果及建議等。
七、思考題
1、粉防己堿和防己諾林堿在結(jié)構(gòu)與性質(zhì)上有何異同點(diǎn)？實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)怎樣利用它們的共性及個性進(jìn)行提取分離？請設(shè)計方案。
2、分離水溶性與脂溶性生物堿的常用方法有哪些？
3、從防己中分離脂溶性、水溶性堿，酚性、非酚性堿的依據(jù)是什么？
4、萃取過程中怎樣防止和消除乳化？
5、生物堿的沉淀反應(yīng)應(yīng)在什么條件下進(jìn)行，為什么？
八、實(shí)驗(yàn)成績評定方法
本門實(shí)驗(yàn)課程考核成績占課程總成績的30%，該實(shí)驗(yàn)考核成績占實(shí)驗(yàn)總成績的40%。考核分實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)、實(shí)驗(yàn)過程操作、實(shí)驗(yàn)報告等三個方面，成績計算為預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)占20%（包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程）、實(shí)驗(yàn)過程操作占40%（包括數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力）、實(shí)驗(yàn)報告占40%（包括實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果）。槐花中黃酮類化合物提取、分離和鑒定 [適用對象]——藥學(xué)、環(huán)境、中藥專業(yè)
[實(shí)驗(yàn)學(xué)時]——18
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?/p>
學(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求：
（1）通過蕓香苷提取與精制，掌握沸水提取黃酮類化合物的原理和操作。（2）掌握由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。（3）掌握黃酮苷和黃酮苷元的分離。
（4）掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
由槐花中提取蕓香苷的方法很多，本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和精制，或根據(jù)蕓香苷分子中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而增大溶解度，以堿水為溶劑煮沸提取，其提取液加酸酸化后則蕓香苷游離析出。
三、儀器設(shè)備
單口圓底燒瓶，冷凝管，鐵架臺，燒杯，電爐，烘箱，水浴鍋，三角燒瓶，濾紙，微量抽濾器，布氏漏斗，試管，層析槽，石棉網(wǎng)，毛細(xì)管等。
四、相關(guān)知識點(diǎn)
槐花為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含蕓香苷（蘆丁），含量高達(dá)12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。
蕓香苷（rutoside），分子式C27H30O16，分子量610.51，淡黃色針狀結(jié)晶，mp.177~178℃。難溶于冷水（1：8000），略溶于熱水（1：200），溶于熱甲醇（1：
7），冷甲醇（1：100），熱乙醇（1：30），冷乙醇（1：650），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，分子量302.23，黃色針狀結(jié)晶，mp.314℃（分解）。溶于熱乙醇（1：23），冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，幾不溶于水。
HOOOH OH 蕓香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖 槲皮素 R=H
五、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）蕓香苷的提?。ㄋ崛》ǎ?/p>
稱取槐花米50克，置1000ml燒杯中，加沸水800ml，加熱保持微沸1小時趁熱用棉花過濾，濾渣再加600ml水煮沸1小時，趁熱過濾，合并2次濾液放置過夜，析出大量淡黃色沉淀，抽濾，沉淀用水洗3~4次，抽干置于空氣中干燥即得粗蕓香苷，稱重計算得率。
（二）蕓香苷的水解
稱取蕓香苷粗品2克，盡量研細(xì)，投入500ml圓底燒瓶中，加2%H2SO4溶液150ml，接上冷凝管，直火加熱煮沸1.5小時，濾取沉淀物（即苷元槲皮素），濾液保留以鑒定糖部分，槲皮素沉淀經(jīng)水洗滌抽干，自然干燥，稱重并計算水解得率。
（三）蕓香苷、槲皮素重結(jié)晶
稱取蕓香苷粗品2克，加甲醇50ml，加熱溶解，趁熱過濾，濾液濃縮一半，6 放置析晶，過濾。濾液適當(dāng)濃縮后放置，復(fù)析出結(jié)晶，濾取結(jié)晶。必要時結(jié)晶再用甲醇重結(jié)晶一次。
取槲皮素全部，加適量95%乙醇，同上法重結(jié)晶一次。
（四）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定
1、點(diǎn)樣：取新華一號色譜濾紙，規(guī)格20cm×20cm，在濾紙下端約2cm處用鉛筆畫一直線，間隔2cm分別點(diǎn)上下列樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）糖樣品溶液（2）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液
（3）標(biāo)準(zhǔn)鼠李糖溶液（4）蕓香苷樣品甲醇溶液（5）蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液（6）槲皮素樣品甲醇溶液
（7）槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液
2、展開劑：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上層上行展開。
3、顯色：展開完畢，將濾紙取出，記錄溶劑前沿位置。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點(diǎn)之間剪開，分別顯色。
（1）糖的顯色：噴苯胺-鄰苯二甲酸試劑，在105℃烘10分鐘，顯棕色斑點(diǎn)。計算并比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。（2）黃酮化合物的顯色：
①可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點(diǎn)。
②經(jīng)氨氣熏后再觀察。
③待氨氣揮盡后，噴1%AlCl3甲醇溶液，再觀察。④計算并比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。
（五）蕓香苷和槲皮素性質(zhì)試驗(yàn)
1、酸性試驗(yàn)：取小試管8支，每4支一組，第一組每管中加入蕓香苷1mg，第二組每管中加入槲皮素1mg，每組四管中分別加入稀氨水、5%碳酸氫鈉水溶液、5%碳酸鈉水溶液、1%氫氧化鈉水溶液各2ml，振搖后觀察各管溶解情況。溶解的溶液應(yīng)呈黃色。再加濃鹽酸數(shù)滴酸化，黃色褪去或變淺，并有沉淀析出或產(chǎn)生渾濁。
2、Molish反應(yīng)：取試樣1mg置小試管中，加乙醇0.5ml溶解，加α-萘酚試劑1~2滴，搖勻。傾斜試管，沿管壁徐徐注入濃硫酸約0.5ml靜置。觀察兩層溶液的界面變化，出現(xiàn)紫色環(huán)者為陽性，表示樣品分子中含有糖的結(jié)構(gòu)（糖和苷類均呈陽性反應(yīng)），比較蕓香苷和槲皮素的不同。
3、Fehling試驗(yàn)：取試樣數(shù)mg，溶于0.5ml熱水中，加斐林氏試劑甲、乙等量 7 混合液2ml，沸水浴上加熱，如產(chǎn)生氧化亞銅的暗紅色或黃色沉淀表示有還原糖或其它還原性物質(zhì)。充分加熱作用后濾去沉淀，濾液滴加濃鹽酸酸化，在水浴上加熱水解，水解液以10% NaOH中和，再進(jìn)行斐林氏試驗(yàn)，此時顯陽性反應(yīng)者表示樣品為糖苷化合物。比較蕓香苷和槲皮素的不同。
4、鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取蕓香苷1mg，加乙醇2ml，在水浴上加熱溶解，加鎂粉約50mg，滴加數(shù)滴濃鹽酸，溶液由黃色漸變紅色者表示有黃酮類化合物。以同法試驗(yàn)槲皮素。
如用鋅粉代替鎂粉，則蕓香苷（3-羥基與糖結(jié)合成苷）仍有作用，而槲皮素（黃酮醇類）不呈還原顯色反應(yīng)。因此可區(qū)別兩者。
5、鋯-檸檬酸反應(yīng)：取樣品1mg，加乙醇2ml，在水浴上加熱溶解，再加2%二氯氧鋯甲醇溶液3~4滴，凡有3-羥基或5-羥基的黃酮即呈鮮黃色。然后加2%檸檬酸甲醇溶液3~4滴，有3-羥基的黃酮黃色不褪。比較蕓香苷和槲皮素的不同。
6、三氯化鋁反應(yīng)：取樣品1mg溶于甲醇中，加1%三氯化鋁甲醇溶液2~3滴，黃酮類呈鮮黃色，并有熒光。
（六）實(shí)驗(yàn)流程 槐花米50g
2g蕓香苷粗品 甲醇重結(jié)晶 2%硫酸，放冷抽濾 精制蕓香苷
濾液（糖類）沉淀（苷元）
95%乙醇重結(jié)晶
鑒定反應(yīng) 槲皮素精制品
六、實(shí)驗(yàn)報告要求
應(yīng)包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程、數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果及建議等。
七、思考題
1、黃酮類化合物還有哪些提取方法？蕓香苷的提取還可用什么方法？
2、酸水解常用什么酸？為什么用硫酸比用鹽酸水解后處理更方便？
3、本實(shí)驗(yàn)中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系。
4、試討論苷類成分的檢識程序。
八、實(shí)驗(yàn)成績評定方法
本門實(shí)驗(yàn)課程考核成績占課程總成績的30%，該實(shí)驗(yàn)考核成績占實(shí)驗(yàn)總成績的40%。考核分實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)、實(shí)驗(yàn)過程操作、實(shí)驗(yàn)報告等三個方面，其成績計算為預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)占20%（包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程）、實(shí)驗(yàn)過程操作占40%（包括數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力）、實(shí)驗(yàn)報告占40%（包括實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果）?；被ㄖ悬S酮類化合物分離和鑒定
[適用對象]——中藥國際交流、中藥知識產(chǎn)權(quán)、中藥制藥工程、中藥資源專業(yè) [實(shí)驗(yàn)學(xué)時]——9
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?/p>
學(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求：（1）了解沸水提取黃酮類化合物的原理和操作。（2）了解由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。
（3）掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
由槐花中提取蕓香苷的方法很多，本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和精制。紙色譜的分離原理是利用各種化合物在流動相和固定相中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離目的。
三、儀器設(shè)備
烘箱，水浴鍋，鐵架臺，燒杯，三角燒瓶，濾紙，試管，層析槽，毛細(xì)管等。
四、相關(guān)知識點(diǎn)
槐花為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含蕓香苷（蘆 9 丁），含量高達(dá)12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。
蕓香苷（rutoside），分子式C27H30O16，分子量610.51，淡黃色針狀結(jié)晶，mp.177~178℃。難溶于冷水（1：8000），略溶于熱水（1：200），溶于熱甲醇（1：
7），冷甲醇（1：100），熱乙醇（1：30），冷乙醇（1：650），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，分子量302.23，黃色針狀結(jié)晶，mp.314℃（分解）。溶于熱乙醇（1：23），冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，幾不溶于水。
HOOOH OH 蕓香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖
槲皮素 R=H
五、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定
1、點(diǎn)樣：取新華一號色譜濾紙，規(guī)格20cm×20cm，在濾紙下端約2cm處用鉛筆畫一直線，間隔2cm分別點(diǎn)上下列樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）糖樣品溶液（2）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液
（3）標(biāo)準(zhǔn)鼠李糖溶液（4）蕓香苷樣品甲醇溶液
（5）蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液（6）槲皮素樣品甲醇溶液（7）槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液
2、展開劑：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上層上行展開。
3、顯色：展開完畢，將濾紙取出，記錄溶劑前沿位置。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點(diǎn)之間剪開，分別顯色。
（1）糖的顯色：噴苯胺-鄰苯二甲酸試劑，在105℃烘10分鐘，顯棕色斑點(diǎn)。計算并比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。（2）黃酮化合物的顯色：
①可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點(diǎn)。②經(jīng)氨氣熏后再觀察。
③待氨氣揮盡后，噴1%AlCl3甲醇溶液，再觀察。④計算并比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。薄層層析法測定氧化鋁的活性
[適用對象]——藥學(xué)、藥劑、環(huán)境、中藥、中藥國際交流、中藥 知識產(chǎn)權(quán)、中藥制藥工程、中藥資源專業(yè) [實(shí)驗(yàn)學(xué)時]——3 氧化鋁是常用的吸附劑，它的活性對分離效果有很大的影響。為了使樣品分離好，結(jié)果重現(xiàn)性好，就需要選用一定活性的氧化鋁。
一、目的：了解吸附劑活性測定的目的，掌握吸附劑活性測定的原理及方法，練習(xí)薄層層析的基本操作。
二、方法：氧化鋁干法鋪板，利用對其有親和力的有機(jī)染料來標(biāo)定其活性
三、原理：根據(jù)染料被吸附的程度不同而定級
四、實(shí)驗(yàn)操作：
1、測定用有機(jī)染料（偶氮苯、蘇丹黃和對氨基偶氮苯）：各稱取20毫克（偶氮苯30毫克），溶于四氯化碳（經(jīng)氫氧化鈉干燥后重新蒸餾）中，配成染料溶液，供測定點(diǎn)樣用。
2、步驟
⑴、制版：干法鋪板
⑵、各染料液點(diǎn)樣：
（下端1.5-2cm，點(diǎn)距1 cm，點(diǎn)直徑0.5 cm，可重復(fù)加樣2-3次）⑶、密閉層析槽中用CCl4上行傾斜法展開：
（先飽和，注意（哪端？浸沒程度？）事項，使其成20-30度傾斜，當(dāng)展至薄層板的2/3時，立即取出，測定Rf值）
⑷、氧化鋁活度的判定：Rf值對照P167表中數(shù)據(jù)，即得活度
五、思考題
1、氧化鋁活性測定的原理及目的是什么？
2、為何可以用這些染料作標(biāo)準(zhǔn)來定級？
第二篇：天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講稿
作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
第一章
黃柏中小檗堿的提取、分離與鑒定
教學(xué)目的要求掌握黃柏中小檗堿(季胺型生物堿)的提取原理和方法。掌握干法裝柱和濕法裝柱的操作方法
1、掌握鑒定小檗堿(已知化合物)的一般方法。教學(xué)重點(diǎn)難點(diǎn)季銨型生物堿的理化性質(zhì)及提取方法。
2、滲漉法的操作過程及注意事項。
3、結(jié)晶法的注意事項
4、掌握薄層色譜鑒定的方法實(shí)驗(yàn)一
黃柏中鹽酸小檗堿的提取
（一）實(shí)驗(yàn)原理
根據(jù)黃柏中含粘液質(zhì)較多的特點(diǎn)，首先用石灰乳使粘液質(zhì)生成難溶于水的鈣鹽，用堿水自黃柏中提出小檗堿，再加鹽酸使其轉(zhuǎn)化為鹽酸小檗堿沉淀析出。小檗堿能緩緩溶解于水中，在冷乙醇中的溶解度不大，但易溶于熱水或熱乙醇，難溶于苯、氯仿、丙酮。小檗堿與酸結(jié)合脫去一分子水而成鹽。小檗堿鹽酸鹽在冷水中溶解度小，較易溶于沸水，幾不溶于乙醇，小檗堿的硫酸鹽、磷酸鹽在水中溶解度較小，與大分子有機(jī)酸生成的鹽在水中的溶解度很小。黃柏中主要含有小檗堿，其結(jié)構(gòu)如下
OOO+NOHOMeOMeOON:OHOMeOMeONHCHOOMeOMe
季銨式（紅棕色）
醇式（黃色）
醛式（黃色）
小檗堿的三種互變異構(gòu)體
川黃柏含小檗堿約1.37％～5.8％，關(guān)黃柏含小檗堿約0.60％～1.64％。作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
黃柏粗粉石灰乳攪拌 均勻，水浸漬后 滲漉滲漉液加入總體 積10％NaCl，靜置，過 濾沉 淀溶于20倍量沸水趁熱抽濾不 溶物濾液濃HCl至pH2，放置，過 濾濾液沉 淀 純 水洗 至中性，抽干(二)實(shí)驗(yàn)方法
鹽 酸小檗堿
實(shí)驗(yàn)二 黃柏中鹽酸小檗堿的純化及鑒定
一、純化
1.濕法裝柱色譜法
吸附劑：中性氧化鋁(100～200目)35g置于燒杯中，加入50ml 95％乙醇，調(diào)成漿狀，濕法裝柱。
上樣：取50～100mg自制鹽酸小檗堿，溶于少量95％熱乙醇中，加入色譜柱中。洗脫：95％乙醇洗脫，收集開始流出的鮮黃色帶，即為純化的鹽酸小檗堿。2.結(jié)晶法
抽率上次提取液，將得到的濾餅用少量水加熱溶解，趁熱抽率，濾液放冷等待析晶，再抽率得到晶體，即鹽酸小檗堿純品。
二、薄層色譜鑒定
將提取分離出的鹽酸小檗堿樣品與鹽酸小檗堿的對照品共薄層色譜，比較其Rf值是否一致。
吸附劑：硅膠G薄層板
展開劑：① 苯一醋酸乙酯一異丙醇一甲醇一水(6：3：1.5：l.5：0.3)，氨蒸汽飽和。
②氯仿-甲醇-氨水(15：8：1)
顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑
1、滲漉前為什么要加入石灰乳攪拌？ 2.提取時加氯化鈉的作用是什么？
3、在制備薄層色譜板時有哪些注意事項？ 第四章
蘆丁的提取、分離、精制和鑒定
1、掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理及操作。
2、掌握黃酮苷的水解原理及操作
3、掌握黃酮類及糖類化合物的檢識。
1、堿溶酸沉法提取的原理
2、黃酮的檢識反應(yīng)實(shí)驗(yàn)七
槐米中蘆丁的提取 作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
實(shí)驗(yàn)原理：蘆丁結(jié)構(gòu)中具有酚羥基，顯酸性，可用堿溶酸沉法提取，堿用石灰水，酸用濃鹽酸。
實(shí)驗(yàn)步驟：
稱取槐米30g，在乳缽中研碎，置l000ml的搪瓷杯中，加入300ml飽和石灰水①(以棉花過濾至澄明)加熱煮沸30分鐘，趁熱過濾(以棉花)，殘渣再用200ml飽和石灰水煮沸30分鐘。趁熱過濾，合并兩次濾液．加濃鹽酸(邊加邊攪拌)調(diào)PH3～4②(放置過夜)次日傾出上清液，抽濾沉淀，蒸餾水洗至PH5～6，70℃干燥，得粗蘆丁。注意：
①加石灰乳既可以達(dá)到堿溶解提取蘆丁目的還可以除去槐花米中的多糖類、粘液質(zhì)等。②酸化時PH過低會使蘆丁形成烊鹽而降低收率。
實(shí)驗(yàn)八 蘆丁的精制、水解及鑒定
實(shí)驗(yàn)原理：蘆丁在水中熱溶冷不溶，可用水做溶劑，利用結(jié)晶法精制蘆丁。
一、蘆?。ㄊ|香苷）的精制
水結(jié)晶法：率上次提取液，得蘆丁粗品，加蒸餾水300ml，煮沸至蘆丁全部溶解，趁熱立即抽濾，冷卻后即可析出結(jié)晶，抽濾，60～80℃烘干，得蘆丁精制品。
二、蘆丁的水解和槲皮素的分離
取蘆丁1g置500ml圓底燒瓶中加2％H2SO4100ml回流30分鐘，(加熱約數(shù)分鐘后，溶液完全澄清，20分鐘后又逐漸析出黃色針狀結(jié)晶)過濾即得槲皮素．必要時用稀乙醇重結(jié)晶即可得以含2個分子結(jié)晶槲皮素，110℃真空干燥，即可得無水物。濾液：供糖的鑒定。
三、化學(xué)鑒定
取蘆丁3～4mg，加乙醇5～6ml使溶解，制成樣品溶液A，取槲皮素3～4mg，加乙醇5～6ml使溶解，制成樣品溶液B，取蘆丁的水解濾液為C，按下列方法進(jìn)行試驗(yàn)。呈色反應(yīng)
(1)鹽酸－鎂粉反應(yīng)
取樣品溶液A和B各1～2ml，分別加2滴濃鹽酸，再酌加少許鎂粉，注意觀察顏色變化情況。
(2)鋯鹽－枸櫞酸反應(yīng)
取樣品溶液A和B各1～2ml，分別滴加2％ZrOCl2的甲醇溶液3～4滴。注意觀察顏色變化情況，再繼續(xù)向試管中加入2％枸櫞酸的甲醇溶液3～4滴，并詳細(xì)記錄顏色變化情況。
(3)a-萘酚反應(yīng)(Molish反應(yīng))取樣品溶液C l～2ml，然后再加10％a-萘酚乙醇溶液2～3滴，搖勻，沿管壁緩緩加入濃硫酸lml，注意觀察溶液界面產(chǎn)生的顏色變化。作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
槐花米粗粉（20g）置500ml燒杯中，加水300ml，在攪拌下加入石灰乳（1~1.5g），調(diào)至PH8~9，加熱至微沸，保持30min，趁熱抽濾。殘渣濾液在60~70℃下用濃鹽酸調(diào)至PH4~5，精置1hr,抽濾。濾液沉淀（粗制蘆?。┲亟Y(jié)晶將沉淀懸浮于蒸餾水中，加熱煮沸15min，趁熱過濾殘渣濾液充分靜置后過濾，60~70℃下干燥蘆?。ň破罚?/p>
2、薄層色譜鑒別（糖的紙色譜鑒定）
點(diǎn)樣：取新華一號濾紙，15厘米長，寬度按需要決定。用毛細(xì)管點(diǎn)上以下溶液：
1、水解濃縮液
2、葡萄糖(Rf0.18)對照品溶液
3、鼠李糖(RfO.37)對照品溶液 展開：用正丁醇一醋酸一水(4：1：5)上行展開。
顯色：噴苯胺-鄰苯二甲酸試劑，于100℃加熱5分鐘
1、簡述堿溶酸沉法的原理。
2、蕓香苷水解時為何會出現(xiàn)沉淀——澄清——沉淀的現(xiàn)象
3、怎樣確定蘆丁結(jié)構(gòu)中糖基是連接在槲皮素C3-OH上? 第二章
大黃中游離蒽醌成分的提取、分離和鑒定
1、掌握PH梯度萃取法的原理和操作技術(shù)。
2、掌握柱色譜法分離精制大黃酚的實(shí)驗(yàn)方法。
3、掌握羥基蒽醌類化合物的理化性質(zhì)及鑒定方法。
1、PH梯度萃取法的原理和操作技術(shù)
2、柱色譜法分離精制大黃酚的實(shí)驗(yàn)方法
3、羥基蒽醌類化合物的理化性質(zhì)及鑒定方法實(shí)驗(yàn)三 大黃中蒽醌類化合物的提取 作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
虎杖粗粉95%乙醇回流三次,濾過藥渣濾液減壓回收乙醇至干膏狀物加水20ml,乙醚100ml,充分振搖后放置,傾出醚層,再加50ml乙醚振搖,放置,傾出醚層,同法操作五次.醚層?(總游離蒽醌)剩余物(含苷類)實(shí)驗(yàn)四
大黃中游離蒽醌的分離及鑒定
1、化學(xué)檢識：分別取大黃素、大黃酚等少許，用乙醚溶解，做如下反應(yīng)： A．堿液試驗(yàn)：取試液1ml，加20%NaOH數(shù)滴，觀察顏色。B．醋酸鎂反應(yīng)：取試樣1ml，加醋酸鎂試劑數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。
2、薄層鑒定：
吸附劑：硅膠G－CMC-Na板
展開劑：石油醚（30~60℃）-乙酸乙酯-甲酸(15：5：1)上層溶液。
顯色劑：（1）氨蒸氣熏。（2）5%KOH噴霧。
[實(shí)驗(yàn)說明及注意事項]
(1)在乙醚提取過程中，如乙醚揮發(fā)，可酌量補(bǔ)加。
(2)加HCl酸化時產(chǎn)生大量CO2氣體,小心防止氣體產(chǎn)生時，內(nèi)容物溢出。
醚層 ?5%NaHCO3液萃取完全5%NaHCO3液乙醚層6NHCl調(diào)PH至2,5%Na2CO3液萃取完全稍放置,濾過5%Na2CO3液乙醚層2%NaOH萃取4～5次濃HCl調(diào)PH至2,濾液沉淀放置,濾過水洗至中NaOH液乙醚層沉淀物性,干燥HCl調(diào)PH至3,(β-谷甾醇)水洗至中性,抽放置,抽濾強(qiáng)酸性成分干,干燥,依次以丙酮、甲醇重沉淀物結(jié)晶水洗至中性,抽干,干燥,以MeOH-大黃素結(jié)晶CHCl3重結(jié)晶大黃酚和大黃素-6-甲醚混合物
1、PH梯度萃取法的原理是什么?適用哪些中藥成分的分離? 作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
2、大黃酚、大黃素和大黃素-6-甲醚酸性及極性強(qiáng)弱，應(yīng)如何排列?
3、根據(jù)虎杖中所含羥基蒽醌的結(jié)構(gòu)，說明為什么它們可以分別被不同強(qiáng)度的堿性水溶液提取出來？
第八章
天然藥物化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)
1、掌握植物主要成分試管預(yù)試及紙色譜、薄層色譜預(yù)試的一般方法。
2、了解未知成分的植物怎樣進(jìn)行初步分離，根據(jù)各類化合物的性質(zhì)，判斷該植物應(yīng)含有什么類型的成分。
1、藥物化學(xué)預(yù)試驗(yàn)的意義
2、藥物化學(xué)預(yù)試驗(yàn)的操作流程 實(shí)驗(yàn)十五
天然藥物化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)
一、樣品液的制備液
1、水提取液
取樣品粉末10g(過20目篩)，加水10倍量，室溫浸泡過夜，濾取部分濾液，供檢查氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)。剩余濾液和濾渣在60℃水浴中加熱10分鐘～1小時，過濾，濾液供檢查糖、多糖、皂苷、苷類和鞣質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽等。
2、乙醇提取液
乙醇提取液可供黃酮、蒽醌、苷類、生物堿、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、香豆精、萜類、甾類及內(nèi)脂化合物等項的檢查。提取方法如下：
二、各類成分的檢查
（一）氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)的檢查
l、加熱沉淀試驗(yàn)
取檢液，加熱至沸，如出現(xiàn)渾濁或沉淀時，表明有蛋白質(zhì)；加入5％硫酸溶液也能出現(xiàn)沉淀。
2、茚三酮試驗(yàn)(Ninhydrin)取檢液，加入0.2％茚三酮的水溶液后，在沸水浴上加熱5分鐘，冷后，如有藍(lán)或藍(lán)紫色反應(yīng)，表明含有氨基酸、多肽、或蛋白質(zhì)；或?qū)⒃囈旱卧跒V紙片上，加入或噴灑0.2％印三酮溶液后，在100℃左右烘烤2分鐘．如有氨基酸和肽則呈現(xiàn)紫紅色或藍(lán)色斑點(diǎn)，也有少數(shù)氬基酸呈黃色斑點(diǎn)。
（二）糖、多糖的檢查
α-萘酚試驗(yàn)(Molish反應(yīng))取檢液．加熱濃縮，使溶于乙醇中，再加等體積的10％α－萘酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁滴加濃硫酸，二液界面處產(chǎn)生紫紅色環(huán)，表示有糖、多塘、苷類。
（三）酚類成分的檢查
三氯化鐵試驗(yàn)
取檢液，加入l％三氯化鐵乙醇溶液．溶液如呈現(xiàn)綠、藍(lán)綠或暗紫色等，則有酚性成分存在，若有鞣質(zhì)存在同樣呈現(xiàn)正反應(yīng)．可水解鞣質(zhì)多呈藍(lán)色．縮合鞣質(zhì)多呈綠色。
（四）有機(jī)酸的檢查
溴酚藍(lán)試驗(yàn)
將檢液滴在濾紙片上，再滴加0.1％溴酚藍(lán)溶液，立即在藍(lán)色的背景上顯黃色斑點(diǎn)；如不夠明顯，再噴灑氨水，然后暴露在鹽酸氣體中，背景逐漸由藍(lán)色變?yōu)辄S色，而有機(jī)酸的斑點(diǎn)仍然為藍(lán)色。(五)皂苷的檢查
泡沫試驗(yàn)
取檢液，置于試管內(nèi)，激烈振搖，如產(chǎn)生持續(xù)性泡沫，就可能含有皂苷、高級脂肪酸、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)。皂苷和脂肪酸鹽，泡沫特別顯著，在試管內(nèi)能持續(xù)10分鐘以上，即使加熱、加乙醇，泡沫也不明顯地減少。(六)黃酮類化合物的檢查
鹽酸－鎂粉試驗(yàn)
取檢液，加入數(shù)滴濃鹽酸及少量鎂粉(或鋅粉)，溶液如現(xiàn)櫻紅色，表示含有黃酮類化合物。如乙醇提取液加濃鹽酸而不加鎂粉即出現(xiàn)紅色，表明含有花色素。(七)蒽醌的檢查
堿液試驗(yàn)
取檢液，加入10％氫氧化鈉溶液，如產(chǎn)生紅色，加入少量30％過氧化氫溶液．加作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
熱，紅色不褪，加酸使呈酸性．則紅色消褪，表明含有蒽醌化合物；冷后，加乙醚振搖，加人氨液顯紅色。(八)香豆素的檢查
熒光試驗(yàn)
將檢液滴在濾紙片上，干燥后，在日光下觀察，有的香豆精類成分，可顯天藍(lán)色熒光，若于紫外燈下觀察，多數(shù)香豆精類成分的藍(lán)色熒光可轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色熒光。呋喃駢香豆精類成分多顯黃綠色熒光。
（十）生物堿的檢查
碘化鉍鉀試劑：取檢液三份，分別加人碘化汞鉀試劑，如產(chǎn)生白色或淡黃色沉淀；加入碘化鉍鉀試劑，如有桔紅色沉淀，或加入硅鎢酸試劑，如有淡黃或灰白色沉淀，均表明含有生物堿。
上述各種成分的預(yù)試驗(yàn)，僅僅是為進(jìn)一步提取分離有效成分提供初步的線索。由于植物中各成分的復(fù)雜性和相互間的干擾，各種定性反應(yīng)都有例外情況。根據(jù)預(yù)試結(jié)果，就作出某種成分存在與否的結(jié)論是不全面的。例如碘化鉍鉀試劑，不僅對生物堿發(fā)生反應(yīng)，對堿性氨基酸、生物胺等同樣也發(fā)生反應(yīng)。生物堿沉淀反應(yīng)作為預(yù)試，如呈陰性還有一些意義，陽性反應(yīng)則不能肯定就是生物堿存在。但通過預(yù)試，可以對中藥成分有一大致了解，告訴我們可能含有的某類成分，如生物堿、糖類、苷類等，再配合薄層色譜，可進(jìn)一步了解其中所含單體的個數(shù)和情況。系統(tǒng)預(yù)試雖有上述一些缺點(diǎn)，但在目前仍不失為檢查中藥化學(xué)成分的常用的簡便方法。這類方法在今后的工作中，還需要不斷地充實(shí)和改進(jìn)。天然藥物化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義和方法？第五章
薄荷中揮發(fā)油的提取及鑒定1.掌握揮發(fā)油類成分的提取和鑒定方法 2.熟悉揮發(fā)油的組成、性質(zhì)和生物活性
3.了解薄荷中的化學(xué)成分和藥用價值重點(diǎn)：水蒸氣蒸餾法提取薄荷揮發(fā)油的原理及操作要點(diǎn)。
難點(diǎn)：道爾頓分壓定律
實(shí)驗(yàn)九
薄荷中揮發(fā)油的提取及鑒定
一、薄荷中揮發(fā)油的提取
取薄荷40g撕碎，置揮發(fā)油含量測定器1000ml燒瓶中，加350ml水與少量沸石，連接 揮發(fā)油含量測定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并使溢流入燒瓶時為止，緩緩加熱至沸提取，至測定器中油量不再增加，停止加熱，防冷，分取油層，計算得率。
二、薄荷中揮發(fā)油的鑒定 薄層色譜法
活化--點(diǎn)樣—飽和—展開—計算Rf—噴香草醛-濃硫酸顯色 觀察斑點(diǎn)數(shù)目和顏色，并做記錄。1.揮發(fā)油的組成？ 2.計算提取率？
第三章
秦皮中香豆素的提取及鑒定
掌握用溶劑法提取、分離香豆素類成分七葉苷和七葉內(nèi)酯的方法。
七葉苷和七葉內(nèi)酯均能溶于沸乙醇中，可用沸乙醇將二者提取出來，利用在乙酸乙酯中兩者溶解度的不同而分離之。實(shí)驗(yàn)五、六
秦皮中七葉苷、七葉內(nèi)酯的提取、分離及鑒定
（一）提取與分離
作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
二）鑒定 1.熒光實(shí)驗(yàn)
2.異羥鎢酸鐵試驗(yàn) 3.TLC 展開劑：甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1）樣品：七葉苷、七葉內(nèi)酯及其對照品的甲醇溶液 顯色劑：紫外等下觀察熒光
1.萃取時，如何選擇溶劑？
2.一般情況下，都有哪幾種方法用于分離苷和苷元？ 第六章
絞股藍(lán)總皂苷的提取分離及鑒別 1．掌握皂苷的提取方法。
2．熟悉大孔吸附樹脂法純化絞股藍(lán)皂苷的操作技術(shù)。
3．熟悉皂苷及其制劑的鑒定方法。
絞股藍(lán)總皂苷有較好的水溶性，可用水為提取溶劑，因?yàn)榻g股藍(lán)皂苷分子中含有非極性部分三萜母核，故可使其在非極性大孔樹脂上能較好地被吸附，相反，極性較大的成分如糖類則在非極性大孔樹脂上難以吸附，因而選用非極性大孔吸附樹脂D101型可將絞股藍(lán)水提物中的總皂苷與糖類等水溶性成分較好地分離，最后用活性炭脫色，從而達(dá)到純化的目的
實(shí)驗(yàn)十
絞股藍(lán)總皂苷的提取
（一）提取
取絞股藍(lán)粗粉5g，加水80ml，超聲振蕩15min，過濾，殘渣再加水60ml，超聲振蕩15min，過濾，合并兩次濾液，用2％氫氧化鈉溶液調(diào)至pH9～10①，靜置，濾除沉淀，濾液備用。
實(shí)驗(yàn)十一
絞股藍(lán)總皂苷的純化與鑒定
（二）純化
1．大孔吸附樹脂的準(zhǔn)備
取D101型大孔吸附樹脂5g，用95％乙醇浸泡過夜后，濕法裝柱（1.0cm×28cm），繼續(xù)用95％乙醇洗滌至流出液加等量水后幾乎無白色渾濁為止。然后用去離子水洗至無醇味。2．純化 將絞股藍(lán)提取液以2m1／min的速度通過大孔吸附樹脂柱②，待溶液全部作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
進(jìn)入柱后，用2％氫氧化鈉溶液洗滌③，洗滌速度控制在5ml／min為宜。當(dāng)流出液接近無色時，改用水洗，至流出液pH接近7為止。然后用95％乙醇洗脫，收集醇洗脫液至無絞股藍(lán)皂苷洗出[薄層色譜法檢查：硅膠H一CMC-Na板，正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5）上層，5％磷鉬酸乙醇液，110℃顯色]。醇洗脫液加入少量活性炭回流10min④，趁熱過濾，濾液回收乙醇至小體積，水浴蒸干，刮松，得白色鱗片狀結(jié)晶，為絞股藍(lán)總皂苷。大孔吸附樹脂回收。
（三）鑒定 1．呈色反應(yīng)
（1）醋酐一濃硫酸反應(yīng) 取絞股藍(lán)總皂苷少許，置蒸發(fā)皿中，滴加冰醋酸1ml溶解，再加1ml醋酐，然后于溶液邊沿滴加濃硫酸，觀察顏色變化。
（2）molish反應(yīng)取絞股藍(lán)總皂苷少許于試管中，加乙醇1ml溶解，滴加lmlα—萘酚試劑，然后沿試管壁加入2ml硫酸，不要搖動，觀察兩液交界面的顏色。2．薄層色譜鑒別
薄層板：硅膠H—CMC-Na板。
點(diǎn)樣：純化的絞股藍(lán)皂苷乙醇液、人參皂苷Rbl對照品乙醇液。
展開劑：正丁醇-乙酸乙酯-水（4：l：5，上層）。
展開方式：上行展開。
顯色：噴5％磷鉬酸乙醇液110℃加熱顯色（約5min）；或噴硫酸-甲醇（1：1）溶液，105℃加熱顯色。
1.皂苷類成分的結(jié)構(gòu)特征？
2.大孔吸附樹脂的操作要點(diǎn)？第七章
漢防己生物堿的提取、分離與鑒定
1、掌握一般叔胺生物總堿的提取和純化方法。
2、熟悉柱色譜法分離生物堿的操作技術(shù)。
3、掌握結(jié)晶法的一般程序和操作方法。
4、掌握薄層色譜法鑒定己知生物堿的方法。
1、回流提取法的操作
2、結(jié)晶法的一般程序和操作方法
3、薄層色譜法的操作方法及注意事項
實(shí)驗(yàn)十二
漢防已總生物堿的提取
取漢防已粗粉50g，置500ml燒瓶中，加95％乙醇150ml，水溶加熱回流提取1小時，傾出乙醇提取液；藥渣重新加入95％乙醇100ml，繼續(xù)如上法加熱回流提取1小時，合并兩次提取液，過濾，濾液置1000ml廣口瓶中。
實(shí)驗(yàn)十三 漢防已總生物堿的純化
將濾液倒置與500ml圓底燒瓶中，水浴回收乙醇(注意加沸石)得流浸膏，傾人蒸發(fā)皿中，水浴上揮盡殘留乙醇，得到糖漿狀提取物。將糖漿狀提取物轉(zhuǎn)入500ml燒杯中，緩慢加入0.5％硫酸溶液，邊加邊攪拌，約加入100ml0.5％H2S04，靜置，過濾，得澄明濾液。加氨水調(diào)至濾液PH11，立即將其轉(zhuǎn)入500ml的分液漏斗中，加入l00ml氯仿，振搖，靜置分層，分出氯仿層，堿水液再加氯仿萃取兩次，每次60ml，合并三次氯仿萃取液。在氯仿溶液中加入約10～20克無水硫酸鈉，充分振搖2min，靜置10min，過濾，濾液置于250ml圓底瓶燒中，回收氯仿至少量，轉(zhuǎn)入20ml蒸發(fā)皿中，水浴揮盡殘留氯仿。殘留物用50ml丙酮分次溶入l00ml圓底燒瓶中，水浴加熱回流20分鐘，趁熱過濾，用少量丙酮洗滌濾紙?；厥毡猎w積的三分之一，放置過夜，析出深黃色沉淀物，即得漢防已總堿。
實(shí)驗(yàn)十四
漢防已甲素和乙素的分離及鑒定
漢防已甲素和乙素的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似，僅一個官能團(tuán)的差異，前者為甲氧基，后者為酚羥基，利用兩個化合物極性的微小差異，采用氧化鋁柱色譜法，可獲得滿意的分離。作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
1、裝柱
取17×400mm層析柱垂直固定在鐵架臺上，在管的下端墊人少量棉花．稱取氧化鋁(100一140目)25克，緩緩加入柱中，邊加邊輕輕振動色譜柱，使氧化鋁在柱中填實(shí)均勻。
2、上樣
稱取漢防已總堿0．5克，置于蒸發(fā)皿中，加5ml氯仿溶解，另加氧化鋁2克，攪拌均勻，并于水浴上緩緩蒸除溶劑，然后將附有樣品的氧化鋁裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。
3、洗脫
將色譜柱活塞打開，通過分液漏斗緩緩加人氯仿洗脫液。每分鐘流速2-3ml，用三角錐瓶收集流份，每個流份收集洗脫液15ml，并依次編號，氯仿洗脫約150ml后，改用甲醇洗脫約50ml。
4、檢查
依次將各流份點(diǎn)于硅膠G薄層板上，用氯仿－丙酮－甲醇(6：1：1)為展開劑，展開，揮干溶劑，噴以碘化鉍鉀試液，比較各流份的Rf值，合并相同Rf值的流份。
1、用回流法提取時要注意什么？
2、用結(jié)晶法分離時，溶劑選擇有何要求？
3、用柱色譜分離時，漢防已甲素和乙素哪個先出柱，哪個后出柱，為什么？
實(shí)驗(yàn)七 黃芩中黃芩苷的提取分離與鑒
定
【實(shí)訓(xùn)目的】
1、能夠運(yùn)用煎煮法、堿溶酸沉法對黃芩中的黃芩苷進(jìn)行提取和精制。
2、會用顯色反應(yīng)、色譜法進(jìn)行黃芩苷的檢識。【實(shí)訓(xùn)原理】 本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)黃芩中的黃芩苷在植物中以鎂鹽形式存在，可以被沸水溶出，在
【實(shí)訓(xùn)目的】
1、能夠運(yùn)用煎煮法、堿溶酸沉法對黃芩中的黃芩苷進(jìn)行提取和精制。
2、會用顯色反應(yīng)、色譜法進(jìn)行黃芩苷的檢識。【實(shí)訓(xùn)原理】
本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)黃芩中的黃芩苷在植物中以鎂鹽形式存在，可以被沸水溶出，在酸性（pH1～2）情況下轉(zhuǎn)變成黃芩苷，溶解度降低沉淀析出，從而與共同存在的水溶性雜質(zhì)分離，進(jìn)一步精制是利用其鈉鹽在pH6.5～7時可溶于50％的乙醇，使之與不溶于50％乙醇的雜質(zhì)分離，在pH1～2時黃芩苷在50％的乙醇中溶解度降低而析出，而得各單體苷元?！緦?shí)訓(xùn)材料】
設(shè)備：托盤天平、電爐、燒杯、離心機(jī)、水浴鍋、抽濾裝置、量筒、玻璃棒、移液管、脫脂棉、溫度計、滴管、pH試紙、新華色譜濾紙（15cm×7cm）、硅膠CMC-Na薄層板、展開缸（筒）、試管、試管架 藥品：黃芩粗粉、鎂粉、鋅粉、5％二氯氧鋯、2％三氯化鋁、鹽酸、40％氫氧化鈉、95％乙醇、冰醋酸、苯、甲酸乙酯、甲酸、正丁醇、冰醋酸、1％三氯化鋁、三氯化鐵乙醇試劑、1％黃芩標(biāo)準(zhǔn)品三氯甲烷溶液 【操作步驟】 作者：楊明利
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（本科）講稿
1、黃芩苷的提取
稱取黃芩粗粉100g，加10 倍量沸水，并加熱煮沸30分鐘，隨時補(bǔ)充失去的水分，脫脂棉過濾。藥渣再加8倍量水煮沸30分鐘，過濾。合并兩次濾液。加濃鹽酸調(diào)pH1～2，水浴保溫80℃30分鐘，放置24小時，析出黃色沉淀。離心濾去沉淀中的水分。將沉淀移入500ml燒杯中，加水100ml，充分?jǐn)嚢枋钩蔀榫鶆虻幕鞈乙?，滴?0％氫氧化鈉溶液調(diào)pH6.5～7，使黃芩苷全部溶解，加入等體積95％乙醇，攪勻后于50℃（水浴保溫）迅速抽濾，濾液加熱至50℃，以濃鹽酸調(diào)pH1～2，放置（約4小時）使析出沉淀。傾去上清液，沉淀物抽濾，沉淀用蒸餾水抽洗2～3次，抽干，60℃以下干燥，得粗制黃芩苷。
2、黃芩苷的精制
稱取黃芩苷粗品，加10倍量水?dāng)嚢杈鶆?，?0%氫氧化鈉溶液調(diào)pH6.5～7，使黃芩苷全部溶解，加活性炭適量拌勻，加熱至80℃30分鐘（水?。闉V除去活性炭渣，濾液用濃鹽酸調(diào)pH1～2，加入等體積95%乙醇，50℃保溫30分鐘（水?。?，至有沉淀析出時取
第三篇：天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義匯總
《天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義》
實(shí)驗(yàn)須知
天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)是天然藥物化學(xué)課程的重要組成部分，是使學(xué)生進(jìn)一步理論聯(lián)系實(shí)際，掌握天然藥物有效成分提取、分離和檢定的基本操作技能，提高學(xué)生分析和解決問題能力。養(yǎng)成嚴(yán)密科學(xué)態(tài)度和良好工作作風(fēng)必不可少的教學(xué)環(huán)節(jié)。為此，提出下列實(shí)驗(yàn)須知：
1．遵守實(shí)驗(yàn)室制度，維護(hù)實(shí)驗(yàn)室安全，不違章操作，嚴(yán)防爆炸、著火、中毒、觸電、漏水等事故的發(fā)生。若發(fā)生事故應(yīng)立即報告指導(dǎo)教師。
2．實(shí)驗(yàn)前作好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，了解實(shí)驗(yàn)的基本原理和方法，安排好當(dāng)天計劃，爭取準(zhǔn)時結(jié)束。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)養(yǎng)成及時記錄的習(xí)慣。凡是觀察到的現(xiàn)象和結(jié)果及有關(guān)的重量、體積、溫度或其他數(shù)據(jù)，應(yīng)立即如實(shí)記錄，實(shí)驗(yàn)完畢后，認(rèn)真總結(jié)，寫好報告，提取純化所得單體產(chǎn)物包好，貼上標(biāo)簽（日期、樣品名稱、純度、mp、bp、TLC、重量）交給老師。
3．實(shí)驗(yàn)室中保持安靜，不許大聲喧嚷，不許抽煙、不遲到、不隨便離開，實(shí)驗(yàn)臺面應(yīng)保持清潔，使用過的儀器及時清洗干凈，存放在實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)，廢棄的固體和濾紙等丟入廢物缸內(nèi)，絕不能丟入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影響環(huán)境衛(wèi)生。
4．公用儀器及藥品用完后立即返還原處，破損儀器應(yīng)填寫破損報告單，注明原因。節(jié)約用水、用電、藥用試劑。嚴(yán)格藥品用量。
5．保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)整潔，學(xué)生采取輪流值日，每次實(shí)驗(yàn)完畢，負(fù)責(zé)整理公用儀器，將實(shí)驗(yàn)臺、地面打掃干凈，倒清廢物缸，檢查水、電和門窗是否關(guān)閉。
實(shí)驗(yàn)一
薄層板的制備、活度測定及應(yīng)用
一、目的要求
1．掌握硅膠薄層板的制備及薄層層析的操作方法 2．掌握硅膠薄層活度的測定方法 3．應(yīng)用薄層層析法檢測識中草藥化學(xué)成分
二、實(shí)驗(yàn)材料
薄層層析用硅膠G，硅膠F，羧甲基纖維素鈉，0.01%二甲基黃（Dimethy-yellow.P-Dimethylaminoazobenzene），蘇丹紅（Sudan Ⅲ），靛酚藍(lán)（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline），苯，微量點(diǎn)樣管，10×20cm玻璃板20塊，碾缽7套。
三、實(shí)驗(yàn)操作
（一）薄層板的制備 1．硅膠薄層的制備
（1）硅膠G薄層
取硅膠G或硅膠GF一份，置燒杯中加水約5份混合均勻，放置片刻，隨即用藥匙取一定量，分別倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推動涂布），均勻涂布成0.25~0.5mm厚度，輕輕振動玻璃板，使薄層面平整均勻，在水平位置放置，待薄層發(fā)白近干，于烘箱中100℃活化0.5~1小時，冷后貯于干燥器內(nèi)備用。活化溫度和時間可依需要調(diào)整，一般檢識水溶性成分或一些極性大的成分時，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活化即可貯存?zhèn)溆谩?/p>
（2）硅膠（H）羧甲基纖維鈉（CMC-Na）薄層
CMC-Na系碳水化合物，調(diào)制時應(yīng)在水浴上進(jìn)行。羧甲基纖維素鈉的溶液一般用0.5~1%濃度（常用0.8%），宜預(yù)先配制后靜置，取其上層澄清溶液應(yīng)用，則所制備的薄層表面較為細(xì)膩平滑。
取薄層層析用硅膠，按1：3~3.5的比例加入羧甲基纖維素鈉溶液順時針方向攪拌混合并排除氣泡，按照硅膠G薄層涂布法制備薄層，讓其自然陰干，100℃下活化30分鐘。活化溫度不應(yīng)過高，防止碳化。冷后于干燥器內(nèi)備用。注：國內(nèi)青島海洋化工廠出售薄層層析用的硅膠在吸附劑名稱之后加幾個字標(biāo)明的意思是：硅膠G（G是Gypsum石膏的縮寫。表示加了石膏），硅膠H（H表示不加石膏），硅膠GF254（F254表示加石膏和波長254顯綠色熒光的硅酸鋅錳）。硅膠GF365（表示加石膏和波長365nm顯黃色熒光的硫化鋅鎘）。2．特殊薄層的制備
根據(jù)分離工作的特殊需要，可制成以下幾種特制薄層。（1）酸、堿薄層和pH緩沖薄層
為了改變吸附劑的酸堿性，以改進(jìn)分離效果，可在吸附劑中加入稀酸溶液（如0.1~0.5N草酸溶液）代替水制成酸性氧化鉛薄層使用，硅膠微呈酸性，可在鋪層時用稀堿溶液（如0.1~0.5N氫氧化鈉溶液）代替水制成堿性的硅膠薄層。當(dāng)用醋酸鈉、磷酸鹽等不同pH的緩沖液代替水鋪層，制成一定pH緩沖的薄層。（2）絡(luò)合薄層
硝酸銀薄層的制法，可在吸附劑中加入5~25%硝酸銀水溶液代替水制成均勻糊狀，再按常法鋪成薄層，制成薄層避光陰干，于105℃活化半小時后避光貯存，制成的薄層以不變成灰色為好，在三天內(nèi)應(yīng)用。也可先把硝酸銀用少量水溶解，再用甲醇稀釋成10%溶液，把預(yù)先制好的硅膠G薄層浸入此溶液中約1分鐘，取出避光陰干，按上法活化，貯存。
（二）、吸附劑的活度測定 1．硅膠活度的測定
一般選用三種染料的薄層層析法進(jìn)行測定。
歐洲藥典1969年記載用0.01%二甲基黃（Dimethy-yellow.P-Dimethylaminoazobenzene）。蘇丹紅（Sudan Ⅲ），靛酚藍(lán)（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的苯溶液各10μl點(diǎn)滴于硅膠G或硅膠H薄層上，以苯為展開劑，展開10cm（約20分鐘），三種染料應(yīng)明顯分離，靛酚藍(lán)斑點(diǎn)接近于起始線。二甲基黃斑點(diǎn)在薄層的當(dāng)中。蘇丹紅斑點(diǎn)與二甲基黃斑點(diǎn)之間，則認(rèn)為薄層板活性符合要求。2．氧化鋁活度的測定
一般可用4~5種偶氮染料以薄層層析法進(jìn)行測定。
染料試劑的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，對甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）,蘇丹黃（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），蘇丹紅（Sudan Ⅲ Tetrazobenzol-β-naphthol），對氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各20mg，分別溶于50ml重蒸餾的四氯化碳（經(jīng)氫氧化鈉干燥）中。
常法制備不含粘合劑氧化鋁薄層，以鉛筆尖或毛細(xì)管尖在薄層板一端2~3 cm處間隔1cm左右輕輕點(diǎn)上5個可以看清的小點(diǎn)，各吸取約0.02ml染料試劑分別點(diǎn)滴于原點(diǎn)上，以四氯化碳為展開劑，展開時薄層板與容器底部交角為10~40°之間，展開后測出各斑點(diǎn)的Rf值，從表1確定氧化鋁的活度（一般高活性氧化鋁Ⅰ~Ⅲ級活度使用本法時，結(jié)果往往偏低）。
另取不含粘合劑氧化鋁薄層板一塊，置于水蒸汽飽和容器內(nèi)，2~3小時后取出，按上述方法測定活度。觀察有無變化。
表1 氧化鋁活度與偶氮染料外值關(guān)系
偶氮染料 偶氮苯
氧化鋁活度級Rf值 二級 0.59
三級 0.72 0.45
四級 0.85 0.69
五級 0.95 0.89 對甲氧基偶氮苯 0.16 蘇丹黃 蘇丹紅 對氨基偶氮苯
0.02 0.00 0.00
0.25 0.10 0.05
0.87 0.35 0.08
0.98 0.50 0.19
（三）、薄層層析的應(yīng)用
薄層層析法在天然藥物化學(xué)成分的研究中，主要應(yīng)用于化學(xué)成分的預(yù)試、化學(xué)成分的鑒定及探索柱層分離的條件。用薄層層析進(jìn)行中草藥化學(xué)成分檢識，可依據(jù)各類成分性質(zhì)及熟知的條件有針對性地進(jìn)行。由于在薄層上展開后，可將一些雜質(zhì)分離，選擇性高，可使預(yù)試結(jié)果更為可靠，不僅可通過顯色獲知成分類型，而且可初步了解主要成分的數(shù)目及其極性大小。實(shí)驗(yàn)操作：蒽醌類成分的鑒別
三、思考題
1.為何在鋪板之前，色譜用的玻璃板要完全洗凈并干燥？ 2.為何鋪好的TLC板用前要在烘箱中干燥？
試驗(yàn)二
大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定
（一）概述
大黃記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》等許多文獻(xiàn)中，用于泄下、健胃、清熱、解毒等。
自古以來，大黃在植物性瀉下藥中占有重要位置，是一位很早就被各國藥典所收載的世界性生藥。大黃的種類繁多，優(yōu)質(zhì)大黃是蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatclm L），大黃（R.officinale Baill）及唐古特大黃（R.tangutium Maxim.et Regll）的根莖及根，大黃中含有多種游離的羥基蒽醌類化合物以及它們與糖所形成的苷。已經(jīng)知道的羥基蒽醌主要有下列五種：
OHOOHR1OR2 晶
形 黃色針晶 橙色細(xì)針晶
熔
點(diǎn) 318~320℃ 206~208℃ 196℃ 256~257℃ 207℃ R1-H-H-H-CH3-CH R2-COOH-CH2OH-CH3-OH-
名 稱 大黃酸(Rhein)蘆薈大黃素(Aloe-emodin)
大黃酚(Chyrsophanol)金色片狀結(jié)晶 大黃素(Emodin)大黃素甲醚(Physcion)
橙色針晶 磚紅色針晶 大黃中蒽醌苷元，其結(jié)構(gòu)不同，因而酸性強(qiáng)弱也不同。大黃酸連有-COOH，酸性最強(qiáng)；大黃素連有β-OH，酸性第二；蘆薈大黃素連有芐醇-OH，酸性第三；大黃素甲醚和大黃酚均具有1,8-二酚羥基，前者連有-OCH3和-CH3，后者只連有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
（二）實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?/p>
1．學(xué)習(xí)緩沖紙色譜的基本操作技術(shù)，并能根據(jù)色譜結(jié)果，設(shè)計液液萃取法分離混合物的實(shí)驗(yàn)方案。
2．掌握PH梯度法的原理及操作技術(shù)。
3．學(xué)習(xí)蒽醌類化合物鑒定方法。
（三）實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)試劑及試藥：
大黃藥材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，濃硫酸2瓶，濃鹽酸2瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸鈉（5% Na2CO3溶液3000ml），碳酸氫鈉（5% NaHCO3溶液3000ml），氫氧化鈉（5% NaOH溶液1000ml），氫氧化鉀，醋酸鎂試劑等。實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備：
500ml圓底燒瓶10個，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10只，500ml燒杯20只，100-250ml量筒10只，常壓漏斗（5-10cm斗徑10只），定性濾紙（10cm）2盒，毛細(xì)管點(diǎn)樣器1盒，玻璃噴瓶4套，廣譜PH試紙5盒，紗布一卷，多孔水浴鍋5臺，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀2臺
1．大黃總蒽醌苷元的提取
大黃粗粉50g
加20%的硫酸水溶液100ml，加氯仿250ml，水浴回流2小時，過濾，測量濾液體積
殘渣 氯仿溶液
注意：①大黃中的蒽醌類成分大部分與糖結(jié)合，以蒽醌的形式存在于植物組織中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有機(jī)溶劑，用苯時應(yīng)注意苯蒸氣的揮發(fā)，嚴(yán)防中毒；②所得的氯仿液中如帶有酸水液，應(yīng)該用分液漏斗分出棄去，并用蒸餾水回洗一次除去酸性以免影響梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可濾取之，該沉淀多為大黃素，余液進(jìn)行下一步分離試驗(yàn)用。
2．總蒽醌苷元的分離與精制 大黃酸的分離與精制 將含有總游離蒽醌的氯仿液250ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8緩沖液（5% NaHCO3溶液）125ml振搖萃?。?次，每次125ml，至堿液無色），靜置至徹底分層，放出氯仿液后，倒出堿水液至置500ml燒杯中，加HCl酸化至PH=3，待黃色沉淀析出完全后，過濾、干燥，干燥后的樣品加冰醋酸10ml加熱使溶，趁熱過濾，濾液靜置，析出黃色針晶為大黃酸，過濾即得純品。大黃素的分離與精制
將提過大黃酸的氯仿液繼續(xù)移至分液漏斗中，用PH9.9緩沖液（5%NaCO3溶液）125ml振搖萃?。?次，每次125ml，至堿液無色），275ml振搖萃取，徹底分層后，分出堿水層，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黃色沉淀，過濾，沉淀經(jīng)干燥后，用10ml冰醋酸加熱使溶，趁熱過濾，析出橙色大針晶，過濾后，即得大黃素純品。
蘆薈大黃素的分離和精制
余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH(9:1)堿水液125ml或用0.5%KOH125ml振搖萃取，堿水液加HCl酸化，析出的沉淀過濾干燥，用10ml乙酸乙酯重結(jié)晶，得黃色針晶的蘆薈大黃素純品。3.鑒定
1.化學(xué)檢識：分別取總蒽醌提取物少許，用乙醚溶解，做如下反應(yīng)： A：堿液試驗(yàn)：取試液1ml，加20%NaOH數(shù)滴，觀察顏色。B．醋酸鎂反應(yīng)：取試樣1ml，加醋酸鎂試劑數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。2．薄層鑒定： 吸附劑：硅膠-CMC 展開劑：C6H6-EtOAc(3:2或97：9)。
顯色劑：（1）氨蒸氣熏。（2）5%KOH噴霧。
（四）實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)
1．本實(shí)驗(yàn)講解要點(diǎn)及注意事項。① PH梯度萃取的原理及注意事項。② 如何設(shè)計萃取分離方案的程序與方法。
③ 分離萃取時一定注意乳化層的分出，不要混入，并且每步最好用新鮮CHCl3，回洗堿水液。
⑤ 緩沖液的配制和堿液的配制要準(zhǔn)確，嚴(yán)格注意檢查。2．實(shí)驗(yàn)報告要求
① 記錄大黃總蒽醌的提取方法及總蒽醌的分離程序（包括溶劑用量）。② 總蒽醌的顯色鑒別結(jié)果。
③ 記錄大黃素、大黃酸、蘆薈大黃素的精制方法及薄層色譜鑒別結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)四
黃連中鹽酸小檗堿的提取、精制和鑒定
黃連為毛莨科黃連屬植物黃連、三角葉黃連或云連等的干燥根莖。具有清熱燥濕、清心除煩、瀉火解毒的功效。黃連的有效成分主要是生物堿，已分離出的主要有：小檗堿（Berberine），又名黃連素，巴馬丁、黃連堿，甲基黃連堿、藥根堿、表木蘭堿等，其中以小檗堿含量最高，可達(dá)10%左右，且以鹽酸鹽的狀態(tài)存在于黃連中。小檗堿鹽酸對痢疾桿菌、葡萄球菌和鏈球菌等均有顯著抑制作用，臨床用于治療細(xì)菌性痢疾和胃腸炎等，無耐藥性和副作用。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>
1、掌握鹽酸小檗堿的一種提取方法，熟悉鹽析法、重結(jié)晶法。
2、掌握小檗堿的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，特殊的理化性質(zhì)和薄層鑒定方法。
3、通過實(shí)驗(yàn)熟悉和掌握柱層析法的分離原理及操作技能。
二、小檗堿的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
小檗堿為黃色長針狀結(jié)晶，具5.5個結(jié)晶水，m.p145℃，能緩緩溶于冷水中（1：20），微溶于冷乙醇（1：100），易溶于熱水和熱乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，與酸結(jié)合成鹽時失去一分子水，其硝酸鹽和氫碘酸鹽極難溶于水，鹽酸鹽微溶于冷水，較易溶于沸水，其硫酸鹽，構(gòu)椽酸鹽在水中溶解度較大。鹽酸小檗堿為黃色結(jié)晶，含2分子結(jié)晶水，220℃左右分解為棕紅色小檗紅堿，285℃左右完全溶融，UVλmax265nm，343nm。游離小檗堿易和1分子丙酮或1分子氯仿或1.5分子苯結(jié)合成一黃色絡(luò)合物晶體。
三、實(shí)驗(yàn)原理
本實(shí)驗(yàn)利用小檗堿與含氧酸（硝酸例外）所成鹽在水中溶解度較大的性質(zhì)，采用稀硫酸將其以硫酸鹽形式提取出來，再根據(jù)小檗堿與氫鹵酸所成鹽在水中溶解度較小的特點(diǎn)，在將小檗堿游離后，加入鹽酸使其形成鹽酸鹽，結(jié)合成鹽析法，使之沉淀析出。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、提取
取黃連粗粉25克，加入0.2%H2SO4液200ml加熱煎煮1小時（注意隨時補(bǔ)充蒸發(fā)損失的溶劑），紗布過濾，殘渣再加0.2%H2SO4液200ml 加熱煎煮45分鐘，紗布過濾，兩次濾液合并。向?yàn)V液中加入石灰乳調(diào)節(jié)pH12，抽濾，再向抽濾所得的濾液中滴加濃HCl，調(diào)節(jié)pH2-3，然后加入8%（W/V）氯化鈉，攪拌并使完全溶解，并繼續(xù)攪拌至溶液出現(xiàn)微濁現(xiàn)象為止，放置過夜。則有鹽酸小檗堿沉淀析出。
2、分離及精制
抽濾，得鹽酸小檗堿粗品，水洗，加適量蒸餾水加熱溶解，趁熱抽濾，濾液放置，則有鹽酸小檗堿結(jié)晶析出。再進(jìn)行重結(jié)晶：即濾取結(jié)晶，加入適量乙醇，水浴加熱溶解，趁熱抽濾，濾液放置結(jié)晶。待鹽酸小檗堿析出完全后，濾出，80℃干燥，得成品。
3、鹽酸小檗堿的檢識
（1）取鹽酸小檗堿少許，加10%稀硫酸適量使之溶解后，加入一點(diǎn)漂白粉，即顯櫻紅色。
（2）取鹽酸小檗堿少許，加熱使其溶于水中，加10%NAOH使呈強(qiáng)堿性，然后滴加丙酮數(shù)滴，可見有黃色結(jié)晶性的小檗堿丙酮加成物生成。
4、柱層析分離
吸附劑：12克氧化鋁（80-100目）
層析柱：1х40cm玻璃柱（也可用堿式滴定管代替）洗脫劑：95%乙醇
（1）氧化鋁吸附柱的制備（濕法裝柱）
取一根25cm堿式滴定管代作層析管用，管的下端套一段約3-4cm長的乳膠管，在乳膠管上夾一螺旋夾，以控制洗脫液流出速度。在層析管的下端填一層松緊合適平整的脫脂棉。將此層析管垂直地固定在鐵架臺上，關(guān)閉螺旋夾。
管內(nèi)先加入一定體積的洗脫劑（此處用95%乙醇），打開螺旋夾，放出管內(nèi)乙醇，將層析管下端的脫脂棉內(nèi)的空氣充分趕盡，然后再向?qū)游龉苤屑尤胍欢w積的乙醇。
取中性氧化鋁（100-200目）12克于燒杯中，加一定體積的乙醇調(diào)成漿狀，趕盡其中氣泡，然后通過小玻璃漏斗將漿狀氧化鋁徐徐注入注中，并同時打開下端螺旋夾，讓洗脫劑緩緩流出，不斷用手輕輕振動玻璃柱，使氧化鋁沉降均勻。當(dāng)柱內(nèi)液面接近氧化鋁柱面時，關(guān)閉螺旋夾。（2）樣品的加入
稱取50-100mg鹽酸小檗堿，加少量95%乙醇于水浴上加熱溶解，用滴管沿層析管壁小心加入，勿使氧化鋁柱面受到振動。找開螺旋夾，當(dāng)液體表面下降接觸氧化鋁時，關(guān)閉螺旋夾。（3）洗脫
用滴管吸取95%乙醇，經(jīng)管壁輕輕加入柱內(nèi)，打開螺旋夾，控制流速20-30滴/分鐘，不斷加入洗脫劑，使洗脫劑的液面始終高于氧化鋁。待氧化鋁柱上呈現(xiàn)數(shù)段不同顏色的色帶時，繼續(xù)沖洗，使其彼此分離，并收集鮮黃色帶，此段為鹽酸小檗堿，其余色帶為其它成分。
5、薄層層析鑒定 薄層板：硅膠G-CMC板
樣品：實(shí)驗(yàn)所得精制鹽酸小檗堿的醇溶液 對照品：1%鹽酸小檗堿的醇溶液
展開劑：氯仿：甲醇=7：2，氨水飽和20分鐘 展距：10cm 顯色：自然光下觀察 結(jié)果：計算Rf值
五、實(shí)驗(yàn)說明及注意事項
1、整個操作過程，氧化鋁柱表面應(yīng)保持一定高度的溶劑（洗脫劑），不得使柱面溶劑流干。
2、一般采用等量收集洗脫液流份。每份洗脫劑體積的毫升數(shù)，一般與吸附劑重量相近。如果洗脫劑極性較大或樣品各組份結(jié)構(gòu)相近似時，每份收集量要?。?/p>
3、洗脫時流速不宜過快，太快時柱中交換來不及達(dá)到平衡，影響分離效果；
4、由于氧化鋁表面活性較大，有時會促使某些成分發(fā)生變化，應(yīng)在短時間內(nèi)完成一個柱層析的分離，以免樣品在柱上起異構(gòu)化、氧化、皂化、水合以及脫氫形成雙鍵等反應(yīng)。樣品在柱上會擴(kuò)散也會影響分離效果。
5、氧化鋁的粒度一般為100-200目，用量一般為樣品量的20-50倍，根據(jù)被分離的化合物而定，有時可達(dá)100-200倍。硅膠吸附柱層析粒度一般為100-160目或160目以上，用量為樣品量的30-60倍，較難分離的化合物可選用500-1000倍。
六、思考題
1、采用柱層析分離時應(yīng)注意哪些方面的問題？
2、為什么本實(shí)驗(yàn)采用氧化鋁而不采用硅膠作吸附劑？ 實(shí)驗(yàn)三
槐花米中蘆丁的提取、分離與鑒定
蘆?。≧utin）廣泛存在于植物界中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含蘆丁的植物至少在70種以上，如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤以槐花米（為植物Sophora japonica的未開放的花蕾）和蕎麥中含量最高，可作為大量提取蘆丁的原料?；被诪槎箍浦参锘被ǖ奈撮_放花蕾。味苦性涼，具清熱、涼血、止血之功?；被ǖ闹饕瘜W(xué)成分為蘆丁，又名蕓香甙，含量可達(dá)12-16%。
蘆丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）〔為葡萄糖（Glucose）與鼠李糖（Rhamnose）組成的雙糖〕脫水合成的苷。為淺黃色粉末或極細(xì)的針狀結(jié)晶，含有三分子的結(jié)晶水，熔點(diǎn)為174~178℃，無水物188~190℃。溶解度：冷水中為1:10000；熱水中1:200；冷乙醇1:650；熱乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于堿而呈黃色。
蘆丁具有維生素P樣作用?？山档兔?xì)管前壁的脆性和調(diào)節(jié)滲透性，有助于保持及恢復(fù)毛細(xì)血管的正常彈性，臨床上用作毛細(xì)管脆性引起的出血癥，并常用作防治高血壓病的輔助治療劑?，F(xiàn)在國處也常用蘆丁作食品及飲料的染色劑。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
1．通過蘆丁的提取與精制掌握堿-酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。2．掌握蘆丁的一種提取、精制方法及提制過程中防止甙水解的方法。3.掌握黃酮甙水解生成甙元的方法及二者之間的分離。4．熟悉蘆丁、槲皮素的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、檢識方法和紙層析鑒定方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
本實(shí)驗(yàn)主要是利用蘆丁中含有較多的酚羥基，可溶于堿中，加酸酸化后又可析出蘆丁結(jié)晶的性質(zhì)，采用堿溶酸沉法提取，并用蘆丁對冷、熱水的溶解度相差懸殊的特性進(jìn)行精制。蘆丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通過紙層析鑒定。蘆丁及槲皮素還可通過化學(xué)反應(yīng)及紫外光譜鑒定。
三、實(shí)驗(yàn)材料
槐米、活性炭、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、2％的硫酸溶液、濃鹽酸、正丁醇、冰醋酸、蒸餾水、1％的氫氧化鈉溶液、1％的三氯化鋁乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、95％乙醇、廣泛pH試紙、中速層析濾紙等。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
（一）提取：
稱取槐米30g，在乳缽中研碎后，投入300ml0.4％硼砂溶液的沸水溶液中煮沸2-3分鐘，在攪拌下加入石灰乳調(diào)pH9，煮沸40分鐘（注意添加水，保持原有體積，保持pH8~9），趁熱傾出上清液，用棉花過濾（或用四層紗布過濾）。殘渣加100ml水，加石灰乳調(diào)pH9，煮沸30分鐘，趁熱用棉花過濾（或用四層紗布過濾），二次濾液合并。濾液保持在60℃，加濃HCl，調(diào)pH2-3，放置過夜，待析出結(jié)晶，過濾，濾餅用蒸餾水洗至pH5-6，抽干，置空氣中晾干，得粗制蘆丁，稱重，計算得率。
（二）精制：
將蘆丁粗品懸浮于蒸餾水中，煮沸至蘆丁全部溶解，加少量活性炭，煮沸5-10分鐘，趁熱抽濾，冷卻后即可析出結(jié)晶，抽濾至干，置空氣中晾干，或60~70℃干燥，得精制蘆丁，稱重，計算得率。
（三）蘆丁的水解：
取蘆丁1g，研碎，加2％硫酸水溶液80ml，小火加熱，微沸回流30-60min，并及時補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分。在加熱過程中，開始時溶液呈渾濁狀態(tài)，約10min后，溶液由渾濁轉(zhuǎn)為澄清，逐漸析出黃色小針狀結(jié)晶，即水解產(chǎn)物槲皮素，繼續(xù)加熱至結(jié)晶物不再增加時為止。抽濾，保留濾液20ml，以檢查濾液中的單糖。所濾得的槲皮素粗晶水洗至中性，加70％乙醇80ml加熱回流使之溶解，趁熱抽濾，放置析晶。抽濾，得精制槲皮素。減壓下110℃干燥，可得槲皮素?zé)o水物。
（四）蘆丁、槲皮素及糖的檢識 1．顏色反應(yīng)
① α-萘酚-濃硫酸（Molisch）試驗(yàn)：
取蘆丁少許置于試管中，加乙醇1ml振搖，加α-萘酚試劑2~3滴振搖，傾斜試管，沿管壁徐徐加入0.5ml濃硫酸，靜置，觀察兩層溶液界面變化，出現(xiàn)紫紅色環(huán)者為陽性反應(yīng)，表示試樣的分子中含有糖的結(jié)構(gòu)，糖和甙類均呈陽性反應(yīng)，比較蘆丁和槲皮素的不同。②鹽酸-鎂粉試驗(yàn)：
取蘆丁少許置于試管中，加5％乙醇2ml，在水浴中加熱溶解，滴加濃鹽酸2滴，再加鎂粉約50mg，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)。溶液逐漸由黃色變?yōu)榧t色。③ 三氯化鐵試驗(yàn)
取樣品水或乙醇液，加入三氯化鐵試劑數(shù)滴，觀察顏色變化。④三氯化鋁試驗(yàn)：
取蘆丁少許置于試管中，加入甲醇1~2ml，在水浴中加熱溶解，加1％三氯化鋁甲醇試劑2~3滴，呈鮮黃色。以同樣方法試驗(yàn)槲皮素。⑤醋酸鎂試驗(yàn)：
取蘆丁少許置于試管中，加入甲醇1~2ml，在水浴中加熱溶解，加1％醋酸鎂甲醇試劑2~3滴，呈黃色熒光反應(yīng)。以同樣方法試驗(yàn)槲皮素（反應(yīng)也可在濾紙上進(jìn)行，觀察熒光）。⑥ 氧氯化鋯-枸櫞酸試驗(yàn)：
取蘆丁少許置于試管中，加甲醇1~2ml，在水浴上加熱溶解，再加2％氧氯化鋯甲醇試劑3~4滴，呈鮮黃色。然后加2%枸櫞酸甲醇試劑3~4滴，黃色變淺，加蒸餾水稀釋變無色。以同樣方法試驗(yàn)槲皮素進(jìn)行對照。⑦ 氫氧化鈉試驗(yàn)：
取蘆丁少許置于試管中，加水2ml振搖，觀察試管中有無變化。滴加1％氫氧化鈉溶液數(shù)滴，振搖使溶解，呈黃色澄清溶液。再加入1％鹽酸溶液數(shù)滴使呈酸性反應(yīng)，則溶液由澄清轉(zhuǎn)為渾濁狀態(tài)。2．色譜檢識
(1)槲皮素和蘆丁的薄層鑒定 ①聚酰胺薄層色譜：
固定相：聚酰胺薄層板
樣品：a 精制蘆丁
b 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品
c 精制槲皮素 展開劑：氯仿-甲醇-丁酮-乙酰丙酮：(16：10：5：1)顯色：a 可見光下觀察色斑，再于紫外燈下觀察熒光斑點(diǎn)
b 噴灑AlCl3乙醇液后觀察。②硅膠薄層色譜
吸附劑：硅膠G，105℃下活化2h 展開劑：a.氯仿：甲醇：甲酸（15：5：1）
b.氯仿：丁酮：甲酸（5：3：1）
顯色劑：1%FeCl3和1%K3[Fe(CN)6]水溶液，應(yīng)用時等體積混合。(2)蘆丁和槲皮素的紙色譜檢識：
支持劑：新華層析濾紙（中速、20cmХ7cm）樣
品：自制1％蘆丁乙醇溶液
對照品：1％槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品與1％蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液 展開劑：a.正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5上層）
b.15％醋酸水溶液 展距：10-15cm 顯色：a.在可見光下觀察斑點(diǎn)顏色，再在紫外燈下觀察斑點(diǎn)顏色
b.噴三氯化鋁試劑呈黃色斑點(diǎn)
c．經(jīng)氨氣熏后再于可見、紫外下觀察。
(3)糖的紙色譜檢識：取上述蘆丁水解后的母液20ml，加入氫氧化鋇細(xì)粉（約2.6g）中和至pH7，濾除生成的硫酸鋇沉淀（可用滑石粉助濾）。濾液中水浴中濃縮至1~2ml，供紙色譜點(diǎn)樣用。
支持劑：新華層析濾紙（中速、20cmХ7cm）樣
品：水解濃縮液
對照品：a.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品水溶液
b.鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品水溶液 展開劑：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5上層）
顯
色：a.噴苯胺-鄰苯二甲酸試劑，于105℃加熱10min，顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)
b.噴氨性硝酸銀試劑，于100℃左右加熱，呈棕褐色斑點(diǎn)。
五、實(shí)驗(yàn)說明及注意事項
1．本實(shí)驗(yàn)采用堿溶酸沉法從槐米中提取蘆丁，收率穩(wěn)定，且操作簡便。在提取前應(yīng)注意將槐米略搗碎，使蘆丁易于被熱水溶出?；被ㄖ泻写罅空骋嘿|(zhì)，加入石灰乳使生成鈣鹽沉淀除支。pH應(yīng)嚴(yán)格控制在8-9，不得超過10。因?yàn)樵趶?qiáng)堿條件下煮沸，時間稍長可促使蕓香甙水解破壞，使提取率明顯下降。酸沉一步pH為2-3，不宜過低，否則會使蕓香甙形成鹽溶于水，降低了收率。
2．提取過程中加入硼砂水的作用：即能調(diào)節(jié)堿性水溶液的pH，又能保護(hù)蕓香甙分子中的鄰二酚羥基不被氧化，亦保護(hù)鄰二酚羥基不與鈣離子絡(luò)合，使蕓香甙不受損失。
3．蕓香甙的提取方法除了用堿溶酸沉法外，還可利用蕓香甙在冷水及沸水中的溶解度不同，采用沸水提取法。又報道將生產(chǎn)工藝改進(jìn)為95%乙醇回流提取后回收醇得浸膏，然后將粗浸膏經(jīng)除去脂溶性雜質(zhì)后，用水洗凈，過濾，干燥即得蕓香甙，可提高收率6．96%，并降低了成本。因此可根據(jù)不同原料采用各種不同方法提取。
4．槲皮素以乙醇重結(jié)晶時，如所用的乙醇濃度過高（90％以上），一般不易析出結(jié)晶。此時可于乙醇溶液中滴加適量蒸餾水，使呈微濁狀態(tài)，放置，槲皮素即可析出。
六、思考題
1．本實(shí)驗(yàn)提取過程中應(yīng)注意哪些問題？
2．根據(jù)蘆丁的性質(zhì)還可采用何種方法進(jìn)行提??？簡要說明理由。
七、參考文獻(xiàn)
1．海藥物研究所：中草藥有效成分的提取和分離
234—240頁
2．中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所：中草藥有效成分的研究(第一分冊)219—225
1972 3．日本藥學(xué)雜志，72(333)1952；76(1210)1956，80(304)1960；80(698)1960 4．Chem，Pharm．
Bull，ll(167)，1963
附錄：
一、薄層的制備實(shí)驗(yàn)材料：
硅膠G 羧甲基纖維素鈉 托盤分析天平薄層玻璃板 薄層玻璃板 燒杯 展開槽 玻棒 量筒 碾缽 烘箱
500g 500g
10*20 5*10 500ml
100ml 100ml 瓶 1 瓶 1 臺 10 張 10 張 10 個 10 套 10 個 10 個 10 個 1
臺
二、大黃中蒽醌類成分的提取分離鑒別實(shí)驗(yàn)材料：
氯仿 乙醚 濃硫酸 濃鹽酸 冰醋酸 乙酸乙酯 碳酸氫鈉 碳酸鈉 氫氧化鈉 大黃 大黃素 大黃酸 大黃酚 蘆薈大黃素 大黃素甲醚 分析天平燒杯 燒杯 錐形瓶 分液漏斗 玻璃漏斗 布氏漏斗 試管 調(diào)溫電爐 圓底燒瓶 索氏提取器 真空冷凝管 牛角管 PH試紙 PH試紙 濾紙 鐵架臺、鐵圈
500ml 500ml 500ml 500ml 500ml 500ml 500g 500g 500g 20mg 20mg 20mg 20mg 20mg 1/1000克級 500ml 50ml 50ml 500ml 小號 中號 10－15ml 1-2000瓦 250ml 中號 中號 中號 廣泛試紙PH4-8試紙 直徑11cm
瓶 10 瓶 2 瓶 4 瓶 2 瓶 10 瓶 2 瓶 2 瓶 2 瓶 1000 g 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 臺 20 個 30 個 10 個 10 個 10 個 10 個 20 個 10 個 10 個 10 個 10 個 10 個 10 本 10 本 5 盒 10 套 1-14
三、槐米中蘆丁的提取鑒別實(shí)驗(yàn)材料：
槐花米 硼砂 氧化鈣 濃鹽酸 蒸餾水 活性炭 95%乙醇 無水乙醇 α-萘酚 濃硫酸 鎂粉 三氯化鐵 三氯化鋁 甲醇 醋酸鎂 二氯氧化鋯 檸檬酸 枸櫞酸 冰醋酸 正丁醇 蘆丁 槲皮素 分析天平燒杯 燒杯 錐形瓶 分液漏斗 玻璃漏斗 布氏漏斗 試管 調(diào)溫電爐 水裕鍋 滴管
新華層析濾紙 紙層析缸 玻棒 研缽 PH試紙 抽濾瓶 量筒 濾紙
脫脂棉或醫(yī)用紗布
500g 500克 500ml
500ml 500ml 50g 500ml 500克 100g 100g 500ml 100g 100g 500ml 500ml 500ml 500ml 200mg 20mg
1/1000克級 50ml 500ml 50ml 500ml 小號 中號 10－15ml 1-2000瓦 2-4孔
中速20cm*7cm
中號 1-14廣泛試紙 500ml 100ml 直徑11cm 600 克 1 瓶 1 克 1 瓶 10L
200g 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 臺 20 個 10 個 20 個 10 個 10 個 10 個 50 個 10 個 2 臺 20
個 盒 10 個 10 個 10 個 10 本 10 個 10 個 5 盒 卷 2
四、黃連中鹽酸小檗堿的分離鑒別實(shí)驗(yàn)材料：
黃連藥材 濃鹽酸 濃硫酸 氧化鈣 氯化鈉 無水乙醇 氫氧化鈉 丙酮 氯仿 甲醇
中性氧化鋁95%乙醇 氨水 蒸餾水 分析天平燒杯 燒杯 錐形瓶 玻璃漏斗 布氏漏斗 抽濾瓶 水裕鍋 硅膠薄層板展開槽 玻棒 PH試紙 量筒 濾紙
堿式滴定管滴管、膠帽螺旋夾 鐵架臺 鐵夾
500ml 500ml 500克 500克 500ml 500克 500ml 500ml 500ml 500g 500ml 500ml
1/1000克級 500ml 50ml 100ml 大號 中號 500ml 4-8孔 自制
1-14廣泛試紙100ml 直徑11cm
500g 克 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 5 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 5 瓶 1 瓶 10L 臺 20 個 10 個 10 個 10 個 5 個 5 個 2 臺 10 塊 10 個 15 個 4 本 10 個 10 盒 12 支 12 個 12 個 10 個 20 個
第四篇：《天然藥物化學(xué)》教案
《天然藥物化學(xué)》教案
一、總學(xué)時數(shù)、理論學(xué)時數(shù)、實(shí)驗(yàn)學(xué)時數(shù)、學(xué)分?jǐn)?shù)：
（一）總學(xué)時數(shù)：108學(xué)時
（二）理論學(xué)時數(shù)：54學(xué)時
（三）討論學(xué)時數(shù)：6學(xué)時
（四）實(shí)驗(yàn)學(xué)時數(shù)：48學(xué)時
（五）學(xué)分?jǐn)?shù)：6學(xué)分
二、承擔(dān)課程教學(xué)的院、系、教研室名稱
華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院
藥學(xué)院中藥系天然藥物化學(xué)教研室
三、課程的性質(zhì)和任務(wù)
天然藥物化學(xué)是運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)理論和方法研究天然藥物中化學(xué)成分的一門學(xué)科。
天然藥物化學(xué)是藥學(xué)專業(yè)的必修專業(yè)課，學(xué)生在具備有機(jī)化學(xué)、分析化學(xué)、光譜解析、藥用植物學(xué)基礎(chǔ)知識后，通過本課程的教學(xué)，使學(xué)生系統(tǒng)掌握天然藥物化學(xué)成分（主要是生物活性成分或藥效成分）的結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)、提取分離方法以及主要類型化學(xué)成分的生源途徑、結(jié)構(gòu)鑒定的基本理論和基本技能，培養(yǎng)學(xué)生具有從事天然藥物的化學(xué)研究、新藥開發(fā)和生產(chǎn)的能力，為繼承、整理祖國傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)寶庫和全面弘揚(yáng)、提高祖國藥學(xué)事業(yè)水平奠定基礎(chǔ)。
四、所用教材和參考書
（一）所用教材：國家級規(guī)劃教材，吳立軍主編，天然藥物化學(xué)(第四版)，人民衛(wèi)生出版社。
（二）參考書：
1、吳壽金、趙泰、秦永琪主編 《現(xiàn)代中草藥成分化學(xué)》中國醫(yī)藥科技出版社。
2、徐任生主編 《天然產(chǎn)物化學(xué)》科學(xué)出版社。
3、Nakanishi K.Natural Products Chemistry, Academic Press, New York。
第一章 緒 論
一、學(xué)時數(shù)：6學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握天然藥物化學(xué)的含義、研究對象、性質(zhì)與任務(wù)；
2、掌握天然藥物有效成分提取分離的一般原理及常用方法；
3、掌握層析分離法的分類及其原理、各種層析分離要素、相關(guān)因素及應(yīng)用技術(shù)；
4、掌握天然化合物結(jié)構(gòu)研究的一般步驟和常用方法；
5、熟悉不同的生物合成途徑與各類二次代謝產(chǎn)物生成的相關(guān)性
6、了解天然藥物化學(xué)的發(fā)展歷史、近代研究成就及發(fā)展趨勢；
7、了解天然藥物化學(xué)與藥學(xué)相關(guān)學(xué)科的關(guān)系；
8、了解天然藥物化學(xué)在國民經(jīng)濟(jì)和藥學(xué)專業(yè)中的作用和地位。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：性質(zhì)、任務(wù)、提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定。
2、難點(diǎn)：提取分離原理。
四、講授的基本內(nèi)容和要點(diǎn)
（一）緒論
1、天然藥物化學(xué)的內(nèi)涵
2、天然藥化的研究對象及其任務(wù)
3、天然藥物化學(xué)的發(fā)展歷史
4、天然藥物化學(xué)的發(fā)展趨勢
（二）生物合成
1、生物合成假說的提出
2、植物代謝及其代謝產(chǎn)物
3、“植物親緣相關(guān)性學(xué)說”與“植物化學(xué)分類學(xué)”
4、生物合成途徑
5、了解生物合成的意義
（三）提取分離方法
1、概述：天然藥物化學(xué)成分的構(gòu)成特點(diǎn)、提取分離前的文獻(xiàn)調(diào)研
2、天然藥物有效成分的提?。撼Ｓ锰崛》椒?、溶劑提取法
3、天然藥物有效成分的分離與精制：根據(jù)物質(zhì)溶解度差異、物質(zhì)分配系數(shù)差異、物質(zhì)吸附能力差異、物質(zhì)分子大小差異、物質(zhì)解離程度差異分離
4、提取與分離天然藥物有效成分的注意事項：光照、酸堿、溫度、溶劑、層析的影響
（四）天然化合物結(jié)構(gòu)研究方法
1、化學(xué)結(jié)構(gòu)研究的目的與意義
2、結(jié)構(gòu)研究步驟與方法：查閱文獻(xiàn)、純度測定、物理常數(shù)測定、分子量測定（經(jīng)典法、MS法）、分子式測定（EA法、HR-MS法、NMR法）
3、不飽度計算
4、分子結(jié)構(gòu)骨架測定：專屬反應(yīng)、植物親緣相關(guān)性、光譜特征、部分合成、化學(xué)降解
5、功能團(tuán)推斷：化學(xué)法、光譜法
6、光譜分析:UV、IR、NMR、MS
（五）天然化合物結(jié)構(gòu)研究實(shí)例
五、英語詞匯
1、概念詞匯：
Chemistry of Constituents of Chinese Traditional and Herbal Drugs、Phytochemistry、Chemistry of Natural Products、Chemistry of Natural Organic Compounds
2、專業(yè)及術(shù)語詞匯： Active Constituents、Active Compounds、Active Extracts、Active Fraction、Inactive Constituents、Biosynthesis、primary metabolites、secondary metabolites、acetate-malonate pathway、mevalonic acid pathway、cinnamic acid – shikimic acid pathway、amino acid pathway、extraction、extracts、isolation、chromatography、CCD、counter current distribution、DCCC、GC、LC、TLC、normal phase、reverse phase、adsorption、adsorbent、partition、fraction、gel filtration、exclusion、Sephadex G、Sephadex LH、mobile-phase、structural identification、structural elucidation、spectral analysis
六、復(fù)習(xí)思考題
1、天然藥物化學(xué)的定義、研究對象、任務(wù)及其在藥學(xué)專業(yè)中的作用？
2、何謂有效成分、有效部位和無效成分？他們與中藥新藥研究開發(fā)的關(guān)系如何？
3、天然化合物生物合成的主要途徑有哪些？與主要成分間相關(guān)性如何？
4、分離天然化合物的主要依據(jù)有哪些？
5、不同的層析法分離天然化合物的要素是什么？吸附薄層層析最佳條件的選擇與哪些因素有關(guān)？如何調(diào)整？何謂邊緣效應(yīng)？如何規(guī)避？
6、天然化合物結(jié)構(gòu)鑒定的一般程序如何？“四大”波譜分別提供化合物分子的何種結(jié)構(gòu)信息？
第二章 糖和苷
一、學(xué)時數(shù)：6學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握糖和苷的結(jié)構(gòu)特征、分類及苷類化合物的含義；
2、掌握苷的溶解度與分子結(jié)構(gòu)的內(nèi)在聯(lián)系，檢識糖、苷類化合物反應(yīng)機(jī)理與應(yīng)用；
3、掌握苷鍵的裂解的反應(yīng)機(jī)理及其應(yīng)用；
4、掌握多糖和苷的提取通法及常用的分離方法。
5、掌握苷類化合物結(jié)構(gòu)鑒定的程序和苷鍵構(gòu)型的確定方法；
6、熟悉單糖立體化學(xué)及苷類化合物中的幾個重要的名詞、術(shù)語；
7、熟悉單糖結(jié)構(gòu)中各類羥基的不同活性及作用于羥基的化學(xué)反應(yīng)；
8、熟悉糖和苷的旋光性質(zhì)及對結(jié)構(gòu)研究的貢獻(xiàn)；
9、了解糖和苷類化合物研究成就與最新研究進(jìn)展。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：分類、檢識反應(yīng)、苷鍵裂解、提取通法、糖鏈結(jié)構(gòu)鑒定程序及苷鍵構(gòu)型確定。
2、難點(diǎn)：苷鍵裂解及苷鍵構(gòu)型確定原理。
四、講授的基本內(nèi)容和要點(diǎn)
（一）單糖的立體化學(xué)；
1、單糖的絕對構(gòu)型
2、單糖的差向異構(gòu)體
3、單糖的氧環(huán)
4、單糖的構(gòu)象
（二）糖和苷的分類
1、天然界常見的單糖
2、低聚糖
3、多聚糖
4、苷類：定義、分類、（三）糖的理化學(xué)性質(zhì)
1、溶解性
2、氧化反應(yīng)
3、糠醛形成反應(yīng)
4、羥基反應(yīng)
5、羰基反應(yīng)
（四）苷鍵的裂解
1、酸催化水解
2、乙酰解
3、堿催化水解和β消除
4、酶催化水解
5、過碘酸裂解反應(yīng)
（五）糖的核磁共振性質(zhì)
1、苷類化合物中糖的1H-NMR特征
2、苷類化合物中糖的13C-NMR特征
3、糖的NMR特征在結(jié)構(gòu)鑒定中的意義
（六）糖鏈的結(jié)構(gòu)鑒定
1、研究糖鏈結(jié)構(gòu)的順序：純度鑒定、分子量測定、單糖種類鑒定、單糖間及糖與苷元間連接位置確定、糖鏈連接順序確定、苷鍵構(gòu)型的確定
2、糖鏈結(jié)構(gòu)研究實(shí)例
（七）糖和苷的提取分離
1、酶對糖及其苷類提取的影響
2、提取糖及苷類溶劑的選擇
3、糖及苷提取分離純化的方法
五、專業(yè)及術(shù)語英語詞匯
monosaccharides、anomeric-carbon、anomeric-proton、oligosaccharides、polysaccharides、glycosides、aglycone、genin、Cyanogenic、saccharides、Molish reaction、invertase、maltase、emulsin、glycoside shift
六、復(fù)習(xí)思考題
1、苷類化合物的含義及其結(jié)構(gòu)特征是什么？常見的分類方法及主要類型有哪些？
2、單糖的D、L系和α、β型的含義是什么？如何判斷？
3、何謂原生苷、次生苷、苷元？提取時應(yīng)注意什么？
4、苷鍵裂解的常用方法有哪些？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？酸水解的反應(yīng)機(jī)理如何？
5、如何識別天然藥物中可能存在糖和苷類成分？Molish反應(yīng)陽性說明一定是苷類成分存在嗎？
6、簡述糖鏈測定的一般程序，如何應(yīng)用NMR確定苷鍵的構(gòu)型？
第三章 苯丙素類
一、學(xué)時數(shù)：2學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握苯丙酸類的結(jié)構(gòu)類型；香豆素的理化性質(zhì)。
2、熟悉香豆素結(jié)構(gòu)類型。
3、了解木脂素的結(jié)構(gòu)特征及結(jié)構(gòu)類型。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：結(jié)構(gòu)類型、化學(xué)性質(zhì)、波譜特征。
2、難點(diǎn)：波譜特征。
四、講授的基本內(nèi)容和要點(diǎn)
（一）定義及生物合成途徑
（二）香豆素類
1、定義
2、結(jié)構(gòu)類型：簡單香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素、其他香豆素、異香豆素、雙香豆素
3、生理活性
4、物理化學(xué)性質(zhì)：溶解性、熒光性質(zhì)、內(nèi)酯性質(zhì)和堿水解反應(yīng)、Labat 反應(yīng)、Gibb’s 反應(yīng)、Emerson 反應(yīng)、異羥肟酸鐵反應(yīng)、酚羥基反應(yīng)
5、提取分離：系統(tǒng)溶劑法、真空升華或蒸餾法、色譜法、酸堿分離法
6、波譜鑒定：UV法、1H-NMR法
（三）木脂素
1、概述
2、結(jié)構(gòu)與分類：簡單木脂素、單環(huán)氧木脂素、木脂內(nèi)酯、環(huán)木脂素、環(huán)木脂內(nèi)酯、雙環(huán)氧木脂素
五、專業(yè)及術(shù)語英語詞匯
Phenylpropanoids、coumarins、lignan、六、復(fù)習(xí)思考題
1、苯丙素的母核結(jié)構(gòu)特征是什么？常見的香豆素結(jié)構(gòu)類型有哪些？
2、香豆素的內(nèi)酯性質(zhì)、Labat 反應(yīng)、Gibb’s 反應(yīng)、Emerson 反應(yīng)、異羥肟酸鐵反應(yīng)在香豆素類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)信息中的意義如何？
3、香豆素的紫外特征是什么？
4、木脂素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是什么？
第四章 醌類化合物
一、學(xué)時數(shù)：4學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握醌類衍生物的理化性質(zhì)及呈色反應(yīng)。
2、掌握醌類衍生物的結(jié)構(gòu)特征及類型；
3、熟悉蒽醌衍生物提取分離的一般原則和方法；
4、熟悉蒽醌衍生物結(jié)構(gòu)測定的化學(xué)方法。
5、了解醌類衍生物的生物活性。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：結(jié)構(gòu)類型、理化性質(zhì)及呈色反應(yīng)。
2、難點(diǎn)：呈色反應(yīng)。
四、講授的基本內(nèi)容和要點(diǎn)
（一）結(jié)構(gòu)類型
1、苯醌類
2、萘醌類
3、菲醌類
4、蒽醌類：蒽醌衍生物、蒽酚和蒽酮衍生物、二蒽酮類
（二）理化性質(zhì)及呈色反應(yīng)
1、物理性質(zhì)：性狀、升華性、揮發(fā)性、溶解性、光穩(wěn)定性
2、化學(xué)性質(zhì)與呈色反應(yīng)：酸性、顏色反應(yīng)（Feigl 反應(yīng)、無色亞甲蘭顯色試驗(yàn)、Kesting-Craven 反應(yīng)、Karius 反應(yīng)、Borntrager’s反應(yīng)、醋酸鎂反應(yīng)）
（三）醌類化合物的提取分離
1、一般醌類成分的提取分離：有機(jī)溶劑提取法、堿提酸沉法、水蒸氣蒸餾法，吸附層析分離法
2、蒽醌類成分的提取分離：游離蒽醌衍生物的分離、游離蒽衍生物與蒽苷類的分離、蒽醌苷類的分離
（四）結(jié)構(gòu)測定
1、衍生物制備：甲基化反應(yīng)、乙酰化反應(yīng)
2、波譜分析：UV、IR
五、專業(yè)及術(shù)語英語詞匯
Quinones、benzoquinones、naphthoquinones、phenanthraquinones、anthraquinones
六、復(fù)習(xí)思考題
1、醌類化合物的母核結(jié)構(gòu)特征及其分類有哪些？寫出丹參酮ⅡA的結(jié)構(gòu)；常見蒽醌的結(jié)構(gòu)類型有哪些？寫出大黃酚、大黃酸結(jié)構(gòu)。
2、蒽醌類化合物顏色反應(yīng)的類型有哪些？它們在蒽醌的檢識與結(jié)構(gòu)信息中有何意義？
3、以大黃中蒽醌系列化合物為例，排列PH梯度萃取酚酸性成分時堿的強(qiáng)弱順序與化合物酸性強(qiáng)弱順序。
4、蒽醌類化合物的UV、IR特征是什么？
第五章 黃酮類化合物
一、學(xué)時數(shù)：6學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握黃酮類化合物的主要理化性質(zhì)和鑒別反應(yīng)；UV、NMR、MS在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用。
2、熟悉黃酮類化合物生物合成的基本途徑；黃酮類化合物結(jié)構(gòu)分類及其結(jié)構(gòu)類別間的生物合成關(guān)系；黃酮類化合物提取分離原理及主要方法；聚酰胺層析法在黃酮類化合物分離中的應(yīng)用；
3、了解化學(xué)法在黃酮類結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：黃酮類化合物的主要理化性質(zhì)和鑒別反應(yīng)；UV、NMR、MS在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用。
2、難點(diǎn)：黃酮類化合物提取分離原理及主要方法
四、講授基本內(nèi)容和要點(diǎn)
（一）概述
1、基本結(jié)構(gòu)和分類
2、黃酮類化合物生物合成的基本途徑
3、黃酮類化合物結(jié)構(gòu)分類及其結(jié)構(gòu)類別間的生物合成關(guān)系
4、重要黃酮類藥物及生理活性成分
（二）黃酮類化合物的理化性質(zhì)
1、性狀
2、溶解度
3、酸堿性
4、顯色反應(yīng)
5、呈色反應(yīng)與結(jié)構(gòu)的關(guān)系
（三）黃酮類化合物的生物活性
（四）黃酮類化合物的提取分離
1、提取
2、精制
3、分離
（五）黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)鑒定
1、層析的應(yīng)用
2、紫外光譜的應(yīng)用 3、1H-MR譜的應(yīng)用； 4、13C-NMR譜的應(yīng)用；
5、MS譜的應(yīng)用；
6、結(jié)構(gòu)研究實(shí)例
五、專業(yè)及術(shù)語英語詞匯
flavone、flavonol、flavanone、flavanonol、chalcone、isoflavone、anthocyanidin、xanthane
六、復(fù)習(xí)思考題
1、試用電子理論解釋為什么黃酮類多顯黃色，而二氫黃酮(醇)多無色。
2、黃芩在貯存過程中為什么會變綠?化學(xué)成分有何變化?(用化學(xué)式表達(dá))
3、就不同的黃酮類化合物的立體結(jié)構(gòu)解釋其在水中溶解度規(guī)律。
4、應(yīng)用堿溶酸沉法提取黃酮類化合物時，應(yīng)注意哪些問題?
5、為什么紅花在開花中期為黃色，開花后期或采收干燥過程中顏色漸變?yōu)榧t色或深紅色(寫出可能的化學(xué)反應(yīng))?
第六章 萜類和揮發(fā)油
一、學(xué)時數(shù)：6學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握萜類成分的結(jié)構(gòu)特征和主要類型；主要類型萜類成分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)；萜類成分的生源途徑；重要的理化性質(zhì)。
2、了解有重要生物活性的萜類化合物。
三、重點(diǎn)與難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：萜類化合物的結(jié)構(gòu)特征和主要類型；主要類型中重要代表物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)；萜類化合物的提取分離方法
2、難點(diǎn)：萜類化合物的結(jié)構(gòu)類型；檢識與結(jié)構(gòu)鑒定
四、講授基本內(nèi)容和要點(diǎn)
（一）概述
1、萜類化合物的含義和分類
2、生物活性及分布
3、萜類化合物的生源學(xué)說與生物合成途徑
（二）萜類化合物的結(jié)構(gòu)類型及其重要代表化合物
1、單萜
2、環(huán)烯醚萜
3、倍半萜
4、二萜
5、二萜半萜
（三）萜類化合物的理化性質(zhì)
1、物理性質(zhì)
2、化學(xué)性質(zhì)
（四）萜類化合物的提取分離
1、萜類的提取
2、萜類的分離
3、提取分離實(shí)例
（五）萜類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)鑒定
1、波譜法的應(yīng)用（UV、IR、MS）
2、結(jié)構(gòu)鑒定實(shí)例
（六）揮發(fā)油
1、概述（定義、分布、組成和分類、生物活性及應(yīng)用）
2、揮發(fā)油的性質(zhì)
3、揮發(fā)油的提取
4、揮發(fā)油的分離
5、揮發(fā)油的鑒定
五、專業(yè)、術(shù)語、重要化合物英語詞匯
terpenoids、empirical isoprene rule、monoterpenoids、geraniol、menthol、borneol、camphor、troponoides、iridoids、qinghaosu、artemisinin、a-santonin、azulenoids、diterpenoids、andrographolide、ginkgolides、taxol、curcumol、triptolide、tanshinone ⅡA、stevioside、guanfu base A
六、復(fù)習(xí)思考題
1、何謂生源異戊二烯法則、揮發(fā)油、Girard試劑、萜類化合物、酸值、酯值、皂化值？
2、常見的重要單萜、倍半萜、二萜、二萜半萜的代表化合物及其生物活性是什么？
3、如何鑒定揮發(fā)油？
4、環(huán)烯醚萜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是什么？穩(wěn)定性如何？
第七章 三萜及其苷類
一、學(xué)時數(shù)：4學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握三萜及其苷類化合物的理化性質(zhì)與顯色反應(yīng)。
2、熟悉三萜皂苷類化合物的結(jié)構(gòu)類型與特征；三萜及其皂苷的提取分離方法。
3、了解三萜皂苷鍵的裂解反應(yīng)。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：掌握三萜及其苷類化合物的理化性質(zhì)與顯色反應(yīng)。
2、難點(diǎn)：三萜皂苷類化合物的結(jié)構(gòu)類型與特征。
四、基本內(nèi)容
（一）概述
1、三萜的定義
2、三萜的分布
3、三萜的存在形式
4、三萜的研究進(jìn)展
5、三萜的生物合成
（二）四環(huán)三萜
1、羊毛脂烷型
2、達(dá)瑪烷型
3、甘遂烷型
4、環(huán)阿屯型
5、葫蘆烷型
6、楝烷型
7、原萜烷型
（三）五環(huán)三萜
1、齊墩果烷型
2、烏蘇烷型
3、羽扇豆烷型
4、木栓烷型
5、何伯烷型和異何伯烷型
（四）三萜類化合物的理化性質(zhì)
1、性狀
2、表面活性
3、溶解度
4、溶血作用
5、沉淀反應(yīng)
6、顯色反應(yīng)
（五）三萜類化合物的提取與分離
1、苷元的提取與分離
2、三萜皂苷的提取與分離
（六）三萜類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
1、常用的化學(xué)反應(yīng)
2、三萜類化合物的波譜特征(UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR)
3、結(jié)構(gòu)測定實(shí)例
（七）三萜類化合物的生物活性
五、專業(yè)、術(shù)語、重要化合物英語詞匯
triterpenes、tetracyclic triterpenoids、Triterpenoid sapogenins、Triterpenoid saponins、ginsenosides、20（S）-protopanaxadiol、oleanane、oleanolic acid、glycyrrhizic acid、Glycyrrhetinic acid、α-amyrane、Ursolic acid、Liebermann-burchard reaction、toosendanin
六、復(fù)習(xí)思考題
1、簡述三萜苷元的提取分離步驟。
2、簡述四環(huán)三萜的分類和結(jié)構(gòu)特征。
3、三萜皂苷的物理化學(xué)性質(zhì)特點(diǎn)是什么？
第八章 甾體及其苷類
一、學(xué)時數(shù)：6學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握甾體化合物的結(jié)構(gòu)特征與分類；強(qiáng)心苷的理化性質(zhì)；甾體皂苷的理化性質(zhì)、提取分離方法。
2、熟悉C21甾體化合物的結(jié)構(gòu)類型和海洋甾體化合物；甾體母核的顯色反應(yīng)及其與三萜的區(qū)別；強(qiáng)心苷的結(jié)構(gòu)特征；區(qū)分甲、乙型強(qiáng)心苷的方法；甾體皂苷元的結(jié)構(gòu)類型及區(qū)分方法。
3、了解強(qiáng)心苷的提取與分離方法。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：甾體化合物的結(jié)構(gòu)特征與分類；強(qiáng)心苷的理化性質(zhì)；
2、難點(diǎn)：甾體皂苷的理化性質(zhì)、提取分離方法。
四、基本內(nèi)容
（一）概述
1、甾體的定義
2、研究進(jìn)展
3、基本結(jié)構(gòu)和分類
4、甾體的立體化學(xué)
5、甾體的顏色反應(yīng)
（二）甾體化合物
1、C21甾體化合物（定義、存在形式、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、結(jié)構(gòu)類型、理化性質(zhì)）
2、海洋甾體化合物
（三）強(qiáng)心苷類化合物
1、定義
2、生物合成
3、化學(xué)結(jié)構(gòu)和分類
4、強(qiáng)心苷的理化性質(zhì)
5、強(qiáng)心苷的顏色反應(yīng)
6、強(qiáng)心苷的提取分離
7、強(qiáng)心苷的波譜特征（UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR）
8、強(qiáng)心苷的生理活性
（四）甾體皂苷
1、概述
2、甾體皂苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)及分類
3、甾體皂苷的理化性質(zhì)
4、甾體皂苷元的波譜特征（UV、IR、MS、1H-NMR）
5、甾體皂苷的提取分離
五、專業(yè)、術(shù)語、重要化合物英語詞匯
steroides、C21-steroides、cyclopentano-perhydrophenanthrene、Salkowski reaction、Rosenheim reaction、pregnane、Keller-Kiliani reaction、cardiac glycosides、bufogenins、bufotoxins、digitoxigenin、cardenolide、scillanolide、bufanolide、Legal reaction、Kedde reaction、Raymond reaction、Baljet reaction、xanthydrol reaction、steroidal saponins、spirostane、spirostanols、isospirostanols、furostanols、pseudo-spirostanols
六、復(fù)習(xí)思考題
1、強(qiáng)心苷的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及分類依據(jù)是什么？其強(qiáng)心作用與結(jié)構(gòu)關(guān)系如何？
2、強(qiáng)心苷類化合物的鑒別反應(yīng)有哪些？活性次甲基反應(yīng)基本原理是什么？
3、甾體皂苷與三萜皂苷如何區(qū)別？甾體皂苷元、C21甾與強(qiáng)心苷元結(jié)構(gòu)上有何異同？
第九章 生物堿
一、學(xué)時數(shù)：8學(xué)時
二、目的和要求
1、掌握生物堿的概念、命名規(guī)則、分布及存在形式；生物堿呈色、溶解性及堿性與其分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系，及其影響生物堿堿性的諸因素；生物堿提取分離的原理；
2、了解生物堿的生物合成途徑；主要生物堿的骨架及結(jié)構(gòu)分類；生物堿常用的檢識方法；生物堿的堿性在提制和結(jié)構(gòu)研究上的意義；生物堿提取分離的諸種方法；生物堿結(jié)構(gòu)測定中常用的降解反應(yīng)機(jī)理和對測定結(jié)構(gòu)的意義。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：生物堿的定義和分類生物堿的分類和物理性質(zhì)。
2、難點(diǎn)：生物堿呈色、溶解性及堿性與其分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系，及其影響生物堿堿性的諸因素。
四、基本內(nèi)容
（一）概述
1、定義
2、分布
3、積累和儲藏
4、生物堿存在形式
（二）生物堿生物合成的基本原理
1、Schiff base的形成2、Mannish reaction
3、酚氧化偶連
4、亞胺鹽次級環(huán)合反應(yīng)
（三）生物堿的分類、生源及其分布
1、生物堿分類的主要方法
2、來源于鳥氨酸的生物堿
3、來源于賴氨酸的生物堿
4、來源于苯丙氨酸/酪氨酸的生物堿
5、來源于色氨酸的生物堿
6、來源于萜類的生物堿
7、來源于甾體的生物堿
（四）生物堿的理化性質(zhì)
1、物理性質(zhì)
2、生物堿的檢識（生物堿的沉淀反應(yīng)、生物堿的顯色反應(yīng)）
3、生物堿的化學(xué)性質(zhì)（堿性、成鹽、C-N鍵的裂解反應(yīng)）
（五）生物堿的提取分離
1、總生物堿的提取
2、生物堿的分離
（六）生物堿的結(jié)構(gòu)鑒定
1、波譜法在生物堿的結(jié)構(gòu)鑒定與測定中的應(yīng)用（UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR）
2、生物堿類化合物結(jié)構(gòu)鑒定實(shí)例
五、專業(yè)、術(shù)語、重要化合物英語詞匯
alkaloid、Schiff base、atropine、morphine、ephedrine、pseudoephedrine、berberine、palmatine、colchicines、reserpine、vinblastine、cinchonine、quinine、verticine、Dragendroff’s reagent、Hofmann degradation、exhaustive methylation、Emde degradation、von Braun ternary amine degradation、Caffeine、Codeine、Cocaine
六、思考題
1、思考生物堿的簡單定義與目前較確切的表述的關(guān)系。
2、生物堿主要有哪些存在形式？
3、莨菪堿與阿托品的關(guān)系如何?如何由莨菪堿變成阿托品?
4、試論影響生物堿堿性的因素。
5、小檗堿有哪幾種結(jié)構(gòu)互變?產(chǎn)生的原因是什么?
6、熟悉有代表性的重要生物堿阿托品、麻黃素、黃連素、嗎啡、利血平、長春堿、長春新堿、秋水仙堿、喜樹堿、咖啡因、麥角堿、可待因、可卡因、一葉秋堿、延胡索乙素的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
7、自天然藥物提取液中識別生物堿是否存在的主要反應(yīng)及其試劑有哪些？生物堿沉淀試劑陽性說明一定含有生物堿嗎？
第十章 海洋天然藥物
一、學(xué)時數(shù)：2學(xué)時
二、目的和要求
1、熟悉大環(huán)內(nèi)酯類、聚醚類、肽類、C15乙酸原化合物、前列腺素類似物等海洋天然藥物。
2、了解海燕天然藥物研究進(jìn)展
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：已知海洋天然藥物類型及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；海洋天然藥物的發(fā)展態(tài)勢。
2、難點(diǎn)：已知海洋天然藥物類型的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
四、基本內(nèi)容
（一）概述
1、海洋的地理狀況
2、海洋生物的特點(diǎn)
3、海洋藥物研究的國內(nèi)外概況
4、海洋藥物研究的發(fā)展趨勢
5、海洋天然產(chǎn)物的化合物類型
（二）大環(huán)內(nèi)酯類
1、特點(diǎn)
2、簡單大環(huán)內(nèi)酯類化合物
3、內(nèi)酯環(huán)含有氧環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類
4、多聚內(nèi)酯類
5、其他大環(huán)內(nèi)酯類
（三）聚醚類化合物
1、脂溶性聚醚類
2、水溶性聚醚類
3、聚醚三萜類
（四）肽類化合物
1、組成海洋肽類化合物的氨基酸
2、常見的海洋肽類化合物
（五）C15乙酸原化合物
1、生物合成
2、海洋生物中發(fā)現(xiàn)的C15乙酸原化合物
3、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
4、分類
（六）前列腺素類似物
1、生理活性
2、發(fā)展概況
（七）海洋天然產(chǎn)物研究實(shí)例
五、專業(yè)、術(shù)語、重要化合物英語詞匯
marine natural products、marine compounds、tetrodotoxin、macrolides
六、思考題
1、已知的幾類海洋天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是什么？
2、海洋藥物的發(fā)展趨勢和主要領(lǐng)域有哪些？
第十一章 天然藥物的研究開發(fā)
一、學(xué)時數(shù)：2學(xué)時
二、目的和要求
1、熟悉天然藥物的研究開發(fā)程序；
2、熟悉天然藥物中生物活性成分的研究方法。
三、重點(diǎn)和難點(diǎn)
1、重點(diǎn)：天然藥物的研究開發(fā)程序。
2、難點(diǎn)：天然藥物的研究開發(fā)思路與設(shè)計。
四、基本內(nèi)容
（一）概述
1、天然藥物的研究開發(fā)面臨的機(jī)遇
2、天然藥物的研究開發(fā)面臨的挑戰(zhàn)
3、我國國家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的中藥新藥注冊分類情況
4、自天然藥物創(chuàng)新藥物研究開發(fā)的一般程序
（二）天然藥物中開發(fā)新藥途徑
1、經(jīng)驗(yàn)積累
2、偶然發(fā)現(xiàn)
3、藥物普篩（生物活性指導(dǎo)下的有效成分或有效部位的提取分離）
4、代謝研究
5、天然藥物化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)修飾或結(jié)構(gòu)改造
6、其他
（三）天然藥物化學(xué)研究方法
1、調(diào)研
2、天然藥物化學(xué)成分預(yù)試
3、化學(xué)成分的分離
五、復(fù)習(xí)思考題
1、自天然藥物研究開發(fā)新藥的主要途徑有哪些？
2、由天然藥物提取分離獲得的有效成分研究開發(fā)新藥，屬國家中藥注冊分類幾類？
3、中藥新藥注冊分類中有效部位的含義是什么？由有效部位開發(fā)的中藥新藥屬于中藥注冊分類幾類？
4、普篩發(fā)現(xiàn)新藥的有缺點(diǎn)是什么？目前尋找新藥的篩選方法研究進(jìn)展如何？
第五篇：天然藥物化學(xué)名詞解釋
天然藥物化學(xué)名詞解釋
Rf值：樣品中某成分在紙層析或薄層層析特定溶劑系統(tǒng)中移動的距離與流動相前沿的距離之比。
酸價：在化學(xué)中，酸價（或稱中和值、酸值、酸度）表示中和1克化學(xué)物質(zhì)所需的氫氧化鉀（KOH）的毫克數(shù)。
碘價：碘價就是在油脂上加成的鹵素的質(zhì)量（以碘計）又作碘值，即每100g油脂所能吸收碘的質(zhì)量（以克計）。
皂化價：皂化1克的油脂所需要之堿(即做皂常用的為氫氧化鈉)的克數(shù) 天然藥物化學(xué)：運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)理論與方法研究天然藥物中化學(xué)成分的一門學(xué)科。
反相層析：流動相的極性大于固定相的層析技術(shù)。分子在此系統(tǒng)中的移動速度依其極性排列，極性大者移動快。
有效成分：一般具有一定生理活性，能用一定的分子式或結(jié)構(gòu)式表述，有一定物理常數(shù)的單體化合物。
無效成分：與有效成分共存的其他成分。
單體：單體（monomer；momer）是能與同種或他種分子聚合的小分子的統(tǒng)稱。是能起聚合反應(yīng)或縮聚反應(yīng)等而成高分子化合物的簡單化合物。是合成聚合物所用的-低分子的原料。
透析：穿過膜的選擇性擴(kuò)散過程。可用于分離分子量大小不同的溶質(zhì)，低于膜所截留閾值分子量的物質(zhì)可擴(kuò)散穿過膜，高于膜截留閾值分子量的物質(zhì)則被保留在半透膜的另一側(cè)。
梯度洗脫：梯度性地改變洗脫液的組分(成分、離子強(qiáng)度等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。
黃酮類化合物：1952年以前黃酮類化合物（flavonoids）是指一類存在于自然界的具有2-苯基色原酮（flavone）結(jié)構(gòu)的化合物。現(xiàn)在泛指兩個苯環(huán)（A與B環(huán)）通過中央三碳原子相互連接而成的一系列化合物。香豆素：是鄰羥基桂皮酸的內(nèi)酯，具有芳香氣味。揮發(fā)油：揮發(fā)油又稱精油,英文為 essential oils，是一類與水不相混溶的揮發(fā)性油狀液體的總稱。
交叉共軛體系：共軛體系中，兩個共軛系統(tǒng)分別與另一π鍵體系共軛，但這兩個共軛系統(tǒng)互不共軛，稱為交叉共軛體系。
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