第一篇：乙型肝炎血清學(xué)檢測中不常見模式分析

乙型肝炎血清學(xué)檢測中不常見模式分析

乙型肝炎病毒的血清學(xué)檢測是臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測項(xiàng)目，應(yīng)用最廣泛的就是我們俗稱的乙肝“二對半”。人體感染乙肝病毒后，血清中抗原、抗體的變化有一定的規(guī)律性，有一些模式是我們經(jīng)常遇到的，例如我們通常所稱的“大三陽”、“小三陽”等，而所謂的不常見模式是相對于常見模式而言，這些模式難以用乙型肝炎病毒感染后血清學(xué)指標(biāo)規(guī)律性的改變來解釋。不常見模式的出現(xiàn)是多種因素造成的。如果排除了試劑、操作及其他干擾因素，根本原因是病毒變異或人體免疫狀態(tài)改變所引起。乙型肝炎病毒的變異是在慢性感染過程中為適應(yīng)生存環(huán)境而自然發(fā)生的，特別是近幾年抗乙肝藥物以及疫苗的廣泛應(yīng)用，使乙肝病毒的突變發(fā)生率明顯增加。突變可發(fā)生在基因組各個(gè)區(qū)域：前S/S區(qū)、前C/C區(qū)、P區(qū)以及X區(qū)，由于基因的變異造成其合成的蛋白構(gòu)象發(fā)生改變，使臨床檢測血清學(xué)指標(biāo)的模式有所改變。而人體免疫狀態(tài)的改變，無論是由于遺傳性的還是繼發(fā)性的原因，都可能在感染乙肝病毒時(shí)發(fā)生無免疫應(yīng)答或應(yīng)答低下，使臨床實(shí)驗(yàn)室無法檢測到某種抗原或抗體，繼而使血清學(xué)指標(biāo)的模式發(fā)生改變。

本實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)了8099例用Abbott Axsym試劑檢測乙型肝炎病毒血清學(xué)指標(biāo)的結(jié)果，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）以及乙肝核心抗體-IgM（HBcAb-IgM），其中有150例為不常見模式，占1.85%。雖然所占比例較低，但由于我國是乙肝的高發(fā)區(qū)且人口眾多，因此不常見模式的絕對數(shù)仍不容忽視。

我們統(tǒng)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)室不常見模式出現(xiàn)的百分比，最多見的依次為以下5種不常見模式：HBeAg與HBeAb同時(shí)陽性、HBsAg與HBsAb同時(shí)陽性、HBsAg單獨(dú)陽性、HBsAg陰性而HBcAb-IgM陽性、HBeAg單獨(dú)陽性。我們將這些模式可能出現(xiàn)的原因進(jìn)行分析討論，有以下幾種情況：

1、HBeAg與HBeAb同時(shí)陽性：HBeAg陽性一般反映HBV復(fù)制活躍，傳染性較強(qiáng)，抗HBe一般在HBeAg由陽性轉(zhuǎn)為陰性后產(chǎn)生，表明部分病毒被清除，乙肝有所緩解，傳染性降低。而我們統(tǒng)計(jì)的HBeAg和HBeAb同時(shí)陽性占總的不常見模式的百分比高達(dá)44%，并且結(jié)合肝功能指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，慢性指標(biāo)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）升高的百分比較高，提示急性HBV感染趨向恢復(fù)（感染中期），處于血清轉(zhuǎn)換期，但肝細(xì)胞仍有炎癥損傷。

但值得注意的是，并非所有HBeAg陽性轉(zhuǎn)為陰性都提示病情有好轉(zhuǎn)的趨勢，一些乙肝患者和健康攜帶者出現(xiàn)-HBeAb的同時(shí)可檢測到持續(xù)高滴度的與前C區(qū)/C區(qū)突變相關(guān)的HBV復(fù)制。此時(shí)應(yīng)檢測HBV-DNA，以觀察患者體內(nèi)HBV是否有復(fù)制。如HBeAg已轉(zhuǎn)陰，而HBV-DNA仍有復(fù)制，高度提示HBV已發(fā)生變異。前C區(qū)1896位（A83）的變異是HBV中最常見，也是目前研

究最多的變異之一，是乙肝病毒為適應(yīng)生存環(huán)境，使前基因組RNA結(jié)構(gòu)更具穩(wěn)定性，有利于病毒復(fù)制而引起的突變（與基因型有關(guān)），臨床上表現(xiàn)為HBeAg陰性而HBV-DNA陽性，患者處于活動狀態(tài)的慢性乙型肝炎。

隨著以拉米夫定為代表的核苷類抗病毒藥物的應(yīng)用，推動了慢性乙型肝炎治療的進(jìn)程，治療過程中會發(fā)生HBeAg向HBeAb的血清轉(zhuǎn)化，出現(xiàn)HBeAg和HBeAb同時(shí)陽性。但拉米夫定的臨床廣泛應(yīng)用也遇到了與以往治療類似的問題，如持續(xù)應(yīng)答率不滿意、部分患者停藥后復(fù)發(fā)、需長期用藥和耐藥突變等。其中耐藥突變研究最多是YMDD變異，已有研究證實(shí)，YMDD變異株復(fù)制活力較野生株低，停用拉米夫定后野生株很快恢復(fù)為優(yōu)勢株，因此變異出現(xiàn)并不是停止治療的指標(biāo)，發(fā)生變異不一定耐藥，只有當(dāng)變異株成為優(yōu)勢株時(shí)才發(fā)生耐藥。臨床應(yīng)根據(jù)患者不同的臨床表現(xiàn)，密切觀察用藥后HBeAg的血清轉(zhuǎn)換率、治療前后谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的升降、HBV-DNA的水平高低以及加強(qiáng)對耐藥突變的檢測，綜合評價(jià)療效，制定下一步的治療方案，并加強(qiáng)隨訪。

2、HBsAg與HBsAb同時(shí)陽性：HBsAg是HBV感染的特異性指標(biāo)，HBsAb一般于HBsAg消失數(shù)周后（也就是急性感染約5個(gè)月后）開始在血液中出現(xiàn)，是HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的特異性保護(hù)抗體，是HBV感染終止及有免疫力的標(biāo)志。一般情況下，血清中HBsAg和HBsAb不可能同時(shí)存在。本實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)HBsAg 與HBsAb同時(shí)陽性占總的不常見模式百分比為35.26%，居不常見模式的第2位。隨著大量乙肝治療藥物的臨床應(yīng)用以及乙肝疫苗的推廣使用，此種模式的患者數(shù)量還會明顯增加。

分析原因可能有以下幾種：①接種乙型肝炎疫苗后，雖有正常的HBsAb應(yīng)答，但仍能感染α決定簇變異的免疫逃逸病毒株，從而與HBsAb并存。②前后有不同亞型的HBV感染。③乙肝病毒攜帶者接種疫苗后產(chǎn)生HBsAb，由于S基因的變異，其編碼的HBsAg抗原性改變，原型HBsAb不能將HBsAg清除。有研究者統(tǒng)計(jì)，隨訪臺灣地區(qū)10年來乙肝HBV-DNA陽性兒童由于接種疫苗后發(fā)生S基因變異，由1984年（接種前）的6.1%（8/132）上升到了1989年（5年后）的19.6%（10/51）和1994年（10年后）的28.1%（9/32）。而且HBV-DNA陽性兒童接種疫苗后S基因變異率明顯高于未接種疫苗者（12/33對15/153）。由此可見HBV基因變異株有可能在免疫后人群中流行而成為新的公共衛(wèi)生問題。④HBsAb能與HBsAg 構(gòu)成免疫復(fù)合物，所以少數(shù)慢性乙肝患者可出現(xiàn)HBsAb和HBsAg 同時(shí)陽性。另外，由于干擾素既能抑制病毒復(fù)制，又能調(diào)節(jié)宿主免疫，因此對于干擾素治療的慢性乙肝患者，在治療中雖出現(xiàn)HBsAb血清轉(zhuǎn)換，但由于S基因的變異，而不能將HBsAg清除。該模式盡管HBsAb陽性，但由于有免疫逃逸病毒株的存在，因此肝功能的急慢性指標(biāo)均有不同程度的升高，說明乙肝并未進(jìn)入恢復(fù)期，對于該模式的患者應(yīng)結(jié)合HBV-DNA和前S蛋白等檢測，以了解病毒復(fù)制情況，進(jìn)行正確的治療。

3、HBsAg單獨(dú)陽性：不常見模式中還有HBsAg單獨(dú)陽性，無抗體出現(xiàn)的模式，主要見于①急性HBV感染的最早期，一般隨之出現(xiàn)HBeAg和HBcAb-IgM，若以后仍為持續(xù)性單一的

HBsAg陽性，需用HBsAg確認(rèn)實(shí)驗(yàn)以避免假陽性結(jié)果。②HBsAg攜帶者母親所生的嬰兒。結(jié)合臨床診斷分析，此種模式主要為慢性乙肝，且肝功能指標(biāo)僅AST升高，提示可能處于乙肝感染的早期或低水平感染。

4、HBsAg陰性而HBcAb-IgM陽性：HBcAb-IgM是HBV感染后較早出現(xiàn)的抗體，高滴度的HBcAb-IgM被認(rèn)為是診斷急性乙型肝炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，即使HBsAg(-),也可診斷急性乙型肝炎，高滴度的HBcAb-IgM常表示肝臟損害，有肝功能的異常。HBsAg陰性而HBcAb-IgM陽性的模式，其肝功能急性指標(biāo)升高的患者較少，而慢性指標(biāo)升高的患者較多，有報(bào)道認(rèn)為此種模式可能是急性乙肝處于恢復(fù)的窗口期。

5、HBeAg單獨(dú)陽性：HBsAg陰性而HBeAg陽性。有文獻(xiàn)報(bào)道，HBV-S基因區(qū)突變可使患者感染HBV后，產(chǎn)生HBsAg陰性結(jié)果，若運(yùn)用PCR技術(shù)在血清或肝組織中能檢測出HBV-DNA，此可視為HBsAg陰性的HBV感染，但較為少見。另有報(bào)道：HBsAb與HBsAg 可形成免疫復(fù)合物，當(dāng)抗體的數(shù)量恰好將抗原決定簇位點(diǎn)全部覆蓋時(shí)，便造成了血清中既不能檢測到HBsAg 又不能檢測到HBsAb的現(xiàn)象；類風(fēng)濕因子與HBeAg有交叉抗原存在，當(dāng)類風(fēng)濕因子陽性時(shí)，可能造成HBeAg假陽性，此時(shí)如遇到HBeAg單獨(dú)陽性時(shí)應(yīng)做類風(fēng)濕因子檢測，以排除假陽性的可能。少數(shù)病例可能與干擾素治療中C基因區(qū)的短暫整合或S基因序列中決定簇前有插入變異有關(guān)。

特別需要注意的是有些不常見模式是由于一些外在的因素造成的，如試劑質(zhì)量、方法學(xué)差異、操作誤差及樣本干擾等，例如HBsAg濃度過高，有些采用“一步法”檢測的試劑盒會產(chǎn)生“鉤狀效應(yīng)”，出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，以上提到的不常見模式中4、5兩種模式就有可能為“鉤狀效應(yīng)”造成，要避免這種情況，可將標(biāo)本稀釋后再測或采用“二步法”的試劑進(jìn)行檢測。因此，對臨床實(shí)驗(yàn)室檢測到的乙肝不常見模式不能輕易發(fā)出報(bào)告，首先要進(jìn)行復(fù)查，排除試劑及操作過程造成的誤差，并且最好采用不同的試劑及方法加以驗(yàn)證；其次應(yīng)及時(shí)與臨床溝通并結(jié)合HBV-DNA、肝功能等檢查以及臨床癥狀進(jìn)行綜合分析；此外，有條件的實(shí)驗(yàn)室還可以對這些標(biāo)本進(jìn)行基因突變的檢測，這樣有利于分析這些模式產(chǎn)生的真正原因，也為臨床的診斷和治療提供可靠依據(jù)。

第二篇：17102例乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒檢測結(jié)果分析

【摘要】 目的 回顧性分析傳染病乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒4項(xiàng)檢測結(jié)果，分別探討其在就診患者中診療的意義。方法 對17102例患者的傳染病4項(xiàng)檢測結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，所有患者均采用時(shí)間分辨免疫熒光法檢測乙型肝炎表面抗原（hbsag），采用酶聯(lián)免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體（抗-hcv）、人類獲得性免疫缺陷病毒抗體（抗-hiv）和梅毒螺旋體抗體，并分析檢查結(jié)果。結(jié)果 ①4 項(xiàng)

檢測結(jié)果中hbsag、抗-hcv、梅毒螺旋體抗體、抗-hiv陽性率分別為21.60%、0.71%、0.75%、0.35%。②科室分布：門診部作為相對獨(dú)立的大科室，在傳染病4項(xiàng)中均占有較高的比例，住院患者中腹部外科的hbsag陽性率較其他科室高，整個(gè)外科的陽性比例要比內(nèi)科高。結(jié)論 傳染病4項(xiàng)陽性率在門診及體檢患者中較為常見，住院患者以外科陽性率為高，及時(shí)檢查能降低醫(yī)源性陽性率，避免發(fā)生醫(yī)療糾紛，減少醫(yī)院內(nèi)感染。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；艾滋病；梅毒

doi：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.004

傳染病4項(xiàng)檢測在臨床上具有相當(dāng)廣泛的實(shí)用性和必要性，由于經(jīng)過血液傳播的疾病初期在臨床上往往無明顯特異性，容易被忽視，并可能對患者及他人造成嚴(yán)重后果，傳染病患者在不知曉的情況下進(jìn)行輸血及無償獻(xiàn)血，對血液安全造成嚴(yán)重威脅[1]。本文分析傳染病4項(xiàng)檢測在臨床中的意義，報(bào)告如下。

資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～12月在本院參與hbsag、抗-hcv、抗-hiv、梅毒螺旋體抗體檢測的17102例就診患者，年齡1～90歲。

1.2 試劑及儀器 hbsag采用上海新波生物有限公司試劑，抗-hcv檢測試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)有限公司，抗-hiv檢測試劑盒購自珠海麗珠試劑股份有限公司，梅毒螺旋體抗體試劑盒購自北京貝爾生物工程有限公司，儀器采用hr801全自動酶標(biāo)儀。

1.3 檢測方法 所有患者均清晨空腹采集靜脈血3～5 ml并及時(shí)送檢。hbsag采用時(shí)間分辨免疫熒光分析法檢測，抗-hcv、抗-hiv、梅毒螺旋體抗體均采用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測。

結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果 17102例中hbsag陽性3694例（21.60%），陽性率最高；抗-hcv陽性122例（0.71%）； 梅毒螺旋體抗體陽性129例（0.75%）；抗-hiv陽性60例（0.35%）。

2.2 科室分布情況 門診部作為相對獨(dú)立的大科室，在傳染病4項(xiàng)中均占有較高的比例，住院患者中腹部外科的hbsag陽性率較其他科室高，整個(gè)外科的陽性比例要比內(nèi)科高，這種情況也反映在抗-hcv、抗-hiv和梅毒螺旋體抗體的陽性情況上。見表1。

討論

我國肝炎高發(fā)，尤其以乙型肝炎、丙型肝炎最多[2]。據(jù)報(bào)道，hcv的慢性陽性率約為我國總?cè)丝诘?%，而隱性 hbsag感染者超過8%[3-8]。自 1981 年 6月美國疾病控制中心（cdc）報(bào)道首例艾滋病以來，短短 30 年間，艾滋病已在

230 多個(gè)國家和地區(qū)流行，至少有5000萬hiv感染者，中國內(nèi)地1985年6月發(fā)現(xiàn)首例外籍艾滋病患者，截止2007年7月

底，全國已累計(jì)艾滋病病毒感染者21.43萬例，艾滋病患者達(dá)56758 例，死亡18246 例。本組發(fā)現(xiàn)抗-hiv呈陽性反應(yīng)者達(dá)60例，以門診部、感染科和其他內(nèi)科比例為最高；感染科是集中了全院大部分艾滋病病毒感染病例，或是首診或是其他住院科室轉(zhuǎn)來或是進(jìn)入艾滋病發(fā)病期的過往患者，因此比例較高，而其他內(nèi)科由較多科室組成，各內(nèi)科科室比例不高；門診部的比例較高，因此必需高度注意門診首診患者的艾滋病病毒抗體篩查。梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性全身性疾病，我國近年來開展梅毒臨床監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)醫(yī)院皮膚科門診就診患者中梅毒約占10%，部分地區(qū)的城市人口中5%患有梅毒，農(nóng)村地區(qū)為2%～3%[9，10]。

本組17102例傳染病4項(xiàng)檢測結(jié)果中hbsag陽性率最高；整個(gè)外科hbsag、抗-hcv、抗-hiv和梅毒螺旋體抗體陽性比例要比內(nèi)科高，因此外科術(shù)前篩查傳染病4項(xiàng)和術(shù)中醫(yī)務(wù)人員注意防護(hù)十分重要。

綜上所述，傳染病4項(xiàng)陽性在門診患者中較為常見，而住院患者又以外科較為多見，及時(shí)進(jìn)行傳染病檢出，可降低醫(yī)源性感染發(fā)生率，避免醫(yī)療糾紛，預(yù)防醫(yī)院內(nèi)感染，同時(shí)可為阻斷母嬰4項(xiàng)傳染病的垂直傳播提供重要指引。

第三篇：不定時(shí)工作制常見爭議問題匯總分析

不定時(shí)工作制常見爭議問題匯總

不定時(shí)工作制，它沒有固定工作時(shí)間的限制，是針對因生產(chǎn)特點(diǎn)、工作性質(zhì)特殊需要或職責(zé)范圍的關(guān)系，需要連續(xù)上班或難以按時(shí)上下班，無法適用標(biāo)準(zhǔn)工作時(shí)間或需要機(jī)動作業(yè)的職工而采用的一種工作時(shí)間制度，是中國現(xiàn)行的基本工作時(shí)間制度之一。

在各行各業(yè)中，并不是每種工作都是朝九晚五這樣規(guī)定好上下班時(shí)間的，有些工作沒有固定的工作時(shí)間限制，而是等待老板或者客戶隨叫隨到，工作起來不分晝夜。例如企業(yè)高管、外勤人員、推銷人員、長途運(yùn)輸司機(jī)等，這些崗位的工作時(shí)間無法按照標(biāo)準(zhǔn)工作時(shí)間進(jìn)行衡量，于是另外一種工作制順勢而生了——不定時(shí)工作制。

因?yàn)閯趧臃ㄖ腥鄙偌?xì)則，不定時(shí)工作制在實(shí)踐當(dāng)中時(shí)常導(dǎo)致一些勞動爭議，例如員工績效難以考核，加班費(fèi)難以計(jì)算，甚至未經(jīng)批準(zhǔn)而實(shí)施不定時(shí)工作制等。

相關(guān)問題：

問題一：不定時(shí)工作制沒有在勞動合同中約定是否就無效？

筆者認(rèn)為，根據(jù)《勞動合同法》第八條規(guī)定，用人單位招用勞動者時(shí)，應(yīng)當(dāng)如實(shí)告知?jiǎng)趧诱吖ぷ鲀?nèi)容、工作條件、工作地點(diǎn)、職業(yè)危害、安全生產(chǎn)狀況、勞動報(bào)酬，以及勞動者要求了解的其他情況；第十七條規(guī)定，工作時(shí)間和休息休假是勞動合同的必備條款，而且第三十五條規(guī)定，用人單位與勞動者協(xié)商一致，可以變更勞動合同約定的內(nèi)容。變更勞動合同，應(yīng)當(dāng)采用書面形式。因此，筆者認(rèn)為，不定時(shí)工作制會切實(shí)影響勞動者的利益，用人單位實(shí)行不定時(shí)工作制的，應(yīng)當(dāng)主動告知，并且在勞動合同中明確注明，由標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)制等變更為不定時(shí)工時(shí)制時(shí)，應(yīng)當(dāng)采用書面形式與勞動者協(xié)商一致。有些地方就是如此規(guī)定的，例如江蘇省人社廳出臺的規(guī)范特殊工時(shí)制的相關(guān)通知，就要求企業(yè)今后申請?zhí)厥夤r(shí)制時(shí)，不僅要事先征得勞動者的書面同意，還要在相關(guān)的勞動合同和勞務(wù)派遣合同中予以注明。

問題二：法定節(jié)假日上班的，應(yīng)當(dāng)為不定時(shí)工作制的職工支付加班費(fèi)嗎？ 根據(jù)勞動部頒布的《工資支付暫行規(guī)定》中第十三條規(guī)定，實(shí)行不定時(shí)工作制的勞動者，不執(zhí)行普通用人單位加班工資計(jì)算的相關(guān)規(guī)定。而各地區(qū)可以輔以出臺適合本地情況的地方法規(guī)。

有些地方對此作出了明確規(guī)定，例如《深圳市員工工資支付條例》第二十條規(guī)定：“用人單位安排實(shí)行不定時(shí)工作制的員工在法定休假節(jié)日工作的，按照不低于員工本人正常工作時(shí)間工資的百分之三百支付員工加班工資。”

但是在很多地方就沒有針對不定時(shí)工作制如何支付加班費(fèi)的具體規(guī)定，如果地方政府未出臺具體的地方法規(guī)，那么應(yīng)當(dāng)按照國家規(guī)定來執(zhí)行，而按照《工資支付暫行規(guī)定》不定時(shí)工作制的，用人單位可以不支付加班工資，即使在法定節(jié)假日被安排工作。

問題三：不定時(shí)工作制獲得許可后能否改變勞動合同的約定？

行政許可是一種授益性行政行為，按照行政法理論，授益性行政行為不具有強(qiáng)制執(zhí)行力。不定時(shí)工作制許可“授益”的范圍，只是為用人單位與勞動者對特殊崗位進(jìn)行“不定時(shí)工作制”協(xié)商提供了條件，并不能當(dāng)然地改變合同關(guān)于工時(shí)制的約定。

而且，根據(jù)前述問題一的分析，由其他工時(shí)制變更為不定時(shí)工時(shí)制的，應(yīng)當(dāng)與勞動者協(xié)商一致并采用書面形式，可見，不定時(shí)工時(shí)制的許可決定不能改變勞動合同的約定。

問題四：改變標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)制要與勞動者協(xié)商嗎？

有些用人單位針對某些工作崗位獲得不定時(shí)工時(shí)制的審批后，沒有變更原勞動合同的約定，或者有些用人單位在規(guī)章制度中規(guī)定了某些工作崗位實(shí)行不定時(shí)工時(shí)制，但是在勞動合同中做相應(yīng)的變更。這時(shí)，對某個(gè)具體的員工，他能否以勞動合同沒有變更為由主張不定時(shí)工時(shí)制對自己不適用呢？

筆者認(rèn)為，根據(jù)《勞動合同法》第十七條規(guī)定 “工作時(shí)間與休息休假” 是勞動合同必備條款，而且按照《勞動合同法》第八條關(guān)于用人單位告知義務(wù)的規(guī)定，用人單位應(yīng)當(dāng)就該崗位實(shí)行的是不定時(shí)工作制的情況對勞動者進(jìn)行告知，并須與勞動者協(xié)商一致，否則，有可能被視為欺詐而導(dǎo)致勞動合同無效。如果勞動關(guān)系成立在前，并且已經(jīng)約定為標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)制或約定不明確，而后勞動行政部門許可該崗位為不定時(shí)工作制，這種情況下，用人單位要改變標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)制為不定時(shí)工作制，屬于勞動合同的變更。按照《勞動合同法》第三十五條的規(guī)定，用人單位仍然要與勞動者協(xié)商，并用書面形式變更勞動合同。如果勞動者不同意變更，只能按照勞動合同約定的條款繼續(xù)履行勞動合同。

另外，根據(jù)《最高人民法院關(guān)于審理勞動爭議案件適用法律若干問題的解釋(二)》第十六條規(guī)定，用人單位制定的內(nèi)部規(guī)章制度與集體合同或者勞動合同約定的內(nèi)容不一致，勞動者請求優(yōu)先適用合同約定的，人民法院應(yīng)予支持。因此，即使用人單位的規(guī)章制度與集體合同中約定了某工作崗位實(shí)行不定時(shí)工時(shí)制，但是如果勞動合同中約定的時(shí)標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)制或其他工時(shí)制的，仍然應(yīng)當(dāng)按照原來的約定履行勞動合同。

但是根據(jù)目前的司法實(shí)踐，很多案例中，只要是用人單位取得行政許可的，法院都認(rèn)定該許可已經(jīng)變更了勞動合同，按照不定時(shí)工作制的規(guī)定履行。

問題五：不定時(shí)工作制員工是否存在遲到曠工？

案例：

老陳是A科技公司的高級業(yè)務(wù)經(jīng)理，在A公司已經(jīng)10多年，負(fù)責(zé)業(yè)務(wù)及客戶接待等工作，需要經(jīng)常外出。早在幾年前，A公司為部分崗位包括老陳在內(nèi)申請了不定時(shí)工作制，簽訂了協(xié)議書。2012年1月，集團(tuán)空降了總經(jīng)理到A公司，大力整頓A公司，發(fā)文要求全體人員（包括不定時(shí)的高管人員）從2012年2月起每天按時(shí)（9點(diǎn)）上班，而且必須打卡考勤，否則嚴(yán)格按照考勤制度處罰。

老陳并不在意，2012年3月，老陳突然收到公司的處罰通知書，理由是老陳多次遲到、甚至?xí)绻ぃ⒚鞔_如再曠工，將立即解除勞動合同。2012年4月，老陳由于無法改變10多年的習(xí)慣，多次不打卡，被A公司以“多次遲到，多次曠工”為由解除勞動合同。老陳不服，遂申請勞動仲裁。

問題：A公司解除老陳勞動關(guān)系合理嗎？你的理由是什么？

評析：

根據(jù)勞動部《關(guān)于企業(yè)實(shí)行不定時(shí)工作制和綜合計(jì)算工時(shí)工作制的審批辦法》第四條規(guī)定：“企業(yè)對符合下列條件之一的職工，可以實(shí)行不定時(shí)工作制：

（一）企業(yè)中的高級管理人員、外勤人員、推銷人員、部分值班人員和其他因工作無法按標(biāo)準(zhǔn)工作時(shí)間衡量的職工”

法律法規(guī)規(guī)定，經(jīng)批準(zhǔn)實(shí)行不定時(shí)工作制的職工，是不受平時(shí)工作日延長工作時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)和月度延長工作時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)的限制；即不存在加班加點(diǎn)之說法。

不定時(shí)工作制的本質(zhì)是，員工的累計(jì)的工作量大概也是每天8小時(shí)左右，只是其工作很難在一段固定的連續(xù)的時(shí)間內(nèi)完成，其工作往往是分階段、分時(shí)段完成的；員工很可能在早上、下午、晚上、深夜都需要工作或在此等部分時(shí)間段內(nèi)工作。如果勞動者有充分證據(jù)證明其工作時(shí)間客觀上確實(shí)明顯超出8小時(shí)，且此狀態(tài)是經(jīng)常性的，那么用人單位還是存在支付加班費(fèi)的風(fēng)險(xiǎn)（可能被認(rèn)定為以合法形式掩蓋非法目的）！

實(shí)行不定時(shí)工作制的單位，往往不要求員工登記考勤。如果一定要求“不定時(shí)工作制”的員工進(jìn)行考勤登記，那么應(yīng)該在其出勤、工作的時(shí)候登記；而不應(yīng)該要求其跟普通員工一樣“朝九晚五”標(biāo)準(zhǔn)式地登記。否則，這些員工白天可能沒有工作任務(wù)，而晚上去工作的時(shí)候他們將可能要求加班費(fèi)。這樣反而對用人單位很不利！

本案中，老陳的崗位實(shí)行了不定時(shí)工時(shí)制，不應(yīng)參照標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)進(jìn)行打卡考勤。用人單位后面發(fā)文要求按標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)去打卡，此做法未必對老陳有效，因?yàn)橛萌藛挝坏膯畏叫袨槲幢啬軐闺p方的約定《勞動爭議司法解釋

（二）第十六條》。假設(shè)內(nèi)部發(fā)文具有法律效力，且老陳日后執(zhí)行該做法，那么將來老陳就有機(jī)會索賠加班費(fèi)，因?yàn)槠涔ぷ餍再|(zhì)決定了老陳肯定存在加班的狀態(tài)！用人單位應(yīng)衡量得失利弊！

問題六：不定時(shí)工作制就是可以隨意“加班”嗎？

【案例】： 今年54歲的老金是某鋼板加工公司的專職駕駛員。2007年9月28日，公司向勞保局提出申請，要求對單位的6名駕駛員實(shí)行不定時(shí)工作制，申請期從同年10月1日至2008年9月30日。第二天，勞保局作出批復(fù)，同意公司對老金在內(nèi)的6名駕駛員實(shí)行不定時(shí)工作制，有效期為1年，周一到周五7： 00－19： 00，以外算作加班時(shí)間。同時(shí)要求公司對于實(shí)行該制度的員工，應(yīng)在保障身體健康的基礎(chǔ)上，采用適當(dāng)?shù)墓ぷ骱托菹⒎绞剑_保員工休息休假的權(quán)利。為此，鋼板加工公司要求司機(jī)老金等人早上7點(diǎn)上班，晚上7點(diǎn)下班。

對于公司的決定，老金卻不認(rèn)可。他認(rèn)為，公司采取的每天工作12小時(shí)不定時(shí)工作制違法。雙方就此發(fā)生爭議，2008年12月16日，老金將同意公司實(shí)行不定時(shí)工作制的勞保局告上法庭，要求撤銷其對第三人某鋼板加工公司作出批復(fù)的具體行政行為。

在庭審中，被告勞保局表示，自2002年9月起，某鋼板加工公司就駕駛員崗位每年向勞保局申請不定時(shí)工作制，并經(jīng)審批同意。原告在2006年時(shí)確認(rèn)公司對其等成功申請了不定時(shí)工作制，每位駕駛員須按照這個(gè)規(guī)章制度工作，周一到周五7： 00－19： 00，以外算作加班時(shí)間。所以，勞動部門作出的批復(fù)具體行政行為合法，事實(shí)清楚，適用法律正確。

第三人某鋼板加工公司認(rèn)為，原告老金起訴超過訴訟時(shí)效，他在進(jìn)入公司時(shí)就已知道工作崗位的特殊，是實(shí)行不定時(shí)工作制的，如有異議，也早應(yīng)提起訴訟，現(xiàn)原告對已經(jīng)執(zhí)行完畢、已失效的具體行政行為起訴，顯然不合理。另外，公司對老金從來沒有實(shí)行考勤制度，原告所稱每天工作12小時(shí)沒有事實(shí)根據(jù)，公司定7點(diǎn)至19點(diǎn)為上班時(shí)間，是為了在此時(shí)間段外便于計(jì)算加班費(fèi)。法院審理后認(rèn)為，根據(jù)相關(guān)規(guī)定，企業(yè)實(shí)行不定時(shí)工作制和綜合計(jì)算工時(shí)工作制的，應(yīng)向注冊地的區(qū)縣勞動和社會保障局提出申請，因生產(chǎn)特點(diǎn)、工作特殊需要或職責(zé)范圍的關(guān)系，適合實(shí)行不定時(shí)工作制的職工，企業(yè)可以實(shí)行不定時(shí)工作制。

司機(jī)老金等人從事駕駛員崗位，工作性質(zhì)具有一定的特殊性，公司據(jù)此向勞保局申請對駕駛員實(shí)行不定時(shí)工作制，符合規(guī)定。勞保局在2007年9月28日受理原告老金的申請后，進(jìn)行了審核，并于次日作出批復(fù)，同意公司對駕駛員實(shí)行不定時(shí)工作制，并強(qiáng)調(diào)該公司對于實(shí)行不定時(shí)工作制的員工，在保障其身體健康的基礎(chǔ)上，采用適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞胶托菹⒎绞剑_保員工的休息休假的權(quán)利，該具體行政行為并無不當(dāng)。另外，行政機(jī)關(guān)作出具體行政行為時(shí)，未告知公民、法人或者其他組織訴權(quán)或起訴期限，起訴期限從公民、法人或者其他組織知道或者應(yīng)當(dāng)知道訴權(quán)或者起訴期限之日起計(jì)算，但從知道或者應(yīng)當(dāng)知道具體行政行為內(nèi)容之日起最長不得超過2年。故原告老金的起訴未超過法定期限。至于某鋼板加工公司對原告等實(shí)行不定時(shí)工作制的員工是否采用了適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞胶托菹⒎绞剑堑谌藢Σ欢〞r(shí)工作制的執(zhí)行問題，不屬于本案審理范圍。據(jù)此，鑒于訴爭批復(fù)目前已自行失效，法院依法作出判決：駁回司機(jī)老金的訴訟請求。爭議焦點(diǎn)。勞保局的批準(zhǔn)行為是否合法，認(rèn)定事實(shí)是否清楚，適用法律是否正確。

【評析】：

1、對司機(jī)老金能否實(shí)行不定時(shí)工時(shí)制？

根據(jù)原勞動部《關(guān)于企業(yè)實(shí)行不定時(shí)工作制和綜合計(jì)算工時(shí)工作制的審批辦法》（勞部發(fā)[1994]503號）的規(guī)定,企業(yè)中的下列三類職工經(jīng)勞動行政部門審批，可以實(shí)行不定時(shí)工作制：（1）企業(yè)中的高級管理人員、外勤人員、推銷人員、部分值班人員和其他因工作無法按標(biāo)準(zhǔn)工作時(shí)間衡量的職工；（2）企業(yè)中的長途運(yùn)輸人員、出租汽車司機(jī)和鐵路、港口、倉庫的部分裝卸人員以及因工作性質(zhì)特殊,需機(jī)動作業(yè)的職工；（3）其他因生產(chǎn)特點(diǎn)、工作特殊需要或職責(zé)范圍的關(guān)系,適合實(shí)行不定時(shí)工作制的職工。根據(jù)上述分析，是可以對司機(jī)老金實(shí)行不定時(shí)工時(shí)制的。

2、不定時(shí)工時(shí)制可以要求隨意“加班”嗎？

《憲法》第四十三條規(guī)定：“中華人民共和國勞動者有休息的權(quán)利。國家發(fā)展勞動者休息和休養(yǎng)的設(shè)施，規(guī)定職工的工作時(shí)間和休假制度。”

根據(jù)原勞動部《關(guān)于企業(yè)實(shí)行不定時(shí)工作制和綜合計(jì)算工時(shí)工作制的審批辦法》第六條規(guī)定：“對于實(shí)行不定時(shí)工作制和綜合計(jì)算工時(shí)工作制等其他工作和休息辦法的職工，企業(yè)應(yīng)根據(jù)《中華人民共和國勞動法》第一章、第四章有關(guān)規(guī)定，在保障職工身體健康并充分聽取職工意見的基礎(chǔ)上，采用集中工作、集中休息、輪休調(diào)休、彈性工作時(shí)間等適當(dāng)方式，確保職工的休息休假權(quán)利和生產(chǎn)、工作任務(wù)的完成。”因此，不定時(shí)工時(shí)制的員工，也有休息休假的權(quán)利，只是其休息是集中進(jìn)行或者輪休調(diào)休、彈性工作時(shí)間等方式進(jìn)行的而已，并非可以讓他們?nèi)我饧影唷Υ耍行┑胤叫砸?guī)定也有規(guī)定，例如《深圳市實(shí)行不定時(shí)工作制和綜合計(jì)算工時(shí)工作制審批管理工作試行辦法》第七條規(guī)定：“用人單位應(yīng)當(dāng)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工時(shí)制度，合理確定實(shí)行不定時(shí)工作制員工的勞動定額，建立健全考勤制度，規(guī)范勞動用工，保障員工休息權(quán)。”

可見，休息休假是勞動者的法定權(quán)利，對不定時(shí)工時(shí)制的員工，用人單位也必須采取彈性工作時(shí)間等適當(dāng)?shù)墓ぷ骱托菹⒎绞?確保職工的休息休假權(quán)利。

問題七：違法實(shí)行不定時(shí)工時(shí)制需要承擔(dān)什么法律責(zé)任？

對此，《勞動保障監(jiān)察條例》第25條規(guī)定：勞動保障部門可以對違反法律、法規(guī)延長工作時(shí)間的單位警告、責(zé)令限期改正，并可以按照受侵害的勞動者每人100~500元的標(biāo)準(zhǔn)處以罰款。

問題八：不定時(shí)工時(shí)制的工作崗位是否都必須經(jīng)過審批？

對此，有些地方有不同的規(guī)定，例如《深圳市實(shí)行不定時(shí)工作制和綜合計(jì)算工時(shí)工作制審批管理工作試行辦法》第十五條規(guī)定，用人單位中符合《公司法》規(guī)定的高級管理人員實(shí)行不定時(shí)工作制的，不需辦理審批手續(xù)。因此，在深圳，對總經(jīng)理、財(cái)務(wù)負(fù)責(zé)人、董事會秘書和公司章程規(guī)定的其他高級管理人員，可以不辦理不定時(shí)工時(shí)制的審批手續(xù)實(shí)行不定時(shí)工時(shí)制。

應(yīng)對措施：

1.用人單位應(yīng)擔(dān)保障勞動者的休息休假權(quán)。

在不影響勞動者身心健康的情況下，企業(yè)由于生產(chǎn)經(jīng)營需要而要求職工加班加點(diǎn)是法律允許的，但是必須符合法定的條件。

2.必須經(jīng)過勞動行政部門的批準(zhǔn)。

非因地方規(guī)定，實(shí)行不定時(shí)工作制不能由用人單位單方?jīng)Q定，也不能僅僅由雙方在勞動合同約定，只有經(jīng)過勞動行政部門審批才合法。

3、在勞動合同中注明 為避免爭議，如果經(jīng)過勞動行政部門審批同意的，建議用人單位在勞動合同中明確注明實(shí)行不定時(shí)工時(shí)制。

【作者簡介】

段海宇，勞動法專家，畢業(yè)于華僑大學(xué)。

著有《人力資源全流程法律風(fēng)險(xiǎn)管理手冊》、《人力資源法律風(fēng)險(xiǎn)管控操作實(shí)務(wù)》和《勞資法律風(fēng)險(xiǎn)管理手冊》（電子書）等著作，當(dāng)當(dāng)網(wǎng)有售。

第四篇：壓力容器中圖紙常見錯(cuò)誤分析

壓力容器審圖中圖紙常見錯(cuò)誤分析

（反應(yīng)釜）

1． 壓力容器類別錯(cuò)誤，主要未按多腔容器劃類原則進(jìn)行。

例如：有一符合監(jiān)察條件的反應(yīng)釜，內(nèi)筒最高工作壓力為0.052MPa(400mmHg),最高工作溫度：120℃，介質(zhì)：易燃、易爆、中度危害。夾套：最高工作壓力為0.6MPa(表壓)，最高工作溫度165℃，介質(zhì)：飽和水蒸汽。定出容器類別：一類。內(nèi)筒實(shí)際上不成類別，只需按夾套來確定類別。

2． 由于類別的錯(cuò)誤，帶來一系列的錯(cuò)誤，如：無損檢測的比例、焊接接頭系數(shù)等錯(cuò)誤。3． 技術(shù)特性表中主要受壓元件材質(zhì)缺少或者是少裝量系數(shù)、操作容積等數(shù)據(jù)。

4． 內(nèi)筒與夾套焊接，異種金屬（如碳鋼與不銹鋼焊接）未采用高鉻鎳焊條，僅采用普通

不銹鋼焊條，如：A102。

二、三壓力容器不要用酸性焊條和酸性焊劑。5． 技術(shù)要求中鍛件級別不正確，出現(xiàn)Ⅰ級鍛件。6． 立式反應(yīng)釜水壓試驗(yàn)時(shí)，注明是臥試，應(yīng)為立試。

7． 水壓試驗(yàn)時(shí)，內(nèi)筒為不銹鋼材料未在技術(shù)要求中說明控制水中的氯離子含量不超過

25mg/l。

8． 技術(shù)要求中關(guān)于攪拌試運(yùn)轉(zhuǎn)未按照HG/T20569-1994執(zhí)行。9． 水壓試驗(yàn)時(shí)，軸封處泄漏量的數(shù)據(jù)不正確。

10．內(nèi)筒介質(zhì)為易燃、易爆特性，軸封形式采用填料密封，未采用機(jī)械密封。11． 設(shè)備法蘭的公稱壓力等級錯(cuò)誤，密封面形式錯(cuò)誤。12． 設(shè)備法蘭的緊固件選用錯(cuò)誤。（螺栓、螺母、墊片）13． 管法蘭的公稱壓力等級錯(cuò)誤，密封面形式錯(cuò)誤。14． 管法蘭的緊固件選用錯(cuò)誤。（螺栓、螺母、墊片）

15． 技術(shù)要求中缺少設(shè)備法蘭與內(nèi)筒焊接C縫的無損檢測要求。

16． 技術(shù)要求中設(shè)備法蘭與內(nèi)筒焊接C縫的無損檢測方法不正確，如奧氏體焊縫采用MT，應(yīng)該為PT。

17． 介質(zhì)為易燃、易爆的，未注明防爆電機(jī)和設(shè)備靜電接地的要求。18． 夾套上端缺少直徑不小于10mm的排氣口。19． 管口方位圖上少定位尺寸或定位角度。

20． 夾套與內(nèi)筒焊接節(jié)點(diǎn)圖標(biāo)注不全面，扳邊圓弧太小。21． 缺少非徑向焊接節(jié)點(diǎn)圖。

22． 不等厚對接焊接節(jié)點(diǎn)圖削邊長度不夠，CS、LAN為1：3；SS為1：4或1：5。23． 溫度計(jì)接管的長度太短，插不到液面以下。24． 水壓試驗(yàn)、氣密性試驗(yàn)的試壓步驟不正確。25． 懸臂軸應(yīng)注明軸端到底封頭的距離。

26． 帶保溫層的立式反應(yīng)釜耳座選了A型，未采用B型。27． 夾套進(jìn)蒸汽口未設(shè)置防沖扳。

28． 導(dǎo)流板設(shè)置結(jié)構(gòu)不合理，導(dǎo)致制造困難。29． 底部接管不合理，開擋太小。

30． 技術(shù)要求中不銹鋼鋼板未注明應(yīng)按壓力容器用鋼板交貨。

31． 視鏡在管口方位圖上位置有誤，應(yīng)錯(cuò)開一個(gè)角度，不能在一直線上。32． 管口在同一圓周上分布得太多了，強(qiáng)度削弱太多 33． 單垮軸的反應(yīng)釜結(jié)構(gòu)不合理，未設(shè)置人孔。

壓力容器審圖中圖紙常見錯(cuò)誤

（換熱器）

1． 壓力容器類別搞錯(cuò)，特別是有一腔的設(shè)計(jì)壓力已是1.6MPa，還是定為一類，應(yīng)該為二類。2． 管板本身具有凸肩與圓筒（或封頭）對接連接時(shí)，沒有采用鍛件，采用了板材。3． 管板采用鍛件時(shí)，級別不正確。4． 管程、殼程的進(jìn)出口溫度調(diào)反。

5． 水壓試驗(yàn)的壓力不正確，管程與殼程對調(diào)了。6． 結(jié)構(gòu)上未設(shè)置放氣口或排液口。

7． F型、S型位置安放錯(cuò)誤，應(yīng)對調(diào)，并注意是熱膨脹型還是冷收縮型的長圓形孔的位置。8． 鞍座安放尺寸不正確，未按照GB151-1999P87執(zhí)行。9． CS、LAN制的焊有分程隔板的管箱未提出熱處理要求，并且密封面應(yīng)在熱處理以后進(jìn)行機(jī)加工。10． 設(shè)備法蘭的公稱壓力等級不正確，緊固件選用不合理，密封面形式不對。11． 管法蘭的公稱壓力等級不正確，密封面形式不對，緊固件選用不合理。12． 折流板缺口的方向不正確。13． 折流板間距不正確，太大，不符合最大無支撐跨距要求。14． 圖紙上有非徑向接管，但無非徑向焊接節(jié)點(diǎn)圖。15． 管板固定端未遠(yuǎn)離圓筒焊有防沖板的接管端，圓筒組裝困難。16． 圖樣上進(jìn)出口與管口表不一致，介質(zhì)沒有按逆向進(jìn)出。17． 甲型法蘭或乙型法蘭與圓筒組焊的C 縫沒有提無損檢測的要求。18． 采用乙型法蘭時(shí)，未設(shè)置法蘭短節(jié)。19． 乙型法蘭短節(jié)與圓筒不等厚焊接未按JB/T4700—2000要求進(jìn)行削邊處理。20． 采用長頸對焊法蘭時(shí)，法蘭與圓筒不等厚焊接未按JB/T4700—2000要求進(jìn)行處理。21． 對長頸對焊法蘭，應(yīng)注意：當(dāng)工作壓力大于或等于0.8倍標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的最大允許工作壓力時(shí)，法蘭與圓筒的對接焊縫必須進(jìn)行100％的RT或UT，合格級別為RTⅡ級、UTⅠ級。22． 不銹鋼換熱器水壓試驗(yàn)時(shí)，技術(shù)要求中沒有提水質(zhì)要求，控制水中的氯離子含量不超過25mg/l。

對帶襯環(huán)的法蘭（不銹鋼與碳鋼、低合金鋼之間的焊接）焊接材料用錯(cuò)，未采用高鉻鎳焊條。23． 技術(shù)數(shù)據(jù)欄中可能會少一部分?jǐn)?shù)據(jù)，如：管束級別等。而且級別可能搞錯(cuò)。24． 技術(shù)要求中缺少部分內(nèi)容，如材料的標(biāo)準(zhǔn)等，特別時(shí)是有關(guān)換熱管的有關(guān)內(nèi)容。25． 當(dāng)管程試驗(yàn)壓力高于殼程試驗(yàn)壓力時(shí)，接頭試壓在圖樣上未作要求。26． 設(shè)備法蘭應(yīng)注意螺栓的跨中問題，圖樣上可能沒有跨中。27． 圓筒厚度未滿足換熱器規(guī)定的最小厚度。28． 分程隔板的厚度未滿足最小厚度的要求。

U形管換熱器應(yīng)注意U形管的彎曲半徑不小于兩倍的換熱管外徑，并注意防短路結(jié)構(gòu)。29． 管束能抽出來的換熱器應(yīng)設(shè)置防松支耳。30． 重量超過30Kg的管箱最好設(shè)置吊耳。31． 立式換熱器如有膨脹節(jié)應(yīng)注意它與耳座的位置。32． 殼程進(jìn)口處沒有按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置防沖裝置。33． 管板與換熱管焊接節(jié)點(diǎn)圖中，換熱管的厚度與標(biāo)準(zhǔn)中的厚度不一致時(shí)，未調(diào)整焊接坡口深度。34． 在圖紙上應(yīng)注意尺寸標(biāo)注是否齊全，管口定位尺寸是否齊全。

第五篇：食品中常見毒素的化學(xué)性質(zhì)和檢測方法

食品中常見毒素和幾種典型毒素的性質(zhì)和檢測方法

07應(yīng)用化學(xué)，2007055079黎健豪

（暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣州 510632）

摘 要 本文綜述了食品中常見毒素的化學(xué)性質(zhì)和化學(xué)的檢測方法，重點(diǎn)討論了河豚毒素，黃曲霉毒素和肉毒毒素的化學(xué)性質(zhì)和檢測方法。

關(guān)鍵詞： 食品檢測

霉菌毒素 河豚毒素 肉毒毒素 Keyword：food detecting

tetrodotoxin

aflatoxin

botulism neurotoxins

在日常生活中，我們每天都會接觸到由不同公司，不同地方生產(chǎn)的食品。但在近幾年，國內(nèi)經(jīng)常出現(xiàn)食品質(zhì)量問題。五年前，肯德基的雞翅被發(fā)現(xiàn)加入了工業(yè)染料蘇丹紅。隨后，問題咸蛋又發(fā)現(xiàn)含有工業(yè)染料蘇丹紅。不法商人用 “瘦肉精”喂養(yǎng)豬只，令食用的豬肉里含有對人體心臟有害的“瘦肉精”。市場用孔雀石綠養(yǎng)魚，令魚類中含有有害物質(zhì)孔雀石綠。去年，又發(fā)現(xiàn)三鹿奶粉中非法添加有害物質(zhì)三聚氰胺。

食品安全不但發(fā)生在國內(nèi)，而且在我們身邊也經(jīng)常發(fā)生。2007年暨南大學(xué)珠海學(xué)院就發(fā)生了一起嚴(yán)重的食物中毒事件，不少師生感到身體不適。學(xué)生因?yàn)檫M(jìn)食不干凈食物發(fā)生腸胃炎的事件時(shí)有發(fā)生。質(zhì)量不安全食品也在市場上泛濫。因此，食品質(zhì)量問題不得不引起人們關(guān)注。

本文結(jié)合自己專業(yè)所學(xué)的化學(xué)知識和《身邊毒物的認(rèn)識與應(yīng)對》 《食品分析》《文獻(xiàn)檢索與利用》的相關(guān)信息和技能，介紹了食品中常見毒素同時(shí)詳細(xì)介紹了幾種典型毒素的化學(xué)性質(zhì)和檢測方法。食品中常見毒素

食品中常見毒素有霉菌毒素，動物性天然毒素和植物性天然毒素。其中 食品中常見的霉菌毒素有黃曲霉毒素，展青霉毒素，單端孢霉烯族化合物，玉米赤霉烯酮，雜色曲霉素，棒曲霉素，島青霉毒素和其他霉菌毒素。常見的動物性天然毒素有動物肝臟中的毒素，河豚毒素，巖蛤毒素，螺累毒素和組胺。常見的植物性天然毒素有氰苷，紅細(xì)胞凝集素，皂苷，龍葵堿，秋水仙堿，棉酚和毒蘑菇。

2霉菌毒素——黃曲霉毒素的性質(zhì)與檢測方法

黃曲霉毒素是黃曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)等的代謝產(chǎn)物,主要存在于霉變的花生、谷物、果仁和大米等食物中,食用油等制品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。它是由黃曲霉和寄生曲霉代謝產(chǎn)生的一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類似、致毒基團(tuán)相同的化合物,目前已分離鑒定出18 種,主要是黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 以及由B1 和B2 在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物M1、M2 等,B1 為毒性及致癌性最強(qiáng)的物質(zhì)。B1 是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?即含有一個(gè)雙呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)?香豆素),前者為基本毒性結(jié)構(gòu),后者與致癌有關(guān)。黃曲霉毒素對人類健康的危害主要是由于人們食用被黃曲霉毒素污染的食物,途徑有二,其一是由受黃曲霉毒素(主要為B1)污染的植物性食物攝入,其二是經(jīng)飼料而進(jìn)入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黃曲霉毒素(主要為M1)。黃曲霉毒素B1 的半數(shù)致死量為0.36 mg/ kg 體重,屬特劇毒的毒物范圍(動物半數(shù)致死量10 mg/ kg ,它的毒性比氰化鉀大10 倍,比砒霜大68 倍),它引起人的中毒主要是損害肝臟,發(fā)生肝炎、肝硬化、肝壞死等。因此，黃曲霉素的檢測方法在食品檢測中極為重要。

2.1檢測方法

國內(nèi)外有關(guān)黃曲霉素B1 的檢測方法主要有:薄層色譜法、酶聯(lián)免疫測定法、高效液相色譜法和熒光光度法。試驗(yàn)采用了免疫親和柱對飼料中黃曲霉素B1 進(jìn)

行凈化,對高效液相色譜熒光檢測方法進(jìn)行了研究,為監(jiān)控飼料中黃曲霉素B1 提供了簡便可行的方法。

2.1.1薄層色譜法(TLC)

薄層色譜法(TLC)是傳統(tǒng)的檢測AFB1 最常用方法,是應(yīng)用最早、最廣的分離、分析技術(shù),曾是我國測定食品及飼料中AFB1 的國家標(biāo)準(zhǔn)方法之一。此法所用的試劑、設(shè)備簡單,費(fèi)用低廉,容易掌握,適用大量樣品的分離、篩選,一般的實(shí)驗(yàn)室均可開展,屬于定性和半定量的功能。靈敏度低、重現(xiàn)差、操作煩瑣、時(shí)間長且安全性差等缺點(diǎn),已越來越不適用現(xiàn)代分析的要求。

2.1.2高效液相色譜法(HPLC)高效液相色譜法(HPLC)具有高效、快速、準(zhǔn)確性好、靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測限低、定量準(zhǔn)確的特點(diǎn),可同時(shí)分離多種黃曲霉毒素,操作簡便,適于大批量樣品的分析。高效液相色譜法是目前國內(nèi)測定黃曲霉毒素使用最多、也是比較權(quán)威的方法,靈敏度高、精度高、能同時(shí)分析多種黃曲霉毒素類型,但該法的樣品前處理相對復(fù)雜,檢測周期長、程序復(fù)雜、所需試劑繁多、操作時(shí)需要專門的技術(shù)人員,難以滿足現(xiàn)代檢測。其中免疫親和色譜-高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中黃曲霉素B1 ,采用甲醇-水提取飼料中的黃曲霉素B1 ,用免疫親和色譜柱凈化,以甲醇和水為流動相,反相高效液相色譜熒光檢測法進(jìn)行測定,激發(fā)波長為365 nm ,發(fā)射波長為435 nm。方法的檢測限為0.01μg/ kg ,定量限為0.03μg/ kg ,平均回收率為77.5 % ,變異系數(shù)為0.03 %。此法適宜用于普通實(shí)驗(yàn)室檢測食品中的黃曲霉素。物性天然毒素——河豚毒素的性質(zhì)與檢測方法

河豚毒素的化學(xué)研究始于1909 年, 1964 年以后由Woodward 測定了TTX 的結(jié)構(gòu), 1972 年Kishi 等采用化學(xué)方法成功合成了河豚毒素。河豚毒素分子式為C11H17N3O8, 分子量為319.27。分子主要由3 個(gè)氮原子組成, 它們與氫氧原子形成特殊的結(jié)構(gòu)。其結(jié)構(gòu)特征, 含有1 個(gè)碳環(huán), 1 個(gè)胍基, 6 個(gè)羥基, 在C—5 和C

—10位有一個(gè)半醛糖內(nèi)酯連接著分開的環(huán)。有專家將其稱為“自然界最奇特的分子之一”, 也是世界上最致命的毒藥之一。1 g 河豚毒素的毒性是1 g 氰化物的1 萬倍。

TTX 粗制品為棕黃色粉末, 純品為無色晶體, 呈針狀或菱形, 無臭, 無味, 易吸濕潮解, 不溶于無水乙醇、乙醚、苯等有機(jī)溶劑, 微溶于水, 極易溶于稀酸水溶液。TTX 在溶液中存在TTX、半縮醛型TTX、內(nèi)酯型TTX動態(tài)平衡的三種結(jié)構(gòu)。TTX 理化性質(zhì)比較穩(wěn)定, 在中性和酸性條件下對熱穩(wěn)定, 240℃開始碳化, 但300 ℃以上也不分解。在堿水溶液中易分解, 在5%氫氧化鉀溶液中于80 ℃～100 ℃可分解成黃色結(jié)晶2-氨基-6-羥甲基-8-羥基-喹唑啉, 這也是TTX 化學(xué)檢測法的理論。

3.1檢測方法

河豚毒素的檢測方法主要有生物檢測法，儀器檢測法和免疫檢測法。以下主要介紹儀器檢測發(fā)。

3.1.1光分析發(fā)

儀器檢測發(fā)有熒光光度法和色譜法熒光檢測法[9]是早期的檢測方法之一，主要是利用TTX 加堿水解后生成2-氨基-6-羥甲基-8-羥基喹唑啉(簡稱C9 堿), 該物質(zhì)在特定波長發(fā)熒光, 從而可進(jìn)行檢測。由于河豚毒素在紫外區(qū)間吸收很少, 使其紫外檢測受到限制, 所以紫外分光光度法采用TTX 在生成C9 堿的同時(shí)定量生成草酸鈉, 草酸鈉在紫外區(qū)有明顯吸收, 從而間接定量TTX。此法操作簡便,但靈敏度低,專一性差。

3.1.2色譜法

另外一種較常用的方法就是色譜法。有關(guān)高效液相色譜(HPLC)用于定量檢測TTX 的報(bào)道很多, 大多采用反相色譜, 用硅膠柱作固定相。張虹等建立了反相離子對-高效液相色譜法測定河豚毒素含量的方法。選用SHIM ADZU ODS 色譜柱(150×6 mm 5 μm), 以0.2 %(v/v)醋酸液為流動相,流速為1.2 mL/min, 檢測波長為230 nm。河豚毒素線性范圍20 μg/mL~100 μg/mL, r=0.996 0(n=5): 回收率為93.32 %, 最低檢測限50 ng。色譜法由于具有簡單、快速等特點(diǎn), 再加上高靈敏度的檢測器成為眾多檢測方法中主要的方法, 但它要求檢測樣品的純度比較高。

4細(xì)菌毒素———肉毒桿菌毒素和金黃色葡萄球菌腸毒素的性質(zhì)與檢測方法

肉毒毒素(botulism neurotoxins,BoNTs)是肉毒梭菌產(chǎn)生的一種外毒素,屬于高分子量蛋白質(zhì)類神經(jīng)毒素。根據(jù)肉毒毒素抗原不同,將其分為A～G 7個(gè)亞型。A型肉毒桿菌由毒性和非毒性蛋白兩部分組成,可高度特異地與突觸前膜結(jié)合,阻滯神經(jīng)興奮傳遞。BoNT/A的LD50為1.2 ng/kg,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的生物毒素中毒性最強(qiáng)的物質(zhì)。在弱酸條件下, 150 kDa毒性亞基以非共價(jià)鍵方式與非毒性亞基結(jié)合成復(fù)合物以保持其生物活性。溫度40 ℃以上,尤其在堿性條件下,A型肉毒桿菌毒素迅速變性。黃金色葡萄球菌腸毒素(staphylococcus aureus enterotoxin, SE)是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的數(shù)種可引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)類腸毒素,分子量約為26～30 kDa。根據(jù)血清學(xué)特征不同分為A～J 10個(gè)毒素血清型,其中A型毒力最強(qiáng)。腸毒素通過刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起中毒反應(yīng),小鼠LD50為25μg/kg。腸毒素易溶于水和鹽溶液,對熱穩(wěn)定, pH耐受范圍較寬(pH 4～10),不易被蛋白水解酶和消化酶降解。一株金葡菌產(chǎn)毒株能產(chǎn)生一種或兩種以上亞型的腸毒素,故腸毒素的型別不能代表細(xì)菌的型別。

4.1檢測方法

進(jìn)來常用的檢測方法有: 質(zhì)譜法,熒光分析法 ,免疫測定法，PCR檢測法（基于SYBR Green染料的實(shí)時(shí)PCR檢測技術(shù)）。以下介紹質(zhì)譜法和熒光分析法。

4.1.1質(zhì)譜法

Endopep2MS是基于肽鏈內(nèi)切酶的質(zhì)譜方法,可分辨肉毒毒素的不同亞型并測定其活性。該方法將抗體親和反應(yīng)與生物質(zhì)譜有機(jī)結(jié)合起來, 血清樣品中的LOD 為: 肉毒毒素A:0.02 mouse LD50 /L,B: 0.001 mouse LD50 /L, E: 2 ×1024 mouse LD50 /L, F: 0.001 mouse LD50 /L。該方法與EL ISA相比靈敏度更高,且不易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。應(yīng)用LC2ESI2MS/MS檢測SEB不僅可以精確測定分子量,還可對SEB酶切后的肽段進(jìn)行氨基酸序列分析,近年來開發(fā)的micro2ESI2TOF2MS具有更小的柱內(nèi)徑,對SEB的分析時(shí)間可顯著縮短至30 min,LOD降至約0.8μg/L(水)。

4.1.2熒光分析法

Anne等利用BoNT/B的蛋白水解酶活性實(shí)現(xiàn)對BoNT/B的檢測,該方法以人突

觸囊泡蛋白21的60～94部分的片段作為底物,用L 2芘基丙氨酸和熒光淬滅基團(tuán)(p2硝基苯丙氨酸)分別修飾74和77位點(diǎn)。肉毒毒素的活性鏈可選擇性地將突觸囊泡蛋白在76～77位點(diǎn)間切斷,去除77位點(diǎn)上修飾的熒光猝滅基團(tuán),再通過檢測60～76位點(diǎn)間發(fā)出的強(qiáng)熒光進(jìn)行直接定量檢測。該方法可檢測3.5 ng/L的肉毒毒素B。

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