顯微鏡的使用與維護

班級：

姓名：

學號：

一、實操部分（80分）

序號

內容

評分標準

分值

得分

準備（滿分10分）

材料準備充分，中途不得取用非操作臺材料

顯微鏡取用姿勢準確，安放位置合理

低倍鏡使用（滿分25分）

插上電源，打開光源，用拇指和中指移動旋轉器（切忌手持物鏡移動

使低倍鏡對準鏡臺的通光孔，放置載玻片，標本中間對準通光孔，并用壓片夾夾好

調節焦距，從一側看著向上調節載物臺，粗準焦螺旋調節物鏡與載物臺至最小距離處

雙眼視目鏡，調節粗準焦螺旋至有模糊的像，然后調節細準焦螺旋至清晰的像，二者不得來回交替使用，且光線強弱適宜（2分）。

高倍鏡使用（滿分10分）

將觀察對象調至視野中央，轉動轉換器至高倍鏡，防止撞到玻片

調節細準焦螺旋至清晰的像，光線調節至強弱適宜

油鏡的使用（15分）

轉動轉換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉動油鏡，在轉換油鏡時，從側面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。

如果不出現物象或者目標不理想要重找，在加油區之外重找時應按：低倍→高倍→油鏡程序。在加油區內重找應按：低倍→油鏡程序，不得經高倍鏡，以免油沾污鏡頭（3分），至調出清晰的像。

擦拭目鏡和物鏡上的油污，擦鏡紙、二甲苯、(0.5)擦拭方法均要正確(1)

取下玻片，拔下電源，關上開關，載物臺調至最大距離處，物鏡八字擺開，罩上防塵罩，并認真填寫使用記錄。

計時

不得超過5分鐘，超過者倒扣分，最多扣5分

簡單染色評分標準

班級：

姓名：

學號：

序號

考核項目

評分要素

配分

評分標準

檢驗結果

得分

備注

準備（10分）

著裝整潔；實驗用物齊全適用，放置合理

少選多選1件扣5分

制片（40分）

無菌操作取菌

無菌操作正確規范，錯1處扣5分，涂片區域圓形，直徑1cm左右

干燥固定

不可過熱、固定操作的規范性，錯1處扣2分

染色、水洗

染液滴加的量；染色時間，水洗操作的規范性，錯1處扣5分

鏡檢（35分）

顯微鏡的預備

顯微鏡的檢查；正確放置打開光源，光路對準，錯1處扣2分

涂片鏡檢

低倍到高倍，到油鏡，物鏡的轉換；物象調節，錯1處扣2分

鏡檢結果

菌體分布均勻，密度合適，明暗合適，對比度合適。錯1處扣3分

顯微鏡的整理

鏡頭的擦拭；物鏡的“八字形”轉換；將載物臺降到最低，錯1處扣2分

其他（5分）

清理用物，環境衛生

清掃實驗臺及收拾產生垃圾，少1環節扣1分

時間（10分）

操作時間

要求10分鐘內完成，每超過1分鐘，扣5分。

總分

制備無菌平板評分標準（時間5分鐘）

班級：

姓名：

學號：

項目

考核內容

分值

評分細則

扣分

備注

得分

準備

（10分)

物品準備、擺放及酒精擦拭

物品擺放合理、酒精擦手正確，材料準備齊全，得8分

中途不得取用任何物品，取1次扣4分

擺放的物品影響操作，扣2分

取菌前未用酒精擦拭，扣2分

貼標簽（培養皿）

貼標簽且位置合理，得2分

每漏貼一個，扣1分

每錯貼一個，扣1分

三角瓶操作（15）

開塞、瓶口滅菌、持法、蓋塞

三角瓶操作正確，得15分

未灼燒，開塞不正確，塞子放置不正確，均扣5分

蓋塞前瓶口和塞子不灼燒，均扣5分

三角瓶的瓶口開口處位置不對，扣5分

以上幾項合計最多扣15分

倒平板

（40分）

加培養基（培養皿持法、加入量、污染皿壁、混勻、）

正確（單手持皿，平端，兩指自如開合皿蓋，另一只手持培養基瓶），平板效果優秀，得40分

培養基溫度不適宜，皿蓋上方水汽過多，扣5分

平板未鋪全或高于培養皿高的2/3，一個扣5分，培養基污染皿壁，一個扣10分

三角瓶口接觸平皿，一個扣5分

培養基傾斜，一個扣5分

培養基有凝塊、不透明，一個扣5分

無菌操作（15）

酒精燈附近區操作

在酒精燈無菌區操作，得15分

所有開口處均應在酒精燈無菌區，出無菌區1次扣5分

操作情況（10分）

操作熟練程度

熟練，得10分

較熟練，得8分

一般，得6分

不熟練，得0分

無菌檢查（10分）

培養48h，有無微生物生長

無雜菌生長，且平板無開裂，無干枯部位，得10分

培養皿有雜菌，每個扣5分

平板開裂，共扣5分

平板干枯，共扣5分

血球計數板計數（時間：30min）

班級：

姓名：

學號：

項目

考核內容

分值

考核記錄（以“√”表示）

備注

得分

準備（3分）

物品擺放及酒精擦手

0.5

物品擺放合理、酒精擦手正確，得0.5分

擺放的物品影響操作，扣0.5分

取菌前未用酒精擦手，扣0.5分

顯微鏡的取用

0.5

顯微鏡的取用與擺放方式準確，得0.5分

取用與擺放方式不正確，扣0.5分

血球計數板的放置與檢查

正確放置血球計數板于載物臺上，得1分

沒用壓片夾夾住，扣0.5分

沒有放在計數區內，扣0.5分

進行檢查或經清洗后確定清潔，得1分

沒有進行檢查扣1分

清洗后干燥方法不合理，扣1分

加樣（2分）

添加酵母菌懸液于血球計數板上

能夠正確添加酵母菌懸液2分

加樣前未搖勻菌懸液扣1分

未用濾紙吸除多余菌液扣0.5分

蓋好玻片后有氣泡扣1.5分

顯微鏡調節（3分）

調整顯微鏡找到血球計數板上計數網格

40倍鏡下找到最左上角的大網格，并將顯微鏡調清晰，給監考老師看，得3分

未從低倍到高倍轉換，扣0.5分

未給監考老師看扣2.5分

未找到最左上角的大網格扣2分

找到最左上角的大網格但不清晰扣1分。

計數（2分）

準確計數，并寫出原始數據

2分

準確計數，并寫出原始數據，得2分

沒有原始數據，扣2分

數據不準確，扣1分

原始數據不合理，扣1分

計算，報告（6分）

計算公式、過程

準確計算，得出菌懸液濃度，得4分

數據處理過程不正確，扣4分

數據處理結果不正確，扣4分

數據不合理，扣1分

報告結果規范、正確

報告清楚、準確、無涂改，得2分

結果報告不準確，扣0.5分

報告填寫每改1次，扣0.5分

清洗（2分）

血球計數板清洗，歸位

血球計數板清洗，并干燥歸位2分

清洗方法不正確，扣1分

干燥方法不合理，扣1分

未將血球計數板歸位，扣1分

文明操作（2分）

實驗后臺面整理，設備歸位

整理，得2分

顯微鏡未整理，扣1分

臺面未整理，扣1分

血球計數板損壞，扣2分

蓋玻片損壞，扣0.5分

完成時間

(0分)

共用（）分鐘

開始：

結束：

0

提前，不加分不扣分

按時，不加分不扣分

超時：每超1分鐘，扣1分（最多扣5分）

合計

平板劃線分離考核標準

班級：

姓名：

學號：

序號

項目

內容

滿分(100分)

評分細則

扣分

總分

實驗前的準備

準備全所需的所有實驗材料

15分

材料準備充分，中途取用物品扣3分

貼標簽

未貼扣4分，貼錯扣2分；信息不完整扣2分

酒精棉球擦拭手與工作臺面

4分

未擦拭扣4分

擦手不徹底最多

2分

擦臺面不徹底最多2分

接種針的灼燒是否徹底，拿法是否科學

4分

灼燒不徹底，最多扣3分

接種環拿法不對，扣1分

未灼燒4分

從試管中取樣接入培養皿中

試管中取菌（15分）

50分

試管口未灼燒，扣3分

持塞手法不正確，扣2分

接種環未冷卻，扣3分

塞塞子時未灼燒塞子與管口，扣4分

試管口離開無菌區，扣3分

手法是否標準(5分)

持平板的手法不當扣1分

開口過大扣4分

分區接種（30）

有離開5cm酒精燈無菌區1次扣2分，最多扣5分

離開無菌區10cm以上一次扣5分

劃完1區未灼燒，扣5分

灼燒完未冷卻，扣5分

單手旋轉平板，有明顯的分區操作

劃破平板，最多扣10分

接種完畢，臺面的處理以及培養等

臺面的整理：酒精燈熄滅，各試驗器材歸位（4分）

10分

1分

熄滅方式不對，扣1分

3分

未歸位，扣3分；未整理，扣2分

未帶走垃圾，扣2分。最多扣3分

置入培養箱中倒置培養，以及最適培養溫度的設置（4分）

4分

未倒置，扣2分

培養溫度和時間寫在標簽上，未注明扣2分

完成實驗，酒精棉球擦拭手或者洗手（2分）

2分

未擦拭手或洗手

結果檢查

分離效果

20分

10分

10個以上單菌落，少1個扣1分

分區效果

5分

無明顯分區，只有一個區，扣5分

平板無菌落區按占的比例扣分

污染情況

5分

有其他雜菌污染，扣5分

用時

5分鐘，超過1分鐘扣1分

平板涂布分離考核標準（20min）

班級：

姓名：

學號：

項目

考核內容

分值

考核記錄（扣分）

備注

得分

準備

（10分)

物品擺放及酒精擦手

物品準備合適，不多不少，得3分

物品擺放合理、酒精擦手正確，得2分

擺放的物品影響操作，扣1分

取菌前未用酒精擦手，扣1分

編號（試管、培養皿），貼標簽

都編號且正確，得5分

每漏編（貼）一個，扣1分

每錯編一個，扣1分；標簽信息不全，一個扣1分

樣品稀釋

(30分)

樣品混勻(原始樣品、稀釋樣品)

進行且操作正確（平搖樣品瓶、手心震搖試管），得10分

原始樣品沒有混勻，扣2分

稀釋樣品沒有混勻，一個扣2分

手心震搖試管時沒塞塞子，扣2分

移液過程其他問題，一次扣2分

吸管或移液器使用(打開方式、取液、調節液面、放液、稀釋順序)

吸管或移液器使用正確，得5分

打開吸管包扎紙時手碰到管尖至吸管的1/3處，一次扣2分；槍頭盒每取一次都要迅速蓋上，注意無菌操作，未蓋一次扣2分

放液時若吸管（或移液器）外壁碰到試管口卻沒有灼燒試管口，一次扣2分

吸取刻度不準確，一次扣2分

稀釋時將移取過高濃度菌液的吸管插入到低濃度試管中，一次扣2分

移液過程中液體流滴在試管外面，一次扣2分

試管、三角瓶操作（開塞、管口滅菌、持法、蓋塞）

試管三角瓶操作正確，得10分

菌種試管三角瓶開塞未灼燒，扣2分

開塞不正確，一次扣2分

蓋塞不正確，一次扣2分

持法不正確，一次扣2分

蓋塞未灼燒，扣2分

平板涂布（25分）

加樣

操作正確，得5分

將移取過高濃度菌液的吸管插入到低濃度試管中進行接種，一次扣1分

吸管外壁碰到培養皿壁，一次扣1分

漏接培養皿，一個扣1分

試管被污染，每根扣1分

涂布

涂布棒使用正確，涂布效果好，得10分

涂布棒上酒精未灼燒徹底，扣2分

涂布棒未冷卻，一次扣2分

涂布方法不對，扣2分

涂布使平板破，扣4分

單手持皿，平端，兩指自如開合皿蓋，錯誤扣2分

酒精燈附近區操作

在酒精燈附近區操作，得3分

未在酒精燈附近區操作，扣3分

空白

進行，得4分

未進行，一個扣2分

操作熟練程度

熟練，得3分

較熟練，得2分

一般，得1分

不熟練，得0分

培養(3分）

培養

正確培養，得3分

培養時未翻轉培養皿，一個扣2分

將培養時間與培養溫度寫在標簽上，錯誤或漏寫均扣1分

文明操作

(2分)

實驗后臺面整理

整理，得1分

未整理，扣1分

器皿破損

未破損，得1分

破損，扣1分

完成時間

(0)

共用（）分鐘

開始：

結束：

0

提前，不加分不扣分

按時，不加分不扣分

超時：每超1分鐘，扣1分（最多扣5分）

合計

結果觀察

結果判斷（30分）

培養結果觀察

菌落無片狀，空白無菌落，得10分

有10個以上單菌落，少一個扣1分

空白平板有菌落，一個平板扣5分

精密度

極差與平均值之比(％)

（以計數平板進行計算）

≤10%

得12分

10~15%

得9分

15~20%

得6分

20~30%

得3分

>30%

得0分

準確度

（以計數平板進行計算）

≤10%

得8分

10~20%

得4分

20~30%

得2分

>30%

得0分

培養基的制備與滅菌

班級：

姓名：

學號：

項目

考核內容

分值

考核記錄（扣分）

備注

得分

題目

配制50mL牛肉膏蛋白胨培養基，全部分裝入試管中，滅菌完畢擺斜面

準備

（10分)

藥品準備

藥品齊全，類別準確

天平準備

水平，干凈

其他

操作所需所有物品，均齊全合適

計算（5分）

準確

所有物品均計算準確，且稱量準確

稱量（25分）

加水

加水量適宜

順序準確

按照配方順序加入樣品

方法正確

牛肉膏的稱取方法正確

蛋白胨迅速，不至潮解

操作文明

不得有藥品撒入天平中，一次扣5分

溶解與

定容（10）

藥品溶解

按順序溶解樣品，不糊不溢

準確定容至要求的體積

體積準確，定容方法準確

調節pH（10分）

調制要求值

pH試紙使用準確

調節準確，不過量，不回調

分裝（15分）

分裝試管，將所有培養基分裝完

裝量適宜，過大或過小一支扣1分

分裝時培養基沾染在試管口上，一支1分

分裝過程培養基凝固

滅菌（5分）

高壓蒸汽滅菌

溫度時間設定合適，寫在標簽上

滅菌鍋使用熟練

擺斜面5分

擺接種斜面

長短適宜

表面整齊

熟練程度（5分）

操作熟練程度

熟練，得5分

較熟練，得3分

一般，得2分

不熟練，得0分

文明操作

(5分)

實驗后臺面整理

整理，得3分

未整理，扣3分

器皿破損

未破損，得2分

破損，扣2分

完成時間

(5)

共用（）分鐘

開始：

結束：

0

提前，不加分不扣分

按時，不加分不扣分

超時：每超1分鐘，扣1分（最多扣5分）

合計

高壓蒸汽滅菌鍋的使用與維護

班級：

姓名：

學號：

序號

內容

分值

評分標準

扣分與備注

得分

材料準備

所需菌種、材料齊全，中途無任務新增材料

操作準備

水量適宜、物品擺放合適

加蓋方式正確，各旋鈕調節適當

滅菌

放氣方法準確，時間恰當

旋鈕調節

滅菌過程中各旋鈕調節準確

壓力旋鈕

設置改變壓力旋鈕，方式準確

滅菌結束

滅菌結束，各旋鈕和開關調節恰當，維護方法準確

故障處理

在滅菌過程中隨機提出問題，