第一篇：銀杏葉中黃酮類化合物的含量測定

江蘇畜牧獸醫職業技術學院

畢業論文（設計）

專業藥品質量檢測技術班級 藥檢071 學號200703123124

論文(設計)題目：銀杏葉中黃酮類化合物的含量測定 學 生 姓 名： 劉江南

設 計 地 點：江蘇畜牧業獸醫職業技術學院 指 導 教 師： 趙麗 職 稱 講師 論 文 完 成 時間： 2010年5月20日

銀杏葉中黃酮類化合物的含量測定

劉江南 藥品質量檢測技術

摘 要：黃酮類化合物是銀杏葉的主要藥用成分，其黃酮含量在很大程度上決定著銀杏葉的利用價值。以十二烷基硫酸鈉(SDS)一正丁醇一正庚烷一水微乳系統為流動相，預制聚酰胺薄層板為固定相，通過調節微乳系統的極性，較好地分離出十幾種銀杏葉黃酮。與傳統的流動相系統—有機溶液系統相比，微乳系統顯示出較強的分離優勢。通過對大齡銀杏葉不同生長時期黃酮含量的測定與比較，分析銀杏葉中黃酮含量隨生長期的變化規律，揭示出大齡銀杏樹采摘葉片的最佳時期。試驗結果表明：不同生長時期的銀杏葉黃酮含量變化幅度較大,在1年中黃酮含量出現2次峰值，8月份出現第1個峰值，黃酮含量為0.884%, 以后下降較快,10月葉色發黃后又上升到最高值 0.977%。

關鍵詞：銀杏葉 黃酮含量 薄層色譜 生長時期 高效液相色譜

Title：In Gingko leaf flavonoid content determination

Liujiangnan

Drug quality testing technology Abstract：Flavonoids are the main medicinal components of ginkgo biloba,its flavonoid content to a large extent determines the value of ginkgo biloba use.Sodium dodecyl sulfate(SDS)1-butanol 1-heptane microemulsion system of water as the mobile phase, pre-polyamide thin-layer plate as the stationary phase, by adjusting the polarity of the microemulsion system, well separated a dozen of flavonoids.Mobile phase with the traditional system-the organic solution systems, the microemulsion system showed strong separation advantage.Leaves of Ginkgo biloba on older growth and flavonoids content during the comparison, analysis of flavonoids of Ginkgo biloba in the variation with growth phase, revealing the older leaves of ginkgo trees picking the best time.The results showed that: different growth stages of the content of flavonoids in a significant reduction in 1 year in the flavonoid content of 2 times the peak, in August the first one peak appears, flavonoid content of 0.8844%, then decreased rapidly in October leaves yellow color after rising to a maximum value 0.977%.Key Words：Ginkgo biloba,Flavonoids content,TLC,Growth period,HPLC

.1 前言

1．1 銀杏葉的介紹

銀杏(Ginkgo bilobal，又名公孫樹，白果)系裸子植物門銀杏科植物，有“活化石”之稱，是當今地球上最古老的樹種之一，為我國特產，我國銀杏資源擁有量占世界總量的75％左右，占世界首位[1,2]。銀杏是中國特有而豐富的經濟植物資源，是一種歷史悠久的植物，除具有很高的觀賞價值外，銀杏的果實和葉片也有很高的藥用價值。銀杏葉為銀杏科植物銀杏的干燥葉，又名白果葉。在我國古代已作為藥用，其能“益心斂肺，化濕止瀉，治胸悶心痛，心悸怔忡，痰喘咳嗽，瀉利白帶。[3]”銀杏葉的研究始于本世紀60年代，由于發現其具有抑制血小板活化因子的作用，能夠改善心血管系統的滲透性、彈性及血液流變速度，對機體組織具有抗缺氧的能力，故引起國內外醫藥界的關注。利用銀杏果葉的有效化學成分和特殊醫藥保健作用加工生產保健食品，藥物和化妝品，正引起國內外研究、開發、生產單位的重視，各國眾多企業競相研制生產以銀杏為原料的天然綠色產品，替代對人體健康有較大副作用的合成化學品，從而為中國的銀杏資源的開發利用開辟了無比廣闊的前景，迅速提高了銀杏的利用價值及其對經濟、社會和生態的影響，為社會創造了就業和財富，為人類帶來了健康和長壽。

1．2 銀杏葉的作用

銀杏葉能夠抗衰老，消除人體自由基，改善血流量，增加腦供血。目前，銀杏葉研究主要集中在多糖[4,5]、萜類內酯[6]、黃酮類化合物[7,8]，銀杏葉揮發油的提取及分析比較少。彭洪[9]采用水蒸氣蒸餾及GC／MS分析鑒定出銀杏揮發油17種化學成分；周維書[10]按中國藥典法提取了揮發油并分析出35種化學成分。

1.2.1 改善血液循環

臨床研究發現，銀杏提取物能使血液粘稠度降低，并調節血脂，抑制血小板聚集，增加紅細胞的變形能力，減少或抑制微血栓的形成，并增加心腦的供血。通俗的解釋，銀杏能保護動脈、靜脈和毛細血管免受傷害，并增強強度和彈性。加之，銀杏能通過降低血小板（一個形成動脈硬化的關鍵因素）粘度、保護紅細胞免受傷害并保持其分布均勻，因而可以起到促進血液循環的作用，并能達到治療缺血性心腦疾病的目的。

1.2.2 防治腦梗死

目前，以腦梗死為代表的腦缺血性疾病已上升為人類第三大致死原因，成為倍受矚目的常見多發病。發病患者急性期過后常留下許多后遺癥，如行為功能障礙，認知障礙等，給患者及其家庭都造成很大的痛苦。對于此類疾病，目前最重要的防治手段是提倡使用神經保護劑。在神經保護劑的篩選中，許多科學家把目標定位于對中藥的開發和研究上。其中，對銀杏葉提取物，在臨床也取得了肯定療效。研究證實，銀杏葉片提取物中的黃酮類物質可明顯增加腦的血流量，提高腦組織耐缺氧能力；銀杏內酯類物質中的內酯A、B，尤其是苦內酯B可以保護腦組織免受損傷；內酯類物質中的白果內脂可以保護神經細胞免受缺血性損傷。

因此，銀杏葉提取物具有調節血脂，抑制血小板聚集，擴張腦血管，清除自由基，降低脂質過氧化反應等，保護腦組織免受缺血缺氧的損害。臨床可用于治療腦缺血、腦梗死、腦外傷后遺癥、老年性腦功能障礙等。

1.2.3 防治冠心病及心肌梗死

冠心病是由于心肌的嚴重缺血而引起心肌的損傷和壞死，而急性心肌梗死是其臨床的主要表現。急性心肌梗死在歐美國家已成為嚴重的健康問題，美國每年大約有150萬人發生，其中大約有1／3的人死亡。在我國急性心肌梗死同樣也是一個引起關注健康問題，流行病學調查結果顯示，心肌梗死患病率在我國平均為1／100000，死亡率為患病率的10％。研究發現，銀杏提取物具有擴張冠狀動脈，增加缺血心肌的血流量，降低心肌耗氧量，改善心肌缺血的癥狀等作用，不僅對冠心病、心絞痛有確切療效，也能減低該疾病的發生率。

1.2.4 預防血凝塊形成

血小板黏在一起，能使血凝塊的形成，而血凝塊會導致心臟病發作或中風，如果通往心臟的動脈里有血凝塊，就會造成心臟病發作；如果血凝塊停留在通往腦部的動脈里，就會造成中風。

黃酮類化合物對于抑制血小板凝集也有顯著作用：黃酮類化合物對凝血因子具有較強的抑制作用，故表現出較好的抗凝血作用。黃酮類化合物還可降低血管內皮細胞羥脯酸代謝，使內壁的膠原或膠原纖維含量相對減少，利于防止血小板粘附凝集和血栓形成，有利于防治動脈粥樣硬化[11]。實驗表明，不同濃度的黃酮類化合物對抑制血小板凝集有不同程度的作用[12]。另外還可以使處于異常狀態下的血管功能恢復正常水平[13]。

1.2.5 具有抑制動脈平滑肌細胞增殖作用

血管平滑肌細胞(VSMC)遷移和過度增殖是高血壓、動脈粥樣硬化及血管成形術后再狹窄等血管增生性疾病的基本特征。鄰近受損的內皮細胞和進入內皮下層的吞噬細胞釋放大量細胞因子和生長因子，這些生物活性物質可促進中層的VSMC向內膜下遷移并過度增殖，同時分泌很多活性物質及細胞外基質成分，導致血管重構，一旦VSMC的增殖超過盤管的代償能力，會導致血管壁增厚和血管腔變窄，最終引發急性心、腦血管病。銀杏內酯能抑制動脈壁平滑肌細胞增殖。魏恩會等觀察銀杏內酯B對主動脈平滑肌細胞增殖的影響，結果發現無論是否用血管緊張素II誘導，GB與銀杏內酯A和B的混合物均呈濃度依賴性地抑制SMC(主動脈平滑肌)的增殖，其機制與阻止細胞有絲分裂期有關，說明GB可抑制動脈壁SMC的增殖，該作用不完全取決于血小板活化因子受體的拮抗活性。

總的來說，銀杏葉片制品臨床用于治療冠心病、心絞痛、腦梗死等疾病已收到滿意效果。但實際上，它對疾病的治療作用還遠不止于此。銀杏葉片還能防治6種疾病，比如：防治糖尿病引起的視網膜病變；治療哮喘；抗腫瘤[14]；緩解急性肺損傷及抗衰老活性；對痔、靜脈曲張的治療作用；防治老年性癡呆癥。

1．3 銀杏葉的化學成分

黃酮類化合物是銀杏葉的主要藥用成分，其黃酮含量在很大程度上決定著銀杏葉的利用價值。銀杏葉中黃酮類化合物含量較高，用紫外分光光度法測得我國泰興銀杏葉中所含黃酮類物質占5.91%[15]。其中單黃酮類主要為山奈酚(Kaempferol)和槲皮素(Quercetin)的單、雙和三糖甙化合物，糖元多為葡萄糖和鼠李糖；其他尚有異鼠李素(Isorhamnetin)、楊梅黃素及蕓香甙等。雙黃酮類有穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)、白果素(Bilobetin)、銀杏雙黃酮(Ginkgetin)、異銀杏雙黃酮及金松雙黃酮等。此外尚有兒茶素類化合物4種。銀杏葉含有的二萜內酯和倍半萜內酯均為其特有成分。現分離出的二萜內酯有銀杏苦內酯A,B,C,M等4種，其中銀杏苦內酯B(BN520210)的抗PAF活性最強；倍半萜內酯為白果內酯(Bilobalide)。

1．4 銀杏葉的劑型研究

我國銀杏葉制劑的開發起步較晚，90年代起方呈蓬勃狀態。1990年上海天工植物制品廠出品的銀杏葉干浸膏已銷往歐洲；1990年西安國藥廠與沈陽藥學院共同研制的出口用銀杏葉標準提取物，其質量與法國Hawaiian Agronomics SA公司的標準相一致；1991年湖南醫工所與寧遠縣天然植物提煉廠合作研制，總黃酮含量按出口標準分別為16%及24% 2種規格，收率為2%～3%，已初步形成生產規模；上海藥物所與康恩貝制藥公司用銀杏葉開發的制劑天保寧已上市，臨床用作冠脈循環改善劑；國家“七五”中醫藥攻關項目銀杏口服液于1992年在遵化制藥廠投產。國外銀杏葉提取物(Egb)劑型較豐富，有片劑、滴劑、薄膜片劑、膠囊、注射液、外用劑、酊劑、液體噴霧劑、洗劑、軟膏、霜劑、氣霧劑和口服液等[16]。銀杏葉的各種提取物、各種制劑以及營養品等都要有明確的質量標準，只有嚴格的標準化，才能控制產品的內在質量。目前國際上公認的質控標準是：銀杏黃酮甙含量為20%～30%，銀杏苦內酯A，B和J的含量為2.5%～4.6%，白果內酯為2%～4%，烷基酚含量小于1×10-6，單寧類物質原花色素含量小于10%。丁青龍等[17]曾對國內不同廠家的制劑進行質量測定，黃酮含量基本合格，但內酯含量不足，故國內銀杏葉制劑的質量有待提高。

1．5 我國銀杏葉制劑的發展前景

雖然我國在銀杏葉制劑開發中還有很大空缺，但這主要是因為國際上還沒有統一的質量控制標準，不少廠家雖已生產出高質量的Egb，但由于競爭原因不肯公布其質量標準；另外國內提取銀杏葉中有效成分的技術低、生產條件差、研究進展緩慢，也影響了銀杏葉制劑的質量。鑒于這種情況應進一步加強對銀杏葉制劑的研發工作，充分利用我國得天獨厚的銀杏樹資源，采用先進、可靠、規范的檢測方法，對我國各地銀杏葉資源的品位加以評定，以期合理使用；大力開展其工藝研究，為提高產品質量不懈地進行工藝改進，使劑型多樣化，爭取出口；為開拓國內市場，應加大臨床研究的進度，為推廣應用創造條件；要開拓銀杏葉提取物的用途，例如飲料、清涼口服液、復方制劑和化妝品等，其提取物十分穩定，不需要加乙醇或表面活性劑。相信隨著現代科學技術的發展，銀杏葉會被人們充分開發利用，從而造福人類。2 實驗部分

2．1 銀杏葉中黃酮類化合物的含量測定 2.1.1 儀器與材料 2.1.1.1 儀器與藥品

薄層色譜紫外分析儀(天津市琛航科技儀器有限公司)、自動點樣儀(天津市琛航科技儀器有限公司)、定量毛細管(天津市琛航科技儀器有限公司)、雙槽展開缸(重慶玻璃儀器廠)、電吹風、聚酰胺預制板(臺州四青生化材料廠)、新型噴霧瓶(華西醫科大學儀器廠)，十二烷基硫酸鈉(SDS)、正丁醇、正庚烷、三氯化鋁、乙醇均為分析純。

對照品：蘆丁、槲皮素、GBE樣品(均為中國藥品生物制品檢定所出品)。2.1.1.2 實驗材料

銀杏葉，2009年購于甘肅南鄰地區。

2.1.2 實驗方法

2.1.2.1 展開劑系統的篩選 2.1.2.1.1傳統展開劑系統

傳統展開劑系統一般為油液系統，極性較小。本實驗用甲苯、醋酸乙酯和吡啶以不同比例作為展開劑，都僅能展開兩三個點。不能較好分離銀杏黃酮。

2.1.2.1.2微乳液系統的配制

按照十二烷基硫酸鈉(SDS)：正丁醇：正庚烷=13.777：15.6：2.7(重量比)稱取各試劑，加少量水制成微乳液。再依據微乳液的比例，加適量水，靜置24h備用。

2.1.2.2 配置供試品GBE液

取不同批次的銀杏葉，剪碎后用甲醇提取，收集甲醇提取液、干燥后為棕黃色粉末。分別稱取各批粉末適量配制甲醇溶液。

2.1.2.3 配置對照標液

稱取蘆丁，槲皮素標準樣品配制成1mg/mL甲醇溶液，作為對照標準溶液。2.1.2.4 配置指紋圖譜對照液

稱取中國藥品生物制品檢定所提供的銀杏葉黃酮樣品配制成2 mg/mL甲醇溶液，作為對照品。

2.1.2.5 高效薄層色譜方法

用定量毛細管吸取對照品溶液、對照標液、GBE樣品液于聚酰胺膜上點樣，直徑約1mm，吹干。以不同含水量的微乳液為展開劑，于已飽和的雙槽展開缸中展開10cm，取出烘干。均勻噴灑1％氯化鋁乙醇溶液，烘干，于365nm紫外燈下觀察。

3.1.1 指紋圖譜結果

3.1.1.1 影響展開效果的因素

3.1.1.1.1展開劑含水量對展開效果的影響

不同含水量的微乳液對銀杏黃酮A和B某一成分移動影響(如圖1-1)10.90.80.70.6Rf0.50.40.30.20.10204060含水量%7080AB

A.實驗室GBE樣品；B.中國藥品生物制品檢定所GBE樣品

圖1-1 銀杏黃酮Rf值與微乳液含水量的關系

從圖1-1可以看出銀杏黃酮的Rf值隨著微乳液含水量增加而下降。實驗室樣品GBE在微乳液含水量較高時的砒值比對照品中國藥品生物制品檢定所高。隨著微乳液含水量的降低，兩者的Rf值相差不大，當含水量為65％～75％時，兩者Rf值相同。

微乳液含水量與斑點形態的關系如表1-1所示。

表1-1 微乳液含水量與斑點形態的關系

微乳液含水量/% 20 40 60 67 70 80

半點個數 2～3 3～4 8 12 12 8

清晰度 模糊 模糊 拖尾嚴重 清晰 少量拖尾 拖尾嚴重

△Rf 小 小 小 較大 小 小

展開時間/h

1.0 2.0 3.5 4.5 6.0 15.0 可以看出，在微乳液含水量67％左右時，Rf值約為0.6，其余成分的斑點較均勻清晰的分布上下，顏色亮黃，無拖尾，斑點間隔較大。在含水量為70％時，雖然斑點較多，但有少量拖尾，不能有效分離。綜合考慮，宜選擇含水量67％微乳液作為銀杏黃酮分離的展開劑。

3.1.1.1.2酸度對展開效果的影響

由于黃酮中酚羥基的存在，使其略顯酸性。中性展開劑對其附著能力差，斑點均有拖尾。而強酸易造成黃酮苷類分解，因此選擇弱酸：甲酸調節酸度。實驗證明，選擇含展開劑體積8％的甲酸對銀杏黃酮展開效果最好。

3.1.1.1.3飽和度對展開效果的影響

展開劑置入展開缸中，實驗必須封閉飽和。未經飽和就展開的薄層板上，展開劑上行速度不一致，導致上線呈曲線，使實驗無效，選擇飽和時間為25min為宜。

此外，展開板的種類、濕度、溫度等均對銀杏黃酮的分離有影響。硅膠類展開板對銀杏黃酮吸附能力差，只能分離2～3個斑點；選擇聚酰胺薄層板分離效果最好；展開通風櫥內濕度以相對濕度為68％為最好；溫度為室溫。3.1.1.2 薄層色譜指紋圖譜結果

銀杏葉黃酮的分離，以含水量67％的微乳體系-甲酸(92：8)為展開劑，聚酰胺薄層板為固定相。分離結果如圖2所示。由色譜指紋圖譜可見，銀杏黃酮能被此微乳系統完全分離。樣品3即中國藥品生物制品檢定所提供的銀杏黃酮和其它樣品一樣，分離出12個點。

從色譜圖可見，銀杏葉中均含有蘆丁和槲皮素，雖然兩者的極性相差不大(黃酮苷的結構類似)，但蘆丁的分子量比槲皮素大，因此蘆丁的Rf(0.528)比槲皮素的Rf(0.642)較小。各批次銀杏葉的黃酮成分相差不大。紫外燈下各批次的黃酮斑點顏色為亮黃色。但由于隨著季節和采摘時間的不同，銀杏葉黃酮的成分有差別[18]，所以斑點顏色有深淺。據此也可作為制訂GBE的質量標準的依據。

1.槲皮素對照品；2．蘆丁對照品；3．中國藥品生物制品檢定所提供GBE樣品；4．GBE樣品A；5．GBE樣品B； 6．GBE樣品C；7．GBE樣品D

圖1-2 各批銀杏葉薄層色譜指紋圖譜

3.1.1.3 銀杏黃酮分子結構對Rf的影響

樣品的極性越大，則被吸附劑吸附得越牢固，在相同條件下，遷移速率就越小，在色譜圖上的Rf值就越小。色譜圖的下部，是黃酮極性大的成分，如黃酮的鹽酸鹽等。中部為槲皮素和蘆丁，槲皮素是蘆丁的一種分解產物。推測有可能是在提取或分析過程中，使蘆丁有所分解。上部是比槲皮素極性更小的黃酮，如二氫黃酮及其化合物等。可以剪開斑點，溶于甲醇過濾后在HPLC上精確分析。

4.1.1 討論

由十二烷基硫酸鈉—正庚烷—正丁醇以13.77：15.6：2.7的比例溶于67％的水中組成的微乳體系，適合于分離銀杏葉黃酮。該微乳液加入8％體積的水，可以有效防止黃酮斑點的拖尾。梁淑芳等用微乳體系分離沙棘黃酮得8個斑點[19]，馬柏林等也用此方法分離杜仲黃酮得9個斑點[20]。在其他人的微乳液基礎上，結合黃酮的結構特點，調節微乳系統的極性，溫度和濕度，分離出銀杏葉提取物黃酮斑點12個。改善了GBE的薄層色譜分離技術，為平面色譜在中藥鑒定和色譜分析中的應用展示了良好的前景。薄層色譜法在中藥分析中有以下特點：對被分離物質的性質沒有限制，使用范圍廣；固定相使用一次，樣品預處理較簡單；薄層具有多路柱效應，可同時進行每個樣品的分離，所以樣品的分析時間短；不受一種監測器的限制，在同一色譜柱上可根據被分離化合物的性質選擇多種檢測方法進行定性或定量，并且可以重復測定；當吸附劑高效化、定量分析儀器化、自動化后，提高了薄層色譜的分辨率及重現性。因此氣相色譜法和高效色譜法不能代替薄層色譜法。

用薄層色譜指紋圖譜方法分析了幾批銀杏葉提取物，符合中藥指紋圖譜對薄層色譜技術的要求，且操作簡單、設備易得，非常適合我國的國情。為銀杏葉藥材的標準化種植，銀杏葉提取物及其制劑的質量控制提供了簡便、經濟可靠的方法 對銀杏葉發展的展望

當今國內外對于銀杏葉的化學成分的研究很多，各國科學家已經從銀杏葉中分離鑒定出很多成分，并從中發現了重要的活性成分。面對銀杏葉中不斷涌現的新的化學成分，有必要對其結構進行歸納、總結。銀杏葉及其提取物用于治療心腦血管疾病和神經系統疾病，其中銀杏葉黃酮、萜內酯和聚異戊烯醇是主要的藥效成分，具有顯著的療效，且無明顯副作用。目前，國內關于銀杏葉化學成分的研究，只是針對總黃酮、銀杏內酯(A，B)、白果內酯，而對其他化合物的研究較少，這主要是提取分離獲得的物質數量有限，制約了進一步對活性的研究。如果能在活性方面作深入的研究，開展構效關系的分析，可以更有效地促進銀杏葉的開發和利用。

參 考 文 獻

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致 謝

本論文是在趙麗老師的悉心指導下完成的，從論文選題、方案設計、實驗安排中疑難問題的解答到論文的撰寫都得到了老師的悉心指導。幾個月來，指導導師給予我無微不至的指導和關懷。指導老師對事業的執著、嚴謹的治學態度、淵博的知識、忘我的工作精神是學生終生學習的典范。對學生無私的教誨，使我受益匪淺，終生難忘。在此表示衷心的感謝！

感謝我的家人、我的朋友在精神上的鼓勵和支持，使我能夠堅強的面對一切，順利完成自己的學業。

在論文完成過程中得到了同事蘇州職業大學尤神龍的關心、指導和幫助，在此表示由衷的感謝。

最后，對三年中所有曾經關心，支持和幫助過我的各位老師、同學再一次表示最誠摯的感謝！

第二篇：枸杞中黃酮類化合物提取與分離純化工藝的研究進展?（范文）

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 枸杞中黃酮類化合物提取與分離純化工藝的研究進展

作者：于惠 康磊等

來源：《安徽農業科學》2015年第05期

摘要近幾年，隨著枸杞的化學成分和藥理作用的廣泛研究，枸杞總黃酮因具明顯的抗氧化、清除自由基、提高免疫力等活性而逐漸成為研究熱點，因此人們采用多種方法對枸杞黃酮進行提取分離。在此從枸杞黃酮的提取和分離提純兩方面進行總結，為今后的分離提純提供參考依據。

關鍵詞 枸杞；黃酮；提取；分離純化；研究進展

中圖分類號 S567；TS225.1 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）05-062-03 Research Progress of Separation and Extraction Flavones in Lycium barbarum YU Hui1，2，KANG Lei1，2，ZHANG Rui1，2 et al（1.State Key Testing Laboratory of Coal Chemical，Yinchuan，Ningxia 750002； 2.Chemical Laboratory Center of Ningxia Baota，Yinchuan，Ningxia 750002）

Abstract In recent years，the chemical composition and pharmacological function of Lycium barbarum has been extensively studied，the total flavones in Lycium barbarum has been gradually become a hot topic because of significant antioxidation，removal of the free radicals，enhancing immunity and other activities.Thus，many researchers used variety methods to separate and extract the total flavones from Lycium barbarum.The separation and extraction of total flavones from Lycium barbarum were summarized，providing a reference for separation and purification in future.Key words Lycium barbarum； Flavones； Extraction； Separation and purification； Research progress 基金項目 寧夏自然科學基金項目（NZ13255）。

作者簡介 于惠（1986-），女，遼寧凌源人，工程師，碩士，從事分離型功能高分子材料研究。

收稿日期 20141226

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 枸杞（Lycium Barbarum）為茄科枸杞屬，多年生落葉小灌木植物，是我國傳統的藥食兩用同源植物之一[1]。枸杞的藥用部位較多，明朝李時珍《本草綱目》記載：“春采枸杞葉，名天精草；夏采花，名長生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。枸杞子為枸杞的成熟干燥果實，其活性成分主要包括色素類、多糖類、黃酮類化合物、多種氨基酸、維生素及微量元素[2]。枸杞子具有滋補肝腎、益精明目之功效，現代臨床上廣泛用于調節免疫功能[3]、抗氧化[4]、抗輻射[5]、抗腫瘤[6]、清除自由基[7]、促進益生菌細胞生長及抗衰老[8]等。枸杞葉，又名天精草，為茄科植物枸杞或寧夏枸杞的嫩莖葉，功能補肝益腎、生津止渴、虛勞發熱。枸杞葉中的活性成分與枸杞子類似，其蛋白質含量極其豐富，另外據報道枸杞葉中含有豐富的有機鍺，具有增強免疫力、延緩衰老的功效[9]。枸杞根皮，又稱為地骨皮，為茄科、枸杞屬植物枸杞的根皮，可入藥，具有清熱、涼血、降壓、清肺降火等功效。我國枸杞有7個種3個變種，其中以寧夏地區生產的寧夏枸杞（Lycium Barbarum L.）最為著名[10]，青海、甘肅等地的枸杞品質也很高。近幾年，枸杞的化學成分和藥理作用被廣泛的研究，作為枸杞中重要的活性物質之一，枸杞總黃酮因具明顯的抗氧化、清除自由基、降血脂、降血糖、治療心腦血管疾病、抗腫瘤、抗衰老、提高免疫力等活性而逐漸成為研究熱點[11-12]。

枸杞中黃酮類化合物的提純，主要包括以下兩方面：一方面是提取，基于植物不同部位所含黃酮類化合物的結合狀態不同，如在花、果、葉中以甙為主要存在形式，在木質部分以甙元為主要存在形式，需要根據被提取物的類型和理化性質選擇合適的提取溶劑和提取方法；另一方面是分離純化，目的是盡可能充分將黃酮類化合物與其他成分分開，并進一步分離得到黃酮類成分單體。筆者在此對近年來枸杞中黃酮類化合物的提取與分離純化工藝的研究進展進行了系統總結。1 提取方法 1.1 有機溶劑提取法

有機溶劑提取法是國內外使用最為廣泛的一種提取方法，主要以乙醇、甲醇、石油醚等有機溶劑作為提取溶劑，在索氏提取器中進行抽提。通常采用乙醇作為提取溶劑，提取的過程中，乙醇的濃度對黃酮類化合物的提取存在影響。高濃度的醇（90%～95%）適用于提取黃酮甙元類化合物，而低濃度的醇（60%～70%）更適合提取黃酮甙類化合物[13]。該方法操作簡單、成本低，易于大規模生產，但工藝繁瑣，雜質含量也較高，回收率低。李銘芳等采用70%的乙醇為溶劑回流提取寧夏枸杞中的總黃酮，通過正交試驗，研究發現最優提取條件為提取溫度70 ℃、提取時間2.0 h、固液比為1∶20[14]。劉蘭英等以70%乙醇對枸杞葉進行回流提取，并通過正交試驗確定了提取工藝條件為70%乙醇、料液比1∶

8、提取時間3 h、提取3～8 nm碎粒，黃酮得率為3.72%[15]。1.2 超聲輔助提取法

超聲波的作用機理是在被提取樣品和溶劑之間產生聲波空化效應[16]，破壞植物細胞并加速溶劑分子之間的運動，使植物細胞中的有效成分較易溶解于溶劑中，加速了植物有效成分的龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 浸出提取。另一方面，超聲提取過程中的空化作用還會增大樣品與提取溶劑之間的接觸面積，從而提高植物中活性成分從固相轉移到液相的傳質速率[17]。因此，對植物有效成分采用超聲提取，可以在很大程度上加快提取速度，縮短了提取時間，進而提高了天然產物中活性成分的提取速率和提取量。該方法節省提取時間、提高提取效率、試驗設備簡單、操作方便，在工業生產中具有較為廣闊的應用前景。王漢卿等通過正交試驗優選出超聲輔助提取枸杞葉總黃酮的最佳工藝條件為乙醇體積分數 65%、乙醇用量 1∶60、超聲提取時間 35 min、超聲溫度 70 ℃；利用優選出的最佳超聲提取工藝測定比較不同采收期枸杞葉中的總黃酮含量，結果為5月中旬含量最高[18]。孫化鵬等通過正交試驗法優選出超聲輔助提取枸杞葉總黃酮的最佳工藝條件為乙醇濃度75%、乙醇用量1∶40、超聲提取時間30 min、超聲提取溫度50 ℃[19]。1.3 微波輔助萃取法

微波萃取又稱微波輔助萃取（Miacrowaveassisted extraction，MAE），是利用微波的熱效應對樣品及其有機溶劑進行加熱，從而將目標組分從樣品基體中分離出來的一種新型高效分離技術。微波萃取過程是高頻電磁波穿透萃取介質到達物料內部，微波能轉化為熱能，物料內部的溫度迅速上升，使物料內部的壓力超過細胞壁膨脹所能承受的壓力，導致細胞膨脹破裂，從而促使有效成分自由流出，并溶解于萃取介質中[20]。微波加熱不同于傳統的加熱模式，即熱量由外向內傳遞，而是直接作用于內部和外部的介質分子，使整個物料同時被加熱，即“體加熱過程”，從而可克服傳統的傳導式加熱方式所存在的升溫較慢的缺陷。同時，微波所產生的電磁場可加速被萃取組分的分子由固體內部向固液界面擴散的速率，從而使萃取速率提高數倍，并能降低萃取溫度，最大限度地保證萃取物的質量[21]。

與其他的提取方法相比較，微波輔助萃取具有如下優點：①選擇性好。由于樣品中各組分對微波的吸收能力存在差異，從而導致其溫度不同，致使各組分從基體中分離的速度也存在差異。因此，微波萃取能對萃取體系中的不同組分進行選擇性加熱，可以使目標組分直接從基體中分離。②熱效率較高。微波加熱是內外同時加熱的模式，由微波能量直接轉化為熱能，沒有熱傳遞造成的溫度梯度和熱量損失，因而加熱均勻，熱效率較高。③質量穩定。可以在較低的溫度下完成萃取，有效地保護了被提取物的有效成分。④操作簡單。微波萃取無需干燥等預處理，簡化了工藝，減少了投資。

巨敏等以枸杞為原料，用乙醇作為提取劑，采用微波提取法對枸杞中總黃酮進行提取，以二次同歸正交試驗設計對結果進行優化分析，得出的最佳條件為乙醇濃度68.3%、微波時間100 s、微波溫度73 ℃、微波功率300 W、液料比14.7∶1.0（ml/g），在最佳條件下，總黃酮的提取率為19.52 mg/g[22]。孫波等以蘆丁為對照品，采用單因素試驗和正交試驗時影響枸杞總黃酮提取率的因素進行了考察，并優選出最佳提取工藝為乙醇濃度70%、料液比1∶30（g/ml）、微波輻射功率400 W、溫度120 ℃、提取時間8 min，在此條件下枸杞總黃酮的含量為18.3 mg/g[23]。1.4 磁場強化萃取法

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 磁場強化萃取是一種借助外加磁場以強化化工分離過程的新技術，被稱為“綠色分離技術”，它可以利用磁場產生的特殊能量來改變抗磁性物質的微觀結構，使其理化性質發生變化[24]，同時通過影響反應速率來起到強化萃取的作用。周蕓等以新鮮枸杞為原料，采用磁場強化萃取法提取枸杞黃酮，通過正交試驗，得出優化磁場處理的最佳條件為：在磁感應強度 640 mT、磁化時間 40 min、磁化溫度 65 ℃、浸提回流時間 60 min 的條件下，枸杞黃酮的提取率可達290.81 mg/100g[25]。李冰等發明一種利用磁性吸附樹脂及外加磁場分離純化葛根黃酮的方法，具體的工藝流程如圖1所示。首先，將葛根粉碎置于微波萃取罐中，加入95%乙醇，微波萃取除去雜質后得葛根黃酮提取液；其次，將磁性吸附樹脂裝入樹脂柱，置于可調磁場中，將葛根黃酮提取液流過樹脂柱，收集解吸液，濃縮干燥后得葛根黃酮產品[26]。1.5 高壓均質提取法

高壓均質提取法是指利用柱塞泵將被分離物保持在一定的壓力條件下，液料高速流過一個狹窄的縫隙時而受到強大的剪切力，同時還有液料與金屬環接觸產生的碰撞力以及由于靜壓驟降和驟升而產生的孔爆發力等綜合力的作用，使原料中不透明、粒徑較大的懸濁液轉化成穩定細小的懸濁液的過程[13]。高壓均質提取法可以將樣品中的組成結構破粹到納米級，利于目標成分的溶出，大大提高了樣品的提取率。同時，操作時溫度較低，因此對樣品的破壞力較小，可以保持樣品原有的性質。因此，該方法將在天然活性成分的提取方面展現越來越重要的作用[27]。

劉增根等考察了高壓均質提取柴達木枸杞葉有效成分的最佳工藝及對有效成分進行了純化，發現高壓均質提取柴達木枸杞葉總黃酮的最佳工藝條件為乙醇體積分數 80%、料液比 1∶

10、均質壓力 60 MPa、提取時間 30 min，在該條件下，提取物中蘆丁質量分數為 10.53%，總黃酮質量分數為32.61%[28]。2 分離純化方法

2.1 大孔吸附樹脂吸附分離法

大孔吸附樹脂（Macroporous Adsorption Resin，MAR）是由功能單體、交聯劑等可聚合成分與致孔劑、分散劑等添加劑經懸浮或反相懸浮聚合制備而成的一類球狀的多孔高分子吸附分離材料，其內部存在大大小小、形狀各異、相互貫通的孔穴，即使在干燥狀態下，其內部均具有較高的孔隙率，且存在大孔結構（一般在100～1 000 nm）。MAR不同于離子交換樹脂，其本身不含可交換性功能基，它的吸附性主要依靠范德華力（包含色散力、定向力和誘導力等）和氫鍵的作用，同時，網狀結構和很高的比表面積又賦予其良好的吸附性能和篩分性能，因此，MAR是一類不同于離子交換樹脂的、集吸附和篩分性能為一體的分離型功能高分子材料。目前，國內外MAR的生產廠家主要有美國RohmHass、日本三菱化成公司、天津南開大學化工廠、華北制藥廠樹脂分廠、西安藍曉科技有限公司、西安藍深特種樹脂有限公司、滄州寶恩化工有限公司、天津海光化工有限公司等，部分廠家產品的性能如表1～3所示[29-30]。

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 目前，MAR主用于皂苷類、黃酮及其苷類、蒽醌及其苷類、酚酸類、色素類及生物堿類等的分離純化。利用MAR分離純化中草藥中的有效成分，有以下幾點優勢：首先，由于MAR獨特的吸附性和篩分性，利用MAR分離純化了多種單味中草藥的有效成分，這為其他中草藥的提取研究奠定了基礎；其次，不斷有新的MAR問世，這為中草藥有效成分的分離富集提供了可供選擇的保障。

胡曉蓮等通過優選MAR，并考察其工藝參數，篩選合適的吸附樹脂DA201，最佳的工藝條件為上樣量10柱床體積（BV）、上樣液濃度15 mg/ml、上樣液流速1 BV/h，上樣液pH=3，解吸洗脫劑乙醇濃度為40%、乙醇用量8 BV，富集純化總黃酮得率75.85%，總黃酮純度35.70%[31]。何彥峰等通過比較11種MAR的靜態吸附解吸性能，篩選出適合純化柴達木枸杞總黃酮的樹脂類型HPD400；并進行動態吸附解吸試驗，利用單因素和響應面法優化MAR純化柴達木枸杞總黃酮，得到的的最佳工藝條為：以16.0 ml pH為4.0的柴達木枸杞總黃酮粗提液上柱，流速1.0 ml/min，充分吸附后用3 BV去離子水洗柱，然后用23.0 ml 80%乙醇溶液以流速1.0 ml/min進行解吸，枸杞黃酮的平均回收率為89.92%，含量為27.62%，約為純化前總黃酮含量的5倍左右[32]。2.2 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）又稱“高壓液相色譜”，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。HPLC具有高壓、高效、高速、高靈敏度及應用范圍廣的特點。

董靜洲等對寧夏枸杞果實黃酮提取液進行色譜柱分離，檢測波長為259 nm，流動相 A為1.0%乙酸，流動相 B為甲醇，流速為1.0 ml/min；并對我國寧夏枸杞六大產區的枸杞果實總黃酮提取液進行了 HPLC 分離和 HPLC 指紋圖譜比較[33]。張自萍等以10個寧夏不同產地的寧夏枸杞主栽品種“寧杞I號”樣品建立枸杞黃酮類化合物指紋圖譜共有模式，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”軟件進行數據處理，對15個不同來源的枸杞樣品進行了分析[34]。

安徽農業科學 2015年 3 展望

近幾年，隨著人們對枸杞黃酮的化學成分和藥理作用不斷深入研究，使枸杞黃酮愈來愈受到人們的重視。因此，通過不斷地探索枸杞黃酮提取和分離純化工藝研究的新方法，仍將是提純枸杞黃酮的熱點研究方向。

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第三篇：豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測定（BJS 201909）

豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測定

BJS

201909

范圍

本標準規定了豆腐、豆干、火鍋底料、麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司帕沙星、環丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星的高效液相色譜-串聯質譜檢測法。

本標準適用于豆腐、豆干、火鍋底料、麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司帕沙星、環丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星的測定和確證。

原理

采用0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液提取樣品中的喹諾酮類化合物，經離心和過濾后，上清液經HLB固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜-串聯質譜儀檢測和確證，內標法定量。

試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純，水為GB/T

6682規定的一級水。

3.1

乙腈（CH3CN）：色譜純。

3.2

甲醇（CH3OH）：色譜純。

3.3

甲酸（CHOOH）：色譜純。

3.4

甲醇（CH3OH）。

3.5

氨水（NH4OH）：濃度25%～28%。

3.6

乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2Na2O8·2H2O）。

3.7

檸檬酸（C6H8O7·H2O）。

3.8

磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。

3.9

氫氧化鈉（NaOH）。

3.10

鹽酸（HCl）：含HCI

38%。

3.11

乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

3.12

磷酸氫二鈉溶液（0.2

mol/L）：稱取71.63

g磷酸氫二鈉（3.8），用水溶解并定容至1000

mL。

3.13

檸檬酸溶液（0.1

mol/L）：稱取21.01

g檸檬酸（3.7），用水溶解并定容至1000

mL。

3.14

Mcllvaine緩沖溶液：將1000

mL

0.1

mol/L檸檬酸溶液（3.13）與625

mL

0.2

mol/L磷酸氫二鈉溶液（3.12）混合，用鹽酸或氫氧化鈉調節pH至4.0±0.1。

3.15

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（0.1

mol/L）：稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉（3.6）至1625mL

Mcllvaine緩沖溶液（3.14）中，超聲使其溶解。

3.16

5%甲醇水溶液：取5

mL甲醇（3.4），用水稀釋至100

mL。

3.17

25%氨水甲醇溶液：取25

mL氨水（3.5），用甲醇（3.4）稀釋至100

mL。

3.18

標準品：標準品中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量見附錄A表A.1，純度≥99%。

3.19

標準儲備液配制：分別精密稱取標準品（3.18）約10

mg，置10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超聲使溶解，用乙腈（3.1）定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1.0

mg/mL的標準儲備液，轉移至溶劑瓶中于-18℃以下避光保存，有效期6個月。

3.20

混合標準溶液的配制：準確吸取標準儲備液（3.19）1

mL于100

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為0.01

mg/mL的混合標準溶液（環丙沙星、沙拉沙星濃度約0.015mg/mL），于4℃以下避光保存，有效期3個月。

3.21

混合標準中間溶液的配制：準確吸取混合標準溶液（3.20）1

mL至10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為1.0

μg/mL的混合標準中間溶液（環丙沙星、沙拉沙星濃度約1.5

μg/mL），于4℃以下避光保存，臨用新配。

3.22

內標標準儲備液配制：分別稱取氘代同位素標準品（3.18）約10

mg，至10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超聲溶解，用乙腈（3.1）稀釋至刻度，配制成濃度為1.0

mg/mL的標準儲備液，于-18℃以下避光保存，有效期6個月。

3.23

混合內標標準中間溶液的配制：準確吸取內標標準儲備液（3.22）0.01mL于10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為1.0

μg/mL的混合內標標準中間溶液，于4℃以下避光保存，臨用新配。

3.24

固相萃取小柱（500

mg，6

mL）：HLB柱或相當者。使用前依次以6

mL甲醇、6mL水活化，保持柱體濕潤。

儀器和設備

4.1

液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。

4.2

分析天平：感量0.001g和0.00001

g。

4.3

渦旋振蕩器

4.4超聲儀

4.5離心機：轉速≥8000

r/min

4.6

均質器

4.7

氮氣濃縮儀

測定步驟

5.1

試樣制備與保存

豆制品、火鍋和麻辣燙的食材

從待檢樣品中取出樣品約500g，用組織搗碎機充分搗碎混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于-18℃冷凍存放。

火鍋底料、麻辣燙底料

固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，用組織搗碎機充分搗碎混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于4℃冷藏存放。

半固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，放入研缽中，迅速研磨均勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記于4℃冷藏存放。

液體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，攪拌均勻后裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于4℃冷藏存放。

5.2

樣品溶液制備

提取：稱取5.0

g均勻樣品（精確至0.001g），置50

mL離心管中，精密加入混合內標標準中間溶液（3.23）0.1mL，加入20

mL

0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15），渦旋混勻1min，超聲提取15

min，8000

r/min離心5

min，上清液轉移至50

mL容量瓶中，殘渣用EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15）同法重復提取兩次，每次10

mL，合并上清液至同一容量瓶中，用EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15）定容至刻度，混勻。用濾紙過濾（必要時10000

r/min離心5

min后過濾），續濾液待凈化。

凈化：精密吸取上述待凈化液25.0

mL，以約1

mL/min的流速全部通過固相小柱（3.24），用3

mL

5%甲醇水溶液（3.16）淋洗，抽干，先后以6

mL甲醇、3

mL氨水甲醇（3.17）洗脫，合并甲醇及氨水甲醇洗脫液，45

℃氮吹至近干，準確加入2.0

mL流動相初始比例復溶液溶解殘渣，過0.22

μm濾膜，續濾液供液相色譜-串聯質譜儀分析。

5.3

基質標準工作溶液的制備

稱取5.0

g空白試樣（精確至0.001g），置50

mL離心管中，除不加入混合內標標準中間溶液外，其余同5.2操作處理后得到空白基質，共制備6份。

分別精密吸取混合標準中間溶液（3.21）0

mL、0.010

mL、0.020

mL、0.050

mL、0.100

mL、0.200

mL及混合內標標準中間溶液（3.23）0.025

mL于試管中，氮吹至近干，精密加入1.0

mL空白基質復溶，過0.22

μm濾膜，制成濃度為0

ng/mL、10

ng/mL、20

ng/mL、50

ng/mL、100

ng/mL、200

ng/mL的基質標準工作溶液（環丙沙星、沙拉沙星濃度為0

ng/mL、15

ng/mL、30

ng/mL、75

ng/mL、150

ng/mL、300

ng/mL，同位素內標濃度約25ng/mL）。

5.4

測定

5.4.1

液相色譜參考條件

1）

色譜柱：C18色譜柱，2.1

mm×50

mm×1.7

μm，或性能相當者。

2）

柱溫：40℃。

3）

流速：0.25

mL/min。

4）

進樣量：2

μL。

5）

流動相：A-5

mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸），B-乙腈。梯度洗脫條件見表1。

表1

梯度洗脫條件

時間（min）

A(%)

B(%)

0

10.5

13.1

5.4.2

質譜參考條件

1）

電離方式：電噴霧電離（ESI）；

2）

掃描方式：正離子掃描；

3）

檢測方式：多反應監測MRM；

4）

離子源參數參考條件：

離子源接口電壓，4000

V；離子源接口溫度，350

℃；脫溶劑溫度，250

℃；離子源加熱溫度，400

℃；霧化氣流速，2.9

L/min；干燥氣流速，10.0

L/min；加熱氣流速，10.0

L/min。

5）定性離子對、定量離子對參見表2。

表2

喹諾酮類藥物主要質譜參數

序號

組分

母離子

子離子

Q1

預四極桿電壓

碰撞電壓

Q3

預四極桿電壓

（m/z）

（m/z）

（V）

(V)

（eV）

諾氟沙星

320.2

*302.0

231.1

氧氟沙星

362.2

*318.2

261.1

洛美沙星

352.0

*265.0

308.0

培氟沙星

334.0

290.1

*316.2

氟羅沙星

370.0

*326.0

269.0

沙拉沙星

386.2

342.0

299.1

*368.1

雙氟沙星

400.0

*356.0

299.0

司帕沙星

393.0

*349.0

292.0

環丙沙星

332.1

*314.1

287.8

231.0

達氟沙星

358.0

*340.1

283.2

82.1

恩諾沙星

360.0

*342.1

316.0

245.2

D8-環丙沙星

340.3

322.1

D5-恩諾沙星

365.1

321.1

D5-諾氟沙星

325.3

307.2

注：1.“*”表示定量離子；2.所列質譜參考條件是在島津（LC/MS-8050）質譜儀上完成的，此處所列試驗用儀器型號僅供參考，不涉及商業目的，鼓勵方法使用者嘗試不同廠家或型號的儀器；3.對不同質譜儀，儀器參數可能存在差異，測定前應將質譜參數優化到最佳；4.由于喹諾酮類化合物離子化受基質干擾較為

顯著，方法使用者可根據實際情況選擇表中所列離子對進行定性定量測定。

5.4.3

標準曲線繪制

取基質標準工作溶液（5.3）按濃度由低到高依次進樣檢測，內標法繪制標準曲線。

5.5

定性

在相同實驗條件下，試樣中待測物質的保留時間與標準工作溶液中對應的保留時間偏差應在±2.5%之內；且試樣譜圖中各組分定性離子的相對豐度與標準工作溶液定性離子的相對豐度，其允許偏差不超過表3規定的范圍時，則可確定為樣品中存在此種待測物。基質標準溶液多反應監測（MRM）典型圖譜見附錄B。

表3

定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度，%

＞50%

＞20%～50%

＞10%～20%

≤10%

允許的相對偏差，%

±20%

±25%

±30%

±50%

5.6

定量

待測樣液中喹諾酮藥物的響應值應在標準曲線線性范圍內，諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、氟羅沙星以氘代諾氟沙星為內標，洛美沙星、雙氟沙星、環丙沙星、達氟沙星以氘代環丙沙星為內標，司帕沙星、沙拉沙星、恩諾沙星以氘代恩諾沙星為內標，內標法定量。本方法中所列內標能基本滿足方法要求，如條件允許，可采用各化合物的對應同位素化合物作為內標。

結果計算

試樣測定結果按公式（1）計算目標物的含量：

………….(1)

式中：

X——試樣中被測組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

m——試樣的稱樣量，單位為克（g）；

C——由工作曲線計算得到的試樣中被測組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V——定容體積，單位為毫升（mL）。

F——稀釋倍數

計算結果需扣除空白值（空白基質），并保留三位有效數字。

檢測方法靈敏度、準確度、精密度

7.1

靈敏度

諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、雙氟沙星、司帕沙星、達氟沙星、恩諾沙星檢出限均為5

μg/kg，環丙沙星檢出限為7.5

μg/kg，沙拉沙星檢出限為7.5

μg/kg。

諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、雙氟沙星、司帕沙星、達氟沙星、恩諾沙星定量限均為15

μg/kg，環丙沙星定量限為22.5

μg/kg，沙拉沙星定量限為22.5

μg/kg。

7.2

準確度

本方法在15.0～100.0

μg/kg的添加水平上的回收率范圍為65.0%～120.0%。

7.3

精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。

附錄A

標準品信息

表A.1

標準品中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量

序號

化合物名稱

英文名

CAS登錄號

分子式

相對分子質量

諾氟沙星

Norfloxacin

70458-96-7

C16H18FN3O3

319.33

氧氟沙星

Ofloxacin

82419-36-1

C18H20FN3O4

361.37

洛美沙星

Lomefloxacin

98079-51-7

C17H19F2N3O3

351.35

培氟沙星

Pefloxacin

70458-92-3

C17H20FN3O3

333.36

氟羅沙星

Fleroxacin

79660-72-3

C17H18F3N3O3

369.34

鹽酸沙拉沙星

Sarafloxacin

Hydrochloride

91296-87-6

C20H18ClF2N3O3

421.81

鹽酸雙氟沙星

Difloxacin

Hydrochloride

91296-86-5

C21H20ClF2N3O3

435.85

司帕沙星

Sparfloxacin

110871-86-8

C19H22F2N4O3

392.40

環丙沙星

Ciprofloxacin

85721-33-1

C17H18FN3O3

331.34

甲磺酸達氟沙星

Danofloxacin

mesylate

119478-55-6

C20H24

FN3O6S

453.48

恩諾沙星

Enrofloxacin

93106-60-6

C19H22FN3O3

359.39

D8-環丙沙星

Ciprofloxacin-d8

/

C17H10D8FN3O3

339.39

D5-恩諾沙星

Enrofloxacin-d5

/

C19H17D5FN3O3

364.37

D5-諾氟沙星

Norfloxacin-d5

/

C16H13D5FN3O3

324.37

注：市售標準品中部分為其鹽酸鹽或甲磺酸鹽。

附錄B

14種喹諾酮類化合物多反應監測（MRM）譜圖

14種喹諾酮類化合物火鍋底料基質標準溶液(100

ng/mL，氘代內標為25

ng/mL)多反應監測（MRM）譜圖

本方法負責起草單位：四川省食品藥品檢驗檢測院

方法的參與驗證單位：上海市食品藥品檢驗所、遼寧省食品藥品檢驗檢測院、深圳出入境檢驗檢疫局食品檢驗檢疫技術中心、山東省食品藥品檢驗研究院、湖北省食品藥品監督檢驗研究院。

主要起草人：余曉琴，李道霞，黃麗娟，成長玉，李澍才，唐昌云

第四篇：杞菊地黃丸定性檢查及含量測定解讀

杞菊地黃丸定性檢查及含量測定

前言：實驗依據：有熟地之膩補腎水,即有澤瀉之宣泄腎濁以濟之;有英肉之溫澀肝經,即有丹皮之清瀉肝以佐之;有山藥收攝脾經,即有獲菩之淡滲脾濕以和之。藥止六味,而大開大合,三陰并治,詢補方之正鵲也”。本方配伍具有“三補”、“三瀉”的特點,但中熟地黃用量是山萸肉、山藥兩藥之和,且三辛傭明顯重于三瀉。枸杞和菊花增加了清肝明目的效果。現對杞菊地黃丸中各味藥材進行定性鑒別和含量測定。

關鍵詞;杞菊地黃丸；定性鑒別；含量測定；

1.地黃(鮮躍全)

定性鑒別（TLC法）

實驗儀器：超聲發生器、研缽、燒杯、微量移液管、、吹風機、研缽、燒杯、硅膠G薄層板、實驗材料：杞菊地黃丸 熟地黃 澤瀉 茯苓 枸杞子 牡丹皮 山茱萸 山藥細粉 菊花

實驗試劑：乙酸乙酯、冰醋酸、10%硫酸、蒸餾水正丁醇、甲苯、冰醋酸、無水乙醇、10%硫酸、蒸餾水

試驗方法

1.1供試品溶液的制備

1.1.1取杞菊地黃丸(濃縮丸)6g，研碎，加乙醇超聲處理分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，作為供試品溶液。

1.1.2供試品溶液的制備

稱取顆粒劑2.2 g，研磨成細粉，加甲醇40 ml，超聲振蕩30 min。過濾。濾液濃縮至干,加乙酸乙酯2 ml溶解,得供試液。1.2對照品的制備

另取毛蕊花糖苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。

1.3對照藥材的制備

稱取熟地黃浸膏粉0.5 g，按照供試品溶液制備方法，制得熟地黃藥材的對照液。

1.4陰性對照液的制備

按處方比例，取除去熟地黃以外的其余藥材，同供試品溶液制備方法分別制成陰性對照液。稱取澤瀉0.75g、茯苓0.75g，30ml水加熱回流提取1個小時，過濾，提取液濃縮至一定濃度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g,山茱萸1g和菊花0.5g，70%乙醇加熱回流提取1個小時，過濾，濃縮成適當濃度；合并以上兩種濃縮液，加山藥細粉1g；加70%乙醇20 mL，加熱回流提取1個小時，濾過，蒸干，加適量水溶解，分別用10ml乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為陰性對照溶液。1.5薄層色譜法

1.5.1照薄層色譜法《中國藥典》(2010年版)附錄YIB試驗，吸取上述溶液各5uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯—乙酸乙醋—冰醋酸((24 : 8 : 1)為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。

1.5.2薄層色譜照薄層色譜法《中國藥典》(2010年版)附錄YIB試驗，吸取上述溶液各5uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇(6∶3∶3∶2)為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，顯相同顏色的斑點且陰性對照液色譜在該位置上不顯斑點。

2.山藥（周開放）

【性味與歸經】味甘，性平。歸脾、肺、腎經。【功能與主治】補脾養胃，生津益肺，補腎澀精。

實驗材料：回流裝置、冷凝裝置、水浴鍋、坩堝、燒杯、微量移液管、硅膠G薄層板、吹風機。

實驗試劑：乙酸乙酯、甲醇、濃氨試液、無水乙醇、10％磷鉬酸。試驗方法

2.1供試品溶液的制備

取本品（杞菊地黃丸）粉末5g，加二氯甲烷30ml，加熱回流2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加二氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。2.2對照品的制備

另取山藥對照藥材5g，同法制成對照藥材溶液。對照藥材加二氯甲烷同法制成對照藥材溶液。

2.3陰性對照液的制備

按處方比例，取除去山藥以外的其余藥材，同供試品溶液制備方法分別制成陰性對照液。

1.稱取澤瀉0.75g、茯苓0.75g和熟地黃2g，30ml水加熱回流提取1個小時，過濾，提取液濃縮至一定濃度；

2.取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加熱回流提取1個小時，過濾，濃縮成適當濃度； 3.合并以上兩種濃縮液;加70%乙醇20 mL，加熱回流提取1個小時，濾過，蒸干，加適量水溶解，分別用10ml乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為陰性對照溶液。2.5薄層色譜法試驗

照薄層色譜法《中國藥典》(2010年版)附錄YIB試驗，吸取上述溶液各5uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(9：1：0.5)為展開劑展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點且陰性對照液色譜在該位置上不顯斑點。

3.茯苓（劉保松）

實驗器材：50ml圓底燒瓶，冷凝管，蒸發皿，水浴鍋，過濾裝置，硅膠G薄層板，紫外檢測儀，吹風機

實驗材料：茯苓對照藥材、杞菊地黃丸

實驗試劑：乙醚，甲醇，甲苯，乙酸乙酯，甲酸，2%香草醛硫酸溶液，乙醇。

3.1供試品溶液制備

取杞菊地黃丸濃縮丸6g，研碎，加乙醚50ml(量筒)，超聲處理10分鐘，濾過(濾紙，漏斗)，濾液蒸干(蒸發皿，水浴鍋)，殘渣加甲醇1ml使溶解(移液管)，作為供試品溶液。3.2對照品藥材制備

取茯苓對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。

3.3陰性對照溶液制備

按處方比例，取除去茯苓以外的其余藥材，同供試品溶液制備方法制成缺茯苓陰性對照液。3.4薄層色譜法試驗

照薄層色譜法(通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸((20 ：5 ：0.5)為展開劑(移液管)，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液一乙醇(4：1)混合溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰(吹風機)。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。或者照薄層色譜法(中國藥典20015年版中國藥典)試驗，吸取上述溶液各5uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸((24 : 8 : 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

4.澤瀉（王金龍）

實驗器材：氧化鋁柱，水浴鍋，蒸發皿，過濾裝置，硅膠H薄層板，紫外檢測儀，吹風機

實驗材料：澤瀉對照藥材、杞菊地黃丸

實驗試劑：乙酸乙酯，23-乙酰澤瀉醇B對照品，環己烷，乙酸乙酯，5%硅鎢酸乙醇。

4.1供試品溶液制備

取杞菊地黃丸濃縮丸6g，研碎，加乙酸乙酯20 m1(量筒)，超聲處理30分鐘，濾過(濾紙，漏斗)，濾液加于氧化鋁柱(200-300目，5g，內徑為l cm，干法裝柱)上，用乙酸乙酯10ml洗脫(移液管)，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯l ml(移液管)使溶解，作為供試品溶液。4.2對照品藥材制備

取澤瀉對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。

4.3對照品溶液制備

另取23-乙酰澤瀉醇B對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。4.4陰性對照溶液制備

按處方比例，取除去澤瀉以外的其余藥材，同供試品溶液制備方法制成缺澤瀉陰性對照液。稱取澤瀉0.75g、熟地黃2g，30ml水加熱回流提取1個小時，過濾，提取液濃縮至一定濃度；取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加熱回流提取1個小時，過濾，濃縮成適當濃度；合并以上兩種濃縮液，加山藥細粉1g；加70%乙醇20 mL，加熱回流提取1個小時，濾過，蒸干，加適量水溶解，分別用10ml乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為陰性對照溶液。

4.5薄層色譜法試驗

照薄層色譜法(通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠H薄層板上，以環己烷一乙酸乙酯(1 : 1）為展開劑(移液管)，展開，取出，晾干，噴以5%硅鎢酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰(吹風機)。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。或者照薄層色譜法(中國藥典20015年版中國藥典)試驗，吸取上述溶液各5uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸((24 : 8 : 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

5.丹皮（雷銘宇）

儀器：加熱回流裝置、薄層板、紫外光燈

材料：乙酸乙酯、蒸餾水、甲醇、牡丹皮對照藥材、乙醚、丙酮、丹皮酚對照品、環己烷、鹽酸、三氯化鐵、乙醇 定性鑒別（TLC法）

5.1 供試品溶液的制備

取本品15g（天平），研碎，加水100ml，加熱回流3 0分鐘，放冷，離心，取上清液，用乙酸乙酯50ml（50ml量筒）振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干（水浴鍋），殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。5.2對照藥材溶液提取

取牡丹皮對照藥材1g（天平），研碎，加乙醚40ml，加熱回流1 小時，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加丙酮lml（量筒）使溶解，作為供試品溶液。5.3對照品溶液的制備

取丹皮酚對照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。5.4陰性對照溶液的制備

取處方中除丹皮外的其余藥味，稱取澤瀉0.75g、茯苓0.75g、熟地黃2g和山茱萸1g，30ml水加熱回流提取1個小時，過濾，提取液濃縮至一定濃度（水浴鍋）；取枸杞子0.5g和菊花0.5g，70%乙醇加熱回流提取1個小時，過濾，濃縮成適當濃度；合并以上兩種濃縮液，加山藥細粉1g；加70%乙醇20 mL，加熱回流提取1個小時，濾過，蒸干，加適量水溶解，分別用10ml乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為陰性對照溶液。5.5.1薄層條件

照薄層色譜法（通則0502)試驗，吸取上述三種溶液各

10ul分別點于同一硅膠G 薄層板上，使成條狀，以環己烷-乙酸乙酯（3：1)為展開劑（層析缸），展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5 %三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的條斑。5.5.2薄層板

硅膠Ｇ薄層板20ｃｍ×20ｃｍ×0.4ｃｍ,105℃ ,活化30ｍｉｎ備用;展開劑:-環乙烷-乙酸已酯-冰醋酸(10∶1∶0.1);斑點觀察:置紫外燈下(λ=254ｎｍ)檢識定位 5.6丹皮酚的含量測定 5.6.1材料與方法

紫外分光光度計、型電熱恒溫鼓風干燥箱、紫外分析儀劑均為99.9%無水乙醇、水為二次蒸餾水 5.6.1.2材料

牡丹皮、丹皮酚對照品

5.6.1.3對照品標準溶液的制備

精確稱取丹皮酚對照品0.005g置于 50ml燒杯中，以無水乙醇溶解’ 轉至 100ml容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，得到 50ug/ml 的丹皮酚對照品溶液

5.6.1.4結果與分析

5.6.1.4.1測定波長的選擇

以無水乙醇為對照品，在274nm出測的最大波長 5.6.1.4.2線性關系考察

分別吸取對照品溶液0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml，4ml，置于25ml容量瓶中!，用無水乙醇稀釋至刻度搖勻。以無水乙醇為空白溶液在 274nm 波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標樣品濃度為橫坐標繪制標準曲線。

5.6.1.4.3丹皮酚含量測定

準確稱取牡丹皮粉末 3.000g（分析天平），置于50ml錐形瓶中，加入25ml無水乙醇，60度恒溫水浴2h，趁熱過濾，置于25ml容量瓶中用無水乙醇溶液定容，作為供試品溶液。量取5份0.1ml牡丹皮供試品溶液分別置于25ml容量瓶中。用無水乙醇定容至刻度，搖勻，以無水乙醇為空白對照，于274nm波長處測定吸光度，測量三次，取平均值。丹皮酚含量測定結果如下表。

吸光度

檢出量ug/ml

平均檢出量ug/ml 丹皮酚含量

6.菊花（鄔學良）

定性鑒別（TLC法）

實驗器材：水浴鍋，超聲提取儀，過濾裝置，硅膠H薄層板,聚酰胺薄膜，紫外檢測儀、錐形瓶、分析天平、回流裝置、蒸發皿、5ml量瓶、25ml棕色量瓶 實驗材料：菊花，綠原酸供試品、杞菊地黃丸

實驗試劑：稀鹽酸，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，正丁醇，甲酸，冰醋酸、氯仿

實驗方法

6.1供試品溶液制備方法

6.1.1取本品杞菊地黃丸（濃縮丸），研細(過一號篩)取約1g，精密稱定（分析天平）,置錐形瓶中,精密加人50％甲醇50ml,稱定重量,加熱回流2小時,冷卻,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取（10ml移液管）續濾液10ml,蒸干殘渣加氯仿5ml,浸漬3分鐘,棄去氯仿液,殘渣揮去氯仿（水浴，蒸發皿）,加水適量使溶解,并轉移5ml棕色量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得。6.2對照品溶液的制備

取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1 ml含綠原酸35μg的溶液，即得(10℃以下保存)。6.3對照藥材溶液制備

另取菊花對照藥材粉末1g，同供試品溶液制法制成對照藥材溶液。

6.4陰性對照溶液的制備

取處方中除菊花外的其余藥味，按上述供試品溶液制備陰性對照溶液。稱取澤瀉0.75g、茯苓0.75g和熟地黃2g，30ml水加熱回流提取1個小時，過濾，提取液濃縮至一定濃度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和山茱萸1g，70%乙醇加熱回流提取1個小時，過濾，濃縮成適當濃度；合并以上兩種濃縮液，加山藥細粉1g；加70%乙醇20 mL，加熱回流提取1個小時，濾過，蒸干，加適量水溶解，分別用10ml乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為陰性對照溶液。6.5照薄層色譜法 6.5.1薄層板

薄層板：硅膠板H 乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1：15：1：1：2)的上層溶液，乙酸乙酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上層溶液，乙酸乙脂:甲酸:水:乙醇(1:1:1:0.2)上層液，乙酸乙酯-正丁醇-水（4:5:1）的上層溶液 6.5.2薄層板

聚酰胺薄膜板展開劑：36%乙酸吸取上述四種溶液各0.5～1μl，分別點于同一硅膠板上，用展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

7.山茱萸（陳明璐）

實驗儀器：加熱回流裝置、高效液相色譜儀、滲漏裝置、吹風機、十八烷基硅烷鍵合硅膠

實驗材料：杞菊地黃丸、蒸餾水、乙酸乙酯、甲醇、山茱萸藥材、熊果酸對照品、甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸、磷酸、莫諾苷、馬錢苷 7.1.供試品溶液的制備

取本品15g，研碎，加水100ml，加熱回流 30 分鐘，放冷，離心，取上清液，用乙酸乙酯 50ml 振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇 lml 使溶解，作為供試品溶液。7.2對照藥材溶液的制備

取山茱萸對照藥材1g，加乙醚 40ml，加熱回流1小時，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯 lml 使溶解，作為對照藥材溶液。7.3樣品溶液的制備

另取熊果酸對照品，加乙酸乙酯制成每lml 含 lmg的溶液，作為對照品溶液

7.4陰性對照品溶液的制備

按處方比例和制法制備不含山茱萸的陰性樣品，制成陰性樣品溶液。稱取澤瀉0.75g、茯苓0.75g和熟地黃2g，30ml水加熱回流提取1個小時，過濾，提取液濃縮至一定濃度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加熱回流提取1個小時，過濾，濃縮成適當濃度；合并以上兩種濃縮液，加山藥細粉1g；加70%乙醇20 mL，加熱回流提取1個小時，濾過，蒸干，加適量水溶解，分別用10ml乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為陰性對照溶液。7.5定性檢測

照薄層色譜法（通則0502)試驗，吸取〔鑒別〕（5)項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液和對照品溶液各 5μl，分別點于同一硅膠 G 薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲酸（15 : 2 : 1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm)檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的斑點。

8.4.2吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸（3：2：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。

參考文獻：1.2015年《中國藥典》第一部

2.中華民族民間醫藥 2015 年8 月第24 卷第16 期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2015，Vol.24，No.16 3.第41 卷第12 期2013 年6 月廣州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.41 No.12June.2013 4.[1]鄧如偉,冉蘭,李穎,張榕.杞菊地黃顆粒中六味藥材的薄層色譜鑒別[J].華西藥學雜志,2005,03:264-266.5.李永霞，靳湘，杜霞.高效液相色譜法測定杞菊地黃丸中綠原酸的含量[J].中國醫院藥學雜志.1549-1550.1.杞菊地黃丸中山藥的測定 2.杞菊地黃丸中茯苓的測定 3.杞菊地黃丸中澤瀉的測定 4.杞菊地黃丸中菊花的測定 5.杞菊地黃丸中枸杞的測定 6.杞菊地黃丸中丹皮的測定 7.杞菊地黃丸中山茱萸的測定

讀書的好處

1、行萬里路，讀萬卷書。

2、書山有路勤為徑，學海無涯苦作舟。

3、讀書破萬卷，下筆如有神。

4、我所學到的任何有價值的知識都是由自學中得來的。——達爾文

5、少壯不努力，老大徒悲傷。

6、黑發不知勤學早，白首方悔讀書遲。——顏真卿

7、寶劍鋒從磨礪出，梅花香自苦寒來。

8、讀書要三到：心到、眼到、口到

9、玉不琢、不成器，人不學、不知義。

10、一日無書，百事荒廢。——陳壽

11、書是人類進步的階梯。

12、一日不讀口生，一日不寫手生。

13、我撲在書上，就像饑餓的人撲在面包上。——高爾基

14、書到用時方恨少、事非經過不知難。——陸游

15、讀一本好書，就如同和一個高尚的人在交談——歌德

16、讀一切好書，就是和許多高尚的人談話。——笛卡兒

17、學習永遠不晚。——高爾基

18、少而好學，如日出之陽；壯而好學，如日中之光；志而好學，如炳燭之光。——劉向

19、學而不思則惘，思而不學則殆。——孔子

20、讀書給人以快樂、給人以光彩、給人以才干。——培根

第五篇：天然氣水露點水含量測定方法總結

天然氣處理與加工

—天然氣水露點/水含量測定方法總結

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目

錄

一．前言

二．天然氣水含量的測定 1.絕對法

（1）吸收稱重法(ISO11541)（2）卡爾費休法(ISO10101)<1>.電位滴定法 <2>.庫侖法

（3）電解法（SY/T7507-1997）（4）紅外法 2.相對法（1）色譜法（2）濕度計法

<1>.電容法 <2>.壓電法 <3>.電導法 <4>.光學法

三．天然氣水露點的測定

冷卻鏡面法(GB/T17238-1998)四．參考文獻

一．前言

水蒸氣含量或水露點是商品天然氣一項重要的技術指標。天然氣從地下產出,一般均含有一定量的水。而且天然氣在輸配過程中通過積存有水的管網,也會使水存在于天然氣中。水會形成水合物,可能引起管線水堵。在低溫條件下,可能造成管線冰堵。水還會使管線、設備和儀表產生腐蝕,直接影響天然氣計量的準確度,給天然氣的安全生產和使用造成極大危害。管輸天然氣、車用壓縮天然氣等產品標準(SY7514-1988和SY/T7546-1996)均對水的含量做了嚴格規定。故測定天然氣的水含量、水露點尤為重要，下面二三部分對其測定方法進行了總結。

二．天然氣水含量的測定

1.絕對法

（1）吸收稱重法(ISO11541)吸收稱量法是一種簡便易操作,且能用于高壓下在線測定的方法。國際上頒布了ISO11541：1997《天然氣-高壓下水含量的測定》，該方法適用于壓力>1 MPa、水含量≧10 mg/m3的天然氣,也可應用于含硫化氫的天然氣。

基本原理為一定體積的氣體通過充填有顆粒狀P2O5的吸收管,氣體中水被P2O5吸收形成磷酸。吸收管增加的重量即為氣體中所含水的量。在氣體流速為2~3 m3/h,總的通過體積為1.5~3 m3的條件下,方法不確定度預計為測定值的±5%(但不優于5 mg/m3),檢測限預計為10 mg/m3。水含量的測定：按圖3裝配測定裝置。在吸收管中填入顆粒狀的P2O5后稱量吸收管(m0),將吸收管裝入壓力容器中。調節流速讓氣體通過吸收管,待通過量達到1.5~3 m3時,減壓后卸下壓力容器,再一次稱量吸收管(m1)。吸收量不應超過吸收管吸收容量一半,否則無效。

（2）卡爾費休法(ISO10101-1,2,3)

ISO/TC193于1993年頒布了以卡爾費休法測定天然氣中水含量的3項國際標準,即導論、電位滴定法和庫侖法。

卡爾費休法的基本原理是氣體樣品中的水同卡爾費休試劑(吡啶/甲醇混合物)中的碘和二氧化硫發生反應。反應式為: CH3OH+SO2+R3Ny[R3NH]SO3CH3 H2O+I2+[R3NH]SO3CH3+2R3Ny[R3NH]SO4CH3+2[R3NH]I 在應用中將根據實際情況選擇使用電位滴定法和庫侖法。

<1>.電位滴定法

該方法適用于水含量在5~5 000 mg/m3的天然氣。方法原理為一定體積的氣體通過含相對少量堿性吸收液的吸收池,氣體中所含的水溶于吸收液中,然后用卡爾費休試劑滴定,終點由電位法確定。卡爾費休試劑相當的水含量適宜值約為5 mg/ml。

水含量的測定:卡爾費休電位儀平面示意圖見圖1。在滴定池中 加入適量的堿性吸收液,滴加卡爾費休試劑反復調零直至穩定。需要的話也可加入足夠量的水來調零。待取樣管線吹掃干凈后,將取樣管線同滴定池連接,并通入一定量的氣體,滴加試劑使指針保持在零位。記錄流量計上的讀數V、溫度T及壓力值P和滴加的試劑體積VR。由于取樣管線和樣品流等的不確定度,第一次滴定結果通常誤差較大,故舍棄。多次重復測定,取平均值。

<2>.庫侖法

該方法適用于水含量在5~5 000 mg/m3的天然氣和其它氣體。方法原理為一定體積的氣體通過含無水陽極溶液的滴定池。氣體中水被陽極溶液溶解吸收。由碘化物電解產生的碘按卡爾費休試劑反應原理同水發生反應。用庫侖法測定消耗的碘即可得到溶解水的量。

水含量的測定：卡爾費休庫侖儀平面示意圖見圖2。在陽極溶液池中加入適量的標準溶液,然后滴定。滴定結果應在誤差范圍內同標準溶液實際含水量一致。待取樣管線吹掃干凈后,將取樣管線同滴定池連接,邊通入一定量的氣體,邊滴定。對低水含量氣體,則推薦待通入氣體達到一定量后再開始滴定。當氣體中水含量低于100 mg/m3時,應進行空白試驗(在氣體入口安裝一個P2O5吸收管)以校正樣品攪動造成的碘蒸發損失。由于取樣管線和樣品流等的不確定度,第一次滴定結果通常誤差較大,故放棄。多次重復測定,取平均值。

（3）電解法（SY/T7507-1997）

SY/T7507-1997規定了用電解法測定天然氣中水含量的方法,適用于水含量體積分數小于4 000×10-6的天然氣。若天然氣中無凝液存在且總硫含量小于500 mg/m3,對測定無影響。

電解法測定天然氣中含水量的原理是樣品氣以一定的恒速通過電解池,其中的水分被電解池內的五氧化二磷膜層吸收,生成亞磷酸后被電解為氫氣和氧氣排出,而五氧化二磷得以再生。電解電流的大小正比于樣品氣中的水含量,故可用電解電流來量度樣品氣中的水量。

測定儀器：天然氣工業常用的USI-1A型微量水分測定儀，其基本結構如圖2所示(圖中干燥器4內裝有40~60目5A分子篩)。（4）紅外法

基本原理：包括水蒸氣在內的大多數氣體都會在特定的波長上吸收紅外線,且吸光率是與該氣體的濃度有關,因而測定吸光率即可測定氣體中的水蒸氣含水量。2.相對法（1）色譜法

基本原理:用帶有熱導池檢測器的氣相色譜儀，由色譜拄將試樣中水與其它組分分離，根據記錄下的水的峰面積(或峰高)，用外標法計算水分的含量。

定性分析：試樣中的水分采用純物對照保留時間定性。首先用l 注射器向汽化室注入O．1μL純水，并記下水的保留時間，然后經六通閥進一燃氣試樣，出峰后對照純水的保留時間找出試樣中的水峰。定量分析：試樣的水分含量采用外標法定量計算，即用與試樣中水分含量相應的標準試樣進行外標定量，也可采用甲醇作外標物進行 定量。（2）濕度計法 <1>.電容法

基本原理：傳感元件為貼有一層金箔的純鋁片,后者經硫酸處理而形成一個多孔的氧化鋁層,從而構成電容器的2個電極。當氣流中水蒸氣被氧化鋁層吸收時,電容就相應發生變化。<2>.壓電法

基本原理：傳感元件大多為石英制作的壓電晶體。把兩側裝有電極且涂敷了吸濕性物質的壓電晶體片安裝在共振器上,當后者以特定的頻率振動時,其頻率與電極厚度、晶體類型、電極質量等因素有關。壓電晶體吸收了氣流中的水蒸氣后,振動頻率就相應發生變化。<3>.電導法

基本原理：當一種不飽和鹽溶液與含水蒸氣的氣體接觸時,前者就吸收后者中的水蒸氣,直到兩者的水蒸氣分壓相平衡。在鹽溶液吸收水蒸氣后,其電導也相應發生變化。<4>光學法

基本原理：傳感元件為法貝一佩羅德(FABRY一PERaT)型光學共振器,它由約20片反射指數不同的薄片組成。反射指數高的材料一般為金屬氧化物(如氧化錯),而反射指數低的材料則為吸濕性物質。當光學共振器吸收水蒸氣后,其反射光譜相應發生變化,吸收水分愈多則被反射光的波長愈長,故分析反射光譜的變化即能測定氣體中的水蒸氣含量。

關于以上方法測定水含量的比較總結如表1所示：

三．天然氣水露點的測定

冷卻鏡面法(GB/T17238-1998)該標準等效采用國際標準ISO6327-1981《天然氣水露點的測定冷卻鏡面凝析濕度計法》。制訂國標前,由四川石油管理局天然氣研究院對ISO6327進行了驗證研究。結果表明:該國際標準的精密度較高,測定范圍寬,檢測下限低,適合于等效采用作為國家標準,但為能適應我國天然氣工業的實際情況,擴大了測定范圍。

冷卻鏡面凝析濕度計法是通過檢測濕度計上的水蒸氣凝析物或檢查鏡面上凝析物的穩定性來測定水露點。經處理的管輸天然氣的水露點范圍一般為-25℃~5℃。在相應的氣體壓力下,水含量的體積分數為50×10-6~200×10-6。特殊情況下水露點測定范圍也可以更寬。如果樣品在測試系統中的總壓力大于或等于大氣壓,上述濕度計不需校正也可用于測定水的蒸氣壓,水蒸氣分壓與所測露點間的關系取決于所用方法和測量水平。如果測定環境中含有凝析溫度接近或高于水露點的氣體,則水露點℃的測定相當困難。

儀器與測定：以美國千德勒(EG&G Chandler)石油儀器公司 生產的13-200型露點儀為例,其基本結構如圖1所示。測定時,樣品氣先進入樣品池,用出口閥調節出口流量至最佳。向致冷室注入致冷劑使導冷桿降溫,與之連接的鏡面溫度也隨之下降。當通過觀察 孔見到鏡面中央開始有微小的圓形露點出現時,記下此溫度值;再升溫觀察露點剛好消失的溫度。前后兩個溫度的平均值即為水露點。

四．參考文獻 陳賡良.測定天然氣水蒸氣含量/水露點的方法與儀器.石油儀器，2000,14（4）陳賡良.天然氣物性的直接測定.石油儀器，1999,13（6）3 羅 勤，邱少林.天然氣中水含量分析方法標準簡介.石油與天然氣化工，2000,96 4 顏曉琴.四種天然氣水含量分析方法的對比研究.石油與天然氣化工,2012,41(3)5 張寶成，李春瑛.人工煤氣、天然氣和液化石油氣中水分的氣相色譜分析,1996,12(2)6 萬征平.電解法測定天然氣含水量評價及改進措施.中國石油長慶油田分公司第一采氣廠 楊 芳,石曉松.吸收稱量法測定天然氣中的水含量.化學研究與應用,2008,20(5)