第一篇：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)在醫(yī)院感染檢測(cè)中的應(yīng)用

臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)在醫(yī)院感染檢測(cè)中的應(yīng)用

【摘要】醫(yī)療中感染問(wèn)題一直是困擾醫(yī)學(xué)界的一個(gè)難題，院內(nèi)的交叉感染是引發(fā)多種感染性疾病、減慢康復(fù)速率、增加患者死亡率的主要根源。由于醫(yī)院中免疫抑制劑的應(yīng)用、放化療的大力開(kāi)展以及內(nèi)科介入療法的廣泛應(yīng)用，使得院內(nèi)感染人數(shù)日益增多。臨床上微生物的檢驗(yàn)主要針對(duì)傳染源、傳播途徑、易感人群這三個(gè)方面，切斷這三個(gè)方面中的任何一個(gè)方面都能有效降低院內(nèi)感染的概率。現(xiàn)針對(duì)臨床微生物檢驗(yàn)對(duì)有效控制醫(yī)院感染的價(jià)值進(jìn)行討論。

【關(guān)鍵詞】臨床微生物；檢驗(yàn)；感染檢測(cè)

【中圖分類號(hào)】R-0 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1671-8801（2016）02-0213-01

引言：醫(yī)院感染的發(fā)生包括3個(gè)重要的環(huán)節(jié)，即傳染原的存在、傳播途徑和易感人群，每個(gè)環(huán)節(jié)都和微生物學(xué)檢查有著極為密切的關(guān)系。醫(yī)院感染的發(fā)生主要有兩種類型，即外源性感染（系指由患者本身以外的微生物引起的感染）、內(nèi)源性感染（系指由患者本身攜帶的微生物引起的感染）。要對(duì)不同類型的感染作出正確的診斷，必須進(jìn)行微生物學(xué)檢查。因此臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)在醫(yī)院感染的診斷、監(jiān)測(cè)，醫(yī)院感染的流行病學(xué)調(diào)查、消毒滅菌效果評(píng)價(jià)以及抗菌藥物的合理使用等方面，具有極其重要的作用。

1.常用微生物檢測(cè)技術(shù)

目前常用的微生物檢測(cè)技術(shù)有顯微技術(shù)、染色技術(shù)、分離純化技術(shù)、微生物鑒定技術(shù)、細(xì)菌診斷技術(shù)、聚合酶技術(shù)等幾大類。

1.1 顯微技術(shù)

顯微技術(shù)是微生物檢測(cè)中常用的技術(shù)之一，包括普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡等多種設(shè)備，在不同的檢測(cè)需求中所運(yùn)用的檢測(cè)設(shè)備并不相同。顯微技術(shù)是微生物檢測(cè)中最為簡(jiǎn)便，操作最為容易的檢測(cè)技術(shù)之一，但檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度和檢測(cè)控制較差，直接觀測(cè)的結(jié)果有可能會(huì)產(chǎn)生極大的誤差。

1.2 染色技術(shù)

染色技術(shù)則是對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行染色后，對(duì)微生物進(jìn)行觀察檢測(cè)的一種技術(shù)，不過(guò)由于染色后微生物標(biāo)準(zhǔn)基本是死的，其形態(tài)和結(jié)構(gòu)會(huì)在染色過(guò)程中發(fā)生一定變化，無(wú)法切實(shí)反應(yīng)出活細(xì)胞的真實(shí)情況，因此通常只作為輔助檢測(cè)手段。在實(shí)際操作中，整個(gè)流程也較為繁瑣，染色、脫色都需要嚴(yán)格控制，否則將會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3 分離純化技術(shù)

自然環(huán)境中的微生物通常是雜居混生的，在微生物檢測(cè)中需要對(duì)混生微生物群體進(jìn)行分離純化，以對(duì)純微生物進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，分離純化技術(shù)常用于菌種鑒定中，分離純化技術(shù)是微生物檢測(cè)的一項(xiàng)重要技術(shù)，是微生物檢測(cè)的重要基礎(chǔ)。

1.4 其它技術(shù)

在微生物常規(guī)檢測(cè)中，通常對(duì)微生物進(jìn)行形態(tài)結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)特性方面的觀察，再利用化學(xué)反應(yīng)來(lái)測(cè)定微生物的代謝物，以鑒別一些形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物，以更好的進(jìn)行微生物分類鑒定。近年來(lái)，在環(huán)境監(jiān)測(cè)中，微生物檢測(cè)技術(shù)運(yùn)用方法較為廣泛，如運(yùn)用細(xì)菌總數(shù)和糞便污染指示菌監(jiān)測(cè)水質(zhì)，運(yùn)用發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)環(huán)境有毒物質(zhì)，運(yùn)用水中藻類生長(zhǎng)量監(jiān)測(cè)水質(zhì)或物質(zhì)霉性等等，這些方法都已經(jīng)有了較為成熟的操作手段和檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，具有較強(qiáng)的實(shí)踐價(jià)值。

2.臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)的運(yùn)用

2.1重視原始標(biāo)本直接涂片的診斷價(jià)值

原始標(biāo)本涂片檢查不僅對(duì)微生物檢驗(yàn)全過(guò)程起著導(dǎo)向作用，還可快速為診斷提供有價(jià)值的信息。在細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中，受細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢且培養(yǎng)特異性的制約，不能快速回報(bào)結(jié)果，可通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)前對(duì)標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡槍，包括未染色濕片位相顯微鏡觀察和染色標(biāo)本片檢查，結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)，快速提供診斷信息，對(duì)一些感染性疾病特別是急重癥感染有重要的實(shí)用價(jià)值。例如無(wú)菌體液如血液、胸腹水、腦脊液等的陽(yáng)性標(biāo)本可直接根據(jù)涂片細(xì)菌形態(tài)和染色特征快速回報(bào)臨床，指導(dǎo)其經(jīng)驗(yàn)用藥，顯微鏡形態(tài)學(xué)在細(xì)菌鑒定中體現(xiàn)的價(jià)值遠(yuǎn)甚于此，但是由于目前自動(dòng)化儀器以及分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，臨床似乎有忽視形態(tài)學(xué)檢查的傾向，同時(shí)，由于缺少模式菌株形態(tài)學(xué)圖譜，以及鑒定鏡下形態(tài)需要豐富的經(jīng)驗(yàn)，更使得顯微鏡形態(tài)學(xué)檢查在各醫(yī)院開(kāi)展困難重重，這就需要每一位檢驗(yàn)工作者從態(tài)度上給予高度重視，平時(shí)苦練基本功，善于總結(jié)歸納。此外，相關(guān)機(jī)構(gòu)應(yīng)盡快建立形態(tài)學(xué)檢查的標(biāo)準(zhǔn)方法，使臨床有據(jù)可依，真正體現(xiàn)顯微鏡形態(tài)學(xué)的應(yīng)有價(jià)值。

2.2發(fā)展快速準(zhǔn)確的診斷技術(shù)

對(duì)于發(fā)病率和病死率很高的感染性疾病，特別對(duì)那些體外難培養(yǎng)的病原微生物，臨床迫切需要快速且準(zhǔn)確的診斷方法。目前血清免疫學(xué)、多重聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、基因芯片和多肽質(zhì)譜分析等技術(shù)在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用，提高了疑難病原確診率。由于條件限制一些前沿技術(shù)很難在基層醫(yī)院開(kāi)展，如何更有效地提高此類醫(yī)院對(duì)感染性疾病的快速診斷水平，是擺在每一位微生物檢驗(yàn)工作者面前的一個(gè)嶄新課題。

2.3做好細(xì)菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化

加強(qiáng)藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化是獲得藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。首先，準(zhǔn)確的藥敏試驗(yàn)需要合格的藥敏試劑和標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)方法。目前國(guó)內(nèi)許多醫(yī)院的微生物室采用K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，該方法是美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）公認(rèn)的藥敏試驗(yàn)方法，但較易受紙片質(zhì)量、M-H瓊脂厚度和菌液濃度等因素的影響，所以欲得到準(zhǔn)確的藥敏結(jié)果，必須進(jìn)行嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)量控制，保證藥敏紙片以及M-H瓊脂等的在控狀態(tài)，同時(shí)也應(yīng)充分了解K-B法的局限性，對(duì)于不能使用此法進(jìn)行檢測(cè)的菌株，應(yīng)參照CLSI推薦的最低抑菌濃度（MIC）法檢測(cè)；其次，臨床微生物檢驗(yàn)工作者應(yīng)注重自身業(yè)務(wù)能力的培養(yǎng)，隨著臨床對(duì)細(xì)菌耐藥性認(rèn)識(shí)的不斷深入及新的抗感染治療藥物的層出不窮，古老的微生物學(xué)重新煥發(fā)了光彩，如何更好地了解細(xì)菌藥敏試驗(yàn)，需要微生物檢驗(yàn)工作者不斷地增加知識(shí)儲(chǔ)備，積極參加本專業(yè)學(xué)術(shù)交流，掌握細(xì)菌藥敏發(fā)展的新動(dòng)向，積極參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，提高檢驗(yàn)技術(shù)水平。

結(jié)束語(yǔ)

微生物檢驗(yàn)技術(shù)正朝著簡(jiǎn)便、高效、快速、自動(dòng)化方向發(fā)展，許多新的檢測(cè)技術(shù)還在不斷涌現(xiàn)出來(lái)，除了上面介紹的技術(shù)，還有代謝學(xué)技術(shù)、傳感器技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、基因探針技術(shù)、生物芯片技術(shù)等等。每種檢測(cè)技術(shù)都有其優(yōu)缺點(diǎn)，研究檢測(cè)人員應(yīng)該根據(jù)不同的檢測(cè)目標(biāo)，不同的實(shí)驗(yàn)環(huán)境及條件，選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法，進(jìn)一步地，還可以將不同的技術(shù)結(jié)合起來(lái)比對(duì)、使用，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

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第二篇：PCR技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

PCR技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

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醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)大致可分為形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、血清免疫學(xué)和分子生物學(xué)幾大類，其分別代表幾代實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)。60年代DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)及半保留復(fù)制模式的出現(xiàn)，70年代基因重組及體外基因克隆技術(shù)、分子雜交技術(shù)的應(yīng)用使分子生物學(xué)在疾病診斷中得到了長(zhǎng)足的發(fā)展。特別是1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，使醫(yī)學(xué)界真正興起了基因診斷技術(shù)熱，成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的又一里程碑。用于臨床檢驗(yàn)的PCR技術(shù)與經(jīng)典的PCR反應(yīng)在操作上稍有區(qū)別，有其自己的特色。一般在樣品處理上，多采用非離子去污劑一次加熱處理，這種方法對(duì)DNA純化有限，但適應(yīng)臨床微量、快速的特點(diǎn)。另外PCR反應(yīng)體系中各組成成份往往都預(yù)分裝到反應(yīng)管中，既減少操作者的工作強(qiáng)度而且也減少了污染的機(jī)會(huì)，具有極高的使用價(jià)值。本公司率先研制并推出單管單人份的PCR診斷試劑，具有開(kāi)創(chuàng)性意義。這些改進(jìn)都不影響PCR效果，同樣表現(xiàn)出高特異性、高敏感性、簡(jiǎn)便快捷等PCR最優(yōu)秀的特征，在常見(jiàn)傳染病、性病、腫瘤、遺傳病、寄生蟲(chóng)病、優(yōu)生優(yōu)育、法醫(yī)學(xué)等廣泛領(lǐng)域中有相當(dāng)高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

常見(jiàn)的傳染性疾病有細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體等，可引起消化、呼吸、循環(huán)、泌尿生殖等不同系統(tǒng)相應(yīng)的病變。消化系統(tǒng)感染性疾病在我國(guó)具有代表性意義的有肝炎、胃炎及腸道感染性疾病。引起肝炎的病原體主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它還有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。這幾種肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均為RNA病毒。我國(guó)是乙肝高發(fā)區(qū)，乙肝病人為世界乙肝病人總數(shù)的50％。乙肝病毒經(jīng)血液傳播，病毒主要在肝細(xì)胞中增殖，也可以長(zhǎng)期存留在骨髓細(xì)胞或外周血白細(xì)胞中。通常用PCR法檢測(cè)血清中的乙肝病毒。有報(bào)道用PCR法可以在淚液、乳汁、精液及血白細(xì)胞中檢出乙肝病毒，這些發(fā)現(xiàn)提示其它傳染途經(jīng)存在的可能。PCR法檢測(cè)乙肝的優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)在：①早期診斷，因?yàn)镻CR擴(kuò)增極其敏感，理論上可檢出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潛伏期即可被PCR法檢出。②對(duì)低持續(xù)感染乙肝病人的診斷，有些乙肝病人體內(nèi)的病毒長(zhǎng)期低復(fù)制感染，血清病毒濃度極低，一般酶標(biāo)試劑無(wú)法檢出，可以用PCR法檢出。③療效跟蹤及病程判斷，因?yàn)镻CR能半定量檢測(cè)乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其數(shù)量多少的最直接指標(biāo)。在治療過(guò)程中通過(guò)監(jiān)測(cè)血清或白細(xì)胞中病毒基因存在與否及其動(dòng)態(tài)變化即能準(zhǔn)確地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的濃度很低，丙肝病毒的分離尚未成功。目前用于丙肝病毒檢驗(yàn)的方法主要是ELISA法測(cè)定血清中的HCV抗體。由于HCV尚無(wú)法分離純化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，這些人工抗原與天然病毒抗原有一定的區(qū)別，理論上是存在假陽(yáng)性或假陰性。同時(shí)血清中抗體的出現(xiàn)及動(dòng)態(tài)變化與病人病情無(wú)線性相關(guān)關(guān)系。RT－PCR技術(shù)使這些困難得到解決。HCV是RNA病毒，需先將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA（RT）后再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，這種技術(shù)稱之為逆轉(zhuǎn)錄－PCR（RT－PCR）。PCR敏感性高可以檢測(cè)出血清中低濃度的病毒，了解病毒在體內(nèi)復(fù)制的動(dòng)態(tài)狀況。RNA純化要求嚴(yán)格，是RT－PCR的技術(shù)關(guān)鍵，本公司目前使用的高效基因釋放劑，聯(lián)合特異性固相基因吸附乳膠顆粒，對(duì)樣本中的RNA進(jìn)行分離純化，使這一問(wèn)題得到解決。通常用于RNA→cDNA逆轉(zhuǎn)錄的酶大致可以分為二大類，即低溫逆轉(zhuǎn)錄酶，如AMV/MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，高溫逆轉(zhuǎn)錄酶，如Tth酶。Tth酶在錳離子作用下，具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，Tth酶活性溫度高，可以使核酸充分線性化，提高逆轉(zhuǎn)錄效率及特異性。Tth酶在鎂離子的作用下，又具有DNA聚合酶活性，從而真正實(shí)現(xiàn)單管單酶單人份的擴(kuò)增要求，這樣就在不降低擴(kuò)增敏感性的條件下，一步完成擴(kuò)增，不僅簡(jiǎn)化操作，而且又減少污染，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。國(guó)內(nèi)本公司已采用這種技術(shù)推出單管單酶單人份的RT－PCR診斷試劑。丁型肝炎病毒是缺陷病毒，與乙型肝炎病毒協(xié)同感染。甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒主要存在于急性病人糞便樣本中，戊型肝炎病毒也長(zhǎng)期存在于血清中。在PCR檢測(cè)時(shí)，需注意取材的合理性。在消化道傳染性疾病中，另一類最重要的感染性疾病是幽門(mén)螺旋桿菌（HP）所引起的胃炎、胃潰瘍等。HP可以經(jīng)口－口途經(jīng)傳播并定位于胃粘膜上皮細(xì)胞，早期表現(xiàn)為淺表性胃炎，可發(fā)展成為胃潰瘍。我國(guó)胃炎發(fā)病率之高估計(jì)比乙型肝炎更嚴(yán)重，對(duì)HP的檢測(cè)應(yīng)受到廣大醫(yī)務(wù)工作者的重視。對(duì)HP的檢測(cè)可以用生化法測(cè)試尿素酶或用免疫法測(cè)試血清中對(duì)HP特異性抗體，也可對(duì)胃液、胃粘膜樣本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及菌種鑒定。PCR法檢測(cè)HP非常敏感且特異性高，有研究發(fā)現(xiàn)可以從病人的唾液或口腔含漱液中檢出HP。PCR法避免了取胃液及胃粘膜，減少病人痛苦，是目前最理想的方法。

呼吸系統(tǒng)感染性疾病主要的有肺結(jié)核、非典型性肺炎等。結(jié)核桿菌感染曾給人類健康帶來(lái)很大威脅，一度是較嚴(yán)重的致死性疾病之一。解放以后由于對(duì)結(jié)核病的預(yù)防的重視，特別是特效抗癆藥物的出現(xiàn)，使結(jié)核病流行基本被控制。近來(lái)結(jié)核病有抬頭的趨勢(shì)，基原因可能有兩方面，其一是耐藥株的不斷出現(xiàn)，其二是對(duì)結(jié)核預(yù)防重視不足。結(jié)核菌痰涂片鏡檢陽(yáng)性率太低，酶標(biāo)法又因抗原交叉反應(yīng)易出現(xiàn)假陽(yáng)性，結(jié)核檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)是結(jié)核菌培養(yǎng)法。但培養(yǎng)法費(fèi)時(shí)昂貴并且受到用藥的影響，在實(shí)際應(yīng)用中受到限制。PCR在結(jié)核菌檢測(cè)方面有簡(jiǎn)便、敏感、特異的優(yōu)點(diǎn)。一般認(rèn)為樣本中內(nèi)要有100個(gè)左右的結(jié)核菌即可被檢出。目前用于結(jié)核菌PCR診斷的試劑，其引物主要來(lái)源于以下基因片段36KD/65KD抗原蛋白基因；染色體重復(fù)插入序列IS986、IS960、IS6110、染色體質(zhì)粒DNA PH7311、PMTB4、P36基因等。其中最常用的是染色體重復(fù)插入序列IS986或IS6110，1990年Hermans首先介紹并使用了IS986基因設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增產(chǎn)物為245BP，研究表明這一基因?qū)θ诵徒Y(jié)核菌有特異性。而后Thierry又介紹了插入序列IS6110基因，并認(rèn)為這一基因?qū)θ诵徒Y(jié)核菌具有比IS986更高的特異性及敏感性，最適合M.TB的檢測(cè)。結(jié)核菌痰標(biāo)本的PCR檢測(cè)應(yīng)注意以下幾種常見(jiàn)的問(wèn)題。其一，多條帶。即擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后有三條或三條以上的螢光除最前面的引物以外有兩條產(chǎn)物帶，這與插入序列本身各片段長(zhǎng)度有差異、結(jié)核菌在治療過(guò)程中染色體畸變、斷裂、缺欠及不等位交換有關(guān)。這種擴(kuò)增結(jié)果的判斷應(yīng)特別注意，凡在陽(yáng)性對(duì)照相應(yīng)位置有明顯條帶的判陽(yáng)性，否則應(yīng)為陰性，或建議病人過(guò)一些時(shí)間后再?gòu)?fù)檢一次；其二，結(jié)核痰樣本PCR檢測(cè)時(shí)，要使樣本充分液化，否則痰液中的粘液成份將影響擴(kuò)增效果，甚至?xí)?dǎo)致嚴(yán)重非特異性擴(kuò)增，電泳結(jié)果呈霧狀；基三，結(jié)核痰樣本PCR檢測(cè)結(jié)果可能表現(xiàn)為陽(yáng)性、陰性交替出現(xiàn)，這與結(jié)核病灶的不規(guī)律排菌有關(guān)。

循環(huán)系統(tǒng)以腸道小RNA病毒感染最具代表意義，如柯薩奇病毒等。這些病毒經(jīng)腸道粘膜、淋巴結(jié)進(jìn)入血液，最終可定位于心肌細(xì)胞中導(dǎo)致心肌炎。目前對(duì)這些病毒的血液樣本檢測(cè)往往比較困難。PCR用于柯薩奇病毒檢測(cè)時(shí)因其是RNA病毒所以應(yīng)注意樣本的保存。外在環(huán)境中存在大量RNA酶，病毒脫殼后RNA將被迅速降解。一般用于RNA檢測(cè)的血清常溫下不應(yīng)超過(guò)24小時(shí)，4℃下可保存2天，-20℃下可以保存2月以下。

PCR檢測(cè)在性傳播性疾病(STD)的診斷中有較廣泛的應(yīng)用。經(jīng)典的性傳播疾病有梅毒、淋病、腹股溝淋巴肉芽腫、軟銳濕癘、硬下疳等。而在現(xiàn)代STD中、解尿支原體及沙眼衣原體引起的非淋菌性尿道炎（NGU）可能更具有代表性意義。梅毒是由梅毒螺旋體感染布致，首先在局部形成硬軟下疳，布后經(jīng)血行播散到全身，最嚴(yán)重的是波及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。感染早期，梅毒螺旋體大量存在于硬下疳中，可以用生理鹽水濕棉簽擦去皮疹表面污物再用鈍刀片輕輕刮去上皮及結(jié)痂，用潔凈棉簽取滲出液樣本作PCR檢測(cè)，其敏感性及特異性極高。二期梅毒皮疹中也存在梅毒螺體其取樣方法同埂下疳，三期梅毒皮疹中一般無(wú)螺旋體存在，因此III病人及部分無(wú)皮疹的I、II期梅毒病人可以取EDTA抗凝全血檢測(cè)。淋病是目前發(fā)病率最高的性傳播性疾病之一，由淋病雙球菌引起。淋病雙球菌一般為胞內(nèi)寄生，常見(jiàn)的感染部位為外生殖器、尿道粘膜最常見(jiàn)。在尿道及外生殖器分泌物中有許多非致病的雙菌存在，對(duì)分泌物拭子進(jìn)行涂片鏡檢時(shí)，常導(dǎo)致誤診。另外目前非淋球菌性尿道炎的發(fā)病率不斷增加，鑒別診斷特要，培養(yǎng)法準(zhǔn)確但費(fèi)時(shí)且費(fèi)用高，受用藥的影響。PCR法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確非常理想。常用的引物多采用外膜蛋白抗原基因、隱性質(zhì)粒DNA或16s RNA基因。16s RNA基因設(shè)計(jì)的引物特異性高但其敏感性低；隱性質(zhì)粒設(shè)計(jì)的引物敏感性高但偶爾出現(xiàn)多條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)以陽(yáng)性對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)，凡在陽(yáng)性對(duì)照相應(yīng)部位有明顯條帶的為陽(yáng)性，其余均為陰性。以往對(duì)沙眼衣原體及解脲支原體的檢測(cè)主要靠培養(yǎng)法，費(fèi)時(shí)且昂貴，簡(jiǎn)便快速的PCR檢測(cè)對(duì)其有極高的使用價(jià)值。沙眼衣原體、解脲支原體樣本來(lái)源主要是尿道及宮頸分泌物拭子，由于分泌物中有許多污物含有PCR擴(kuò)增的抑制劑，因此每次采樣時(shí)盡量避免采集過(guò)多膿性分泌物，如果宮頸分泌物太多可以先用濕棉簽將表面的分泌物擦去，再用潔凈的濕棉簽輕壓旋轉(zhuǎn)采集宮頸脫落細(xì)胞送檢，其準(zhǔn)確性更高。PCR也可以用檢測(cè)單純皰疹病毒、EB病毒、乳頭瘤病毒等。引物尖銳濕疣的病毒是人類乳頭瘤（HPV）,可致生殖系統(tǒng)感染的乳頭瘤病毒主要是6、11、16、18、33型。新近研究結(jié)果表明，在乳頭瘤病毒引起的良、惡性生殖器病變中，與血清型的關(guān)系并不密切，經(jīng)常有交叉或多型民時(shí)感染。為簡(jiǎn)化操作，對(duì)其基因?qū)Ρ确治鰧ふ夜餐蛄性O(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物可以同時(shí)檢出這幾種型別的病毒既簡(jiǎn)化操作又減少費(fèi)用是一種極理想的方法。

我國(guó)惡性腫瘤為人口死亡的第一位原因，其中以肺癌、胃癌及食管癌的發(fā)病率最高，占惡性腫瘤死亡總數(shù)的60％以上。引起腫瘤的原因非常復(fù)雜包括外界環(huán)境因素及遺傳背景。外界因此可分為三大類即化學(xué)、物理及生物因素。腫瘤與遺傳有關(guān)的證據(jù)越來(lái)越多，除已知的單基因遺傳腫瘤如視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤等以外，還在幾乎所有的腫瘤細(xì)胞中觀察到原癌基因的重排，這些基因的變化常導(dǎo)致細(xì)胞增殖調(diào)控失調(diào)終形成腫瘤。癌基因是指在自然或?qū)嶒?yàn)條件下具有潛在誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的基因，它們是在研究逆轉(zhuǎn)錄病毒時(shí)發(fā)現(xiàn)的。目前已知的腫瘤基因有60多種，1969年Hubner根據(jù)Rous(1911)的實(shí)驗(yàn)，在小雞肉瘤濾液中發(fā)現(xiàn)一種能誘導(dǎo)宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化的RNA病毒性癌基因（Viral Oncogene）。后來(lái)又在其它哺乳動(dòng)物基因中發(fā)現(xiàn)與病毒癌基因同源序列，這種正常的細(xì)胞基因表達(dá)產(chǎn)物與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化有關(guān)。但若被某種因素激活就會(huì)轉(zhuǎn)化為有活力的癌基因，通常稱之為原癌基因（Proto Oncogene）。為了與病毒癌基因區(qū)分，分別用V-Onc及C-Onc基因來(lái)代表。目前了解較多的癌基因（C-one）有scr基因族、ras基因族、mgc及myb基因族。原癌基因存在于正常細(xì)胞中，并表達(dá)生物功能，只有在原癌基因被激活后才能誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，可能的原癌基因活化機(jī)理有：①點(diǎn)突變，受到射線、化學(xué)因素、生物因素的誘導(dǎo)，這樣微小的變化，就會(huì)活化癌基因，活化的基因產(chǎn)物僅有極微的結(jié)構(gòu)差異，但在功能在卻有很大的區(qū)別。②獲得啟動(dòng)子，原癌基因從病毒基因中獲得啟動(dòng)子而活化。③基因易位，內(nèi)外界因素能導(dǎo)致染色體的某些基因易位、重排使原來(lái)無(wú)活性的原癌基因移至某些強(qiáng)的啟動(dòng)因子或增強(qiáng)子附近而被活化。④原癌基因的過(guò)量擴(kuò)增，原癌基因產(chǎn)物一般與生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子受體、跨膜信息蛋白有關(guān)或功能相近，過(guò)度表達(dá)時(shí)，會(huì)因調(diào)控失常而引起細(xì)胞癌變。另一類與腫瘤相關(guān)的基因是抑癌基因如P53。抑癌基因較復(fù)雜，作用機(jī)理不太清楚。癌基因檢測(cè)中常用的分子生物學(xué)技術(shù)有：雜交、DNA分子克隆、PCR擴(kuò)增及序列分析。PCR擴(kuò)增簡(jiǎn)便、快捷有較強(qiáng)的實(shí)用性，甚至可從病人體液樣本中檢測(cè)活化的癌基因而不需取活組織，對(duì)癌癥的早期診斷有極重要的意義。Ras基因是1964年首次從大鼠肉瘤的急性逆轉(zhuǎn)錄病毒（Harver Murine Sarcoma and Kister Murine Sarcoma Virus）中分離出來(lái)取大鼠肉瘤（Rat Sarcoma）的字首命名。1982年首次在人膀胱細(xì)胞細(xì)胞癌中檢出有轉(zhuǎn)化能力的ras基因與Harver大鼠肉瘤病毒癌基因有同源性稱C-H-ras基因，后從肺細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)了與Kister大鼠肉瘤癌基因同源的C-K-ras基因，從神經(jīng)母細(xì)胞中又發(fā)現(xiàn)了N-ras基因。Ras基因激活的最常見(jiàn)方式是點(diǎn)突變。人類原發(fā)腫瘤時(shí)點(diǎn)突變主要發(fā)生在密碼子12、13、59、61位。激活后的ras基因不牟自行滅活，根據(jù)其點(diǎn)突變的情況可以基因診斷、療效觀察。用PCR擴(kuò)增樣本ras原癌基因，再使用雜交法、限制性內(nèi)切酶消化或產(chǎn)物測(cè)序法檢測(cè)基因的突變情況即可用診斷。P53是抑制癌基因的代表，位于17號(hào)染色體短臂上，其產(chǎn)物為53KD分子量的蛋白從此而得名，可分為突變型和野生型，前者為癌基因，后者為抗癌基因。1979年Cane發(fā)現(xiàn)了P53蛋白Eliyahu發(fā)現(xiàn)了p53基因有抑癌作用。P53突變后其產(chǎn)物突變蛋白穩(wěn)定性增加，半衰期較野生型基因產(chǎn)物長(zhǎng)，在細(xì)胞內(nèi)堆積，可以用免疫組化法測(cè)出。PCR-RELP、PCR-SSCP則因方法簡(jiǎn)單、快速、特異性高，更具有實(shí)用價(jià)值。在SSCP分析中，單鏈DNA因堿基序列的變異，導(dǎo)致構(gòu)型改變，在進(jìn)行凝膠電泳時(shí)，其泳動(dòng)速率發(fā)生改變，從布將變異的DNA與正常DNA區(qū)分開(kāi)，統(tǒng)計(jì)表明100-300bp分子大小的ssDNA突變檢出率可達(dá)97％，300-450bp標(biāo)出率可達(dá)69％，因此大于400bp的片段多態(tài)性應(yīng)采用其它方法檢測(cè)。

遺傳病是由于遺傳基礎(chǔ)異常而引起的疾病，人類遺傳病約有3000多種，患者占總?cè)丝跀?shù)的10％。遺傳病大概可分為單基因、多基因及染色體遺傳病。常用診斷方法有家系譜分析、染色體檢查（特別是顯帶法）、生物化分析等。隨分子生物學(xué)發(fā)展，基因診斷愈來(lái)愈表現(xiàn)出其優(yōu)越性，PCR技術(shù)是基因診斷的主要技術(shù)之一，為快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)人類遺傳病開(kāi)辟了一個(gè)新的途徑，預(yù)計(jì)與遺傳相關(guān)的疾病的檢測(cè)有80％將在3-5年內(nèi)被PCR法所取代。PCR在遺傳病診斷應(yīng)用中，可以利用引物直接擴(kuò)增變化的基因產(chǎn)物，也可以結(jié)合應(yīng)用限制內(nèi)切酶，分子雜交及電泳圖譜分析進(jìn)行診斷。應(yīng)用較為廣泛的有PCR法檢測(cè)中海貧血、苯丙酮尿癥、血友病、脆性X綜合癥及性別鑒定等。地中海貧血（Thalassmia）是世界上最常見(jiàn)的單基因遺傳病，不有同類型，以a地中海貧血及在中海貧血最常見(jiàn)。a珠蛋白基因位于11號(hào)染色體短臂上，a珠蛋白基因突變致血紅蛋白的全成減少或缺失，表現(xiàn)溶血性貧血，肝脾腫大，在我國(guó)發(fā)病率為0.66％，貴州、四川等地高發(fā)可達(dá)2.2％。應(yīng)用PCR技術(shù)可以直接檢測(cè)突變的基因診斷此病。苯丙酮尿癥（Phenylketouria,PKU）是一種常染色體隱性遺傳病。病人肝臟苯丙氨酸羥化酶嚴(yán)重缺乏使苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)化為酷氨酸血癥，出現(xiàn)腦組織損傷，智力障礙。此病患者出生時(shí)正常，出生后一經(jīng)確診立即停止母乳喂養(yǎng)，采用低苯丙氨酸飲食治療8-10年不致影響患者智力，但低苯丙氨酸飲食代價(jià)之昂貴是一般家庭所不能承受的，關(guān)鍵在于避免患兒出生。因此本病的早期診斷有極其重要的意義。PCR結(jié)合斑點(diǎn)雜交能有效診斷PKU。遺傳性疾病的基因變化很復(fù)雜，單基因固定位點(diǎn)變異布致病的情況很少，因此基因診斷過(guò)程中往往需要PCR技術(shù)與限制性內(nèi)切酶、斑點(diǎn)雜交、聚丙烯酰胺膠電泳圖譜分析及擴(kuò)增產(chǎn)物序列分析結(jié)合，作綜合判斷。

優(yōu)生學(xué)包括基礎(chǔ)優(yōu)生學(xué)、社會(huì)優(yōu)生學(xué)、臨床優(yōu)生學(xué)及環(huán)境優(yōu)生學(xué)。孕期檢查及產(chǎn)前診斷是臨床優(yōu)生學(xué)的最重要內(nèi)容之一。孕期檢查除一般項(xiàng)目外還能及時(shí)了解孕婦是患有某些對(duì)胎兒發(fā)育有嚴(yán)重影響的疾病如風(fēng)疹病毒感染、沙眼衣原體、解脲支原體、單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、弓體感染等，及時(shí)發(fā)現(xiàn)及時(shí)治療并采取有效措施預(yù)防發(fā)展成為宮內(nèi)感染。PCR技術(shù)對(duì)這些病原體的檢測(cè)簡(jiǎn)便而確實(shí)，另外利用PCR技術(shù)可以對(duì)地中海貧血、血友病、苯丙酮尿癥、脆性X綜合癥等遺傳性疾病進(jìn)行宮內(nèi)診斷。可見(jiàn)PCR在優(yōu)生優(yōu)育方面有很高的應(yīng)用價(jià)值。

PCR技術(shù)的出現(xiàn)對(duì)法醫(yī)學(xué)的發(fā)展也有不可低估的作用。在法醫(yī)物證如血斑、毛發(fā)、組織碎片等的確證，DAN多態(tài)性分析遠(yuǎn)比血清學(xué)或等方法確實(shí)可靠。早期DNA多態(tài)性分析主要使用Southern印跡雜交的方法。1985年Jeffreys首先采用肌紅基因第一個(gè)內(nèi)含子中的串聯(lián)重復(fù)序列作探針，從人的基因庫(kù)中篩選出小衛(wèi)量DNA，使用阿交法產(chǎn)生雜交圖譜即DNA指紋。這一技術(shù)成功地應(yīng)用于個(gè)人識(shí)別及親子鑒定。這種方法仍受到樣本量的限制，當(dāng)樣本DNA數(shù)量不足時(shí)或DAN嚴(yán)重降解則不能正常檢出。且雜交技術(shù)常使用同位素杯記探針要求較鎬的防護(hù)措施。PCR技術(shù)的出現(xiàn)，可以對(duì)極少量物證如一根毛發(fā)、一滴血液、極小精斑都可以進(jìn)行分析。在人類基因組中有許多由10-15bp核心順序構(gòu)成的串聯(lián)重復(fù)DNA序列，具有單位點(diǎn)特征的稱為VNTR結(jié)構(gòu)，多位點(diǎn)串聯(lián)成為衛(wèi)星DNA。由于VNTR在等位基因中的多態(tài)性便構(gòu)成了遺傳標(biāo)記。使用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增結(jié)合對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖譜分析即可進(jìn)行個(gè)人識(shí)別及親子鑒定。由2-6核苷組成的重復(fù)串聯(lián)序列稱為微衛(wèi)星。在人類基因組中，微衛(wèi)星更加豐富。微衛(wèi)星的重復(fù)序列比VNTR短，擴(kuò)增分型簡(jiǎn)便，易于自動(dòng)化，在VNTR或微衛(wèi)星不僅重復(fù)片段的數(shù)量不同而且重復(fù)片段的核苷酸也具有多態(tài)性。在VNTR或微衛(wèi)星多態(tài)性分析時(shí)，如再結(jié)合堿基配對(duì)分析可以藜得更大量的信息，這一種更有希望的標(biāo)志即MVR（Microsatllite Variant Repeats）。理論上其對(duì)嫌疑人的排除率為99.999％。PCR技術(shù)可以完成替代早期的Southern印跡法進(jìn)行多態(tài)性分析而且操作簡(jiǎn)便，敏感性及準(zhǔn)確性都有大幅度的提高。當(dāng)然PCR技術(shù)在法醫(yī)中的應(yīng)用仍在起步階段有許多技術(shù)問(wèn)題等待解決，如樣本中的抑制劑、檢村中DNA的損報(bào)告?zhèn)CR擴(kuò)增污染等。想念隨著PCR技術(shù)的不斷完善它將在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中有更加廣泛的應(yīng)用。

第三篇：《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)》教學(xué)大綱

《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)》教學(xué)大綱

課程號(hào)

制定單位

制定人洪秀華 審核人 胡翊群

制定時(shí)間

課程概述

臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)是國(guó)家教委規(guī)定的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)主干學(xué)科和必修課程，在 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)人才培養(yǎng)中發(fā)揮主要作用。主要講授微生物學(xué)基礎(chǔ)理論及其技術(shù)，臨床上重要的病原菌的生物學(xué)性狀、致病性和微生物學(xué)檢驗(yàn)方法。通過(guò)本課程學(xué)習(xí)，掌握各類感染性疾病的微生物特性和系統(tǒng)的檢出病原體檢驗(yàn)方法，為臨床診斷、治療、預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。課程適用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)4年制學(xué)生使用，課程總學(xué)時(shí)數(shù)為162，其中實(shí)驗(yàn)71學(xué)時(shí)。課程使用中國(guó)醫(yī)藥科技出版社出版的《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)》為教材；實(shí)驗(yàn)教材為北京人民衛(wèi)生科出版社出版的《臨床微生物學(xué)與微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》;參考教材為北京科技文獻(xiàn)出版社出版的考試輔導(dǎo)叢書(shū)《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)》。考試采用閉卷形式。

課程教學(xué)基本要求

講授內(nèi)容和時(shí)數(shù)

講授內(nèi)容

講授時(shí)數(shù)

實(shí)驗(yàn)時(shí)數(shù)

緒論 1 微生物的信息貯存與傳遞 2 細(xì)菌的生理學(xué) 5 6 細(xì)菌代謝 2 細(xì)菌遺傳變異 4 細(xì)菌感染與宿主免疫 5 細(xì)菌實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)與質(zhì)量控制 3 5 細(xì)菌耐藥性檢測(cè) 6 3 微生物的分類與命名 1 球菌 5 6 腸桿菌科 7 9 非發(fā)酵革蘭陰性菌 3 3 弧菌 3 2.5 彎曲菌、螺桿菌 3 0.5 需氧革蘭陽(yáng)性桿菌 3 3 革蘭陰性小細(xì)菌 3 2 分枝桿菌 3 2 厭氧菌 5 2 螺旋體、2.5 1 立克次體、支原體、衣原體 2.5 0.5 真菌 3 1.5 病毒的基本性狀 3 病毒感染與宿主免疫 1 病毒實(shí)驗(yàn)室診斷 2 3 病毒學(xué)各論 6 臨床標(biāo)本的微生物檢測(cè) 3 19 考試 4 2 合計(jì) 91 71

緒論

【目的要求】

掌握

微生物分類其主要特點(diǎn)和微生物學(xué)的定義。

了解

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史和臨床微生物學(xué)的任務(wù)及其在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的地位。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授1學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

微生物定義、種類、存在、和人類的關(guān)系，醫(yī)學(xué)微生物研究的內(nèi)容和郭霍原則，臨床微生物學(xué)的任務(wù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)中的地位，微生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史和臨床微生物學(xué)的發(fā)展方向。

【自學(xué)內(nèi)容】

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)發(fā)展史上的重要時(shí)期，免疫學(xué)的興起和發(fā)展、微生物對(duì)遺傳學(xué)和分子生物學(xué)發(fā)展的影響。

第二章 細(xì)菌生理學(xué)

【目的要求】

掌握 細(xì)菌大小及其測(cè)量單位、細(xì)菌的基本形態(tài)；細(xì)菌的結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和功能；細(xì)菌各種結(jié)構(gòu)的生物學(xué)意義和臨床意義及在細(xì)菌檢驗(yàn)中的作用。革蘭陽(yáng)性菌與陰性菌的結(jié)構(gòu)差異。細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖方式和生長(zhǎng)速度，細(xì)菌生長(zhǎng)曲線意義，影響細(xì)菌生長(zhǎng)的因素。

細(xì)菌的人工培養(yǎng)，培養(yǎng)基的分類及用途。細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖條件，細(xì)菌繁殖方式、速度及其生長(zhǎng)曲線；細(xì)菌的人工培養(yǎng)的培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法及生長(zhǎng)現(xiàn)象觀察。

熟悉

細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其吸收。消毒滅菌的常用術(shù)語(yǔ)、方法、機(jī)制和適用范圍。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)6學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

細(xì)菌的大小和形態(tài) 大小和形態(tài)及它們受細(xì)菌種類、菌齡和環(huán)境因素影響。鞭毛 定義、分類、作用與意義；菌毛的定義、分型、作用與意義。莢膜與糖萼 定義、分類、作用與意義

細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和功能 肽聚糖骨架及其聯(lián)結(jié)方式；革蘭陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁的特殊組成；革蘭陰性菌的外膜和周漿間隙；不同組成的細(xì)胞壁與革蘭染色性、致病性和對(duì)抗生素敏感性的關(guān)系；細(xì)胞壁缺陷細(xì)菌(原生質(zhì)體和圓球體)的臨床意義。

細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和功能 細(xì)胞膜和真核細(xì)胞膜的異同點(diǎn)；細(xì)胞膜的特殊結(jié)構(gòu)－中介體。

細(xì)胞質(zhì)的化學(xué)組成和功能 核蛋白體、異染顆粒、質(zhì)粒、芽胞。

核質(zhì)的特點(diǎn)和功能(詳見(jiàn)第四章)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn) 顯微鏡的構(gòu)造和應(yīng)用；細(xì)菌不染色標(biāo)本檢查；革蘭染液的配制；細(xì)菌涂片的制作和革蘭染色；細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)。

細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)

培養(yǎng)基制備技術(shù)；細(xì)菌培養(yǎng)方法；分離培養(yǎng)和接種技術(shù)； 傾注培養(yǎng)和活菌計(jì)數(shù)；細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：芽胞、鞭毛、莢膜、菌毛、中介體、原生質(zhì)體、圓球體、細(xì)菌L型、培養(yǎng)基、細(xì)菌生長(zhǎng)曲線、菌落、自養(yǎng)菌、異養(yǎng)菌、污染菌落。

問(wèn)答題：

1.簡(jiǎn)述革蘭陰性和革蘭陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)差異及其臨床意義。2.試述觀察細(xì)菌的大小和形態(tài)的方法及其注意點(diǎn)。3.細(xì)菌L型的檢查在臨床上有何意義? 4.簡(jiǎn)述細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的臨床意義。

5.如何觀察細(xì)菌在各種不同培養(yǎng)基生長(zhǎng)的現(xiàn)象？ 6.簡(jiǎn)述細(xì)菌生長(zhǎng)的必需條件。

第三章 細(xì)菌代謝

【目的要求】

掌握

細(xì)菌的化學(xué)組成，細(xì)菌的物理性狀。合成代謝、分解代謝、中間代謝、發(fā)酵、呼吸、有氧呼吸、厭氧呼吸概念，細(xì)菌的合成代謝產(chǎn)物（熱原質(zhì)、毒素和侵襲性酶類、色素、抗生素、細(xì)菌素、維生素）及其在醫(yī)學(xué)上的意義。

了解

細(xì)菌的化學(xué)組成、物理性狀及其臨床意義。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授2學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

細(xì)菌的物理性狀

帶電現(xiàn)象，巨大表面積，半透明和滲透壓，光學(xué)性質(zhì)。

細(xì)菌分解代謝和生化反應(yīng)

糖分解、蛋白質(zhì)分解。

細(xì)菌合成代謝產(chǎn)物

熱原質(zhì)、毒素、侵襲性酶、色素、抗生素、細(xì)菌素、維生素。

【自學(xué)內(nèi)容】

細(xì)菌攝取營(yíng)養(yǎng)的機(jī)制，細(xì)菌的生物氧化，需氧呼吸，發(fā)酵。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：IMViC、氧化酶試驗(yàn)、凝固酶、生化反應(yīng)、細(xì)菌數(shù)值分類。

問(wèn)答題：

1.簡(jiǎn)述細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的臨床意義。

2.如何觀察細(xì)菌在各種不同培養(yǎng)基生長(zhǎng)的現(xiàn)象？

3.簡(jiǎn)述不同物理性狀的培養(yǎng)基在檢驗(yàn)中的不同用途。

4.簡(jiǎn)述細(xì)菌生長(zhǎng)的必需條件。

第四章

細(xì)菌遺傳

【目的要求】

掌握

突變的類型、規(guī)律和發(fā)生機(jī)制，誘變劑的種類；基因重組的類型和機(jī)制，轉(zhuǎn)座子的分類和轉(zhuǎn)座的意義；質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)、功能和特點(diǎn)，接合發(fā)生的過(guò)程和機(jī)制，高頻率重組菌株和F’質(zhì)粒的概念；噬菌體的生物學(xué)性狀，噬菌體的生活周期及其與宿主的相互關(guān)系，轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制及意義；細(xì)菌轉(zhuǎn)化的機(jī)制和人工轉(zhuǎn)化的原理及意義。遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)；微生物變異的機(jī)制；耐藥性變異。

熟悉

細(xì)菌變異的表現(xiàn)形式和研究意義。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授4學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)

細(xì)菌染色體(結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，細(xì)菌DNA復(fù)制、表達(dá)和調(diào)節(jié))；細(xì)菌的質(zhì)粒(質(zhì)粒基本特性，質(zhì)粒的分類，F(xiàn)質(zhì)粒、R質(zhì)粒)；細(xì)菌的插入順序及轉(zhuǎn)座子，轉(zhuǎn)座噬菌體。噬菌體生物學(xué)性狀，噬菌體的增殖和宿主相互關(guān)系(溶菌和溶原)，噬菌體在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中的應(yīng)用。

變異類型

遺傳性變異和非遺傳性變異，形態(tài)與結(jié)構(gòu)的變異，培養(yǎng)特性的變異，抗原性變異，毒力變異，耐藥性變異。

微生物變異的機(jī)理

突變(概念、規(guī)律、類型、機(jī)制)，細(xì)菌基因物質(zhì)轉(zhuǎn)移和重組（轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合、溶原性轉(zhuǎn)換、原生質(zhì)體融合）。

遺傳變異的實(shí)際應(yīng)用 【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：突變、轉(zhuǎn)座子、插入順序、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合、溶原性轉(zhuǎn)換、高頻重組株、普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)、局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)、R質(zhì)粒、F質(zhì)粒、突變株、BCG、空斑形成、溫度敏感突變株(ts)，毒性噬菌體、溫和噬菌體、溶原菌、前噬菌體。

問(wèn)答題

試述細(xì)菌耐藥變異的機(jī)制。

第五章 細(xì)菌感染與宿主免疫

【目的要求】

掌握

傳染病的概念、病原菌感染類型及其傳播方式。病原菌的致病性；條件致病菌的意義、條件致病菌與內(nèi)源性感染的關(guān)系、引起內(nèi)源性感染的機(jī)制。醫(yī)院感染的類型、途徑及病原菌的特點(diǎn)。正常菌群與菌群失調(diào)的概念、人體重要的正常菌群、菌群檢測(cè)指標(biāo)

了解 人體細(xì)菌的分類及與人體的關(guān)系；機(jī)體免疫防御系統(tǒng)組成。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授5學(xué)時(shí)。

【講授內(nèi)容】

感染，致病菌，非致病菌，條件性致病菌，正常菌群概念。

宿主與菌群的相互關(guān)系（有益菌、條件致病菌、病原菌）。病原菌的致病性與宿主免疫反應(yīng)：病原菌的毒力包括侵襲力和毒素。毒素按其來(lái)源、性質(zhì)和作用，分為外毒素內(nèi)毒素兩種。病原菌與傳染病；醫(yī)院感染；外源性感染和內(nèi)源性感染。人體菌群與微生態(tài)相關(guān)疾病；常見(jiàn)微生態(tài)相關(guān)疾病微生態(tài)診斷。【自學(xué)內(nèi)容】

宿主抵抗力，機(jī)體的基本抵抗力，抗細(xì)菌免疫。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：正常菌群、菌群失調(diào)、條件性致病菌、外毒素、內(nèi)毒素、外源性感染、內(nèi)源性感染、社會(huì)感染、醫(yī)院感染、顯形感染、隱性或亞臨床感染、持續(xù)性感染、潛伏感染細(xì)菌密集度。問(wèn)答題：

1.2.3.4.5.6.7.試述人體細(xì)菌的分類及與宿主的關(guān)系并舉例說(shuō)明。試述細(xì)菌的致病物質(zhì)及與致病有關(guān)的結(jié)構(gòu)有哪些？ 簡(jiǎn)述機(jī)體非特異性免疫防御系統(tǒng)的組成。簡(jiǎn)述機(jī)體特異性免疫防御系統(tǒng)的組成。簡(jiǎn)述內(nèi)源性感染的發(fā)病機(jī)制。何謂菌群失調(diào)，并舉例說(shuō)明之。

試述微生物如何入侵機(jī)體引起機(jī)體感染？

第六章

細(xì)菌實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)與質(zhì)量控制

【目的要求】

掌握

掌握臨床常見(jiàn)標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序和方法；掌握細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的形態(tài)學(xué)檢 查方法；掌握細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù)和方法；掌握細(xì)菌代謝產(chǎn)物檢測(cè)與鑒定技術(shù)。掌握細(xì)菌檢驗(yàn)的質(zhì)量控制。

了解

幾種常用免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的原理和應(yīng)用；核酸雜交與聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)原理和應(yīng)用。細(xì)菌感染的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)、細(xì)菌感染免疫學(xué)檢測(cè)、細(xì)菌毒素的檢測(cè)、【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查

普通光學(xué)顯微鏡的原理和應(yīng)用；暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡觀察細(xì)菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)的意義。細(xì)菌染色標(biāo)本檢查：革蘭染色法原理、步驟、結(jié)果判斷；細(xì)菌不染色標(biāo)本檢查：細(xì)菌動(dòng)力觀察。

細(xì)菌的人工培養(yǎng)和生化反應(yīng)

細(xì)菌生長(zhǎng)條件、培養(yǎng)基；細(xì)菌接種方法；細(xì)菌培養(yǎng)方法；生化反應(yīng)的原理；常見(jiàn)生化反應(yīng)IMViC、蛋白分解產(chǎn)物試驗(yàn)、呼吸酶類試驗(yàn)、脂酶、凝固酶等原理和結(jié)果判斷。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

細(xì)菌鑒定技術(shù)

生物化學(xué)鑒定；數(shù)值編碼鑒定；血清鑒定。生化反應(yīng)的原理；常見(jiàn)生化反應(yīng)IMViC、蛋白分解產(chǎn)物試驗(yàn)、呼吸酶類試驗(yàn)、脂酶、凝固酶等原理和結(jié)果判斷；菌毒素檢測(cè)。【自學(xué)內(nèi)容】

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇、動(dòng)物接種法、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用。

免疫檢測(cè)技術(shù)：免疫熒光、酶免疫測(cè)定、凝集反應(yīng)、免疫印跡、氣－液相色譜技術(shù)、發(fā)光分析技術(shù)。

核酸技術(shù)：雜交技術(shù)、PCR技術(shù)。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：生化反應(yīng)、細(xì)菌數(shù)值分類、鑒別培養(yǎng)基。

問(wèn)答題：

1.臨床常見(jiàn)標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序和方法有哪些？

2.培養(yǎng)和鑒定細(xì)菌方法有哪些？各有何用途？

第七章-細(xì)菌耐藥性檢測(cè)

【目的要求】

掌握

抗菌藥物敏感試驗(yàn)體外藥敏試驗(yàn)意義、方法、原理和結(jié)果判斷；細(xì)菌的耐藥性產(chǎn)生機(jī)制和細(xì)菌的耐藥性檢查

熟悉

體外藥敏試驗(yàn)的步驟；厭氧菌、真菌及分支桿菌體外藥敏試驗(yàn)。

了解

臨床常用抗菌藥物作用機(jī)制。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授6學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

體外藥敏試驗(yàn)

K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法、稀釋法、E試驗(yàn)、最低抑菌濃度測(cè)定和體外聯(lián)合藥敏試驗(yàn)原理、方法、結(jié)果判斷及質(zhì)量控制。

細(xì)菌耐藥性檢測(cè)

特殊耐藥菌檢測(cè)：耐甲氧西林葡萄球菌檢測(cè)、耐青霉素肺炎鏈球菌檢測(cè)、耐萬(wàn)古霉素腸球菌檢測(cè)、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的腸桿菌科細(xì)菌檢測(cè)。

結(jié)核分枝桿菌及酵母樣真菌體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)

稀釋法原理及結(jié)果判斷解釋。

【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

抗生素敏感試驗(yàn)

紙片擴(kuò)散法、稀釋法、E試驗(yàn)。特殊耐藥菌檢測(cè)。【自學(xué)內(nèi)容】

體內(nèi)抗菌藥物的活性和濃度的測(cè)定：微生物測(cè)定法和非微生物法。

【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：?-內(nèi)酰胺酶、E試驗(yàn)。

問(wèn)答題：

1.試述抗菌藥物敏感性檢測(cè)方法的原理和質(zhì)量檢測(cè)。

2.試述檢測(cè)細(xì)菌耐藥性的幾種方法。

第八章 微生物的分類與命名

【目的要求】

掌握

微生物在生物分類學(xué)中的地位；細(xì)菌的分類單位和命名。

熟悉

細(xì)菌的分類系統(tǒng)；細(xì)菌的分類方法。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授1學(xué)時(shí)。【自學(xué)內(nèi)容】

微生物在生物分類學(xué)中的地位

細(xì)菌和原核生物界；真菌和真菌界；病毒和病毒界。

細(xì)菌的分類單位、系統(tǒng)和命名

細(xì)菌分類單位—種、屬、科；細(xì)菌的株和型；細(xì)菌的雙命名法；細(xì)菌的伯杰分類系統(tǒng)和CDC分類系統(tǒng)。

細(xì)菌的分類方法

生理學(xué)與生物學(xué)分類法(傳統(tǒng)分類法和數(shù)值分類法)；遺傳學(xué)分類法(DNA G+C mol%、核酸同源值測(cè)定、核蛋白體RNA鹼基序列測(cè)定)。

病毒的分類方法

ICTV分類；習(xí)慣分類法。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：株、標(biāo)準(zhǔn)株、型、種、屬、科。

問(wèn)答題：

試述細(xì)菌的雙命名法和它們的分類系統(tǒng)。

第九章 球菌

【目的要求】

掌握 常見(jiàn)化膿性球菌的種類。葡萄球菌的分類方法、微生物特性、微生物學(xué)檢 驗(yàn)，鏈球菌的分類方法、微生物特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)，鑒別甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌的主要試驗(yàn)。腸球菌的分類、微生物特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)，奈瑟菌屬的分類方法、微生物特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)

熟悉

葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、奈瑟菌屬細(xì)菌其致病因素及所致主要疾病。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)6學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

葡萄球菌屬

分類

與鏈球菌屬的鑒定要點(diǎn)；凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌。

生物學(xué)性狀

形態(tài)與染色(革蘭陽(yáng)性球菌、葡萄狀)，培養(yǎng)特點(diǎn)(耐鹽)，生化反應(yīng)，抗原結(jié)構(gòu)，抵抗力。

臨床意義

致病物質(zhì)(毒素、殺白細(xì)胞素、血漿凝固酶、腸毒素、皮膚壞死毒素)；致病特點(diǎn)(化膿性感染、食物中毒)；耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和凝固酶陰性葡萄球菌(MRSCN)。

微生物學(xué)檢查

檢驗(yàn)程序，檢驗(yàn)方法(直接涂片、分離培養(yǎng)及鑒定)，結(jié)果的評(píng)價(jià)和報(bào)告。

.鏈球菌屬

鏈球菌

分類

按溶血性分為甲、乙、丙三大類；按Lancefied分類。

生物學(xué)性狀

形態(tài)與染色(革蘭陽(yáng)性球菌、鏈狀)，培養(yǎng)特性(營(yíng)養(yǎng)要求高)，生化反應(yīng)，抗原結(jié)構(gòu)(群和型特異性抗原)。

臨床意義

致病物質(zhì)(毒素－溶血素O及S，酶－透明質(zhì)酸酶、鏈激酶、鏈道酶、蛋白酶、核糖核酸酶)；所致疾病(化膿性感染,中毒性感染－猩紅熱,變態(tài)反應(yīng)性疾病－風(fēng)濕熱、腎小球腎炎)。

微生物學(xué)檢查

標(biāo)本(咽拭、血液、膿液、血清)；分離培養(yǎng)及鑒定；鏈球菌分群試驗(yàn)；血清學(xué)反應(yīng)(抗鏈球菌溶血素“O”)。

肺炎鏈球菌

生物學(xué)性狀

形態(tài)與染色(革蘭陽(yáng)性雙球菌、矛頭狀有莢膜，與甲型溶血性鏈球菌鑒別)，生化反應(yīng)(膽汁溶菌等)，抗原結(jié)構(gòu)。耐青霉素的肺炎鏈球菌(penicillinresistant streptococous pneomonia，PRSP)

腸球菌屬

生物學(xué)性狀

形態(tài)與染色，培養(yǎng)特性，分類。

臨床意義

醫(yī)院感染，耐藥菌株，耐萬(wàn)古霉素腸球菌(VRE)。

微生物學(xué)檢查

檢驗(yàn)程序，檢驗(yàn)方法(直接涂片、分離培養(yǎng)和鑒定、種間鑒定)，耐萬(wàn)古腸球菌。腦膜炎奈瑟菌

生物學(xué)特性

形態(tài)(腎形雙球菌，細(xì)胞內(nèi))與染色，培養(yǎng)特性(營(yíng)養(yǎng)要求高)，抵抗力(抵抗力極低易自溶)，抗原結(jié)構(gòu)與分型，流行菌群。

臨床意義

傳染源，傳播途徑，鼻咽炎，菌血癥，腦膜炎，帶菌者。

微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集(按不同病期采取不同標(biāo)本)，送檢(保溫)，檢驗(yàn)程序，檢查方法(涂片、分離培養(yǎng)、血清學(xué)分群)。淋病奈瑟菌

生物學(xué)性狀

形態(tài)與染色，培養(yǎng)特性，生化反應(yīng)。

臨床意義

致病性(性病、新生兒眼結(jié)膜炎)，耐藥性。

微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集和運(yùn)送；分泌物涂片、分離培養(yǎng)、鑒定。

.布蘭漢菌

形態(tài)與染色，培養(yǎng)特性，生化反應(yīng)，所致疾病。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌形態(tài)染色、菌落特性、血漿凝固酶試驗(yàn)；鏈球菌(甲、乙、丙三型)、肺炎鏈球菌、糞腸球菌形態(tài)染色，菌落觀察，生化反應(yīng)；鏈球菌溶血素O試驗(yàn)；淋病奈瑟菌陰道涂片染色，菌落觀察生化反應(yīng)。【自學(xué)內(nèi)容】

了解葡萄球菌生化反應(yīng)鑒定程序；微球菌屬的生物學(xué)特性及細(xì)菌學(xué)檢查；其他奈瑟菌屬。

【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：血漿凝固酶、MRSA、MRSCN、VRE、PRSP。

問(wèn)答題：

1.金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌在形態(tài)、培養(yǎng)、對(duì)抗菌藥物的抵抗力及產(chǎn)生毒性物質(zhì)方面有何不同？

2.鑒定鏈球菌有哪些試驗(yàn) ？

3.肺炎鏈球菌形態(tài)結(jié)構(gòu)有何特點(diǎn)？它與甲型鏈球菌如何鑒別？

4.淋病奈瑟菌是怎樣傳播的？在其微生物學(xué)檢查中應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？

第十章 腸桿菌科

【目的要求】

掌握

腸桿菌科的命名與分類；腸桿菌科細(xì)菌的共同特性、臨床意義和微生物學(xué)檢驗(yàn)；大腸埃希菌、沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、與臨床醫(yī)學(xué)密切相關(guān)的腸桿菌科（變形桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬）的生物學(xué)特性、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

熟悉

耶爾森菌屬生物學(xué)特性、臨床意義。

了解

沙雷菌屬、哈夫尼菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬生物學(xué)特性、臨床意義和微生物學(xué)檢查。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授7學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)9學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

.概述

腸桿菌科定義、命名與分類(伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè))、共同特性(染色特性、培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)及抗原結(jié)構(gòu))；臨床意義和微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集運(yùn)送、分離培養(yǎng)、鑒定和血清學(xué)檢測(cè))。.埃希菌屬

生物學(xué)性狀

形態(tài)染色、培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、抗原結(jié)構(gòu)。

臨床意義

致病因素(侵襲力、內(nèi)毒素和腸毒素)；所致疾病(腸道外感染，腸道感染－產(chǎn)毒素性大腸埃希菌、腸致病性大腸埃希菌、腸侵襲性大腸埃希菌、腸出血性大腸埃希菌、腸凝聚型大腸埃希菌)。

微生物學(xué)檢查

檢驗(yàn)程序、分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定及毒素(LT、ST)檢測(cè)。

沙門(mén)菌屬

血清學(xué)分類

生物學(xué)性狀

形態(tài)染色，常用培養(yǎng)基及特性，生化反應(yīng)，抗原構(gòu)造，變異性。

臨床意義

傳染源，傳播途徑，致病因素及所致疾病(傷寒、副傷寒、胃腸炎、菌血癥和敗血癥)。

微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集、分離培養(yǎng)和鑒定(初步鑒定—氧化酶、KIA、MIU，最后鑒定—腸桿菌科試劑盒、沙門(mén)因子血清凝集試驗(yàn))；Vi噬菌體分型、肥達(dá)反應(yīng)。.志賀菌屬

生物學(xué)性狀

形態(tài)染色、培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、抗原構(gòu)造(分類與分型)、變異性。

臨床意義

傳染源、傳播方式。

變形桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬 生物學(xué)特性、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

耶爾森菌屬

生物學(xué)性狀

形態(tài)染色、培養(yǎng)特點(diǎn)、生化反應(yīng)、抗原構(gòu)造。

臨床意義

致病因素(內(nèi)毒素、外毒素)；所致疾病臨床類型(鼠疫耶爾森菌引起鼠疫，小腸結(jié)腸耶爾森菌引起小腸結(jié)腸炎)。

微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集、檢驗(yàn)程序、分離培養(yǎng)和鑒定。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

.大腸埃希菌、沙門(mén)菌屬、志賀菌屬細(xì)菌形態(tài)染色，菌落觀察，生化反應(yīng)，血清學(xué)試驗(yàn)；肥達(dá)試驗(yàn)；小腸結(jié)腸耶爾森菌、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、沙雷菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌形態(tài)染色，菌落觀察，生化反應(yīng)。【自學(xué)內(nèi)容】

蜂房哈夫尼菌、多源菌屬、普羅威登菌屬及摩根菌屬。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：SS瓊脂、KIA、MIU。

問(wèn)答題：

1.腸桿菌科根據(jù)伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)共分幾屬？各寫(xiě)出一個(gè)代表菌種。

2.大腸埃希菌在臨床上主要引起哪些疾病？引起腸道感染的該菌可分幾組？(用 中、英文寫(xiě)出)。

3.傷寒患者的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，根椐病程有何特殊的采樣要求。

4.列出志賀菌屬及傷寒沙門(mén)菌在KIA和MIU的基本生化反應(yīng)。

肺炎克雷伯菌處初次分離時(shí)菌落有何特點(diǎn)？ 6．何謂產(chǎn)ESBL株，其臨床意義是什么？

第十一章 非發(fā)酵革蘭陰性菌

【目的要求】

掌握

非發(fā)酵革蘭陰性菌的概念、種類和初步鑒定特征。假單胞菌屬的分類、臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查和耐藥性。銅綠假單胞菌的臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查和耐藥性。熒光假單胞菌、不動(dòng)桿菌屬、寡養(yǎng)單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬和軍團(tuán)菌的臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查和耐藥性。

了解

惡臭假單胞菌、斯氏假單胞菌的臨床意義、細(xì)菌特性和實(shí)驗(yàn)室檢查。黃桿菌屬和莫拉菌屬的細(xì)菌特性和實(shí)驗(yàn)室檢查。莫拉菌屬、軍團(tuán)菌屬生物學(xué)性狀，臨床意義和微生物學(xué)檢查。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

概述

非發(fā)酵菌定義、主要菌屬、假單胞菌分類。銅綠假單胞菌生物學(xué)性狀(單端鞭毛、生長(zhǎng)溫度范圍25~42℃、綠膿素)；臨床意義(條件性致病菌)；微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集、檢驗(yàn)程序、分離培養(yǎng)和鑒定)。熒光假單胞菌生物學(xué)形狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

嗜麥芽黃 寡養(yǎng)單胞菌細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查和耐藥性；

不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬和軍團(tuán)菌黃桿菌屬的主要菌種、臨床意義，生物學(xué)性狀及其臨床意義(條件性致病菌)。

軍團(tuán)菌屬

分類命名、生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

假單胞菌屬和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌形態(tài)染色、菌落觀察、生化反應(yīng)；不動(dòng)桿菌屬和產(chǎn)堿桿菌屬形態(tài)染色、菌落觀察和生化反應(yīng)。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：非發(fā)酵菌、O-F培養(yǎng)基、氧化酶試驗(yàn)。

問(wèn)答題：

1.非發(fā)酵菌為條件性致病菌，常引起人類哪些疾病？如何鑒定之？

2.臨床上引起感染的非發(fā)酵菌主要有哪些？

第十二章 弧菌屬、氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬

【目的要求】

掌握

霍亂弧菌、副溶血弧菌的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

熟悉

非O1群霍亂弧菌、O139、氣單胞菌屬的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。氣單胞菌和 鄰單胞菌屬生物學(xué)性狀、臨床意義、微生物學(xué)檢查。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)2.5學(xué)時(shí) 【講授內(nèi)容】

弧菌屬

霍亂弧菌

生物學(xué)性狀(形態(tài)染色、活潑動(dòng)力)，培養(yǎng)特性(嗜堿、需氧)，選擇鑒別培養(yǎng)基，生化反應(yīng)(發(fā)酵蔗糖)，抗原結(jié)構(gòu)，變異性，抵抗力；臨床意義(致病因素、所致疾病)；微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集、檢驗(yàn)程序、檢驗(yàn)方法)。

非O1群霍亂弧菌

血清學(xué)分型。

O139血清學(xué)分型

血清學(xué)分型。

副溶血弧菌

生物學(xué)性狀(形態(tài)染色、活潑動(dòng)力)，培養(yǎng)特性(嗜鹽性、耐堿性)，選擇鑒別培養(yǎng)基，生化反應(yīng)，神奈川現(xiàn)象，抗原結(jié)構(gòu)，抵抗力；臨床意義(耐熱溶血毒素和類似毒素，所致疾病)；微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集、檢驗(yàn)程序與方法)。

.氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬

分類，氣單胞菌屬生物學(xué)性狀，臨床意義和微生物學(xué)檢查。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

霍亂弧菌和副溶血弧菌形態(tài)觀察、菌落觀察、生化反應(yīng)；霍亂弧菌分型試驗(yàn)、副溶血弧菌鑒定試驗(yàn)。氣單胞菌和鄰單胞菌生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：TCBS培養(yǎng)基、神奈川現(xiàn)象。

問(wèn)答題：

1.如何進(jìn)行霍亂弧菌和副溶血弧菌的培養(yǎng)、分離和鑒定？

2.霍亂弧菌及副溶血弧菌主要的致病因素和致病機(jī)制。

第十三章

彎曲菌屬和螺桿菌屬

【目的要求】

掌握

螺桿菌屬的主要特性、分類；幽門(mén)螺桿菌的臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查。

熟悉

彎曲菌屬的主要特性、分類；幽門(mén)螺桿菌的臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)0.5學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】 彎曲菌屬

彎曲菌的主要特性、分類；空?qǐng)鰪澢⒋竽c彎曲菌、胎兒彎曲菌的鑒別、致病。彎曲菌的微生物學(xué)檢查。

螺桿菌屬

幽門(mén)螺桿菌生物學(xué)性狀(形態(tài)染色、培養(yǎng)所需氣體條件)、選擇培養(yǎng)基；與慢性胃炎關(guān)系；微生物學(xué)檢查(快速脲酶試驗(yàn)、碳標(biāo)記呼吸試驗(yàn)、PCR檢測(cè)HP、分離培養(yǎng)和鑒定)。幽門(mén)螺桿菌的臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

幽門(mén)螺桿菌形態(tài)染色和培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)(氧化酶、脲酶和快速脲酶試驗(yàn))。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：快速脲酶試驗(yàn)。問(wèn)答題：

1．螺桿菌的致病機(jī)制及主要細(xì)菌特性。

2．如何培養(yǎng)鑒定胃炎活體組織標(biāo)本中的幽門(mén)螺桿菌。

第十四章苛養(yǎng)菌與人獸共患病原菌

【目的要求】

掌握

苛養(yǎng)菌概念;嗜血桿菌屬主要細(xì)菌的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

熟悉

鮑特菌屬的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。了解

人獸共患病原菌的概念，常見(jiàn)細(xì)菌。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)2學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】 苛養(yǎng)菌概念

嗜血桿菌屬

主要菌種、形態(tài)染色、培養(yǎng)(X、V因子)、衛(wèi)星現(xiàn)象、生化反應(yīng)；臨床意義；主要菌種、形態(tài)染色、培養(yǎng)(標(biāo)本采集、檢驗(yàn)程序和檢查方法)。

鮑特菌屬

主要菌種、形態(tài)染色、培養(yǎng)特性，主要菌種、形態(tài)染色；微生物學(xué)檢查。

人獸共患病原菌

布魯菌屬、巴斯德菌屬、弗朗西斯菌屬主要細(xì)菌的微生物學(xué)特性及其臨床意義。

【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】 【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：流感嗜血桿菌

形態(tài)染色、菌落觀察、衛(wèi)星現(xiàn)象、X＋V因子試驗(yàn)。

第十五章 革蘭陽(yáng)性需氧桿菌

【目的要求】

掌握

白喉棒狀桿菌生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查；炭疽芽胞桿菌和蠟 樣芽胞桿菌生物學(xué)形狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查；產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌生物學(xué)形狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

講授3，實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

炭疽芽胞桿菌

生物學(xué)性狀(形態(tài)染色芽胞、抗原結(jié)構(gòu))；臨床意義(炭疽毒素、所致疾病)；微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集處理、檢驗(yàn)程序和方法、鑒定試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn))。【自學(xué)內(nèi)容】

蠟樣芽胞桿菌

生物學(xué)性狀(形態(tài)染色芽胞、卵磷脂酶試驗(yàn))；臨床意義和微生物學(xué)檢查。

產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌

生物學(xué)性狀；臨床意義；微生物學(xué)檢查。白喉棒狀桿菌

生物學(xué)形狀(形態(tài)、染色、異染顆粒、培養(yǎng)特性、亞碲酸鉀培養(yǎng)基、生化反應(yīng)、抗原構(gòu)造)；臨床意義(白喉外毒素的特性、致病機(jī)制、預(yù)防接種、錫克試驗(yàn))；微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集、檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法)。

其他棒狀桿菌

常見(jiàn)的菌種及所致疾病；與白喉棒狀桿菌的鑒別 【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

蠟樣芽胞桿菌形態(tài)及菌落觀察、生化反應(yīng)和活菌計(jì)數(shù)；

炭疽芽胞桿菌形態(tài)及菌落觀察、生化反應(yīng)；產(chǎn)單李斯特菌形態(tài)及菌落觀察、生化反應(yīng)。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：Elek平板毒力試驗(yàn)、異染顆粒、呂氏血清斜面。

問(wèn)答題；

1.白喉棒狀桿菌和類白喉棒狀桿菌的區(qū)別。

2.炭疽芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌的鑒別。

3.產(chǎn)單李斯特菌的主要生物學(xué)形狀。

第十六章分枝桿菌屬

【目的要求】

掌握

分枝桿菌屬主要種別；結(jié)核分枝桿菌的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

熟悉

麻風(fēng)分枝桿菌生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)2學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

分枝桿菌屬

共同生物學(xué)性狀；主要種別；國(guó)際上應(yīng)用的分類。

結(jié)核分枝桿菌

形態(tài)染色(抗酸陽(yáng)性、分枝生長(zhǎng)、Much顆粒)；專性需氧培養(yǎng)、菌落特征；生化反應(yīng)；菌體成分和抗原；變異及抵抗力；臨床意義、Koch現(xiàn)象、結(jié)核菌素試驗(yàn)；微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集、涂片檢查、分離培養(yǎng)、核酸檢測(cè))。

非典型分枝桿菌

分類、與結(jié)核分枝桿菌的鑒別。

麻風(fēng)分枝桿菌

生物學(xué)形狀、臨床意義、微生物學(xué)檢查。

【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

結(jié)核分枝桿菌

涂片法檢查、抗酸染色、金胺“O”熒光染色，菌落觀察、培養(yǎng)。

麻風(fēng)分枝桿菌

病理組織切片涂片染色檢查。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：抗酸染色、魯琴培養(yǎng)基、結(jié)核菌素試驗(yàn)。

問(wèn)答題：

1.試述結(jié)核分枝桿菌感染和免疫的關(guān)系。

2.結(jié)核分枝桿菌的主要致病因素是什么？

第十七章 厭氧菌

【目的要求】

掌握 厭氧菌的概念、種類及其在人體中的分布特點(diǎn)。厭氧菌感染的特點(diǎn)，厭氧菌感染的臨床及細(xì)菌學(xué)指征。厭氧菌標(biāo)本采集與送檢的要求及方法，厭氧菌的檢驗(yàn)程序，厭氧培養(yǎng)方法。無(wú)芽胞厭氧菌在臨床厭氧菌感染中的意義、常見(jiàn)種類、細(xì)菌學(xué)特性與細(xì)菌檢驗(yàn)方法。厭氧性細(xì)菌的概念、分布及其在臨床各科中感染的普遍性；厭氧菌的分類；厭氧菌標(biāo)本的采集和送檢；厭氧菌分離與鑒定。

熟悉

梭狀芽胞桿菌屬細(xì)菌的生物學(xué)性狀；臨床意義和微生物學(xué)檢查；無(wú)芽胞厭氧菌的常見(jiàn)種類及其它們的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)2學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

概述

分布特性、種類；厭氧菌感染因素；感染的臨床及細(xì)菌學(xué)特征。

厭氧菌的分離培養(yǎng)和鑒定

標(biāo)本的采集方法；標(biāo)本的運(yùn)送－無(wú)氧小瓶運(yùn)送法、針筒運(yùn)送法、厭氧袋運(yùn)送法、大量液體標(biāo)本運(yùn)送法；培養(yǎng)基的種類和選擇；厭氧培養(yǎng)法－厭氧罐培養(yǎng)法、抽氣換氣法、氣袋法、厭氧手套箱法；鑒定試驗(yàn)－形態(tài)染色、菌落性狀、抗生素敏感性鑒定試驗(yàn)、生化特性、氣液相色譜分析。

梭狀芽胞桿菌屬

破傷風(fēng)梭菌、氣性壞疽病原梭菌、肉毒梭菌和艱難梭菌的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。

類桿菌屬

脆弱類桿菌群、產(chǎn)黑色素類桿菌群和厭氧性球菌的生物學(xué)性狀、臨床意義和微生物學(xué)檢查。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌形態(tài)染色、菌落觀察、芽胞染色；庖肉基生長(zhǎng)現(xiàn)象、卵磷脂酶試驗(yàn)、洶涌發(fā)酵、動(dòng)物試驗(yàn)(毒素被抗毒素中和)。

脆弱類桿菌和產(chǎn)黑色素類桿菌形態(tài)染色、厭氧培養(yǎng)、生化反應(yīng)、胞外酶快速試驗(yàn)。【自學(xué)內(nèi)容】

無(wú)芽胞厭氧菌—梭桿菌屬、雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬 【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：庖肉培養(yǎng)基、洶涌發(fā)酵現(xiàn)象、聶格爾試驗(yàn)。

問(wèn)答題：

1．試述厭氧培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。

2．試述厭氧菌微生物學(xué)檢查的程序和方法。

第十八章 螺旋體

【目的要求】

掌握

螺旋體的生物學(xué)性狀，臨床意義和微生物學(xué)檢查，相互之間的生物學(xué)性狀的比較。

熟悉

螺旋體生物學(xué)性狀，臨床意義及微生物學(xué)檢查。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授2.5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)。

【講授內(nèi)容】

螺旋體

概述

生物學(xué)性狀

形態(tài)結(jié)構(gòu)(細(xì)胞壁、細(xì)胞質(zhì)組成的原生質(zhì)圓柱體、軸絲、周漿鞭毛)，染色性，活潑螺旋式運(yùn)動(dòng)；培養(yǎng)特性(需氧生長(zhǎng)、柯氏培養(yǎng)基、密螺旋體的組織培養(yǎng))；抗原結(jié)構(gòu)(特異性抗原、類屬抗原)；抵抗力。

臨床意義

性傳播性疾病，自然疫源性疾病(鉤端螺旋體病，萊姆病，回歸熱)

微生物學(xué)檢查梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：RPR

問(wèn)答題：

1.試述螺旋體的生物學(xué)性狀。

2.螺旋體微生物學(xué)檢查原則。

第十九章 立克次體、支原體、衣原體

【目的要求】

掌握

支原體、立克次體和衣原體的生物學(xué)性狀，臨床意義和微生物學(xué)檢查，相互之間的生物學(xué)性狀的比較。

熟悉

支原體、立克次體、衣原體和人類感染密切的菌種生物學(xué)性狀，臨床意義及微生物學(xué)檢查。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授2.5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)0.5學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】 支原體

概述

生物學(xué)性狀

形態(tài)結(jié)構(gòu)(無(wú)細(xì)胞壁、多形性、革蘭染色陰性)；培養(yǎng)特性(pH、馬或小牛血清、微氧環(huán)境、油煎蛋樣菌落)；生化反應(yīng)(葡萄糖、精氨酸、尿素、CCU)；抗原結(jié)構(gòu)(GIT及MIT)；抵抗力。

臨床意義泌尿生殖道感染的常見(jiàn)支原體的致病性。

微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集，分離鑒定。

立克次體

概述

生物學(xué)性狀

形態(tài)結(jié)構(gòu)、繁殖代謝、抗原成分、變異性、抵抗力。

臨床意義

立克次體病、衣原體

概述

生物學(xué)性狀

獨(dú)特生活周期，抗原成分LPS和外膜蛋白，抵抗力。

臨床意義

沙眼衣原體感染，肺炎衣原體感染。

微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集與處理，直接鏡檢，分離與鑒定。

【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】 支原體鑒定板條 【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：始體、原體、CCU。問(wèn)答題：

1.支原體、衣原體、立克次體微生物學(xué)檢查原則。

2.支原體、衣原體、立克次體的生物學(xué)性狀及他們和細(xì)菌、病毒的相互比較。

第二十章 真菌學(xué)檢驗(yàn)

【目的要求】

掌握

真菌的基本特征、分類、致病性、微生物學(xué)檢查；醫(yī)學(xué)上重要的真菌臨床意義及微生物學(xué)檢查。

了解

醫(yī)學(xué)上有關(guān)的真菌性疾病與病原性真菌。

【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)1.5學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

概述

生物學(xué)性狀(營(yíng)養(yǎng)體、繁殖體、孢子)，分類與致病，致病特點(diǎn)，微生物學(xué)檢查(標(biāo)本采集、非培養(yǎng)法、培養(yǎng)法)。

醫(yī)學(xué)上重要酵母菌

念珠菌

臨床意義，真菌檢驗(yàn)和血清學(xué)診斷。

隱球菌

臨床意義，真菌檢驗(yàn)。

二相性真菌

特征，真菌檢驗(yàn)，血清免疫學(xué)試驗(yàn)。

曲霉菌

特征，分離鑒定，血清免疫學(xué)診斷。

毛霉菌

特征，分離鑒定，血清免疫學(xué)診斷。

皮膚真菌 臨床意義，真菌檢驗(yàn)(標(biāo)本采集、直接鏡檢、分離鑒定)。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

淺部真菌（石膏樣小孢子、石膏樣毛霉菌、絮狀表皮蘚菌）的菌落觀察；芽管形成試驗(yàn)；菌絲、孢子鏡下觀察；白假絲酵母菌菌落觀察、鏡下形態(tài)；科瑪嘉真菌顯色平板。

【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：菌絲、孢子、二相型真菌、沙氏培養(yǎng)基。

問(wèn)答題：

1.試述真菌的結(jié)構(gòu)特征及其在真菌檢驗(yàn)中的重要意義。

2.深部真菌感染有何臨床意義？

第二十一章病毒基本性狀

【目的要求】

掌握

病毒體大小、測(cè)量單位、基本形態(tài)；病毒的基本特性、結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成及功能；病毒的復(fù)制周期及增殖過(guò)程中的異常現(xiàn)象；噬菌體生物學(xué)特性及其應(yīng)用。

了解

理化因素對(duì)病毒的影響。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

病毒體的形態(tài)結(jié)構(gòu)

病毒大小與形態(tài)；病毒結(jié)構(gòu)：核心、衣殼、包膜、輔助結(jié)構(gòu)；核衣殼對(duì)稱型。

病毒的復(fù)制周期

吸附、穿入、脫殼、生物合成、組裝與成熟、釋放。

異常病毒復(fù)制

頓挫感染與缺損病毒。

干擾現(xiàn)象

干擾類型、干擾機(jī)制、干擾現(xiàn)象意義。

亞病毒

類病毒、衛(wèi)星RNA、朊病毒。

理化因素對(duì)病毒的影響

溫度、pH、射線、脂溶劑。【自學(xué)內(nèi)容】

兩種病毒感染同一宿主細(xì)胞時(shí)的增殖。【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：病毒體、衣殼、核衣殼、核衣殼對(duì)稱型、包膜、病毒的滅活、病毒復(fù)制周期、頓挫感染、缺損病毒、問(wèn)答題： 敘述病毒的基本特性。在形態(tài)大小、結(jié)構(gòu)、生長(zhǎng)繁殖、培養(yǎng)方法和細(xì)菌相比較有何區(qū)別?

第二十二章 病毒感染與宿主免疫 第二十三章 病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷

【目的要求】

掌握

病毒的感染類型；病毒的致病機(jī)制；病毒學(xué)分離培養(yǎng)鑒定的方法及病毒增殖的指標(biāo)；病毒血清學(xué)診斷方法及原理；病毒感染的早期診斷的原則。了解

病毒的感染方式與途徑；宿主的抗病毒免疫。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

病毒感染的方式與途徑

水平傳播、垂直傳播。

病毒的感染類型

隱性感染、顯性感染。

病毒的致病機(jī)制

病毒對(duì)宿主細(xì)胞的直接作用：殺細(xì)胞效應(yīng)、穩(wěn)定狀態(tài)感染、細(xì)胞凋亡包涵體的形成、細(xì)胞轉(zhuǎn)化增生與整合感染；免疫病理?yè)p傷及對(duì)免疫系統(tǒng)的影響。宿主的抗病毒免疫

非特異性抗病毒免疫；特異性抗病毒免疫。

病毒學(xué)檢驗(yàn)原則

直接檢查病毒體、病毒核酸和病毒抗原；分離培養(yǎng)鑒定病毒體、病毒學(xué)清學(xué)診斷患者血清中特異抗體。

病毒分離培養(yǎng)與鑒定

標(biāo)本采集時(shí)間、部位，標(biāo)本的運(yùn)送和保存，標(biāo)本的處理；分離培養(yǎng)方法(組織培養(yǎng)、動(dòng)物接種、雞胚接種)；病毒的鑒定(初步鑒定、最后鑒定)；病毒培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告。

病毒血清學(xué)診斷

原理、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、TCID50、血凝抑制試驗(yàn)、間接免疫熒光檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定。

病毒感染早期診斷

病毒胞內(nèi)抗原檢出，病毒胞外抗原檢出；光學(xué)顯微鏡檢查病毒包涵體；電鏡及免疫電鏡檢查病毒體。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

病毒雞胚接種技術(shù)、流感病毒血凝試驗(yàn)、正常細(xì)胞與病毒感染細(xì)胞CPE效應(yīng)的觀察，酶免法測(cè)EB病毒。

【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：潛伏感染、隱性感染、TCID50、包涵體、血凝現(xiàn)象。

問(wèn)答題：

1.試述細(xì)胞水平的病毒感染。

2.試述病毒分離檢驗(yàn)的基本原則、方法和步驟。

3.解釋各種病毒增殖指標(biāo)的含義和原理。

4.概括引起常見(jiàn)的感染性疾病病毒的生物學(xué)性狀、臨床意義和檢測(cè)特點(diǎn)

第24章肝炎病毒 第25章皰疹病毒 第26章呼吸道病毒

第29章人類免疫缺陷病毒 【目的要求】

掌握 甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、單純皰疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、流感病毒、SARS-CoV、人類免疫缺陷病毒的臨床意義、微生物特性、微生物檢驗(yàn)

熟悉 腸道病毒的生物學(xué)性狀，臨床意義和微生物學(xué)檢查。了解

狂犬病毒、人乳頭瘤病毒的臨床意義和微生物學(xué)檢查。【教學(xué)時(shí)數(shù)】。

講授6學(xué)時(shí) 【講授內(nèi)容】

甲型肝炎病毒 丙型肝炎病毒丁型肝炎病毒戊型肝炎病毒分類、臨床意義、微生物特性、微生物檢驗(yàn)

皰疹病毒的種類和共同特點(diǎn)單純皰疹病毒的水痘-帶狀皰疹病毒巨細(xì)胞病毒EB病毒致病性和檢測(cè)方法。

呼吸道病毒的種類。掌握流感病毒、SARS-CoV的分類方法、生物學(xué)性狀、微生物學(xué)檢驗(yàn)方法，熟悉所致主要疾病及發(fā)病機(jī)理。

人類免疫缺陷病毒的概念、形態(tài)結(jié)構(gòu)、傳播途徑、致病機(jī)制、培養(yǎng)特性及其常用實(shí)驗(yàn)室檢查法的原理。【復(fù)習(xí)思考題】

問(wèn)答題：試述上述病毒分離檢驗(yàn)的基本原則、方法和步驟。

各種臨床標(biāo)本的微生物學(xué)檢查

【目的要求】

掌握

血液、腦脊液、糞便、生殖道分泌物、尿液、膿汁及痰液標(biāo)本的常見(jiàn)病原微生物檢測(cè)的程序和結(jié)果報(bào)告；各種臨床標(biāo)本微生物學(xué)檢測(cè)的基本技能。【教學(xué)時(shí)數(shù)】

講授3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)19學(xué)時(shí)。【講授內(nèi)容】

各種臨床標(biāo)本

采集和運(yùn)送；常見(jiàn)致病菌的檢驗(yàn)方法和鑒定要求；檢測(cè)報(bào)告的發(fā)出方式。

【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

血液標(biāo)本

標(biāo)本采集和接種；A群鏈球菌、枯草芽孢桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、沙門(mén)菌屬和葡萄球菌鑒定。

糞便標(biāo)本

標(biāo)本采集；一般性狀檢查(量、外觀、氣味、酸堿反應(yīng)、寄生蟲(chóng)和結(jié)石)；化學(xué)檢查(隱血試驗(yàn)、糞膽色素檢查)；顯微鏡檢查(細(xì)胞、食物殘?jiān)⒔Y(jié)晶)；細(xì)菌學(xué)檢查(SS瓊脂平板接種、志賀氏菌屬的鑒定)。

尿液標(biāo)本

標(biāo)本和采集；尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序；尿液標(biāo)本細(xì)菌計(jì)數(shù)法；腸球菌、大腸埃希菌和變形桿菌的鑒定。

泌尿生殖道標(biāo)本

標(biāo)本采集；外觀及清潔度檢查；細(xì)菌學(xué)檢查(淋病奈瑟菌、支原 體和衣原體鑒定)。

痰液標(biāo)本

標(biāo)本采集；細(xì)菌檢測(cè)程序；細(xì)菌鑒定(結(jié)核分枝桿菌、肺炎鏈球菌和甲型溶血性鏈球菌)。

膿汁分泌物標(biāo)本

標(biāo)本采集；檢測(cè)程序；細(xì)菌鑒定(銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌)。

腦脊液標(biāo)本

標(biāo)本采集；一般性狀檢查；化學(xué)檢查；顯微鏡細(xì)胞檢查；細(xì)菌學(xué)檢查(腦脊液奈瑟菌和新型隱球菌、產(chǎn)單核李斯特菌)【復(fù)習(xí)思考題】

名詞解釋：運(yùn)送培養(yǎng)基、標(biāo)本處理。

問(wèn)答題：

簡(jiǎn)述各種臨床標(biāo)本微生物學(xué)檢查的程序及常見(jiàn)病原微生物的鑒定。21

第四篇：PCR在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

PCR在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)大致可分為形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、血清免疫學(xué)和分子生物學(xué)幾大類，其分別代表幾代實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)。60年代DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)及半保留復(fù)制模式的出現(xiàn)，70年代基因重組及體外基因克隆技術(shù)、分子雜交技術(shù)的應(yīng)用使分子生物學(xué)在疾病診斷中得到了長(zhǎng)足的發(fā)展。特別是1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，使醫(yī)學(xué)界真正興起了基因診斷技術(shù)熱，成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的又一里程碑。用于臨床檢驗(yàn)的PCR技術(shù)與經(jīng)典的PCR反應(yīng)在操作上稍有區(qū)別，有其自己的特色。一般在樣品處理上，多采用非離子去污劑一次加熱處理，這種方法對(duì)DNA純化有限，但適應(yīng)臨床微量、快速的特點(diǎn)。另外PCR反應(yīng)體系中各組成成份往往都預(yù)分裝到反應(yīng)管中，既減少操作者的工作強(qiáng)度而且也減少了污染的機(jī)會(huì)，具有極高的使用價(jià)值。本公司率先研制并推出單管單人份的PCR診斷試劑，具有開(kāi)創(chuàng)性意義。這些改進(jìn)都不影響PCR效果，同樣表現(xiàn)出高特異性、高敏感性、簡(jiǎn)便快捷等PCR最優(yōu)秀的特征，在常見(jiàn)傳染病、性病、腫瘤、遺傳病、寄生蟲(chóng)病、優(yōu)生優(yōu)育、法醫(yī)學(xué)等廣泛領(lǐng)域中有相當(dāng)高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

常見(jiàn)的傳染性疾病有細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體等，可引起消化、呼吸、循環(huán)、泌尿生殖等不同系統(tǒng)相應(yīng)的病變。消化系統(tǒng)感染性疾病在我國(guó)具有代表性意義的有肝炎、胃炎及腸道感染性疾病。引起肝炎的病原體主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它還有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。這幾種肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均為RNA病毒。我國(guó)是乙肝高發(fā)區(qū)，乙肝病人為世界乙肝病人總數(shù)的50％。乙肝病毒經(jīng)血液傳播，病毒主要在肝細(xì)胞中增殖，也可以長(zhǎng)期存留在骨髓細(xì)胞或外周血白細(xì)胞中。通常用PCR法檢測(cè)血清中的乙肝病毒。有報(bào)道用PCR法可以在淚液、乳汁、精液及血白細(xì)胞中檢出乙肝病毒，這些發(fā)現(xiàn)提示其它傳染途經(jīng)存在的可能。PCR法檢測(cè)乙肝的優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)在： ① 早期診斷，因?yàn)镻CR擴(kuò)增極其敏感，理論上可檢出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潛伏期即可被PCR法檢出。② 對(duì)低持續(xù)感染乙肝病人的診斷，有些乙肝病人體內(nèi)的病毒長(zhǎng)期低復(fù)制感染，血清病毒濃度極低，一般酶標(biāo)試劑無(wú)法檢出，可以用PCR法檢出。③ 療效跟蹤及病程判斷，因?yàn)镻CR能半定量檢測(cè)乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其數(shù)量多少的最直接指標(biāo)。在治療過(guò)程中通過(guò)監(jiān)測(cè)血清或白細(xì)胞中病毒基因存在與否及其動(dòng)態(tài)變化即能準(zhǔn)確地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的濃度很低，丙肝病毒的分離尚未成功。目前用于丙肝病毒檢驗(yàn)的方法主要是ELISA法測(cè)定血清中的HCV抗體。由于HCV尚無(wú)法分離純化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，這些人工抗原與天然病毒抗原有一定的區(qū)別，理論上是存在假陽(yáng)性或假陰性。同時(shí)血清中抗體的出現(xiàn)及動(dòng)態(tài)變化與病人病情無(wú)線性相關(guān)關(guān)系。RT－PCR技術(shù)使這些困難得到解決。HCV是RNA病毒，需先將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA（RT）后再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，這種技術(shù)稱之為逆轉(zhuǎn)錄－PCR（RT－PCR）。PCR敏感性高可以檢測(cè)出血清中低濃度的病毒，了解病毒在體內(nèi)復(fù)制的動(dòng)態(tài)狀況。RNA純化要求嚴(yán)格，是RT－PCR的技術(shù)關(guān)鍵，本公司目前使用的高效基因釋放劑，聯(lián)合特異性固相基因吸附乳膠顆粒，對(duì)樣本中的RNA進(jìn)行分離純化，使這一問(wèn)題得到解決。通常用于RNA→cDNA逆轉(zhuǎn)錄的酶大致可以分為二大類，即低逆轉(zhuǎn)錄酶，如AMV/MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，高逆轉(zhuǎn)錄酶，如Tth酶。Tth酶在錳離子作用下，具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，Tth酶活性度高，可以使核酸充分線性化，提高逆轉(zhuǎn)錄效率及特異性。Tth酶在鎂離子的作用下，又具有DNA聚合酶活性，從而真正實(shí)現(xiàn)單管單酶單人份的擴(kuò)增要求，這樣就在不降低擴(kuò)增敏感性的條件下，一步完成擴(kuò)增，不僅簡(jiǎn)化操作，而且又減少污染，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。國(guó)內(nèi)本公司已采用這種技術(shù)推出單管單酶單人份的RT－PCR診斷試劑。丁型肝炎病毒是缺陷病毒，與乙型肝炎病毒協(xié)同感染。甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒主要存在于急性病人糞便樣本中，戊型肝炎病毒也長(zhǎng)期存在于血清中。在PCR檢測(cè)時(shí)，需注意取材的合理性。在消化道傳染性疾病中，另一類最重要的感染性疾病是幽門(mén)螺旋桿菌（HP）所引起的胃炎、胃潰瘍等。HP可以經(jīng)口－口途經(jīng)傳播并定位于胃粘膜上皮細(xì)胞，早期表現(xiàn)為淺表性胃炎，可發(fā)展成為胃潰瘍。我國(guó)胃炎發(fā)病率之高估計(jì)比乙型肝炎更嚴(yán)重，對(duì)HP的檢測(cè)應(yīng)受到廣大醫(yī)務(wù)工作者的重視。對(duì)HP的檢測(cè)可以用生化法測(cè)試尿素酶或用免疫法測(cè)試血清中對(duì)HP特異性抗體，也可對(duì)胃液、胃粘膜樣本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及菌種鑒定。PCR法檢測(cè)HP非常敏感且特異性高，有研究發(fā)現(xiàn)可以從病人的唾液或口腔含漱液中檢出HP。PCR法避免了取胃液及胃粘膜，減少病人痛苦，是目前最理想的方法。

呼吸系統(tǒng)感染性疾病主要的有肺結(jié)核、非典型性肺炎等。結(jié)核桿菌感染曾給人類健康帶來(lái)很大威脅，一度是較嚴(yán)重的致死性疾病之一。解放以后由于對(duì)結(jié)核病的預(yù)防的重視，特別是特效抗癆藥物的出現(xiàn)，使結(jié)核病流行基本被控制。近來(lái)結(jié)核病有抬頭的趨勢(shì)，基原因可能有兩方面，其一是耐藥株的不斷出現(xiàn)，其二是對(duì)結(jié)核預(yù)防重視不足。結(jié)核菌痰涂片鏡檢陽(yáng)性率太低，酶標(biāo)法又因抗原交叉反應(yīng)易出現(xiàn)假陽(yáng)性，結(jié)核檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)是結(jié)核菌培養(yǎng)法。但培養(yǎng)法費(fèi)時(shí)昂貴并且受到用藥的影響，在實(shí)際應(yīng)用中受到限制。PCR在結(jié)核菌檢測(cè)方面有簡(jiǎn)便、敏感、特異的優(yōu)點(diǎn)。一般認(rèn)為樣本中內(nèi)要有100個(gè)左右的結(jié)核菌即可被檢出。目前用于結(jié)核菌PCR診斷的試劑，其引物主要來(lái)源于以下基因片段36KD/65KD抗原蛋白基因；染色體重復(fù)插入序列IS986、IS960、IS6110、染色體質(zhì)粒DNA PH7311、PMTB4、P36基因等。其中最常用的是染色體重復(fù)插入序列IS986或IS6110，1990年Hermans首先介紹并使用了IS986基因設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增產(chǎn)物為245BP，研究表明這一基因?qū)θ诵徒Y(jié)核菌有特異性。而后Thierry又介紹了插入序列IS6110基因，并認(rèn)為這一基因?qū)θ诵徒Y(jié)核菌具有比IS986更高的特異性及敏感性，最適合M.TB的檢測(cè)。結(jié)核菌痰標(biāo)本的PCR檢測(cè)應(yīng)注意以下幾種常見(jiàn)的問(wèn)題。其一，多條帶。即擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后有三條或三條以上的螢光除最前面的引物以外有兩條產(chǎn)物帶，這與插入序列本身各片段長(zhǎng)度有差異、結(jié)核菌在治療過(guò)程中染色體畸變、斷裂、缺欠及不等位交換有關(guān)。這種擴(kuò)增結(jié)果的判斷應(yīng)特別注意，凡在陽(yáng)性對(duì)照相應(yīng)位置有明顯條帶的判陽(yáng)性，否則應(yīng)為陰性，或建議病人過(guò)一些時(shí)間后再?gòu)?fù)檢一次；其二，結(jié)核痰樣本PCR檢測(cè)時(shí)，要使樣本充分液化，否則痰液中的粘液成份將影響擴(kuò)增效果，甚至?xí)?dǎo)致嚴(yán)重非特異性擴(kuò)增，電泳結(jié)果呈霧狀；基三，結(jié)核痰樣本PCR檢測(cè)結(jié)果可能表現(xiàn)為陽(yáng)性、陰性交替出現(xiàn)，這與結(jié)核病灶的不規(guī)律排菌有關(guān)。

循環(huán)系統(tǒng)以腸道小RNA病毒感染最具代表意義，如柯薩奇病毒等。這些病毒經(jīng)腸道粘膜、淋巴結(jié)進(jìn)入血液，最終可定位于心肌細(xì)胞中導(dǎo)致心肌炎。目前對(duì)這些病毒的血液樣本檢測(cè)往往比較困難。PCR用于柯薩奇病毒檢測(cè)時(shí)因其是RNA病毒所以應(yīng)注意樣本的保存。外在環(huán)境中存在大量RNA酶，病毒脫殼后RNA將被迅速降解。一般用于RNA檢測(cè)的血清常下不應(yīng)超過(guò)24小時(shí)，4℃下可保存2天，-20℃下可以保存2月以下。

PCR檢測(cè)在性傳播性疾病（STD）的診斷中有較廣泛的應(yīng)用。經(jīng)典的性傳播疾病有、淋病、腹股溝淋巴肉芽腫、軟銳濕癘、硬下疳等。而在現(xiàn)代STD中、解尿支原體及沙眼衣原體引起的非淋菌性尿道炎（NGU）可能更具有代表性意義。是由螺旋體感染布致，首先在局部形成硬軟下疳，布后經(jīng)血行播散到全身，最嚴(yán)重的是波及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。感染早期，螺旋體大量存在于硬下疳中，可以用生理鹽水濕棉簽擦去皮疹表面污物再用鈍刀片輕輕刮去上皮及結(jié)痂，用潔凈棉簽取滲出液樣本作PCR檢測(cè)，其敏感性及特異性極高。二期皮疹中也存在螺體其取樣方法同埂下疳，三期皮疹中一般無(wú)螺旋體存在，因此III病人及部分無(wú)皮疹的I、II期病人可以取EDTA抗凝全血檢測(cè)。淋病是目前發(fā)病率最高的性傳播性疾病之一，由淋病雙球菌引起。淋病雙球菌一般為胞內(nèi)寄生，常見(jiàn)的感染部位為外生殖器、尿道粘膜最常見(jiàn)。在尿道及外生殖器分泌物中有許多非致病的雙菌存在，對(duì)分泌物拭子進(jìn)行涂片鏡檢時(shí)，常導(dǎo)致誤診。另外目前非淋球菌性尿道炎的發(fā)病率不斷增加，鑒別診斷特要，培養(yǎng)法準(zhǔn)確但費(fèi)時(shí)且費(fèi)用高，受用藥的影響。PCR法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確非常理想。常用的引物多采用外膜蛋白抗原基因、隱性質(zhì)粒DNA或16s RNA基因。16s RNA基因設(shè)計(jì)的引物特異性高但其敏感性低；隱性質(zhì)粒設(shè)計(jì)的引物敏感性高但偶爾出現(xiàn)多條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)以陽(yáng)性對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)，凡在陽(yáng)性對(duì)照相應(yīng)部位有明顯條帶的為陽(yáng)性，其余均為陰性。以往對(duì)沙眼衣原體及解脲支原體的檢測(cè)主要靠培養(yǎng)法，費(fèi)時(shí)且昂貴，簡(jiǎn)便快速的PCR檢測(cè)對(duì)其有極高的使用價(jià)值。沙眼衣原體、解脲支原體樣本來(lái)源主要是尿道及宮頸分泌物拭子，由于分泌物中有許多污物含有PCR擴(kuò)增的抑制劑，因此每次采樣時(shí)盡量避免采集過(guò)多膿性分泌物，如果宮頸分泌物太多可以先用濕棉簽將表面的分泌物擦去，再用潔凈的濕棉簽輕壓旋轉(zhuǎn)采集宮頸脫落細(xì)胞送檢，其準(zhǔn)確性更高。PCR也可以用檢測(cè)單純皰疹病毒、EB病毒、乳頭瘤病毒等。引物尖銳濕疣的病毒是人類乳頭瘤（HPV）,可致生殖系統(tǒng)感染的乳頭瘤病毒主要是6、11、16、18、33型。新近研究結(jié)果表明，在乳頭瘤病毒引起的良、惡性生殖器病變中，與血清型的關(guān)系并不密切，經(jīng)常有交叉或多型時(shí)感染。為簡(jiǎn)化操作，對(duì)其基因?qū)Ρ确治鰧ふ彝蛄性O(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物可以同時(shí)檢出這幾種型別的病毒既簡(jiǎn)化操作又減少費(fèi)用是一種極理想的方法。

我國(guó)惡性腫瘤為人口死亡的第一位原因，其中以肺癌、胃癌及食管癌的發(fā)病率最高，占惡性腫瘤死亡總數(shù)的60％以上。引起腫瘤的原因非常復(fù)雜包括外界環(huán)境因素及遺傳背景。外界因此可分為三大類即化學(xué)、物理及生物因素。腫瘤與遺傳有關(guān)的證據(jù)越來(lái)越多，除已知的單基因遺傳腫瘤如視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤等以外，還在幾乎所有的腫瘤細(xì)胞中觀察到原癌基因的重排，這些基因的變化常導(dǎo)致細(xì)胞增殖調(diào)控失調(diào)終形成腫瘤。癌基因是指在自然或?qū)嶒?yàn)條件下具有潛在誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的基因，它們是在研究逆轉(zhuǎn)錄病毒時(shí)發(fā)現(xiàn)的。目前已知的腫瘤基因有60多種，1969年Hubner根據(jù)Rous（1911）的實(shí)驗(yàn)，在小雞肉瘤濾液中發(fā)現(xiàn)一種能誘導(dǎo)宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化的RNA病毒性癌基因（Viral Oncogene）。后來(lái)又在其它哺乳動(dòng)物基因中發(fā)現(xiàn)與病毒癌基因同源序列，這種正常的細(xì)胞基因表達(dá)產(chǎn)物與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化有關(guān)。但若被某種因素激活就會(huì)轉(zhuǎn)化為有活力的癌基因，通常稱之為原癌基因（Proto Oncogene）。為了與病毒癌基因區(qū)分，分別用V-Onc及C-Onc基因來(lái)代表。目前了解較多的癌基因（C-one）有scr基因族、ras基因族、mgc及myb基因族。原癌基因存在于正常細(xì)胞中，并表達(dá)生物功能，只有在原癌基因被激活后才能誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，可能的原癌基因活化機(jī)理有：①點(diǎn)突變，受到射線、化學(xué)因素、生物因素的誘導(dǎo)，這樣微小的變化，就會(huì)活化癌基因，活化的基因產(chǎn)物僅有極微的結(jié)構(gòu)差異，但在功能在卻有很大的區(qū)別。②獲得啟動(dòng)子，原癌基因從病毒基因中獲得啟動(dòng)子而活化。③基因易位，內(nèi)外界因素能導(dǎo)致染色體的某些基因易位、重排使原來(lái)無(wú)活性的原癌基因移至某些強(qiáng)的啟動(dòng)因子或增強(qiáng)子附近而被活化。④原癌基因的過(guò)量擴(kuò)增，原癌基因產(chǎn)物一般與生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子受體、跨膜信息蛋白有關(guān)或功能相近，過(guò)度表達(dá)時(shí)，會(huì)因調(diào)控失常而引起細(xì)胞癌變。另一類與腫瘤相關(guān)的基因是抑癌基因如P53。抑癌基因較復(fù)雜，作用機(jī)理不太清楚。癌基因檢測(cè)中常用的分子生物學(xué)技術(shù)有：雜交、DNA分子克隆、PCR擴(kuò)增及序列分析。PCR擴(kuò)增簡(jiǎn)便、快捷有較強(qiáng)的實(shí)用性，甚至可從病人體液樣本中檢測(cè)活化的癌基因而不需取活組織，對(duì)癌癥的早期診斷有極重要的意義。Ras基因是1964年首次從大鼠肉瘤的急性逆轉(zhuǎn)錄病毒（Harver Murine Sarcoma and Kister Murine Sarcoma Virus）中分離出來(lái)取大鼠肉瘤（Rat Sarcoma）的字首名。1982年首次在人膀胱細(xì)胞細(xì)胞癌中檢出有轉(zhuǎn)化能力的ras基因與Harver大鼠肉瘤病毒癌基因有同源性稱C-H-ras基因，后從肺細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)了與Kister大鼠肉瘤癌基因同源的C-K-ras基因，從神經(jīng)母細(xì)胞中又發(fā)現(xiàn)了N-ras基因。Ras基因激活的最常見(jiàn)方式是點(diǎn)突變。人類原發(fā)腫瘤時(shí)點(diǎn)突變主要發(fā)生在密碼子12、13、59、61位。激活后的ras基因不牟自行滅活，根據(jù)其點(diǎn)突變的情況可以基因診斷、療效觀察。用PCR擴(kuò)增樣本ras原癌基因，再使用雜交法、限制性內(nèi)切酶消化或產(chǎn)物測(cè)序法檢測(cè)基因的突變情況即可用診斷。P53是抑制癌基因的代表，位于17號(hào)染色體短臂上，其產(chǎn)物為53KD分子量的蛋白從此而得名，可分為突變型和野生型，前者為癌基因，后者為抗癌基因。1979年Cane發(fā)現(xiàn)了P53蛋白Eliyahu發(fā)現(xiàn)了p53基因有抑癌作用。P53突變后其產(chǎn)物突變蛋白穩(wěn)定性增加，半衰期較野生型基因產(chǎn)物長(zhǎng)，在細(xì)胞內(nèi)堆積，可以用免疫組化法測(cè)出。PCR-RELP、PCR-SSCP則因方法簡(jiǎn)單、快速、特異性高，更具有實(shí)用價(jià)值。在SSCP分析中，單鏈DNA因堿基序列的變異，導(dǎo)致構(gòu)型改變，在進(jìn)行凝膠電泳時(shí)，其泳動(dòng)速率發(fā)生改變，從布將變異的DNA與正常DNA區(qū)分開(kāi)，統(tǒng)計(jì)表明100-300bp分子大小的ssDNA突變檢出率可達(dá)97％，300-450bp標(biāo)出率可達(dá)69％，因此大于400bp的片段多態(tài)性應(yīng)采用其它方法檢測(cè)。

遺傳病是由于遺傳基礎(chǔ)異常而引起的疾病，人類遺傳病約有3000多種，患者占總?cè)丝跀?shù)的10％。遺傳病大概可分為單基因、多基因及染色體遺傳病。常用診斷方法有家系譜分析、染色體檢查（特別是顯帶法）、生物化分析等。隨分子生物學(xué)發(fā)展，基因診斷愈來(lái)愈表現(xiàn)出其優(yōu)越性，PCR技術(shù)是基因診斷的主要技術(shù)之一，為快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)人類遺傳病開(kāi)辟了一個(gè)新的途徑，預(yù)計(jì)與遺傳相關(guān)的疾病的檢測(cè)有80％將在3-5年內(nèi)被PCR法所取代。PCR在遺傳病診斷應(yīng)用中，可以利用引物直接擴(kuò)增變化的基因產(chǎn)物，也可以結(jié)合應(yīng)用限制內(nèi)切酶，分子雜交及電泳圖譜分析進(jìn)行診斷。應(yīng)用較為廣泛的有PCR法檢測(cè)中海貧血、苯丙酮尿癥、血友病、脆性X綜合癥及性別鑒定等。地中海貧血（Thalassmia）是世界上最常見(jiàn)的單基因遺傳病，不有同類型，以a地中海貧血及在中海貧血最常見(jiàn)。a珠蛋白基因位于11號(hào)染色體短臂上，a珠蛋白基因突變致血紅蛋白的全成減少或缺失，表現(xiàn)溶血性貧血，肝脾腫大，在我國(guó)發(fā)病率為0.66％，貴州、四川等地高發(fā)可達(dá)2.2％。應(yīng)用PCR技術(shù)可以直接檢測(cè)突變的基因診斷此病。苯丙酮尿癥（Phenylketouria,PKU）是一種常染色體隱性遺傳病。病人肝臟苯丙氨酸羥化酶嚴(yán)重缺乏使苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)化為酷氨酸血癥，出現(xiàn)腦組織損傷，智力障礙。此病患者出生時(shí)正常，出生后一經(jīng)確診立即停止母乳喂養(yǎng)，采用低苯丙氨酸飲食治療8-10年不致影響患者智力，但低苯丙氨酸飲食代價(jià)之昂貴是一般家庭所不能承受的，關(guān)鍵在于避免患兒出生。因此本病的早期診斷有極其重要的意義。PCR結(jié)合斑點(diǎn)雜交能有效診斷PKU。遺傳性疾病的基因變化很復(fù)雜，單基因固定位點(diǎn)變異布致病的情況很少，因此基因診斷過(guò)程中往往需要PCR技術(shù)與限制性內(nèi)切酶、斑點(diǎn)雜交、聚丙烯酰胺膠電泳圖譜分析及擴(kuò)增產(chǎn)物序列分析結(jié)合，作綜合判斷。

優(yōu)生學(xué)包括基礎(chǔ)優(yōu)生學(xué)、會(huì)優(yōu)生學(xué)、臨床優(yōu)生學(xué)及環(huán)境優(yōu)生學(xué)。孕期檢查及產(chǎn)前診斷是臨床優(yōu)生學(xué)的最重要內(nèi)容之一。孕期檢查除一般項(xiàng)目外還能及時(shí)了解孕婦是患有某些對(duì)胎兒發(fā)育有嚴(yán)重影響的疾病如風(fēng)疹病毒感染、沙眼衣原體、解脲支原體、單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、弓體感染等，及時(shí)發(fā)現(xiàn)及時(shí)治療并采取有效措施預(yù)防發(fā)展成為宮內(nèi)感染。PCR技術(shù)對(duì)這些病原體的檢測(cè)簡(jiǎn)便而確實(shí)，另外利用PCR技術(shù)可以對(duì)地中海貧血、血友病、苯丙酮尿癥、脆性X綜合癥等遺傳性疾病進(jìn)行宮內(nèi)診斷。可見(jiàn)PCR在優(yōu)生優(yōu)育方面有很高的應(yīng)用價(jià)值。

PCR技術(shù)的出現(xiàn)對(duì)法醫(yī)學(xué)的發(fā)展也有不可低估的作用。在法醫(yī)物證如血斑、毛發(fā)、組織碎片等的確證，DAN多態(tài)性分析遠(yuǎn)比血清學(xué)或等方法確實(shí)可靠。早期DNA多態(tài)性分析主要使用Southern印跡雜交的方法。1985年Jeffreys首先采用肌紅基因第一個(gè)內(nèi)含子中的串聯(lián)重復(fù)序列作探針，從人的基因庫(kù)中篩選出小衛(wèi)量DNA，使用阿交法產(chǎn)生雜交圖譜即DNA指紋。這一技術(shù)成功地應(yīng)用于個(gè)人識(shí)別及親子鑒定。這種方法仍受到樣本量的限制，當(dāng)樣本DNA數(shù)量不足時(shí)或DAN嚴(yán)重降解則不能正常檢出。且雜交技術(shù)常使用同位素杯記探針要求較鎬的防護(hù)措施。PCR技術(shù)的出現(xiàn)，可以對(duì)極少量物證如一根毛發(fā)、一滴血液、極小精斑都可以進(jìn)行分析。在人類基因組中有許多由10-15bp核心順序構(gòu)成的串聯(lián)重復(fù)DNA序列，具有單位點(diǎn)特征的稱為VNTR結(jié)構(gòu)，多位點(diǎn)串聯(lián)成為衛(wèi)星DNA。由于VNTR在等位基因中的多態(tài)性便構(gòu)成了遺傳標(biāo)記。使用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增結(jié)合對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖譜分析即可進(jìn)行個(gè)人識(shí)別及親子鑒定。由2-6核苷組成的重復(fù)串聯(lián)序列稱為微衛(wèi)星。在人類基因組中，微衛(wèi)星更加豐富。微衛(wèi)星的重復(fù)序列比VNTR短，擴(kuò)增分型簡(jiǎn)便，易于自動(dòng)化，在VNTR或微衛(wèi)星不僅重復(fù)片段的數(shù)量不同而且重復(fù)片段的核苷酸也具有多態(tài)性。在VNTR或微衛(wèi)星多態(tài)性分析時(shí)，如再結(jié)合堿基配對(duì)分析可以藜得更大量的信息，這一種更有希望的標(biāo)志即MVR（Microsatllite Variant Repeats）。理論上其對(duì)嫌疑人的排除率為99.999％。PCR技術(shù)可以完成替代早期的Southern印跡法進(jìn)行多態(tài)性分析而且操作簡(jiǎn)便，敏感性及準(zhǔn)確性都有大幅度的提高。當(dāng)然PCR技術(shù)在法醫(yī)中的應(yīng)用仍在起步階段有許多技術(shù)問(wèn)題等待解決，如樣本中的抑制劑、檢村中DNA的損報(bào)告?zhèn)CR擴(kuò)增污染等。想念隨著PCR技術(shù)的不斷完善它將在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中有更加廣泛的應(yīng)用。

第五篇：臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)教學(xué)大綱

臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)教學(xué)大綱

長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系

微生物學(xué)與檢驗(yàn)教學(xué)大綱

前言

適用專業(yè):醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè) 課程的性質(zhì)、目的及任務(wù)：

微生物學(xué)及檢驗(yàn)是醫(yī)學(xué)微生物學(xué)、臨床微生物學(xué)以及微生物學(xué)技術(shù)密切結(jié)合的一門(mén)新興學(xué)科，是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)的一門(mén)專業(yè)主干課程，它綜合了臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、臨床抗生素學(xué)和醫(yī)院流行病學(xué)等幾方面的知識(shí)和技能，研究感染性疾病的病原體特征，提供快速、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷，密切結(jié)合臨床提出及時(shí)有效的治療方案，對(duì)醫(yī)院內(nèi)感染進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)控。

課程內(nèi)容：該課程包括醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和臨床微生物學(xué)兩部分，前者主要研究與醫(yī)學(xué)有關(guān)的病原微生物的生物學(xué)特性、致病性、免疫性、以及防治措施的學(xué)科。后者側(cè)重于研究感染性疾病，快速、準(zhǔn)確的診斷病原體的策略與方法，為臨床診斷提供依據(jù)。教學(xué)內(nèi)容覆蓋了《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》和《臨床微生物學(xué)及微生物學(xué)檢驗(yàn)》兩本教材，在教學(xué)過(guò)程中將兩本教材的內(nèi)容有機(jī)融合在一起。本課程包括五篇：細(xì)菌學(xué)總論，細(xì)菌學(xué)各論及檢驗(yàn)，真菌學(xué)及檢驗(yàn)，病毒學(xué)及檢驗(yàn)，微生物學(xué)檢驗(yàn)。

課程教學(xué)基本要求：

1．掌握微生物的基本特性。

2．掌握病原微生物對(duì)人體的致病性以及人體的抗感染免疫 3．掌握微生物學(xué)檢驗(yàn)的基本技術(shù)。

4．掌握各類臨床標(biāo)本的采集方法、檢驗(yàn)程序及常規(guī)檢驗(yàn)方法。5．選擇最佳鑒定方法對(duì)感染性病原體進(jìn)行鑒定或快速診斷。6．熟悉感染性疾病的預(yù)防及治療原則。

7．了解病原微生物學(xué)檢驗(yàn)的新方法、新技術(shù)及發(fā)展動(dòng)向。8．能夠正確運(yùn)用微生物實(shí)驗(yàn)室常用自動(dòng)化儀器和微量裝置。9．能夠進(jìn)行正確的抗菌藥物敏感實(shí)驗(yàn)并準(zhǔn)確報(bào)告。10.能夠?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正確的分析及致病性評(píng)價(jià)。教學(xué)模式及教學(xué)環(huán)節(jié)： 微生物學(xué)及檢驗(yàn)是一門(mén)實(shí)踐性、應(yīng)用性很強(qiáng)的課程，在廣泛吸納國(guó)內(nèi)外先進(jìn)教學(xué)方法的基礎(chǔ)上，結(jié)合本課程的特點(diǎn)，經(jīng)過(guò)多年的教學(xué)改革實(shí)踐，形成了風(fēng)格迥異的教學(xué)模式，即將傳統(tǒng)沿用的“理論與實(shí)驗(yàn)教學(xué)”改為“理論與實(shí)驗(yàn)合二為一”，課堂上以學(xué)生為主體，以直觀、形象、立體的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容為切入點(diǎn)，同時(shí)輔以討論、交流、歸納等諸多教學(xué)實(shí)踐活動(dòng)，將理論與實(shí)驗(yàn)相融合，學(xué)生參與、老師引導(dǎo)并行，同時(shí)根據(jù)不同的教學(xué)內(nèi)容，采用不同的靈活多樣的教學(xué)實(shí)踐活動(dòng)，充分調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的主動(dòng)性，課堂效率大大提高。本著不斷充實(shí)和豐富提高的原則，在總結(jié)教改經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上制定了本教學(xué)大綱。

學(xué)時(shí)分配：

在教學(xué)過(guò)程中理論與實(shí)驗(yàn)時(shí)間為1:1，本課程總學(xué)時(shí)數(shù)為162學(xué)時(shí)，其中： 第一篇細(xì)菌學(xué)總論40學(xué)時(shí)（理論21學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)19學(xué)時(shí)）；第二篇細(xì)菌學(xué)各論及檢驗(yàn)70學(xué)時(shí)（理論34學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)36學(xué)時(shí)）；第三篇真菌學(xué)及檢驗(yàn)10學(xué)時(shí)（理論5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)）； 第四篇病毒學(xué)及檢驗(yàn)34學(xué)時(shí)（理論24學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)10學(xué)時(shí)）；第五篇微生物學(xué)檢驗(yàn)8學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)）。

通過(guò)微生物學(xué)及檢驗(yàn)的學(xué)習(xí)，使學(xué)生具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)高素質(zhì)的專門(mén)人才所必需的微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的基本知識(shí)和基本技能。為學(xué)生學(xué)習(xí)相關(guān)專業(yè)知識(shí)和職業(yè)技能，提高全面素質(zhì)，增強(qiáng)適應(yīng)職業(yè)變化的能力和繼續(xù)學(xué)習(xí)的能力打下一定的基礎(chǔ)。

教學(xué)大綱內(nèi)容

第一章 緒論

教學(xué)目的：

掌握有關(guān)微生物及微生物學(xué)的概念，了解微生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史。教學(xué)時(shí)數(shù)：1學(xué)時(shí) 教學(xué)內(nèi)容：

一、微生物、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)、臨床微生物學(xué)

二、微生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史

三、臨床微生物學(xué)的任務(wù)及在臨床醫(yī)學(xué)中的地位

第一篇細(xì)菌學(xué)總論

第二章 細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

教學(xué)目的：

掌握細(xì)菌的形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)、細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的含義與意義，革蘭染色的原理、步驟、結(jié)果及致病性；熟悉不染色標(biāo)本檢查法及特殊染色法。教學(xué)時(shí)數(shù)：9學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)6學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、細(xì)菌的大小與形態(tài)

（一）細(xì)菌的大小

（二）細(xì)菌的形態(tài)

二、細(xì)菌的結(jié)構(gòu)

（一）基本結(jié)構(gòu)

（二）特殊結(jié)構(gòu)

三、細(xì)菌形態(tài)學(xué)染色法

第三章 細(xì)菌的生理

教學(xué)目的：

掌握細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、生長(zhǎng)繁殖規(guī)律及培養(yǎng)基的制備方法，掌握細(xì)菌的分解代謝產(chǎn)物及其意義，熟悉其合成代謝產(chǎn)物及意義。了解微生物的分類與命名原則 教學(xué)時(shí)數(shù)：6學(xué)時(shí)（理論2學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)4學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖

（一）細(xì)菌的理化性狀

（二）細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)與繁殖條件（三)細(xì)菌的新陳代謝

1.細(xì)菌的分解代謝產(chǎn)物及其意義 2.細(xì)菌的合成代謝產(chǎn)物及其意義

（四）細(xì)菌的能量轉(zhuǎn)換

二、細(xì)菌的人工培養(yǎng)

（一）培養(yǎng)基

（二）細(xì)菌在各種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象

（三）人工培養(yǎng)細(xì)菌的意義

三、細(xì)菌的命名細(xì)菌分類學(xué)

（一）基本概念

（二）細(xì)菌分類等級(jí)

（三）細(xì)菌命名法

第四章 消毒與滅菌

教學(xué)目的：

掌握消毒、滅菌的基本概念，物理滅菌法的條件及應(yīng)用，熟悉化學(xué)消毒劑的應(yīng)用及影響因素，了解化學(xué)消毒劑的種類及殺菌機(jī)理 教學(xué)時(shí)數(shù)：4學(xué)時(shí)（理論2學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)2學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、基本概念

二、物理滅菌法

（一）高溫

1.干熱滅菌法 2.濕熱滅菌法

（二）紫外線及輻射

（三）超聲波

（四）濾過(guò)除菌

三、化學(xué)消毒法

（一）化學(xué)消毒劑的種類及用途

（二）影響化學(xué)消毒劑的因素

四、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全

第五章 細(xì)菌的遺傳與變異

教學(xué)目的：

掌握細(xì)菌變異的物質(zhì)基礎(chǔ)及機(jī)理，熟悉細(xì)菌的各種變異現(xiàn)象，熟悉細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移和重組的過(guò)程，了解遺傳變異的實(shí)際意義。教學(xué)時(shí)數(shù)：4學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、噬菌體

（一）毒性噬菌體

（二）溫和噬菌體

二、遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)

（一）細(xì)菌染色體

（二）質(zhì)粒

（三）轉(zhuǎn)位因子

三、細(xì)菌基因表達(dá)的調(diào)節(jié)

四、細(xì)菌基因的轉(zhuǎn)移和重組

五、基因突變

六、遺傳變異研究的意義

第六章 抗微生物藥物敏感性實(shí)驗(yàn)和耐藥性

教學(xué)目的：

掌握抗菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)的方法；掌握細(xì)菌對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥的機(jī)制及耐藥性檢測(cè)主要方法。熟悉抗菌藥物的種類。教學(xué)時(shí)數(shù)：6學(xué)時(shí)（理論4學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)2學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、常用抗菌藥物

二、抗菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)

（一）抗菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)的原理和意義

（二）紙片擴(kuò)散法

（三）稀釋法

（四）E實(shí)驗(yàn)

三、細(xì)菌耐藥性和發(fā)生機(jī)制

第七章 細(xì)菌的感染與免疫

教學(xué)目的：

掌握細(xì)菌的致病性、感染類型；熟悉正常菌群的分布及生理作用；了解機(jī)體的抗菌免疫。了解醫(yī)院感染概況，掌握醫(yī)院感染常見(jiàn)微生物及監(jiān)測(cè)方法 教學(xué)時(shí)數(shù)：8學(xué)時(shí)（理論5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、正常菌群和機(jī)會(huì)性致病菌

二、細(xì)菌的致病作用

（一）細(xì)菌的毒力 1.侵襲力

2.毒素：內(nèi)外毒素的主要區(qū)別

（二）細(xì)菌的侵入數(shù)量

（三）細(xì)菌的侵入門(mén)戶

三、宿主的免疫防御機(jī)制

（一）非特異性免疫

（二）特異性免疫

四、感染的發(fā)生與發(fā)展

（一）感染途徑

（二）感染種類

（三）感染類型

五、院內(nèi)感染

（一）醫(yī)院感染的概述與流行特點(diǎn)

（二）醫(yī)院感染的監(jiān)測(cè)

（三）醫(yī)院感染的控制 第八章 細(xì)菌感染的檢查方法與防治原則

教學(xué)目的：

掌握標(biāo)本采集的原則、標(biāo)本的處理方法及常用實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)。了解微生物感染的防治原則

教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)（理論1學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、臨床標(biāo)本的采集與處理

二、病原學(xué)診斷：

（一）細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查

（二）細(xì)菌的分離培養(yǎng)與接種技術(shù)

（三）細(xì)菌生化實(shí)驗(yàn)

（四）細(xì)菌感染的血清學(xué)檢測(cè)

（五）細(xì)菌感染的分子生物學(xué)檢測(cè)

（六）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

（七）免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

三、人工主動(dòng)免疫

（一）疫苗

（二）類毒素

四、人工被動(dòng)免疫

五、細(xì)菌感染的治療

第二篇 細(xì)菌學(xué)各論及檢驗(yàn)

第九章 球菌

教學(xué)目的：

掌握葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、奈瑟菌屬的主要生物學(xué)性狀及檢查，熟悉其致病性。

教學(xué)時(shí)數(shù)：10學(xué)時(shí)（理論5學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、葡萄球菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

1．標(biāo)本采集

2．檢驗(yàn)程序 3.檢驗(yàn)方法

4.鑒定依據(jù) 5.報(bào)告方式

三、鏈球菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

1．標(biāo)本采集 2．檢驗(yàn)程序 3.檢驗(yàn)方法

4.鑒定依據(jù) 5.報(bào)告方式

四、腸球菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性及耐藥性：

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

1．檢驗(yàn)程序： 2．檢驗(yàn)方法：

五、奈瑟菌屬和布蘭漢菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

第十章 腸桿菌科

教學(xué)目的：

掌握大腸埃希菌、沙門(mén)菌和志賀菌的檢驗(yàn)程序及檢驗(yàn)方法，掌握肥達(dá)氏反應(yīng)原理、方法及致病性，熟悉各種腸桿菌的致病性。教學(xué)時(shí)數(shù)：10學(xué)時(shí)（理論5學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述：

（一）腸桿菌科的定義及分類

（二）腸桿菌科的共同特性：

二、埃希菌屬（以大腸埃希菌為代表）

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1．標(biāo)本采集 2．檢驗(yàn)程序

3．檢驗(yàn)方法

三、沙門(mén)菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)： 1.標(biāo)本采集； 2.檢驗(yàn)程序； 3.檢驗(yàn)方法

4.血清學(xué)試驗(yàn)---肥達(dá)反應(yīng)

四、志賀菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1.標(biāo)本采集 2.檢驗(yàn)程序 3.檢驗(yàn)方法

4.快速診斷

五、耶爾森菌屬 克雷伯菌屬 腸桿菌屬 變形桿菌 沙雷菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)： 1．檢驗(yàn)程序 2．鑒定試驗(yàn)

第十一章 小細(xì)菌

教學(xué)目的：

掌握嗜血桿菌屬、布魯菌屬、鮑特菌屬主要生物學(xué)性狀及鑒定方法。教學(xué)時(shí)數(shù)：4學(xué)時(shí)（理論2學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)2學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、嗜血桿菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

二、布魯菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

三、鮑特菌屬

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

第十二章 非發(fā)酵革蘭陰性菌

教學(xué)目的：

掌握非發(fā)酵菌的鑒定要點(diǎn)及銅綠假單胞菌主要鑒定特征，熟悉不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、黃桿菌屬、軍團(tuán)菌屬的主要鑒定特征。教學(xué)時(shí)數(shù)：6學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、銅綠假單胞菌

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1．標(biāo)本采集 2．檢驗(yàn)程序 3．檢驗(yàn)方法 4．鑒定依據(jù)

三、熒光假單胞菌：與銅綠假單胞菌的區(qū)別

四、軍團(tuán)菌

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

五、其他非發(fā)酵菌

第十三章 弧菌屬 氣單胞菌屬

教學(xué)目的：

掌握霍亂弧菌的生物學(xué)性狀及鑒定方法，熟悉氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬之間的主要區(qū)別以及與弧菌屬的區(qū)別。

教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)（理論1學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、弧菌屬

（一）霍亂菌屬 1．生物學(xué)性狀 2．致病性 3．微生物學(xué)檢驗(yàn)（1）標(biāo)本采集（2）檢驗(yàn)程序（3）檢驗(yàn)方法

（4）快速診斷

（二）副溶血性弧菌：與霍亂弧菌的主要區(qū)別。

二、氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬

兩屬之間的主要區(qū)別以及與弧菌屬的區(qū)別。

第十四章 彎曲菌屬和螺桿菌屬

教學(xué)目的：

熟悉彎曲菌和幽門(mén)螺桿菌的生物學(xué)性狀及主要鑒別試驗(yàn) 教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)（理論1學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、彎曲菌屬

（一）概述

（二）生物學(xué)性狀

（三）致病性：腸道感染；腸道外感染

（四）微生物學(xué)檢驗(yàn)

二、螺桿菌屬—幽門(mén)螺桿菌

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

第十五章 需氧革蘭陽(yáng)性桿菌

教學(xué)目的：

掌握白喉棒狀桿菌的生物學(xué)性狀及檢驗(yàn)方法，炭疽芽胞桿菌的培養(yǎng)特性及檢驗(yàn)方法；熟悉李斯特菌、紅斑丹毒絲菌、陰道加特納菌的生物學(xué)特性及主要鑒定試驗(yàn)。

教學(xué)時(shí)數(shù)：6學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、白喉棒狀桿菌

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)： 1.標(biāo)本采集 2.檢驗(yàn)程序 3.檢驗(yàn)方法

二、其他棒狀桿菌：與白喉棒狀桿菌的鑒別

三、炭疽芽胞桿菌

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1.標(biāo)本采集 2．檢驗(yàn)程序 3.檢驗(yàn)方法

四、蠟樣芽胞桿菌

五、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌和紅斑丹毒絲菌

六、陰道加特納菌

微生物學(xué)檢驗(yàn)

第十六章 分枝桿菌屬

教學(xué)目的：

掌握結(jié)核分枝桿菌的生物學(xué)性狀，檢驗(yàn)程序及主要鑒定方法，了解其他分枝桿菌的檢驗(yàn)程序及鑒定方法

教學(xué)時(shí)數(shù)：8學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、結(jié)核分枝桿菌與非典型分枝桿菌

（一）結(jié)核分枝桿菌 1．生物學(xué)性狀 2．致病性

3．微生物學(xué)檢驗(yàn)

⑴ 標(biāo)本采集 ⑵ 檢驗(yàn)程序 ⑶ 檢驗(yàn)方法

（二）非典型分枝桿菌

三、麻風(fēng)分枝桿菌

四、放線菌屬和諾卡菌屬

第十七章 厭氧菌

教學(xué)目的：

掌握厭氧菌的培養(yǎng)方法、檢驗(yàn)程序、檢驗(yàn)方法；掌握梭狀芽胞桿菌的檢驗(yàn)方法，熟悉其致病性；熟悉無(wú)芽胞厭氧菌的檢驗(yàn)方法及致病性。教學(xué)時(shí)數(shù)：8學(xué)時(shí)（理論4學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)4學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、厭氧菌的分布與致病性

三、厭氧菌標(biāo)本的采集與送檢

（一）標(biāo)本采集

（二）標(biāo)本運(yùn)送與處理

四、厭氧菌的分離與鑒定

（一）檢驗(yàn)程序

（二）檢驗(yàn)方法

五、梭狀芽胞桿菌屬

（一）破傷風(fēng)梭菌 1.生物學(xué)性狀 2.致病性

（二）產(chǎn)氣莢膜梭菌 1.生物學(xué)性狀 2.致病性

3.微生物學(xué)檢驗(yàn)

（三）肉毒梭菌 1.生物學(xué)性狀 2.致病性

3.微生物學(xué)檢驗(yàn)

（四）艱難梭菌

六、無(wú)芽胞厭氧菌

致病性

第十八章支原體 立克次體 衣原體

教學(xué)目的：

掌握支原體的生物學(xué)特性，肺炎支原體和解脲脲原體的檢驗(yàn)方法，沙眼衣原體的檢驗(yàn)方法；熟悉立克次體，衣原體的致病性。教學(xué)時(shí)數(shù)：4學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、支原體

（一）概述

（二）生物學(xué)性狀

（三）致病性

（四）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1.標(biāo)本采集

2.檢驗(yàn)方法 3.鑒定依據(jù)

二、衣原體

（一）命名與分類

（二）生物學(xué)性狀

（三）致病性 1.沙眼衣原體 2.鸚鵡熱

3.肺炎衣原體感染

（四）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1.標(biāo)本采集處理 2.檢驗(yàn)方法

三、立克次體：

檢驗(yàn)方法和致病性。

第十九章 螺旋體

教學(xué)目的：

掌握螺旋體生物學(xué)性狀及梅毒螺旋體和鉤端螺旋體的微生物學(xué)檢驗(yàn)，熟悉螺旋體的致病性。

教學(xué)時(shí)數(shù)：8學(xué)時(shí)（理論4學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)4學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、鉤端螺旋體

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

1．標(biāo)本采集 2．檢驗(yàn)方法 3．檢驗(yàn)程序

二、梅毒螺旋體

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

1．標(biāo)本采集 2．檢驗(yàn)方法

三、疏螺旋體

（一）伯氏疏螺旋體

（二）回歸熱疏螺旋體

（三）奮森疏螺旋體

細(xì)菌學(xué)錄像

教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)

第三篇 真菌學(xué)

第二十章 真菌學(xué)及檢驗(yàn) 教學(xué)目的：

掌握真菌生物學(xué)性狀及檢驗(yàn)方法，了解真菌的致病性。教學(xué)時(shí)數(shù)：10學(xué)時(shí)（理論5學(xué)時(shí),實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、真菌生物學(xué)性狀：

（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)

（二）培養(yǎng)特性

（三）分類與致病

二、真菌檢驗(yàn) 1.標(biāo)本采集 2.檢驗(yàn)程序

3.檢驗(yàn)方法

三、病原性真菌

（一）淺部真菌 1.致病性 2.檢驗(yàn)方法

（二）白假絲酵母菌、隱球菌及其他醫(yī)學(xué)上重要的霉菌 1.致病性 2.檢驗(yàn)方法

第四篇 病毒學(xué)及檢驗(yàn)

第二十一章 病毒總論

教學(xué)目的：

掌握病毒的基本性狀；掌握病毒的致病性及抗病毒免疫；掌握病毒感染常用診斷方法。

教學(xué)時(shí)數(shù)：10學(xué)時(shí)（理論8學(xué)時(shí)，錄像2學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、病毒的基本性狀

（一）病毒的概念

（二）病毒的特點(diǎn)

（三）病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成

（四）病毒的增殖

（五）理化因素對(duì)病毒的影響

（六）病毒的分類與命名

（七）病毒的遺傳與變異

二、病毒的感染與免疫

（一）病毒的致病機(jī)理

（二）病毒性感染的方式與類型

（三）抗病毒免疫

三、病毒感染的檢查方法與預(yù)防原則

（一）標(biāo)本采集

（二）檢驗(yàn)方法 1．直接檢查 2．分離培養(yǎng)鑒定 3．病毒抗原檢測(cè) 4．早期IgM抗體檢測(cè) 5．病毒核酸檢測(cè)

（三）病毒感染的治療

第二十二章 呼吸道病毒

教學(xué)目的：

掌握流感病毒生物學(xué)性狀及檢測(cè)方法，熟悉呼吸道病毒的種類及其致病性。教學(xué)時(shí)數(shù)：6學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、流行性感冒病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢查 1．病毒的分離與鑒定 2．血清學(xué)診斷

三、副粘病毒科（呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒）

四、其他呼吸道病毒（冠狀病毒、風(fēng)疹病毒）

第二十三章 腸道病毒

教學(xué)目的：

熟悉腸道病毒的微生物學(xué)特性，了解腸道病毒生物檢測(cè)及致病性。教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)（理論1學(xué)時(shí)，錄象1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、脊髓灰質(zhì)炎病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）微生物學(xué)檢查

三、柯薩奇病毒簡(jiǎn)介

四、埃可病毒、新型腸道病毒簡(jiǎn)介

五、輪狀病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）微生物學(xué)檢查

第二十四章出血熱病毒及蟲(chóng)媒病毒

教學(xué)目的：

掌握流行性乙型腦炎病毒的檢驗(yàn)方法，熟悉其致病性；掌握流行性出血熱病毒的檢驗(yàn)方法，熟悉其致病性。

教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)（理論1學(xué)時(shí)，錄象1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、流行性出血熱病毒

（一）漢坦病毒

（二）新疆出血熱病毒

二、蟲(chóng)媒病毒

（一）概述

（二）流行性乙型腦炎病毒

（三）森林腦炎病毒

（四）登革病毒

第二十五章 肝炎病毒

教學(xué)目的：

掌握甲型、乙型、丙型肝炎病毒的致病性及微生物學(xué)檢查，熟悉其它肝炎病毒的致病性。

教學(xué)時(shí)數(shù)：6學(xué)時(shí)（理論5學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、各型肝炎病毒性狀比較

二、甲型肝炎病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）微生物學(xué)檢查法： 1.標(biāo)本采集

2.檢查方法：電鏡直接查病毒顆粒；早期抗HAV-IgM抗體檢測(cè)。

三、乙型肝炎病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)方法

四、其他肝炎病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)方法

第二十六章逆轉(zhuǎn)錄病毒

教學(xué)目的：

掌握人類免疫缺陷病毒的生物學(xué)性狀及檢驗(yàn)方法，熟悉其致病性特點(diǎn)。教學(xué)時(shí)數(shù)：4學(xué)時(shí)（理論3學(xué)時(shí)，錄象1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、人類免疫缺陷病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性與免疫性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1.標(biāo)本采集 2.檢驗(yàn)方法

二、人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒簡(jiǎn)介

第二十七章 皰疹病毒 教學(xué)目的：

掌握各種皰疹病毒的微生物學(xué)檢驗(yàn)方法，熟悉其致病性。教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)（理論1學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)1學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、單純皰疹病毒

（一）致病性

（二）檢驗(yàn)方法

三、水痘帶狀皰疹病毒

四、巨細(xì)胞病毒

（一）致病性

（二）檢驗(yàn)方法

五、EB病毒

（一）致病性

（二）檢驗(yàn)方法

第二十八章 其他病毒

教學(xué)目的：

掌握狂犬病毒的生物學(xué)性狀及微生物學(xué)檢驗(yàn)，熟悉其致病特點(diǎn)及防治原則。教學(xué)時(shí)數(shù)：1學(xué)時(shí) 教學(xué)內(nèi)容：

一、狂犬病毒

（一）生物學(xué)性狀

（二）致病性

（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)

（四）防治原則

二、人乳頭瘤病毒

第二十九章 朊粒

教學(xué)目的：

掌握朊粒的生物學(xué)性狀及微生物學(xué)檢查，熟悉其致病性特點(diǎn)，了解其發(fā)現(xiàn)過(guò)程。

教學(xué)時(shí)數(shù)：1學(xué)時(shí) 教學(xué)內(nèi)容：

一、朊粒的發(fā)現(xiàn)

二、朊粒的定義

三、朊粒的生物學(xué)性狀

四、朊粒的致病性

五、微生物學(xué)檢查

第五篇 微生物學(xué)檢驗(yàn)

第三十章 臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)與微生物商品化、自動(dòng)化檢驗(yàn)

教學(xué)目的：

掌握臨床標(biāo)本的采集原則、檢驗(yàn)程序及檢查方法。了解微生物鑒定和藥敏實(shí) 驗(yàn)的自動(dòng)化分析系統(tǒng)、血培養(yǎng)自動(dòng)化分析系統(tǒng)。教學(xué)時(shí)數(shù)：6學(xué)時(shí)（理論1學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)5學(xué)時(shí)）教學(xué)內(nèi)容：

一、臨床標(biāo)本檢查的一般原則

二、標(biāo)本的采集原則

三、檢查方法的選擇

四、常見(jiàn)臨床標(biāo)本的檢查

（一）糞便標(biāo)本的檢驗(yàn)

（二）尿標(biāo)本的檢驗(yàn)

（三）痰標(biāo)本的檢驗(yàn)

四、細(xì)菌耐藥性的檢測(cè)方法

五、醫(yī)院見(jiàn)習(xí)

六、SENSITRE微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)。

第三十一章 微生物學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

教學(xué)目的：

掌握微生物學(xué)檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的方法，熟悉室間質(zhì)控的評(píng)判方法及意義。教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí) 教學(xué)內(nèi)容：

一、概述

二、室內(nèi)質(zhì)量控制

（一）人員與組織管理

（二）操作手冊(cè)

（三）培養(yǎng)基

（四）試劑、抗血清和染液的質(zhì)量控制

（五）抗生素選擇與質(zhì)控

（六）儀器

（七）標(biāo)準(zhǔn)菌株

三、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)