第一篇：差熱分析在藥品質量研究中的應用范文

近年來，熱分析（Therma lanalysis，TA）廣泛應用于藥品、食品、化妝品、陶瓷、紡織、航天等眾多研究領域中，特別是在藥品質量研究過程中有其獨到之 處。據統計，在藥物研究領域中，熱分析的使用占10%~13%。不少國家已經把熱 分析方法作為控制藥品質量的主要方法，美國藥典、英國藥典、歐洲藥典與日本 藥局方均已經將其作為法定方法收載。我國的2005年版《藥典》首次將熱分析收 入，并規定有關的新藥申報資料中必須要有熱分析的檢驗報告，因此熱分析方法 引起了業內人士的日益重視。

那么熱分析具有什么樣的特點，一般都應用在哪些領域？在實際的應用中應 該注意哪些問題？近日，記者就這些問題采訪了中國藥品生物制品檢定所的楊臘虎主任。

■便捷靈敏 優勢突出

藥物在程序升溫的過程中，會表現出來熔融、晶態變化、分解等熱特征，對 進行分析從而得出相關結果的過程就是熱分析，這種方法可分為差時掃描量熱法（DSC）和熱重分析法(TG)兩種。在藥品質量研究中，熱分析一般用于晶型變化、熔點測定、相容性變化、最佳配方篩選、降解反應過程、水分以及揮發物質的檢

測等。

熱分析可以在較短的時間內獲得需要復雜技術的或者長期研究才能得到的各 種信息。這種方法使用樣品量少，并且具有靈敏、快捷的特點。例如，對于藥品 穩定性的測定，以前往往需要幾年的時間，而使用熱分析方法，在特定的溫度條 件下只要幾個月就可以了。

■應用范圍日益擴大

近年來，熱分析應用范圍不斷擴大，目前在化學藥品對照品、中藥化學對照 品、生物化學藥品、藥用高分子材料、藥用輔料以及納米材料方面都能發揮很好的作用。

熱分析在藥物多晶型測定，水分的測定、降解物和穩定性的測定以及最佳配 方篩選方面的應用尤其突出：藥物的多晶型直接關系到療效，所以有關研究日益 受到人們的重視，而熱分析是測定藥物多晶型最有效的手段之一。相對于目前常 用的紅外光譜分析與X線衍射測晶型方法，熱分析方法不但可以測定藥物的多 晶型，還可以測得其晶型是單向性晶型還是可逆性晶型。藥物多晶型形成因素復 雜，溫度、濕度和壓強的改變都可以導致晶型的轉變。通過熱分析，借助于相關 公式，可以進行晶型轉換的動力學計算，計算活化能和轉化速率。

藥物在合成過程中會殘留溶劑，可以用熱分析的方法檢測出來。熱分析方法 還可以檢測藥物中的水分，并判斷其為結合水還是吸附水或者結晶水。

根據熱分析的數據，可以判斷藥物的降解產物與穩定性，對新藥研究與藥物 的再評價具有重要意義。熱分析方法可以用于多種反應動力學研究，來反映藥品 的穩定性。例如，檢測藥物與賦行劑之間的有否化學以及物理反應是一個長期的 穩定性實驗，熱分析可以大大加速它的進程。

根據熱分析相圖，可以找到藥物的最佳配方，國外的新藥研究中常用此法。

另外，在生物制品方面，熱分析對細胞的相變、結晶水的測定、細胞分裂生 長速度的測定，熱分析能夠起到很好的導向作用。

第二篇：幸福感研究在企業管理中的應用

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

齊 齊 哈 爾 大 學

畢業設計（論文）

題 目： 幸福感研究在企業管理中的應用

學 院： 教育與傳媒學院

專業年級：

學生姓名：

指導教師：

成 績：

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

年 月 日

摘 要

目前，隨著社會和經濟的快速發展，人們對于生活質量的要求也在不斷提高，不再是以往的僅停留在物質生活方面，目前目光更多的集中在精神生活層次。積極心理學也應運而生，幸福感是積極心理學中重要的研究領域。首先，本文通過對幸福感理論的研究，重點研究它的主要方面，即主觀幸福感，闡述主觀幸福感的含義、和特點；其次，介紹主觀幸福感的研究內容、理論模型以及影響因素；最后將主觀幸福感理論研究與管理思想相結合，應用于企業管理的實踐中，針對其影響因素，提出對人力資源管理方面的一些建議，以期為企業進行人力資源工作提供參考和依據。

關鍵詞： 幸福感 主觀幸福感 企業管理 人力資源

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

Abstract

Now, with the rapid social and economic development, people's requirements for quality of life is improving, no longer the only remain in the material life, the current attention focused on the spiritual life more level.Positive psychology has come into being, happiness is an important positive psychology research.First, this paper studies the theory on happiness, focusing on its main aspects, namely the subjective well-being to explain the meaning of subjective well-being, and characteristics;second, introduced SWB research, theoretical models, and influencing factors;finalthe theory of subjective well-being of combining research and management thinking, applied to the practice of business management for the factors affecting the management of human resources a number of recommendations to human resources for the enterprise to provide information and evidence.Key words: Happiness Subjective Well Being Human Resources Management

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

目 錄

摘要 ………………………………………………………………………………Ⅰ Abstract…………………………………………………………………………Ⅱ

一、緒論……………………………………………………………………………1

（一）選題背景及意義??????????????????????

（二）本研究價值????????????????????????

二、幸福感與主觀幸福感……………………………………………………………

（一）幸福感的含義及研究現狀???????????????????

（二）主觀幸福感????????????????????????? 主觀幸福感的含義?????????????????????? 2 主觀幸福感的研究現狀???????????????????? 3 主觀幸福感的相關理論????????????????????

（1）人格特質理論???????????????????????

（2）目標理論?????????????????????????

（3）判斷理論?????????????????????????

三、主觀幸福感與員工工作滿意度的關系…………………………………………

（一）主觀幸福感與員工滿意度???????????????????

（二）主觀幸福感與工作績效????????????????????

四、幸福感研究在企業管理中的應用及案例分析…………………………………

（一）影響企業員工主觀幸福感的因素???????????????? 主觀因素?????????????????????????? 2 客觀素???????????????????????????

（二）激勵措施??????????????????????????

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）建立積極的管理理念 ????????????????????? 進行入職測評 了解企業員工的人格特質????????????? 3 建立公平具有激勵性的薪酬制度????????????????

幫助員工完善其職業生涯規劃?????????????????

建立輕松良好的工作家庭關系?????????????????

提高員工的組織和職業的認同感????????????????

（三）具體案例分析???????????????????????

五、研究的不足與展望…………………………………………………………… 參考文獻…………………………………………………………………………… 致謝…………………………………………………………………………………

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

一、緒論

（一）選題背景及意義

社會在不斷進步，經濟在飛速發展，人們在關注物質資料豐富的同時，更加注重精神層面的幸福。幸福感，成了越來越多的人關心的話題。在心理學意義上的幸福感不僅僅是個名詞，更演變為一個心理學術語，用來衡量一個人的幸福程度，是個體對客觀存在的積極的主觀反映。幸福感，作為積極心理學最為重要的研究領域，對人們的工作、學習和生活都有著十分重要的影響。因此，對于幸福感的研究顯得尤為重要。

隨著人們思想的改變與進步，企業在管理中也由過去注重效率，看重結果的死板模式，轉變進而加強了對于人本身的關注。研究者們對于員工的理解從以往的“經濟人”假設轉變為“社會人”假設，近期也有學者提出“自我實現人”假設。幸福感正是針對人的內心體驗和感知進行的研究，在現在企業管理中有著十分重要的意義。

（二）本研究的價值

心理學中對于幸福感的研究，主要研究人們的幸福感指數；把有關幸福感研究的理論引入到企業管理的應用實踐中，對于心理學理論研究和企業管理的實踐都具有重要的意義。許多專家學者通過研究證明幸福感相對于工作滿意度更能影響員工的工作積極性和工作績效。由此可見，有關幸福感的研究在企業管理中十分重要，尤其在人力資源規劃方面表現更為突出。這樣的研究對于心理學，特別是積極心理學是一種研究領域的創新和嘗試，而就企業而言，幸福的員工在工作中的表現是最好的，對于績效的提升、企業的進步與發展都有益處。

雖然人們在進行幸福感評價時使用的是自定的標準，在評價標準上可能存在差異，但是幸福感本身具有相對穩定性。所以，通過對幸福感的理論研究，并將其應用于企業管理中，分析影響員工幸福感的因素，采取相對性的措施對員工的幸福感進行干預，可以影響員工的幸福感，進而對工作績效產生影響，引起變化。但是，不同的文化背景、社會條件等對員工的幸福感有著不同程度的影響，而且不同群體的影響因素也不盡相同，所以有必要進行更加深入的探索和研究。

所以本文將通過對于理論的分析、歸納和總結，結合當前已有的國內外先

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

進的研究成果，將幸福感理論研究同企業管理的實踐相結合，找到兩者的契合點，為我國企業提升員工的幸福感提出一些建議，同時為企業人力資源部門進行人力資源規劃時提供參考和依據。

二、幸福感與主觀幸福感

積極心理學(positive psychology)是當代心理學的兩個最新進展之一[1]。積極心理學是與過去消極心理學(pathology psychology)相對的，旨在糾正過去心理學只關注病態心理、去除消極情感的傳統。積極心理學學者一致認為，積極情感并不完全是消極情感的對立面，幸福并不等于沒有心理疾病。在這種心理學時代精神的倡導下，幸福感毋庸置疑的成為了積極心理學重要的研究領域，因為，其直接反映了人類追求美好生活的愿望。幸福是人人都向往，但是卻很少有人能闡釋清楚具體什么是幸福，這也是眾多研究者努力要弄清的問題。幸福感是積極心理學的重要研究領域，西方對于幸福感的研究主要可以分為主觀幸福感和心理幸福感兩大傳統，這兩種傳統分別源于兩種不同的哲學體系建立的。其中主觀幸福感是幸福感研究最重要的方面，也是研究者們最重視的主要方面。主觀幸福感以快樂論為基礎，認為幸福由高興和快樂組成[ 2]。主觀幸福感專指評價者根據自定的標準對其生活質量的整體性評估，對于主觀幸福感的操作性定義，大多數研究者認同主觀幸福感由三部分組成：積極情感、消極情感和生活滿意度。

（一）幸福感的含義及研究現狀

心理學意義上的幸福感，主要是指人們對自己的生活狀況進行整體的評價，并由此而產生的積極性情感占優勢的心理狀態，是人類個體認識到自己需要得到滿足以及理想得以實現時而產生的一種情緒體驗，是有需要、認知、情感等心理因素與外部誘因的交互作用形成的一種復雜的、多層次的心理表現。當個體處于幸福感體驗中時，其體驗到較多的愉快和較少的不快，從而提高人們的工作、學習和生活的效率。幸福感是人們對客觀現實的主觀反映。它既同人們生活的客觀條件密切相關，又體現了人們的需求和價值取向。一方面，幸福感不能脫離幸福的生活事件而存在，它具有客觀性；另一方面，幸福的生活事件只有被個體感知和體驗才有意義，它又具有主觀性。

幸福感的研究興起于20世紀50年代的美國。經過50多年的發展，關于幸福感的研究大致經歷如下三個階段：第一階段是以外界標準界定的幸福感。該階段判斷幸福感的標準是以研究者的角度來界定的，只強調外在的判斷，忽略研究對象本身的個人感知和內心體驗。第二階段是以個體的內在情緒體驗作為判斷標準的幸福。這種觀點雖然已經將對于幸福感的理解提升到主觀體驗的高度，但是由于對幸福感組成各個部分關系的研究不充分,具有一定的局限性。第三階段以個體的主觀體驗作為界定幸福感的標準。這種觀點強調幸福感是評價者依據自己的標準對其生活質量的一種整體評價，本論文關于幸福感的研究就是基于這一理論。

幸福是人們快樂的心理體驗，屬于主觀意識范疇，隨著人們自己的主觀感覺體驗的變化而變化。主觀幸福感是幸福感研究的一個主要方面，近五十年來

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

積極情緒領域研究的重點都集中在主觀幸福感上。本文以主觀幸福感為主要研究對象進行深入探討，闡述其含義、理論模型及影響因素，將對主觀幸福感的研究應用到企業管理的實踐中。

（二）主觀幸福感

1.主觀幸福感的含義

主觀幸福感是評價者根據自定的標注對其生活質量的整體性評估。它是一種主觀的、整體的概念，同時也是一個相對穩定的值，是評估長期的情感反應和生活滿意度。主觀幸福感將幸福等同于對生活質量的評價，把幸福感還原為生活質量，認為幸福是對當前和過去生活的評估。在心理測量中，常用主觀幸福感作為反映某一種社會中個體生活質量的重要心理學參數[3]。從結構上講，它包含三方面的內容：積極情緒，如愉悅、高興、快樂、興奮等情緒體驗；消極情緒，如抑郁、憂慮、厭煩、傷心等情感體驗；認知評價，即對于生活滿意程度，指個體建構出一個與自己相吻合的標準，并將生活的諸多方面作為一個整體來評定自己的滿意感程度。Diener認為幸福感概括的講具有三個明顯的特點：（1）主觀性。幸福感的評定主要依賴于個體本人設定的標準，而不是他人或外界的標準，一個人是否覺得幸福只有自己的內心體驗最為真實準確，因此幸福感具有極強的主觀性。（2）整體性。幸福感是一種綜合評價，它包括對情感反應的評估和認知判斷，既包括正向情感、負向情感和生活滿意度三個維度，反映的是個體作為整體的主觀評價，是一種綜合性的心理指標，所以具有綜合性。（3）相對穩定性。幸福感主要評定長期而非短期情感反應和生活滿意度，是一個相對穩定的參數。雖然在評定幸福感是會受到情景和情緒狀態的影響，其情緒水平會發生變化，但是長期的幸福感還是相對趨于穩定。

2.主觀幸福感的研究現狀

幸福是個古老的話題，伊壁鳩魯的倫理學說就認為：“快樂是生活的目的，是天生的最高的善，我們的一切取舍都應從快樂出發，我們的最終目的乃是得到快樂。”主觀幸福感這一概念是由Dodge 在20 世紀30年代提出的,對主觀幸福感進行研究開始于20 世紀50 年代的美國。其研究背景主要有兩個方面,一是二戰后美國人民生活水平的不斷提高, 二是健康心理學的崛起。由于主觀幸福感是社會進步的深層尺度,即社會的進步表現在政治、經濟、文化的進步,但是最終要回歸到人的心理層面。20世紀60年代，當時威爾森（W.Wilson）發表了他的博士論文：《自稱幸福的相關因素》[4]，這是第一篇關于主觀幸福感科學研究的文章。該文指出了主觀幸福感個體差異的兩個理論假設：一是如果需要能夠及時得到滿足，將產生快樂；如果需要總是得不到滿足，將導致消極情緒的出現；二是個人的期望水平決定了需要滿足到何種程度能夠帶來快樂，價值觀、過去的經驗、與他人的比較等其他因素對此都有影響。1984年，Diener區分了影響主觀幸福感的外部與內部因素。早期理論建構重點在于證明外部因素如事件、情境和人口統計項目等是如何影響主觀幸福感的。這一理論是基于威爾森的第一個理論假設。許多研究支持這一理論，但是有更多的研究表明外在、客觀的變量對主觀幸福感的影響相當小，人口統計項目只能解釋主觀幸福

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

感不足20%的變化，外在環境只能解釋主觀幸福感變化的15%[5]。由于外部因素影響較小，研究者們將視線轉移到內部因素的研究中，及威爾森的第二個假設：個人內部建構決定生活事件如何被人所感知，進而影響個體的幸福體驗。綜合來講，西方心理學對于幸福感的研究主要分為三個階段：第一，描述性研究階段。這一階段的時間是從20世紀50年代開始一直到70年代。在此階段各研究定義了幸福感的緯度，Andrews和Withey（1976）認為主觀幸福感同時包括認知和情感兩個維度；包括三個基本成分：積極情感、消極情感和生活滿意度[4]。后來的研究認為消極情感和積極情感并不是同一緯度相對的兩端，而是兩個相對獨立的維度。另外，這一階段的大部分研究側重于影響幸福感的外部因素如生活事件、情境和人口統計項目等是如何影響幸福感的。第二，理論建構階段。20世紀70年代，幸福感的研究進入了理論建構階段。隨著對主觀幸福感理論構成的觀點逐漸統一，研究者們開始把研究方向從研究幸福感的構成轉向了研究影響幸福感的因素。早期對于幸福感的研究主要集中在討論影響幸福感的客觀因素上，著眼于性別、年齡、收入、教育程度等人口統計變量、情境及婚姻狀況等對幸福感的相關性研究。而結果發現，這些對于幸福感的影響較小。隨后對于幸福感的研究集中到了影響幸福感的主觀因素，主要是人格特征方面。在理論建構階段，由于研究角度不同，形成了各種流派和觀點。主要有狀態理論、人格理論、判斷理論、目標理論、活動理論、動力平衡理論等。第三，實證性研究階段。自20世紀90年代以來，幸福感研究的重點集中在對幸福感的測量，探討如何提高人們的幸福感。對于幸福感測量的研究方向主要有兩種：一種是對生活質量意義上的幸福感測量，這類研究將幸福感定義為人們對自身生活的滿意程度的評價；另一種研究取向是心理健康意義上的幸福感測量，它與積極心理學和健康心理學密切相關。近年來，心理學研究者開始運用幸福感的測量理論來整合各種方法，并開展了大規模的跨文化研究。

我們國家是在上世紀八十年代，才開始興起針對幸福感的研究，大多是綜述性的研究，主要是對國外研究進行介紹、整合，實證研究還處于逐步開展的階段。從理論建構上看我國學者多數認同Diener等學者提出的幸福感的概念。在幸福感測量方面，我國學者現在有的研究主要使用引進的測量幸福感的量表。現今比較流行的測量量表有生活滿意度量表、費城老年中心信心量表、總體幸福感量表以及情感量表等。這些量表在我國都得到了廣泛的應用，為我國幸福感的研究作出了很大的貢獻。

3.主觀幸福感的相關理論

由于針對主觀幸福感研究的角度不同，形成了各種不同的觀點，概括地說有以下幾種：

（1）人格特質理論

主觀幸福感是一種主觀的心理體驗，客觀的外界因素往往是通過主觀加工而起的作用。不同的人對相同的外在條件可能會產生不同的幸福感，其主要原因就是人格特質的差異。人格因素如果說不是SWB 最好的預測指標至少也是最可靠最有力的預測指標之一[6]，許多研究證實了這一點。

Heady發現[7] ：人格影響生活事件進而影響主觀幸福感。人格由于其內在

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）的人格結構作用，是一個長期影響的強烈因素。具有“幸福圖式”的人，對環境和生活事件傾向于以積極的方式來看待和處理，擁有更健康的情緒和更樂觀的期望，所以其幸福感水平相對而言較高。Gray 在20 世紀70 年代提出了預測內外向和神經情感易感性的理論。他認為人類有兩個動機系統: 行為抑制系統(通過懲罰調節行為)和行為激活系統(通過獎勵調節行為)。不同的人對獎懲的感受不同。外向的人對正性情感敏感, 非神經質及穩定性的個體對負性情感不敏感, 這兩類人的幸福感較高。Costa和McCrae（1982,1991）對于大五人格的研究是以人格五因素理論為指導，即外傾性、神經質、經驗的開放性、隨和性和盡責性[8]。研究表明[6]：外傾（E）與積極情感和生活滿意度有關，與負性感情無關，因而提高主觀幸福感水平；神經質（N）與消極情感穩定的相關，從而降低主觀幸福感。隨和性和盡責性通過創造使人快樂的環境及生活事件而影響這人們幸福感的體驗，與生活滿意度和積極情感存在顯著正相關，與消極情感存在顯著負相關[9]。Lucas, Diener, Grob,Suh和Shao的跨文化研究發現, 外向者對正性情感敏感, 非神經質及穩定的個體對負性情感不敏感。

（2）目標模型

Emmons發現，當實現其特定目標時，人們會產生積極情緒體驗。Oishi，Diener,Suh和Lucas認為目標是幸福感的調控裝置，人們的主觀幸福感取決于人們的目標以及價值取向[10]。所謂目標，就是個體行為的內在目標狀態，而價值，就是生活的取向原則，可以視為高層次的目標。目標理論所關注的核心是主觀幸福感的個體差異與發展性的變化。例如，將自己的人生價值定位于在工作崗位上實現自我價值的人，在工作中得到發展，發揮潛能時會感到幸福感；喜歡物質獎勵的員工，發獎金一定是最好的激勵辦法。

目標理論認為主觀幸福感產生于需要的滿足和目標的實現。目標模型的基本假設是：目標和價值取向決定人的幸福感，是人們獲得與維持主觀幸福感的主要來源。個體目標與價值取向的差異是人們感受和體驗幸福感不同的主要原因[11]。目標是個人確定的標準和準則，反映了人們情感系統的參照標準，目標的達成程度影響人們的幸福感。目標的定義、實現目標的過程和目標的達成及目標的達成結果都影響個人情感和生活滿意度。同時目標必須與人的內在動機聯系在一起，當一個人能以內在價值和自主選擇的方式來追求目標并獲得一定程度的成功時，才能真正提高其主觀幸福感。生活中，目標使人感到生活的意義，并產生自我效能感。同時，努力實現目標的過程幫助人們有效地應對各種日常生活問題，使人在社會和困境中保持良好狀態。目標通過自我效能感這一中介變量來影響幸福感。成功的體驗將使人更加自信，建立強大的自我效能感，從而提高人們的主觀幸福感體驗。

目標理論還有一個重要假設：，目標與個人生活背景相適應，才能提高主觀幸福感水平。生活背景重要組成部分之一就是個人生活的文化背景。Cantor和Sanderson認為：當個人實現被其文化或亞文化高度評價的目標時，主觀幸福感會增加；文化影響人們選擇個人目標，從而成為影響主觀幸福感的因素之一[12]。造成人們主觀幸福感的情緒體驗差異的特殊文化維度是：個人——集體主義。對于主觀幸福感的跨文化研究顯示，集體主義文化鼓勵群體成員相互支持和依賴，在群體中保持和諧的人際關系，強調社會責任感。因此，集體主義文化中個體的主觀幸福感更多的取決于和諧的人際關系、社會職責的完成和期

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

望的實現；而個人主義文化中的個體的主觀幸福感往往來自于自尊、自豪感以及個人目標的達成。

（3）判斷理論

Michalos（1985）借用古希臘哲學家、Wilson和Campbell等人的主張，提出滿意度的多種差異：個人與多種標準（過去情況、期望值、他人、滿意感理想水平、目標或需要）作向下（比較標準低于現實條件）和向上（比較標準高于現實條件）比較必然產生差異，向下比較主觀幸福感水平提高，反之則降低。判斷標準主要有以下兩種：一是社會比較理論，Wood在1996年將社會比較定義為：“想到與自我有關的友好或多個他人的信息的過程”。社會比較過程包括三個內容，即獲得社會信息、思考或比較社會信息和對社會比較作出的反應，包括認知、行為和情感反應；二是期望值理論，Wilson（1967）指出高期望值對感知幸福感是一個主要的威脅。現今的觀點一般認為：期望值和實際成就之間的差異與主觀幸福感有關，高期望值與個體的實際差距過大會使人喪失信心和勇氣；期望值過低會使人感到厭煩。期望值本身并不是衡量主觀幸福感的好的預測指標，而期望值、現實條件與個人內在資源（外貌、氣質等）和外在資源（經濟狀況、社會關系、地位等）是否一致，可以作為主觀幸福感的預測指標。[13]

三、主觀幸福感與員工工作滿意度的關系

工作滿意度是人們在工作過程中形成的一種主觀上的心理感受式意識形態，實質上是態度問題。工作滿意感是指個體對所從事的工作的滿意程度，是人們對所從事工作的感情反應，它受個人價值取向的影響，每個員工對此都有自己的評判標準。人們普遍認為，提高員工的工作滿意度可以提高工作熱情，提升工作效率，降低員工流失率，進而增強企業的競爭力和實力。因此，企業在進行人力資源工作中對如何讓員工提升對工作的滿意度十分重視。之前的研究將主觀幸福感與工作滿意度相等同，這樣的看法有失偏頗。工作滿意度高的員工不一定是快樂的，因為，除了工作還有很多因素在影響著主觀幸福感，簡單的將兩者畫上等號是不太合理的。

（一）主觀幸福感和員工滿意度

工作滿意度是個體對所從事的工作環境因素的滿足感的內心體驗，是對工作情景的主觀反映。主觀幸福感是個體依據一定的標準對其生活質量的整體的綜合性的評價，也是一種主觀的心理感覺。主觀幸福感由認知成分和情感成分兩部分構成。認知成分指的是生活滿意度，情感成分包含積極情感和消極情感。其中積極情感包括生活和工作領域滿意、快樂、愉快這些積極的情感體驗。兩者都是個體的內心情緒的體驗，不同的是，工作滿意度僅僅只涉及工作領域內的情感；而主觀幸福感不只包含工作方面的情緒，還有生活、人際關系、社會文化等方面的情緒情感體驗，工作滿意度確實可能在一定程度上影響員工的情緒進而影響員工的工作熱情和工作績效。但是，個體的情緒情感還可能受到更多方面的影響，所以說，工作滿意度是主觀幸福感的一個方面。

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

（二）員工主觀幸福感與工作績效的關系

一個人的情緒情感勢必要影響他生活的全部，其中當然也包括工作。有證據表明主觀幸福感較高的工作者相比主觀幸福感較低的工作者，更加具有優勢。主觀幸福感體驗較多的人，更容易產生積極情緒，更能夠樂觀的理解生活情境和環境因素，他們相對于主觀幸福感較低的人更具有活力和熱情。在工作中，更容易贏得面試，更多的受到上司的表揚，更多的晉升機會，也比較少出現工作倦怠。Cropanzano、Wright和Staw的研究說明了工作幸福感和工作績效不但顯著相關，而且前者對后者具有影響作用[14]。還有學者認為快樂之所以能夠在工作中發揮積極的作用，是因為積極的情感對于人的生理、智力和社會資源等方面具有拓展作用，這些資源的豐富可以讓人增加面臨威脅的勇氣和信心，激勵人們更好的抓住機遇，富有熱情，進而影響并提高工作績效，增加公民的組織行為，降低消極情感出現的頻次，以及缺席率和離職率。

四、幸福感研究在企業管理中的應用及案例分析

（一）影響企業員工主觀幸福感的因素

幸福感是人的主觀心理體驗，影響人們感知幸福感的主要因素有主觀和客觀兩方面。因為心理體驗是一種心理過程，與個體的主觀意識緊密相關，而且主觀幸福感的建立依賴于個體自己所構建的價值標準體系，它是隨著個人標準的不同而變化的。因此，個體的主觀因素對主觀幸福感的影響是不容忽視的。同時，主觀幸福感又是個體對客觀實在的主觀反映。這就說明主觀幸福感即是主觀的，也是客觀的，也不可避免的受到客觀因素的影響，如文化、社會環境等方面的差異。本文從主觀因素和客觀因素兩方面進行探討。

1.主觀因素

（1）人格特質

人格是人在社會化的過程中形成的思想、情感及行為的特有統合模式，包括個體獨立而穩定的特質或特點[15]。從一些研究的結果來看，人格特質一種有效預測主觀幸福感的重要因素。20世紀80年代，克斯塔（A.Costa）和麥克瑞（R.McCrae）發現，積極情感、消極情感和生活滿意感分別對應著人格特質中的神經質（N）和外傾（E）特質；這說明，與其他因素相比，就主觀幸福感產生的穩定性的特征來看更多的依賴與人格特質，還可以對十年甚至二十年的主觀幸福感進行預測。大五人格中的兩個特質對主觀幸福感具有重要影響。神經質和消極情感之間、外傾和積極情感之間分別有著不同的聯系，神經質的個體對消極情感的反應強于積極情感；而外傾的個體對積極事物的反應強于消極事物的反應，跟容易受到正面、積極的事物影響而產生積極的情緒體驗。除了上述的人格特質以外，已得到證實的與主觀幸福感相關的人格特質還有樂觀、自尊等。有研究者指出，樂觀者更加期待生活中出現有利結果而且會朝向自己設定的目標來努力，這種行為模式使得樂觀者比悲觀者更能夠順利的

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

達到目標；高自尊的個體更多的時候以積極的心態看待自己，同時高自尊個體傾向于改變情境，能夠更好的應對各類問題和困境，從而產生積極情緒，體驗幸福感。

（2）自我效能

自我效能是對行為操作能力的知覺和有關恪守自我生成能力的信念，人們通過它可以對技能進行權衡和判斷，也可以對自己的思想加以評價和改變[16]。1982年，社會學習論的創始人班杜拉最早提出了自我效能感這一概念，用以解釋在特殊情境下產生動機的原因，是指人們主觀判斷自己能否成功完成某一成就的行為。自我效能是個人對其工作能力的自我評估，是人們對在某一特定的情境中組織和運用行動的能力的信念，在形態上表現為個人因素、行為方式和環境因素三部分相互作用和影響的三段交互決定論模型[17]。國內佟月華、余鵬等的研究發現[18]，一般自我效能感、積極應對與主觀幸福感之間存在顯著正相關。說明一般自我效能感越高，以樂觀積極心態和行為方式對待生活事件的可能性就更高，因而對于幸福感的體驗就會更強烈，生活滿意度也會更多。

（3）心理控制源

有關主觀幸福感與心理控制源的研究，一般認為內控者相對于外控者的主觀幸福感較高些。如果人們認為不良的生活事件是不可控的，即心理控制源為外控者，則更容易產生消極情緒，從而降低幸福感體驗；內控者則能夠更好的針對消極事物采取應激辦法，通過改變情景來提升主觀幸福感。

2.客觀因素

（1）經濟因素

關于收入和主觀幸福感的相關研究的有兩個方面：國家內和國家間。國家內的許多研究發現，收入與幸福感相關呈正向。其原因是因為較高的收入和財富會帶來更高的權利、地位和物質享受，并隨之產生優越感，使高收入者幸福感體驗增加；國家間對于收入與幸福感相關的研究多數處于宏觀層面，一般將國際通用經濟指數作為國家財富的指標，主觀幸福感的水平則是國家平均水平，總體來說，富裕國家的人們幸福感水平較高。因此，在企業管理中，薪酬的設計和管理對于員工主觀幸福感的影響是不容忽視的。

（2）文化和社會支持因素

人不是獨立生活的個體，而是居住在不同的社會環境中，必然要受到不同社會文化背景的影響。在不同的文化中生活的個體，在生活滿意度、價值取向、情感體驗、判斷準則等方面存在差異。這就要企業在進行人力資源工作中，將文化作為影響員工主觀幸福感的重要因素考慮進去。例如在集體主義文化（如中國），人們較注重社會責任感、集體榮譽感、人際和諧等因素。社會支持是集體主義文化中衡量主觀幸福感的重要維度之一，有研究證實，在集體主義文化氛圍中，社會支持與主觀幸福感成正相關。

（3）工作和家庭因素

工作是人們生活的重要組成部分，其影響地位不容忽視。對于企業的員工，齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

工作包含了諸多可以影響主觀幸福感的因素，如工作性質、工作地位、工作報酬、同事關系、肯定與晉升的機會等。當員工在一個崗位上，感到充分發揮了自己的才干，同時得到了應有的物質回報和積極的情感體驗，其主觀幸福感就會較高。Meyer等人發現組織承諾與主觀幸福感的消極情緒因素存在負相關，主觀幸福感的認知因素和情感因素都對工作滿意度組織承諾有顯著作用[18]。家庭是伴隨每一個體成長的重要環境，家庭對與一個人主觀幸福感的影響從出生到死亡一直都存在。在嬰幼兒到青少年階段，家庭對于人格的形成和確立有著十分重要的影響，而人格又是影響主觀幸福感的重要因素。在工作家庭關系中，工作家庭沖突對于員工的主觀幸福感有負性影響；而工作家庭關系的積極方面會在一定程度上提升員工的主觀幸福感，而且這種作用是相互的，積極家庭因素和主觀幸福感是相互促進的關系。

（4）自我實現

美國心理學家馬斯洛提出了非常著名的需要層次理論，他認為人具有五個層次的需要：生理需要、安全的需要、歸屬和愛的需要、尊重的需要以及自我實現的需要。這五個層次逐步遞進的，自我實現是最高層次的需要。員工在工作中，為了實現自己的價值，會自我激勵保持良好的積極心態，追求更高的目標，充分發揮他們的潛能，在自我實現的過程中，感知和體驗幸福。反之，當員工看不到自己的前途，實現不了應有的價值時，會導致離職。

（二）激勵措施

理論的研究是為了實際應用而服務的。在針對影響企業員工主觀幸福感因素的研究中，可以看出企業可以從多個角度來影響和提升員工的主觀幸福感，進而提高其工作績效，更好地為企業創造利益和價值，增強企業的綜合競爭力和實力。下面從五個方面論述如何干預和影響員工的主觀幸福感。

1.建立積極的管理理念

個體選擇工作的一個很重要的原因是因為這項工作給他帶來相應的滿足感，不僅僅是金錢的回報，因此，在企業管理中，管理者應該建立積極的管理理念，改變以往認為只要有足夠的物質報償就可以讓企業員工為企業盡心盡力的傳統觀念，而將員工的主觀幸福感放在管理的第一位，把提升員工的主觀幸福感正是當代積極管理理念的核心。需要建立積極管理理念的當仁不讓的應是當代企業的管理者。作為當代的管理者，應該成為一位極有變革精神的領導。變革型領導概念是1978年伯恩斯（J.M.Burns）基于對各種政治領導人的類型進行描述性分析后，在其著作《領導力》中首次提出的[19]。所謂變革型領導就是指領導者通過員工意識到自己所承擔任務的重大意義和責任，并激發員工的高層及需求或擴展員工的需要和愿望，從而使員工為了團隊、組織和更大的政治利益超越個人利益[20]。變革型領導要將企業員工的需要和目標提升到一個更高的層次，通過領導者個人的信念、價值取向以及熱情來感染、激勵、鼓舞員工，促進員工優秀品質的充分發揮，提升員工的積極情緒體驗，進而提高其幸福感。

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

2.進行入職測評 了解企業員工的人格特質

人格特質是影響主觀幸福感的重要因素，不同的人格特質對于個體的工作態度與工作狀態有著不同的影響，對于相同的工作，不同人格特質的個體也會有不同的處理方式。不同性質的工作，要求的人格特質也不盡相同。如技術精密的工作對于外傾性特質要求較低；對于銷售工作，則要求外傾性特質較高的員工，善于并熱衷于人際交往。因此，在人力資源部門進行招聘以及人員工的分配上，對于人格特質的測評顯得尤為重要。

人格特質對于工作來講并無好壞之分，在人力資源管理工作中，讓合適的人處于適合的工作崗位上，才能發揮員工最大的潛能，把工作做好，員工也在工作中得到樂趣。所以，對于不同的工作進行區分，分析工作性質，找到并制定出相對應的更能出色勝任的人格特質模型。在招聘和分配的工作中，對個人的人格特質進行測評，將人格特質與工作性質進行匹配，找到最能勝任此工作的人格個體，進而激發員工最大的工作興趣和潛能，發揮最大的工作效能，實現績效的最大化。

3.建立公平具有激勵性的薪酬制度

前面已經闡述過收入對于員工主觀幸福感的影響，所以企業可以從薪酬的設計和管理上著手，提升員工的主觀幸福感。

完善的薪酬體系需要一個合理全面的績效考核體系作為基礎，方便對員工在其工作崗位上的行為表現和結果進行評價。合理的績效考核，不但能對每位員工對組織的貢獻和不足作出評價，監督員工的工作情況，還可以為薪酬制度的制定提供參考和依據，這對于提升員工士氣、工作績效，提高員工的工作滿意度具有非常重要的意義。所以，首先應當做的是建立合理有效的績效考核體系。薪酬是激勵員工的眾多方法中使用最為普遍也最為直接的一種。薪酬制定的方式不同，由此所產生的激勵效果也不相同。在制定薪酬制度時，應該注意以下兩點：第一是薪酬的激勵性。所謂薪酬，是指企業向員工提供的報酬，用以吸引、保留和激勵員工，具體包括：工資、獎金、福利、股票期權等[21]。從這一定義我們可以看出，薪酬對于員工主要有兩面因素：保健因素和激勵因素。保健因素是讓員工不會不滿意的因素，使員工不至于情緒低落；激勵因素是使員工滿意的因素，保持員工的工作積極性。因此，在設計薪酬體系時，應將重點放于激勵因素的設置，調動員工的工作熱情。第二是薪酬的公平性。在企業員工判斷薪酬的公平性時，通常會從三方面出發考慮：一是與他人比較。這包含企業內部的公平性和外部一致性，員工不僅會與企業內部和自己處于相同職位的人相比，還會和和自己從事相同工種的企業外部人員相比；二是與制度比較。員工要求企業薪酬制度公開透明，觀察管理的是否合理，是否具有可行性；三是與自我比較。員工會將自己過去的付出和收入相比較以產生公平感。當薪酬管理失去了公平性，薪酬就沒有了其應有的意義。

4.幫助員工完善其職業生涯規劃

自我實現與員工的主觀幸福感具有相互促進的作用，當員工實現自身價值

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

時，會產生幸福感體驗；而當員工具有高幸福感體驗時，會激勵自我去追求實現自我價值的目標。在工作中的成就感和自豪感對于員工主觀幸福感體驗的提升具有重要作用。據此，企業可以從自我實現的方面，提升員工的主觀幸福感。首先，企業可以通過對員工委以重任，提高其工作的成就感；其次，在授權方式上可以采取部分授權方式和完全授權方式，增強企業和員工之間的信任感、歸屬感和榮譽感，增加員工的積極情緒情感的體驗；最后，幫助員工完善其職業生涯規劃，為員工創造可能自我實現的條件，滿足其實現自我價值的需要，特別是針對優秀員工，做投資性的培養，有助于留住人才。

5.建立輕松良好的工作家庭關系

我國是崇尚集體主義文化的國家，在集體主義文化的氛圍中，和諧良好的工作家庭關系顯得尤為重要。工作和家庭是相輔相成的。在工作中，良好的同事關系和上下級關系、輕松愉快的工作環境，都有助于提升員工的主觀幸福感；家庭生活中，和諧和睦的家庭氛圍，容易積累積極情緒，對在工作中的表現有著積極的影響。企業可以加強對于員工的個性化關心，增強員工的歸屬感，讓員工以企業為家，增強工作的自主性。

6.提高員工的組織和職業的認同感

積極管理的管理理念強調增強員工的主觀幸福感的最終調節機制是組織和職業的認同感。在工作領域中的個人的認同感可以分為兩方面，即組織認同感和職業認同感。組織認同感就是員工對于組織的感知，并將組織的成功與失敗是為自己的成功與失敗[22]。職業認同感指的就是員工對于職業的感知，并在此基礎上產生的對于自己所從事職業的一種肯定的情感體驗。一般來講，在工作中擁有積極自我認同感的員工更可能會體會到主觀幸福感，所以，加強員工的組織和職業的認同感對于主觀幸福感會產生積極的影響。

（三）具體案例分析

理論服務于實踐，主觀幸福感作為一種積極的心態，提高員工的工作熱情和積極性，進而提升企業美譽度，贏得忠實的顧客群，創造工作績效的最大化。下面以“海底撈”火鍋為實際案例探討主觀幸福感研究在企業管理中的作用。將主觀幸福感應用于員工管理，考慮的主要是營造輕松的工作環境，培養員工的積極人格，從而讓員工在工作中產生幸福的情感體驗。通過為員工營造一種積極優越的環境中，企業可以幫助員工培養并維持積極的人格，有些情況下，員工甚至會自我激發并不斷維持積極人格，這樣最終能幫助員工形成積極的情感體驗，獲得主觀上的幸福感。相比較其他餐飲業一線員工而言，海底撈的員工有著非常優越海底撈管理層規定：所有員工都必須住在配有空調的兩居室、三居室，不能是地下室，而且距離店鋪的路程步行不能超過20 分鐘，因為太遠會縮短員工的休息時間。夫妻倆都在“海底撈”的，還必須考慮讓他們單獨住一個房間[23]。同時，海底撈致力于提高員工滿意度，采用關懷式管理，樹立員工與企業是一體的概念，采取人性化的管理。除了給員工提供優越的環境以外，在海底撈的內刊上，有這樣一句話：倡雙手改變命運之理，樹公司公平公正之風。它采取內部晉升制，并積極鼓勵每一位員工，因此每一位員工都

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

全心投入如何能更好的滿足顧客需求，為企業的發展獻計獻策[24]。同時公司給所有員工都買了保險，給了員工充分的安全和穩定感。正是海底撈這種積極的工作環境，一位進公司才一個多月的員工，有一次接受記者采訪時，臉上的笑容很由衷，“平時沒什么好擔心的，只要好好干就行了。[25]”

海底撈本著以人為本的管理理念，極力推行一種信任平等的價值觀。從為員工提供優越的生活條件到為員工購買保險等等，海底撈這個大環境中處處彌漫著“平等”、“信任”的氣息，因此孕育和培養了員工積極的人格，顧客從海底撈員工臉上讀到的都是發自內心的笑容。在優越、信任、平等的大氛圍下，海底撈的員工積極的工作，同時發掘著自身的潛能，為公司建言獻策，健康快樂地生活和工作。當別的餐飲店員工因為打破一個杯子而痛苦的面臨罰款時，海底撈的員工擁有為客人免單和送菜的權力；當別的餐飲店員工在工作時間不得私自離開工作崗位時，海底撈的員工有權力去超市買冰激凌送給顧客；當有些企業員工在軍事化的高強度管理下壓力重重甚至輕生時，海底撈的員工正快樂幸福地為下一個目標而奮斗，對他們而言，工作帶給他們積極的情感體驗，工作是一個自我展示的機會，工作帶來的是快樂和希望，他們從中感受到的是十足的幸福感。

通過積極心理學在海底撈員工管理中的應用分析，海底撈本著“人”這個關鍵詞出海底撈的員工在積極環境和積極人格的共同作用下，感受到了積極的情感體驗，從而認可公司，快樂工作，用自然的微笑、發自內心的微笑，將顧客當做親友般照料，為顧客提供了無與倫比的特色服務，從而譜寫了海底撈的神話。

五 研究的不足與展望

本文以前人理論為基礎，與管理思想相結合，從理論角度切入到企業管理的實踐中，未能從實證出發，對相關具體對象調查研究，沒有對幸福感研究在企業管理中的應用進行深入探討，使得本文缺乏一定的說服力。本文討論的主要是幸福感的主要研究方面，即主觀幸福感，對于心理幸福感沒有涉及，有待于今后研究的進一步展開。

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

參考文獻

[1]D.P.Shultz,S.E.Shultz.A History of Modern Psychology [M].Thomson ,2004.P.xvii(轉引自，任俊.積極心理學，上海教育出版社，2006:p.2)[2] D.Kahneman ,E.Diener ,N.Schwarz.Well-Being: The foundations of Hedonic Psychology[M].New York:Russell Sage Found.1999

[3] 汪向東，王希林，馬弘.心理衛生評定量表手冊[Z].中國心理衛生雜志，1999 [4] 程正方.現代管理心理學[M].北京師范大學出版社,2003 [5] Diener E ,Eunkook MS,Richard E et al.Subjective Well-Being:Three Decades of Progress.Psychology Bulletin,1999 [6] Diener E.Subjective Well-being[J].Psychological Bulletin,1984,95(3):542-575 [7] Heady B,Wearing A.Personality, Life events,and Subjective Well-being: Toward Equibrium Model.Journal of Personality and Social psychology, 1989.57(4):731-739 [8] Costa P T, McCrae R R.Influence of Extraversion on Subjective Well-being: Happy and Unhappy people [J].Journal of Personality and Social Psychology 1980,38(4):668-678 [9] Ruiz VM.The Five Factor Model of Personality, Subjective Well-being, and Social Adaptation [J].Generalizability to the Spanish context.2005,96(3):863-866 [10] Diener E,Robert Biswas-Diener New Direction Subjective Well-Being Reseasrch[J].Indian Journal of Clinical Psychology,2000 [11][12] 吳明霞.30年來西方關于主觀幸福感的理論發展[J].心理學動態,2000,4:23-28 [13] Diener E,Fujita F.Resources,Personal Strivings and Subjective Well-being:A Nomotheic and Idiographic Approach.Journal of Personality and Social Psychology,1995,68(5):926-935

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

[14] 張惠,戴兵.主觀幸福感和工作績效的關系研究綜述[J].商場現代化,2007,6 [15] Ryff, C D.The structure of psychological well-being revisited[J].Journal of Personality and Social psychology ,1995,69:719-727 [16] Bandura A.Self-Efficacy: The Exercise of Control.New York[J], Freeman, 1997,133-134 [17] Bandura A.Self-Efficacy: Toward a Unifying Theory of Behavioral Change[J].Psychological Review, 1997, 84:192-215 [18] Meyer J P, Allen N J.Links between work experiences and organizational commitment during the first year of employment: a longitudinal analysis[J].Journal of occupational psychology, 1986,(2):195-209 [19] Burns J M.leadership [M].New York：Harper&Row,1978 [20] Bass B M.Theroy of Transformational Leadership Redux[J].The leadership quarterly, 1995, 6(4):463-478 [21] 彭劍鋒.人力資源管理概論[M].復旦大學出版社.2009,P371~P435 [22] Mael F, Ashforth B E.Alumni and their alma mater: A partial test of the reformulated model of organizationgal identification[J].Journal of Organizational Behavior, 1992,13:103-123 [23] 丁曉磊.“海底撈”紅火沒秘密.人民文摘,2009,3:38-39 [24] 楊婧姝.淺談餐飲業的服務營銷 —以海底撈火鍋店為例[J].網絡財富，2008，（08）

[25] 李瑛.海底撈的商業模式.IT 經理世界.2008，（16）

[26] Andrews.F.M.&Withey.S.B.(1976).Social indicators of well-being.New York:Plenum Press,1976

[27] 蔣云根.組織行為的心理分析[M].東華大學出版社, 2003 [28] 王賽男, 等.變革型領導、組織集體效能、工作態度關系研究綜述[J].現代管理科學,2006, 9:24-25 [29] 李超平, 等.變革型領導、家長式領導、PM里理論與領導有效性關系的比較研究[J].心理科學, 2007, 30(6):1477-1481 [30] 佟月華.大學生一般自我效能感、應對方式及主觀幸福感的相關研究[J].中國學校衛生,2004,25:396-397 [31] 苗元江.幸福感的解釋模型綜述.贛南師范學院學報,2002,5:33-36 [32] 高良,鄭雪.當代西方幸福感研究的問題與方向.自然辯證法通訊,2009,1:84-87 [33] 李焰,趙君.幸福感研究概述.沈陽師范大學學報（社會科學版）,2004,2:22-26

齊齊哈爾大學畢業設計（論文）

致謝

論文如期完成，特此感謝我最尊敬最親愛的的導師侯女士。在這四年里，學習上是我指點迷津的良師，生活中是無私關懷的益友，謝謝您這四年的教誨，我會銘記于心。感謝教育與傳媒學院的老師和同學們，你們讓我在他鄉依然感到溫暖。我還要真誠的謝謝我的父母，是你們的愛讓我一路前行。

第三篇：激光共聚焦顯微鏡在細胞骨架研究中的應用

激光共聚焦顯微鏡在細胞骨架研究中的應用

摘要

隨著生物技術研究的不斷發展，對觀察細胞形態所使用的儀器要求也越來越高，普通光學顯微鏡已經無法滿足研究的需要，激光共聚焦顯微鏡的產生從一定程度上彌補了光學顯微鏡的不足。激光共聚焦顯微鏡具有分辨率高、靈敏度高、放大率高等優點，使得它在形態學、分子細胞生物學，神經科學、藥理學、遺傳學等領域研究中成為有力工具。本文就其在細胞骨架的研究方面做一簡要綜述。關鍵詞

激光共聚焦顯微鏡

細胞骨架

Laser Scanning Confocal Microscope in the study of cell skeleton

Abstract With the development of biotechnology research, instrumentation requirements for cell morphology was observed being used increasingly high, ordinary optical microscope has been unable to meet the needs of the study, the generation of laser scanning confocal microscope optical microscope to make up to some extent from the inadequate.Laser scanning confocal microscope with high resolution, high sensitivity, magnification advantages, making it a powerful tool in the research field morphology, molecular cell biology, neuroscience, pharmacology, genetics, etc..In this paper, a brief overview of their research in the cytoskeleton.Keywords confocal microscopy cytoskeleton

所謂激光共聚焦顯微鏡(Laser Scanning Confocal Microscope，簡稱LSCM)與傳統顯微鏡相比，它具有分辨率高、靈敏度高、放大率高等優點，可以在細胞水平上進行多種功能的測量和分析，得到具有三維清晰度的原色圖像，而且它還可以處理活的標本，不會對標本造成物理化學特性的破壞。隨著軟件開發和應用技術的不斷完善，激光掃描共聚焦顯微鏡已成為形態學、分子細胞生物學，神經科學、藥理學、遺傳學等領域中新一代強有力的研究工具[1-2]。

正是由于激光共聚焦顯微鏡在細胞學中有很大的應用范圍，本文就其在細胞骨架方面的研究做一簡要綜述。

1.LSCM的原理

1.1普通光學顯微鏡的原理

普通光學顯微鏡的成像系統由產生物像的光學系統(目鏡和物鏡)、照明系統和機械支架三部分組成。其中目鏡和物鏡都是具有放大成像功能的凸透鏡。顯微鏡的放大倍數與每個凸透鏡的放大倍數密切相關。

當物體與物鏡的距離小于焦距時，在物體的同一側形成的是正立放大的虛像。當物體與物鏡的距離在1—2倍焦距之間時，在物鏡的另一側形成倒立縮小的實像。所觀察的物體位于物鏡的焦點的前方(1— 2倍焦距之間)，在物鏡的另一側形成一放大、倒立的實像于目鏡焦點以內(即在目鏡的單倍焦距內)，此物像通過目鏡的再次放大，得到虛像。此物像比眼睛直接看到的物體AB要大得多，所以使用顯微鏡可以看清非常微小的物體[3]。

不過顯微鏡的分辨率受到一些物理因素的影響，主要有球差和色差兩個方面。所謂球差，是由于透鏡不能把近軸光線和遠軸光線在光軸上共聚焦。以至透過標本一點的光線通過透鏡后，不能聚焦成一點，而是形成一個光斑，從而使成像模糊不清。所謂色差，是由于顯微鏡對不同顏色的光線具有不同的折射率造成的。因為不同顏色的光具有不同的波長，透鏡類似于三棱鏡，對不同顏色的光線具有不同的折射率。所以光線透過透鏡后。不同顏色的光聚焦在不同點上，從而使成像模糊，而且像的邊緣尚帶有色彩。1.2 LSCM基于光學顯微鏡的改進[4] 1.2.1用激光做光源

因為激光的單色性非常好，光源波束的波長相同，從根本上消除了色差。1.2.2采用共聚焦技術

在物鏡的焦平面上放置了一個當中帶有小孔的擋板，將焦平面以外的雜散光擋住，消除了球差；并進一步消除了色差。1.2.3采用點掃描技術

將樣品分解成二維或三維空間上的無數點，用十分細小的激光束(點光源)逐點逐行掃描成像，再通過微機組合成一個整體平面的或立體的像。而傳統的光鏡是在場光源下一次成像的，標本上每一點的圖像都會受到相鄰點的衍射光和散射光的干擾。這兩種圖像的清晰度和精密度是無法相比的。

1.2.4用計算機采集和處理光信號，并利用在共聚焦顯微鏡中，計算機代替了人眼或照相機進行觀察、攝像，得到的圖像是數字化的，可以在電腦中進行處理，再一次提高圖像的清晰度。而且利用了光電倍增管，可以將很微弱的信號放大，靈敏度大大提高。1.3 LSCM 的原理[5-7]

LSCM是在熒光顯微鏡成像的基礎上加裝了激光掃描裝置，使用紫外光或可見光激光熒光探針產生信號，并利用計算機進行圖像處理，獲得高分辨率、高質量的圖像的顯微鏡。LSCM主要由激光光源、掃描器（內裝有針孔光欄、分光鏡、發射熒光濾光片及檢測器）、熒光顯微鏡（裝有微量步進電動機）系統、光學裝置、計算機存儲與處理及控制系統等部分組成。通過針孔成像作用，還可以對樣品進行直接無損傷的光學斷層掃描，進而實現立體結構的三維重建以及空間結構和熒光強度信息。

傳統的光學顯微鏡使用的是場光源，標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射光或散射光的干擾；激光共聚焦顯微鏡利用激光束經照明針孔形成點光源對標本內焦平面上的每一點掃描，標本上的被照射點發射的熒光在探測針孔處成像，而來自該點以外的任何發射熒光均被探測針孔阻擋，由探測針孔后的光電倍增管逐點接受，在計算機監視器屏幕上形成熒光圖像。所以照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的，也就是說照明針孔與探測針孔具有共同的焦平面。在載物臺上加一個微量步進馬達，使載物臺沿垂直方向(Z軸)上下步進移動，將樣品新的一個層面移到焦平面上，這個層面又成像在顯示器上，隨著z軸的不斷移動，就可得到樣品不同層面連續的光學圖像，實現“光學切片”的目的，被形象地稱為顯微“CT”，在此基礎上計算機系統自動進行三維重建。

與此同時LSCM也是活細胞的動態觀察、多重免疫熒光標記和離子熒光標記觀察的有力工具。

2.激光共聚焦顯微鏡在細胞骨架研究中的應用

2.1激光共聚焦顯微鏡在活細胞的細胞骨架研究中的應用

微絲（microfilaments，MF），又稱肌動蛋白纖維（actin filament），是真核細胞中由肌動蛋白（actin）組成，直徑7nm的骨架纖維。參與細胞內的多種生理活動，如胞質流動，肌肉收縮，細胞分裂，細胞顆粒的運輸等，維持細胞的形狀，參與細胞頂端生長，細胞壁構建，細胞器定位等[8]。

微絲骨架通常是通過迅速的聚合解聚來調整和改變其形態，從而在細胞執行各種功能及應對外界刺激時維持細胞正常的生理活動。細胞中的微絲骨架的動態變化直接受肌動蛋白結合蛋白（actin-binding proteins, ABPs）的調節。ABPs 通過與單體肌動蛋白（G-actin）或絲狀肌動 蛋白（F-actin）結合，調節二者之間的動態平衡，進而調控微絲骨架的組織和功能。ABPs 的活性又受諸多其他因素的調控，諸如 Ca2+、pH、磷酸化等等，因此微絲骨架能通過 ABPs 對細胞內外信號作出的反應，從而參與細胞內的各種生理活動[9]。

細胞內微絲骨架是高度動態的網絡結構，采用合適的標記探針對體內的微絲骨架進行標記、獲得可視化效果強的圖像，是研究體內微絲骨架形態結構及動態變化的重要前提。隨著發光蛋白的發現，植物體內微絲骨架的標記方法也從利用微絲的特異性藥物向著構建發光蛋白與某種可以特異結合微絲的蛋白或肽段構成的融合蛋白方向發展。Kost等人最先使用 GFP 與小鼠 talin 蛋白 C 端的肌動蛋白結合結構域構成融合蛋白（GFP-mTn）在植物體內標記微絲[10]。隨后，Timmers 將GFP與一種微絲結合蛋白——擬南芥絲束蛋白1（AtFIM1）構成融合蛋白（GFP-AtFIM1）用于標記微絲[11]。

也正是由于這些發光探針的使用，結合激光共聚焦顯微鏡的使用，才使得對于細胞骨架系統的研究越來越透徹，一步步揭示出細胞骨架的奧秘。2.2激光共聚焦顯微鏡在凋亡細胞研究中的應用

近年的越來越多的研究顯示，微管在細胞凋亡過程中也起著非常重要的作用[12-13]。細胞凋亡(apoptosis)是不同于細胞壞死的一種細胞主動死亡方式，并由特定的基因控制。凋亡細胞在形態上出現變圓皺縮、染色質濃縮邊集、核碎裂、凋亡小體形成等變化，并最終由非炎癥過程清除。由于細胞凋亡獨特地影響著機體的細胞發育和代謝。在監測和清除腫瘤細胞與突變細胞等方面也可能發揮重要的作用。在細胞凋亡的研究中，LSCM以其獨特的優勢已被廣泛地應用于監測重要生理改變的方面。

新型檢測細胞凋亡主要有以下幾種方法：電鏡觀察、熒光及普通光學顯微鏡觀察、DNA凝膠電泳、流式細胞術、原位缺口末端標記(in situ nick—end labeling，TUNEL)DNA斷片化分析以及凋亡過程蛋白因子、酶活性檢測等。

目前認為凋亡細胞特異性的形態學改變仍是判斷細胞凋亡的最直觀可靠的指標。過去對細胞凋亡的形態學研究方法局限于活性細胞和組織切片染色、熒光鏡觀察．或者石蠟切片原位末端標記法。由于普通光鏡的分辨率和清晰度有限，且更多局限于對切片的觀察，而電鏡又顯然不適合對凋亡這一復雜動態過程的監測．激光掃描共聚焦顯微鏡可對活細胞清晰成像的特點。使其在對細胞凋亡的形態學觀察分析中倍受重視。

觀察發現，細胞微管的形態隨細胞凋亡的發展發生相應的改變，凋亡早期微管的分布發生改變，逐漸凝聚成無功能的團塊狀，因此也伴隨細胞骨架的功能改變，細胞逐漸失去其原來的細胞形態，到凋亡晚期，微管結構降解，細胞骨架塌陷，在共聚焦顯微鏡下，細胞熒光著色變淺，分布減少，細胞更加扁平，因此，細胞凋亡的發生、發展，與細胞骨架有著極其密切的關系，共聚焦顯微鏡在此之中發揮著不可替代的作用[14]。3.小結

通過多篇文獻的反映，激光共聚焦顯微鏡呈現出一系列的優點，比如：有利于多熒光探針標記樣品高清晰度、高分辨率圖像的采集，無損傷連續光學切片圖像的采集一顯微“CT”，三維圖像重建，可以對感興趣區域的掃描，定位、定量測定等等。這些優點的應用不僅僅可以使激光共聚焦顯微鏡在細胞骨架方面有所研究，還會對其他一些方面有所幫助，通過激光共聚焦顯微鏡得到的豐富的實驗數據，有利于支持我們的實驗研究。同時，充分運用 LSCM 所攜帶軟件的定量分析功能對所獲得的圖像進一步分析統計，也會為我們的實驗結果增添可信之處。對已獲得的實驗相關圖像進行量化和統計分析得到更加直觀的信息，這在科學研究中也越來越重要，而LSCM軟件的強大功能就能使這些復雜的數據統計變的簡單而易懂。所以，在實驗過程中我們還要充分利用LSCM所攜帶軟件的各種功能為的研究工作提供更多信息。但是激光共聚焦顯微鏡也有一些不得不說的缺點，如價格昂貴，對操作人員技術要求高等，這也限制了它在一些領域中的應用[15]。

總而言之，我們相信，LSCM應用于科學研究之后為生命科學所開拓的實時觀察活細胞的結構和特定分子、離子動態生物學變化的途徑，隨著新軟件的不斷開發及各個學科的不斷發展和相互滲透，必將有更廣闊的發展前景。

參考文獻

[1]王珺,王燕,龔堅.唐微激光共聚焦顯微鏡的應用技術.現代儀器,2009,15(4)[3]朱國榮.解析光學顯微鏡使用中遇到的幾個問題,2012.2 [2]朱珊珊,黃志江.激光掃描共聚焦顯微鏡在生命科學研究中的應用.2005(02)[4]趙啟韜,苗俊英.激光共聚焦顯微鏡在生物醫學研究中的應用,北京生物醫學工程2003,22(1)[5]周疆明,程路明,賈宏濤.顯微鏡技術研究進展[J].新疆農業科學,2006,43(S1):53-56.[6]李楠.激光掃描共聚焦顯微技術[M].北京:人民軍醫出版社,1997:68.[7]童應鵬,張藝,張靜.激光掃描共聚焦顯微技術在中醫藥治療腦血管疾病研究中的應用[J].中藥藥理與臨床,2007,23(5): 257-259.[8]薛秀花,張曉嫣,鄭東,任海云.激光共聚焦顯微成像技術在植物細胞微絲骨架三維動態觀察中的應用.現代儀器 2010,16(5)[9]Franklin-Tong VE.Signaling and the modulation of pollen tube growth.Plant Cell, 1999, 11: 727~738 [10]Kost B, Spielhofer P and Chua NH.A GFP-mouse talin fusion protein labels plant actin filaments in vivo and visualizes the actin cytoskeleton in growing pollen tubes.The Plant Journal,1998, 16(3), 393~401 [11]Timmers AC, Niebel A, Balague C, et al.Differential localisation of GFP fusions to cytoskeleton-binding proteins in animal, plant, and yeast cells.Protoplasma, 2002, 220: 69~78

[12]Shen Zhong—Ying，Xu Li-Yan，Li En·Min，et a1．Ezrin，acin and cytoskeleton in apoptosis of esophageal epithelial cells induced by arsenic trioxide[J]．Jnt J Mole Med．2003．12：341—347．

[13]Parlato S，Giammarioli AM，Logozzi M，et a1．CD95(APO·l／Fas)linkage to the actin eytoskeleton through ezrin in human T lymphocytes：a novel regulatory mechanism of the CD95 apoptotic pathway[J]．EMBOJ，2000，19：5123—5134．

[14]吳波,高清,劉琦,石群立,孟奎.細胞凋亡過程中細胞骨架改變的激光共聚焦顯微鏡觀察.電子顯微學報 2010,29(4)[15]張瑩,谷巍,陳建偉.激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)在植物細胞學中的應用.南京中醫藥大學學報2011,27(2)

第四篇：淺談生物信息學在生物學研究中的應用

10生乙 尹竹10517109

淺談生物信息學在生物學研究中的應用

生物信息學（Bioinformatics）是一門新興的、正在迅速發展的交叉學科，目前國內外對生物信息學的定義眾說紛紜，沒有形成統一認識。概括來說，現代生物信息學是以核酸和蛋白質等生物大分子數據庫及其相關的圖書、文獻、資料為主要對象，以數學、信息學、計算機科學為主要手段，對浩如煙海的原始數據和原始資料進行存儲、管理、注釋、加工，使之成為具有明確生物意義的生物信息。并通過對生物信息的查詢、搜索、比較、分析，從中獲得基因的編碼、凋控、遺傳、突變等知識；研究核酸和蛋白質等生物大分子的結構、功能及其相互關系；研究它們在生物體內的物質代謝、能量轉移、信息傳導等生命活動中的作用機制。

生物信息在生物學研究上的應用主要包括在基因組學研究上的應用和在蛋白質組學研究中的應用。

1.在基因組學研究中的應用

基因組（genome）表示一個生物體所有的遺傳信息的總和。一個生物體基因所包含的信息決定了該生物體的生長、發育、繁殖和消亡等所有生命現象。有關基因組的研究稱為基因組學(Genomics)，基因組學根據研究重點的不同分為序列基因組學(Sequence genomics)、結構基因組學(Structural genomics)、功能基因組學(Functional genomics)與比較基因組學(Comparative genomics)。結構基因組學的研究：結構基因組學(Structural genomics)是基于基因組學的一個重要組成部分和研究領域，它是一門通過基因作圖、核苷酸序列分析確定基因組成、基因定位的科學口。生物信息學在結構基因組學中的應用主要在于：基因組作圖、核苷酸序列信息分析、基因定位、新基因的發現和鑒定等方面。比較基因組學的研究：借助生物信息學的手段對不同生物基因組的比較、分析，可以進行生物進化等方面的研究。

功能基因組學的研究：功能基因組學(Functional genomics)是指在全基因組序列測定的基礎上，從整體水平研究基因及其產物在不同時空、條件下的結構與功能關系及活動規律的學科。功能基因組的研究是后基因組時代的關鍵點，它將借助生物信息學的技術平臺，利用先進的基因表達技術及龐大的生物功能檢測體系，從浩瀚無垠的基因庫篩選并確知某一特定基因的功能，并通過比較分析基因及其表達的狀態，確定出基因的功能內涵，揭示生命奧秘，甚至開發出基因產品。

2.在蛋白質組學的研究中的應用

在20世紀中后期，隨著DNA雙螺旋結構的提出和蛋白質空間結構的解析，生生命科學的研究進入了分子生物學時代，而遺傳信息載體DNA和生命功能的體現者蛋白質的研究，成為了其主要內容。90年代初期啟動的龐大的人類基因組計劃，已經取得巨大的成在20世紀中后期，隨著DNA雙螺旋結構的提出和蛋白質

空間結構的解析，生生命科學的研就，人類基因組序列草圖繪制完成后，生命科學研究跨入了后基因組時代。然而，人們清醒地識到基因僅是遺傳信息的載體，而生命活動的執行者是基因的表達產物—蛋白質，它是生命現象復雜性和多變性的直接體現者。

蛋白質組一詞是澳大利亞學者馬克威爾金斯在1994年最先提出來的，它是指基因組表達的所有相應的蛋白質，也可以說是指細胞或組織或機體全部蛋白質的存在及其活動方式。蛋白質組學是從整體的蛋白質水平上,在一個更加深入、更加貼近生命本質的層次上去探討和發現生命活動的規律和重要生理、病理現象的本質等。蛋白質組學的研究對揭示生命活動規律，探討重大疾病機制，疾病診斷和防治、新藥的開發提供重要的理論基礎。

生物信息學在蛋白質組學中的蛋白質數據庫的應用

2.1蛋白質組數據庫

蛋白質組數據庫是蛋白質組學研究的主要內容之一。通過構建不同環境條件下組織或細胞全部蛋白質的數據庫來研究蛋白質表達的差異情況。與其他數據庫相比, 目前大部分蛋白質組數據庫都有以下幾個方面的特點:（1）由于蛋白質相關數據的種類繁多,蛋白質組數據庫的種類也多種多樣,如雙向電泳數據庫、基于蛋白序列的數據庫、蛋白質一級或高級結構數據庫、蛋白質相互作用數據庫等等;（2）新速度快,網絡上的蛋白質組數據庫的數據幾乎每天都在更新;（3）網共享程度高, 越來越多的數據庫資源與互聯網相互配合,使得蛋白質相關數據的利用率空前的提高。蛋白質組數據庫的主要內容即集中在基于雙向電泳結果的數據庫和基于蛋白質序列信息的數據庫。

2.1.1基于雙向電泳圖譜的數據庫

雙向電泳技術是蛋白質組學研究中最重要的實驗技術之一，所以基于雙向電泳圖片的數據庫也成了蛋白質組學研究中主要內容。

2.1.2 基于蛋白質序列信息的數據庫

基于蛋白質序列信息的數據庫是生物信息學數據庫中最基本的數據庫，這些數據庫以氨基酸殘基順序為基本內容，并附有注釋信息（計算機的序列分析結果和生物學家查閱文獻的結果）。基于蛋白質序列的數據庫很多，主要有蛋白質信息資源數據庫（PIR）、SWISS3D和 TrEMBL等等。

2.1.3 其他蛋白質組數據庫

蛋白質生物信息學包含很多方面的內容：如蛋白質大分子的結構、相互作用等等，所以，除了上述的一些數據庫之外，還有很多關于構象、相互作用等方面的數據庫，是基于質譜應用的數據庫，屬于混合數據庫。將生物信息學的實驗思路引入蛋白質組學的實驗方案后，實驗人員可以通過互聯網上的信息設計實驗方

案，避免了很多重復性的勞動，少走很多彎路，為蛋白質組學的發展提供了可靠的信息資源。值得一提的是，上文提到的大多數數據庫都能實現數據接收、在線查詢和空間結構的可是化瀏覽等多種功能。而且，幾乎所有這些數據庫都是免費的，都可以免費下載或提供免費服務，使得蛋白質組學可以在生物信息學的輔助之下快速發展。

2.2生物信息學與蛋白質分析

在蛋白質組分析過程中，生物信息學的作用不僅僅體現在數據庫的查閱和資料的整合中，生物信息學軟件在蛋白質組研究領域的作用根式至關重要的。蛋白質分析軟件應用主要集中在結合蛋白質組研究中的分離技術和堅定技術識別蛋白質（如2-DE）圖像分析、Edman降解的序列組合、質譜數據的綜合分析等），對有價值的未知蛋白質進行分析和預測（包括序列分析、結構預測、結構域、電點等性質的檢測等）、針對蛋白質的分析預測方法應用的工具有4個方面。

2.2.1 蛋白質一級結構分析

根據20中氨基酸的理化性質可以分析電泳等實驗中的未知蛋白質，同樣也可以分析已知蛋白質的物化性質。設計PROPSEARCH的目的是為了通過排比方法查詢一個新的蛋白質序列失敗時,查找公認的蛋白質家族而設計的。PROPSEARCH可以通過氨基酸組分來查詢,同時也可以通過其他的特性來進行查詢,如從序列中計算所得的分子量、挑選的二肽組分的含量等。

2.2.2 蛋白質的物理性質預測

從蛋白質序列出發，預測蛋白質的許多物理性質，包括等電點、分子量、酶切特性、疏水性、電荷分布等。

2.2.3蛋白質二級結構預測

二級結構是指α螺旋和β折疊等規則的蛋白質局部結構元件。蛋白質的二級結構預測的基本依據是每一段相鄰的氨基酸殘基具有形成一定二級結構的傾向。因此,進行二級結構預測需要通過統計和分析發現這些傾向或者規律。蛋白質二級結構預測的方法有3種。一是由已知結構統計各種氨基酸殘基形成二級結構 的構象趨勢,其中最常用的是Chou和Fasman 法;二是基于氨基酸的物理化學性質,包括堆積性、疏水性、電荷性、氫鍵形成能力等;三是通過序列比對,由已知三維結構的同源蛋白推斷未知蛋白的二級結構。各種方法預測的準確率隨蛋白質類型的不同而變化。一般對于α螺旋預測精度較好,對β折疊差些,而對除α螺旋和β折疊等之外的無規則二級結構則效果很差。

2.2.4蛋白質的三維結構

蛋白質三維結構是預測時最復雜和最困難的預測技術。序列差異較大的蛋白質序列也可能折疊成類似的三維構象。由于蛋白質的折疊過程并不十分清晰,從理論上解決蛋白質折疊的問題還有待進一步的科學發展,但也有了一些有一定作

用的三維結構預測方法。即與已知結構的序列比較,同源模建,threading算法和 折疊識別方法。常見的預測算法有:SWISS-MODEL(自動蛋白質同源模建服務器)、CPHmodels等。

2.3 生物信息學與蛋白質功能

生物信息學發展到今天不僅可以對蛋白質組數據進行分析和預測，而且可以對已知或者未知的基因產物進行功能上全面的分析和預測。

生物信息學最常用的分析方法是模式識別。主要是利用存在于蛋白質序列結構中的某些特殊的特征模體來識別相關蛋白質性質。換而言之，就是從新的蛋白序列中發現標志性的序列或者結構，以此建立模式，然后在已經建立好的已知蛋白質數據庫中，搜集于此相似的模式，來確定未知蛋白質的歸屬，從而預測它的功能。許多基因是在特定時期和條件下被激活，才能表達出來，在正常人工模擬的環境下根本無法表達。類似于這樣的恩未知蛋白質也需要通過生物信息學的方法計算分析預測，以獲得它的功能信息。

生物信息學的發展將給生命科學研究帶來革命性的變革，將幫助人類認識生命的起源、進化、遺傳和發育的本質，揭示人體生理和病理過程的分子基礎，為人類疾病的預測、診斷、預防和治療提供合理和有效的方法或途徑，同時還將對醫藥、衛生、食品、農業等產業產生巨大的推動作用，甚至可能引發新的產業革命。21世紀是生命科學的時代，生物信息學為生命科學的發展提供了便利和強有利的技術支持，推動著生命科學的迅速發展。

第五篇：流式細胞儀在免疫學研究中的應用

流式細胞儀在免疫學研究中的應用

摘 要：隨著現代激光技術、電子檢測技術和電子計算機技術等的迅速發展，流式細胞儀(FCM)在免疫學、生物學、遺傳學、血液學、臨床檢驗等領域中得到了更加廣泛的應用。在免疫學研究領域，FCM以快速、靈活及定量等特點被廣泛地應用于基礎研究和臨床治療的各個方面，尤其是與單克隆抗體技術的結合，使其在免疫分型、分選、免疫監測、免疫細胞的系統發生及特性研究等方面發揮了重要的作用，成為現代免疫學研究不可缺少的工具。該文對近年來流式細胞儀在免疫學研究中的應用進展進行了綜述。

關鍵詞：流式細胞儀；免疫學；檢測

流式細胞儀(flow cytometry，FCM)是一種集激光技術、電子物理技術、光電測量技術、計算機技術、細胞熒光化學技術以及單克隆抗體技術為一體的新型高科技儀器[1]。FCM 可對細胞大小、細胞表面抗原的表達等進行快速、靈活、定量、多參數的檢測，而且，可同時用于檢測細胞內的核酸定量、DNA倍體、細胞周期分析，細胞因子和黏附分子等[2]。具有分析速度快、精確度高、重復性好和費用低廉等優點。流式細胞儀介紹

1.1 流式細胞儀的工作原理

流式細胞儀主要由流動室和液流系統，激光源和光學系統，光電管和檢測系統，計算機分析系統和細胞分選系統5部分組成，其中，流動室是儀器的核心部件。

將待測標本制備成單細胞懸液，經特異性熒光染料染色后，由氣壓裝置送入流動室，以一定的流速經過噴嘴進入激光聚焦區，流速的選擇與檢測的目的有關，此時，在激光束的照射下，被熒光染色的細胞產生散射光和激發熒光，其散射光信號和熒光信號經光學系統收集，由檢測系統轉換成為電信號，再通過模/數轉換器，轉換為可被計算機識別的數字信號，各種信號經計算機采集后，用相應的應用軟件進行分析處理，最后，以直方圖或三維圖的形式顯示出來。選擇不同的單克隆抗體及熒光染料，可同時測定一個細胞上的多種不同的特征參數，從而可以對細胞進行分類[3]。1.2 流式細胞儀機型介紹

近年，流式細胞儀的主要生產廠家有美國的BD(BectonDickinson)公司、貝克曼庫耳(Beckman Coulter)公司和德國的Partec公司。國內使用的流式細胞儀主要由前兩家生產。它們生產出一系列科研型和臨床型的流式細胞儀，并研制生產了流式細胞儀所用的各種單克隆抗體和熒光試劑。

流式細胞儀可分為兩大類，一類為臨床分析型(又稱小型機、臺式機)，其特點為儀器光路調節系統固定，自動化程度高，易學易掌握，適合在臨床實驗室中應用。如BD公司的FACSCalibur，BeckmanCoulter公司的EPICSXL，Partec公司的Pas，Cytomation公司的MOFLO，Aber公司的Microcyte，Ortho公司Cytoron等。

另一類為科研分選型(又稱綜合型)，特點為功能齊全，分析靈活，可快速將所感興趣的細胞分選出來，同時可選配多種波長類型的激光器，適用于廣泛的科學研究之用。如BD公司的FACSVantage，Beckman Coulter公司的EPICS ALTRA，Partec公司的PasIII及Cytomation公司的MOFLOMLS等。

隨著計算機技術、電子制造技術、激光技術及熒光素合成技術的發展，流式細胞儀的制造工藝、功能、精確度等有了質的飛躍。流式細胞儀已開始向模塊化發展，即它的光學系統、檢測器單元和電子系統都可以按照試驗要求隨意更換[4]。各流式細胞儀生產廠商繼續推出新產品以滿足用戶的不同需要。如BD公司的FACSAria(高速細胞分選儀)、分選增強型FACSVantage SETM(多色分析和高速分選流式細胞儀)、LSR II(數字化分析型流式細胞儀)，FACSCanto(雙激光六色分析流式細胞儀)。BeckmanCoulter公司近年又推出了Cytomics ?FC 500系列，如FC 500MCL/MPL 采用單激光或雙激光激發方式，可進行五色分析。Partec公司的頂級科研型十三色熒光流式細胞儀CYFLOW ML，臨床科研型六色熒光流式細胞儀DYFLOW SL。Amnis公司的Image Stream100(激光流動成像細胞儀)，將流式多色檢測技術和熒光顯微圖像顯示技術結合在一個平臺上，不僅可以通過熒光信號的強度，還可以通過細胞熒光圖像對細胞內外信號定位，從而對細胞亞群進行定性和定量分析。流式細胞儀在免疫學中的應用近年來，隨著生物醫學等相關學科的發展和免疫學研究的深入，流式細胞儀在分子免疫學、免疫生物學和免疫遺傳學，免疫血液學、免疫藥理學、移植免疫學、腫瘤免疫學、抗感染免疫學、臨床免疫學等免疫學領域的基礎學科，以及淋巴細胞及其亞群分析、淋巴細胞免疫分型、細胞因子檢測等臨床研究中，也有了越來越廣泛的應用。

2.1 淋巴細胞及其亞群分析

FCM在臨床淋巴細胞及其亞群分析中得到廣泛應用，可同時檢測出一種或幾種淋巴細胞細胞表面抗原，將不同的淋巴細胞亞群區分開，并計算出它們相互間的比例。通過淋巴細胞及其亞群數量的檢測，可了解在不同情況下機體的免疫功能狀態，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病的發病機理、病程、預后，指導臨床治療方案[5]。

由于FCM可以進行高靈敏度、高速度和多參數分析，使FCM對血液淋巴細胞亞群的檢測較其他方法更精確，故其被認為是血液淋巴細胞亞群分析的標準方法[6]。

2.1.1 檢測項目 在臨床上，淋巴細胞及其亞群分析項目包括：B/NK/CD4/CD8/CD4：CD8；絕對計數(TruCount)；活化淋巴細胞的檢測(CD69/HLADR/CD71/B27)；CD4＋ Th/i和CD8＋Ts/c的進一步區分；Naive/Memory T細胞亞群的檢測；Th1/Th2亞群的檢測。

用流式細胞儀診斷某種疾病時，經常需要檢測多個項目，如當人類感染免疫缺陷病病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)后，HIV主要選擇地侵入人類具有重要免疫功能的T淋巴細胞亞群中的輔助性T細胞，即Th細胞(CD4＋)，使具有重要免疫功能的T細胞群被破壞，繼而累及全身免疫器官，使機體免疫功能下降。檢測的免疫指標表現為：T淋巴細胞總數減少(正常值的65%～81%)；T細胞亞群比值倒置，即Th/Ts<1.0(正常1.3∶12～2.1∶1)；Th細胞(CD4＋)絕對計數<200個/μL(正常值400～1 500細胞/μL)，CD8＋ T細胞在感染早期增多，后期則下降；Ts細胞增高，NK細胞減少或活力下降，B淋巴細胞群則在正常范圍；CD4＋/CD8＋ 明顯低于健康成人(P<0.01)。

2.1.2 檢測技術的發展 隨著新的熒光色素分子的不斷發現，熒光標記技術的進步和流式細胞儀的多激光激發技術的進展，多色熒光分析得到迅速發展，三色、四色甚至五色或六色熒光分析對細胞亞群的識別、細胞功能評價等更為精確。近年，淋巴細胞及其亞群的分析已經發展到三色熒光以上分析，且借用MultiSET全自動獲取分析軟件完成。如：通過四色熒光標記，對外周血T淋巴細胞亞群可進行快速、客觀、準確檢測及絕對計數分析[78]。利用流式細胞儀，采用多色熒光標記的單克隆抗體，分析黏附性T 細胞表面CD3＋ CD4＋ 或CD8＋CD19－CD16－CD45RO＋CD62＋CD27＋ CD57 抗原，從而對LFA1adhesive T 細胞快速準確地測定[9]。

總之，用流式細胞儀檢測淋巴細胞及其亞群的檢測技術朝著多激光、多色分析方向發展。近年來，為了使樣本一次檢測，得到更多結果，滿足臨床多色分析診斷的需要，一些廠家為臨床應用專門設計了六色分析流式細胞儀。

2.2 白血病免疫分型

白血病是白細胞在分化到某個階段受阻后呈克隆性異常增殖的結果，它的發病是多階段的，不同病因引起的白血病的發病機制不同，在治療和預防上也不同，所以，利用白細胞分化不同階段出現的細胞表面標志，可以對白血病進行免疫分型，對其進行導向治療[10]。近年，白血病的MICM(形態學、免疫學和細胞遺傳學，分子生物學)分型已成為現代白血病診斷的重要指標，其中應用流式細胞儀進行免疫表型的檢測在分型中發揮了越來越重要的作用，現已積累了豐富的應用經驗。它具有快速、客觀、準確、特異性強、重復性好等優點，對白血病進行免疫分型具有極其重要的臨床診斷意義[11]。

準確的免疫分型關鍵是區分正常細胞與白血病細胞，傳統的流式細胞儀白血病免疫分型依賴于白血病細胞的FSC/SSC特性來設定原始細胞群，然后根據門內某些陽性單抗占門內細胞的百分比來確定其抗原表達情況。很顯然，這種方法是不能將原始細胞與正常細胞完全分開的。

隨著免疫學和遺傳學及流式細胞儀檢測技術的發展，由開始的主要采用間接免疫熒光標記法到直接免疫熒光標記法，從單色或雙色到利用CD45抗體標記設門法進行多色免疫標記。利用造血系統細胞CD45表達量與細胞分化程度的高度相關性，可以精確地將原始/幼稚細胞與正常成熟細胞群完全分開。使免疫分型的準確性得到很大的提高，現在，已成為診斷白血病免疫分型的重要工具[12]。國際上普遍采用三色或四色分析的方法，利用CD45SSC設門法，并結合其他技術進行免疫分型。如應用流式細胞儀，采用CD45 SSC 設門法多參數，并利用抗體積分系統診斷標準，可以準確地、完整地分析白血病免疫分型[13]。采用三色流式細胞術CD45/側散射(SSC)雙參數散點圖設門，并結合FAB 形態學能對急性白血病進行準確分型[14]。應用流式細胞儀四色熒光標記技術，CD45/SSC雙參數散點圖設門方法，能清楚地區分各種免疫細胞，可準確、客觀地進行白血病免疫分型[15]。

2.3 血小板膜表面受體檢測

血小板膜上有豐富的糖蛋白受體，是血小板發揮其功能的物質基礎，靜止期和活化期的血小板膜糖蛋白受體的種類、含量、結構和功能顯著不同。應用流式細胞儀檢測血小板膜上受體，主要是對血小板特異性膜糖蛋白和活化標志物進行免疫熒光標記，結合單克隆抗體和免疫熒光技術，用不同的抗血小板單克隆抗體，可以從分子水平上診斷血小板功能和數量的異常。使用流式細胞儀測定活化血小板是目前公認的快捷而靈敏的方法之一[16]，可直接、靈敏、特異地分析血小板的活化程度和功能狀態。

普遍采用的技術是以全血為標本，應用流式細胞儀進行多參數分析，即全血法流式細胞術。如采用流式細胞儀三色熒光標記技術，能準確地檢測冠心病患者血小板表面糖蛋白的變化[17]。采用流式細胞儀和三色免疫熒光標記的單克隆抗體，可直接檢測全血樣本中血小板膜表面CD41、CD61、CD62的表達水平[18]。

與常規血小板功能測定法相比，全血法流式細胞術雖然有許多優點，如直接使用全血樣本，且標本用量少；簡化標本的處理，避免了樣本處理不當等因素導致的血小板體外激活，并可防止血小板亞群的丟失，從而更客觀、更準確地反映血小板的功能[19]。但是，全血法流式細胞術也存在不足之處，如流式細胞儀價格昂貴，為了避免血小板體外活化，血樣不能久置，需在45 min內處理；只能分析循環中的血小板的數量和功能，不能反映血小板代謝和最近被清除的血小板的數量。所以，還需對該方法進行更深入的研究，并使之標準化[20]。

2.4 細胞因子的檢測 細胞因子(cytokine)是由免疫細胞或非免疫細胞合成和分泌的小分子多肽，在調節機體多種細胞的生長、分化和功能，調節正常與病理狀態下的免疫應答過程中起著十分重要的作用。檢測細胞因子對于闡明機體免疫應答機制及相關疾病的發生、發展規律和臨床治療具有重要意義。

隨著研究的進展，僅僅對細胞進行定量和活性的檢測已不能滿足需要。目前，越來越重視在單細胞水平上研究細胞因子的表達能力。應用流式細胞儀結合間接免疫熒光法，可在單細胞水平上客觀、正確地檢測細胞內多個細胞因子，并可區分表達特定細胞因子的細胞亞群，進行多參數相關分析，是一種有效地在單細胞水平研究細胞因子的方法[21]。

近年主要采用的是胞內流式分析法。該方法是基于BD公司的快速免疫細胞因子系統(fast Immune cytokine system)。以植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)，佛波酯(phorbol myristate acetate，PMA)加離子霉素(ionomycin，Ion)作刺激劑，刺激全血中淋巴細胞表達細胞因子；用雷菲德菌(Brefeldin A，BFA)與莫能霉素(monensin，MN)等藥物阻斷細胞因子分泌至胞外，用CD3和CD8設門，應用兩種免疫熒光抗體同時標記淋巴細胞膜表面特異分子和被阻滯在胞內的細胞因子，然后用流式細胞儀進行檢測和分析。

該方法具有許多優點，如完善的全血激活方法，保留體內細胞及生化微環境，能更準確反映體內狀況，避免了人工假象的產生。高效熒光結合抗體，確保高度靈敏及低背景染色。高質量的膜通透劑，可以保證一致的靈敏度與低背景染色，且免除了為增加通透性所需冷凍細胞過夜的步驟。同型對照，避免了使用重組細胞因子進行繁瑣的競爭性封閉。

該技術雖然已成為一項可在單細胞水平上檢測細胞因子的有效方法，尤其是在確定功能不同的T細胞亞群方面具有重要的作用[22]，具有其他方法難以比擬的優點。但是，也存在一定的缺陷，如現有的激活劑可導致部分至表面分子表達的下調。因此，今后還要尋找更佳的激活劑。結語

FCM以其快速、準確、靈活、大量、多參數同時分析等優點，已成為免疫學研究領域中無可替代的重要工具。科技水平的不斷發展，免疫學研究的不斷深入，尤其是近年來，流式細胞儀的功能不斷完善、各種功能強大的分析軟件的開發、多參數分析技術的發展等，為流式細胞儀檢測結果準確性的提高和分析能力的擴展提供了保障，并使儀器不斷向小型化，操作自動化，簡單化方向發展。可以預見，在未來免疫學領域，流式細胞儀的應用范圍會進一步擴大，應用深度會進一步加強。