第一篇：體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則

附件1：

體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則 ——酶聯免疫診斷試劑生產及質量控制技術指導原則

（征求意見稿）

酶聯免疫診斷試劑是指在酶標板上包被相關的抗原（或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關抗體（或抗原）反應，形成的抗原抗體復合物再與相應的酶標記的抗體或抗原進一步反應，經過酶催化底物發生顯色反應，由形成的顏色的強弱來判斷樣本中相應的抗體或抗原的存在。

為了規范酶聯免疫診斷試劑的生產和質量控制，制定本技術指導原則。

本指導原則適用于應用酶聯免疫法的第三類診斷試劑（病原微生物）的生產和質量控制，其他類酶聯免疫診斷試劑參考本指導原則。國家藥品監督管理部門將依據科學技術發展的需要，適時組織修訂。

一、基本原則

（一）酶聯免疫診斷試劑生產用的各種原料、輔料應當制定其相應的質量指標，并應符合有關法規的要求。

（二）酶聯免疫診斷試劑的生產企業應具備相應的專業技術人員、儀器設備以及適宜的生產環境，獲得《醫療器械生產許可證》；同時，生產企業應按照《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》的要求建立相應的質量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；生產企業還應該通過《體外診斷試劑生產企業質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。

（三）酶聯免疫診斷試劑在研制時，應當遵循科學、規范的原則，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。

（四）酶聯免疫診斷試劑生產過程中所用的各種材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

（五）生產和質量控制的總體目標：保證試劑使用安全、質量穩定、工藝可控、檢測有效。

二、原材料質量控制

（一）主要生物原料

與診斷試劑的質量最密切相關的生物原料主要包括各種生物活性抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標反應板、標記相關酶（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應用抗原或抗體、制備校準品（標準品）等。一般應按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規定的質量標準。主要生物原料若為企業自己生產，其工藝必須相對穩定；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，必須進行原料驗證，并進行補充申報。

主要生物原料的常規檢驗項目一般包括：

1、外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀；或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜質；特殊生物原料應具備相應外觀標準。

2、純度和分子量

主要經SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據所檢測生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進行電泳。一般情況下，每個電泳道加樣量為5μg，同時用已知分子量標準作參照，采用合適的電泳電流和電泳時間；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量。作為診斷試劑用生物原材料，用銀染法染色后，純度一般都要大于90％；用考馬斯亮藍染色后，純度一般都要大于95％。

3、蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測；

4、效價

效價的測定一般根據蛋白含量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效價應達到規定的要求。

5、功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩定性等，并比較其與上批次原料的相關性。

（二）生物輔料

生物輔料指的是在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料均應按照《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》所規定的質量標準要求進行檢驗，達到相應的質量標準后方應用于生產。

生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應進行功能性實驗，即以其為原料配制10％濃度的稀釋液作為樣品，進行酶聯免疫測定，均不得出現非特異性反應。

對于標記用酶，應在產品的質量標準中明示所使用的標記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應根據不同生產廠家的檢定方法和質量標準進行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應大于3.0。

（三）化學原材料

參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》分析純級別進行檢驗。主要的檢測指標包括：溶液外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值檢測、溶解情況檢測、干燥失重的檢測、熾灼殘渣等。

主要化學原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發生變更。化學原材料在購入時，原材料的生產商必須提供該批次化學原材料的質量質量保證材料和質量檢驗報告，其質量標準應達到生產所需的質量標準。

（四）其他物料

1、酶標板（1）外觀

明亮處用肉眼觀察板條的外觀質量。如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應剔除。

（2）吸附能力和精密性

用一定濃度的正常人IgG包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結合物吸附，通過顯色反應，雙波長酶標儀（主波長450nm，參考波長630nm）讀數。計算CV值，批內CV≤5％，批間CV≤10％。

2、液體試劑裝量瓶

包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應有相應的裝量瓶，并建立相應的質量控制標準，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。

3、其他材料

包括試劑瓶標簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，均應符合相應質量控制標準，如數量、規格等。

（五）企業質控品 企業質控品包括陰陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、靈敏度、精密性（均一性）等質控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質控品樣品。如該產品具有國家標準品或參考品，應使用國家標準品（參考品）進行標化；若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則企業參考品的質量標準不能低于國家藥品監督管理部門已經批復的第一家試劑的質量標準。

企業質控品的基質應與診斷試劑的待測樣品的基質基本一致，如待測樣品為血清/血漿，質控品基質也應為血清/血漿。

三、試劑盒各組分的生產

酶聯免疫診斷試劑盒主要組分的生產包括酶標記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標反應板、分裝及包裝等步驟；并通過產品的半成品檢定和成品檢定兩個質控過程來完成。

（一）各種工作液的配制

酶聯免疫診斷試劑研制生產過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標準品（或校準品）溶液。若陰性陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應在相應的生物安全實驗室完成。

各種工作液在配制過程中應嚴格按質量標準中的配方進行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進行相應的質量檢驗并達到質量標準后，方可使用或者分裝。對于定量檢測試劑，其標準品（或校準品）溶液應該在量值上具有溯源性。

應對配制過程及配制的液體進行的質量控制，主要包括酶結合物的功能性實驗及穩定性；各種溶液的外觀、pH值及電導率的測定等；酶作用的底物應測定在無相應酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標；終止液應對其終止酶促反應的能力進行測定。

（二）包被酶標反應板

包被前應對酶標反應板進行質量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標反應板的批號、數目、標識。酶標反應板經檢驗合格后方能用于包被。不同批號的板條不能混用。

選擇經檢定合格的包被原料（如抗原、抗體等），經一定的方法確定最佳包被濃度和酶結合物工作濃度，按照診斷試劑的生產規程，配制包被緩沖液、封閉液，經檢驗合格后，包被酶標反應板，經干燥后，已包被的酶標反應板用鋁箔紙封閉（內置干燥劑），抽真空后，保存于2?8℃。

應對包被過程進行相應的質量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質量檢驗、包被液和封閉液的質控（如配方、外觀、pH）、包被過程的監控（包括包被和封閉的體積、溫度、濕度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監控等。

（三）分裝和包裝 樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應嚴格按照質量標準中的量進行無菌處理后再分裝，分裝量的誤差應小于<5%。

分裝及包裝均應按照相應的SOP的要求進行。包裝前，應嚴格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數量，并在關盒前進行復核。

四、質量控制

（一）半成品質量控制

1、半成品抽樣

檢驗人員按試劑的批號，根據抽樣申請單抽取規定數量的半成品各組分，作號標記、待檢。

2、半成品檢驗

利用上一批檢定合格的試劑盒的相應組分，對本批生產出的各種試劑盒組分分別進行檢驗，檢驗結果達到產品的質量標準。

半成品檢驗，一般使用國家標準品（參考品）或經國家標準品（參考品）標化后的質控品。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業參考品，但該企業參考品的質量標準不能低于國家藥品監督管理部門已經批復的第一家試劑的質量標準。

檢測所抽樣的半成品的試劑盒性能，包括陰陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應達到相應質量標準的要求，對精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對定量檢測試劑，同時應分析其線性相關系數和校準品檢測結果的準確性。

企業應該具有對每一批試劑的半成品進行穩定性研究。

（二）成品質量控制

產品包裝完成后，質檢人員根據試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進行抽樣，同時填寫抽樣數量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數量應包括檢定用數量和留樣數量。質檢人員同時應檢查相關原始記錄。

每一批酶聯免疫診斷試劑報批批量最低要求：達到1萬人份/批。

1、檢驗（1）成品檢驗

一般使用國家標準品（參考品）對成品進行檢驗，并達到質控品的質量要求。若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業參考品，但其質量標準不能低于國家藥品監督管理部門已經批復的第一家試劑的質量標準。

（2）穩定性試驗

在批放行前，每一批酶聯免疫診斷試劑需具備穩定性研究資料。

第二篇：體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則--生物芯片

附件6: 體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則 ——生物芯片類試劑生產及質量控制技術指導原則

前 言

本指導原則所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個生物探針(包括DNA片段,寡核苷酸,抗原,抗體,組織,細胞等)按預先設計的排列方式固定在特制的基質(包括玻璃片,尼龍膜,硝酸纖維素膜等)上,用特定的方法提取生物靶分子并進行標記,然后與固定在基質上的生物探針特異性的結合,再用相應的檢測設備(如激光掃描儀,CCD檢測儀等)和分析方法(包括軟件)進行檢測,記錄,分析,實現對生物靶分子的定性或定量檢測的試劑.根據芯片制作的主要原料和方法,生物芯片可分為核酸芯片,蛋白芯片,細胞芯片,組織芯片,芯片實驗室等.本指導原則是針對核酸和蛋白為檢測靶分子生物芯片的生產及質量控制技術指導原則,其它類型靶分子檢測的芯片診斷試劑可參考本指導原則.由于生物芯片技術還在不斷發展,國家食品藥品監督管理部門可依據科學技術發展的需要,適時組織對本指導原則進行修訂.一,基本原則

(一)生物芯片診斷試劑生產用的物料包括:原料,輔料和包裝材料.各種物料應當制定相應的質量指標,并應符合有關法規的要求.(二)生物芯片診斷試劑的生產企業應具備相應的專業技術人員,相適應的儀器設備和生產環境,獲得《醫療器械生產許可證》;應當按照《體外診斷試劑生產實施細則(試行)》的要求建立相應的質量管理體系,形成文件和記錄,加以實施并保持有效運行;應當通過《體外診斷試劑生產企業質量管理體系考核評定標準(試行)》的考核.(三)生物芯片診斷試劑的研制應當按照科學,規范的原則組織研發,各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理.(四)生物芯片診斷試劑生產過程中所用的物料及工藝,應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜.二,物料質量控制(一)核酸檢測芯片

核酸芯片檢測時,從生物樣本中提取的核酸可用熒光標記,金標記和酶標記.檢測方法包括光譜學方法和化學顯色.下面為熒光標記芯片技術指導原則,采用金標記和酶聯顯色等的生物芯片診斷試劑可參照核酸芯片和蛋白芯片相關部分.1,主要生物原料

核酸檢測芯片的主要生物原料包括模板DNA,dNTPs,引物,探針,標記物等.應按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗,以保證其達到規定的質量標準.主要生物原料的供應商要求相對固定,不得隨意變更供應商.(1)模板DNA 重組DNA:經測序驗證,關鍵位置沒有錯誤.1×TE溶解,濃度為1μg/μl以上,-20℃保存.(2)dNTPs(dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP)HPLC純,PCR級,無DNase,RNase污染.-20℃以下保存.外購者,由生產廠家提供質量保證證明,達到生產要求.(3)引物

序列確證;進行PCR擴增后,克隆測序鑒定驗證,建立引物標準品.生產中的引物原材料為凍干粉,PAGE純或HPLC純,外購者,供應商應提供該產品的質檢證明,如PAGE電泳結果或HPLC分析圖譜;自己合成的引物,需有PAGE電泳結果或HPLC分析圖譜.用標準DNA模板擴增,電泳檢測,譜帶單一,大小正確,與對照引物比較,產物量一致.符合視為合格引物.-20℃以下保存.(4)探針(用于陣列制備)重組DNA, 凍干粉(或1×TE溶解液):每種90μg以上,酶切鑒定分析圖譜.PCR產物,凍干粉(或1×TE溶解液):每種90μg以上,PCR電泳鑒定圖譜.合成寡核苷酸:PAGE純或HPLC純,每種90μg以上,提供該產品的PAGE電泳分析圖譜或HPLC分析圖譜.外購者,供應商應提供質量保證證明,達到生產要求.探針序列的正確性:應用克隆鑒定的標準DNA雜交鑒定或進行測序鑒定.外購者,供應商應提供質量保證證明,達到生產要求.純度和濃度檢測:用電泳方法,電泳圖譜沒有雜帶,目標條帶的強度與已知濃度的標準DNA條帶進行參比計算其強度.純度較高的DNA,可用紫外分光光度計進行定量.檢定合格后入庫.避光,-20℃以下保存.(5)標記物

含有激發光波長和發射光波長介于280680nm的所有熒光分子,HPLC純,供應商應提供質量保證證明.(6)Taq DNA聚合酶

SDS-PAGE 檢測,純度>95%,具DNA聚合酶活性,無核酸外切酶活性及核酸內切酶活性,具熱穩定性,94℃1小時后仍保持50%活性,由供應商提供質量保證.-20℃保存.(7)UNG(尿嘧啶糖基化酶)具尿嘧啶糖基化酶活性,無核酸外切酶及核酸內切酶活性.1U UNG 37℃處理3分鐘后,103拷貝以下含U模板被降解后,不能產生擴增產物,供應商提供質量保證.-20℃保存.(8)RT 酶

具有逆轉錄活性,供應商提供質量保證.-20℃保存.(9)RT-PCR酶

具逆轉錄酶活性和DNA聚合酶活性,無核酸外切酶活性及核酸內切酶活性,具熱穩定性,94℃1小時后仍保持50%活性.-20℃保存.(10)緩沖液

各類酶制品需要的的反應緩沖液由廠家隨酶制品提供,供應商提供質量保證.-20℃保存.2,主要生物輔料(1)雜交液

購買成品者,供應商提供質量標準,并按要求保存.自制雜交液,按半成品檢定標準要求進行檢定.(2)酶類

蛋白酶,核酸酶等,供應商提供質量標準,并按要求保存.(3)核酸提取試劑

供應商提供質量保證,并按要求保存.如果是自制提取液,按半成品檢定要求.(4)魚精DNA 供應商提供質量保證,并按要求保存.(5)封閉用蛋白

包括牛血清白蛋白,奶粉等,提供質量標準,并按要求保存.3,主要化學原輔料 參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準(2000年版)》分析純級別進行檢驗.主要的檢測指標包括:溶液外觀,一般鹽類檢測,溶液pH值檢測,溶解情況檢測,干燥失重的檢測,熾灼殘渣等.主要化學原材料的供應商要求相對固定,不得隨意發生變更.化學原材料在購入時,原材料的生產商必須提供該批次化學原材料的質量質量保證材料和質量檢驗報告,其質量標準應達到生產所需的質量標準.(1)無機類

主要包括氯化鈉,氫氧化鈉,純化水等.(2)有機類

主要包括有丙酮,乙醇,枸櫞酸,吐溫20,乙二胺四乙酸二鈉,氨基吡啉等.(3)特殊化學原料

聚乙二醇,多聚賴氨酸,丙烯酰胺,甲叉雙丙烯酰胺,N,N,N',N'-四甲基二乙胺(TEMED),溴化乙錠(EB),染色劑等.4,其他物料(1)載玻片

外觀:明亮處用肉眼觀察無缺刻,無劃傷等.規格按設計要求.激光掃描儀掃描(波長為芯片檢測波長):包被層基本均勻.(2)試管,吸頭,試劑瓶等

一次性使用,由生產廠家提供質量保證,達到設計要求.(3)其他:說明書,包裝外盒等

參照國家食品藥品監督管理局頒布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫療器械說明書,標簽和包裝標識管理規定》執行.(二)蛋白檢測芯片 1,主要生物原料

與生產的產品質量最密切相關的生物原料包括各種活性抗原,重組抗原,單克隆杭體,多克隆抗體以及多肽類生物原科.這類原料可用于點膜,標記相關酶,納米金,光學基團及中和反應用抗原或抗體等.使用前應按工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗,以保證其達到規定的質量要求.主要生物原料若為企業自己生產,其工藝必須相對穩定;若購買,其供應商要求相對固定,不能隨意變更供應商,如果主要原料(包括工藝)或其供應商有變更,必須進行原料驗證,并進行補充申報.主要生物原料的常規檢驗項目一般包括:(1)外觀

肉眼觀察,大部分生物原料為澄清透明的液體,不含異物,渾濁或搖不散的沉淀;或者為白色粉末,不含有其他顏色的雜質;特殊生物原料應具備相應外觀標準.(2)純度和分子量

主要通過SDS-PAGE電泳和電泳結果掃描儀進行檢測,也可用其他適宜的方法,如高效液相法等.作為免疫診斷試劑用生物原材料,用銀染法染色后,純度一般都要大于90%;用考瑪氏亮藍染色后;純度一般都要大于95%.SDS凝膠電泳法測定分子量.(3)蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法,280nm光吸收法,雙縮脲方法等進行檢測;(4)效價

效價的測定一般根據蛋白含量測定結果通過倍比稀釋法進行.效價應達到設計規定的要求.(5)功能性實驗 功能性實驗是指生物原料用于試劑盒試劑實際生產中的情況,一般考查該原料使用后的試劑靈敏度,特異性和穩定性.2,主要生物輔料

生物輔料指的是在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料,主要包括小牛血清,山羊血清,牛血清白蛋白和酪蛋白等.這些生物原料均應按照《中國生物制品主要原輔材料質控標準(2000年版)》所規定的質量標準要求進行檢驗,達到相應的質量標準后方應用于生產.生物輔料的供應商同樣要求相對固定,不得隨意變更供應商.對于小牛血清或山羊血清,牛血清白蛋白以及酪蛋白等,還應進行功能性實驗,即以其為原料配制10%濃度的稀釋液作為樣品,進行酶聯免疫測定,均不得出現非特異性反應.對于標記用酶,應在產品的質量標準中明示所使用的標記用酶的名稱(如辣根過氧化物酶,堿性磷酸酶等),同時應根據不同生產廠家的檢定方法和質量標準進行檢驗,酶的純度RZ值(OD403nm/OD280nm)應大于3.0.3,化學原輔料

參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準(2000年版)》分析純級別進行檢驗.主要的檢測指標包括:溶液外觀,一般鹽類檢測,溶液pH值檢測,溶解情況檢測,干燥失重的檢測,熾灼殘渣等.主要化學原材料的供應商要求相對固定,不得隨意發生變更.化學原材料在購入時,原材料的生產商必須提供該批次化學原材料的質量質量保證材料和質量檢驗報告,其質量標準應達到生產所需的質量標準.(1)無機類

主要包括氯化鈉,氫氧化鈉,純化水等.(2)有機類

主要包括有丙酮,乙醇,枸櫞酸,吐溫20,乙二胺四乙酸二鈉,氨基吡啉等.(3)特殊化學原料

DAB(聯苯二胺),染色劑等.4,其他物料(1)基質

以硝酸纖維素膜為例:孔徑符合設計要求(0.45μm,0.22μm等),均一性(厚度及毛細遷移速度±20%),尺寸(與標識吻合)(2)瓶子和干燥劑

由生產廠家提供質量保證,達到規定要求.(3)其他:說明書,包裝外盒等

應參照國家食品藥品監督管理局頒布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫療器械說明書,標簽和包裝標識管理規定》執行.三,試劑盒各組分的生產

生物芯片主要包括DNA芯片,蛋白芯片,組織芯片,細胞芯片以及芯片實驗室等.生物芯片診斷試劑產品基本可分成二個部分,一部分是芯片,另一部分檢測用工作液.如果有配套的檢測儀器,還需對儀器及處理軟件的應用加以說明.(一)芯片的生產

芯片生產的基本過程包括探針的獲取方法,純化,點樣,固定.1,探針獲取

不同的芯片,主要是探針不同,生物芯片的探針主要包括以下幾類,其它探針可參考制定相應的技術及質量標準.(1)DNA探針的獲取

探針的形式有PCR產物,克隆DNA,人工合成DNA片段等;要求有生產程序和質量指標及檢測方法,要進行純化,有固定的純化程序.(2)抗原的生產

抗原的獲得方法包括細胞培養,從生物材料中分離提取,基因工程表達以及合成肽等.基因工程表達產物又分為純抗原蛋白,融合蛋白等.(3)抗體

抗體分單克隆抗體和多克隆抗體.抗體制備包括細胞培養,動物腹水,基因工程表達等方式.(4)細胞和組織

包括細胞或組織類型,固定方法.組織材料還包括固定,包埋,切片等.(5)芯片實驗室,包括各種管道泵的制作等.2,陣列的排列設計

陣列的排列包括依次排列,隨機排列,對角線排列等,設計時需考慮重復次數等.3,點陣的制作

使用儀器的要確定型號,程序;手工制作的也要有標準操作程序.4,固定:包括固定方式,固定的條件等.應對芯片生產的過程進行相應的質量控制,如點樣和固定過程的監控,點樣均一性檢驗等.(二)工作液配制

1,芯片生產所需試劑,包括細胞培養基,探針制備試劑,陣列制作和固定試劑等.2,樣品處理試劑,芯片檢測靶分子分為核酸和蛋白質.檢測核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣,DNA提取或RNA提取試劑,逆轉錄試劑,PCR擴增試劑,核酸標記試劑等;檢測蛋白的處理試劑包括取樣試劑,蛋白稀釋液以及特殊試劑等.3,反應液:檢測核酸時的反應液包括預雜交液,雜交液,洗脫液等;檢測蛋白時,包括封閉液,抗原/抗體反應液,洗脫液,顯色液,顯色終止液等.(三)數據判讀

1,判斷標準及依據,包括Cut off值的確定依據.2,數據判讀方式:人工還是軟件判讀.3,如果是軟件判讀,應提供軟件判斷的科學依據(包括生物學原理,數據獲取原理和判斷實驗是否成立的依據)以及實驗測試的原始報告(或數據),并需要說明:(1)軟件的來源:購買或自己編制,是否獲得注冊等.(2)軟件的用途:包括對數據的分析,存儲,解讀,含義等.(3)軟件的使用:基本的使用程序.四,半成品質量控制(一)抽樣

檢驗人員按批號抽取檢定需要數量的半成品,作好標記,待檢.(二)質控品

可用克隆并測序鑒定的DNA或經特異性鑒定的抗原(或抗體).質控品的基質應盡可能與被測物基質相一致.(三)檢定要求 1,芯片檢定

(1)靈敏度:最低檢測限達到規定要求.(2)特異性:應達到規定要求.若進行全陰,全陽和交叉反應檢測,全陰性檢測應在沒有靶分子存在時,所有檢測位點沒有檢測信號;全陽性檢測應在加入足夠量的靶分子,所有檢測位點均有檢測信號;交叉反應檢測時,用某一位點的靶分子檢測,應只有該位點有檢測信號,其它位點不能有檢測信號.(3)精密性(均一性):用比最低檢測限高一個數量級的質控品,重復檢測10次,判定結果一致.考慮到芯片的多位點檢測,因此要進行全位點和單個位點進行檢測.半成品檢定可以用克隆DNA和鑒定的抗原和抗體作質控品.2,工作液的檢定

(1)物理檢測:外觀顏色正常,沒有雜質.(2)質量檢定:用被檢定的工作液檢測標準樣,檢測結果達到預定要求.五,成品質量控制(一)生產批量

申報生產的批量每批原則上不低于1000人份.(二)抽樣

檢驗人員按批號抽取檢定需要數量的半成品,做好標記,待檢.(三)標準品(參考品)應用國家標準品或參考品進行檢定,若無國家標準品(參考品),可以使用企業參考品,但其標準不得低于第一家已經獲得批準的該類試劑.(四)檢定要求

1,靈敏度:應達到規定要求.2,特異性:應達到規定要求.3,精密性(均一性):對某一樣本,重復10次,對病種的定性檢測結果一致.4,穩定性(僅對蛋白芯片)37℃放置至少3天,靈敏度,特異性和精密度仍達到規定要求.熱加速破壞試驗的時間長短,可由生產單位根據不同產品在37℃貯存與常溫貯存(2℃8℃)中質量變化的相關性來決定

第三篇：體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則(化學發光報批稿)

體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則——發光免疫分析試劑生產及質量控制技術指導原則（報批稿）

2009-05-15 09:00 發光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應等生物學原理，利用發光信號的強弱來判斷樣本中相應抗原或抗體是否存在來進行檢測的一類試劑。主要包括化學發光（酶促、非酶促），電化學發光和時間分辨熒光等法。

該指導原則主要適用于利用發光分析技術對蛋白質等被測物質進行檢測的第三類試劑生產及質量控制，第二類試劑的生產及質量控制可參考該指導原則執行，國家食品藥品監督管理部門將依據科學技術發展的需要，適時組織修訂。

一、基本原則

（一）研制、生產用的各種原料、輔料應當制定相應的質量標準，并符合有關法規的要求。

（二）診斷試劑的生產企業應具備相應的專業技術人員、儀器設備以及適宜的生產環境，獲得《醫療器械生產許可證》；同時，生產企業應按照《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》的要求建立相應的質量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；生產企業還應該通過《體外診斷試劑生產企業質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。企業應對試劑的使用范圍做出明確規定，并經國家藥品監督管理部門批準。

（三）診斷試劑的研制應當按照科學、規范的原則組織研發，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。

（四）研制生產過程中所用的材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

（五）試劑生產和質量控制的總體目標：保證產品使用安全，質量穩定，工藝可控，使用有效。

二、原材料質量控制

（一）主要生物原料

與產品質量最密切相關的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標反應板、標記相關酶（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應用抗原或抗體、制備校準品（標準品）等。一般按工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規定的質量標準。主要生物原料若為企業自己生產，其工藝必須相對穩定；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據國家相關法規的要求進行變更申請。

主要生物原料的常規檢驗項目一般包括：

1．外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色雜質；特殊生物原料應具備相應外觀標準。

2．純度和分子量

主要經SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。一般每個電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質量標準，分子量大小應在正確的條帶位置。

3．蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測。

4．效價

效價的測定一般根據蛋白含量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效價應達到規定的要求。

5．功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩定性等，并比較其與上批次原料的相關性。

（二）生物輔料

生物輔料一般指在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料、主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質量標準應符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質控標準》規定的標準要求，并且要適合于本企業的生產。

建議作以下檢驗：

1.牛血清或羊血清

外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物

無菌試驗：將血清直接37℃度放置7天，放在明亮處觀察，不得出現混濁或沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量不小于32mg/ml。

球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應≤2mg/ml。

2.牛血清白蛋白：

外觀：應為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其它雜質顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18-26℃時，溶解時間應不大于15分鐘。1%牛血清白蛋白水溶液的pH值應為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲方測定，質量標準為≥95％。

總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標準為≥90%。

3.酪蛋白：

酸度應符合生產所需的質量標準。

4．標記用酶

應在產品的質量標準中明示所使用的標記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應根據不同生產廠家的檢驗方法和質量標準進行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應大于3.0。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行測定，均不得出現非特異性反應。

生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。

（三）化學原材料

化學原材料的質量標準，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、重金屬檢測、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應符合《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業的生產。

1．無機類：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。

2．有機類：主要包括有吐溫20、三羥基氨基甲烷等。

3.特殊化學原料：Eu-DTTA，魯米諾等。

Eu-DTTA純度分析與鑒定：要求Eu-DTTA各功能團符合分子結構，純度在96%以上。

（四）其他原輔料

1．微孔板條

外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質量應無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應條塑料框架應配合合適。

材質：微孔反應板條每孔加200?L增強液，用發光免疫分析儀檢測其熒光值，平均本底熒光值≤1500。

吸附能力和精密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值，CV值結果應符合相關產品的功能性質量標準，一般批內CV≤5％,批間CV≤10％。

2．其他

粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應參照國家食品藥品監督管理局頒布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫療器械說明書、標簽和包裝標識管理規定》建立相應質量控制標準。

三、試劑盒各組分的生產

發光免疫分析試劑主要組分的生產包括包被反應板、標記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過產品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質控過程來保證其質量符合規定。

(一)固相載體的制備（因不同產品使用的包被載體有很大區別，在此以標準96孔微孔反應板為例進行描述）

1．包被板的準備

準備經檢驗合格的包被板，記錄批號、數目、狀態標識。

質控項目：尺寸，外觀，包裝。

2．包被液的配制

配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應在規定時間內使用。

質控項目：包被緩沖液配方，pH值，包被物成份。

3．包被板的包被

包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數量。

質控項目：包被體積，溫度，時間，過程監控。

4．洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）

按配方配制洗板工作液。

質控項目：洗板工作液配方，pH值。

5．封閉液的配制

按配方配制封閉液。

質控項目：封閉液配方，pH值。

6．洗板和封閉

包被完成后，抽去孔內包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。

質控項目：封閉體積，溫度，時間，過程監控。

質檢項目：封閉前檢驗包被均一性。

7．抽干

封閉后的反應板，抽干孔內液體。

質控項目：過程監控。

8．干燥

反應板應按工藝的要求進行干燥。質控項目：溫度，濕度，時間，過程監控等。

9．密封包裝

將干燥后的反應板用鋁箔袋密封包裝，內放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。

質控項目：密封性能，標示及效期等。

10．反應板（半成品）檢驗

對裝袋密封后的反應板進行抽樣檢驗，外觀、板內變異、板間變異。

(二)滴配過程

1．酶結合物的制備（根據各產品實際情況，該步驟可不進行）

采用常規過碘酸鈉——乙二醇法將相關的抗體（或抗原）標記辣根過氧化物酶（或其他酶），酶標記后的抗體（或抗原）應加入適當的保護劑保存于低溫。

質控項目：標記方法，過程控制。

2．酶結合物的鑒定

(1)功能性實驗

將酶結合物用酶稀釋液稀釋后，用于產品的滴配，其結果應符合相關試劑盒的質量標準。

(2)穩定性

將酶結合物用酶稀釋液稀釋，進行2-8℃，及熱穩定性實驗，滴配結果應符合相關試劑盒的質量標準。

3．酶結合物稀釋液

按酶結合物稀釋液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于規定時間內使用。

質控項目：酶結合物稀釋液配方，pH值。

4．酶結合物工作濃度的滴配

取酶結合物，用酶結合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應板進行滴配。測定系列標準品及相應的質控品，確定使體系達到最優的酶結合物工作濃度。

5．酶結合物工作液配制

將所需量酶結合物和酶結合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。

質檢項目：分裝前檢驗，用配套的反應板進行檢驗，外觀、靈敏度、質控品測定值、定量產品應作校準品線性檢測。

6．酶結合物工作液的分裝

按工藝要求分裝酶結合物工作液。

質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量，封裝后密封性。

7．酶結合物工作液（半成品）檢驗

對分裝后的酶結合物工作液進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、靈敏度、校準品劑量-反應曲線線性、質控品測定值。

(三)校準品、陰/陽性對照或質控品的制備

1．稀釋液

按稀釋液的配方配制，存放在2?8℃或-20℃保存，并于有效期內使用。

質控項目：稀釋液配方，pH值。

2．校準品、陰/陽性對照或質控品的配制

校準品、陰/陽性對照或質控品的配制應具有量值溯源性，可參照國家標準品、WHO標準品或其他級別的標準物質進行配制。

質檢項目：分裝前檢驗，準確性、劑量－反應曲線線性（定量產品）、質控品測定值。

3．校準品、陰/陽性對照或質控品的分裝

按工藝要求分裝校準品、陰/陽性對照或質控品。

質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量。4．校準品、陰/陽性對照或質控品（半成品）檢驗

對分裝后的校準品、陰/陽性對照或質控品進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、準確性、劑量－反應曲線線性（定量產品）、質控品測定值。

(四)化學發光底物的制備

1．底物緩沖液

按底物緩沖液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于有效期內使用。

質控項目：底物緩沖液配方，pH值。

2．化學發光底物（氧化劑和發光劑）的配制

分別按氧化劑和發光劑的配方在底物緩沖液中加入相應的氧化劑和發光劑

質控項目：氧化劑和發光劑配方。

質檢項目：分裝前檢驗，本底、發光強度。

3．化學發光底物（氧化劑和發光劑）的分裝

按工藝要求分裝化學發光底物（氧化劑和發光劑）。

質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量，封裝后密封性。

4．化學發光底物（半成品）檢驗

對分裝后的化學發光底物進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發光強度。

（五）銪標記物的制備

針對不同的標記生物原料，確定不同的標記制備工藝，包括銪-DTTA與標記生物原料的比例，標記溫度和標記時間、標記得率的計算標準等。在實際操作過程中要求嚴格按照SOP進行操作

（六）凍干

各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應該呈現疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復溶完全、迅速，呈澄清透明液體。

（七）分裝、燈檢和貼簽

分裝量用減重稱量法進行測量，把質量換算成體積后進行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質等。

（八）包裝

根據試劑盒包裝SOP要求及說明書的要求，以流水線操作形式進行包裝。包裝時應嚴格檢查品名、批號、裝量，認真核對各物料數量，并在關盒前進行復核。

四、質量控制

（一）半成品質量控制

1．半成品抽樣

檢驗人員按試劑的批號，根據抽樣申請單抽取規定數量的半成品各組分，作號標記、待檢。

2．質控品的要求

用于半成品質量控制的質控品包括陰/陽性樣品符合率，靈敏度（最低檢出量），特異性，檢測范圍，定量曲線的線性，精密性，穩定性等指標，如具有國家標準品或參考品的產品應使用國家標準品（參考品）或經國家標準品（參考品）標化的企業參考品進行檢驗。如無國家標準品（參考品），可采用企業參考品，企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

3．半成品檢驗

根據各個試劑盒的企業標準或者制檢規程進行半成品的檢驗，檢驗指標一般包括準確性、靈敏度、特異性、精密性、相關性等，均應達到相應的質量標準。企業應對每一批試劑的半成品進行穩定性研究。試劑盒各組分應留樣，2?8℃定期作穩定性考核，同時作37℃熱穩定性試驗，試驗結果應符合產品的質量標準。

（二）成品質量控制

1．成品抽樣

產品包裝完成后，質檢人員根據試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進行抽樣，同時填寫抽樣數量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數量應包括檢驗用數量和留樣數量。質檢人員同時應檢查相關原始記錄。

每一批試劑的報批批量應至少為10000人份。

2．成品檢驗

一般使用國家標準品（參考品）對成品進行檢驗，并達到國家標準品（參考品）的質量要求。若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業參考品，企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

在批放行前，每一批發光類診斷試劑應完成37℃熱穩定性試驗，試驗結果應符合產品的質量標準。

第四篇：體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則(生物芯片報批稿)

體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則——生物芯片類試劑生產及質量控制技術指導原則（報批稿）

2009-05-15 09:00 本指導原則所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個生物探針（包括DNA片段，寡核苷酸、抗原、抗體，組織，細胞等）按預先設計的排列方式固定在特制的基質（包括玻璃片，尼龍膜，硝酸纖維素膜等）上，用特定的方法提取生物靶分子并進行標記，然后與固定在基質上的生物探針特異性的結合，再用相應的檢測設備（如激光掃描儀、CCD檢測儀等）和分析方法（包括軟件）進行檢測、記錄、分析，實現對生物靶分子的定性或定量檢測的試劑。

根據芯片制作的主要原料和方法，生物芯片可分為核酸芯片、蛋白芯片、細胞芯片、組織芯片等。本指導原則是針對核酸和蛋白為檢測靶分子生物芯片的生產及質量控制技術指導原則，其它類型靶分子檢測的芯片診斷試劑可參考本指導原則。國家食品藥品監督管理部門將依據科學技術發展的需要，適時組織修訂。

一、基本原則

（一）試劑研制、生產用各種原料、輔料等應制定相應的質量標準，并符合有關法規的要求。

（二）試劑生產企業應具備相應的專業技術人員、儀器設備以及適宜的生產環境，獲得《醫療器械生產許可證》；同時，應按照《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》的要求建立相應的質量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應通過《體外診斷試劑生產企業質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。

（三）生物芯片類試劑在研制時，應當按照科學、規范的原則組織研發，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。

（四）試劑研制、生產過程中所用的物料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

（五）生產和質量控制的總體目標：保證試劑使用安全、質量穩定、工藝可控、檢測有效。

二、原材料質量控制

（一）核酸檢測芯片

核酸芯片檢測時，從生物樣本中提取的核酸可用熒光標記、金標記和酶標記；檢測方法包括光譜學方法和化學顯色。下面為熒光標記芯片技術指導原則，采用金標記和酶聯顯色等的生物芯片診斷試劑可參照核酸芯片和蛋白芯片相關部分。

1、主要生物原料

核酸檢測芯片的主要生物原料包括模板DNA、dNTPs、引物、探針、標記物等。主要生物原料若為企業自己生產，其工藝必須相對穩定，企業應按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規定的質量標準；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，同時，供應商應提供相應的質量保證證明和相應的質檢報告，達到生產規定的質量標準。如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據國家相關法規的要求進行變更申請。

（1）模板DNA 重組DNA：經測序驗證，關鍵堿基或序列沒有錯誤。1×TE溶解，濃度為100ng/μl以上，-20℃保存。作為陽性參考品時，其稀釋度由企業根據產品標準確定。（2）dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）

HPLC純，PCR級，無DNase、RNase污染，-20℃以下保存。

（3）引物

生產中的引物原材料為凍干粉，PAGE純或HPLC純。用標準DNA模板擴增，電泳檢測，譜帶單一，大小正確，與對照引物比較，產物量一致。符合視為合格引物，-20℃以下保存。

（4）探針（用于陣列制備）

重組DNA, 凍干粉（或1×TE溶解液）：至少滿足一個批次的用量，酶切鑒定分析圖譜。

PCR產物，凍干粉（或1×TE溶解液）：至少滿足一個批次的用量，PCR電泳鑒定圖譜。

合成寡核苷酸：PAGE純或HPLC純，至少滿足一個批次的用量，提供該產品的PAGE電泳分析圖譜或HPLC分析圖譜。

探針序列的正確性：應用克隆鑒定的標準DNA雜交鑒定或測序鑒定。

純度和濃度檢測：采用電泳方法，電泳圖譜沒有雜帶，目的條帶的強度與已知濃度的標準DNA條帶進行參比計算其強度。純度較高的DNA，可用紫外分光光度計進行定量。檢驗合格后入庫，避光、-20℃以下保存。

（5）標記物

含有激發光波長和發射光波長介于280?680nm的所有熒光分子，HPLC純。

（6）Taq DNA聚合酶

SDS-PAGE 檢測，純度＞95%，具有DNA聚合酶活性，無核酸內切酶活性；具熱穩定性，94℃保溫1小時后仍保持50％活性。產品-20℃保存。

（7）尿嘧啶糖基化酶（UNG）

具尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內切酶活性。1U UNG 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板被降解后不能產生擴增產物。產品-20℃保存。

（8）RT 酶

具有逆轉錄活性，無核酸內切酶活性，-20℃保存。

（9）RT-PCR酶

具逆轉錄酶活性和DNA聚合酶活性，無核酸內切酶活性，具熱穩定性，94℃ 1小時后仍保持50%活性。產品-20℃保存。

（10）緩沖液

各類酶制品所需的反應緩沖液由廠家隨酶制品提供，-20℃保存。

2、主要生物輔料

主要生物輔料包括酶類（蛋白酶、核酸酶等）、核酸提取試劑、魚精DNA、封閉用蛋白、雜交液等，企業應建立相應的質量標準。主要生物輔料若為企業自己生產（配制），其工藝必須相對穩定，并按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規定的質量標準；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，同時，供應商應提供相應的質量保證證明和相應的質檢報告，達到生產規定的質量標準。

3、主要化學原輔料

化學原材料的質量標準參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》分析純級別進行檢驗。主要的檢測指標包括：溶液外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。

主要化學原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發生變更。化學原材料在購入時，原材料的生產商必須提供該批次化學原材料的質量保證材料和質檢報告，其質量標準應達到生產所需的質量標準。

4、其他物料

（1）載玻片 外觀：明亮處用肉眼觀察無缺刻，無劃傷等。規格按設計要求。

激光掃描儀掃描（波長為芯片檢測波長）：包被層基本均勻。

（2）試管、吸頭、試劑瓶等

一次性使用，由生產廠家提供質量保證，達到設計要求。

（3）其他：

包括試劑瓶標簽、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應參照國家食品藥品監督管理局頒布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫療器械說明書、標簽和包裝標識管理規定》建立相應質量標準。

（二）蛋白檢測芯片

1．主要生物原料

與生產的產品質量最密切相關的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于點膜、標記相關酶、納米金、光學基團及中和反應用抗原或抗體等。使用前應按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規定的質量標準。主要生物原料若為企業自己生產，其工藝必須相對穩定；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據國家相關法規的要求變更申請。

主要生物原料的常規檢驗項目一般包括：

⑴ 外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色雜質；特殊生物原料應具備相應外觀標準。

⑵ 純度和分子量

生物原料經SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析；也可用其他適宜的方法，如高效液相法等進行分析。根據所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。一般每個電泳道加樣量為5μg；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質量標準，分子量大小應在正確的條帶位置。

⑶ 蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其它適宜方法進行檢測。

⑷ 效價

效價的測定一般根據蛋白含量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效價應達到規定的要求。

⑸ 功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩定性等，并比較其與上批次原料的相關性。

2．主要生物輔料

生物輔料指的是在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質量標準應符合《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》規定的質量標準要求，并且要適合于企業生產。

建議作以下檢驗：

⑴ 牛血清或羊血清

外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物

無菌試驗：將血清直接37℃放置7天，放在明亮處觀察，不得出現混濁或沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，標準為不小于32mg/ml。

球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀。沉淀溶于0.85%NaCl溶液至1ml，用Lowry法測定蛋白含量不能大于2mg/ml。⑵ 牛血清白蛋白：

外觀：應為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其它雜質顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時間在18-26℃時應不大于15分鐘。pＨ值應為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，其標準為不小于干重的95％。

總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為不小于總蛋白含量的95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標準為不小于90%。

⑶ 酪蛋白：

應符合生產所需的質量標準。

⑷ 標記用酶

應在產品的質量標準中明示所使用的標記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應根據不同生產廠家的檢驗方法和質量標準進行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應大于3.0。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行測定，均不得出現非特異性反應。

生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。

3．化學原輔料

參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》分析純級別進行檢驗。主要的檢測指標包括：溶液外觀、一般鹽類、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。

主要化學原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發生變更。化學原材料在購入時，原材料的生產商必須提供該批次化學原材料的質量保證材料和質檢報告，其質量標準應達到生產所需的質量標準。

4．其他物料

⑴ 基質

以硝酸纖維素膜為例：孔徑符合設計要求（0.45μm、0.22μm等）、均一性（厚度及毛細遷移速度±20％）、尺寸（與標識吻合）

⑵ 試劑瓶和干燥劑

由生產廠家提供質量保證，達到規定要求。

⑶ 其他：說明書、包裝外盒等

應參照國家食品藥品監督管理局頒布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫療器械說明書、標簽和包裝標識管理規定》建立相應質量控制標準，如數量、規格等。

三、試劑盒各組分的生產

生物芯片主要包括DNA芯片、蛋白芯片、組織芯片和細胞芯片等。生物芯片診斷試劑產品基本可分成二個部分，一部分是芯片，另一部分檢測用工作液。如果有配套的檢測儀器，還需對儀器及處理軟件的應用加以說明。

（一）芯片的生產

芯片生產的基本過程包括探針的獲取方法，純化，點樣，固定。

1．探針獲取

不同芯片，主要是探針不同，生物芯片的探針主要包括以下幾類，其它探針可參考制定相應的技術及質量標準。

（1）DNA探針的獲取

探針的形式包括PCR產物、克隆DNA、人工合成DNA片段等；要求有生產程序和質量指標及檢測方法，要進行純化，有固定的純化程序。（2）抗原的生產

抗原獲得方法包括細胞培養、從生物材料中分離提取、基因工程表達以及合成肽等。基因工程表達產物又分為純抗原蛋白、融合蛋白等。

（3）抗體

抗體分單克隆抗體和多克隆抗體。抗體制備包括細胞培養，動物腹水，基因工程表達等方式。

（4）細胞和組織

包括細胞或組織類型，固定方法。組織材料包括固定，包埋，切片等。

2．陣列的排列設計

陣列的排列可以是依次排列、隨機排列、對角線排列以及其它排列方式，但設計時需考慮重復次數和對照等因素。

3．點陣的制作

使用儀器的需要確定型號，程序；手工制作的也應有標準操作程序。

4．固定：包括固定方式，固定條件等。

應對芯片生產的過程進行相應的質量控制，如點樣和固定過程的監控、點樣均一性檢驗等。

（二）工作液配制

1．芯片生產所需試劑，包括細胞培養基，探針制備試劑，陣列制作和固定試劑等。

2．樣品處理試劑，芯片檢測靶分子分為核酸和蛋白質。檢測核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣，DNA提取或RNA提取試劑，逆轉錄試劑，PCR擴增試劑，核酸標記試劑等；檢測蛋白的處理試劑包括取樣試劑，蛋白稀釋液以及特殊試劑等。

3．反應液：檢測核酸時的反應液包括預雜交液，雜交液，洗脫液等；檢測蛋白時，包括封閉液，抗原/抗體反應液，洗脫液，顯色液，顯色終止液等。

（三）數據判讀

1．判斷標準及依據，包括Cut off值的確定依據。

2．數據判讀方式：人工還是軟件判讀。

3．如果是軟件判讀，應提供軟件判斷的科學依據（包括生物學原理、數據獲取原理和判斷實驗是否成立的依據）以及實驗測試的原始報告（或數據），并需要說明：

⑴ 軟件的來源：購買或自己編制，是否獲得注冊等。

⑵ 軟件的用途：包括對數據的分析、存儲、解讀、含義等。

⑶ 軟件的使用：基本的使用程序。

四、半成品質量控制

（一）抽樣

檢驗人員按批號抽取檢驗需要數量的半成品，作好標記，待檢。

（二）半成品檢驗

利用上一批檢驗合格的試劑盒的相應組分，對本批生產出的各種試劑盒組分分別進行檢驗，檢驗結果達到產品的質量標準。

半成品檢驗，一般使用國家標準品（參考品）或經國家標準品（參考品）標化后的企業參考品進行。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業參考品，企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

檢測所抽樣的半成品試劑盒的性能，包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應達到相應質量標準的要求。精密性用比最低檢測限高一個數量級的質控品，重復檢測10次，判定結果一致。對定量檢測試劑，同時應分析其線性相關系數和校準品檢測結果的準確性。

企業應該對每一批試劑的半成品進行穩定性測試。穩定性試驗可在在特定溫度或特定條件下完成。對蛋白芯片，應完成37℃熱穩定性試驗，試驗結果應符合產品的質量標準。

五、成品質量控制

產品包裝完成后，質檢人員根據試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進行抽樣，同時填寫抽樣數量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數量應包括檢驗用數量和留樣數量。質檢人員同時應檢查相關原始記錄。

每一批生物芯片類診斷試劑報批批量不少于2000人份。

（1）成品檢驗

一般使用國家標準品（參考品）或經國家標準品（參考品）標化后的企業參考品進行。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業參考品，企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

（2）穩定性試驗

試劑批放行前，應完成穩定性試驗。穩定性試驗可在特定溫度或特定條件下完成。對蛋白芯片，每批試劑批放行前，應完成37℃熱穩定性試驗，達到相應的質量標準。

第五篇：體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則-核酸擴增

體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則——核酸擴增法試劑生產及質量控制技術指導原則（報批稿）

2009-05-15 09:00

核酸擴增檢測技術泛指以擴增DNA或RNA為手段，從而檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術，如聚合酶鏈反應（PCR）、連接酶鏈反應（LCR）、轉錄依賴的擴增反應（TMA）等。核酸擴增法檢測試劑是基于核酸擴增檢測技術的體外診斷試劑，目前已經用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內物質的型別鑒定等不同領域。

本指導原則僅適用于核酸擴增法檢測試劑的生產及質量控制，其他類核酸檢測試劑可參照相關內容。國家藥品監督管理部門依據科學技術發展的需要，適時組織修訂。

一、基本要求

（一）核酸擴增類檢測試劑的生產企業應獲得《醫療器械生產許可證》。研制、生產用的各種原料、輔料等應制定其相應的質量標準，并應符合有關法規的要求。

（二）試劑生產企業應具有與其技術要求相適應的人員、廠房、設施和儀器設備以及適宜的生產環境，配備滿足核酸提取和擴增檢測以及操作人員防護所需的設備。建立專用實驗室，實驗室應當嚴格分區，人員和物品應當單向流動，以最大限度地防止實驗過程中樣品之間的污染和避免擴增產物的污染。生產用于病原微生物核酸檢測的生產企業應建立符合生物安全要求的設施和措施。

（三）試劑生產企業應按照《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》的要求，建立相應的質量管理體系，并應通過《體外診斷試劑生產企業質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。

（四）核酸擴增類檢測試劑的引物設計應當符合核酸檢測設計的要求，擴增體系應設定合理的內標和外標，試劑需設置抗污染的特定措施，擴增產物須進行確證研究。

（五）企業使用新型原材料時，應提供與通行原材料比對研究結果及相關資料。使用未列入上述標準的化學試劑，應不低于分析純。

二、原材料

應提供主要原材料如引物、探針、企業參考品或標準品等的選擇與來源、制備過程、質量分析和質量標準等的相關研究資料。若主要原材料為企業自己生產，其生產工藝必須相對穩定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應提供的資料包括：對物料供應商審核的相關資料、購買合同、供貨方提供的質量標準、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質量檢驗資料。主要原材料（包括生產工藝）或其供應商發生變更，應依據國家相關法規的要求進行變更申請。

核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應無DNase和RNase污染。

（一）脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應為HPLC純、PCR級，無DNase和RNase污染。—20℃保存。

（二）引物

由一定數量的dNTP構成的特定序列，通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。

凍干粉，序列正確，合成量應達到試劑生產要求。純度應達到電泳級（PAGE）或HPLC級，不含雜帶。應提供合成機構出具的合成產物的質檢證明，如PAGE電泳結果或HPLC分析圖譜。

應作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計測定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間，可視為合格引物。—20℃保存。

（三）探針

是指特定的帶有示蹤物（標記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'+'-端(和/或3'+'-端)進行標記，如熒光素報告基團或其他發光標記物，在3'+'-端標記熒光素淬滅基團，并經HPLC或其他適宜方法純化。

凍干粉，純度應達到HPLC純。應提供合成機構出具的合成產物的質檢證明，如HPLC分析圖譜；應對探針的核酸序列及標記的熒光素或化學發光物進行核實，并作HPLC分析。應以可見—紫外分光光度計進行200—800nm掃描，在260nm處應有吸收峰。另外，根據標記熒光素的不同，還應該在熒光素的激發波長處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫。避光、—20℃保存。

（四）DNA聚合酶

如Taq DNA聚合酶。應具有DNA聚合酶活性，無核酸內切酶活性；具熱穩定性，94℃保溫1小時后仍保持50%活性。—20℃保存。

（五）尿嘧啶糖基化酶（UNG）

具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內切酶活性，IU UNG在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模版應完全降解，不能產生擴增產物。—20℃保存。

（六）逆轉錄酶

具逆轉錄酶活性，無核酸內切酶活性。—20℃保存。

三、生產工藝

核酸擴增類檢測試劑的基本生產工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應符合要求，原材料應混合均勻，配制過程應對pH、電導率等關鍵參數進行有效控制。

工藝研究的資料應能對反應體系涉及到的基本內容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應條件、校準方法、質控方法、臨界值的確定、穩定性和有效期，提供確切的依據。

四、質量控制

（一）半成品質量控制

1．按批號抽取規定數量的半成品。

2．以參考品 / 對照品進行半成品質量控制。如果產品具有國家標準品或參考品，應以其進行檢定。如果產品不具有國家標準品或參考品，應根據規定制備相應的企業參考品，企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

3．半成品檢定內容包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測結果應符合質量標準的要求。

4．半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進行分裝和包裝。

（二）成品質量控制

1．每一批核酸擴增類檢測試劑報批批量應不低于3000人份。

2．產品完成包裝后，應根據生產量進行抽樣和生產記錄審核。

3．以參考品 / 對照品或參考品，進行成品質量檢驗。結果應符合要求。

4。成品檢驗的內容應包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性和穩定性。

5．試劑批放行前，應對需要進行穩定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進行穩定性試驗。穩定性試驗可采用加速破壞試驗。