第一篇：病理石蠟切片心得體會

病理石蠟切片心得體會

石蠟切片是組織學常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領(lǐng)域的研究中。

我從事病理技術(shù)工作剛剛一年多，細細回味自己在實際工作中的切片過程，有一點點心得體會，在這里向大家做一簡單匯報。

一、組織脫水：

要想切出一張好的石蠟切片，組織處理非常重要。經(jīng)典的脫水方法，酒精脫水，二甲苯透明，石蠟浸蠟是最簡單、方便、容易掌握，也是最便宜效果最好的方法。但脫水過程中尤其要注意的是梯度酒精脫水。在實際工作中，有時為了省事，往往采取倒掉第一缸酒精，后面往前移，這樣會導(dǎo)致第一缸酒精濃度偏高，高濃度酒精，能使蛋白質(zhì)凝固，使組織表面發(fā)硬，酒精無法滲透到組織深處，造成組織脫水效果不佳，從而不能切出優(yōu)質(zhì)石蠟切片。我的做法是，在更換液體時，盡管是后邊液體往前邊倒，但一定要測量其濃度，不合適就要調(diào)整到合適為止。這樣像子宮平滑肌瘤這樣的硬組織也能切除很好的切片。

二、組織包埋：

組織包埋好壞同樣會影響石蠟切片質(zhì)量。有些小組織，特別是內(nèi)窺鏡活檢組織，如果組織沒切全，就有可能會影響診斷。因此。小組織切出優(yōu)質(zhì)切片的重要步驟是把好組織包埋這一關(guān)。首先，最好選用5x5mm或更小的包埋底模，這樣的底模即可將組織完全置于蠟塊切面的中心，又可連續(xù)切片并將蠟片撈在載撥片相對集中的區(qū)域而利于閱片診斷。另外，包埋時先把底模放入少許石蠟，將組織移放在底模里移至冰上，待石蠟略冷卻再用齒科鑷子將組織集中到一塊并按壓到一個平面后，再注滿石蠟，平移到冰臺上。

三、組織切片：

切片工藝上稍加講究，就可做到“多”、“快”、“好”、“省”。

1、先粗切所有蠟塊。用廢棄刀片將每個蠟塊粗切至組織全部暴露的最大切面，邊切邊排序，擺放在事先做好的冰盤中冷凍。

2、全部蠟塊粗切完成后，再更換新刀片細切。將冰凍好的蠟塊迅速按放固定好，先切2-3張，削去浮蠟后即可連續(xù)切片，切片時要求用力均勻柔和，搖速不宜過快或者過慢，切片厚度一般為3-5um，如為淋巴結(jié)，切片厚度應(yīng)為3um，這樣鏡下細胞無重疊，清晰，透亮利于診斷。切出的蠟片先放在入40℃熱水中，在這種溫度下，蠟片迅速舒展得非常平整，再裱貼至載玻片上。采用這種方法切片，既有速度又節(jié)省刀片，最主要的是能切出高質(zhì)量的切片。

四、染色：

染色同樣會影響切片的整體質(zhì)量。染色過程中最重要的是蘇木素染色后經(jīng)鹽酸酒精分化，流水沖洗即反藍過程，時間一定要充分，否則切片再好，鏡下結(jié)構(gòu)也不夠清晰。

切片經(jīng)過染色后，通過各級酒精脫水，由低濃度到高濃度，低濃度酒精對伊紅有分化作用，時間要短，向高濃度時逐步延長脫水時間，染色經(jīng)過脫水后必須經(jīng)過二甲苯處理，這樣的切片看切來才晶瑩剔透，使閱片者賞心悅目。

以上是我在工作中得出的一點體會，不足之處請各位批評指正。

第二篇：病理實驗 各種切片介紹

1.腎小管水樣變

腎小球周圍腎小管體積大，染色淡紅

近曲小管上皮細胞腫脹，向管內(nèi)突出，官腔不規(guī)則變小，胞漿內(nèi)有粉紅色小顆粒，分布均勻，大小一致，細胞核結(jié)構(gòu)清晰 2.肝脂肪變性

小葉周圍肝細胞胞漿出現(xiàn)大小不等的圓形空泡 有的空泡較大，將核擠到一邊 3.腎小管玻璃樣變

近曲小管上皮內(nèi)出現(xiàn)大小不一的紅色球形顆粒 4.脾動脈硬化(玻璃樣變)低倍鏡：脾動脈增厚，脾小梁增粗，脾小體中央動脈及其小梁內(nèi)的小動脈壁增厚，紅染 高倍鏡：脾小體中央動脈壁增厚，管腔變小，內(nèi)膜下可見均勻紅染無結(jié)構(gòu)物質(zhì) 5.脾梗死

低倍鏡：紅染區(qū)即為壞死區(qū)，其中散落著一些深藍色碎屑，為壞死的細胞核 高倍鏡：核固縮，碎裂，溶解，脾小體和小梁結(jié)構(gòu)模糊，尚可辨認 6.肉芽組織

低倍鏡：表面有一層炎性滲出物，其下可見大量的新生的毛細血管垂直表面生長，其間有成纖維細胞。深部血管減少，成纖維細胞逐步變?yōu)槔w維細胞，并有膠原纖維生成

高倍鏡：新生毛細血管由單層內(nèi)皮細胞構(gòu)成，成纖維細胞大，胞漿豐富淡紅色，成梭型或分支狀，可見各種炎細胞 7.慢性肺淤血

低倍鏡：肺泡壁增厚，肺泡壁內(nèi)毛細血管擴張充血。高倍鏡：肺泡腔內(nèi)含淡紅色水腫液及心衰細胞、8.慢性肝淤血

中央靜脈及周圍肝竇擴張充血，近中央靜脈的肝細胞萎縮甚至消失 9.混合血栓

低倍鏡：粉紅色不規(guī)則小梁與淺紅色區(qū)域交織存在 高倍鏡：粉紅色小梁為已經(jīng)崩解而凝聚成顆粒的血小板，小梁邊緣附近有較多的中性粒細胞，血小板小梁間的淺紅色區(qū)域為絲網(wǎng)狀的纖維素及自溶的紅細胞 10.腎貧血性梗死

低倍鏡：正常腎組織與梗死組織交錯分布，梗死灶內(nèi)可見輪廓模糊的腎小管和腎小球，梗死灶周邊部有較多的中性粒細胞浸潤

高倍鏡：壞死的腎小球及周圍腎小管結(jié)構(gòu)模糊，胞質(zhì)紅染，腎小管數(shù)目明顯減少，殘留的細胞核呈固縮狀態(tài) 11.肺出血性梗死

肺泡輪廓可見，肺泡壁細胞壞死，核消失，肺泡腔內(nèi)聚集大量的紅細胞 12.會厭白喉、低倍鏡：支氣管上皮壞死脫落，表面附著粉染的假膜 高倍鏡：假膜由纖維素，壞死組織和炎細胞構(gòu)成 13.心肌膿腫

肉眼可見心肌組織內(nèi)圓形淡藍色區(qū)域為膿腫

鏡下可見膿腫灶內(nèi)心肌纖維破壞消失，積聚以大量中性粒細胞和膿細胞，膿腫周圍心肌纖維變性壞死，并有炎細胞浸潤。14.急性化膿性闌尾炎 蜂窩織炎 低倍鏡：闌尾各層內(nèi)有彌漫的炎細胞浸潤，腔內(nèi)有炎性滲出及壞死脫落的粘膜上皮，漿膜面有炎性滲出物，血管擴張充血

高倍鏡：各層浸潤的炎細胞為中性粒細胞，漿膜面滲出物由纖維素和中性粒細胞組成 15.異物肉芽腫

低倍鏡：主要由多核巨細胞，單核巨噬細胞等成分構(gòu)成，為結(jié)節(jié)狀的病變

高倍鏡：病變部位主要由單核巨噬細胞，散在分布較多的異物多核巨噬細胞，邊緣區(qū)可見纖維組織增生 16.纖維肉瘤

低倍鏡：瘤細胞束狀排列成人字形，羽毛性或魚骨狀結(jié)構(gòu)，間質(zhì)膠原纖維較少。分化差者，瘤細胞彌散排列，間質(zhì)纖維少，血管豐富

高倍鏡：分化好者，瘤細胞長梭型，核肥大，染色質(zhì)較粗，可見核分裂像，細胞大小較一致；分化差者，瘤細胞呈短梭型，圓形或不規(guī)則型，有巨瘤細胞，可見病理性核分裂像 17.鱗狀上皮乳頭瘤

低倍鏡：腫瘤呈乳頭狀，實質(zhì)為增生的鱗狀上皮，間質(zhì)為血管及纖維組織，有少量炎細胞浸潤

高倍鏡：瘤細胞分化成熟，排列近似正常鱗狀上皮，可見角化，基底膜完整 18.子宮平滑肌瘤

低倍鏡：瘤組織呈圓形結(jié)節(jié)，與周圍組織界限清楚，瘤細胞分化較好，大小形態(tài)一致，呈編織狀排列。

高倍鏡：瘤細胞類似正常的平滑肌細胞，核呈長桿狀，兩端頓圓 19.乳腺纖維腺瘤

低倍鏡：有增生的腺管和纖維組織，有管周型，管內(nèi)型和混合型

高倍鏡：增生的上皮為立方或者桿狀，兩層，未層為肌上皮，異型性較低，內(nèi)層為腺上皮 20.食管鱗狀細胞癌

低倍鏡：可見癌巢，與間質(zhì)分界清楚，高分化的癌巢中可見層狀紅染的角化珠，低分化者不可見

高倍鏡：高分化癌細胞體積較大，核大深染，可見病理性核分裂像和細胞間橋，癌巢中間的角化珠內(nèi)可見角化不全的藍色細胞核碎屑。低分化的癌細胞分化差，癌巢內(nèi)細胞極性，層次不明，癌細胞排列紊亂，大小不等，可見核分裂像，五角化珠與細胞間橋，間質(zhì)有炎細胞浸潤

21.胃腺癌

低倍鏡：分化好者，癌細胞排列成腺管狀，排列不規(guī)則，多層排列。分化差者，癌細胞形成癌巢，與間質(zhì)分界清楚，癌細胞突破粘膜層向深層浸潤

高倍鏡：癌細胞表現(xiàn)不同程度的異型性，大小不一，形態(tài)各異，排列紊亂，可見病理性核分裂像

22.淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腺癌

低倍鏡：正常淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)尚存，部分淋巴結(jié)破壞，于淋巴結(jié)邊緣竇及皮質(zhì)，髓質(zhì)內(nèi)可見多量大小不一，形態(tài)不規(guī)則的癌性腺體，高倍鏡：癌細胞有明顯的異型性，可見病理性核分裂像 23.骨肉瘤

低倍鏡：癌組織由大小不等，異型性顯著的癌細胞構(gòu)成，可見腫瘤性類骨質(zhì)形成

高倍鏡：癌細胞多為立方形，多邊形，梭型，排列不規(guī)則，核大，深染，部分可見核仁，異型性明顯 24.畸胎瘤

低倍鏡：囊壁由復(fù)層鱗狀上皮所襯覆，可見皮膚的附屬結(jié)構(gòu) 高倍鏡：各胚層來源的組織基本分化成熟，無明顯的異型性。31.急性風濕性心內(nèi)膜炎 theumatic myocarditis 低倍鏡：心肌間質(zhì)充血，水腫，心肌纖維排列疏松，血管周圍可見由簇細胞構(gòu)成的梭型或橢圓形病灶，即風濕小體

高倍鏡：小體中央有少許紅色絮狀物質(zhì)，為纖維素樣壞死，其外部見許多風濕細胞，體積較大，梭型或多邊形，胞漿豐富，嗜堿性，核大，卵圓形，空泡狀，染色質(zhì)集中于核中央，有細絲放射至核膜，似梟眼，縱切像毛蟲。外層有少量淋巴細胞，單核細胞及漿細胞浸潤。

診斷要點:心肌間質(zhì)形成具有特征性的Ashoff小體 32.主動脈粥樣硬化 atherosclerosis of aorta 低倍鏡：主動脈內(nèi)膜部分增厚，表層纖維結(jié)締組織增生，并有玻璃樣變。內(nèi)膜深層見一片淺依紅色無結(jié)構(gòu)樣壞死物，為粥樣斑塊。其中有許多呈斜方形，菱形和針樣空隙，為膽固醇結(jié)晶

高倍鏡：可見泡沫細胞及膽固醇結(jié)晶，中膜肌層不同程度的萎縮，外膜疏松有少量淋巴細胞浸潤

診斷要點：內(nèi)膜表面纖維組織增生，玻璃樣變性 內(nèi)膜深層為大量壞死物，并可見膽固醇結(jié)晶 內(nèi)膜底部和邊緣科技那肉芽組織增生，外周可見少許泡沫細胞 中膜不同程度萎縮 33.冠狀動脈粥樣硬化

冠狀動脈內(nèi)膜部分增厚，半月形向管內(nèi)突出，表層纖維結(jié)締組織增生，部分玻璃樣變，下位依紅色無結(jié)構(gòu)粥樣斑塊，中膜平滑肌萎縮。34.肺氣腫

低倍鏡:部分肺泡管和肺泡囊,肺泡腔明顯擴張成囊狀,細小支氣管壁增厚

高倍鏡:肺泡間隔變薄,斷裂,相互融合成囊狀,肺泡壁毛細血管數(shù)量減少,細小支氣管管壁可見炎細胞浸潤

診斷要點：肺泡擴張融合，肺泡間隔斷裂 細小支氣管慢性炎細胞浸潤 35.大葉性肺炎紅色肝樣變

低倍鏡:肺泡壁毛細血管擴張,肺泡腔內(nèi)充滿炎性滲出物

高倍鏡:毛細血管擴張充血,肺泡腔內(nèi)可見大量纖維素,紅細胞,中性粒細胞,單核巨噬細胞

診斷要點：肺泡腔內(nèi)大量的纖維素和紅細胞滲出 灰色肝樣變期

低倍鏡:肺組織固有結(jié)構(gòu)存在,肺泡壁變窄,其內(nèi)毛細血管呈貧血狀態(tài),肺泡腔內(nèi)有大量炎性滲出物,胸膜表面有纖維素滲出

高倍鏡:肺泡腔擴張,其內(nèi)充滿大量纖維素和中性粒細胞以及少量巨噬細胞,肺泡間孔擴張,部分區(qū)域可見纖維素穿過肺泡間孔與相鄰肺泡腔內(nèi)的纖維素網(wǎng)連接

診斷要點：肺泡腔內(nèi)可見大量的纖維素和中性粒細胞滲出 36.小葉性肺炎

低倍鏡:肺組織內(nèi)血管擴張充血,可見彌漫三載的灶性病變,肺泡腔擴張.高倍鏡:病灶中心可見細支氣管,粘膜上皮部分脫落壞死,腔內(nèi)有膿性分泌物,周圍肺泡腔有多量炎細胞浸潤.部分病灶內(nèi)肺組織周圍固有結(jié)構(gòu)破快,形成小膿腫.病灶間肺泡代償性擴張.診斷要點：肺內(nèi)彌漫散在的化膿性病灶，病變細支氣管及所屬肺泡腔內(nèi)的滲出物為中心粒細胞 可見正常的肺泡和代償性擴張的肺泡 37.矽肺 低倍鏡:肺組織內(nèi)可見矽結(jié)節(jié)以及彌散性間質(zhì)纖維化

高倍鏡:矽結(jié)節(jié)內(nèi)可見巨噬細胞,成纖維細胞,纖維細胞以及膠原纖維.后三者呈同心圓狀排列

診斷要點：矽結(jié)節(jié)形成，間質(zhì)彌漫性纖維化 38.肺小細胞癌

低倍鏡:肺組織大部分區(qū)域被破壞,局部出現(xiàn)體積較小的瘤細胞

高倍鏡:腫瘤細胞體積較小,一部分如淋巴細胞大小,核圓形,染色較深,胞漿小.一部分呈短梭型,核深染,一端較細,一端較粗,呈葵花籽樣,另一部分體積較大,形狀不規(guī)則.診斷要點：肺組織內(nèi)見浸潤性生長的惡性腫瘤細胞，瘤細胞體積小呈巢狀排列，部分呈燕麥狀

39.慢性萎縮性胃炎

低倍鏡:粘膜萎縮變薄,腺體變小,可有囊性擴張,數(shù)目減少

高倍鏡:粘膜上皮有明顯的上皮化生,固有層間質(zhì)內(nèi)有慢性炎細胞浸潤

診斷要點： 40.慢性胃潰瘍

低倍鏡:兩側(cè)為正常胃組織,中間為潰瘍部,凹陷缺損病灶深達肌層

高倍鏡:從上到下可見四層結(jié)構(gòu) 滲出層：中心粒細胞和纖維素滲出 壞死層：紅染無結(jié)構(gòu)的壞死物質(zhì) 肉芽組織層：幼稚的纖維結(jié)締組織，成纖維細胞，毛細血管較多，少許炎細胞浸潤 瘢痕組織層：由纖維結(jié)締組織組成，可發(fā)生玻璃樣變

診斷要點：胃黏膜局部組織成凹陷缺損，其底部從上到下可見典型的4層結(jié)構(gòu) 41.亞急性重型肝炎

低倍鏡：肝組織出現(xiàn)大片壞死，有壞死區(qū)和出血區(qū)

高倍鏡：肝索竭力，肝細胞溶解，呈現(xiàn)彌漫性的大片壞死，并有肝細胞結(jié)節(jié)狀再生 42.門脈性肝硬化

低倍鏡：正常肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，由大小不等，圓形或者橢圓形的假小葉組成，周邊有較多的纖維組織，其中有淋巴細胞浸潤和小膽管再生

高倍鏡：假小葉有以下特點，肝細胞排列紊亂，部分肝細胞變性壞死，可見肝細胞再生；中央靜脈缺如，偏位或者有兩個以上中央靜脈，部分假小葉可見會管區(qū) 43.肝細胞肝癌

低倍鏡:癌細胞排列成小梁狀，類似肝細胞索，小梁間為血竇。癌細胞染色較深

高倍鏡:癌細胞呈多邊形,胞漿豐富,顆粒狀,嗜酸性,核大深染,核漿比例增大.分化差者異型性明顯,常有多核和巨核瘤巨細胞 44.霍奇金淋巴瘤

低倍鏡:淋巴結(jié)正常結(jié)構(gòu)破壞,被大量瘤細胞取代.瘤細胞成分多樣化,可見多核巨細胞.高倍鏡:瘤組織中有一種特殊的多核瘤巨細胞,體積較大,橢圓形或不規(guī)則形,胞漿豐富,嗜雙色性或嗜酸性.核大,多見雙核或多核,染色質(zhì)沿核膜排列,使核膜增厚,核內(nèi)有一嗜酸性大核仁.核仁便捷光滑整齊,周圍有一層空暈,成為r-s細胞,雙核的rs細胞兩核等大排列,都有大而紅的核仁,稱為鏡影細胞.可見較多的嗜酸性粒細胞,漿細胞和淋巴細胞浸潤.46.彌漫性毛細血管內(nèi)增生性腎小球腎炎

低倍鏡:病變彌漫累積及幾乎所有的腎小球,腎小球內(nèi)細胞數(shù)目增多,腎小球體積增大,腎間質(zhì)充血,有炎細胞浸潤

高倍鏡:腎小球內(nèi)血管內(nèi)皮細胞核系膜細胞增生,少量中心粒細胞浸潤,毛細血管官腔狹窄閉塞,很少見紅細胞,呈貧血狀態(tài).腎小管尤其是近曲小管上皮細胞腫脹,顆粒變性,部分腎小管可見蛋白及白細胞管型.腎間質(zhì)毛細血管擴張充血及炎細胞浸潤.47.新月體性腎小球腎炎

低倍鏡:多數(shù)腎小球可見到新月體和環(huán)狀體形成.高倍鏡:腎小球囊壁層上皮細胞增生成多層,如新月狀,重者包繞整個血管從,構(gòu)成環(huán)狀體.部分腎小球毛細血管叢因受新月體壓迫兒纖維化或玻璃樣變,所屬腎小管也萎縮,部分腎小球代償性肥大,所屬腎小管也擴大.間質(zhì)纖維增生伴有淋巴細胞浸潤.48.慢性腎小球腎炎

低倍鏡:病變彌散,腎小球數(shù)目減少,部分腎小球纖維化,玻璃樣變.腎小球相對集中,部分代償性肥大,擴張.間質(zhì)廣泛的結(jié)締組織增生.高倍鏡:受累腎小球萎縮,纖維化或玻璃樣變,相應(yīng)腎小管也萎縮,纖維化或消失.周圍腎小球體積增大,腎小管擴張,可見各種管型.腎間質(zhì)大量纖維結(jié)締組織增生伴淋巴細胞浸潤,間質(zhì)內(nèi)細小動脈管壁增厚,玻璃樣變性,官腔狹窄.診斷要點 大量腎小球纖維化或玻璃樣變,所屬腎小管萎縮消失,存留腎單位代償性肥大,腎小球集中現(xiàn)象.49.急性腎盂腎炎

低倍鏡:腎組織中片狀分布的炎性病灶,腎盂粘膜充血水腫.有炎細胞浸潤.高倍鏡:部分腎小球和腎小管壞死,為中心粒細胞或膿細胞所替代.有些腎小管管腔內(nèi)有大量膿細胞和壞死的組織碎片及細菌菌落.腎間質(zhì)充血,大量中性粒細胞浸潤.50.慢性腎盂腎炎 51.腎透明細胞癌

低倍鏡:癌細胞呈實性團塊狀,條索狀,腺管狀或乳頭狀.間質(zhì)少,血管豐富.高倍鏡:癌細胞由透明細胞和顆粒細胞兩種類型，按照不同比例分為透明細胞型和顆粒細胞型，混合型。透明細胞體積較大,呈多角形,輪廓清楚,胞漿透明清亮,細胞核小,深染,位于細胞中央或邊緣.53.葡萄胎

低倍鏡:胎盤絨毛腫大,絨毛間質(zhì)高度水腫,并形成水泡

高倍鏡:絨毛間質(zhì)高度水腫,間質(zhì)內(nèi)血管減少或消失.絨毛表面細胞滋養(yǎng)層細胞核合體滋養(yǎng)層細胞增生活躍,有的形成團塊.合體細胞胞漿紅染, 54.絨毛膜癌

低倍鏡:癌細胞由兩種細胞組成,無絨毛,無間質(zhì),無血管,侵入子宮平滑肌層,伴有出血壞死和炎細胞浸潤

高倍鏡:一種癌細胞與細胞滋養(yǎng)層細胞相似,細胞界限清楚,胞漿豐富而淡染,核大而圓,核膜增厚,核空泡狀.另一種癌細胞與合體滋養(yǎng)層細胞相似,體積大,形態(tài)不規(guī)則,胞漿豐富紅染,核長橢圓形.兩種癌細胞多少不等,彼此緊密鑲嵌,組成部規(guī)則的團塊狀或條索狀.55.子宮頸原位癌

低倍鏡:子宮頸上皮全層不典型增生與癌變,基底膜完整,間質(zhì)無浸潤

高倍鏡:增生上皮異型性明顯,核漿比例失常,核大小不等.核分裂像增多,多見病理性核分裂像.細胞排列紊亂,極性消失 56.卵巢粘液性囊腺瘤

低倍鏡：上皮為單層高柱狀粘液上皮,胞漿含清亮粘液,核位于基底部,大小形態(tài)比較一致,染色質(zhì)纖細,無明顯核仁,無核分裂像,間質(zhì)為纖維結(jié)締組織.高倍鏡: 57.卵巢漿液性囊腺瘤 低倍鏡:腫瘤形成囊腔,囊壁內(nèi)為乳頭狀增生,囊腔和乳頭間質(zhì)均由含血管的纖維結(jié)締組織構(gòu)成

高倍鏡:乳頭表面為單層柱狀上皮或立方上皮,核大多位于中央,染色質(zhì)纖細,核仁缺損不明顯,無病理核分裂相 58.單純性甲狀腺腫

低倍鏡:濾泡上皮增生肥大,呈立方上皮或柱狀,間質(zhì)充血,上皮細胞受壓扁平.濾泡增生,大部分濾泡可顯著擴大,內(nèi)積多量濃厚的膠質(zhì),濾泡大小有明顯差異 59

60.甲狀腺腺瘤

低倍鏡:瘤組織與正常甲狀腺之間有包膜分隔,瘤組織與包膜外的甲狀腺組織截然不同.高倍鏡:瘤組織由許多小濾泡構(gòu)成,濾泡圓形,由單層小立方上皮圍繞而成.61.甲狀腺乳頭狀腺癌

低倍鏡:大部分為癌組織,一側(cè)可見正常的甲狀腺組織,兩者間有不完整的纖維間隔存在.高倍鏡:癌組織圍繞纖維血管中心軸呈乳頭狀排列.乳頭分支較復(fù)雜,有三級以上分支.癌細胞矮柱狀或立方狀,染色質(zhì)少,透明或毛玻璃樣,無核仁,間質(zhì)中常有啥立體出現(xiàn).包膜及血管亦被上述癌組織 62.肺結(jié)核

低倍鏡:肺組織內(nèi)可見多個結(jié)核結(jié)節(jié),中央部為干酪樣壞死.高倍鏡:干酪樣壞死灶周圍可見放射狀排列的類上皮細胞核朗格漢斯巨細胞,外周有大量成纖維細胞

診斷要點：肺組織內(nèi)有結(jié)核結(jié)節(jié)，結(jié)核結(jié)節(jié)由干酪樣壞死灶，朗格漢斯細胞，類上皮細胞及成纖維細胞組成 63.淋巴結(jié)結(jié)核

低倍鏡:淋巴結(jié)組織中有多數(shù)散在的結(jié)核結(jié)節(jié),部分可見干酪樣壞死,無結(jié)核區(qū)可見正常的淋巴小結(jié)和竇,索結(jié)構(gòu)

高倍鏡:結(jié)節(jié)中有朗格漢斯巨細胞和干酪樣壞死物,周圍為環(huán)形或放射狀排列的類上皮細胞,外層為增生的成纖維細胞核纖維細胞圍繞.66.細菌性痢疾

粘膜上面有假膜覆蓋,假膜由大量壞死組織和纖維素組成.粘膜上層及腺體大片消失,粘膜下層,肌層,漿膜層有大量炎細胞浸潤 67.阿米巴痢疾

低倍鏡：腸粘膜發(fā)生液化性壞死，形成無結(jié)構(gòu)的淡紅染物質(zhì).周圍粘膜見充血出血及少量淋巴細胞和漿細胞浸潤.潰瘍底部和邊緣可見殘存的壞死組織,周圍炎性反應(yīng)不明顯.高倍鏡:壞死組織和活組織交界處可找到阿米巴滋養(yǎng)體,圓形,直接打,核小而圓,胞漿略嗜酸性,其中可見紅細胞,淋巴細胞和壞死組織碎片.

第三篇：病理組織切片制作技術(shù)

病理組織切片制作技術(shù)

病理組織切片常用的制作方法有三種。即石蠟切片法，冰凍切片法和火棉膠切片法。以石蠟切片法為代表，切片的基本制作過程是：

組織取材→固定→沖洗→脫水→透明→浸蠟→組織包埋→組織切片→展片附貼→切片脫蠟→染色→脫水→染片透明→封固。

以上基本過程是互相聯(lián)系的，任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都將使整個切片制作歸于失敗。因此應(yīng)細致、耐心、認真負責，并事先做好計劃安排。

一、取材

采取病料，要刀剪銳利，剪切時不可擠壓，扯拉病料，以防人為損傷。切取的工具要清潔。采取病料越新鮮越好，一般不超過死后24小時。應(yīng)選擇病變部與可疑病變部切取，切取時要由表及里，有淺入深并包括周圍正常組織一部分。特殊病料應(yīng)根據(jù)器官的結(jié)構(gòu)特點切取。管狀，囊狀和皮膚組織應(yīng)注意垂直切取（橫切）。帶有薄膜的組織，要防止切時薄膜分離和脫落。

切取組織塊大小，以1.5×1.5×0.3厘米為宜，最厚不宜超過0.5厘米。組織塊病變一面應(yīng)平整光滑，另一面可不平整，以便包埋時辨認。切取后，放入事先準備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標記。

二、固定

固定的目的是迅速將組織細胞殺死，使細胞中的蛋白質(zhì)，糖，脂肪等凝固，從而保持與活組織相似的結(jié)構(gòu)狀態(tài)。材料取下后，應(yīng)迅速固定。固定液數(shù)量應(yīng)為病理組織塊的5到20倍。由于一般把組織塊浸入固定液后數(shù)小時，固定液滲入組織液的深度只達2到3厘米。因此，可以放置冰箱內(nèi)固定，使組織內(nèi)酶失去作用，細菌也能停止滋生。

最常用的固定液是10%的福爾馬林溶液：使用時，用40%的甲醛飽和水溶液10毫升，加水90毫升配成。

三、沖洗

固定后的組織塊，應(yīng)將固定液洗去。一般均用流水（自來水）沖洗12到24小時左右。及時沖洗尚有停止固定的作用，防止固定過度，有利于制片染色。

沖洗時如不方便用流水沖洗，也可用較大容器盛裝水浸洗，每隔相當時間換水一次。整個浸洗時間比流水沖洗應(yīng)稍長一些。酒精固定的組織材料不需沖洗。

四、脫水

經(jīng)過固定的組織，沖洗后要進行脫水。脫水的目的在于將組織內(nèi)的水分用酒精或其他溶劑置換出來，為石蠟等其他包埋劑浸入組織創(chuàng)造條件。常用的脫水劑為酒精。由于酒精可以任何比例與水結(jié)合，對組織穿透力強，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的酒精中，應(yīng)從低濃度逐漸到高濃度。脫水必須充分，否則給浸蠟造成困難。

除用酒精作脫水劑外，還可以用正丁醇（N—Butyla alcohol）。正丁醇微溶于水，能與各種濃度酒精混合，也能直接溶解石蠟。故組織經(jīng)正丁醇脫水后，不須經(jīng)二甲苯透明。用正丁醇作脫水劑，組織塊收縮減低，也不會過硬，故比酒精優(yōu)越。

五、透明

透明的目的是將組織內(nèi)的酒精用礦物油或植物油置換出來，并溶解石蠟，幫助石蠟浸透組織。由于經(jīng)過透明劑處理的組織塊用肉眼觀察呈透明狀，故稱這一過程為透明。常用的透明劑為二甲苯（Xylol），因其穿透力較強，因而組織在二甲苯中停留時間不宜過長，一般透明時間在30分鐘左右即可。

六、浸蠟 浸蠟是指組織經(jīng)過透明作用以后，放入溶化的石蠟中浸滲，使石蠟浸入組織塊中，冷卻后，才能進行切片。

通常選擇熔點在52～56℃之間的石蠟，并視切片時環(huán)境的氣溫而選擇。室溫高則選用熔點稍高的石蠟，反之，則選用熔點較低的石蠟，這樣可防止切片時石蠟太軟或易碎裂。浸蠟的過程是：

二甲苯石蠟混合液（1：1）

1小時 二甲苯石蠟混合液（1：2）

1小時

石蠟（1）

1小時30分 石蠟（2）

1小時30分

上述過程可在56℃～58℃恒溫箱中進行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛裝。

七、包埋

包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。根據(jù)需要，包埋的方法常有石蠟包埋法和火棉膠包埋法。石蠟包埋法：

（1）先將熔化的石蠟倒入包埋框，用加熱的鑷子將欲包埋的組織塊在蠟液內(nèi)放置好。注意各組織塊之間的距離和每個組織塊的位置和方向。

（2）迅速第二次往平皿內(nèi)傾倒蠟液，淹沒組織塊。待蠟液出現(xiàn)凝固層后，即輕輕放入冷水盆中或冰箱中使其凝固。石蠟完全凝固后，倒出冷縮的蠟塊片，用加熱的外科刀，按組織塊位置修整蠟片待用。

對于實驗動物（狗和兔等）組織，一般的脫水透明和浸蠟時間如下： 處理步驟處理時間（min）處理步驟處理時間（min）① 75%酒精長短不定二甲苯Ⅰ、Ⅱ⑥ 30 ② 85%酒精 120－300 二甲苯Ⅲ⑦ 60

③ 95%酒精Ⅰ和Ⅱ 120－300 56－58℃石蠟⑧ 30 ④無水酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 30 56－58℃石蠟⑨ 60－120 ⑤無水酒精Ⅲ 60－120 56－58℃石蠟⑩ 120－180

注：摘自病理學技術(shù)，人民衛(wèi)生出版社，王伯，李玉松，黃高，張遠強主編。

八、組織切片

不同的切片制備方法，其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。常用的切片工具包括組織切片機、切片刀和自動磨刀儀器等。以下分別加以敘述。

（一）石蠟切片法

組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機制成切片的過程稱為石蠟切片法。為現(xiàn)在病理診斷常用的制作切片的方法。在切片前應(yīng)先切去標本周圍過多的石蠟（此過程稱為修塊）但也不能留得太少，否則易造成組織破壞，連續(xù)切片時分片困難。一般切4－6μm的切片，特殊情況可切1－2μm。要觀察病變的連續(xù)性，可制作連續(xù)切片。除此之外，石蠟包埋的組織便于長期保存，因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用，最普遍的一種方法。

1．切片前的準備

（1）固定后的標本經(jīng)脫水、透明、浸蠟和包埋后，制成蠟塊。高質(zhì)量的蠟塊和鋒利的切片刀是保證切片質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。檢查切片刀是否鋒利，簡便的方法是用頭發(fā)在刀鋒上碰一下，如一碰即斷，說明刀鋒鋒利。用顯微鏡觀察可確定刀口是否平整，有無缺口。

（2）準備充足的經(jīng)過處理的清潔載玻片和恒溫烤片裝置，大中號優(yōu)質(zhì)狼毫毛筆和鉛筆（用于在載玻片的粗糙端寫號），如用普通載玻片，可用碳素墨水和蛋白甘油按3：1體積混合后書寫。

2．切片制作過程

（1）將預(yù)先修好的組織塊先在冰箱中冷卻，而后裝在切片機固定裝置上。將切片刀裝在刀架上，刀刃與蠟塊表面呈5℃夾角。將蠟塊固定，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，并移動刀架或蠟塊固定裝置，使蠟塊與刀刃接觸。

（2）切片多使用輪轉(zhuǎn)式切片機，使用時左手執(zhí)毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機轉(zhuǎn)輪。先修出標本，直到組織全部暴露于切面為止，但小標本注意不要修得太多，以免無法切出滿意的用于診斷的切片，標本應(yīng)注意切全。切出蠟片后，用毛筆輕輕地托起，爾后用眼科鑷夾起，正面向上放入展片箱（展片溫度根據(jù)作用的石蠟熔點進行調(diào)整，一般低于蠟熔點10～12℃），待切片展平后，即可進行分片和撈片。切片經(jīng)30%的酒精初展后，再用載玻片撈起放入展片箱更易展平。為減少切片刀與組織塊在切片過程中產(chǎn)生的熱量，使石蠟保持合適的硬度，切片時可經(jīng)常用冰塊冷卻切片刀和組織塊，尤其在夏季高溫季節(jié)更為必要。（3）輪轉(zhuǎn)式切片機切取組織，是由下向上切，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端（如皮膚組織，應(yīng)將表皮部分向上。而胃腸等組織，應(yīng)將漿膜面朝上）。

（4）撈片時注意位置，要留出貼標簽的空間，并注意整齊美觀。撈起切片后，立即寫上編號。

（5）切片撈起后，在空氣中略微干燥后即可烤片。一般在60℃左右烤箱內(nèi)烤30min即可，也可用烤片器烤片。血凝塊和皮膚組織應(yīng)及時烤片。但對腦組織待完全晾干后，才能進行烤片。否則，可能產(chǎn)生氣泡影響染色。

3．注意事項

（1）組織的取材和固定 取材時，組織塊的大小厚薄應(yīng)適當，過大、過厚的組織，固定液不易滲透，易引起固定不良。過小、過薄的組織，在固定和脫水的過程中易變硬或產(chǎn)生彎曲扭轉(zhuǎn)，同樣影響切片質(zhì)量。陳舊、腐敗和干枯的組織不宜制作切片。用陳腐組織制成的切片，往往核漿共染，染色模糊，組織結(jié)構(gòu)不清，無法進行觀察。固定不及時和固定不當?shù)慕M織，染色時常出現(xiàn)核質(zhì)著色較淺，輪廓不清，出現(xiàn)不同程度的片狀發(fā)白區(qū)。組織固定時，固定液的量應(yīng)充足，至少要在4倍以上，同時注意組織塊不要與容器粘連。至于組織固定的時間，根據(jù)具體情況加以掌握。有關(guān)固定時應(yīng)注意的事項，可參見有關(guān)章節(jié)。（2）組織脫水、透明和浸蠟組織脫水用的各級酒精，應(yīng)保證相應(yīng)濃度，以便組織脫水徹底。但無水酒精中，組織塊放置時間不宜過長，否則組織過硬，切片困難。遇到此情況，可將組織浸在香柏油中軟化，用二甲苯洗去香柏油后，再重新浸蠟和包埋。脫水酒精，尤其是無水酒精中混有水分，則組織脫水不干凈。經(jīng)二甲苯時，組織也無法透明，呈現(xiàn)渾濁。此時應(yīng)將組織在新的酒精中重新脫水。二甲苯透明也應(yīng)充分，否則不利于石蠟的浸透。但組織在二甲苯內(nèi)的時間應(yīng)嚴格掌握，時間過長組織易碎，也無法切出好的切片。時間不足，則石蠟不易浸透。浸蠟的溫度也不宜過高，時間長短也應(yīng)加以控制。總之，組織脫水、透明和浸蠟對于切片質(zhì)量都有一定影響，組織脫水、透明和浸蠟過度，組織塊變硬變脆，因此對于小塊組織或小動物標本應(yīng)注意時間。但若時間不夠，組織塊硬化不夠，也不利于切片和染色，因此，應(yīng)注意各具體環(huán)節(jié)的操作，并注意保證各種試劑的質(zhì)量。

（3）切片切片刀要求鋒利且無缺口，切片自行卷起多由切片刀不鋒利所致，切片刀有缺口時，易造成切片斷裂破碎和不完整。骨組織切片時，用重型刀較好。全鋼刀或單面鎢刀也適合石蠟或火棉膠包埋的骨組織。

（4）切片刀和切片機切片刀放置的傾角以20－30℃為好。傾角過大切片上卷，不能連在一起。過小則切片皺起。應(yīng)注意維護切片機，防止因螺絲松動產(chǎn)生震動，切片時會造成切片厚薄不均。遇硬化過度的肝、腦、脾等組織時，應(yīng)輕輕切削，防止由于震動產(chǎn)生空洞現(xiàn)象。（5）特殊要求切片的制作 石蠟切片雖然有很多優(yōu)點，但制片過程中要經(jīng)過酒精和二甲苯等有機溶劑處理，因此很易造成組織內(nèi)抗原性的喪失，在用于免疫組織化學染色時影響結(jié)果的準確性。因而有人采用冷凍干燥包埋法，即將新鮮組織低溫速凍，利用冷凍干燥機在真空和低溫條件下除去組織內(nèi)的水分，然后用甲醛蒸汽固定干燥后的組織，而后在進行浸蠟、包埋和切片。此法可保存組織內(nèi)的可溶性物質(zhì)，防止蛋白質(zhì)變性和酶的失活，減少抗原的丟失。用于免疫熒光標記、免疫酶標記和放射自顯影。

（二）冰凍切片法

冰凍切片在組織學技術(shù)中應(yīng)用廣泛，對臨床快速病理診斷尤其具有重要意義。另外，因冰凍切片制作時不經(jīng)各級酒精的脫水，二甲苯的透明等過程，因此對脂肪和類脂的保存較好，在進行脂肪染色和神經(jīng)組織髓鞘的染色常用。冰凍切片多用于新鮮組織，甲醛固定的組織和低溫冰箱冷藏的組織塊等。組織不經(jīng)任何包埋劑而直接放在制冷臺上冷卻后進行切片。

1．恒冷箱切片 將組織塊在恒冷箱的切片機上切片。恒冷箱切片機的種類較多，可根據(jù)實際情況加以選用。一般調(diào)節(jié)溫度為－25℃左右。箱內(nèi)溫度下降后，打開觀察窗，將組織固著器放置到速凍臺上，先放少量OCT或羧甲基纖維素，待凍結(jié)后將組織塊放上，并在其周圍加適量包埋劑，將組織塊包埋。組織凍結(jié)后，將組織固著器裝到切片機上，調(diào)整組織的切面與刀刃平行并貼近刀刃，將厚度調(diào)至適當位置后，關(guān)閉觀察窗。初步修出組織切面后，放下抗卷板，開始切片。切出切片用載玻片貼附后，進行吹干或固定。這種切片用于科研和教學的連續(xù)切片，效果較好。在切片前，應(yīng)預(yù)先啟動進行預(yù)冷，同時準備多個冷卻臺，用于多塊組織切片。

2．半導(dǎo)體制冷冰凍切片法 組織塊放置在半導(dǎo)體制冷臺上，加少許蒸餾水，調(diào)好切片的厚度。接通循環(huán)流水后，再接通電源，而且在使用的全過程中流水不能中斷，關(guān)閉電路后，才能停水。還應(yīng)注意電源正負極不能接反，用整流電源控制溫度。冰凍組織周圍的水不宜過多，用手檢查組織塊的硬度，當可切成厚薄一致的切片時，即可切片。切片用毛筆展平后，立即用載玻片貼附，待切片剛要融化時，即刻入固定液內(nèi)固定1min。已固定的組織切片，收集于清水中。根據(jù)目的進行染色。暫時不染色的切片，用載玻片吸附。

3．甲醇制冷器 制冷箱為附有帶導(dǎo)管的制冷臺和制冷刀的甲醇循環(huán)裝置，其冷卻速度較快，屬開放式，做一般常規(guī)冰凍切片用。

4．二氧化碳冰凍法 將組織塊用蒸餾水洗后，放在冰凍切片機的冷凍臺上，加蒸餾水少許。打開冷凍臺的二氧化碳開關(guān)，二氧化碳氣體噴出，待組織出現(xiàn)冷霜時，關(guān)閉二氧化碳，即可切片。組織冷凍過硬易碎，若冷凍不夠，組織塊硬度不足，切片呈粥糜狀，無法成片，應(yīng)用間歇冷卻法繼續(xù)冷卻。硬度一般在剛開始解凍時最適合，應(yīng)迅速切片。

5．冰凍切片粘片法冰凍切片粘片法基本按石蠟切片的粘片處理，但烤片溫度不宜超過40℃。烤干后立即取出，溫度過高，時間過長，則切片易碎。烤干后用70%酒精和自來水略洗后即可染色。

九、蘇木精－伊紅染色方法

蘇木精-伊紅染色方法，簡稱HE染色方法，是生物學和醫(yī)學的細胞與組織學最廣泛應(yīng)用的染色方法。在病理學實驗室中稱為常規(guī)染色方法。病理細胞和組織學的診斷，教學和研究都是用HE染色方法觀察正常和病變組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此病理學工作者必需學習和掌握這種染色方法。

（一）HE染色的基本原理

1．細胞核染色的原理

細胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而染色。蘇木精在堿性染料中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

2．細胞漿染色的原理

細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。伊紅是細胞漿的良好染料。

隨著科學技術(shù)快速發(fā)展和電子計算機的廣泛應(yīng)用，染色自動儀器的出現(xiàn)，許多實驗室已用全自動染色機代替人工染色。

（二）人工操作蘇木精伊紅染色方法

1．染色步驟 二甲苯I脫蠟10min.二甲苯II脫蠟5min。

無水乙醇洗去二甲苯1min×2次。

95%酒精1min。

90%酒精1min。

85%酒精1min。自來水洗2min。

蘇木精染色1min至5min。自來水洗1min。

1%鹽酸酒精分化20s。自來水洗1min。

稀氨水（1%）反藍30s。自來水洗或蒸餾水洗1min。伊紅染色20s至5min。自來水洗30s。

85%酒精脫水20s。

90%酒精30s。

95%I酒精1min。

95%II酒精1min。無水乙醇I 2min。無水乙醇II 2min。二甲苯I 2min。二甲苯II 2min。二甲苯III 2min。

中性樹膠或加拿大樹膠封片。

2．染色結(jié)果

細胞核呈藍色，細胞漿、肌肉、結(jié)締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍色或紫藍色。

（三）自動染色機蘇木精伊紅染色程序

1．二甲苯I 10min。

2．二甲苯II 10min。

3．無水乙醇1min。

4．無水乙醇1min。

5．95%酒精I 1min。

6．95%酒精II 1min。

7．90%酒精I 1min。

8．80%酒精1min。

9．自來水洗1min。

10．蘇木精染色1至5min。

11．自來水洗1min。

12．1%鹽酸酒精分化30s。

13．自來水洗5min。

14．伊紅染色30s至5min。

15．自來水洗30s。

16．85%酒精20s。

17．90%酒精30s。

18．95%酒精1min。

19．95%酒精1min。

20．無水乙醇I 2min。

21．無水乙醇II 2min。

22．二甲苯I 2min。

23．二甲苯II 2min。

24．二甲苯III 2min。

25．中性樹膠或加拿大樹膠封片。

（四）冰凍切片蘇木精伊紅染色

1．恒冷箱冰凍切片，粘貼在載玻片上，用95%酒精95ml和冰醋酸5ml的混合固定液固定1min。自來水洗。

2．蘇木精染色1～2min。

3．自來水洗30s。

4．1%鹽酸酒精分化20s。

5．自來水洗20s。

6．稀氨水30s。

7．自來水洗20s。

8．伊紅染色20s～1min。

9．自來水洗10s。

10．85%酒精20s。

11．90%酒精30s。

12．95%酒精1min。

13．無水乙醇I 1min。

14．無水乙醇II 2min。

15．二甲苯I 1min。

16．二甲苯II 2min。

17．二甲苯III 2min。

18．中性樹膠或加拿大樹膠封片。

（五）染色液的配制

1．蘇木精（素）

蘇木精是一種純天然染料，是從蘇木素樹提煉出來的，蘇木樹主產(chǎn)墨西哥的坎偑切，蘇木精的染色性能差，經(jīng)過一百多年精心加工配制，現(xiàn)用的蘇木精配方，染色性能好，保持時間長，是世界上唯一的常規(guī)細胞核染料，2．蘇木精的配制

蘇木精的配方很多，可根據(jù)不同需要選用，Harris配方最常用。（1）Harris蘇木精的配制 蘇木精1g 硫酸鋁鉀15g 無水乙醇10ml 蒸餾水200ml

先用蒸餾水加熱溶解硫酸鋁鉀，用無水乙醇溶解蘇木精再倒入已溶解的硫酸鋁鉀蒸餾水中，煮沸1min后，稍冷卻，慢慢加入紅色氧化汞0.5g，繼續(xù)加熱至染液變?yōu)樽霞t色，用紗布蓋瓶口，用前濾紙過濾后每100ml加冰醋酸5ml。（2）Mayer蘇木精改良配法

A液 蘇木精2g

無水乙醇40ml

B液

硫酸鋁鉀100g 蒸餾水600ml

稍加熱使硫酸鋁鉀在水中溶解，將蘇木精溶于酒精中，再將A液與B液混合煮沸2min。用蒸餾水補足600ml，加入400mg碘酸鈉充分混勻，蘇木精染液呈紫紅色。（3）Gill改良蘇木精染液的配制 蘇木精2g

無水乙醇250ml 硫酸鋁鉀17g 蒸餾水750ml 碘酸鈉0.2g 冰醋酸20ml

先將蘇木精溶于無水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中。兩液溶解后將其混合，加入碘酸鈉待蘇木精氧化成紫紅色，再加入冰醋酸。

3．伊紅溶液的配制（1）水溶性伊紅 伊紅Y0.5－1g 蒸餾水100ml

先將水溶性伊紅加入蒸餾水中，用玻璃棒將伊紅攪起泡沫后過濾，每100ml加冰醋酸1滴。（2）乙醇性伊紅液的配制 伊紅Y 0.5～1g

90%酒精100ml

先將伊紅溶于酒精中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊紅液染細胞漿后不可經(jīng)水洗直接用85%酒精脫水。

4．鹽酸酒精分化液的配制 濃鹽酸0.5～1ml

75%酒精99ml

此液用一段時間后需要延長或更換液體，新液分化時間要短。

5．染色中注意事項（1）脫蠟 石蠟切片必需經(jīng)過脫蠟后才能染色，脫蠟前切片要經(jīng)烘烤，這樣使組織與玻璃片粘貼牢固。組織切片脫蠟應(yīng)徹底，脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時間，所有的時間都是指新的二甲苯在室溫25℃以下時，如果二甲苯是用過一段時間，切片又比較厚，室溫低應(yīng)增加脫蠟時間，脫蠟不凈是影響染色不良的重要原因之一。（2）染色

石蠟切片經(jīng)水洗后放入Harris蘇木精染色，一般情況下在新配的蘇木精溶液中只需要染1min左右，應(yīng)根據(jù)染片的多少，逐步把染色時間延長。蘇木精染色后，不宜在水中和鹽酸酒精停留過長，切片分化程度應(yīng)在鏡下觀察，分化過度，應(yīng)水洗后重新在蘇木精中染色，再水洗分化和使切片在自來水或稀氨水中充分變藍。

新配的伊紅染色快，切片染色不宜過長，應(yīng)根據(jù)染切片的多少逐步延長染色時間，切片經(jīng)伊紅染后，水洗時間要短。（3）脫水

切片經(jīng)過染色后，通過各級酒精脫水，首先從低濃度到高濃度，低濃度酒精對伊紅有分化作用，切片經(jīng)過低濃度時間要短，向高濃度時逐步延長脫水時間；脫水不徹底，使切片發(fā)霧，在顯微鏡下組織結(jié)構(gòu)模糊不清。（4）透明與封片

石蠟組織切片染色經(jīng)過脫水后必須經(jīng)二甲苯處理，使切片透明，才能用樹膠封片。常用切片封片膠有國產(chǎn)的中性樹膠，光學樹膠，加拿大樹膠和合成樹脂（DPX）。在封片時，樹膠不能太稀或太稠，不能滴加的太多或太少，太稀或太少切片容易空泡，樹膠也不可太多，不要使樹膠溢出玻片四周太多。標簽要附貼牢固。封片中不能對著切片呼氣。（5）常規(guī)石蠟切片和HE染色標本的質(zhì)量標準（全國統(tǒng)一評定標準）①切片完整，厚度4－6um，薄厚均勻，無褶無刀痕。②染色核漿分明，紅藍適度，透明潔凈，封裱美觀。

第四篇：冰凍切片快速病理診斷30年總結(jié)

冰凍切片快速病理診斷30年總結(jié)

秦皇島市腫瘤醫(yī)院病理科

康文喜 謝芳芳 王小聰 李英 郵編：066001

術(shù)中冰凍切片快速病理診斷是1818年由Pieter de Riemer首先創(chuàng)造發(fā)明的，1891年Halsted和Accarty將冰凍切片技術(shù)列為正式診斷方法。目前國內(nèi)外已將此項技術(shù)普遍應(yīng)用于臨床，解決手術(shù)中的病理診斷問題。并日益受到外科醫(yī)生和患者的歡迎和肯定。隨著冰凍切片技術(shù)和臨床外科手術(shù)的發(fā)展，要求做冰凍的病例逐年增多，截止到2012年10月份，本院病理科開展快速冰凍病理診斷30余年，共完成冰凍快速病理診斷1476例，積累了一定的經(jīng)驗和教訓，為了更進一步提高冰凍快速病理診斷水平，提高冰凍診斷準確率，降低誤診率，作者將30年來所有冰凍切片快速病理診斷病例進行總結(jié)分析如下。1 材料和方法

1.1 一般資料

本組1476例大部分來自本院住院病人，小部分來自其他醫(yī)院。其中男897例，女579例，年齡最大81歲，最小5個月。1.2 病變部位

乳腺1052例，軟組織42例，胃33例，淋巴結(jié)33例，骨12例，腹膜9例，睪丸及附睪8例，甲狀腺47例，小腸15例，大腸25例，膀胱5例，脊椎5例，闌尾10例，膽道14例，陰莖19例，卵巢53例，腦及腦膜3例，前列腺3例，肝12例，腎26例，脊髓2例，喉2例，子宮42例，精索1例，縱隔1例，腹膜后1例，眼1例。

1.3 方法

本組1476例均采用德國進口萊卡冰凍切片機切片，HE染色，普通光學顯微鏡觀察。

1.4 結(jié)果

1476例中，惡性腫瘤687例，良性腫瘤388例，瘤樣病變170例，炎癥202例，結(jié)核29例，確診1457例，未能確診15例，誤診4例。2.討

論

冰凍切片質(zhì)量差，最初很多著名的病理學家如Ewing、Brewer、Simpson等曾經(jīng)懷疑冰凍切片的準確性，1960年Cryostat冰凍切片機正式應(yīng)用于臨床后，冰凍切片質(zhì)量有了很大提高，但和石蠟切片相比仍很遜色，對準確的冰凍病理診斷帶來一定困難，尤其對年輕的病理科醫(yī)生來說難度較大，缺乏經(jīng)驗的病理科醫(yī)生難以勝任此項工作，下面根據(jù)自己個人的經(jīng)驗發(fā)表一點看法。

2.1 冰凍切片快速病理診斷的優(yōu)缺點：冰凍切片快速病理診斷的優(yōu)點是在手術(shù)過程中隨時取材，迅速做出準確可靠的病理診斷，同時也減少了病人二次手術(shù)的痛苦。缺點是切片厚，細胞大，層次多，易造成錯覺。另外冰凍切片診斷要求報告快，沒有更多思考討論余地，一旦報錯，將造成嚴重的無法彌補的后果。

2.2 準確率：本文對1476例冰凍切片進行了統(tǒng)計分析，結(jié)果準確率為98.7%，未能確診率為1.02%，誤診率為0.3%，與國內(nèi)報道相比準確率相仿，而誤診率低于各家報道。

2.3 未能確診和誤診的原因：⑴

取材不當：恰當準確的取材是正確診斷的必備條件，取材不當就不可能得出正確的病理診斷。當臨床切取腫物困難時，所送檢的腫物標本不一定是腫物中心組織，很可能是腫物邊緣組織，這種組織大部分是腫物周圍的正常成分，或僅帶有少量腫物，此時應(yīng)多切幾個切面進行觀察，在把握不足的情況下可多取幾塊組織做切片，以防漏診。⑵

切片質(zhì)量不佳：切片過厚，組織未能展平出現(xiàn)折疊，組織缺損，染色深淺不均等都直接影響診斷結(jié)果。因此，一張高質(zhì)量的冰凍切片要求厚度不得超過10微米，而且要平整，無折疊無破損，染色深淺適中。

圖1：乳腺冰凍切片

圖2：同一病例常規(guī)石蠟切片

⑶

病理醫(yī)師經(jīng)驗不足：醫(yī)生經(jīng)驗不足是誤診的重要原因，從事冰凍快速病理診斷的醫(yī)生，必須要經(jīng)過相當長的時間訓練和有足夠的石蠟切片診斷經(jīng)驗方能勝任此項工作。2.4 冰凍切片快速病理診斷應(yīng)注意的幾個問題：⑴

甲狀腺腫物冰凍切片

濾泡性甲狀腺癌、胚胎型甲狀腺瘤和 Hurhle 氏細胞腺瘤的良惡性鑒別診斷在常規(guī)石蠟切片上均有一定難度，在冰凍切片上若想準確的進行鑒別則更加困難，為了防止誤診，有些知名的老專家主張在基層單位的病理科不宜開展甲狀腺腫物的冰凍切片快速病理診斷。我們認為，當冰凍切片較難做出良惡性判斷時應(yīng)等石蠟切片確診，不要冒然發(fā)出良性或惡性的報告。另外在許多甲狀腺疾病中常常出現(xiàn)一種多形性大細胞，易與惡性腫瘤細胞相混淆，在冰凍切片診斷時應(yīng)特別注意。這種細胞與惡性腫瘤細胞不同之處是染色質(zhì)分布均勻，胞漿豐富，不見核分裂像。⑵

淋巴結(jié)

術(shù)中送淋巴結(jié)做冰凍快速病理檢查多用于確定有無癌轉(zhuǎn)移，以便手術(shù)醫(yī)生選擇手術(shù)方式和手術(shù)范圍。原發(fā)于淋巴結(jié)的惡性淋巴瘤一般不用冰凍切片方法進行診斷，因為正常未脫水的淋巴細胞膨脹，體積大，加之切片厚，很難與惡性淋巴瘤瘤細胞進行區(qū)別，在冰凍切片診斷淋巴結(jié)原發(fā)性惡性淋巴瘤時要格外慎重。⑶

骨：骨腫瘤冰凍切片快速病理診斷因涉及到截肢，病理科醫(yī)生的責任十分重大，應(yīng)慎之又慎。在診斷中一定要密切結(jié)合臨床及X線，特別是鏡下觀察，必須結(jié)合大體標本的形態(tài)特點、取材部位認真分析作出判斷。因骨腫瘤病理形態(tài)變化多端，送檢組織塊小常不能代表腫瘤病變?nèi)玻o良惡性判斷帶來非常大的困難，在確實無法肯定良惡性時，應(yīng)縫合切口，待石蠟切片確診后再做處理。

第五篇：手術(shù)中冰凍切片病理檢查志愿書

接受手術(shù)中冰凍切片病理檢查志愿書

門診、住院科 室ID號住院號

姓名年齡性別職別單位

手術(shù)中冰凍切片病理檢查是將切下的病變組織在冰凍切片機中迅速冷凍后制成病理切片，由病理醫(yī)師即刻在顯微鏡下檢查，做出病現(xiàn)診斷，主要目的是：（1）幫助判斷病變的性質(zhì)。如：炎癥、腫瘤或其它性質(zhì)的病變；如果是腫瘤，則需進一步判斷是良性還是惡性腫瘤。（2）幫助判斷切除腫瘤組織的邊緣是否有殘留的癌組織。（3）幫助辨認手術(shù)切除組織。

（4）判斷手術(shù)切除的淋巴結(jié)中有無轉(zhuǎn)移的癌細胞。冰凍切片病理診斷結(jié)果作為術(shù)中會診意見提供給臨床醫(yī)生，臨床醫(yī)生將其作為重要的參考依據(jù)決定進一步手術(shù)的方式和范圍。與常規(guī)石蠟包埋切片相比，冰凍切片診斷的局限性是：（1）冰凍切片質(zhì)量較差，診斷準確率低于常規(guī)石蠟切片。（2）在做冰凍切片采取活檢組織時，有造成腫瘤種植的可能，特別是在甲狀腺和肺等實質(zhì)器官。（3）術(shù)中冰凍切片技術(shù)不適用于脂肪組織和骨組織。（4）某些疑難病例和交界性病例有時在石蠟切片診斷都很困難，需要做免疫組化和電鏡觀察，僅憑冰凍切片難以確定診斷，因而要延緩病理診斷。（5）冰凍切片取材局限，有時局部的組織不能代表整個標本。因此，有的病例冰凍切片組織象和手術(shù)切除大標本的石蠟切片組織象相差很遠，甚至造成假陰性診斷。（6）病變組織在冷凍過程中不可避免地形成冰晶，以及組織處理和診斷時間緊迫等技術(shù)因素所限，“冰凍”診斷的準確率有一定的局限性，有可能與最終的“常規(guī)”病理切片診斷不相符合，最后病理診斷應(yīng)以“常規(guī)病理診斷為準”。

醫(yī)師簽名：年月日

我已仔細閱讀并了解上述關(guān)于“冰凍”切片病理診斷的作用及其局限性，同意對實施手術(shù)中切除的病變組織進行冰凍切片快速病理檢查。

患者本人簽字：

代表簽字：（與患者關(guān)系：）

年月日

注：本志愿書除不能明辨是非、不能正確表達的傷病員可由法定代理人簽字外，均由傷病員本人簽字