第一篇：食品微生物學實驗題目

食品微生物學實驗（名詞解釋選一題，簡答題選三題）

一．名詞解釋

1.細菌總數(shù)

2.大腸菌群

3.高壓蒸汽滅菌

4.乳酸菌

5.芽孢

二．簡答題

1.簡述革蘭氏染色原理

2.簡述培養(yǎng)基配置步驟

3.影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有哪些？

4.革蘭氏染色分為那幾步？其關(guān)鍵是哪一步？為什么？

5.MRS培養(yǎng)基中加入CaCO3的作用是什么？

6.為什么檢測乳酸菌不用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基？

7.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中各成分分別起什么作用？

8.細菌細胞特殊結(jié)構(gòu)有哪些？分別起什么作用？

9.簡述顯微鏡使用步驟

10.高壓蒸汽鍋滅菌與干熱空氣滅菌相比有什么優(yōu)點？為什么？

11.比較平板計數(shù)法和顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)缺點

12.高壓蒸汽鍋滅菌開始之前為什么要將鍋內(nèi)的冷空氣排盡？滅菌后為什么要待壓力表指針降到0時，才能打開排氣閥，開蓋取物。

13.鮮乳中存在霉毒素會對乳酸菌生長起什么作用？

14.普通酸乳制作中常加入乳酸菌有哪些？比例如何？二者關(guān)系如何？

15.用作消毒劑的乙醇濃度是多少？請說明用此濃度的乙醇的原因和機理。

第二篇：微生物學實驗

細菌群體生長表現(xiàn)為細胞數(shù)目的增加或細胞物質(zhì)的增加。測定細胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。測定細胞物質(zhì)的方法有細胞干重的測定，細胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測定，代謝產(chǎn)物的測定等。總之，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。本實驗主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計數(shù)法、平板菌落計數(shù)法和光電比濁計數(shù)法。

一 顯微鏡直接計數(shù)法

（一）目的要求

1．明確血細胞計數(shù)板計數(shù)的原理。

2．掌握使用血細胞計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。

（二）基本原理

顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。目前國內(nèi)外常用的計菌器有：血細胞計數(shù)板、Peteroff-Hauser計菌器以及Hawksley計菌器等，它們都可用于酵母、細菌、霉菌孢子等懸液的計數(shù)，基本原理相同。后兩種計菌器由于蓋上蓋玻片后，總?cè)莘e為0.02mm3，而且蓋玻片和載波片之間的距離只有0.02mm，因此可用油浸物鏡對細菌等較小的細胞進行觀察和計數(shù)。除了用這些計菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細菌學檢查。顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單。但此法的缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時間）以及加細胞分裂抑制劑等方法來達到只計數(shù)活菌體的目的。本實驗以血球計數(shù)板為例進行顯微鏡直接計數(shù)。另外兩種計菌器的使用方法可參看各廠商的說明書。

用血細胞計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)是一種常用的微生物計數(shù)方法。該計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。血細胞計數(shù)板構(gòu)造如圖l5-1。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計數(shù)室的容積為0.lmm3(萬分之一毫升)。

圖15—1 血細胞計數(shù)板構(gòu)造

（一）圖15—2 血細胞計數(shù)板構(gòu)造

（二）A.正面圖；B.縱切面圖； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計數(shù)室

1.血細胞計數(shù)板；2.蓋玻片；3.計數(shù)室

計數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。

設(shè)五個中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個中方格的計數(shù)板，則

1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個）

同理，如果是16個中方格的計數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×16×104×B=32000A·B（個）

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母

2．儀器或其他用具 血細胞計數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細滴管。

（四）操作步驟

l．菌懸液制備

以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當?shù)木鷳乙骸?/p>

2．鏡檢計數(shù)室

在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數(shù)。

3．加樣品

將清潔干燥的血細胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。

取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。

4．顯微鏡計數(shù)

加樣后靜止5min，然后將血細胞計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數(shù)。

調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當，對于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。

在計數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個菌體為宜。每個計數(shù)室選5個中格(可選4個角和中央的一個中格)中的菌體進行計數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數(shù)。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均數(shù)值來計算樣品的含菌量。

5．清洗血細胞計數(shù)板

使用完畢后，將血細胞計數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復洗滌至干凈為止。

（五）實驗報告

l．結(jié)果

將結(jié)果記錄于下表中。A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml

12345

第一室

第二室

2．思考題

(1)根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準確?

(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設(shè)計1～2種可行的檢測方法。

二平板菌落計數(shù)法

（一）目的要求

學習習近平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。

（二）、基本原理

平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細胞。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個細胞。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colony-forming units，cfu)而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。

平板菌落計數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計數(shù)方法的最大優(yōu)點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。

（三）器材

1．菌種 大腸桿菌菌懸液。

2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。

3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，盛有4.5ml無菌水的試管，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。

（四）操作步驟

l．編號

取無菌平皿9套，分別用記號筆標明10-

4、10-

5、10-6。(稀釋度)各3套。另取6支盛有4.5mL無菌水的試管，依次標是10-

1、10-

2、10-

3、10-

4、10-

5、10-6。

2．稀釋

用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測樣品)，精確地放0.5ml至10-1的試管中，此即為10倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。

OptionsEmail Replies將10-1試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進一步將菌體分散、混勻。吹吸菌液時不要太猛太快，吸時吸管伸人管底，吹時離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋。……其余依次類推，整個過程如圖15-3所示。

放菌液時吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。

3，取樣

用三支1mL無菌吸管分別吸取10-

4、10-5和10-6。的稀釋菌懸液各lmL，對號放入編好號的無菌平皿中，每個平皿放0.2mL。

不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀釋菌液放入平皿臼，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。

圖15—3平板菌落計數(shù)操作步驟

4．倒平板．

盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。由于細菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計數(shù)。

待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5．計數(shù)

培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進行計算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5

一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個重復對照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復對照平板不能少于三個，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計，減少誤差。由10-

4、10-

5、10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。

平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調(diào)整。

平板菌落計數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺上適當吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實驗臺上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。

涂布平板用的菌懸液量一般以0.1ml較為適宜，如果過少菌液不易涂布開，過多則在涂布完后或在培養(yǎng)時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。

五、實驗報告

1．結(jié)果

2．將培養(yǎng)后菌落計數(shù)結(jié)果填入下表

稀釋度10-410-510-6

Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均

每毫升中的cfu

2．思考題

(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?

(2)要使平板菌落計數(shù)準確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵?為什么?

(3)試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡下直接計數(shù)法的優(yōu)缺點及應(yīng)用。

(4)當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里?

(5)用倒平板法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長時間(48h)后觀察結(jié)果?

三 光電比濁計數(shù)法

一、目的要求

1．了解光電比濁計數(shù)法的原理。

2．學習、掌握光電比濁計數(shù)法的操作方法。

二、基本原理

當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定的范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖15-4)。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數(shù)標準曲線。然后，以樣品液所測得的光密度，從標準曲線中查出對應(yīng)的菌數(shù)。制作標準曲線時，菌體計數(shù)可采用血細胞計數(shù)板計數(shù)，平板菌落計數(shù)或細胞干重測定等方法。本實驗采用血細胞計數(shù)板計數(shù)。

光電比濁計數(shù)法的優(yōu)點是簡便、迅速，可以連續(xù)測定，適合于自動控制。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標準曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗來確定。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進行測定。

圖15—4 比濁法測定細胞濃度的原理

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液

2．儀器或其他用具 721型分光光度計，血細胞計數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。

（四）操作步驟

1．標準曲線制作

（1）編號 取無菌試管7支，分別用記號筆將試管編號為1、2、3、4、5、6、7。

（2）調(diào)整菌液濃度 用血細胞計數(shù)板計數(shù)培養(yǎng)24小時的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106、12×106含菌數(shù)的細胞懸液。再分別裝入已編好號的1至7號無菌試管中。

（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表

管號12345678

細胞數(shù)106/ml

光密度（OD）

每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定

(4)以光密度(OD)值為縱坐標，以每毫升細胞數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線。

2．樣品測定

將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。

各種操作條件必須與制作標準曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數(shù)就不準確。

3．根據(jù)所測得的光密度值，從標準曲線查得每毫升的含菌數(shù)。

（五）實驗報告

l．結(jié)果

每毫升樣品原液菌數(shù)=從標準曲線查得每毫升的菌數(shù)×稀釋倍數(shù)

2．思考題

(1)光電比濁計數(shù)的原理是什么?這種計數(shù)法有何優(yōu)缺點?

(2)光電比濁計數(shù)在生產(chǎn)實踐中有何應(yīng)用價值?

(3)本實驗為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實驗中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?

四 大腸桿菌生長曲線的測定

(一)目的要求

1．通過細菌數(shù)量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長線。

2．復習光電比濁法測量細菌數(shù)量的方法。

(二)基本原理

大多數(shù)細菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細胞每20min分裂一次。將一定量的細菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。測定細菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細菌的生長具有重要意義。

用于測定細菌細胞數(shù)量的方法已在上述實驗作了介紹。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖15-5)測定“klett units”值的光度計。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時間(橫坐標)取樣測定，以測得的klett units為縱坐標，便可很方便地繪制出細菌的生長曲線。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/0.002換算出所測菌懸液的OD值。

圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶

(三)器材

1．菌種 大腸桿菌

2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。

3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。

圖15—6 直接用試管測OD值

(四)操作步驟

1．標記

取11支無菌大試管，用記號筆分別標明培養(yǎng)時間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。

2．接種

分別用5ml無菌吸管吸取2.5ml大腸桿菌過夜培養(yǎng)液(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標記的11支無菌大試管中。

3．培養(yǎng)

將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標有相應(yīng)時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。

4．比濁測定

用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對細胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當稀釋后測定，使其光密度值在0.1~0.65之內(nèi)(測定OD值前，將待測定的培養(yǎng)液振蕩，使細胞均勻分布)。

本操作步驟也可用簡便的方法代替：

1．用1ml無菌吸管取0.25ml大腸桿菌過夜培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入盛有3~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。

2．分別在培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。該方法準確度高、操作簡便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準確度愈高。

(五)實驗報告

1．結(jié)果

(1)將測定的OD600值填入下表：

培養(yǎng)時間對照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值OD600

(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。

2．思考題

(1)如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線，你認為會有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點？

(2)細菌生長繁殖所經(jīng)歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細胞密度為103/ml，培養(yǎng)4.5h后，其密度高達2×108/ml，計計算出其代時。

(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個時期？根據(jù)細菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？

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第三篇：食品微生物學總結(jié)

1、巴斯德、科赫、列文虎克和李斯特分別對微生物學的發(fā)展有哪些貢獻？ 巴斯德--主要貢獻：徹底否定了自然發(fā)生說證明發(fā)酵由微生物引起,發(fā)明巴氏消毒法,首次制成狂犬病疫苗

科赫—細菌學的奠基人,主要貢獻：建立了微生物研究基本技術(shù)，包括細菌的分離純化技術(shù)，培養(yǎng)基的設(shè)計、細菌染色技術(shù)。發(fā)現(xiàn)了許多病原菌，提出了科赫法則。

安東·列文虎克（1632~1723）—微生物學的先驅(qū)者,自制顯微鏡觀察到微生物。李斯特--提出手術(shù)中無菌操作的方法，建立了外科消毒術(shù).弗來明—青霉素發(fā)現(xiàn)者,霉菌菌落周圍出現(xiàn)抑制細菌現(xiàn)象

2、微生物的分類單元有哪些？基本分類單元是什么？

種以上可依次分成7級：界、門、綱、目、科、屬、種，種是最基本的分類單位，每一分類單位之后可有亞門、亞綱、亞目、亞科.....概念：

肽聚糖：是由N－乙酰胞壁酸（NAM）和N－乙酰葡糖胺（NAG）以及短肽鏈（主要是四肽）組成的亞單位聚合而成的大分子聚合物。

伴孢晶體：少數(shù)芽孢桿菌在形成芽孢的同時，會在芽孢旁形成一個菱形、方形或不規(guī)則的堿溶性蛋白晶體稱為伴胞晶體（即δ內(nèi)毒素）。

芽孢：某些細菌在其生長發(fā)育后期，在細胞內(nèi)形成的一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量低、抗逆性強的休眠構(gòu)造,稱芽孢。

菌落：在固體培養(yǎng)基上（內(nèi)）以母細胞為中心的一堆肉眼可見的有一定形態(tài)、構(gòu)造的子細胞的群體。

病毒粒子：成熟的或結(jié)構(gòu)完整、有感染性的病毒個體

溫和噬菌體：在短時間內(nèi)不能連續(xù)完成吸附、侵入、增值、成熟和裂解這五個階段而實現(xiàn)繁殖的噬菌體

噬菌斑：噬菌體侵染細菌細胞,導致寄主細胞溶解死亡.因而在瓊脂培養(yǎng)基表面形成的空斑

3、試述革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌肽聚糖單體構(gòu)造差別。組成成分不同：

革蘭氏陽性菌：肽聚糖（基本結(jié)構(gòu)），包括聚糖骨架，四肽側(cè)鏈，五肽交聯(lián)橋 磷壁酸（特殊成份），包括膜磷壁酸，壁磷壁酸 表面蛋白（特殊成分），包括SPA,M蛋白

革蘭氏陰性菌:肽聚糖（基本結(jié)構(gòu)），包括聚糖骨架，四肽側(cè)鏈 外膜（特殊成分），包括脂蛋白，脂質(zhì)雙層，脂多糖

4、細菌細胞的一般構(gòu)造特殊構(gòu)造各有哪些？（一般構(gòu)造了解）

一般構(gòu)造:所有細菌都有.包括：細胞壁、細胞膜、擬核、間體、細胞質(zhì)、核糖體、顆粒狀內(nèi)含物

特殊構(gòu)造:并非所有細菌都有，只存在于某些細菌、甚至是某特定的生理階段 包括：鞭毛、菌毛、性菌毛、糖被和芽孢

5、霉菌的菌絲根據(jù)有無隔膜可分為幾類？各舉一例？霉菌的繁殖方式可分為哪幾類？分別可產(chǎn)生哪些孢子？

無隔菌絲 有隔菌絲 1）菌絲片段

2）孢子：無性孢子（孢囊孢子 ；分生孢子；節(jié)孢子；厚垣孢子）；性孢子（卵孢子 ；接合孢子 ；子囊孢子；擔孢子）

6、試比較毛霉、根霉、曲霉和青霉的異同。

7、病毒粒子包括哪些基本結(jié)構(gòu)？并說明其化學組成 核衣殼（基本結(jié)構(gòu)）：

1）核酸→基因組： DNA/RNA（雙股/單股）

2）衣殼→衣殼粒（形態(tài)亞單位）→多肽（結(jié)構(gòu)亞單位）營養(yǎng)：

8、什么叫生長因子？包括哪幾類化合物？是否任何微生物都需要生長因子？如何滿足微生物對生長因子的要求？

生長因子：通常指那些微生物生長所必需而且需要量很小,但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機體需要的有機化合物。

包括維生素、生物堿、卟啉、甾醇、短鏈的分支或直鏈脂肪酸、氨基酸等

不是，需要在充足氮 碳源 水 無機鹽的條見下，有些不能生長，按微生物對生長因子的需要與否，可分為三種類型：

（1）生長因子自養(yǎng)型微生物

它們不需要從外界吸收任何生長因子

（2）生長因子異養(yǎng)型微生物

它們需要從外界吸收多種生長因子才能維持正常生長

（3）生長因子過量合成的微生物

少數(shù)微生物在其代謝活動中，能合成并大量分泌某種維生素等生長因子

9、簡述細胞膜運送營養(yǎng)物質(zhì)的四種方式及其特點

1）單純擴散(simple diffusion or passive diffusion):又稱被動運送,指細胞膜在無載體蛋白參與下，單純依靠物理擴散方式讓營養(yǎng)物質(zhì)被動通過的一種運輸方式。2）促進擴散(facilitated diffusion/transport)：指溶質(zhì)在運送過程中，必須借助細胞膜上的底物特異載體蛋白的協(xié)助，但不消耗能量的一類擴散性運送方式。3）主動運送(Active transport)：指一類需要提供能量并通過細胞膜上特異性載體蛋白構(gòu)象的變化，而使膜外環(huán)境中低濃度的溶質(zhì)運入膜內(nèi)的一種運送方式。是微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要方式。

4）基團移位(Group translocation)：指溶質(zhì)在運送過程中既需特異性載體蛋白的參與，又需消耗能量，而且溶質(zhì)在運送前后還會發(fā)生分子結(jié)構(gòu)變化的一種運送方式。

10、常見的培養(yǎng)四大類微生物的培養(yǎng)基是什么？

細菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 放線菌：高氏一號培養(yǎng)基

霉菌：察氏合成培養(yǎng)基或 PDA(Potato-Dextrose-Agar)酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基 代謝相關(guān)概念

有氧呼吸：底物按常規(guī)方式脫氫后，脫下的氫經(jīng)呼吸鏈傳遞，最終被外源分子氧接受（分子氧作為最終氫受體）的氧化過程。

無氧呼吸：又稱厭氧呼吸，指一類呼吸鏈末端的氫受體為外源無機氧化物（少數(shù)為有機氧化物）的生物氧化。這是一類在無氧條件下進行的、產(chǎn)能效率較低的特殊呼吸。

發(fā)酵：在生物氧化中發(fā)酵是指在無氧等外源氫受體的條件下，底物脫氫后所產(chǎn)生的還原力[H]不經(jīng)過呼吸鏈傳遞而直接交給某一內(nèi)源性中間代謝物接受，以實現(xiàn)底物水平磷酸化產(chǎn)能的一類生物氧化反應(yīng)。生長：

11、什么是純培養(yǎng)？純培養(yǎng)如何獲得？

純培養(yǎng)：微生物學中把從一個細胞或一群相同的細胞經(jīng)過培養(yǎng)繁殖而得到的后代,稱純培養(yǎng)（物）。

獲得純培養(yǎng)的方法 ：①液體稀釋法 ②傾注平板法 ③平板涂布法 ④平板劃線法 ⑤單細胞分離法 ⑥選擇培養(yǎng)法

12、什么是生長曲線？試說明制作單細胞微生物生長曲線的方法。單細胞微生物的典型生長曲線可分幾個時期？各有何特點？ 在生產(chǎn)上延長穩(wěn)定期和縮短延滯期(lag phase)的措施有哪些？

定量描述液體培養(yǎng)基中微生物群體生長規(guī)律的實驗曲線，稱為生長曲線(Growth Curve)。制作：將少量的純種單細胞微生物接種到恒容積的液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，每隔一定時間取樣，測定單位體積里的細胞數(shù)。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以單位體積里的細胞數(shù)的對數(shù)值為縱坐標，繪制的曲線，即生長曲線。生長曲線分為四個階段：延滯期；對數(shù)期；穩(wěn)定期；衰亡期。1）延滯期：指將少量微生物接種到新鮮培養(yǎng)液中后，在開始培養(yǎng)的一段時間內(nèi)，因代謝系統(tǒng)適應(yīng)新環(huán)境的需要，細胞數(shù)目不增加的一段時期。特點：①生長速率常數(shù)= 0 ②細胞體積增長,細胞內(nèi)RNA、DNA含量增高。

④合成代謝活躍，核糖體、酶類和ATP合成加快，易產(chǎn)生各種誘導酶。⑤對外界不

2）對數(shù)期

指在生長曲線中，緊接著延滯期的一段細胞數(shù)按幾何級數(shù)增長的時期。

特點：①生長速率常數(shù)R最大，細胞每分裂一次（即繁殖一代）所需要的時間 ——代時或原生質(zhì)增加一倍所需的倍增時間最短。②細胞進行平衡生長，菌體內(nèi)各種成分最為均勻 ③酶系活躍，代謝旺盛。3）穩(wěn)定期（stationary phase）又稱恒定期或最高生長期。

特點：①生長速率常數(shù)R=0，新增殖的細胞數(shù)與老細胞的死亡數(shù)幾乎相等，細胞

數(shù)目達到最高水平。

②細胞分裂速度下降，開始積累內(nèi)含物，產(chǎn)芽孢的細菌開始產(chǎn)芽孢。③開始積累代謝產(chǎn)物。4）衰亡期（decline phase）

特點：①微生物死亡數(shù)超過新增殖數(shù)，活菌數(shù)急劇下降，出現(xiàn)“負生長”。②細胞出現(xiàn)多形態(tài)，大小不等，有時出現(xiàn)畸型。有的微生物在此期會進一步合成或釋放次生代謝物。芽孢菌的芽孢開始釋放。

③因菌體本身產(chǎn)生的酶及代謝產(chǎn)物的作用，使菌體死亡、自溶等，發(fā)生自溶的菌生長曲線表現(xiàn)為向下跌落的趨勢。良條件反應(yīng)敏感，如氯化鈉濃度、溫度、抗生素等理化因素。

延長穩(wěn)定期措施：①補充營養(yǎng)物質(zhì)（補料）；②調(diào)pH ；③調(diào)整溫度等。縮短延滯期措施：加大接種量、用對數(shù)期的作為菌種、用相應(yīng)的培養(yǎng)基

13、根據(jù)微生物生長的最適溫度不同，可以將微生物分為幾種類型？

根據(jù)微生物生長 的溫度范圍，將微生物劃分為三個類型： 1）低溫型微生物（嗜冷微生物）2）中溫型微生物（嗜溫微生物）3）高溫型微生物（嗜熱微生物）

14、細菌和真菌常用的培養(yǎng)溫度是多少？生長的適宜pH范圍？ 光合細菌生長的最適條件是①溫度15～20℃時，光照30000～50000lx，培養(yǎng)基pH值為7.0；②溫度25～30℃時，光照為3000～5000lx，培養(yǎng)基的pH值為7.0 培養(yǎng)真菌最適pH為4.0～6.0最適溫度為22～28℃,某些深部感染的真菌則在37℃中生長最好。培養(yǎng)真菌需要較高的溫度與氧氣。

光復活作用：把經(jīng)紫外線照射后的微生物立即暴露于可見光下時，可明顯降低其死亡率的現(xiàn)象，稱為光復活作用。

15、簡述菌種保藏原理并說明幾種常用菌種保藏方法

菌種保藏原理：首先要挑選典型菌種或典型培養(yǎng)物的優(yōu)良純種（最好是分生孢子、芽胞等休眠體）；其次是要創(chuàng)造一個有利于它們長期休眠的良好環(huán)境條件，如干燥、低溫、缺氧、避光、缺營養(yǎng)以及添加保護劑等。常用菌種保藏方法：冰箱保藏法（斜面）；冰箱保藏法（半固體）；石蠟油封藏法；甘油懸液保藏法；沙土保藏法；冷凍干燥法；液氮保藏法。生態(tài)：

共生：兩種生物共居在一起，相互分工合作，相依為命，以至達到難分難解、合二為一的極其緊密的一種相互關(guān)系。

拮抗：又稱抗生，指由某種生物所產(chǎn)生的特定代謝產(chǎn)物可抑制他種生物的生長發(fā)育甚至殺死它們的一種相互關(guān)系。食品微生物部分：

概念：大腸菌群：是指在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌群主要包括埃希氏菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸桿菌屬等細菌。

食物中毒：指經(jīng)口攝入了含有生物性、化學性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有毒有害物質(zhì)當作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性的急性、亞急性疾病，稱為食物中毒 商業(yè)滅菌：也可以叫做商業(yè)無菌，指食品經(jīng)過殺菌處理后，按照所規(guī)定的微生物檢驗方法，在所檢食品中無活的微生物檢出或僅能檢出合理范圍內(nèi)的非病原菌，是一個標準。

舉出酸奶、納豆菌、啤酒、葡萄酒、白酒、醬油、腐乳、丹貝生產(chǎn)中常用的生產(chǎn)菌種及其作用。

醬油是以蛋白質(zhì)原料和淀粉質(zhì)原料為主，經(jīng)米曲霉等多種微生物共同發(fā)酵釀制而成。

丹貝：少孢根霉丹貝又稱天培（Tempeh），是印度尼西亞的傳統(tǒng)大豆發(fā)酵制品。面包是以面粉為主要原料，以糖、油脂和雞蛋等為輔料利用酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)出來的一種發(fā)酵食品

啤酒是以優(yōu)質(zhì)大麥芽為主要原料，酒花、大米或玉米等為輔料，經(jīng)過制麥、糖化、啤酒酵母發(fā)酵等工序釀制而成的一種含有CO2、低酒精濃度和多種營養(yǎng)成分的飲料酒

葡萄酒：有釀酒酵母、葡萄酒有孢漢遜酵母（Hanseniaspora vineae）、葡萄汁有孢漢遜酵母(H.uvarum)等。釀酒酵母是主要的菌種，在健壯的葡萄上含量約為50 CFU/g 白酒：大曲白酒:用小麥、大麥等原料發(fā)酵制成。大曲中微生物主要是曲霉和酵母菌及少量細菌。小曲白酒:用米粉和米糠加中藥發(fā)酵制成。麩曲白酒:用麩皮酒糟制成散狀曲經(jīng)發(fā)酵而成 腐乳：霉菌型腐乳有腐乳毛霉、魯氏毛霉、總狀毛霉、華根霉(Rhizopus chinensis)等。細菌型腐乳菌種微球菌屬（克東腐乳）和枯草芽孢桿菌（武漢腐乳）納豆菌:屬枯草芽孢桿菌納豆菌亞種

普通酸奶：主要是嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌。

嗜酸菌乳：主要用嗜酸乳桿菌或者嗜酸乳桿菌和其它乳酸菌的混合菌種。雙歧桿菌乳：主要是雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌或嗜酸乳桿菌等的混合菌種。

益生菌乳：多數(shù)是由多菌種共發(fā)酵，常含有雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌或瑞士乳桿菌等

17、什么是水活度值？大多數(shù)細菌、酵母菌和霉菌生長的最低水活度？

水活度值是指食品在密閉容器內(nèi)水的蒸汽壓（P）與同溫同壓下的純水蒸汽壓（P0）之比值

微生物類群

最低Aw值范圍

微生物類群

最低Aw值

大多數(shù)細菌

0.99~0.90

嗜鹽性細菌

0.75

大多數(shù)酵母菌

0.94~0.88

耐高滲酵母

0.60 大多數(shù)霉菌

0.94~0.73

干性霉菌

0.65

19、一般從哪幾個方面進行食品腐敗變質(zhì)的鑒定？

1、感官鑒定：主要檢驗食品的色澤、氣味、口味、狀態(tài)等。

2、化學鑒定：含氮量高的食品：常測定揮發(fā)性鹽基總氮、三甲胺、組胺等。碳水化合物豐富的食品：常測定pH、有機酸含量等。

3、物理指標：測定食品浸出物的量、浸出液的電導度、折光率、冰點下降、黏度上升等指標。

4、微生物檢驗：常測定細菌總數(shù)、大腸菌群的近似數(shù)和霉菌等。一般食品中活菌數(shù)達到108cfu.g-1時，則可認為食品處于初期腐敗階段。20、食品的微生物污染途徑有哪些？

1、內(nèi)源性污染

食品原料本身帶有微生物。

2、外源性污染

通過水、空氣污染、人及動物、加工設(shè)備及包裝材料和土壤污染。

21、食品衛(wèi)生標準中的微生物指標有哪些？ 食品中微生物指標的常見檢驗項目如下：菌落總數(shù)、大腸菌群計數(shù)、大腸桿菌計數(shù)、腸道致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌）、副溶血性弧菌、單核細胞增生李斯特氏菌、雙岐桿菌、空腸彎曲菌、霉菌計數(shù)和酵母計數(shù)。

22、簡述大腸菌群概念以及食品中大腸菌群最大可能數(shù)的檢驗意義。

大腸菌群（coliforms）是指在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌群主要包括埃希氏菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸桿菌屬等細菌。大腸菌群被許多國家用作食品衛(wèi)生質(zhì)量評價的指標菌。檢測大腸菌群的食品衛(wèi)生意義：它可作為糞便污染食品的指標菌，大腸菌群數(shù)的高低，表明了食品被糞便污染的程度和對人體健康危害性的大小。它可以作為腸道致病菌污染食品的指標菌，大腸菌群與腸道致病菌有相同來源，在外界環(huán)境中生存時間也與主要腸道致病菌相近。

23、細菌性食物中毒的種類，致病性細菌舉例。按發(fā)病機理可分為三型：

①感染型中毒。細菌在食品中大量繁殖，攝取了這種帶有大量活菌的食品，腸道粘膜受感染而發(fā)病。沙門氏菌、副溶血性弧菌、變形桿菌、致病性大腸桿菌等皆可引起此型。

②毒素型中毒。由細菌在食品中繁殖時產(chǎn)生的毒素引起的中毒，攝入的食品中可以沒有原來產(chǎn)毒的活菌。如肉毒中毒、葡萄球菌腸毒素中毒。

③過敏型。由于細菌的作用，食品中產(chǎn)生大量的有毒胺（如組胺）而使人產(chǎn)生過敏樣癥狀的食物中毒，引起此型中毒的食品為不新鮮或腐敗的魚。含組胺較多的魚為鯖科的鮐魚，科的藍圓和竹莢魚，金槍魚科的金槍魚、扁舵鰹、鮪魚和鯡科的沙丁魚。這些魚青皮紅肉，即魚皮為黑青色，而肉色較紅，因其中血管系統(tǒng)較發(fā)達，含血紅蛋白較多。引起此型中毒的細菌是含組胺酸脫羧酸酶的細菌，其中酶活性最強的為摩根氏變形桿菌、組胺無色桿菌和溶血性大腸桿菌。

細菌性食物中毒可按致病菌分類，分為沙門氏菌食物中毒、副溶血性弧菌食物中毒、肉毒梭狀芽孢桿菌食物中毒等。

24、病原菌特性（金黃）。

金黃色葡萄球菌致病菌株可產(chǎn)生多種毒素和酶，致病性強。

產(chǎn)生的毒素和酶：主要有溶血毒素、殺白血球毒素、凝固酶、溶纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、耐熱核酸酶、剝脫性毒素、腸毒素等。

第四篇：03281食品微生物學(二)實驗考試大綱

江蘇省高等教育自學考試大綱江南大學編

食品微生物學實驗

一、課程性質(zhì)及其設(shè)置目的與要求

（一）課程性質(zhì)和特點

微生物學實驗是為專業(yè)基礎(chǔ)課《微生物學》配套的同步實驗課程，為必修課程，本教學大綱是根據(jù)食品科學專業(yè)的人才培養(yǎng)目標制定的。其目的是為了使學生加深理解微生物基礎(chǔ)理論，掌握微生物學實驗的基本技能，通過實驗教學，培養(yǎng)學生觀察、思考、分析和解決問題的綜合能力，以及實事求是、嚴肅認真的科學研究態(tài)度，提高學生的綜合素質(zhì)，熟悉并掌握微生物學研究方法，能用微生物學方法解決一些專業(yè)實際問題。為學生今后的學習及工作實踐打下寬厚的基礎(chǔ)

（二）本課程的基本要求

1．要求學生熟悉微生物實驗的基本原理，包括普通光學顯微鏡的工作原理，簡單染色法原理，革蘭氏染色法原理，測量微生物細胞大小的原理，微生物的分離、純化的基本原理，培養(yǎng)基的配制原理，高壓蒸汽滅菌原理、干熱滅菌原理，細菌總數(shù)的測定原理，微生物生理生化反應(yīng)原理，食品衛(wèi)生微生物檢驗檢測原理等。

2要求學生掌握顯微技術(shù)、染色技術(shù)、消毒與滅菌技術(shù)、接種技術(shù)、培養(yǎng)技術(shù)，代謝產(chǎn)物檢測技術(shù)、菌種鑒定技術(shù)與食品衛(wèi)生微生物檢驗檢測技術(shù)等，并運用這些技術(shù)從事微生物學研究、解決有關(guān)微生物專業(yè)的實際問題，為進一步學習有關(guān)專業(yè)課程與微生物學相關(guān)研究與生產(chǎn)基礎(chǔ)奠定良好基礎(chǔ)。

3.要求學生及時規(guī)范地寫出實驗報告：有繪圖要求的實驗，必須在課堂內(nèi)完成顯微鏡下繪圖，力求真實、準確；無繪圖要求的實驗，對實驗結(jié)果要認真觀察、記錄、整理；實驗報告寫作要規(guī)范，要有簡要的分析討論。

（三）與其他課程的聯(lián)系與分工

本課程側(cè)重介紹微生物學實驗原理、技術(shù)，開設(shè)時間最好略后或同步于微生物學理論課。

二、課程內(nèi)容與考核目標

實驗

一、普通光學顯微鏡的使用

【目的和要求】

1.學習普通光鏡的結(jié)構(gòu)、功能、使用方法。

2.學習并掌握油鏡的原理和使用方法。

【實驗內(nèi)容】

1.了解光鏡各部分結(jié)構(gòu)。

2.熟悉普通光學顯微鏡使用方法，并學習油鏡的使用方法。

3.掌握利用光鏡觀察微生物的技能，了解細菌（球菌、桿菌）、真菌等微生物的主要特征。

【重難點】

1.油鏡的使用

2.聚光器的調(diào)節(jié)

【注意事項】

1.安全取放顯微鏡。

2.油鏡使用后要徹底清潔。

實驗

二、微生物的染色

【目的和要求】

1.學習并掌握微生物的制片技術(shù)

2.學習掌握簡單染色的基本技術(shù)。

3.學習革蘭氏染色法的原理和方法。

【實驗內(nèi)容】

1.簡單染色技術(shù)并觀察。

2.革蘭氏染色并觀察鑒定。

【重難點】

1.革蘭氏染色，結(jié)果鑒定。

【注意事項】

1.革蘭氏染色的染色和脫色時間要恰當，否則結(jié)果不明顯。

2.觀察芽孢時要調(diào)節(jié)光線，否則不易觀察到。

實驗

三、放線菌、霉菌的形態(tài)觀察

【目的和要求】

1.練習絲狀微生物的制片和簡單染色技術(shù)。

2.了解放線菌、霉菌的形態(tài)特征。

【實驗內(nèi)容】

1.觀察放線菌、霉菌的自然絲狀生長狀態(tài)。

2.簡單染色并觀察細胞特征。

3.熟悉顯微鏡下觀察絲狀微生物的一般方法。

【重難點】

1.放線菌、霉菌的自然絲狀生長狀態(tài)的觀察。

2.比較兩者形態(tài)的異同點。

【注意事項】

1.注意防止菌絲污染顯微鏡物鏡鏡頭。

實驗

四、酵母菌的形態(tài)觀察及死活細胞的鑒別

【目的和要求】

1.學習水浸片法制作酵母菌臨時裝片。

2.了解酵母菌的形態(tài)特征，觀察出芽繁殖的狀態(tài)。

3.了解鑒別細胞死活的方法。

【實驗內(nèi)容】

1.水浸片法制作酵母菌臨時裝片。

2.觀察酵母菌的形態(tài)特征，并注意芽殖的狀態(tài)。

3.通過染色結(jié)果鑒別細胞的死活。

【重難點】

1． 酵母菌的芽殖特征。

2． 鑒別細胞的死活。

【注意事項】

1.美藍染液水浸片法制作酵母菌制片注意染液的濃度和染色時間。

2.菌體與染液混合時不要劇烈涂抹，以免破壞細胞。

3.蓋片時緩慢傾斜覆蓋，以免產(chǎn)生氣泡。

實驗

五、微生物大小的測定

【目的和要求】

1.學習并掌握使用顯微測微尺測定微生物大小的方法。

2.掌握對不同形態(tài)酵母菌細胞大小測定的要求，增強對微生物大小的感性認識。

【實驗內(nèi)容】

1.安裝并校正測微尺。

2.測定并記錄不同形態(tài)微生物細胞的大小。

3.處理數(shù)據(jù)，計算細胞平均實際大小。

【重難點】

1.換算目鏡測微尺每格長度的代表值。

2.安全使用測微尺，保護高倍物鏡鏡頭。

【注意事項】

1.校正目鏡測微尺時光線宜弱些，以便找到鏡臺測微尺的刻度。

2.換高倍鏡時要十分小心，防止壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭。

3.測量對象要有代表性，數(shù)據(jù)及單位換算要準確。

實驗

六、顯微鏡直接計數(shù)法

【目的和要求】

1.了解血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)和功能。

2.學習并掌握使用血球計數(shù)板測定酵母菌細胞或孢子數(shù)量的方法。

【實驗內(nèi)容】

1.制備菌懸液

2．檢查血球計數(shù)板

3.加樣并計數(shù)，計算樣品的含菌量

【重難點】

1.計數(shù)板中計數(shù)室的尋找。

2.調(diào)節(jié)成合適的濃度以便計數(shù)和減小誤差。

【注意事項】

1.清洗計數(shù)板時要小心，不能使用刷子等硬物，以免破壞精細度；干燥計數(shù)板不能火上烘烤。

2.取樣時要搖勻菌液，且加樣時不可有氣泡產(chǎn)生。

實驗

七、培養(yǎng)基的配制及滅菌

【目的和要求】

1.學習掌握培養(yǎng)基的配制原理。

2.掌握配制培養(yǎng)基的一般方法步驟。

3.熟悉高壓滅菌鍋的使用原理和方法。

4.熟悉干熱滅菌箱的使用原理和方法。

【實驗內(nèi)容】

1.按照培養(yǎng)基的配方濃度要求計算各成分所需要的量。

2.準確配制培養(yǎng)基并滅菌。

3.各種玻璃儀器的包扎與滅菌。

【重難點】

1.規(guī)范準確量取各成分。

2.高壓滅菌鍋的安全使用。

3.干熱滅菌箱的安全使用。

【注意事項】

1.計算要準確無誤。

2.稱量要精確。

3.安全使用高壓滅菌鍋。

4.安全使用干熱滅菌箱。

實驗

八、微生物的接種、分離與培養(yǎng)

【目的和要求】

1.學習微生物的接種、分離方法原理與培養(yǎng)技術(shù)。

2.學習無菌操作培養(yǎng)微生物的技術(shù)方法。

【實驗內(nèi)容】

1.學習常用的接種與分離方法，掌握無菌操作要求。

2.制備菌種混懸液，無菌操作進行劃線及涂布培養(yǎng)。

3.學習一般微生物的培養(yǎng)方法。

【重難點】

1.無菌操作

【注意事項】

1.劃線分離菌懸液要無菌操作，以免污染空氣中雜菌。

2.劃線分離時各級劃線區(qū)域不要重疊。

實驗

九、細菌的代謝與生化反應(yīng)—細菌對含碳、氮化合物的分解和利用

【目的和要求】

通過不同細菌對不同含碳化合物的分解利用情況，了解細菌碳代謝類型的多樣性 通過不同細菌對不同含氮化合物的分解利用情況，了解細菌氮代謝類型的多樣性

【實驗內(nèi)容】

對大腸桿菌、沙門氏菌做不同生化反應(yīng)試驗，觀察記錄結(jié)果。

【重難點】

1.對實驗結(jié)果有正確的判斷

【注意事項】

1.無菌操作，以免污染空氣中雜菌。

2.接種時標記要清楚，各菌種間切忌交叉污染

實驗

十、食品衛(wèi)生微生物學檢驗

【目的和要求】

1.學習食品衛(wèi)生微生物學中菌落總數(shù)測定原理與方法

2.學習食品衛(wèi)生微生物學中大腸菌群測定原理與方法

【實驗內(nèi)容】

1.測定飲用水中的菌落總數(shù)。

2.測定飲用水中大腸菌群的數(shù)量。

【重難點】

1.樣品的量取、稀釋、澆注法接種。

2.數(shù)據(jù)處理，結(jié)果的判斷。

【注意事項】

1.注意無菌操作。

2.樣品稀釋倍數(shù)要準確，標記要清楚，接種前要搖勻。

3.培養(yǎng)基的溫度要適宜。

4.數(shù)據(jù)處理。

三、有關(guān)說明和實施要求

（一）自學教材

本課程使用教材為：江南大學編寫的微生物學實驗講義，GB/T4789.2-2008, GB/T4789.3-2008

參考書：錢存柔，微生物學實驗教程，北京大學出版社，1999.7

(二)考核方式

考核方式：

1.本課程的最后成績?yōu)楦鞔螌嶒灣煽兊钠骄蹬c實驗操作考核相結(jié)合的方式。各次實

驗成績由實驗報告成績與實驗操作實驗成績組成。

2.各次實驗成績的平均值占總成績的70%，實驗操作考核占總成績的30%。實驗報告評分依據(jù)：

1.實驗報告撰寫的完整程度以及正確性；

2.所觀察結(jié)果的正確性、繪圖的完整性；

3.實驗結(jié)果的正確性；

4.回答問題的正確性；

5.分析和討論中所體現(xiàn)的對實驗過程中出現(xiàn)問題的認知程度。

第五篇：微生物學實驗考試題

《微生物學實驗》試題

1、在進行高壓蒸汽滅菌時，是否只要滅菌鍋壓力表到達所需的值時鍋內(nèi)就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？

2、在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？

3、高壓蒸汽滅菌鍋的操作有哪幾個步驟？每一步驟應(yīng)注意哪些問題？

4、在微生物學實驗中，常用于配制固體培養(yǎng)基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？

5、環(huán)境樣品梯度稀釋、涂布平板法分離微生物時，如何選擇不同稀釋梯度樣品的涂布順序？為什么？

6、在革蘭氏染色實驗中，為什么會出現(xiàn)假陽性和假陰性？如何避免？

7、在革蘭氏染色實驗中，不經(jīng)復染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌？為什么？

8、為何用計數(shù)板可以計得樣品中的總菌值？如何計算樣品中的菌體濃度？

9、血球計數(shù)板計數(shù)時，計數(shù)室內(nèi)如有氣泡會對結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？如何避免產(chǎn)生氣泡？

10、試分析血球計數(shù)板計數(shù)法的誤差來源，并提出減少誤差的方法和措施。

要求把題目和答案寫在實驗報告紙上，統(tǒng)一收齊后和第一次實驗報告一起送到我辦公室-生科樓104。