第一篇：食品微生物學實驗報告

常見微生物的分離培養與觀察

一，實驗目的1，掌握顯微鏡的使用方法，操作原理。

2，了解培養基的制備并掌握制備方法

3，掌握殺菌鍋殺菌方法

4，掌握常見微生物在超凈接種臺接種方法

5，掌握微生物裝片制備方法，染色，并能在顯微鏡下觀察細菌裝片

6，在顯微鏡下認識幾種常見微生物并比較

二．實驗原理

1，微生物培養基培養原理

培養基是人工配置的適合于不同微生物生長繁殖或積累代謝產物的混合營養物質。所以，任何培養基都應具備微生物所需要的6大營養素，而且比例是合適的，培養基配制好后，必須立即進行殺菌，否則很快引起雜菌生長。配制的培養基有協調的營養，最適合的物理化學條件，如滲透壓和PH，等一系列能滿足微生物生長的條件，所以可以制備不用的培養基來培養不同的微生物。如用麥芽汁培養菌培養酵母菌，用馬鈴薯蔗糖培養菌培養霉菌，用營養瓊脂培養基培養常用細菌等。

2，顯微鏡使用原理

常見微生物在光學顯微鏡下或者電子顯微鏡下可見。用顯微鏡能比較清晰的辨別幾種常見微生物并比較。在本次使用的顯微鏡中先插上電源，調節光源，把即將觀察的載玻片放到載物臺，先在低倍鏡下找到所要觀察的細菌，再切換至中倍鏡和高倍鏡下觀察。

三．實驗操作

1，儀器與試藥以及器材

SW-SJ-2FD潔凈工作臺（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）

BSP-100生化培養箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）

JP-500A架盤藥物天平（常熟市雙杰測試儀器廠）

01J2003-04型立式壓力蒸汽滅菌器筒（上海東亞壓力容器制造有限公司）SHZ-82恒溫振蕩器（國華企業）

電子式可調萬用電爐（南通金石實業有限公司）

UB102I生物顯微鏡（重慶澳浦光電技術有限公司）

打粉機

瓊脂，土豆（市售），麥芽（藥店），蔗糖（庫存），氯化鈉，雞蛋，蛋白胨，酵母提取液，美藍，酒精，結晶紫，碘液，番紅。

火柴，酒精燈，酒精，棉球，接種棒，棉線，燒杯（5000ml,500ml），錐形瓶，試管，培養皿，玻璃棒，試管塞，廢報紙，吸水紙。

2培養基配制

細菌培養基,蛋白胨10g,酵母抽提物5g，氯化鈉9g加水至1000ml,瓊脂2,5g, 加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水加NaoH至PH7.0，分裝在各個試管里3ml,其余的分裝在錐形瓶中。加棉花塞，用高溫殺菌鍋殺菌30分鐘。

麥芽汁培養基：見筆記本裝在錐形瓶中

馬鈴薯蔗糖培養基： 把馬鈴薯洗凈去皮，取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸半小時后，補足水分。在濾液中加入10g瓊脂，煮沸溶解后加糖20g（用于培養霉菌的加入蔗糖，用于培養酵母菌的加入葡萄糖），補足水分，分裝在錐形瓶中，滅菌，備用。

操作步驟，1，殺菌鍋殺菌過程：加水至稍微沒過鍋內三腳架，再整齊的放入錐形瓶和試管。蓋上殺菌鍋蓋子，在蓋的時候要注意將管子放入鍋內小孔處，同時要對稱的旋轉旋鈕，蓋上蓋子，接通電源，將底下溫度開關調至最大處，打開放氣閥，從看到氣體出現起，計時20分鐘后，關掉放氣閥，觀察壓力閥至0。1千帕時，調整溫度旋鈕至綠燈熄滅，計時15分鐘。關掉電源，冷卻至壓力閥指針到0帕。結束殺菌，打開放氣閥放出剩余氣體。打開殺菌鍋鍋蓋，取出各個試劑瓶。

2，分裝各種微生物，將從殺菌鍋取出的試劑分開裝，將試管整齊排放到由廢舊報紙折成的斜面上，為金黃色葡萄球菌的培養備用。將裝有麥芽汁培養基的錐形瓶取出為酵母菌培養備用。將裝有細菌培養基的錐形瓶分別倒入培養皿中，為培養沙門氏菌備用。將裝有馬鈴薯蔗糖培養基的錐形瓶分別裝入培養皿中，為霉菌的培養做備用。

第二篇：微生物學實驗報告

微 生 物 學 實 驗 報 告（格式標準）

(生命科學專業)

教 師：黎 勇

目錄索引

實驗一 油鏡的使用和細菌的簡單染色法 3

實驗二 細菌的革氏染色與芽孢染色 5

實驗三 常用培養基的配制 7

實驗四 酵母菌霉菌的形態結構觀察及酵母死活細胞的鑒別 8

實驗

五、微生物大小的測定與顯微計數 10

實驗六 環境中微生物的檢測和分離純化 11

實驗七 細菌鑒定中常用的生理生化反應 12

實驗八（綜合實驗）化能異養微生物的分離與純化 13

課程名稱： 微生物學

實驗班級：化生系生命科學本科

實驗日期：

指導教師：黎勇 實驗一 油鏡的使用和細菌的簡單染色法

〔目的要求〕學習并熟練掌握油鏡的使用技術；觀察細菌的基本形態；學習觀察細菌的運動性的基本方法。

〔基本原理〕

1.N2A=n2sinα

2.D=λ/2N.A

3.目鏡可提高放大倍數，但有效放大率取決于鏡口率。已經分辨的物體不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。

4.用懸滴法或凹玻片法觀察細菌的運動性時，可以通過真運動能定向地由一處快速運動來區別于顆粒的布朗運動。

〔器材用具〕顯微鏡、載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水紙、擦鏡紙；細菌、放線菌等固定裝片；培養18小時左右的B.subtilis.S.arueus菌斜面培養物；無菌水、生理鹽水。

〔方法步驟〕：

（一）油鏡的使用

鏡檢裝片在中倍（或高倍鏡）下找到目的物，并使位于視野正中

聚光鏡上升到最高位置，虹彩光圈開到最大，鏡頭轉開成八字形

在玻片的鏡檢部位（光斑處）滴一滴香柏油

油鏡轉入正下方

側視小心上升載物臺（縮短鏡頭與裝片距離，鏡頭浸入油中，至油圈不擴大為止鏡頭幾與裝片接觸）粗調器徐徐下降載物臺（密切注視視野，當捕捉到物像時，立即用細調器校正）仔細觀察并繪圖

取出裝片，清洗油鏡：擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油

擦鏡紙沾少許二甲苯擦去殘留（用手指輔助，迅速拭擦一、二次）

用清潔擦鏡紙仔細擦干二甲苯（2-3次）。

（二）細菌的簡單染色法：涂片

干燥

火焰固定

染色

水洗

干燥

油鏡觀察

（三）細菌運動性的觀察 取潔凈蓋玻片，四周涂上凡士林

滴加一小滴菌懸液

凹玻片的凹窩向下蓋于蓋玻片上

翻轉觀察

〔結果分析〕

1、畫一圓圈表示視野，選取所觀察的微生物繪圖，注意特殊結構、形狀和排列。（描繪時按視野實際大小5－10倍繪制）

菌名：大腸桿菌

菌名：金黃色葡萄球菌

放大倍數：100310（35）

放大倍數：100310（35）

特殊結構：無 特殊結構：無

視野觀察下微生物的形態

2、油鏡使用時為什么必須干燥裝片？

防止水油分層，光受到折射而影響油鏡性能的發揮

〔實驗討論〕

首次實驗中有幾個要點：一是按無菌操作取用菌；二是涂片技術的掌握；三是油鏡使用技術。凡實驗中學生的所思所想，如無菌操作技術要點、自行處理實驗材料、失敗與思考等均可進行討論（如涂片時蒸餾水不宜過多、取用菌時防止菌被灼燙變形、取菌宜少不宜多等均是可以討論的內容）。

實驗二 細菌的革氏染色與芽孢染色

〔目的要求〕觀察細菌菌落的特征；掌握簡單染色法、革蘭氏染色法的原理及操作步驟；在油鏡下觀察細菌個體形態；學習環境中微生物的檢查方法，并加深對微生物分布廣泛性的認識

〔器材用具〕E.coliB.subtilisS.aureus.的斜面培養物（18－24小時）以及菌落平板各一個；染液：草酸銨結晶紫、劃蘭氏染液、盧戈氏碘、95%的乙醇、蕃紅；無菌水、顯微鏡、載片、濾紙、液體石蠟是、、擦鏡紙、接種環。

〔方法內容〕：

（一）實驗室環境中微生物的檢查

（二）革蘭氏染色法 涂片固定

冷卻

結晶紫染色1min 水洗

碘媒染1min 95%乙醇30-60s 水洗

番紅復染2－3min

水洗

干燥

油鏡鏡檢

（三）芽孢染色 涂片固定

孔雀綠加熱染色（勿干）5min 水洗

番紅復染1min

水洗

鏡檢

〔結果分析〕實驗結果被染成紫色者即為革蘭氏陽性，被染成紅色者為革蘭氏陰性；菌體染成紅色，芽孢被染成綠色。

菌名：大腸桿菌

菌名：金黃色葡萄球菌

放大倍數：100310（35）

放大倍數：100310（35）

染色反應：紅色（陰性）染色反應：紫色（陽性）

菌名：枯草芽孢桿菌

放大倍數：100310（35）

染色反應：紫色（陽性）

圖1 視野觀察下細菌的革蘭氏染色反應

圖2 枯草芽孢桿菌芽孢形態圖

〔實驗討論〕

嚴格掌握脫色程度，是成敗的關鍵。若脫色時間過度，則陽性菌初時之紫色脫出，復染成紅色，誤成陰性，反之脫色時間不足，陰性菌在初染時的紫色未能脫出，復染時不能染成紅色，誤以為陽性菌；涂片不能厚；盧弋氏碘即用即配。

作業

1、繪出所觀察到到細菌的視野圖，并說明染色反應。

2、哪些因素會影響到革蘭氏染色結果的正確？其中是關鍵的一步是什么？ 菌齡及培養條件和染色技術是最主要的，關鍵是脫色。

3、怎樣對未知菌進行革蘭氏染色，以證明你的結果的正確？

與已知菌混合涂片比較。

實驗三 常用培養基的配制

〔目的要求〕了解培養基的配制原理；了解培養基常規配制程序；了解培養基過程各環節的要求和注意事項。了解半合成培養基的配制原理，學習掌握肉膏蛋白胨培養基、馬鈴薯培養基的配制方法。

〔器材用具〕等配各種培養基的組成成分，瓊脂、1N NaoH溶液 1N HCl天平或臺秤高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養皿、玻璃漏斗等。藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙報紙等。

〔方法步驟〕

(一)玻璃器皿的洗滌和包裝 以小組為單位清洗、控水，按9個為一組，分別用報紙包好并放入烘箱中等待滅菌。

(二)液體及固體培養基的配制過程

原料稱量（按配方次序）

溶解

調節ｐH 過濾澄清

分裝

塞棉塞和包札

滅菌

分別按教材配方配制牛肉膏蛋白胨、馬鈴薯液體及固體培養基。

(三)培養基的分裝 用玻璃漏斗，橡皮管，小玻璃管及彈簧夾制作分裝裝置

選用153150平口試管或150mL錐形瓶貼上標簽

分裝（至試管高度1/4-1/3，斜面制作用1/5，半固體用1/3）

要求：每人制作斜面3支。其余分裝至錐形瓶中。

(四)棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎 分別制作試管及錐形瓶棉塞并塞好好以牛皮紙包裝頭部。

(五)培養基的滅菌 培養基用濕熱法滅菌；皿用干熱法分別滅菌。

(六)斜面和平板的制作（下次試驗完成）

(七)培養基的無菌檢查（下次實驗完成）

(八)無菌水的制備 同時制作無菌生理鹽水，置錐形瓶中備用。

〔結果分析〕

以斜面接種培養驗證培養基配制效果；

以平板制作及接種24小時培養驗證滅菌效果；

簡述移液管包裝的注意事項。

〔實驗討論〕

滅菌器的滅菌效果必須間隔一段時間，加以驗證，主要方法除無菌檢查外，還通過壓力試紙同時滅菌來驗證其壓力與溫度；培養基通常成批制作備用。但制作后，其貯藏時間有一定限制，一般室溫條件下不超過三周；冰箱4℃條件下可貯藏半年，過期不能用。

作業：

1、記錄培養基的成分和名稱

2、分析所配制培養基的碳源、氮源、能源及無機鹽、維生素的來源。所配制均為天然培養基，各成分主要來自有機質，微量元素可以由自來水提供。

3、什么是天然培養基？什么是半合成、合成培養基？

實驗四 酵母菌霉菌的形態結構觀察及酵母死活細胞的鑒別

〔目的要求〕觀察并掌握酵母菌霉菌的菌落特征、個體形態、生長及繁殖方式。學習酵母死活細胞的鑒別方法。

〔材料用具〕釀酒酵母、紅酵母、假絲酵母；(釀酒酵母和紅酵母菌落平板各一個。釀酒酵母豆芽汁斜面及釀酒酵母醋酸鈉斜面各一支，假絲酵母加蓋片培養的平板)；7.6%孔雀綠染液，0.5%蕃紅染液，蘇丹黑染液，二甲苯，中性紅染液，碘液；目鏡測微尺、鏡臺測微尺；載片及蓋片。

〔方法步驟〕

(一)菌落特征的觀察

(二)個體形態與出芽

(三)子囊孢子的觀察

(四)酵母死活細胞的觀察。

〔結果分析〕描述釀酒酵母霉菌的菌落形態特征；繪圖釀酒酵母的菌體、出芽方式及細胞細節；

（一）酵母的菌落濕潤，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；

菌名：釀酒酵母

放大倍數：100310（35）

特殊結構：芽（出芽繁殖）

（二）霉菌

菌落特征：干燥，正反面及中央與邊緣不一致；大而疏松。

（如右圖）

菌名：青霉（Penicillium）

菌名：毛霉（Circinella）

放大倍數：100310（35）

放大倍數：100310（35）

特殊結構：分生孢子梗（帚狀分枝）

特殊結構：孢子囊

菌名：曲霉（Aspergillus）

菌名：根霉（Rhizopus）

放大倍數：模式圖

放大倍數：100310（35）

特殊結構：足細胞 特殊結構：假根

〔實驗討論〕

作業：

1、繪圖說明所觀察到的酵母菌、霉菌的形態特征。

實驗

五、微生物大小的測定與顯微計數

〔目的要求〕學習并掌握用測微尺測定微生物細胞大小的方法；了解血細胞計數板的構造及計數原理，掌握使用血細胞計數板進行微生物計數的方法。

〔材料用具〕啤酒酵母；顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺；血球計數板；蓋玻片，載玻片，滴管，試管，無菌水，〔方法步驟〕

(一)酵母細胞大小測定

(1)目鏡測微尺的校正(2)細胞大小的測定

(二)顯微計數法

(1)鏡檢計數室

(2)菌懸液制備及加樣

(3)計數

(4)清洗計數板

〔結果分析〕結果記錄入表中。

1、目鏡測微尺的標定結果（精確到零點幾小格）物鏡倍數

（目鏡均為10倍）目鏡測微尺的格數（小格）

鏡臺測微尺的格數（小格）

目鏡測微尺的每格的長度（μm）40倍

2、酵母菌大小測定結果 菌號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 目鏡測微尺的格數（小格）長軸

短軸

酵母大小平均值＝±（保留小數點后2位）

長軸＝

3、血細胞計數板對酵母菌懸液計數結果 實驗次數 各中格中菌數 總菌數 稀釋倍數平均值

菌數(個/mL)1

短軸＝

〔實驗討論〕

作業：

1.什么更換不同放大倍數的目鏡和物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺校正。2..根據實驗體會說明血細胞計數法的誤差主要來自哪些方面？如何減少誤差？ 3..在滴加菌液時，為什么要先置蓋玻片然后滴加菌液？能否先加菌液再置蓋玻片？ 4..用血球計數板測定微生物數量時，哪些步驟易造成誤差？如何預防？計算細胞數目時此法是否可以適用？ 實驗六 環境中微生物的檢測和分離純化 〔目的要求〕

1、學習并掌握各種無菌操作技術，并用此技術進行微生物的劃線分離接種

2、學習掌握平板菌落計數法 〔基本原理〕

土壤是微生物生活的大本營，是生物多樣性的重要場所，也是發揚微生物資源的重要基地，可以從中分離純化得到許多的菌株。劃線法是常用的分離與純化方法，通過無菌操作條件下，“漸劃漸稀”的效應而得到菌落純的菌株。

平板菌落計數法是將待測樣品經過適當稀釋，使其中的微生物充分分散形成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經過培養，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品含菌量。這種方法為活菌計數法，廣泛應用于生物制品及污染程度（含菌指數）的檢測。

〔材料與用品〕

土樣10g，無菌平皿（20套）及無菌水，牛肉膏蛋白胨平板（2只）；取液器（0.5mL及1mL各三支）；無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環，記號筆，酒精燈，火柴，試管架 〔方法步驟〕

1、周圍環境中微生物的檢測

平板分4個區做好標記

用未洗的手指及肥皂洗過的手指（1次、2次、3次，或其它）分別在四個區上涂抹

倒置到37℃培養24小時觀察結果。

2、土壤中微生物分離純化及平板計數

采土樣（5－20cm）土10g，裝入到已滅菌的牛皮袋（信封）中，封好袋口

1.0g加入99mL無菌水（三角瓶）中

1mL無菌吸管0.5mL加入到4.5mL無菌水試管中，吹吸三次，振蕩均勻(10-3)。同法得10－4－10－6土壤溶液

用接種環沾取10-2土壤懸液在已經凝固的平板表面進行劃線分離

分別取各濃度土壤懸液0.1mL對號均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉膏蛋白胨平板，用無菌涂棒涂勻（多涂幾遍）。每個濃度做3個平板。〔結果分析〕

1、有較大片菌苔生長時，棄用。

2、選擇平均菌落數在30－300之間的平板。只有一個濃度符合此范圍時，以該平均菌落數為準；有兩個濃度的平板菌落數在30－300之間時，按兩者的總數平均決定，比值小于2，取平均，比值大于2則取較少的菌落總數。所有菌落數大于300，取稀釋度最高的平均菌落數乘稀釋倍數；所有菌落數均小于30，取稀釋度最低的平均菌落數乘稀釋倍數（即當所有菌落數均不在30－300之間時，此實驗的精確度要求下，可以最接近30或300的菌落數乘稀釋倍數）。

〔實驗討論〕

土壤中的菌數量在哪個數量級？你分離的微生物主要有哪些種類？為什么？

105數量級，主要是細菌，也有酵母。主要通過其菌落特征來判斷。細菌的菌落為濕潤，其正反面顏色一般一致，普遍比較小。酵母的菌落濕潤，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；而霉菌菌落特征：干燥，正反面及中央與邊緣不一致；大而疏松。

實驗七 細菌鑒定中常用的生理生化反應

〔目的要求〕了解細菌生理生化反應原理，掌握細菌鑒定中常用的生理生化反應方法；通過對不同細菌對不同含碳、氮化合物的分解利用情況，了解基代謝多樣性；學習不同培養基基中的不同生長現象及其代謝產物在鑒別細菌中的意義。

〔實驗原理〕各種細菌所具有的酶系統不盡相同，對營養基質的分解能力也不一樣，因而代謝產物存在差別。細菌的這種代謝方式可供鑒別細菌之用。用生理生化試驗的方法檢測細菌對各種基質的代謝作用及其代謝產物，從而鑒別細菌的種屬，稱為細菌的生理生化反應。有些細菌能發酵葡萄糖，而不能分解乳糖；有些細菌能分解某種糖產生有機酸和氣體；有的細菌則只產酸不產氣。在配制培養基時預先加入溴甲酚紫（ｐH4.4紅色～ｐH6.2黃色），當發酵產酸時，培養基由紫色變黃，氣體的產生則可由試管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來判斷。大腸桿菌不產生丁二醇，V.P.試驗為陰性。其進行混合酸發酵，故甲基紅試驗為陽性。產氣桿菌則進行丁二醇發酵，V.P試驗為陽性，甲基紅試驗為陰性。

〔材料用具〕E.coli，變形桿菌，枯草芽孢桿菌，產氣桿菌，糞水中分離的未知菌種斜面，糖發酵培養基；超凈工作臺，恒溫培養箱，試管，移液管，杜氏小管。甲基紅試劑、V.P.試劑。

〔實驗步驟〕各取4支相應的培養基，標記好發酵培養基的名稱、所接菌種名及組號，1支接大腸桿菌，1支接變形桿菌，1支接未知斜面菌種，1支不接。

1、糖發酵試驗

2、甲基紅試驗

3、V.P.試驗

接種后37℃分別培養24h、48h、48h，觀察實驗結果，將實驗結果填入表中。〔實驗結果〕

表7－1 實驗結果 編號 大腸桿菌 枯草芽孢桿菌 產氣桿菌 未知菌 CK 葡萄糖發酵

乳糖發酵

甲基紅實驗

V.P.試驗

〔實驗討論〕

如：討論通過哪些生理生化反應可以區分大腸桿菌，產氣桿菌？

大腸桿菌不產生丁二醇，V.P.試驗為陰性。其進行混合酸發酵，故甲基紅試驗為陽性。產氣桿菌則進行丁二醇發酵，V.P試驗為陽性，甲基紅試驗為陰性。

實驗八（綜合實驗）化能異養微生物的分離與純化 [目的要求]

1．掌握細菌、放線菌、酵母苗和霉菌稀釋分離、劃線分離等技術。

2．學習從樣品中分離、純化出所需菌株。

3．學習并掌握平板傾注法和斜面接種技術，了解培養細菌、放線菌、酵母菌及霉菌四大類微生物的培養條件和培養時間。

4．學習習近平板菌落計數法。[基本原理]

土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發現有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數量不同，一般土壤中細菌數量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機質豐富的土壤中放線苗數量較多；酵母菌在一般土壤中的數量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數量多些。本次實驗從土壤中分離細菌、放線菌和霉菌；白面曲(發面用的引子)或酒曲或果園土中分離酵母菌。

為了分離和確保獲得某種微生物的單苗落，首先要考慮制備不同稀釋度的苗懸液。各類菌的稀釋度因菌源、采集樣品時的季節、氣溫等條件而異。其次，應考慮各類微生物的不同特性，避免樣品中各類微生物的相互干擾。細菌或放線苗在中性或微堿性環境較多．但細菌比放線萌生長快，分離放線菌時，一般在制備土壤稀釋液時添加10%酚或在分離培養基中加相應的抗生素以抑制細菌和霉菌(如加鏈霉素25-50μg mL以抑制細菌；添加制霉菌素50μg／mL或多菌靈30μ／mL以抑制霉菌)；酵母苗和霉菌都喜酸性環境，一般酵母菌只能以糖為碳源，不能直接利用淀粉，酵母菌在pH 5時生長極快。而細菌生長適宜的酸堿度為pH7，所以分離酵母菌時只要選擇好適宜的培養基和pH，可降低細菌增殖率，霉菌生長慢，也不干擾酵母菌分離。若分離霉菌，需降低細菌增殖率，一般培養基臨用前須添加滅過菌的乳酸或鏈霉素。為了防止菌絲蔓延干擾菌落計數，分離霉菌時常在培養基中加入化學抑制劑。要想獲得某種微生物的純培養，還需提供有利于該微生物生長繁殖的最適培養基及培養條件。四大類微生物的分離培養基、培養溫度、培養時間見表所示。[材料與用品] 1.菌源 選定采土地點舌。鏟去表土層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g，裝入已滅過菌的牛皮紙袋內．封好袋口，并記錄取樣地點、環境及日期。土樣采集后應及時分離，凡不能立即分離的樣品，應保存在低溫、干燥條件下，盡量減少其中菌種的變化。從面曲中分離酵母菌。也可用酒曲等替代。

2．培養基 肉膏蛋白胨培養基、馬丁氏培養基、高氏合成一號培養基、豆芽汁葡萄糖培養基(制平板和斜面，3．無菌水或無菌生理鹽水 配制生理鹽水．分裝于250mL錐形瓶中，每瓶裝99mL(或95mL分離霉菌用)，每瓶內裝10粒玻璃珠；分裝試管，每管裝約4.5-5mL(不超過試管高度的1／5)。

4．其他試劑與用品 無菌培養皿、無菌移液管、無菌玻璃涂棒(刮刀)、稱量紙、藥匙、洗耳球、10％酚溶液。[實驗步驟]

1．稀釋分離法平板分離菌有傾注法和涂布法兩種。本次實驗分離細菌、放線菌、霉菌時采用傾注法，酵母菌分離采用涂布法：

(1)細菌的分離 1)制備土壤稀釋液 稱取土樣1 g，在火焰旁加入盛有99mL并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．振蕩10一20min，使土樣中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成10-2稀釋度的土壤稀釋液。然后按10倍稀釋法進行稀釋分離，以制備10-2稀釋度為例，具體操作過程如下：取4.5 mL無菌水試管6支，按10-2......10-7順序編號，放置在試管架上。取無菌移液管一支，從移液管包裝紙套 中間撕口，將包裝紙套分成上、下兩段，去除下段包裝紙套，在移液管上端管口裝橡皮頭，取出下段移液管紙套放置桌面，以右手拇指、食指、中指拿住移液管卜端的橡皮頭，將吸液端口及移液管外部表面迅速通過火焰2～3次，殺滅撕紙套時可能污染的雜菌，切忌不要用手指去觸摸移液管吸液端口及外部。左手持錐形瓶底，以右手掌及小指、無名指夾住錐形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞(棉塞夾在于上，不能亂放在桌上)，將lmL移液管的吸液端伸進振蕩混勻的錐形瓶土壤懸液底部，用手指輕按橡皮頭，在錐形瓶內反復吹吸二次(吹吸時注意第二次液面要高于第一次吹吸 的液面)，然后準確吸取0.5mL10-2土壤稀釋液，右手將棉塞插回錐形瓶上，左手放下錐形瓶，換持一支盛有4.5mL無菌水的試管，依前法在火焰旁拔除試管帽(或棉塞)，將0.5m10-2土壤稀釋液注入4.5m1無菌水試管內，制成l0-3的土壤稀 釋液，將此移液管通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙套內，以備再用。另取一只未用過的無菌移液管在試管內反復吹吸三次，然后取出移液管，并將其通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙套內，以備再用。蓋上試管帽。右手持10-3稀釋液試管在左手十敲打20～30次。混勻土壤稀釋液。再從紙套取出原來的移液管，插入稀釋液已搖勻的試管內，再吹吸三次，然后準確吸出o.5mL 10-3的稀釋液。置第二支裝有4.5 m1無菌水試管，制成10-4：土壤稀釋液。用同法再制成 10-

5、10-

6、10一7的土壤稀釋液(為避免稀釋過程誤差，進行微生物計數時，最好每一個稀釋度更換一支移液管)：最后用的移液管重新放人紙套內。待滅菌后，再洗刷或將用過的移液管放在廢棄物筒中．用3%-5%來蘇爾浸泡l h后再滅菌洗滌。2)傾注法分離 取無菌培養皿6-9套，分別于培養皿底面按稀釋度編號。稀釋完畢后，用原來的移液管從菌液濃度最小的10-7土壤稀釋液開始吸取1mL稀釋液，按無菌操作技術加到和應編號的無菌培養皿內。再依同方法分別吸取1mLl0-

6、10-5的土壤稀釋液，各加到和應編號為10-

6、10-5的無菌培養皿內。將已滅菌的肉膏蛋白胨固體培養基融化，待冷卻至45-50度左右，分別傾入到已盛有I0-

5、10-

6、10-7土壤稀釋液的無菌培養皿內。注意：溫度過高易將菌燙死，且皿蓋上冷凝水太多，會影響分離效果；低于45％培養基易凝固，平板易出現凝塊、高低不平。傾倒培養基時注意無菌操作，要在火焰旁進行。左手拿培養皿，右手拿錐形瓶底部，左手同時用小指和手掌將棉塞拔開，灼燒瓶口．用左手大拇指將培養皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入培養基約12-15 mL，將培養皿在桌面上輕輕轉動，使稀釋的菌懸液與融化的瓊脂培養基混合均勻．混勻后靜置桌上，待凝。3)培養 待平板完全冷凝后，將平扳倒置于35-37℃恒溫培養箱中，培養24～48h觀察結果。

(2)放線菌的分離

1)制備土壤稀釋液 稱取土樣l g，加入盛有99m1并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．并加人lo滴10％酚溶液(抑制細菌生長，可用l％的重鉻酸鉀溶液代替lo%酚溶液．效果更好)。振蕩后靜置5min，即成10-2土壤稀釋液。

2)傾注法分離 按前法將土壤稀釋液分別稀釋為10-

3、10-

4、10-5三個稀釋度，然后用無菌移液管依次分別吸取lmL 10-

5、l0-

4、10-3土壤稀釋液于對應編號的無菌培養皿內，用高氏合成1號培養基依前法傾倒平板，每個稀釋度做2～3個平行培養皿。理鹽水內，振蕩20min，即成10-2的面曲稀釋液。若選用果園上樣，也依前法稱取土樣，制成10-2壤稀釋液。3)涂布法分離 依前法向無菌培養皿中傾倒已融化并冷卻至45-50℃的豆芽汁葡萄糖培養基，待平板冷凝后，用無菌移液管分別吸取上述l0-

6、l0-

5、10-4三個稀釋度苗懸液0.1mL，依次滴加于對應編號已制備好的豆芽汁葡萄糖培養基平板上。右手持無菌玻璃涂棒，左手拿培養皿，并用拇指將皿蓋打開一縫，在火焰旁右手持玻璃涂棒于培養皿平板表面將菌液自平板中央均勻向四周涂布擴散，切忌用力過猛將菌液直接推向平板邊緣或將培養基劃破。4)培養 接種后，將平板倒置于30℃恒溫培養箱中，培養2～3 d觀察結果。

2劃線分離法 菌種被其他雜苗污染時或混合菌懸液常用劃線法進行純種分離。此法將蘸有混合菌懸液的接種環在平板表面多方向連續劃線，使混雜的微生物細胞在平板表面分散，經培養得到分散成由單個微生物細胞繁殖而成的菌落，從而達到純化目的。平板制作方法如前所述。但劃線分離的培養基必須事先傾倒好，需充分冷凝待平板稍于后方可使用；為便于劃線，一般培養基不宜太薄，每皿約傾倒20mL培養基，培養基應厚薄均勻，平板表面光滑。劃線分離主要有連續劃線法和分區劃線法兩種。(1)連續劃線法 連續劃線法是從平板邊緣一點開始，連續作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環上的菌。以無菌操作用接種環直接取平板上待分離純化的菌落。將菌種點種在平板邊緣一處，取出接種，燒去多余菌體。將接種環再次通過稍打開皿蓋的縫隙伸人平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環冷卻．然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。劃線時平板面與接種環面成30～40°的角度，以手腕力量在平板表面輕巧滑動劃線。接種環不要嵌入培養基內劃破培養基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊。劃線完畢，關上皿蓋。灼燒接種環，待冷卻后放置接種架上。培養皿倒置于適溫的恒溫培養箱內培養(以免培養過程中皿蓋冷凝水滴下，沖散巳分離的菌落)。培養后在劃線甲板上觀察沿劃線處長出的菌落形態，涂片鏡檢為純種后再接種斜面。(2)分區劃線法平板分四區，故又稱四分區劃線法。劃線時每次將平板轉動60一70°劃線，每換一次角度，應將接種環上的菌燒死后，再在上次劃線末尾處繼續劃線。取菌、接種、培養方法與連 續劃線法相似。分區劃線法劃線分離的平板分4個區，其中第四區是單菌落的主要分布區，故其劃線面積應最大。為防止第四區內劃線與l、2、3區線條和接觸，應使4區線條與l區線條和平行，這樣區與區間線條夾角最好保持120度左右。先將接種環沾取少量菌在平板1區劃3～5條平行線，取出接種環，左手關上皿蓋．將平板轉動60～70°，右手把接種環上多余苗體燒死，將燒紅的接種環在子板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線的苗體為菌源，由1區向2區作第二次早行劃線。第二次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60一70°，同樣依次在5、1區劃線。劃線完畢，灼燒接種環，關上皿蓋，同上法培養，在劃線區觀察單菌落。本次實驗在分離細菌的平板上選取單菌落。于肉膏蛋白胨平板上再次劃線分離，使菌進一步純化。劃線接種后的平板，倒置于30℃恒溫培養箱中培養24h后觀察結果。

3．微生物菌落計數(平板菌落計數法)含菌樣品的微生物經稀釋分離培養后，每一個活苗細胞可以在平板上繁殖形成一個肉眼可見的菌落。故可根據平板上菌落的數目．推算出每克含菌樣品中所含的活菌總數。每克菌樣品中微生物的活細胞數＝(同一稀釋度的3個平板上菌落平均數X稀釋倍數)/含菌樣品克數。一般由三個稀釋度計算出的每克含菌樣品中的總活菌數和同一稀釋度出現的 總活菌數均應很接近，不同稀釋度平板上出現的菌落數應呈規律性地減少。如相差較大，表示操作不精確。通常以第二個稀釋度的平板上出現50個左右菌落為好。也可用菌落計數器計數。

4．平板菌落形態及個體形態觀察 從不同平板上選擇不同類型菌落用肉眼觀察，區分細菌、放線菌、酵母茵和霉菌的菌落形態特征。并用接種環挑菌，看其與基質結合緊密程度。再用接種環挑取不同菌落制片，在顯微鏡下進行個體形態觀察。記錄所分離的含菌樣品中明顯不同的各類菌株的主要菌落特征和細胞形態。

5.分離純化菌株轉接斜面(斜面接種)在分離細菌、放線菌，酵母苗和霉菌的不同平板上選擇分離效果較好，認為已經純化的苗落各挑選一個用接種環接種斜面。將細菌接種于肉膏蛋白胨斜面，放線菌接種于高氏1號斜面，酵母菌和霉菌接種于豆芽汁葡萄糖斜面上。貼好標簽，在各自適宜的溫度下培養，培養后觀察是否為純種，記錄斜面培養條件及苗苔特征。置冰箱保藏。[實驗報告] 1.簡述分離微生物純種的原則及列出分離操作過程的關鍵無菌操作技術。2.四大類微生物的分離方法及培養條件

3.分離的微生物平板菌落計數結果

4.樣品中單菌落菌株的菌落培養特征與鏡檢形態 5.斜面培養條件及菌苔特征(包括純化結果)。

[思考題] 1.稀釋分離時．為什么要將已融化的瓊脂培養基冷卻到45～50℃左右才能傾入到裝有菌液的培養皿內? 2.劃線分離時為什么每次都要將接種環上多余的菌體燒掉?劃線時為何不能重疊? 1.3.在恒溫箱中培養微生物時為何培養皿均需倒置? 4.分離某類微生物時培養皿中出現其他類微生物，請說明原因。應該如何進一步分離和純化；經過-次分離的菌種是否皆為純種，若不純，應采用哪種分離方法最合適? 5.根據哪些菌落特征可區分細菌、放線苗、酵母菌與霉菌?它們的細胞結構表現在菌落形態上有什么聯系？

第三篇：微生物學實驗報告

微生物學實驗報告

實驗名稱：用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細胞質流動

一、實驗目的1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。

2.觀察高等植物的葉綠體在細胞質基質中的形態和分布

二、實驗原理

高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側面朝

向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆

蘚,其小葉內葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。

活細胞中的細胞質處于不斷的流動狀態，觀察細胞質的流動，可以用細胞質基質中的葉綠體的運動做為標志。

三、材料用具

蘚類的葉，新鮮的黑藻，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滴管，鑷子，刀片，培養皿，鉛筆

四、實驗過程（見書Ｐ30）

1．制作蘚類葉片的臨時裝片

2．用顯微鏡觀察葉綠體

3．制作黑藻葉片臨時裝片

4．用顯微鏡觀察細胞質流動

物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板

五、討論

1．細胞質基質中的葉綠體是否靜止不動，為什么？

2．葉綠體的形態和分布與葉綠體的功能有什么關系？

3．植物細胞的細胞質處于不斷的流動狀態，這對于活細胞完成生命活動有什么意義？

4．用鉛筆畫一個葉片細胞，標出葉綠體的大致流動方向。

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第四篇：食品微生物學總結

1、巴斯德、科赫、列文虎克和李斯特分別對微生物學的發展有哪些貢獻？ 巴斯德--主要貢獻：徹底否定了自然發生說證明發酵由微生物引起,發明巴氏消毒法,首次制成狂犬病疫苗

科赫—細菌學的奠基人,主要貢獻：建立了微生物研究基本技術，包括細菌的分離純化技術，培養基的設計、細菌染色技術。發現了許多病原菌，提出了科赫法則。

安東·列文虎克（1632~1723）—微生物學的先驅者,自制顯微鏡觀察到微生物。李斯特--提出手術中無菌操作的方法，建立了外科消毒術.弗來明—青霉素發現者,霉菌菌落周圍出現抑制細菌現象

2、微生物的分類單元有哪些？基本分類單元是什么？

種以上可依次分成7級：界、門、綱、目、科、屬、種，種是最基本的分類單位，每一分類單位之后可有亞門、亞綱、亞目、亞科.....概念：

肽聚糖：是由N－乙酰胞壁酸（NAM）和N－乙酰葡糖胺（NAG）以及短肽鏈（主要是四肽）組成的亞單位聚合而成的大分子聚合物。

伴孢晶體：少數芽孢桿菌在形成芽孢的同時，會在芽孢旁形成一個菱形、方形或不規則的堿溶性蛋白晶體稱為伴胞晶體（即δ內毒素）。

芽孢：某些細菌在其生長發育后期，在細胞內形成的一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量低、抗逆性強的休眠構造,稱芽孢。

菌落：在固體培養基上（內）以母細胞為中心的一堆肉眼可見的有一定形態、構造的子細胞的群體。

病毒粒子：成熟的或結構完整、有感染性的病毒個體

溫和噬菌體：在短時間內不能連續完成吸附、侵入、增值、成熟和裂解這五個階段而實現繁殖的噬菌體

噬菌斑：噬菌體侵染細菌細胞,導致寄主細胞溶解死亡.因而在瓊脂培養基表面形成的空斑

3、試述革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌肽聚糖單體構造差別。組成成分不同：

革蘭氏陽性菌：肽聚糖（基本結構），包括聚糖骨架，四肽側鏈，五肽交聯橋 磷壁酸（特殊成份），包括膜磷壁酸，壁磷壁酸 表面蛋白（特殊成分），包括SPA,M蛋白

革蘭氏陰性菌:肽聚糖（基本結構），包括聚糖骨架，四肽側鏈 外膜（特殊成分），包括脂蛋白，脂質雙層，脂多糖

4、細菌細胞的一般構造特殊構造各有哪些？（一般構造了解）

一般構造:所有細菌都有.包括：細胞壁、細胞膜、擬核、間體、細胞質、核糖體、顆粒狀內含物

特殊構造:并非所有細菌都有，只存在于某些細菌、甚至是某特定的生理階段 包括：鞭毛、菌毛、性菌毛、糖被和芽孢

5、霉菌的菌絲根據有無隔膜可分為幾類？各舉一例？霉菌的繁殖方式可分為哪幾類？分別可產生哪些孢子？

無隔菌絲 有隔菌絲 1）菌絲片段

2）孢子：無性孢子（孢囊孢子 ；分生孢子；節孢子；厚垣孢子）；性孢子（卵孢子 ；接合孢子 ；子囊孢子；擔孢子）

6、試比較毛霉、根霉、曲霉和青霉的異同。

7、病毒粒子包括哪些基本結構？并說明其化學組成 核衣殼（基本結構）：

1）核酸→基因組： DNA/RNA（雙股/單股）

2）衣殼→衣殼粒（形態亞單位）→多肽（結構亞單位）營養：

8、什么叫生長因子？包括哪幾類化合物？是否任何微生物都需要生長因子？如何滿足微生物對生長因子的要求？

生長因子：通常指那些微生物生長所必需而且需要量很小,但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機體需要的有機化合物。

包括維生素、生物堿、卟啉、甾醇、短鏈的分支或直鏈脂肪酸、氨基酸等

不是，需要在充足氮 碳源 水 無機鹽的條見下，有些不能生長，按微生物對生長因子的需要與否，可分為三種類型：

（1）生長因子自養型微生物

它們不需要從外界吸收任何生長因子

（2）生長因子異養型微生物

它們需要從外界吸收多種生長因子才能維持正常生長

（3）生長因子過量合成的微生物

少數微生物在其代謝活動中，能合成并大量分泌某種維生素等生長因子

9、簡述細胞膜運送營養物質的四種方式及其特點

1）單純擴散(simple diffusion or passive diffusion):又稱被動運送,指細胞膜在無載體蛋白參與下，單純依靠物理擴散方式讓營養物質被動通過的一種運輸方式。2）促進擴散(facilitated diffusion/transport)：指溶質在運送過程中，必須借助細胞膜上的底物特異載體蛋白的協助，但不消耗能量的一類擴散性運送方式。3）主動運送(Active transport)：指一類需要提供能量并通過細胞膜上特異性載體蛋白構象的變化，而使膜外環境中低濃度的溶質運入膜內的一種運送方式。是微生物吸收營養物質的主要方式。

4）基團移位(Group translocation)：指溶質在運送過程中既需特異性載體蛋白的參與，又需消耗能量，而且溶質在運送前后還會發生分子結構變化的一種運送方式。

10、常見的培養四大類微生物的培養基是什么？

細菌：牛肉膏蛋白胨培養基 放線菌：高氏一號培養基

霉菌：察氏合成培養基或 PDA(Potato-Dextrose-Agar)酵母菌：麥芽汁培養基 代謝相關概念

有氧呼吸：底物按常規方式脫氫后，脫下的氫經呼吸鏈傳遞，最終被外源分子氧接受（分子氧作為最終氫受體）的氧化過程。

無氧呼吸：又稱厭氧呼吸，指一類呼吸鏈末端的氫受體為外源無機氧化物（少數為有機氧化物）的生物氧化。這是一類在無氧條件下進行的、產能效率較低的特殊呼吸。

發酵：在生物氧化中發酵是指在無氧等外源氫受體的條件下，底物脫氫后所產生的還原力[H]不經過呼吸鏈傳遞而直接交給某一內源性中間代謝物接受，以實現底物水平磷酸化產能的一類生物氧化反應。生長：

11、什么是純培養？純培養如何獲得？

純培養：微生物學中把從一個細胞或一群相同的細胞經過培養繁殖而得到的后代,稱純培養（物）。

獲得純培養的方法 ：①液體稀釋法 ②傾注平板法 ③平板涂布法 ④平板劃線法 ⑤單細胞分離法 ⑥選擇培養法

12、什么是生長曲線？試說明制作單細胞微生物生長曲線的方法。單細胞微生物的典型生長曲線可分幾個時期？各有何特點？ 在生產上延長穩定期和縮短延滯期(lag phase)的措施有哪些？

定量描述液體培養基中微生物群體生長規律的實驗曲線，稱為生長曲線(Growth Curve)。制作：將少量的純種單細胞微生物接種到恒容積的液體培養基中，在適宜的條件下培養，每隔一定時間取樣，測定單位體積里的細胞數。以培養時間為橫坐標，以單位體積里的細胞數的對數值為縱坐標，繪制的曲線，即生長曲線。生長曲線分為四個階段：延滯期；對數期；穩定期；衰亡期。1）延滯期：指將少量微生物接種到新鮮培養液中后，在開始培養的一段時間內，因代謝系統適應新環境的需要，細胞數目不增加的一段時期。特點：①生長速率常數= 0 ②細胞體積增長,細胞內RNA、DNA含量增高。

④合成代謝活躍，核糖體、酶類和ATP合成加快，易產生各種誘導酶。⑤對外界不

2）對數期

指在生長曲線中，緊接著延滯期的一段細胞數按幾何級數增長的時期。

特點：①生長速率常數R最大，細胞每分裂一次（即繁殖一代）所需要的時間 ——代時或原生質增加一倍所需的倍增時間最短。②細胞進行平衡生長，菌體內各種成分最為均勻 ③酶系活躍，代謝旺盛。3）穩定期（stationary phase）又稱恒定期或最高生長期。

特點：①生長速率常數R=0，新增殖的細胞數與老細胞的死亡數幾乎相等，細胞

數目達到最高水平。

②細胞分裂速度下降，開始積累內含物，產芽孢的細菌開始產芽孢。③開始積累代謝產物。4）衰亡期（decline phase）

特點：①微生物死亡數超過新增殖數，活菌數急劇下降，出現“負生長”。②細胞出現多形態，大小不等，有時出現畸型。有的微生物在此期會進一步合成或釋放次生代謝物。芽孢菌的芽孢開始釋放。

③因菌體本身產生的酶及代謝產物的作用，使菌體死亡、自溶等，發生自溶的菌生長曲線表現為向下跌落的趨勢。良條件反應敏感，如氯化鈉濃度、溫度、抗生素等理化因素。

延長穩定期措施：①補充營養物質（補料）；②調pH ；③調整溫度等。縮短延滯期措施：加大接種量、用對數期的作為菌種、用相應的培養基

13、根據微生物生長的最適溫度不同，可以將微生物分為幾種類型？

根據微生物生長 的溫度范圍，將微生物劃分為三個類型： 1）低溫型微生物（嗜冷微生物）2）中溫型微生物（嗜溫微生物）3）高溫型微生物（嗜熱微生物）

14、細菌和真菌常用的培養溫度是多少？生長的適宜pH范圍？ 光合細菌生長的最適條件是①溫度15～20℃時，光照30000～50000lx，培養基pH值為7.0；②溫度25～30℃時，光照為3000～5000lx，培養基的pH值為7.0 培養真菌最適pH為4.0～6.0最適溫度為22～28℃,某些深部感染的真菌則在37℃中生長最好。培養真菌需要較高的溫度與氧氣。

光復活作用：把經紫外線照射后的微生物立即暴露于可見光下時，可明顯降低其死亡率的現象，稱為光復活作用。

15、簡述菌種保藏原理并說明幾種常用菌種保藏方法

菌種保藏原理：首先要挑選典型菌種或典型培養物的優良純種（最好是分生孢子、芽胞等休眠體）；其次是要創造一個有利于它們長期休眠的良好環境條件，如干燥、低溫、缺氧、避光、缺營養以及添加保護劑等。常用菌種保藏方法：冰箱保藏法（斜面）；冰箱保藏法（半固體）；石蠟油封藏法；甘油懸液保藏法；沙土保藏法；冷凍干燥法；液氮保藏法。生態：

共生：兩種生物共居在一起，相互分工合作，相依為命，以至達到難分難解、合二為一的極其緊密的一種相互關系。

拮抗：又稱抗生，指由某種生物所產生的特定代謝產物可抑制他種生物的生長發育甚至殺死它們的一種相互關系。食品微生物部分：

概念：大腸菌群：是指在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌群主要包括埃希氏菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸桿菌屬等細菌。

食物中毒：指經口攝入了含有生物性、化學性有毒有害物質的食品或者把有毒有害物質當作食品攝入后出現的非傳染性的急性、亞急性疾病，稱為食物中毒 商業滅菌：也可以叫做商業無菌，指食品經過殺菌處理后，按照所規定的微生物檢驗方法，在所檢食品中無活的微生物檢出或僅能檢出合理范圍內的非病原菌，是一個標準。

舉出酸奶、納豆菌、啤酒、葡萄酒、白酒、醬油、腐乳、丹貝生產中常用的生產菌種及其作用。

醬油是以蛋白質原料和淀粉質原料為主，經米曲霉等多種微生物共同發酵釀制而成。

丹貝：少孢根霉丹貝又稱天培（Tempeh），是印度尼西亞的傳統大豆發酵制品。面包是以面粉為主要原料，以糖、油脂和雞蛋等為輔料利用酵母菌發酵生產出來的一種發酵食品

啤酒是以優質大麥芽為主要原料，酒花、大米或玉米等為輔料，經過制麥、糖化、啤酒酵母發酵等工序釀制而成的一種含有CO2、低酒精濃度和多種營養成分的飲料酒

葡萄酒：有釀酒酵母、葡萄酒有孢漢遜酵母（Hanseniaspora vineae）、葡萄汁有孢漢遜酵母(H.uvarum)等。釀酒酵母是主要的菌種，在健壯的葡萄上含量約為50 CFU/g 白酒：大曲白酒:用小麥、大麥等原料發酵制成。大曲中微生物主要是曲霉和酵母菌及少量細菌。小曲白酒:用米粉和米糠加中藥發酵制成。麩曲白酒:用麩皮酒糟制成散狀曲經發酵而成 腐乳：霉菌型腐乳有腐乳毛霉、魯氏毛霉、總狀毛霉、華根霉(Rhizopus chinensis)等。細菌型腐乳菌種微球菌屬（克東腐乳）和枯草芽孢桿菌（武漢腐乳）納豆菌:屬枯草芽孢桿菌納豆菌亞種

普通酸奶：主要是嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌。

嗜酸菌乳：主要用嗜酸乳桿菌或者嗜酸乳桿菌和其它乳酸菌的混合菌種。雙歧桿菌乳：主要是雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌或嗜酸乳桿菌等的混合菌種。

益生菌乳：多數是由多菌種共發酵，常含有雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌或瑞士乳桿菌等

17、什么是水活度值？大多數細菌、酵母菌和霉菌生長的最低水活度？

水活度值是指食品在密閉容器內水的蒸汽壓（P）與同溫同壓下的純水蒸汽壓（P0）之比值

微生物類群

最低Aw值范圍

微生物類群

最低Aw值

大多數細菌

0.99~0.90

嗜鹽性細菌

0.75

大多數酵母菌

0.94~0.88

耐高滲酵母

0.60 大多數霉菌

0.94~0.73

干性霉菌

0.65

19、一般從哪幾個方面進行食品腐敗變質的鑒定？

1、感官鑒定：主要檢驗食品的色澤、氣味、口味、狀態等。

2、化學鑒定：含氮量高的食品：常測定揮發性鹽基總氮、三甲胺、組胺等。碳水化合物豐富的食品：常測定pH、有機酸含量等。

3、物理指標：測定食品浸出物的量、浸出液的電導度、折光率、冰點下降、黏度上升等指標。

4、微生物檢驗：常測定細菌總數、大腸菌群的近似數和霉菌等。一般食品中活菌數達到108cfu.g-1時，則可認為食品處于初期腐敗階段。20、食品的微生物污染途徑有哪些？

1、內源性污染

食品原料本身帶有微生物。

2、外源性污染

通過水、空氣污染、人及動物、加工設備及包裝材料和土壤污染。

21、食品衛生標準中的微生物指標有哪些？ 食品中微生物指標的常見檢驗項目如下：菌落總數、大腸菌群計數、大腸桿菌計數、腸道致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌）、副溶血性弧菌、單核細胞增生李斯特氏菌、雙岐桿菌、空腸彎曲菌、霉菌計數和酵母計數。

22、簡述大腸菌群概念以及食品中大腸菌群最大可能數的檢驗意義。

大腸菌群（coliforms）是指在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌群主要包括埃希氏菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸桿菌屬等細菌。大腸菌群被許多國家用作食品衛生質量評價的指標菌。檢測大腸菌群的食品衛生意義：它可作為糞便污染食品的指標菌，大腸菌群數的高低，表明了食品被糞便污染的程度和對人體健康危害性的大小。它可以作為腸道致病菌污染食品的指標菌，大腸菌群與腸道致病菌有相同來源，在外界環境中生存時間也與主要腸道致病菌相近。

23、細菌性食物中毒的種類，致病性細菌舉例。按發病機理可分為三型：

①感染型中毒。細菌在食品中大量繁殖，攝取了這種帶有大量活菌的食品，腸道粘膜受感染而發病。沙門氏菌、副溶血性弧菌、變形桿菌、致病性大腸桿菌等皆可引起此型。

②毒素型中毒。由細菌在食品中繁殖時產生的毒素引起的中毒，攝入的食品中可以沒有原來產毒的活菌。如肉毒中毒、葡萄球菌腸毒素中毒。

③過敏型。由于細菌的作用，食品中產生大量的有毒胺（如組胺）而使人產生過敏樣癥狀的食物中毒，引起此型中毒的食品為不新鮮或腐敗的魚。含組胺較多的魚為鯖科的鮐魚，科的藍圓和竹莢魚，金槍魚科的金槍魚、扁舵鰹、鮪魚和鯡科的沙丁魚。這些魚青皮紅肉，即魚皮為黑青色，而肉色較紅，因其中血管系統較發達，含血紅蛋白較多。引起此型中毒的細菌是含組胺酸脫羧酸酶的細菌，其中酶活性最強的為摩根氏變形桿菌、組胺無色桿菌和溶血性大腸桿菌。

細菌性食物中毒可按致病菌分類，分為沙門氏菌食物中毒、副溶血性弧菌食物中毒、肉毒梭狀芽孢桿菌食物中毒等。

24、病原菌特性（金黃）。

金黃色葡萄球菌致病菌株可產生多種毒素和酶，致病性強。

產生的毒素和酶：主要有溶血毒素、殺白血球毒素、凝固酶、溶纖維蛋白酶、透明質酸酶、耐熱核酸酶、剝脫性毒素、腸毒素等。

第五篇：食品微生物學實驗題目

食品微生物學實驗（名詞解釋選一題，簡答題選三題）

一．名詞解釋

1.細菌總數

2.大腸菌群

3.高壓蒸汽滅菌

4.乳酸菌

5.芽孢

二．簡答題

1.簡述革蘭氏染色原理

2.簡述培養基配置步驟

3.影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有哪些？

4.革蘭氏染色分為那幾步？其關鍵是哪一步？為什么？

5.MRS培養基中加入CaCO3的作用是什么？

6.為什么檢測乳酸菌不用牛肉膏蛋白胨培養基？

7.牛肉膏蛋白胨培養基中各成分分別起什么作用？

8.細菌細胞特殊結構有哪些？分別起什么作用？

9.簡述顯微鏡使用步驟

10.高壓蒸汽鍋滅菌與干熱空氣滅菌相比有什么優點？為什么？

11.比較平板計數法和顯微鏡直接計數法的優缺點

12.高壓蒸汽鍋滅菌開始之前為什么要將鍋內的冷空氣排盡？滅菌后為什么要待壓力表指針降到0時，才能打開排氣閥，開蓋取物。

13.鮮乳中存在霉毒素會對乳酸菌生長起什么作用？

14.普通酸乳制作中常加入乳酸菌有哪些？比例如何？二者關系如何？

15.用作消毒劑的乙醇濃度是多少？請說明用此濃度的乙醇的原因和機理。