第一篇：腫瘤檢測樣本

1、新鮮組織(包括手術和活檢組織)腫瘤新鮮冷凍材料可提取出最高品質的DNA、RNA。在手術現場取樣的情況也比較多，但需要在顯微鏡下確認腫瘤細胞含量。周圍炎癥嚴重的腫瘤、黏液產生過高的腫瘤、病變中心廣泛纖維化的腫瘤細胞不能采集，以免產生假陰性結果。切割后取其中一半，并利用另一半切面制作組織標本，然后進行確認。

手術切除的組織樣本理想的保存方法是迅速置于液氮中，然后保存于液氮罐或-80℃冰箱，這一過程應在手術樣本離體后30分鐘內完成。由于組織樣本通常需先進行病理學分析，在分析完成后應盡早將組織樣本置于穩定劑中，避免核酸降解。

2、石蠟包埋組織（formalin-fixed paraffin-embedded，FFPE）

10%中性福爾馬林固定手術切除樣本，按病理學操作規范進行取材。制作石蠟切片時，切取5片連續切片，其中1片進行HE染色，確認腫瘤細胞的含量。在高靈敏度檢測方法中，可考慮使用活檢標本。

DNA容易受固定的影響，長時間（1周以上）浸泡在福爾馬林中的樣本的DNA會被片段化，不能檢出突變。活檢材料的固定時間一般是24小時，對于穿刺等活檢樣本，固定時間控制在6~24小時為佳。

3、胸腹水等細胞學樣本

用胸腹水中的腫瘤細胞用于基因檢測時，必須確認腫瘤細胞，穿刺獲得胸腹水樣本提交給細胞病理檢查之后，剩余液體冷藏/冷凍保存，也可在含有細胞成分的離心沉淀中加入含有蛋白質變性劑的緩沖液（AL緩沖液，Qiagen公司）等室溫保存。由于細胞學樣本的腫瘤細胞含量較低，因此必須使用高靈敏度檢測方法。

4、血漿樣本

循環DNA(circulating free DNA，cfDNA)是存在于血漿中的游離DNA，腫瘤來源的DNA占血漿游離DNA的比例在不同腫瘤及病例中相差懸殊（0.01~93%），從而限制了外周血在腫瘤分子檢測時的應用。目前已有多篇文獻證實可利用從血漿游離DNA檢出突變，但需要使用ARMS法等靈敏度非常高的檢測方法。

采集外周血提取血漿游離DNA進行檢測，取樣時應使用一次性密閉EDTA抗凝真空采血管，采集6~10ml全血，冷藏運輸，6小時內分離血漿，提取游離DNA，保存到-80℃冰箱中，并避免反復凍融。如外周血需長時間運輸，建議用商品化的游離DNA樣本保存管，在常溫條件下，cfDNA在全血中可穩定保存7天。

第二篇：如何檢測腫瘤轉移

如何檢測腫瘤轉移

腫瘤細胞一旦獲得某些遺傳突變就會發生轉移，這些突變可能使細胞在異質環境中更加頑強——如當乳腺細胞轉移到骨骼中時，或使細胞更易逃脫原發腫瘤，涌向血流中時更易幸存下來，但要檢查出這種轉移并不容易醫`學教育網搜集整理。

近年來，研究人員在監測腫瘤轉移方面獲得了許多成果，比如來自德國慕尼黑大學(Ludwig

Maximilians University)的研究人員就利用一種多光子激光掃描顯微鏡(multiphoton laser scanning microscopy)觀察到了大腦中癌細胞轉移建立的過程，這對于檢測腫瘤轉移主要重要的意義。

多光子激光掃描顯微技術在生物及醫學成像，單分子探測，三維信息存儲，微加工等領域得到廣泛應用，其技術原理主要是在激光照射下，基態熒光分子或原子吸收一個光子后成為激發態，隨后又弛豫到某一基態，同時以光子形式釋放能量而發出熒光。多光子共焦激光掃描顯微鏡已延伸到各個研究和應用領域，它能對處在自然狀態下的樣品進行三維無損觀察，并能提高系統的分辨率和信噪比，利用多光子激發后材料性質的變化，還可以實現三維高度數據存儲和三維任意方向的微細加工。

研究人員利用這種技術實時觀察到了轉移過程形成的每個步驟。他們還能在幾分鐘到幾個月的時間里，跟蹤小鼠大腦深處血管中單個轉移癌細胞的命運。而且研究人員還確立出一整套的關鍵性步驟：在血管分枝處捕捉癌細胞、退出血管、持續聯結細胞和毛細胞，最后，在血管周圍轉移癌細胞。在活體中觀察到大腦癌細胞轉移形成的過程，將有助于科學家們深入了解癌細胞的發展過程，并確立出相應的治療方法。另外一組研究人員研發了納米金球生物檢測平臺，只需一滴血與幾分鐘，就能檢測腫瘤細胞轉移的可能性。這一檢測平臺具有檢測時間短、靈敏度高、成本低、檢測簡便等優點，未來可發展像是居家式血糖檢測之類的生醫檢測產品。

這一檢測平臺的基礎是一種基質金屬蛋白酶，這種蛋白酶會影響腫瘤細胞的形成與轉移，因此血液中這類酶活性的變化可成為檢測癌細胞的重要依據之一。目前常用于基質金屬蛋白酶活性分析的酶譜分析法，分析時間長且靈敏度低，所以僅適用在實驗室或醫院中檢測醫`學教育網搜集整理。研究人員希望利用納米金球建構一個新式的光學生物檢測平臺來測定血液中基質金屬蛋白酶活性，由于納米金球具球狀，表面積大，可以大幅提升檢測的敏感度與檢測底限。

最近日本的科學家還開發出了一種乳腺癌和大腸癌腫瘤轉移的新方法，他們在為癌癥患者進行手術時，切除一部分淋巴結，將其磨碎后涂上試劑，檢查癌細胞標志物：細胞角蛋白19(CYFRA21-1)的含量。這樣短時間內就能檢查出乳腺癌和大腸癌的癌細胞是否轉移到了淋巴組織。

利用這一技術，在手術過程中就能檢查出癌細胞向淋巴轉移的程度，如果發現了轉移，能夠當場處理。由于無需日后再次手術，患者的負擔大幅減輕。

癌癥的早期診斷對癌癥患者來說意味著存活機會的增加，但不幸的是癌癥的早期診斷有時是非常困難的事，因此使許多病人錯過了最佳的治療時間。近期國內的研究人員獲得了癌癥早期診斷的新成果，詳情見中科院博導多篇文章逐步解析癌癥早期檢測方法。

第三篇：腫瘤標記物檢測

腫瘤標記物檢測及臨床意義

腫瘤標志物是腫瘤細胞本身存在或分泌的特異性物質，應具備以下一些特征：必須由惡性腫瘤細胞產生，并可在血液、組織液、分泌液或腫瘤組織中測出；不應該存在于正常組織和良性疾病中；某一腫瘤的腫瘤標志物應該在該腫瘤的大多數患者中檢測出來；臨床上尚無明確腫瘤證據之前最好能測出；腫瘤標志物的量最好能反映腫瘤的大小；在一定程度上能有助于估計治療效果、預測腫瘤的復發和轉移。理想的腫瘤標志物應符合上述各項特征。然而，實際上凍存在絕對理想的腫瘤標志物。現今所知的腫瘤標志物中，絕大多數不但存在于惡性腫瘤中，而且也存在于良性腫瘤、胚胎組織，甚至正常組織中。因此，這些腫瘤標志物并非惡性腫瘤的特異性產物，但在惡性腫瘤患者中明顯增多。故有人將腫瘤標志物稱為腫瘤相關抗原。

腫瘤標志物可以分成以下幾大類：腫瘤胚胎性抗原，如甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）；異位激素（ACTH），血清鐵蛋白（Fer/SF），血B2微球蛋白（B2-MG），神經元特異性烯醇化酶（NSE），細胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）,前列腺酸性磷酸酶（PAP）,總前列腺特異性抗原（TPSA），游離前列腺特異性抗原（FPSA），EB病毒抗體（EB-IGM）,糖類抗,CA-50）,糖類抗原（CA-72-4），糖類抗原（CA-19-9），糖類抗原(CA24-2),糖類抗原（CA-125）,糖類抗原（CA15-3），各項腫瘤標記物都有它的臨床意義。

1.AFP原發性肝癌最敏感、最特異的指標，適用于大規模普查，如果成人血AFP值升高，則表示有患肝癌的可能AFP含量顯著升高一般提示原發性肝細胞癌，但陰性并不能排除原發性肝癌。AFP水平在一定程度上反應腫瘤的大小，其動態變化與病情有一定的關系，是顯示治療效果和預后判斷的一項敏感指標。AFP值異常高者一般提示預后不佳，其含量上升則提示病情惡化。通常手術切除肝癌后二個月，AFP值應降至20ng/ml以下，若降的不多或降而復升，提示切除不徹底或有復發、轉移的可能。在轉移性肝癌中，AFP值一般低于350-400ng/ml。正常參考值0-15ng/ml

2．癌胚抗原（CEA）

在正常成人的血液中CEA很難測出。CEA是一種重要的腫瘤相關抗原，70~90%的結腸腺癌患者CEA高度陽性，在其它惡性腫瘤中的陽性率順序為胃癌（60~90％）、胰腺癌（70~80％）、小腸腺癌（60~83％）、肺癌（56~80％）、肝癌（62~75％）、乳腺癌（40~68％）、泌尿系癌腫（31~46％）。胃液（胃癌）、唾液（口腔癌、鼻咽癌）以及胸腹水（肺癌、肝癌）中CEA的陽性檢測率更高，因為這些腫瘤“浸泡液”中的CEA可先于血中存在。CEA含量與腫瘤大小、有無轉移存在一定關系，當發生肝轉移時，CEA的升高尤為明顯。CEA測定主要用于指導各種腫瘤的治療及隨訪，對腫瘤患者血液或其他體液中的CEA濃度進行連續觀察，能對病情判斷、預后及療效觀察提供重要的依據。CEA的檢測對腫

瘤術后復發的敏感度極高，可達80%以上，往往早于臨床、病理檢查及X光檢查。

3．癌抗原125（CA125）

CA125是卵巢癌和子宮內膜癌的首選標志物，如果以65U/ml為陽性界限，Ⅲ-Ⅳ期癌變準確率可達100%。CA125迄今為止是用于卵巢癌的早期診斷、療效觀察、預后判斷、監測復發及轉移的最重要指標。CA125測定和盆腔檢查的結合可提高試驗的特異性。對輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、乳腺癌和間皮細胞癌診斷的符合率也很高，良性病變陽性率僅2%。CA125水平的升高是女性生殖系腫瘤復發的信號。正常參考值：0.1～35 U/ml。

4．癌抗原15-3（CA15-3）

CA15-3是乳腺癌的最重要的特異性標志物。30%-50%的乳腺癌患者的CA15-3明顯升高，其含量的變化與治療效果密切相關，是乳腺癌患者診斷和監測術后復發、觀察療效的最佳指標。正常參考值：0.1～25 U/ml

5．癌抗原19-9（CA19-9）

CA19-9是胰腺癌，胃癌，結、直腸癌、膽囊癌的相關標志物，大量研究證明CA19-9濃度與這些腫瘤大小有關，是至今報道的對胰腺癌敏感性最高的標志物。胰腺癌患者85%-95%為陽性，CA19-9測定有助于胰腺癌的鑒別診斷和病情監測。正常參考值：0.1～27 U/ml

6．癌抗原72-4（CA72-4）

CA72-4是目前診斷胃癌的最佳腫瘤標志物之一，對胃癌具有較高的特異性，其敏感性可達28-80%，若與CA19-9及CEA聯合檢測可以監測70％以上的胃癌。

CA72-4對其他胃腸道癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌也有不同程度的檢出率。CA72-4與CA125聯合檢測，作為診斷原發性及復發性卵巢腫瘤的標志，特異性可達100%。

正常參考值：0.1～7 U/ml

CA242是一種新的腫瘤相關抗原，當消化道發生腫瘤時，其含量升高

CEA與CA242聯合檢測可提高敏感性，與單獨采用CEA檢測相比，對結腸癌可提高40-70%，對直腸癌提高達到47-62%。CEA與CA242無相關性，具有獨立的診斷價值，且二者之間具有互補性。

正常參考值：0～17 U/ml

CA50是胰腺和結、直腸癌的標志物，是最常用的糖類抗原腫瘤標志物，因其廣

泛存在胰腺、膽囊、肝、胃、結直腸、膀胱、子宮，它的腫瘤識別譜比CA19-9廣，因此它又是一種普遍的腫瘤標志相關抗原，而不是特指某個器官的腫瘤標志物。

另有報導萎縮性胃炎患者胃液CA50的濃度與正常人比較有顯著改變。通常認為萎縮性胃炎是癌前高危期，因此CA50可作為癌前診斷指標之一。在胰腺炎、結腸炎和肺炎發病時，CA50也會升高，但隨炎癥消除而下降。

9．非小細胞肺癌相關抗原（CYFRA 21-1）

CYFRA 21-1是非小細胞肺癌最有價值的血清腫瘤標志物，尤其對鱗狀細胞癌患者的早期診斷、療效觀察、預后監測有重要意義

CYFRA 21-1與良性肺部疾病（肺炎、結核、慢性支氣管炎、支氣管哮喘、肺氣腫）的鑒別特異性比較好。

正常參考值：0.10～4 ng/ml

10．小細胞肺癌相關抗原（神經元特異性烯醇化酶，NSE）

NSE被認為是監測小細胞肺癌的首選標志物，60-80%的小細胞肺癌患者NSE升高

血清NSE水平的測定對于神經母細胞瘤的監測療效和預報復發均具有重要參考價值，比測定尿液中兒茶酚胺的代謝物更有意義。

另外對胺前體攝取脫羧細胞瘤、精原細胞瘤及其它腦腫瘤的診斷也有重要意義。

正常參考值：0～16 ng/ml

11．鱗狀細胞癌抗原（SCC）

鱗狀細胞癌抗原(SCC)是一種特異性很好而且是最早用于診斷鱗癌的腫瘤標志物。SCC在正常的鱗狀上皮細胞中抑制細胞調亡和參與鱗狀上皮層的分化，在腫瘤細胞中參與腫瘤的生長，它有助于所有鱗狀上皮細胞起源癌的診斷和監測，對子宮頸癌有較高的診斷價值：對原發性宮頸鱗癌敏感性為44%-69%；復發癌敏感性為67%-100%，特異性90%-96%；正常參考值：< 1.5 mg/L

12．總前列腺特異性抗原（TPSA）

PSA是前列腺癌的特異性標志物，也是目前公認的唯一具有器官特異性腫瘤標志物。血清TPSA升高一般提示前列腺存在病變（前列腺炎、良性增生或癌癥

TPSA測定還可用于監測前列腺癌患者或接受激素治療患者的病情及療效，90%前列腺癌術后患者的血清TPSA值可降至不能檢出的痕量水平，若術后血清TPSA值升高，提示有殘存腫瘤。放療后療效顯著者，50％以上患者在2個月內血清TPSA降至正常。

正常參考值：0.01～4.0 ng/ml

13．游離前列腺特異性抗原（FPSA）

單項的血清總PSA（TPSA）測定不能明確鑒別前列腺癌和良性的前列腺增生，主要是因為在濃度2-20ng/ml范圍內，二組病人有交叉。而FPSA/TPSA不受此因素及年齡的影響，通過FPSA/TPSA比值達到鑒別前列腺癌或良性的前列腺增生的目的FPSA檢測主要適用于未經治療、TPSA值為2-20ng/ml病人，當TPSA值低于2ng/ml或高于20ng/ml時，FPSA/TPSA比值并不能用于鑒別前列腺癌和良性的前列腺增生。

正常參考值：0.01～2.0 ng/ml FPSA/TPSA：> 0.15

14．α-L-巖藻糖苷酶（AFU）

AFU是是對原發性肝細胞性肝癌檢測的又一敏感、特異的新標志物。原發性肝癌患者血清AFU活力顯著高于其它各類疾患（包括良、惡性腫瘤）。血清AFU活性動態曲線對判斷肝癌治療效果、估計預后和預報復發有著極其重要的意義

正常參考值：234～414 μmol/L

15．EB病毒抗體（EBV-VCA）

EB病毒陽性、鼻咽癌家族史、鼻咽癌的高發區、身體免疫力低下，都可能是患鼻咽癌的高危因素。從理論上講，如EB病毒檢查陽性者，僅是代表患者以前曾經受過EB病毒感染，但它是否是鼻咽癌發病的直接原因，目前尚無定論。但臨床實踐，科學研究表明，陽性者患鼻咽癌的機會比陰性者大得多。正常參考值：EBV-VCA抗體 陰性

16．腫瘤相關物質（TSGF）

TSGF腫瘤相關物質聯合檢測（原名惡性腫瘤特異性生長因子）是一種可以簡便快速地用于惡性腫瘤早期輔助診斷的新型的腫瘤標志物，對療效觀察、人群查體亦有很高的應用價值。

惡性腫瘤患者血清中TSGF含量顯著升高，不同種類的惡性腫瘤間差異不明顯；而良性腫瘤與健康人群間無顯著差異，TSGF是良、惡性腫瘤的鑒別指標，可在輔助診斷惡性腫瘤方面發揮作用正常參考值：正常人TSGF濃度范圍為47±17U/ml；＜64U/ml為陰性；≥64U/ml而＜71U/ml為可疑；≥71U/ml為陽性。

17．鐵蛋白（SF）

鐵蛋白升高可見于下列腫瘤：急性白血病、何杰金氏病、肺癌、結腸癌、肝癌和前列腺癌。檢測鐵蛋白對肝臟轉移性腫瘤有診斷價值，76%的肝轉移病人鐵蛋白含量高于400μg/L，當肝癌時，AFP測定值較低的情況下，可用鐵蛋白測定值補充，以提高診斷率。

正常參考值：男性：30～400 μg/L 女性：13～150 μg/L

18．β2-微球蛋（β2-MG）

β2-MG是惡性腫瘤的輔助標志物，也是一些腫瘤細胞上的腫瘤相關抗原。在惡性血液病或其它實質性癌瘤中，突變細胞合成和分泌β2-MG，可使病人血清中濃度顯著上升，在淋巴系統腫瘤如慢性淋巴細胞白血病、淋巴細胞肉瘤、多發性骨髓瘤等中尤為明顯，在肺癌、乳腺癌、胃腸正常參考值：1.58～3.55 μg/ml

道癌及子宮頸癌等中也可見增高。

正常參考值：1.58～3.55 μg/ml

19．胰胚胎抗原（POA）

胰胚胎抗原是胰腺癌的又一新型、敏感、特異的新標志物，胰腺癌的POA的陽性率為95%

正常參考值：0～7 U/ml

20．胃泌素前體釋放肽（PROGRP）

胃泌素前體釋放肽是一種新的小細胞肺癌標志物。PROGRP是腦腸激素的一種，是小細胞肺癌增殖因子胃泌素釋放肽的前體。PROGRP作為小細胞肺癌標志物有以下特點：1.針對小細胞肺癌的特異性非常高；2.較早期的病例有較高的陽性率；3.健康者與患者血中濃度差異很大，因而檢測的可靠性很高。

正常參考值: 4～6 pg/ml

現在臨床對一些腫瘤項目進行一些組合檢查腫瘤普查：

1、腫瘤普查四項：AFP、CEA、Fer、β2-MG2、腫瘤三項：AFP、CEA、CA1993、婦科腫瘤五項：AFP、CEA、CA125、CA153、CA1994、卵巢癌二項：CA125、CEA5、乳腺癌二項：CA153、CA1996、消化道腫瘤六項：AFP CEA CA199 CA242 CA724 CA507、肝膽腫瘤五項：AFP CEA CA199 CA125 CA508、胃癌三項：CEA CA724 CA1999、肺癌三項：CEA NSE CYFRA21110、前列腺癌三項：PSA FPSA PAP11、前列腺癌兩項：PSA FPSA

第四篇：7項腫瘤標志物檢測試劑盒A

7項腫瘤標志物檢測試劑盒A 【產品名稱】

通用名稱：7項腫瘤標志物檢測試劑盒（微陣列化學發光免疫分析法）

英文名稱： Seven Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包裝規格】

100人份/盒

【預期用途】

本產品用于體外定量檢測人血清樣本中的糖鏈抗原19-9（CA19-9）、糖鏈抗原125（CA125）、糖鏈抗原724（CA724）、神經元烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、胃泌素釋放肽前體（Pro-GRP）7種腫瘤標志物的濃度。

【檢驗原理】

本產品由蛋白芯片、酶標二抗反應液、檢測液及其他試劑配套組成。應用雙抗體夾心法原理定量檢測人血清中的7種腫瘤標志物的濃度。

第一步反應：待測血清與芯片反應，芯片表面的7種腫瘤標志物的單克隆抗體與樣品中潛在的相應抗原結合，反應結束芯片經洗滌后進行第二步反應。第二步反應：將芯片轉入預加了酶標二抗反應液的反應杯中，進一步反應形成抗體-抗原-抗體的雙抗夾心結構，反應結束芯片經洗滌后檢測反應信號。

信號檢測：將芯片轉移入預加了發光底物的反應杯中，利用致冷CCD對芯片反應區進行成像，讀取點陣灰度值。

報告結果：以不同濃度的校準品作為樣本進行檢測，作出灰度——濃度定量標準曲線，通過該標準曲線計算血清樣本中不同指標的相應濃度，報告檢測結果。

【適用儀器】

江蘇三聯生物工程有限公司全自動生物芯片閱讀儀SLXP-001、SLXP-002。

【儲存條件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6個月。

【醫療器械注冊證編號】

國械注準20153400230

7項腫瘤標志物檢測試劑盒B 【產品名稱】

通用名稱：7項腫瘤標志物檢測試劑盒（微陣列化學發光免疫分析法）

英文名稱： Seven Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包裝規格】

100人份/盒

【預期用途】

本產品用于體外定量檢測人血清中的糖鏈抗原19-9（CA19-9）、糖鏈抗原125（CA125）、糖鏈抗原724（CA724）、癌胚抗原（CEA）、細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、胃蛋白酶原I（PG I）以及胃蛋白酶原II（PG II）7種腫瘤標志物的濃度。

【檢驗原理】

本產品由蛋白芯片、酶標二抗反應液、檢測液及其他試劑配套組成。應用雙抗體夾心法原理定量檢測人血清中的7種腫瘤標志物的濃度。

第一步反應：待測血清與芯片反應，芯片表面的7種腫瘤標志物的單克隆抗體與樣品中潛在的相應抗原結合，反應結束芯片經洗滌后進行第二步反應。

第二步反應：將芯片轉入預加了酶標二抗反應液的反應杯中，進一步反應形成抗體-抗原-抗體的雙抗夾心結構，反應結束芯片經洗滌后檢測反應信號。

信號檢測：將芯片轉移入預加了發光底物的反應杯中，利用致冷CCD對芯片反應區進行成像，讀取點陣灰度值。

報告結果：以不同濃度的校準品作為樣本進行檢測，作出灰度——濃度定量標準曲線，通過該標準曲線計算血清樣本中不同指標的相應濃度，報告檢測結果。【適用儀器】

江蘇三聯生物工程有限公司全自動生物芯片閱讀儀SLXP-001、SLXP-002。

【儲存條件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6個月。

【醫療器械注冊證編號】

國械注準20153400234 6項腫瘤標志物檢測試劑盒

【產品名稱】

通用名稱：6項腫瘤標志物檢測試劑盒（微陣列化學發光免疫分析法）

英文名稱：Six Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包裝規格】

100人份/盒

【預期用途】

本產品用于體外定量檢測人血清樣本中的甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、糖鏈抗原19-9（CA19-9）、糖鏈抗原125（CA125）、糖鏈抗原724（CA724）以及細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）6種腫瘤標志物濃度。【檢驗原理】

本產品由蛋白芯片、酶標二抗反應液、檢測液及其他試劑配套組成。應用雙抗體夾心法原理定量檢測人血清中的6種腫瘤標志物的濃度。

第一步反應：待測血清與芯片反應，芯片表面的6種腫瘤標志物的單克隆抗體與樣品中潛在的相應抗原結合，反應結束芯片經洗滌后進行第二步反應。

第二步反應：將芯片轉入預加了酶標二抗反應液的反應杯中，進一步反應形成抗體-抗原-抗體的雙抗夾心結構，反應結束芯片經洗滌后檢測反應信號。

信號檢測：將芯片轉移入預加了發光底物的反應杯中，利用致冷CCD對芯片反應區進行成像，讀取點陣灰度值。

報告結果：以不同濃度的校準品作為樣本進行檢測，作出灰度——濃度定量標準曲線，通過該標準曲線計算血清樣本中不同指標的相應濃度，報告檢測結果。

【適用儀器】

江蘇三聯生物工程有限公司全自動生物芯片閱讀儀SLXP-001、SLXP-002。

【儲存條件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6個月。

【醫療器械注冊證編號】

國械注準20153400232 12項腫瘤標志物檢測試劑盒（女）

【產品名稱】

通用名稱：12項腫瘤標志物檢測試劑盒（微陣列化學發光免疫分析法）

英文名稱： Twelve Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包裝規格】

100人份/盒

【預期用途】

本產品用于體外定量檢測女性患者血清樣本中的糖鏈抗原19-9（CA19-9）、糖鏈抗原125（CA125）、糖鏈抗原724（CA724）、甲胎蛋白（AFP）、神經元烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、糖鏈抗原153（CA15-3）、β-人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）、胃蛋白酶原（IPGI）、胃蛋白酶原II（PGII）以及胃泌素釋放肽前體（Pro-GRP）12種腫瘤標志物的濃度。

【檢驗原理】

本產品由蛋白芯片、酶標二抗反應液、檢測液及其他試劑配套組成。應用雙抗體夾心法原理定量檢測人血清中的12種腫瘤標志物的濃度。第一步反應：待測血清與芯片反應，芯片表面的12種腫瘤標志物的單克隆抗體與樣品中潛在的相應抗原結合，反應結束芯片經洗滌后進行第二步反應。

第二步反應：將芯片轉入預加了酶標二抗反應液的反應杯中，進一步反應形成抗體-抗原-抗體的雙抗夾心結構，反應結束芯片經洗滌后檢測反應信號。

信號檢測：將芯片轉移入預加了發光底物的反應杯中，利用致冷CCD對芯片反應區進行成像，讀取點陣灰度值。

報告結果：以不同濃度的校準品作為樣本進行檢測，作出灰度——濃度定量標準曲線，通過該標準曲線計算血清樣本中不同指標的相應濃度，報告檢測結果。

【適用儀器】

江蘇三聯生物工程有限公司全自動生物芯片閱讀儀SLXP-001、SLXP-002。

【儲存條件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6個月。

【醫療器械注冊證編號】

12項腫瘤標志物檢測試劑盒（男）

【產品名稱】

通用名稱：12項腫瘤標志物檢測試劑盒（微陣列化學發光免疫分析法）英文名稱： Twelve Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包裝規格】

100人份/盒

【預期用途】

本產品用于體外定量檢測男性患者血清樣本中的糖鏈抗原19-9（CA19-9）、糖鏈抗原125（CA125）、糖鏈抗原724（CA724）、甲胎蛋白（AFP）、神經元烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、前列腺特異性抗原（T-PSA）、游離前列腺特異性抗原（F-PSA）、胃蛋白酶原I（PGI）、胃蛋白酶原II（PGII）以及胃泌素釋放肽前體（Pro-GRP）12種腫瘤標志物的濃度。

【檢驗原理】

本產品由蛋白芯片、酶標二抗反應液、檢測液及其他試劑配套組成。應用雙抗體夾心法原理定量檢測人血清中的12種腫瘤標志物的濃度。

第一步反應：待測血清與芯片反應，芯片表面的12種腫瘤標志物的單克隆抗體與樣品中潛在的相應抗原結合，反應結束芯片經洗滌后進行第二步反應。

第二步反應：將芯片轉入預加了酶標二抗反應液的反應杯中，進一步反應形成抗體-抗原-抗體的雙抗夾心結構，反應結束芯片經洗滌后檢測反應信號。信號檢測：將芯片轉移入預加了發光底物的反應杯中，利用致冷CCD對芯片反應區進行成像，讀取點陣灰度值。

報告結果：以不同濃度的校準品作為樣本進行檢測，作出灰度——濃度定量標準曲線，通過該標準曲線計算血清樣本中不同指標的相應濃度，報告檢測結果。

【適用儀器】

江蘇三聯生物工程有限公司全自動生物芯片閱讀儀SLXP-001、SLXP-002。

【儲存條件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6個月。

【醫療器械注冊證編號】

國械注準20153400231

國械注準20153400233

第五篇：腫瘤標志物檢測的質量保證

腫瘤標志物檢測的質量保證

一、腫瘤標志物的定義

腫瘤標志物（tumor marker，TM）是指在腫瘤的發生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產生的或者是由機體對腫瘤細胞反應而產生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質，包括蛋白質、激素、酶（同工酶）、多胺及癌基因產物等。腫瘤患者血液或體液中腫瘤標志物的檢測，對腫瘤的輔助診斷、鑒別診斷、療效觀察、病情監測以及預后的評價具有一定的價值。

腫瘤標志物存在于細胞漿和細胞核中，與細胞表面膜相連，在血液中進行循環。腫瘤標志物可以在血清、血漿、其他體液、組織提取物或石蠟固定的組織中檢測到。大多數腫瘤標志物可以用免疫學的技術進行檢測。

二、影響腫瘤標志物檢測的因素 1.樣本采集對檢測的影響

如前列腺按摩、前列腺穿刺、射精、導尿和直腸鏡檢查后，血液PSA和PAP值可升高；肝、腎功能異常和膽道排泄不暢、膽汁淤滯等均可造成腫瘤標志物如 CEA、ALP、GGT、細胞因子等濃度增高；某些藥物影響腫瘤標志物的濃度，如抗雄激素治療前列腺癌時可抑制PSA產生，導致 PSA 假陰性結果；唾液和汗液污染標本可使SCC升高。由于紅細胞和血小板中也存在神經元特異性烯醇化酶（NSE），因此，樣本溶血或放置時間過長（且未分離血清保存）可使血液中NSE濃度增高。采血管內的促凝劑或抗凝劑，對某些項目的測定有干擾。2.樣本保存對檢測的影響

血液標本采集后應及時離心,分離血清或血漿盡快測定,或保存于4℃冰箱中；若在2～3個月內測定,則應低溫冰凍保存,防止反復凍融。酶類和激素類TM不穩定,如fPSA和HCG,半壽期短,易降解,應及時測定。3.腫瘤病人自身狀況的影響

腫瘤患者自身的狀況影響腫瘤標志物的檢出及血液中腫瘤標志物的濃度，包括：①腫瘤的大小和腫瘤細胞的數目：腫瘤越大、腫瘤細胞的數目越多，血液中TM越高。②腫瘤細胞自身的分化程度：腫瘤細胞的分化程度越差，惡性程度越高，血液中TM越高。③腫瘤的分期不同：腫瘤越晚期，血液中TM越高。④腫瘤細胞表達和合成腫瘤標志物的程度：腫瘤細胞表達和合成的TM程度越高，血液中TM越高，反之，血液中TM較低。⑤腫瘤細胞的壞死和壞死程度：腫瘤細胞壞死后，釋放出TM，使血液中TM升高，壞死程度越大，血液中TM升高越明顯。⑥TM在體內的降解和排泄：若肝臟、腎臟功能差，排泄速度慢，則TM在體內明顯升高。⑦假陽性和假陰性；有些疾病如炎性疾病，結締組織病和生理變化如妊娠時，有些標志物的表達也升高，可導致假陽性；而有些腫瘤標志物較少或腫瘤細胞被封閉，抗原抗體形成免疫復合物，血循環差等都可導致腫瘤標志物不能被檢出，導致假陰性。⑧生物學因素的影響: 隨年齡的增長PSA升高;老年人CA199、CA153、CEA等可升高。部分婦女在月經期CA125和CA199可增高，妊娠期血液中AFP和CA125含量明顯升高；長期吸煙會使血液中CEA含量偏高。⑨非法表達與假基因轉錄：非法表達指有些基因在腫瘤組織中表達，在正常組織中不應該表達而有少量表達；假基因轉錄，指假基因轉錄為mRNA，一般情況下不翻譯為蛋白質。在定性的檢測mRNA和蛋白質時，這兩種情況都可以影響檢測的準確性和特異性，導致假陽性。⑩患者血液中有噬異性抗體存在，可導致TM假陽性結果，要將此抗體消除后再檢測。

因此，腫瘤患者的腫瘤標志物基礎測定值對于觀察療效、預測復發有非常重要價值。對腫瘤標志物檢測正常的腫瘤患者，還可以做如下解釋：療效顯著、未復發未轉移；未選擇到恰當的腫瘤標志物，提供錯誤信息；是一種目前還未發現的腫瘤細胞亞型。

三、腫瘤標志物檢測的質量保證

（一）腫瘤標志物檢測前的要求

對病人的信息進行充分了解，確保實驗結果的準確性。

檢測前樣本的保存：血液標本采集后應及時離心，保存于4℃冰箱中，24小時內測定；如在短期內測定，則應-20℃保存，長期保存應置于-70℃ 冰箱, 標本應防止反復凍融。酶類和激素類腫瘤標志物不穩定，易降解，應及時測定或低溫保存。

（二）腫瘤標志物分析檢測的要求 滿意的測試結果來自于符合要求的標本以及經過室內質控（IQC）和實驗室間質量評價（EQA）監測評價的有效的實驗方法。室內質控和室間質評的監測評價包括實驗的重復性、采用的標準、所用基質的影響、動力學范圍、參考品、穩定性、分析結果的理論數據、實驗方法。

腫瘤標志物測定方法很多，有放射免疫測定法，酶聯免疫測定法，化學發光免疫測定法等，每種測定方法有自己的精密度和重復性，但手工操作的方法重復性較差，誤差比較大，操作時要特別認真；用自動化儀器進行測定，重復性好，誤差小，實驗結果的分析內和分析間變異系數可以達到<5%和<10%，具有手工分析難以比擬的優勢。各實驗室還應注意影響實驗特異性的因素。

不同的試劑盒測定也有差異,其原因是由于使用的單克隆抗體針對抗原的位點不同所致。有時即使使用同一抗體，也可能因抗原異質性（如原發腫瘤轉移后，失去了原有的抗原性而停止分泌原有的腫瘤抗原）或基質的影響而得到不同的結果。有研究報道，使用12種不同的CEA試劑盒檢測某一混合血清中CEA的濃度，結果其差異超過100%。導致分析間誤差的主要原因是沒有測定的標準化，包括缺乏統一的抗原、抗原成分、校正品和參考方法等。因此，在工作中要盡量使用同一種方法，同一種儀器和同一廠家的試劑盒進行測定。1.室內質量控制（IQC）的要求

腫瘤標志物很少有參考方法，要堅持作室內質控圖，以均值為靶值，來判斷試驗的穩定性和重復性。

①重復性：理想的分析批內誤差應<5%；批間誤差<10%。②建立測定認可的標準：選擇合適的IQC標準。

③樣品與病人血清盡可能相似：僅僅采用試劑盒所附的質控品是不夠的，還應包括獨立來源的可靠的血清基質質控品。

④IQC樣品的濃度適合臨床應用：應包括腫瘤標志物的陰性和低值陽性質控品，需要較寬的濃度范圍；評價高濃度樣本稀釋后的測定準確度。

⑤評價實驗的干擾因素：要求對實驗的干擾因素（嗜異性和其他抗體、血凝試管中的凝血試劑等）進行檢查。2.實驗室間質量評價（EQA）的要求 ①適宜濃度的EQA樣本：EQA樣本應具有適宜的工作濃度范圍，但有時會需要較高濃度的EQA樣本來評價實驗的稀釋步驟。對于某些分析（如：AFP、hCG）用無分析物血清檢查基線的可靠性是很重要的。

②實驗“穩定性”的評價：在一定時間內（6-12個月）重復進行相同樣本的測試，對實驗室內實驗結果的重復性進行評價。

③驗證靶值的精確度和穩定性：指無現成參考方法時，需要對所使用的方法進行以下驗證：穩定性：對同一樣本進行重復測定；用已知濃度的相關國際標準品進行回收率實驗；對不同實驗室間的檢測結果（參考值范圍、結果累計報告等）進行比較。

3.腫瘤標志物測定的標準化問題

要保證TM檢測結果的準確性和各實驗室之間的可比性,首先診斷產品要達到國際標準(IS),有統一的參考方法和國際參考品(IRR)。但目前尚無公認的參考方法,能得到的國際標準品僅有AFP、CEA、HCG和PSA四種,而CA系列的TM至今還沒有國際標準,這為TM測定的準確性和質量控制帶來了困難。

涉及到免疫測定標準化的組織有世界衛生組織（WHO）生物學標準化專家委員會（The Expert Committee on Biological Standardization，ECBS），負責建立生物物質的國際標準及參比材料。WHO通過國家生物學標準和質控物研究所（National Institute for Biological Standards and Control，NIBSCC）提供大多數多肽激素和一些腫瘤標志物的國際標準品。一些地區性組織也制備標準品，如美國的疾病控制中心（Centers of Disease Control，CDC）、美國病理學家協會的國家委員會（National Committee of the College of American Pathologists）、國家衛生研究所（National Institute of Health，NIH）等提供用于研究目的的多肽激素標準品。國際癌癥生物學和醫學學會（International Society of Onco-developmental Biology and Medicine）已啟動一個腫瘤標志物抗原決定簇繪圖計劃。

4.抗原、抗體和基質效應對腫瘤標志物測定的影響

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體間所發生的特異性結合反應,受抗原抗體的性質、活性、效價、反應比例及環境(如電解質,pH 值,溫度)等因素影響。在TM測定中應注意:①確認樣品中被檢抗原和校準品中抗原的一致性。②制備抗體時使用的抗原和樣品中抗原的一致性。③抗原過剩的識別。④試劑使用的是多克隆抗體，則抗體的純度很重要；試劑使用的是混合單克隆抗體則每批抗血清內各單克隆抗體的組成及相對比例很重要，并要保持恒定。另外，很多腫瘤標志物是糖蛋白或粘蛋白，糖基化的不均一性可能導致其免疫反應性某些變化，從而引起測定結果的差異。⑤校準品穩定、無混濁。⑥抗原抗體反應時所處的基體（基質）狀況應保持恒定和一致。

免疫反應的基質效應是指干擾抗原、抗體反應而與分析物本身無關的所有非特異性因素(即基質)對分析物反應的影響。基質效應通常由蛋白質、電解質、補體、類風濕因子、抗人球蛋白抗體、藥物、添加劑和各種污染物引起。標準品和質控品的基質與待測血清標本不一樣,標準品的基質通常是含蛋白的緩沖溶液；標準品和質控品都是經過加工處理的,如冰凍、冷凍干燥、加穩定劑或添加某些分析物等,而臨檢所用的測定方法、儀器、試劑等都是以人新鮮血清標本為模板的,對血清標本測定有可靠性,而對加工處理過的物質不一定可靠。對于基質效應，需要注意以下幾點：①同一基質狀態的基質效應隨方法及檢測條件而異。②基質效應是絕對的，只要處理過的樣品和測定樣品的基質狀態不一，一定有基質效應；基質效應又是相對的，只要認可某一方法的基質效應可忽略不計，或者由基質效應對某方法引入的誤差在可接受水平，那么衡量另一方法是否具有基質效應時，應作方法學比較。若處理過的樣品和測定樣品的結果分布不同，說明基質效應明顯。反之屬可接受。也即認為“無” 基質效應。③嚴格講，不同批號試劑，它們產生的基質效應也不一致。度量有無基質效應，或者了解不同方法間的可比性，最佳樣品是人新鮮樣本。④一定要懂得單一標準液，校準品，質控品和新鮮樣品間的區別，并正確使用。不應用質控品作為校準品去校準儀器，不僅是基質差異，而且是校準品和質控品定值的水平不一。室內質控用的質控品僅用于各檢驗科日常工作中重復性和精密度的控制。由于各檢驗科的檢驗方法和廠商定值的方法不一致，不可將定值血清的靶值來定值。⑤衡量某一方法或試劑是否準確可靠，唯一可信的方法是使用人新鮮樣本進行比較，僅以控制品測定值相似或等于定值，不足以說明方法的準確度。⑥校準品是公司指定用來校準某測定系統（儀器＋試劑＋方法程序）的，是考慮到它具有基質效應的情況下，人為賦予校準品的校準值。因此校準品必須專用于某一測定系統。應鼓勵檢驗科使用儀器廠商指定的試劑和校準品。⑦同一個校準品用于不同儀器時，應該有不同的校準值。不輕易使用某一校準品的校準值對于各種儀器作校準。5.引起腫瘤標志檢測錯誤結果的潛在因素

①高濃度hook效應：通常情況下，腫瘤標志物的濃度范圍會有好幾個數量級的差別，因此有可能需要確認高濃度的樣本產生的hook效應，以避免低值結果的錯誤報告。這對于首次進行腫瘤標志物檢測的病人猶為重要。（可以通過使用高結合力的固相抗體、分析兩個稀釋度的樣本、或通過后續的分析步驟包括清洗步驟來減少hook效應。）

②樣本間的攜帶：檢測高濃度的樣本會產生樣本間攜帶的潛在問題，因此有必要對此進行隨時檢查。

③嗜異性或人抗鼠抗體（HAMA）的干擾：IgG抗體可以和測定中使用的抗體進行反應。通常情況下，由于進行影像檢查和治療而使病人接觸鼠單克隆抗體，由此而產生的人抗鼠抗體會使腫瘤標志物的檢測出現錯誤結果。（可以通過使用阻斷劑對樣本進行前處理、在反應基質中加入非免疫的鼠血清或對樣本進行稀釋后再進行分析的方法來減少HAMA的干擾。）

（三）腫瘤標志物分析檢測后的要求

①通過詢問醫生獲取病人的臨床信息：有必要鼓勵臨床醫生提供帶有說明的簡短的臨床信息（如手術后、化療后等），這有助于確認偶然誤差（如可能出現的儀器上加錯標本等）。另外，當改變TM 檢測方法和試劑時,必須通知臨床,避免對結果的誤判。實驗室還應印發宣傳資料介紹TM標本采集的注意事項,并提出TM 檢測的合適頻率供臨床參考。這些措施對提高檢測質量,用好TM非常有用。②參考值范圍的有效性：通常來自相應的健康人群的參考值范圍與初始治療前的腫瘤病人有很好的相關性。因此，病人自己的“基線”值對于腫瘤標志物的測定結果具有非常重要的參考意義。只有基于有效的參考范圍，增高甚至在參考范圍增高才有臨床顯著床意義，但須進行進一步的工作。

③了解顯著變化或臨床相關變化的組成因素：應包括生物學變異和分析數據的變異。一般病人的結果在排除檢測方法引起的誤差后，上升或下降25％都有臨床價值。對于測定結果升高的標本必須復查，以防測定誤差。

④改變方法時應進行方案確認：有助于確認由于改變方法而引起的腫瘤標志物檢測結果的差異。（可能需要對以前檢測過的樣本再用新的方法進行檢測來確認結果的差異。）

⑤必須知道腫瘤標志物的半壽期：TM的半壽期是指腫瘤組織被完全切除后血液循環中TM濃度下降到50%的時間。這有助于選擇TM的監測時間和解釋TM濃度變化與臨床療效和腫瘤復發的關系。若復查間隔時間太短,將誤認為腫瘤未被完全切除；間隔時間太長,將無法區分是腫瘤復發還是療效欠佳。一般應在治療結束后5個半壽期采血為好,這時原有的TM約97%已被清除。主要TM的生物半壽期: CA199為4～8天；CA153為5～7天；CA125為5天；CA724為3～7天；細胞角質蛋白19片段(CYFRA21)為1天；AFP2～8天；CEA2～8天；PSA2～3天；fPSA12～18小時；HCG12～36小時；NSE 1天；SCC1天。

⑥腫瘤標志物臨床應用的比較：首先需要得到有關腫瘤標志物臨床應用的信息，再由有關的專業組織進行考察比較。

六、常用腫瘤標志物檢測中的注意事項

CA15-3

分析測試前準備和樣本貯存：進行CA15-3的檢測可以采用新鮮分離的血清樣本。CA15-3在4℃下可以穩定24小時。建議將血清貯存于-20℃（短期）或-70℃（長期），以備復試時使用。若需長期貯存，則不能使用變性膠（CA15-3在變性膠的存在下表現出明顯的不穩定）。

分析中的注意事項：每個實驗室都應對CA15-3的分析方法、分析精密度和參考值范圍進行驗證，以確定臨床診斷的界限值。分析后結果報告的注意事項：應進行進一步的研究來確認性別、種族、年齡和絕經情況對正常人和乳腺癌病人CA-153表達的影響，制訂出腫瘤標志物的參考值范圍。CA125 分析前注意事項：含糖的血清腫瘤標志物一般在常規實驗室室溫條件下有一定程度的穩定性。然而樣本的快速處理對于減少分解是十分必要的。新鮮分離的血清應該立即進行CA125的測定。血清樣本應于4℃下存放或凍存于-20℃（短期）或-70℃（長期），以備復試時使用。

分析中的注意事項：NACB認為，CA125的測定結果用于病情監測，CV值應<15%。在此CV值下，95%可信限的范圍是21～39U/ml，平均30U/ml。EGTM建議，腫瘤標志物自動化測定的批內變異應<10%，并應考慮生物變異和分析的不精確度。分析后結果報告的注意事項：由于各廠家的檢測試劑盒檢測結果略有不同，因此應在報告中附加試劑盒標明的正常值范圍。SCCA 分析前注意事項：由于唾液、汗液和呼吸分泌物中存在大量SCCA，因此血樣應避免暴露于皮膚和唾液。

分析中的注意事項：SCCA測定的平均日間變異為24%，因此在監測疾病復發時，應分別考慮其Cut-off值。

分析后結果報告注意事項：應同時報告試劑盒生產廠家標明的正常值范圍。PSA 分析前注意事項：NACB對用于PSA測定的標本的采集和處理作出如下建議：因為有許多因素都會影響PSA的含量，所以應確保在任何有關前列腺的活動之前進行血樣的抽取，也就是說，在射精后至少24小時（如果在24小時以內，應注意最后一次射精的時間）、前列腺炎癥消退、前列腺活檢、經尿道的前列腺切除后數周再進行游離PSA的檢測。由靜脈抽取的血樣應在3小時內離心分離出血清。血清樣本在冰箱中可保存24小時以上，但應于24小時內進行測定，否則就應將樣本凍存于-20℃以下（最好在-30℃以下避免結晶），長期保存溫度應在-70℃以下。考慮到以上對樣本的要求在日常工作中可能較難達到，EGTM建議根據采集樣本時病人的情況而使用特定的分析參考值。分析和結果報告注意事項：結果報告中應注明，單次PSA的檢測結果不能用于前列腺癌的診斷和判定，應該和物理檢查結合使用。結果報告中還應分別注明分析實驗的靈敏度和正常值參考范圍，并說明結果不能用作評判惡性腫瘤是否存在的證據，除非有另外一些檢測結果說明一定程度上升高的PSA水平不是由于良性前列腺組織疾病所引起的。報告中還應注明PSA分析（試劑、儀器）的生產商，并聲明測定結果不能和用其他方法得到的結果進行互換。對病人的治療后監測，單次PSA檢測結果不能用于前列腺癌復發的診斷。根部前列腺切除手術后，PSA的持續升高（基于多次PSA的檢測結果）指示疾病的復發，若用超靈敏度分析進行根部前列腺切除手術后的跟蹤隨訪（超靈敏度分析唯一的臨床應用），應對實驗的靈敏度進行驗證，并將其報告給臨床醫生，更重要的是要研制出質控品并達到要求的靈敏度。有些較低的檢測結果在生物學變異范圍內可能會變得很高，因此持續升高的PSA水平應該引起高度重視。EGTM的觀點是PSA超靈敏度分析實驗的結果不應用于決定臨床治療方案。肺癌標志物

分析測試前的注意事項：用于肺癌腫瘤標志物檢測的樣本應存放于4℃（短期）和-70℃（長期）。當融化冰凍樣本進行細胞角蛋白測定時，應避免樣本的劇烈混合，因為劇烈震蕩后細胞角蛋白可能會附著在試管壁上。用于NSE檢測的樣本應在采集的血液凝集后60分鐘內進行分離，注意避免存在于紅細胞內的NSE漏出。溶血的樣本不能進行NSE檢測。用于SCCA檢測的樣本應避免皮膚和唾液的污染，因為這可能導致結果的錯誤升高。腎功能障礙會顯著影響CYFRA21-1和SCCA的檢測結果，因此，對高檢測結果的病人應觀察其身體狀況。