第一篇：六年級下冊洋蔥表皮細胞實驗教案范文

分組實驗內(nèi)容：觀察洋蔥表皮細胞課案

實驗名稱：觀察洋蔥表皮細胞實驗內(nèi)容：教科版小學科學六年級下冊，第一單元《微小世界》第5節(jié)《用顯微鏡觀察身邊的生命世界

（一）》觀察洋蔥表皮細胞。實驗類型：分組實驗

實驗準備：教師：按學生妹三人一組，每組：洋蔥、小刀、清水、滴管、鑷子、吸水紙、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、放大鏡。學生：書本、抹布。實驗教學過程：

一、談話導(dǎo)入

師：這是一個洋蔥，如果從它的內(nèi)表皮上揭下一塊，你能看到些什么？如果用上放大鏡又能看到些什么？如果用上顯微鏡又能看到些什么？

二、制作洋蔥表皮玻片標本

1、師：為了能更好地觀察它，首先我們要制作一個玻片標本。（師演示）1)在一個干凈的玻璃載片中間滴一滴清水

2)用鑷子把取下的洋蔥表皮放到栽玻片的水滴中央，注意標本要平展開，不能折疊。

3)用蓋玻片（或另一個玻璃載片）傾斜著蓋到標本上面，放蓋玻片時，先放一端，再慢慢放下另一端，注意不要有氣泡。

4)從標本的邊緣滴一滴稀釋的碘酒，并把玻片微微傾斜，再用吸水紙吸掉多余的水。

2、學生以組為單位制作玻片標本

二、用肉眼和放大鏡觀察洋蔥表皮

1、先用肉眼觀察洋蔥表皮，將看到的畫在科學記錄本上（或書上13頁）

2、材料員發(fā)給每位同學放大鏡，大家用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的畫到科學記錄本或書上。

3、交流用肉眼和放大鏡觀察到的有何不同。

三、用顯微鏡觀察洋蔥表皮

實驗過程：

1、用小刀將洋蔥表皮剝下一薄層，用顯微鏡觀察。

2、制作洋蔥切片：先取下一小片，用鑷子取下，輕放在滴了碘酒的載玻片上，用蓋玻片從右向左滑動放在切片上，再用吸水紙吸去多余的水。

3、將制作好的切片放在顯微鏡下，調(diào)好焦距觀察

4、觀察時用左眼觀察顯微鏡，右眼看圖，右手畫出細胞形狀圖

5、填好實驗報告冊，得出結(jié)論 實驗結(jié)論：

洋蔥表皮是由無數(shù)細胞構(gòu)成的。生物體是由細胞構(gòu)成的，的。細胞是有生命的，它會生長、繁殖、變化、衰老和死亡。生物體生長發(fā)育的過程中就是在它生長、繁殖、變化的過程，生物體的衰老、死亡也是由細胞的衰老、死亡引起的 師：如果我們將洋蔥表皮的玻片標本放到顯微鏡下觀察，又會有什么新的發(fā)現(xiàn)呢？

2、師出示顯微鏡，介紹各部分的名稱、功能及使用方法（如果學生五年級時已使用過，也可叫學生介紹老師指導(dǎo)更正，具體內(nèi)容見13頁）

3、每2人一個顯微鏡觀察洋蔥表皮，不會使用的同學可根據(jù)13頁的提示進行操作。每組的材料員監(jiān)督大家進行規(guī)范的操作，對不規(guī)范操作且不改正的同學取消其使用資格。同樣將顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)畫到科學記錄本或書上。

4、交流我們在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)

（洋蔥表皮由一個個比較規(guī)則的多邊形組成。洋蔥表皮上的一個個小房間似的結(jié)構(gòu)，是洋蔥的細胞。閱讀12頁的資料，了解胡克發(fā)現(xiàn)細胞的故事。讓學生談?wù)剬毎恼J識。）

第二篇：觀察洋蔥表皮的實驗

觀察洋蔥表皮的實驗

實驗材料：顯微鏡、洋蔥、載玻片、蓋玻片、鑷子、碘酒

試驗方法：

(1)準備好顯微鏡。

(2)將洋蔥切開，掰下一塊嫩的鱗葉；用刀片在鱗葉表面輕輕劃一個井字，用鑷子在井字中

間輕輕撕下一塊洋蔥鱗葉的表皮。

(3)在載玻片上滴幾滴水，用鑷子夾住洋蔥表皮，放在載玻片的水中展平，用鑷子夾住蓋玻

片蓋上，注意不要有氣泡。

(4)在蓋玻片的左邊有水處滴一滴稀釋的碘液，用吸水紙在蓋玻片的右邊將碘液吸過來，給

洋蔥表皮染色。

(5)將經(jīng)過上述步驟做好的切片放在顯微鏡的載物臺上，夾好。

(6)利用低倍鏡進行觀察。

制作細胞模型

制作材料：一包無色明膠、一個長方形的盒子，各種顏色的橡皮泥或泡沫塑料

制作方法：

（1）把在顯微鏡下觀察到的某種細胞的樣子畫在紙上。

（2）把名叫溶解在溫水中，再把他倒進一個長方形盒子里或一個圓形的盒子里。

（3）用橡皮泥或泡沫塑料模擬某種植物或動物細胞中的結(jié)構(gòu)，在凍僵之前把他們插進明

膠中。

觀察洋蔥表皮的實驗

實驗材料：顯微鏡、洋蔥、載玻片、蓋玻片、鑷子、碘酒

試驗方法：

(7)準備好顯微鏡。

(8)將洋蔥切開，掰下一塊嫩的鱗葉；用刀片在鱗葉表面輕輕劃一個井字，用鑷子在井字中

間輕輕撕下一塊洋蔥鱗葉的表皮。

(9)在載玻片上滴幾滴水，用鑷子夾住洋蔥表皮，放在載玻片的水中展平，用鑷子夾住蓋玻

片蓋上，注意不要有氣泡。

(10)在蓋玻片的左邊有水處滴一滴稀釋的碘液，用吸水紙在蓋玻片的右邊將碘液吸過來，給

洋蔥表皮染色。

(11)將經(jīng)過上述步驟做好的切片放在顯微鏡的載物臺上，夾好。

(12)利用低倍鏡進行觀察。

制作細胞模型

制作材料：一包無色明膠、一個長方形的盒子，各種顏色的橡皮泥或泡沫塑料

制作方法：

（4）把在顯微鏡下觀察到的某種細胞的樣子畫在紙上。

（5）把名叫溶解在溫水中，再把他倒進一個長方形盒子里或一個圓形的盒子里。

（6）用橡皮泥或泡沫塑料模擬某種植物或動物細胞中的結(jié)構(gòu)，在凍僵之前把他們插進明

膠中。

第三篇：洋蔥鱗片葉表皮細胞的細胞骨架觀察實驗報告

洋蔥鱗片葉表皮細胞的細胞骨架觀察實驗報告

吳若自然科學大類 16307110316 單周四 119 2016/11/17

一、實驗?zāi)康? 1.掌握用光學顯微鏡觀察植物細胞骨架的原理及方法。2.認識細胞骨架的形態(tài)，聯(lián)系細胞骨架的功能。

二、實驗原理：

細胞骨架是指真核細胞中的蛋白纖維網(wǎng)架體系。廣義的細胞骨架包括細胞核骨架、細胞質(zhì)骨架、細胞膜骨架和細胞外基質(zhì)。根據(jù)蛋白質(zhì)纖維的直徑、組成成分和組裝結(jié)構(gòu)的不同可分為微絲、微管和中間纖維。細胞骨架對于維持細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細胞運動、物質(zhì)運輸、能量轉(zhuǎn)換、信號傳導(dǎo)和細胞分裂等有重要的作用。本試驗采用去垢劑TritonX-100 的緩沖液處理植物材料時，可將細胞的膜結(jié)構(gòu)和大部分蛋白質(zhì)抽提掉，但細胞骨架系統(tǒng)的蛋白卻被保存下來，后者用考馬斯亮藍R250 染色，在光學顯微鏡下可見一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

三、操作步驟：

1.取洋蔥內(nèi)皮表層膜1cm2(可多取兩片)左右置于含2mlPBS液的小皿中濕潤5min后，吸去PBS 2.向小皿中加入1.5mlTritonX-100(1%)，浸沒20min后，吸走TritonX-100

3.向小皿中加入2mlMbuffer浸沒置于搖床上5min，重復(fù)兩次后，吸走Mbuffer 4.向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸沒30min后，吸走戊二醛 5.向小皿中加入2mlPBS，浸沒置于搖床上5min，重復(fù)兩次

6.取出表皮平鋪于載玻片上，滴加100微升，靜置100min后吸取染料 7.向表面滴加蒸餾水洗滌后用紙巾洗去液體，重復(fù)兩次

8.蓋上蓋玻片，擦去殘余液體，用光學顯微鏡觀察并拍照記錄

四、實驗結(jié)果：

如圖所示，洋蔥內(nèi)表皮細胞輪廓清晰可見，細胞壁及其分界明顯可見。可觀察到線性纖維交織而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，同一細胞內(nèi)各處骨架密集度不均勻，細胞核區(qū)域纖維較密集，藍色較重。調(diào)節(jié)顯微鏡焦距可觀察到細胞不同橫切面的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的變化，表明細胞骨架以三維立體結(jié)構(gòu)的形式分布在整個細胞內(nèi)。

五、思考題：

1.簡述細胞質(zhì)骨架的基本類型及結(jié)構(gòu)特征

答：微管：中空的圓筒狀結(jié)構(gòu)，直徑為18nm～25nm，構(gòu)成微管的主要成分是微管蛋白。這種蛋白有兩個亞基，即α，β亞基它們成螺旋形排列。進化高度保守。微絲：由肌動蛋白組成的直徑約為7nm的骨架纖維，單體形式的球形肌動蛋白聚合形成纖維形肌動蛋白，在微絲結(jié)合蛋白的輔助作用下形成微絲高級結(jié)構(gòu)，行使功能。

中間纖維：中空的骨狀結(jié)構(gòu)，直徑介于微管微絲之間，具有明顯的組織細胞特異性，基本結(jié)構(gòu)為一個中央α螺旋桿狀區(qū)輔以兩側(cè)大小和化學組成不同的端區(qū)。2.本實驗觀察到的藍色纖維主要是哪種細胞骨架？

答：應(yīng)為微絲和中間纖維。3.考馬斯亮藍染色方法的優(yōu)缺點。

答：優(yōu)點：反應(yīng)相對迅速，其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定，試劑配置簡單，操作簡便。

缺點：用于不同蛋白質(zhì)測定時有較大的偏差，仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定。

六、實驗討論：

1.觀察和分析細胞骨架的意義？

答：細胞骨架是細胞結(jié)構(gòu)的重要組成部分，也是細胞行為與功能的重要調(diào)節(jié)系統(tǒng)，觀察和分析細胞骨架的性質(zhì)與變化將幫助我們更好地認識和研究細胞性質(zhì)、功能與機制。

2.考馬斯亮藍是一個理想的細胞骨架染料嗎？本實驗的優(yōu)點和缺點是什么？

答：不是，特異性熒光染料可能更好。本實驗優(yōu)點是反應(yīng)相對迅速，其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定，試劑配置簡單，操作簡便。缺點是無法直觀分辨微管，微絲和中間纖維等。

第四篇：農(nóng)桿菌侵染煙草葉片表皮細胞實驗步驟

農(nóng)桿菌侵染煙草葉片表皮細胞實驗步驟

整理人：早熟組趙鳳利

一、準備試劑：

1.加有三抗的YEB或LB液體培養(yǎng)基，用于搖菌；

2.滲透液(50ml)：250mg D-glucose，5ml MES 原液，5ml Na3PO4·12H2O 原液，5ul 1M 乙酰丁香酮原液，加dH2O至50ml。

1).500 mM MES(Sigma)：4.88 g溶于50ml dH2O，保存于4℃

2).20 mM Na3PO4·12H2O(BDH)：0.38 g 溶于50ml dH2O，保存于4℃

3).1M 乙酰丁香酮：0.196 g，加DMSO至1 ml，可分裝成小劑量，存于-20℃。

二、實驗步驟：

1.將檢測成功的農(nóng)桿菌菌液過夜擴搖，28℃,200rpm；

2.取1-1.5 ml 菌液，加到滅菌的1.5ml離心管中；

3.1000 g，10 min，沉淀菌體(室溫)，去上清，加1 ml 滲透液，懸浮菌體；

4.重復(fù)步驟3，進一步除去少量的抗生素；

5.取少量懸浮菌液稀釋10倍，測定OD600值，并乘以10，作為懸浮菌液的OD600值；注：如果懸浮菌液的OD600值在1.5-2.0之間，說明有大量的死菌細胞，將降低轉(zhuǎn)化的效率。

6.確定懸浮菌液對滲透液的滴定度，計算稀釋系數(shù)，使最終懸浮菌液(用于侵染)為0.5-5.0 ml，OD600為0.01-0.1，通常0.5-1.0 ml的最終懸浮菌液就能滿足侵染了；

如：需要OD600=0.1的500 ul最終懸浮菌液，而測定的懸浮菌液的OD600=0.4，則最終懸浮菌液中，懸浮菌液的用量為(0.1*500)/0.4=125 ul，則需要滲透液為375 ul。

7.在1.5ml離心管中，配好最終懸浮菌液，準備侵染；

8.侵染前，將煙草放于白色熒光燈下1 h，使其氣孔打開；

9.選擇倒三葉和倒四葉，用于侵染(于兩葉脈之間侵染)，一株選兩葉，侵染一種菌液；

10.用去掉針頭的注射器，輕柔地摩擦待轉(zhuǎn)葉片的背部(0.5 cm2)，或用小針頭刺穿，以去除其蠟質(zhì)層；

11.侵染前，用記號筆標記待轉(zhuǎn)區(qū)域；

12.將第7步中的最終懸浮菌液吸入1ml去針頭的注射器中

13.將注射器對著葉片背面的待轉(zhuǎn)區(qū)域，一手按著葉片上面，另一手輕輕推動活塞，直到看到液體擴散，再侵染其他部位，侵染后，用記號筆圈定侵染區(qū)域；

14.將侵染后的煙草放回培養(yǎng)室

15.2-3天后：

1).亞細胞定位實驗：切掉侵染區(qū)域，制片，熒光顯微鏡觀察；

2).啟動子GUS活性：GUS染色，75%酒精脫色，觀察結(jié)果。

參考文獻：Nature Protocols, 2006: 2019-2025.

第五篇：細胞實驗教案1（最終版）

細胞生物學實驗教案

實驗一細胞核與線粒體的分級分離

一、實驗?zāi)康?/p>

了解差速離心法分離細胞器的原理，以及練習使用差速離心法分離哺乳動物的細胞核與線粒體。

二、實驗原理

細胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不相同，根據(jù)這一原理，常用不同轉(zhuǎn)速的離心法，將細胞內(nèi)各種組分分級分離出來。分離細胞器最常用的方法是將組織制成勻漿，在均勻的懸浮介質(zhì)中用差速離心法進行分離，其過程包括組織細胞勻漿、分級分離和分析三步，這種方法已成為研究亞細胞成分的化學組成、理化特性及其功能的主要手段。勻漿(Homogenization)低溫條件下，將組織放在勻漿器中，加入等滲勻漿介質(zhì)(即0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣)進行破碎細胞使之成為各種細胞器及其包含物的勻漿。分級分離(Fractionation)由低速到高速離心逐漸沉降。先用低速使較大的顆粒沉淀，再用較高的轉(zhuǎn)速，將浮在上清液中的顆粒沉淀下來，從而使各種細胞結(jié)構(gòu)，如細胞核、線粒體等得以分離。由于樣品中各種大小和密度不同的顆粒在離心開始時均勻分布在整個離心管中，所以每級離心得到的第一次沈淀必然不是純的最重的顆粒，須經(jīng)反復(fù)懸浮和離心加以純化。分析 分級分離得到的組分，可用細胞化學和生化方法進行形態(tài)和功能鑒定。

三、細胞核的分離提取(一)操作步驟

1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結(jié)締組織)盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。

2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。

3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動研磨3～5次，用3層紗布過濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標記，自然干燥。

4．將裝有濾液的離心管配平后，放入普通離心機，以2500rpm，離心15分鐘；(1)緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中，待分離線粒體用；(2)同時涂一張上清液片②做好標記，自然干燥；(3)余下的沉淀物進行下一步驟。5．用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液懸浮沉淀物，以2500rpm離心15分鐘棄上清，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上，涂片③，自然干燥。

6．將①、②、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。

(二)結(jié)果

分別于高倍鏡下觀察三張涂片，描述鏡下所見。

四、高速離心分離提取線粒體(一)操作步驟

1．將裝有上清液的高速離心管，從裝有冰塊的燒杯中取出，配平后，以17000rpm離心20分鐘，棄上清，留取沉淀物。

2．加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化鈣液lml，用吸管吹打成懸液，以17000rpm離心20分鐘，將上清吸入另一試管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液混勻成懸液(可用牙簽)。

3．取上清液和沉淀物懸液，分別滴一滴于干凈載玻片上(分別標記④、⑤涂片)，各滴一滴0.02％詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鐘。(二)結(jié)果

油鏡下觀察，顆粒狀的線粒體被詹納斯綠B染成藍綠色。作業(yè)

光鏡或油鏡下觀察制備的細胞核與線粒體樣本。

實驗二細胞膜的通透性觀

一、實驗?zāi)康?/p>

1.掌握細胞膜通透性的實驗方法。

2.觀察并掌握相對分子量、脂溶性大小、電解質(zhì)和非電解質(zhì)對細胞膜通透性的影響。

二、實驗原理

細胞膜在不斷變化的環(huán)境中必須保持自身的穩(wěn)定狀態(tài)才有生存。細胞膜允許一些物質(zhì)通透，又能降低甚至阻止另一些物質(zhì)的通透，所以細胞膜具有選擇通透性。

水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質(zhì)濃度梯度從滲透壓低的一側(cè)通過細胞膜向滲透壓高的一側(cè)擴散，這種現(xiàn)象就是滲透。將紅細胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細胞內(nèi)，可使細胞脹破，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，由不透明的紅細胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細胞膜對各種溶質(zhì)的通透性不同，膜兩側(cè)的滲透壓平衡會發(fā)生改變，也會發(fā)生溶血現(xiàn)象。

在不同相對分子量、脂溶性大小以及電解質(zhì)和非電解質(zhì)等各種溶液中，紅細胞質(zhì)膜對各種溶質(zhì)的滲透性不同。由于溶質(zhì)透入速度不同，溶血時間也不同。因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時間長短可作為測量物質(zhì)進入紅細胞速度的一種指標。本實驗通過觀察紅細胞溶血現(xiàn)象時間的不同來記錄滲入速度，從而測量各種物質(zhì)通透性的差別。

三、實驗用品

1.實驗材料

血液（兔血或雞血，含適量肝素）2.儀器

50mL燒杯、10ml試管、試管架、移液槍及槍尖，標簽紙、吸水紙等。

3.主要試劑

0.17 mol/L氯化鈉

0.17 mol/L氯化銨

0.17 mol/L醋酸銨

0.17 mol/L硝酸鈉

0.17 mol/L草酸銨

0.12 mol/L硫酸鈉 0.32 mol/L葡萄糖

0.32 mol/L甘油

0.32 mol/L乙醇 蒸餾水

四、實驗方法與步驟

1.制備10%血紅細胞懸液：把一份動物血液和10份0.17M氯化鈉溶液加入到50ml燒杯中即為稀釋的血紅細胞懸液（不透明的紅色液體）。

2.溶血實驗：取0.3ml動物紅細胞懸液加入到3ml蒸餾水的試管中，晃動試管使之混合均勻，注意觀察溶液的顏色變化，溶液由不透明 的紅色變?yōu)橥该鞯募t色，紅細胞發(fā)生破裂，造成100%紅細胞溶血，使光線比較容易透過溶液。記錄發(fā)生溶血（可以通過試管壁看清實驗指導(dǎo)上的字為標準）的時間（自加入稀釋血液到溶液變成紅色透明澄清所需的時間）。

3.紅細胞的滲透性：取10支試管，分別加入3ml不同的等滲溶液，做好標記后，分別加入0.3ml紅細胞懸液，輕輕振蕩，仔細觀察是否發(fā)生溶血并記錄發(fā)生溶血的時間。

五、實驗結(jié)果

將不同等滲溶液下的溶血現(xiàn)象列表，分析（是否發(fā)生溶血以及溶血發(fā)生的時間、原因）。

六、思考

脂溶性與水溶性、小分子與大分子、極性與非極性、帶電荷與不帶電荷物質(zhì)，分別是哪一種更容易穿過質(zhì)膜？

七、注意事項

1.溶血現(xiàn)象可用一張有字的白紙來輔助識別，能夠清楚地透過溶液看到溶液后方紙上清晰的字跡時，為完全溶血。

2.因相對分子質(zhì)量大小對膜通透性有影響，所以將溶血時間適當?shù)匮娱L至15min，15min時仍然不溶即判斷為不溶血。3.注意同組實驗過程的同步性，尤其滴加血液的操作要迅速。4.試管中有紅細胞和測試溶液時，不要強力搖晃，以免造成人為的紅細胞破裂。

5.各試管中加入的試劑量一致，血量也要一致。

實驗三 細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與幾種細胞器的觀察

一,實驗?zāi)康?/p>

在普通光學顯微鏡下識別細胞和細胞器的形態(tài)結(jié)構(gòu),掌握生物繪圖的方法.二,實驗原理

細胞在形態(tài)上是多種多樣的,有球形,橢圓形,扁平形,立方形,梭形,星形等.雖然細胞的形狀各異,但是它們卻有共同的基本結(jié)構(gòu)特點,都由細胞膜(動物),細胞壁(植物),細胞質(zhì)和細胞核組成.細胞中的各種細胞器,如線粒體,高爾基體,中心體,核仁,染色體等,一般經(jīng)過一定固定染色處理后,大多數(shù)在光學顯微鏡下是可以看見的.細胞器的形態(tài)結(jié)構(gòu)在普通光學顯微鏡下與電子顯微鏡下所看到的結(jié)構(gòu)有很大的差別.三,實驗材料

洋蔥根尖切片 小白鼠肝切片 兔神經(jīng)節(jié)切片 馬蛔蟲受精卵切片 四,實驗內(nèi)容

(1)洋蔥根尖切片細胞的觀察

先用低倍鏡觀察根尖的縱切面,注意分生區(qū),伸長區(qū),成熟區(qū)細胞的異同,然后再仔細觀察細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),特別要注意細胞的形狀,大小,以及細胞壁,細胞核,核仁,細胞質(zhì),液泡的形態(tài)結(jié)構(gòu).(2)兔神經(jīng)節(jié)細胞切片高爾基體的觀察

先在低倍鏡下找到兔神經(jīng)節(jié)細胞,然后轉(zhuǎn)用高倍鏡觀察,可看到細胞內(nèi)淡黃色的背景上有黃褐色或者透明的細胞核,核的周圍分布著許多深褐色的(硝酸銀鍍?nèi)?高爾基體,呈彎曲的線狀,顆粒狀,少量分散在細胞質(zhì).(3)小白鼠肝細胞切片線粒體的觀察

先用低倍鏡后用高倍鏡觀察,可見到許多肝小葉,每小葉有許多緊密排列成索狀的多角形的肝細胞,細胞中央有大而圓的細胞核.這時,轉(zhuǎn)用油鏡觀察,可見到細胞質(zhì)內(nèi)分布著許多被蘇木精染成深紫色的線粒體,呈顆粒狀和線狀.(4)馬蛔蟲受精卵切片中心體的觀察

取馬蛔蟲受精卵切片,在顯微鏡下找到充滿子宮腔的受精卵,每個馬蛔蟲受精卵外圍有一層較厚的卵膜,膜內(nèi)有寬大的圍卵腔,各圍卵腔內(nèi)有處在不同分裂期的卵細胞.找到分裂中期的細胞,在細胞中央被染成藍色條狀或棒狀的結(jié)構(gòu),這就是染色體.在染色體兩側(cè)可見各有一個較小的,亦被染成藍色的小粒,稱中心粒.在中心粒的周圍可見呈放射狀的星絲.作業(yè)

圖一, 洋蔥根尖細胞圖

圖二, 兔的神經(jīng)細胞中高爾基體 圖三, 小白鼠肝細胞切片示線粒體

圖四, 馬蛔蟲受精卵切片示中心體

生物繪圖應(yīng)注意的問題

1.繪圖前,先要把顯微鏡下的圖象觀察清楚,再根據(jù)繪圖的要求,安排好圖紙的布局,必須養(yǎng)成兩眼打開觀察的習慣.2.繪圖時要注意科學性和真實性,看到什么繪什么,不要隨意增多或減少,圖的各部分比例要恰當.3.要保持圖面的清潔,整齊,盡量少用橡皮擦.圖的各部分標記要清楚,要用細的直線標示在圖的右邊,字體要端正.細胞中的生活部分或明暗部分可用疏密圓點表示.生物繪圖是不能涂的.實驗四細胞的無絲分裂與有絲分裂 一.實驗?zāi)康?/p>

1.通過實驗掌握無絲分裂和有絲分裂的基本過程和生物學意義，并比較它們兩者有何不同。

2.通過觀察洋蔥根尖的有絲分裂標本，掌握細胞有絲分裂前、中、后、末期的染色體形態(tài)變化特點。

3.通過觀察馬蛔蟲受精卵的有絲分裂標本，比較植物細胞和動物細胞有絲分裂過程的不同點。二.實驗物品

1.材料：草履蟲無絲分裂裝片、洋蔥根尖切片、馬蛔蟲裝片，洋蔥根尖。2.器材：

每組配備：眼科鑷和眼科剪各2把，皮頭吸管1支，5ml燒杯2個，載玻片（每人一片），蓋玻片，擦鏡紙，吸水紙，擦鏡液。

3.試劑：1mol/L HCl（60℃預(yù)熱），Carnoy固定液（甲醇3∶1冰醋酸），95%、85%、70%酒精。蒸餾水、改良苯酚品紅染液。三.實驗步驟

(一)草履蟲無絲分裂切片觀察

草履蟲可進行無性生殖（無絲分裂）和有性生殖（接合生殖）。在無性生殖時，可在顯微鏡下看到草履蟲胞體被染成粉紅色，細胞核染成紫紅色。分裂時草履蟲大核向胞體兩端伸長，進而在核的中部向內(nèi)凹陷，呈啞鈴形。然后斷開形成兩個細胞核，同時胞體也隨之延伸，中部出現(xiàn)分裂溝，最后完全分裂成兩個子細胞。(二)洋蔥根尖有絲分裂觀察

1.材料發(fā)根：待根長達2厘米時，切下根尖，浸入Carnoy固定液中4h，分別在95%和85%酒精中各浸泡30 min，最后在70%酒精中保存。（此項實驗前準備）

2.水解：取出根尖放在載玻片上，滴加1mol/L HCl（60℃）于根尖上，水解8 min，蒸餾水水洗3次（將酒精洗去，以利于染色）。

3.染色：切取根尖的乳白色的分生區(qū)，用鑷子輕輕地搗碎，滴一滴改良苯酚品紅染液，染色20 min后，蓋上蓋玻片。

4.壓片：在蓋玻片上面覆蓋一張吸水紙，用拇指垂直壓下，再用鉛筆橡皮頭輕輕敲打，使細胞壓成均勻的薄層（敲打時，勿使蓋玻片移動）。5.觀察：

先在低倍鏡下找出根尖末端，從根尖末端往上依次為根的根冠區(qū)、生長區(qū)和伸長區(qū)（圖18-1）。選擇生長區(qū)的細胞觀察，可見這一部位的細胞染色較深，緊密排列成一行行的四方形。小心移動標本，選擇處于分裂狀態(tài)最多的部位轉(zhuǎn)高倍鏡觀察，便可見許多處于不同分裂時期的細胞。

間期：間期細胞較小，可清晰看到染色均勻的細胞核，核內(nèi)有一個染色較深的圓形小體為核仁。

前期：細胞從間期進入前期時，細胞核膨大，染色質(zhì)逐漸螺旋形成細線狀的染色體。隨著染色體不斷螺旋縮短變粗，可見每條線狀的染色體是由兩條姐妹染色單體組成。前期末，核仁解體，紡綞絲出現(xiàn)，核膜、核仁完全消失。

實驗 雞血細胞的體外融合 【實驗?zāi)康摹?/p>

了解乙二醇（PEG）誘導(dǎo)體外細胞融合的基本原理。

通過PEG誘導(dǎo)雞血細胞之間的融合實驗，初步掌握細胞融合的基本方法?！緦嶒炘怼? 細胞融合（cell fusion）又稱體細胞雜交，是指用人工方法使兩個或兩個以上的體細胞融合成異核體細胞，隨后，異核體同步進入有絲分裂，核膜崩潰，來自兩個親本細胞的基因組合在一起形成只含有一個細胞核的雜種細胞（hybrid cell）。細胞融合技術(shù)是研究細胞遺傳、基因定位、細胞免疫、病毒和腫

瘤的重要手段。依據(jù)融合過程采用的助融劑不同，細胞融合可分為：①病毒誘導(dǎo)的細胞融合，如仙臺病毒（hemagglutinating virus of Japan,HVJ）;②化學因子誘導(dǎo)的細胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）;③電場誘導(dǎo)的細胞融合；④激光誘導(dǎo)的細胞融合。

PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子質(zhì)量的多聚體。PEG可改變各類細胞的膜結(jié)構(gòu)，是兩細胞接觸點處脂類分子發(fā)生疏散和重組，引發(fā)細胞融合。該方法應(yīng)用相對分子質(zhì)量為400～6000的PEG溶液引起細胞的聚集和粘連，產(chǎn)生高頻率的細胞融合。融合的頻率和活力與所用PEG的相對分子質(zhì)量、濃度、作用時間、細胞的生理狀態(tài)與密度等有關(guān)?！緦嶒瀮x器、材料和試劑】

儀器、用具：注射器、刻度離心管、離心機、血細胞計數(shù)板、水浴鍋、滴管、顯微鏡、燒杯、容量瓶、凹面載玻片、蓋玻片、酒精燈等。

材料：成年家雞。試劑

1）0.85%NaCl溶液。

2）GKN液：8.0g NaCl，0.4g KCl，1.77g Na2HPO4·2H2O,0.69g NaH2PO4·H2O,2.0g 葡萄糖，0.01g 酚紅，溶于1000ml重蒸水中。

3）50%（m/V）PEG溶液：

①取50g PEG(相對分子質(zhì)量=4000)放入100ml瓶中，高壓滅菌20min。

②讓PEG冷卻至50～60℃，勿讓其凝固。

③加入50ml預(yù)熱至50℃的GKN液，混勻，置37℃?zhèn)溆谩?）Hanks原液（10×）：

NaCl 80.0g Na2HPO4·12H2O 1.2g

KCl 4.0g KH2PO4 0.6g MgSO4·7H2O 2.0g 葡萄糖 10.0g CaCl2 1.4g 稱取1.4g的CaCl2，溶于30～50ml的重蒸水中。取1000ml的燒杯及容量瓶各一個，先放重蒸水800ml于燒杯中，然后按上述配方順序，逐一稱取藥品。必須在前一藥品完全溶解后，方可加入下一藥品，直到葡萄糖完全溶解后，再將已溶解的CaCl2溶液加入，最后加水至1000ml。5）Hanks液：

Hanks原液 100ml 重蒸水 896ml 0.5%酚紅 4ml 配好的Hanks液，分裝包扎貼上標簽，經(jīng)過滅菌后，4℃保存。6）詹納斯綠染液?！痉椒ㄅc步驟】 雞血細胞的獲得

從家雞的翼根靜脈用注射器采血，注入試管后，迅速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制成抗凝全血。雞血細胞儲存液的制備

在抗凝全血的試管中，加入4倍體積的0.85%NaCl溶液，制成紅細胞儲備液，置于4℃冰箱內(nèi)可供一周內(nèi)使用。雞血細胞懸液的制備

取雞血細胞儲備液200μl，加入800μl 0.85%NaCl溶液，混勻后，1200r/min離心5min，棄去上清液，再加入1000μl 0.85%NaCl溶液按上述條件離心一次。最后，棄去上清液，加入2000μl的GKN溶液制成雞血細胞懸液。計數(shù)

取100μl雞血細胞懸液，加700μl的GKN溶液進行稀釋，在血細胞計數(shù)板上計數(shù)。若細胞濃度過大，用GKN溶液稀釋至177×107個/ml 左右。雞血細胞的收集

吸取200μl雞血細胞懸液放入離心管中，加入800μl Hanks液混勻，1000r/min離心5min。棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細胞團塊松散。PEG誘導(dǎo)細胞融合 吸取100μl 37℃的50%PEG溶液，慢慢沿著離心管壁逐滴加入，邊加邊輕搖離心管，使PEG與細胞混勻，然后在37℃水浴中靜置2min。終止PEG作用

緩慢加入1mlHanks液，輕輕吹打混勻，于37℃水浴中靜置5min。制備細胞懸液

用吸管輕輕吹打細胞團數(shù)次使細胞團分散，1000r/min離心5min，使細胞完全沉降。棄去上清液，加Hanks液，再離心一次，棄多數(shù)上清，留少許溶液，混勻。滴片、染色和鏡鑒

用鑷子取預(yù)先冰凍的干凈載玻片，迅速滴上2—3滴細胞懸浮液，用玻片從載玻片的一邊推到另一邊，使細胞分散均勻，然后置酒精燈上微微加熱干燥。

將晾干的玻片放在潔凈的玻板上，用Giemsa染液[Giemsa原液用10倍體積的1/15mol/L磷酸緩沖液（PH7.4）稀釋]染色30min，自來水沖洗，空氣干燥。在顯微鏡下觀察細胞融合的情況。

計算細胞融合率

細胞融合率是指在顯微鏡的視野內(nèi)，已發(fā)生融合的細胞其細胞核總數(shù)與視野內(nèi)所有細胞（包括已融合細胞）的細胞核總數(shù)之比，通常以百分比表示，而且要進行多個視野測定；進行統(tǒng)計

分析。

【注意事項】

本實驗中，用0.85%NaCl液代替了Alsver液。實驗證實，用Alsver液保存的紅細胞時間較短，而改用生理鹽水則明顯延長紅細胞的保存時間且不影響細胞融合率。高Ca2+濃度能夠提高細胞融合率。有些抗凝劑中含有和Ca2+結(jié)合的化合物，比如Alsver液中檸檬酸鈉的酸根與血液中的Ca2+形成難解離的可溶性絡(luò)合物，導(dǎo)致血液中的Ca2+濃度降低，故起抗凝血作用，同時會造成細胞的融合率較低。

必須嚴格控制PEG的作用時間，通常處理細胞1～2min。PEG和二甲基亞砜（DMSO）并用，可以提高細胞的融合率。

融合細胞繼續(xù)培養(yǎng)就變成了一個雜種細胞，它的染色體不是兩核的倍數(shù)，因為一些染色體會逐漸的消失?！咀饔谩?/p>

畫出觀察到的融合細胞，并計算融合率。試說明細胞融合的關(guān)鍵。