第一篇：孕酮檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件3 孕酮檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對孕酮檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對孕酮檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍 從方法學(xué)考慮，在本文中孕酮檢測試劑是指采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，以競爭法為基本原理，利用全自動、半自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，在醫(yī)學(xué)實驗室對人體樣本中孕酮的含量進行體外定量分析的試劑。依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法修正案》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第30號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），孕酮檢測試劑管理類別為Ⅱ類醫(yī)療器械，分類編碼為6840。

本指導(dǎo)原則不適用于：

（一）單獨申請注冊的孕酮校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

（二）化學(xué)發(fā)光免疫分析法原理之外的其他孕酮檢測試劑。

二、注冊申報材料要求 （一）綜述資料 孕酮是一種重要的孕激素，屬于類固醇激素，相對分子量 314.5，主要由卵巢黃體和妊娠期胎盤生成，是睪酮、雌激素及腎上腺皮質(zhì)激素的前體。正常男性和女性卵泡期產(chǎn)生的孕酮水平很低，分泌入血后主要結(jié)合于白蛋白和性激素結(jié)合蛋白在體內(nèi)進行循環(huán)。孕酮水平與黃體的發(fā)育和萎縮有關(guān)。

孕酮的主要功能是使子宮為受精卵的著床做好準(zhǔn)備，并維持妊娠。在月經(jīng)周期的卵泡期，孕酮水平很低。排卵之后，由黃體產(chǎn)生的孕酮迅速升高，并在排卵后5—7天達到濃度最大值10ng/mL—20ng/mL，使子宮內(nèi)膜從增生狀態(tài)轉(zhuǎn)為分泌狀態(tài)。若未受孕，在月經(jīng)周期的最后4天黃體萎縮，孕酮濃度降低。若受孕，黃體不會凋落，繼續(xù)分泌孕酮，使孕酮保持在相當(dāng)于黃體中期的水平，并一直持續(xù)到妊娠的第六周。在懷孕期間，胎盤逐漸成為孕酮的主要來源，濃度從懷孕前3個月的10ng/mL—50ng/mL升高到7—9個月的50ng/mL—280ng/mL。臨床研究證明孕酮在非孕期女性體內(nèi)發(fā)揮著促進排卵和維持黃體的正常功能。如果黃體產(chǎn)生的孕酮不足，可能說明黃體功能不足，而黃體功能不足與不孕及早期流產(chǎn)有關(guān)。

血中孕酮升高可見于以下情況：（1）觀察婦女排卵的時間及黃體酮的生成情況：在排卵的－1、0、+1天，孕酮含量成倍增加，提示為有排卵。（2）正常妊娠、雙胎和多胎妊娠時孕酮合成量明顯增加，血液中孕酮水平相對升高。（3）妊娠毒血癥、先兆子癇、葡萄胎及原發(fā)性高血壓時，孕酮含量也會升高。

血中孕酮含量降低見于以下情況：（1）先兆流產(chǎn)、宮外孕、早產(chǎn)、閉經(jīng)、不孕癥。（2）黃體功能不全、卵巢黃體發(fā)育不全時，孕酮含量相應(yīng)降低。（3）腎上腺、甲狀腺功能嚴(yán)重失調(diào)也可影響卵巢功能，使排卵發(fā)生障礙，孕酮含量也會相應(yīng)降低。

孕酮的檢測方法主要為酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法，化學(xué)發(fā)光免疫分析法是目前臨床檢測孕酮應(yīng)用較多的檢測方法。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、生物安全性方面的說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同方面進行介紹，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）1.主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實驗驗證研究資料 檢測試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗資料。如抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并對其工藝有相關(guān)的驗證。同時確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；

如為申請人外購，則應(yīng)詳述其名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗報告，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。供貨商應(yīng)相對固定。

其他主要原材料的選擇及驗證資料，申請人應(yīng)詳述每一原材料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原材料作為主要原材料的依據(jù)，確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。若為外購，應(yīng)提供外購方名稱并提交外購方出具的檢驗報告。

2.質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的原料選擇、制備、定值過程及實驗資料 3.校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。申請人應(yīng)根據(jù)GB/T21415—2008/ ISO17511:2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)，以及不確定度等內(nèi)容。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示；

2.反應(yīng)原理介紹；

3.檢測方法的介紹：含樣本采集、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、測試步驟、結(jié)果計算等；

4.反應(yīng)體系研究：含樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等的研究資料；

5.不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。應(yīng)當(dāng)對多批（至少3批）產(chǎn)品進行性能評估。對于孕酮檢測試劑，建議著重對以下分析性能進行研究。

1.通過重復(fù)性和批間差考察精密度 1.1重復(fù)性 在重復(fù)性條件下，對濃度（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L的樣品分別重復(fù)測定10次，計算10次測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），根據(jù)公式（1）得出變異系數(shù)（CV），其測量結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%（儀器自動操作法）或不大于15%（手工操作法）。

CV=SD/×100%........................................（1）1.2批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。其測量結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

2.準(zhǔn)確度性能評估 按以下優(yōu)先順序選擇準(zhǔn)確度性能評估方法：

2.1相對偏差 2.1.1用可用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)/有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑（盒）進行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準(zhǔn)確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

Bi =（Xi －T）/T………………………（2）式中：Xi—單次測試結(jié)果；

T—有證參考物質(zhì)標(biāo)示值或各濃度人源樣本定值；

Bi—單次相對偏差。

注：首選國家參考物質(zhì)，如無國家參考物質(zhì)可選用國際參考物質(zhì)。

2.1.2對企業(yè)參考品進行檢測 用參考方法定值的企業(yè)參考品對試劑（盒）進行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準(zhǔn)確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.2回收實驗 選擇接近參考區(qū)間的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3—4份，在其中2—3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標(biāo)液制備待回收分析樣本，加入體積不大于原體積的10%，制成2—3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進行測定，通常對樣本進行3次重復(fù)測定，計算均值，取其均值進行下述計算。

回收率應(yīng)在85%—115%范圍內(nèi)。用公式（3）計算回收率：

…………………………………（3）式中：R-回收率；

V-加入待測物標(biāo)準(zhǔn)液的體積；

V0-基礎(chǔ)樣本的體積 C-樣本加入待測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后的檢測濃度；

C0-基礎(chǔ)樣本的檢測濃度；

Cs-待測物標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。

2.3比對實驗 參考相關(guān)國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行準(zhǔn)確度評估。

用不少于40個覆蓋檢測濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，以申請人指定的試劑（盒）作為比對方法，每份樣品按待測試劑（盒）及比對試劑（盒）的操作方法分別檢測。線性回歸計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（r）、斜率及偏差，結(jié)果應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

3.檢出限性能評估 申請人需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息。根據(jù)提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進行測定，每份樣本測定5次。對測量結(jié)果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為所提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。

3.1低于申請人提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果數(shù)量應(yīng)小于等于3個；

3.2無高于3.18nmol/L的測量結(jié)果。

4.線性范圍性能評估 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度。其中，低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復(fù)測定最少2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)（r）。

5.特異性性能評估 推薦參考《WS/T416-2013 干擾實驗指南》或相關(guān)國際、國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行特異性評估。孕酮的干擾物質(zhì)選取可參見表1，企業(yè)可在不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下根據(jù)實際情況選擇適用的干擾物質(zhì)進行評估干擾程度。

5.1溶血（血紅蛋白）、脂血（甘油三酯）、黃疸（膽紅素）等干擾因素對檢測結(jié)果的影響；

5.2樣本中其他可能干擾試劑反應(yīng)的物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響；

5.3資料中所提到的干擾物質(zhì)，其干擾程度均不應(yīng)使用模糊的描述方式，而應(yīng)細(xì)化到干擾量，并提供相應(yīng)的實驗數(shù)據(jù)予以支持。

表 1 孕酮干擾物參考表 序號 干擾物質(zhì) 序號 干擾物質(zhì) 序號 干擾物質(zhì) 1 11-去氧皮質(zhì)酮 6 17β-雌二醇 11 克羅米酚 2 孕烯醇酮 7 雌酮 12 11-脫氧皮質(zhì)醇 3 皮質(zhì)醇 8 雌三醇 13 保泰松 4 皮質(zhì)酮 9 醛甾酮 14 睪酮 5 17a-羥基孕酮 10 丹那唑 15 強的松龍 評估方法：設(shè)置對照樣本組，使孕酮目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），重復(fù)測定（n≥7）并計算平均值（M）與標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。設(shè)置待測樣本組，分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮的目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），待測樣本測量結(jié)果的平均值（n≥2）應(yīng)在對照樣本組孕酮目標(biāo)濃度M±2SD范圍內(nèi)。其中，所添加潛在干擾物與含有孕酮的樣本之間體積比例為不大于1：9，對照樣本組的基質(zhì)盡可能與待測樣本組樣本的基質(zhì)一致。

6.校準(zhǔn)品及質(zhì)控品 參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的瓶間均勻性進行評價。

7.其他需注意問題 7.1對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有適用機型的性能評估資料。

7.2如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料 應(yīng)提交驗證參考值（區(qū)間）所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。參考區(qū)間可參考文獻資料，應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，樣本來源應(yīng)考慮不同性別、生理周期等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。建議參考相關(guān)國際、國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估文件開展評估。

孕酮參考區(qū)間的確定可以按性別（男性、女性）及女性的不同生理周期。如：非孕正常女性卵泡期、黃體期、絕經(jīng)后 ；

孕早期、中期、晚期等，以下列舉具有代表性的國內(nèi)外廠家參考區(qū)間僅供參考（見表2）。參考值研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng)說明。

表2 各廠家參考區(qū)間篩選分組示例 廠家 篩選分組 A ng/mL B ng/mL C ng/mL D ng/mL 男性 0.27—1.22 0.2—1.4 0.026—2.75 0.1—2.0 卵泡期 0.15—1.39 0.2—1.5 0.4—2.3 0.2—2.40 排卵期 / 0.8—3.0 1.2—18.8 0.5—3.60 黃體期 3.33—25.55 1.7—27 / 6.0—20.5 絕經(jīng)期 ND—0.73 0.1—0.8 0.4—1.4 0.1—1.8 早期妊娠 0—12周 / / 15.8—46 / 中期妊娠13—28周 / / 15.6—74 / 晚期妊娠 29—40 周 / / 45—143 /（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑穩(wěn)定性研究主要包括注冊單元中所有組成部分的效期穩(wěn)定性及開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等，如有需要可增加運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性研究等。如試劑需要配制，還應(yīng)對配制后試劑的穩(wěn)定性進行研究。企業(yè)可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。常用的穩(wěn)定性研究方案為證實試劑在經(jīng)過被作用于指定條件后仍能證明主要性能指標(biāo)要求與未被作用于指定條件的試劑性能一致。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于效期穩(wěn)定性和開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期/開封效期后的研究資料。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行穩(wěn)定性驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的保存穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果分別在說明書《儲存條件及有效期》和《樣本要求》兩項中進行詳細(xì)說明。樣本在不同儲存條件下的穩(wěn)定性期限若有相關(guān)文獻中已明確說明，亦可作為依據(jù)。

（七）臨床評價資料 此項目已經(jīng)列入《關(guān)于新修訂免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號）中免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，申請人可按照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）要求進行臨床評價。如無法按要求進行臨床評價，應(yīng)進行臨床試驗。

對于通過臨床試驗方式進行臨床評價時，臨床試驗資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》中臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。臨床試驗中的基本要求如下：

1.研究方法 選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能相近的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為對比試劑。

2.臨床試驗機構(gòu)的選擇 應(yīng)選擇不少于兩家（含兩家）已經(jīng)在備案系統(tǒng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗機構(gòu)，臨床試驗機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)充分熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準(zhǔn)、保養(yǎng)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

開展體外診斷試劑臨床試驗，申請人應(yīng)當(dāng)按照試驗用體外診斷試劑的類別、風(fēng)險、預(yù)期用途等特性，組織制定科學(xué)、合理的臨床試驗方案。一般應(yīng)當(dāng)包括以下內(nèi)容：

3.1一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關(guān)信息、申請人相關(guān)信息等）；

3.2臨床試驗的背景資料；

3.3試驗?zāi)康模?/span>

3.4試驗設(shè)計；

3.5評價方法；

3.6統(tǒng)計方法；

3.7對臨床試驗方案修正的規(guī)定；

3.8臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本（如有）；

3.9數(shù)據(jù)處理與記錄保存; 3.10其他需要說明的內(nèi)容。

4.研究對象的選擇 4.1總體要求 選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群/在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，孕酮檢測樣本通常為血清，總體樣本數(shù)不少于200例，參考區(qū)間范圍外的樣本數(shù)不少于30%。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍。如果樣本類型包含血漿樣本，在上述樣本例數(shù)基礎(chǔ)上再增加100例與血清樣本的同源樣本比對，參考區(qū)間范圍外的樣本數(shù)不少于30%。建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的樣本，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風(fēng)濕因子陽性樣本及其他可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本等。

4.2非孕女性不同生理周期的考慮 非懷孕正常女性在不同的生理期，其孕酮的含量也不同，樣本選擇時，應(yīng)含有一定數(shù)量的各生理周期的樣本。如:卵泡期、排卵期、黃體期、絕經(jīng)期。

4.3懷孕女性不同孕期的考慮 選取一定數(shù)量的各孕期樣本，如：孕0—12周、孕13—28周、孕29—40周。

4.4樣本數(shù)量的考慮 申報的樣本類型均應(yīng)在臨床試驗中進行驗證。如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；

變更抗體等主要原材料的供應(yīng)商、參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

4.5樣本類型的考慮 血清應(yīng)明確存貯條件、可否凍融等。

血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、離心速度及時間要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

5.統(tǒng)計學(xué)分析 對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、Bland-Altman分析、線性回歸、配對t檢驗等。建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.結(jié)果差異樣本的驗證 對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進行復(fù)核，以便對臨床試驗結(jié)果進行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說明理由。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫 根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

申請人或臨床試驗牽頭單位應(yīng)對各臨床試驗機構(gòu)的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結(jié)報告。臨床試驗報告的格式及內(nèi)容如下：

7.1首篇 首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應(yīng)包含該部分內(nèi)容。

7.1.1封面標(biāo)題 包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機構(gòu)（蓋章）、統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。

7.1.2目錄 列出整個臨床試驗報告的內(nèi)容目錄和對應(yīng)頁碼。

7.1.3研究摘要 對臨床試驗情況進行簡單的介紹。

7.1.4試驗研究人員 列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責(zé)及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人、臨床試驗報告的撰寫人。

7.1.5縮略語 臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。

7.2正文內(nèi)容和報告格式 7.2.1基本內(nèi)容 介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關(guān)的背景情況，包括：

7.2.1.1被測物的來源、生物及理化性質(zhì)；

7.2.1.2臨床預(yù)期使用目的，所針對的目標(biāo)適應(yīng)癥人群，目前針對該適應(yīng)癥所采用的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等；

7.2.1.3所采用的方法、原理、技術(shù)要求等；

7.2.1.4國內(nèi)外已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的應(yīng)用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構(gòu)間的合作關(guān)系。

7.2.2研究目的 說明本臨床試驗所要達到的目的。

7.2.3試驗管理 對試驗管理結(jié)構(gòu)的描述。

管理結(jié)構(gòu)包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質(zhì)量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。

7.2.4試驗設(shè)計 7.2.4.1試驗總體設(shè)計及方案的描述 試驗的總體設(shè)計和方案的描述應(yīng)清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應(yīng)詳細(xì)敘述。應(yīng)包括：

7.2.4.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

7.2.4.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；

7.2.4.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

7.2.4.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn) 7.2.4.2試驗設(shè)計及試驗方法選擇 試驗設(shè)計中應(yīng)包括以下內(nèi)容：

7.2.4.2.1樣本量及樣本量確定的依據(jù)。

7.2.4.2.2樣本選擇依據(jù)、入選標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)。

7.2.4.2.3樣本采集、保存、運輸方法等。

7.2.4.2.4對比試劑的確立。

7.2.4.2.5臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件，對比試劑的注冊情況。考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

7.2.4.2.6質(zhì)量控制方法。對質(zhì)量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；

7.2.4.2.7臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法。對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

定量值相關(guān)性和一致性分析：用相關(guān)分析、Bland-Altman分析、線性分析、配對t檢驗等進行定量值相關(guān)性和一致性分析，應(yīng)給出相關(guān)系數(shù)、95%一致性界限、回歸分析的擬合方程y=ax+b和R2、t值、p值、95%（99%）置信區(qū)間等統(tǒng)計結(jié)果，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

7.2.4.2.8具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

7.2.4.2.9試驗過程中方案的修改 一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應(yīng)說明，對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進行詳細(xì)闡述并論證其對整個研究結(jié)果評價的影響。

7.2.5臨床試驗結(jié)果及分析 7.2.6討論和結(jié)論。對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

7.3有關(guān)臨床試驗中特別情況的說明 7.4附件 7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準(zhǔn)情況。

7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復(fù)核者簽字，臨床試驗機構(gòu)蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

7.4.3主要參考文獻 7.4.4主要研究者簡歷 7.4.5申請人需要說明的其他情況等。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料 申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求 產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》及《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。產(chǎn)品注冊單元劃分應(yīng)符合《醫(yī)療器械注冊單元劃分指導(dǎo)原則》的要求。如已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則技術(shù)要求中不得低于其相關(guān)要求。

作為定量檢測試劑，孕酮檢測試劑的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、溯源性、準(zhǔn)確度、檢出限、線性范圍、重復(fù)性、批間差、特異性、穩(wěn)定性。各性能指標(biāo)的檢驗方法應(yīng)清晰明了且具可操作性。

下面就技術(shù)要求中涉及的相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分說明 明確試劑的組成、組成成分及規(guī)格。

注1：如不同包裝規(guī)格適用不同的儀器型號，則應(yīng)在劃分說明中標(biāo)明。

注2：如試劑盒注冊單元中包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，校準(zhǔn)品質(zhì)控品可選購，但不能單獨銷售。包裝規(guī)格中可分別設(shè)計含校準(zhǔn)品/質(zhì)控品和不含校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的兩種包裝規(guī)格。

2.性能指標(biāo) 2.1外觀 外觀應(yīng)做如下要求：

2.1.1試劑盒各組分組成、性狀；

2.1.2試劑盒內(nèi)外包裝完整，文字符號標(biāo)識清晰。

2.2溯源性 應(yīng)根據(jù)GB/T21415及有關(guān)規(guī)定提供試劑盒校準(zhǔn)品的來源、賦值過程以及不確定度等內(nèi)容。

2.3檢出限 應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.4線性范圍 應(yīng)規(guī)定線性范圍，在所規(guī)定的線性范圍內(nèi)，試劑盒相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)≥0.9900.2.5 重復(fù)性 使用同一批試劑盒測試同一份樣本，其測試結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%。

2.6批間差 用三批試劑盒測試同一份樣本，其測試結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

2.7 準(zhǔn)確度 應(yīng)規(guī)定準(zhǔn)確度要求。

注：按相對偏差、比對實驗、回收實驗優(yōu)先順序。

2.8特異性 分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%，潛在干擾物濃度符合企業(yè)規(guī)定要求），各個樣本測量結(jié)果的均值應(yīng)在目標(biāo)濃度平均值（M）±2標(biāo)準(zhǔn)差（SD）范圍內(nèi)。

2.9穩(wěn)定性 根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇以下方法進行驗證。

2.9.1應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品有效期，取到效期后一定時間內(nèi)的樣品檢測試劑檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性、特異性應(yīng)符合規(guī)定要求。

2.9.2根據(jù)所聲稱的熱穩(wěn)定性條件取有效期內(nèi)的試劑盒進行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性，特異性，結(jié)果應(yīng)符合要求。

3.檢驗方法 3.1外觀 目測檢查，應(yīng)符合2.1的要求。

3.2溯源性 應(yīng)根據(jù)GB/T21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量及有校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》要求提供試劑盒校準(zhǔn)品的來源及溯源的賦值過程和不確定度的內(nèi)容2.2的要求。

3.3檢出限 需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息。根據(jù)所提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進行測定，每份樣本測定5次。對測量結(jié)果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。

3.3.1低于提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果數(shù)量應(yīng)小于等于3個；

3.3.2無高于3.18nmol/L的測量結(jié)果。

3.4線性范圍 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復(fù)測定最少2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)（r），所得結(jié)果應(yīng)符合2.4的要求。

3.5重復(fù)性 使用同一批號試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算10次測量濃度結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.5的要求。

3.6批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.6的要求。

3.7準(zhǔn)確度 方法見（四）分析性能評估資料部分，結(jié)果符合2.7的要求。

3.8特異性 方法見（四）分析性能評估資料部分，結(jié)果符合2.8的要求。

3.9穩(wěn)定性 3.9.1取到效期后一定時間內(nèi)的產(chǎn)品，按照檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性、特異性檢測方法進行檢測，應(yīng)符合2.9.1的要求。

3.9.2熱穩(wěn)定性 根據(jù)所聲稱的熱穩(wěn)定性條件取有效期內(nèi)的試劑盒進行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性，特異性，應(yīng)符合2.9.2的要求。

如注冊單元中包含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，其性能指標(biāo)的檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)當(dāng)包括準(zhǔn)確度、均勻性檢驗方法的詳細(xì)描述。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告 根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行注冊檢測。承接注冊檢測的機構(gòu)在出具檢測報告的同時，應(yīng)出具相應(yīng)的預(yù)評價意見，預(yù)評價意見在提交注冊資料時應(yīng)隨注冊檢測資料時一并提交。

（十一）產(chǎn)品說明書 產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）和《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，以申報產(chǎn)品為基礎(chǔ)，以研究結(jié)果為依據(jù)，對孕酮測定試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】 1.1通用名稱：試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：孕酮測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。名稱中不應(yīng)當(dāng)出現(xiàn)定性/定量等內(nèi)容。

1.2英文名稱（適用進口產(chǎn)品）。如不適用，可刪除。

2．【包裝規(guī)格】 2.1應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規(guī)格一致；

2.2應(yīng)能清晰地描述出試劑盒的構(gòu)成，不得出現(xiàn)試劑盒的組成成分與包裝規(guī)格中描述不一致的情況。

2.3應(yīng)注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××mL。

2.4如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型，則應(yīng)同時明確適用機型。

2.5單一包裝規(guī)格，可以不加標(biāo)點符號；

多個包裝規(guī)格，按照分隔層次分別適用頓號、逗號、分號進行區(qū)分，以句號結(jié)束。不得采用列表形式進行描述。

3.【預(yù)期用途】 3.1第一段說明試劑盒用于體外定量測定血清或血漿中的孕酮的含量。

3.2第二段應(yīng)強調(diào)臨床適應(yīng)癥（可使用不同的描述方式），參考（一）綜述資料部分。

4.【檢驗原理】 應(yīng)詳細(xì)闡明試劑的工作原理，例如采用基于磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的競爭法反應(yīng)原理為：樣本中的孕酮和磁微粒包被的孕酮抗原競爭與吖啶酯標(biāo)記的抗體結(jié)合，樣本中的孕酮越多，吖啶酯標(biāo)記的抗體與固相磁珠包被的孕酮抗原結(jié)合的越少，樣本中的孕酮含量與光量子數(shù)成反比。

5.【主要組成成分】 5.1說明試劑盒包含組分的名稱信息，如果對于正確的操作或使用者理解其用途很重要，應(yīng)詳細(xì)說明。對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.2如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品也應(yīng)對主要組成成分及生物學(xué)來源進行相應(yīng)說明，校準(zhǔn)品需注明其定值及溯源性。溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號。

如：校準(zhǔn)品：校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW09199。

質(zhì)控品需注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6．【儲存條件及有效期】 6.1對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應(yīng)對復(fù)溶后的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。如試劑需要配制，則應(yīng)對配制后的試劑的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。

6.2保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。小于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以日或小時為單位，大于或等于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以月為單位。

6.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

6.4對于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。

6.5生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期（可見標(biāo)簽）。

7.【適用機型】 注明所適用的儀器類型，應(yīng)細(xì)化到型號。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以指導(dǎo)用戶操作。

如適用儀器為酶標(biāo)儀則需給出對酶標(biāo)儀配置的要求，如適用儀器為非通用的儀器則需寫明其具體型號，避免“系列”。

8.【樣本要求】 　 應(yīng)在以下幾方面進行說明：

8.1適用的樣本類型。

8.2在樣本收集過程中的特別注意事項。

8.3為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等。

8.4已知的干擾物。

8.5能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法。

9.【檢驗方法】 詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序。

9.2校準(zhǔn)程序（如有）：應(yīng)說明校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、推薦的校準(zhǔn)周期，以及何種情況須重新校準(zhǔn)。

9.3質(zhì)量控制程序：應(yīng)說明質(zhì)控品的使用方法、注意事項、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.4試驗結(jié)果的計算或讀取，包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說明。

10.【參考區(qū)間】 簡要參考區(qū)間的確定方法。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及孕期等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

應(yīng)與資料（五）參考區(qū)間確定性資料數(shù)據(jù)一致。

11．【檢驗結(jié)果的解釋】 應(yīng)根據(jù)其臨床意義對可能出現(xiàn)的結(jié)果進行合理的解釋。

說明試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查等情況綜合考慮。

說明在何種情況下應(yīng)對樣本進行重復(fù)測試，以及在重復(fù)測試時需要采取的樣本處理方式。

12.【檢驗方法的局限性】 明確常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，企業(yè)可根據(jù)自身情況對特殊干擾物進行說明，并注明可接受的最高限值，不應(yīng)使用模糊的描述方式。不建議使用存在明顯干擾物如乳糜、黃疸等樣本。

試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)，為達到診斷目的，此檢測結(jié)果要與臨床檢查、病史和其他的檢查結(jié)果結(jié)合適用。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 與技術(shù)要求中主要性能指標(biāo)保持一致，孕酮產(chǎn)品主要性能指標(biāo)可包含：

13.1檢出限；

13.2線性范圍；

13.3重復(fù)性；

13.4準(zhǔn)確度；

13.5特異性。

14.【注意事項】 14.1必要內(nèi)容，如：“本品僅用于體外診斷”。

14.2如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。說明不同分析系統(tǒng)間的檢測結(jié)果可能存在的差異。

說明對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

14.3說明檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書提供的操作步驟及相關(guān)實驗室規(guī)范要求進行操作，否則可能對結(jié)果造成的影響。

14.4其他需要說明的注意事項。

15.【標(biāo)識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。可參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：YY/T0466.1—2016。

16.【參考文獻】 注明引用參考文獻，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

17.【基本信息】 17.1境內(nèi)體外診斷試劑 17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑 按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】 應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。

19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】 應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點 （一）關(guān)注檢驗報告中檢測結(jié)果的報告單位，孕酮的結(jié)果報告單位分為兩種：ng/mL和nmol/L兩個單位的轉(zhuǎn)換公式為。ng/mL×3.18=nmol/L。

（二）關(guān)注產(chǎn)品技術(shù)要求及說明書中性能指標(biāo)的一致性。

（三）關(guān)注臨床試驗所采用的樣本類型、樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（四）由于孕酮在不同時期的參考范圍不同，因此需關(guān)注臨床評價資料中是否涵蓋了不同時期的臨床數(shù)據(jù)，并重點關(guān)注參考范圍研究資料。

（五）說明書中預(yù)期用途、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)、抗干擾能力等描述應(yīng)分別與臨床評價資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考范圍研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

四、名詞解釋 （一）化學(xué)發(fā)光免疫分析法。化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的輻射光的強度來確定物質(zhì)含量的分析方法。化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用化學(xué)發(fā)光相關(guān)的物質(zhì)標(biāo)記抗體或抗原，與待測的抗原或抗體反應(yīng)后，經(jīng)過分離游離態(tài)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，加入化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的其他相關(guān)物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，進行抗原或抗體的定量或定性檢測。

（二）準(zhǔn)確度（Accuracy）。一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

（三）分析特異性（Analytical Specificity）。測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。

（四）線性（Linearity）。在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

（五）精密度（Precision）。在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)方法得到的測量精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

（六）參考物質(zhì)（Reference Material）。具有一種或多種足夠均勻和很好地確定了特性，用于校準(zhǔn)測量裝置、評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質(zhì)。對于該項目，指國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、可溯源至IFCC糖化血紅蛋白參考方法或標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、可溯源至NGSP參考方法或標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

五、指導(dǎo)原則編寫單位和人員 吉林省食品藥品監(jiān)督管理局。

第二篇：地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年）

附件3

地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑

注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（包括點突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現(xiàn)，重者以進行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區(qū)最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達10%以上，廣西更是達到了20%以上。

α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達的2個基因（α2和α1），基因的排列順序為5’-α2-α1-3’。根據(jù)單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個α基因同時缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/），1個α1或α2基因發(fā)生點突變或少數(shù)幾個堿基的缺失。中國現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點突變。其中，6

種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377

T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數(shù)的98%。

α-地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明。α-地貧的表型嚴(yán)重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個α-基因缺失或點突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素；（2）2個α-基因缺失或復(fù)合-α基因點突變，或點突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現(xiàn)為不貧血或輕度貧血，血液學(xué)檢查有小細(xì)胞低色素特征；（3）3個α-基因缺失或復(fù)合α基因點突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb

H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為Hb

H病。通常，--/αTα的非缺失型

Hb

H病較單純?nèi)笔虷b

H病（--/-α）的臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb

H病患者，貧血程度較為嚴(yán)重；（4）4個α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb

Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個體一般無法存活到出生或分娩后半小時內(nèi)死亡。

β-地貧是由于β-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起，以點突變?yōu)橹鳎贁?shù)為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個成人期表達基因（β和δ），基因的排列順序為5’-δ-β-3’。根據(jù)β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報道84種β-珠蛋白基因點突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：

c.79G>A，HBB：

c.316-197C>T和HBB：

c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。

β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學(xué)表型正常或臨界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴(yán)重貧血，需要定期輸血才能存活。患兒出生時無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會顯示中間型的表型。

2018年發(fā)布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標(biāo)。2018年發(fā)布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規(guī)定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據(jù)之一。

另外，國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的相關(guān)文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發(fā)省份實施地貧防控試點項目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進行血常規(guī)初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽性的夫婦進行血紅蛋白分析復(fù)篩；（3）對血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進行相應(yīng)的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結(jié)果，判定為高風(fēng)險夫婦。對高風(fēng)險夫婦進行追蹤，及時了解受檢婦女懷孕情況，指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時期接受產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項目為相應(yīng)的地貧基因檢測。

綜上，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關(guān)基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷等。

結(jié)合該類產(chǎn)品在中國注冊的實際情況以及當(dāng)前的認(rèn)知，本指導(dǎo)原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進行了詳細(xì)闡述。針對其他預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，對本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進行補充并做出相應(yīng)評價。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)（如：PCR-反向點雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說明申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對照品（質(zhì)控品）及企業(yè)參考品的研究資料。

1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs、反應(yīng)緩沖液等。申請人應(yīng)提交相關(guān)原材料的選擇、制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。如為申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應(yīng)提交供應(yīng)商篩選資料以及供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報告。

1.1

核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗證資料。

1.2

引物、探針

申請人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計多套引物探針以供篩選，針對待測位點的特異性等進行評價，選擇最佳設(shè)計，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。

申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進行質(zhì)量評價，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗等，并依據(jù)評價結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3酶

酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進行驗證，提交功能性試驗資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗證資料，以及功能性試驗資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.對照品（質(zhì)控品）

試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對照品（質(zhì)控品）來實現(xiàn)。陽性對照應(yīng)至少包括代表性的突變位點和突變類型。陰性對照可以是含有野生型序列的核酸溶液。空白對照為不含核酸的溶液。

如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變），其反應(yīng)體系均可報出核酸序列結(jié)果，均可對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進行質(zhì)量控制，則無需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。

對照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系或質(zhì)粒等。空白對照應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請人應(yīng)提供對照品原料選擇、制備、定值過程等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對其檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。

3.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。

3.1

陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應(yīng)與待測樣本一致。應(yīng)至少包含所有檢測位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.2

陰性參考品：應(yīng)包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列樣本，同時應(yīng)盡量包含檢測范圍外其他檢測位點的樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測位點的雜合型樣本。

3.4

精密度參考品應(yīng)至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應(yīng)至少包括代表性的突變位點和突變類型，且在每一反應(yīng)體系均有分布。

目前，該類產(chǎn)品已有國家參考品，對于申報產(chǎn)品所聲稱的檢測位點，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國家參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

反應(yīng)體系研究指反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、PCR反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）等的確定。

不同適用機型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)針對下述各項分析性能提交詳細(xì)的評估資料，包括試驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計方法、試驗數(shù)據(jù)及結(jié)論等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則。

每項性能評估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系等。

1.核酸提取/純化性能（如有）

在進行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應(yīng)對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。

2.檢測準(zhǔn)確性

建議采用若干份臨床樣本驗證該類產(chǎn)品的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應(yīng)涵蓋野生型、所有檢測位點的雜合突變型，同時盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.最低檢測限

該類產(chǎn)品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度。可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進行多次重復(fù)檢測，確定適當(dāng)檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含所有檢測位點的雜合突變型。應(yīng)明確臨床樣本或細(xì)胞系與人基因組DNA濃度的對應(yīng)關(guān)系。

4.分析特異性

4.1

應(yīng)針對同源序列或檢測范圍外基因和位點進行交叉反應(yīng)驗證，說明交叉反應(yīng)樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗證資料。

4.2

應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進行干擾試驗研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細(xì)胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。

干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價干擾物質(zhì)對目標(biāo)序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。

5.精密度

精密度評價應(yīng)采用臨床樣本進行試驗，試驗操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。應(yīng)對每一反應(yīng)體系進行精密度評價，并至少覆蓋代表性的突變位點和突變類型。

精密度評價需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進行驗證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點、時間、檢測輪次和試劑批次等。

5.2設(shè)定合理的精密度評價周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實驗室進行重復(fù)實驗以對室間重復(fù)性進行評價。

5.3用于精密度評價的臨床樣本至少設(shè)置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV等（如有），申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。

（五）陽性判斷值確定資料

建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，應(yīng)包括所有檢測位點的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。

如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應(yīng)說明理由。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要包括申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時間等的研究。

實時穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個時間點進行產(chǎn)品性能評價，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。

如核酸提取液可保存，還需對核酸提取液的保存條件和保存時間進行研究。

（七）臨床試驗

應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗中應(yīng)關(guān)注的重點問題。

1．針對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途

1.1

臨床試驗機構(gòu)及人員

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。

1.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

具有地貧癥狀和/或體征，或血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進行鑒別診斷的其他疾病患者，如：缺鐵性貧血、鐵粒細(xì)胞性貧血或先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血等。

臨床試驗所用樣本應(yīng)為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申報產(chǎn)品說明書、對比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

1.3臨床試驗方法

1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

對于已批準(zhǔn)的α-地貧突變和β-地貧突變，原則上選擇已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑，評價申報產(chǎn)品的臨床檢測性能。

1.3.2無同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

1.3.2.1

如新突變位點的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R），且上述認(rèn)可基于充分的中國人群的臨床數(shù)據(jù)，則臨床試驗可選擇Sanger基因測序（針對新的點突變）或臨床普遍使用的其他公認(rèn)方法（針對其他類型的新突變位點，如缺失）作為對比方法，評價新突變位點的臨床檢測性能。除此之外，還應(yīng)提交新位點臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)，該部分資料可不納入臨床方案和報告。

1.3.2.2

如新突變位點的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，則臨床試驗應(yīng)包括兩個目的，新突變位點的臨床檢測性能評價和臨床意義評價。新突變位點的臨床檢測性能評價可參考1.3.2.1；新突變位點的臨床意義評價應(yīng)提交基于中國人群的充分的臨床證據(jù)，證明基因型與表型的關(guān)系，如：隨訪或其他可證明基因型與表型關(guān)系的臨床驗證資料。

1.4最低樣本量和陽性例數(shù)

臨床試驗樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。

1.4.1

臨床檢測性能評價的樣本量估算

臨床檢測性能評價的樣本量估算可分為以下幾種情況。

對于常見突變位點，建議采用單組目標(biāo)值法分別估算每個突變位點臨床試驗的最低樣本量，通過陽性符合率計算所需陽性樣本的例數(shù)，通過陰性符合率計算所需陰性樣本的例數(shù)，同時考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。

對于罕見突變位點，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進行估算，陽性樣本則應(yīng)保證一定的例數(shù)。

對于極其罕見的、且有確切臨床證據(jù)證明其臨床意義的突變位點，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進行估算，陽性樣本的例數(shù)則應(yīng)結(jié)合臨床證據(jù)確定。

1.4.2

新位點臨床意義評價的樣本量估算

新位點臨床意義評價的樣本量估算，建議采用抽樣調(diào)查公式或其他合理方法進行估算。

2.針對“地貧高風(fēng)險夫婦的評估”和“胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷”預(yù)期用途

針對上述兩個預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，充分考慮本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗并進行評價。

2.1臨床試驗機構(gòu)和人員

如申報產(chǎn)品的預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，除滿足法規(guī)要求外，臨床試驗機構(gòu)還應(yīng)取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)。臨床試驗人員應(yīng)為經(jīng)過專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》《母嬰保健專項技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機構(gòu)應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》，人員應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書》。

2.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

如預(yù)期用途為地貧高風(fēng)險夫婦的評估，則適用人群為：地貧表型篩查陽性的育齡人群。地貧表型篩查陽性的育齡人群可根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會和地貧高發(fā)地區(qū)相關(guān)政策確定。

如預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，則適用人群為：地貧高風(fēng)險夫婦的胎兒。地貧高風(fēng)險夫婦的確定可參考國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件。

臨床試驗所用樣本應(yīng)為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說明書的要求。

2.3

最低樣本量和陽性例數(shù)

針對每種不同的預(yù)期用途，應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預(yù)期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等），也應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。

3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計科學(xué)的臨床試驗，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。

4.不同預(yù)期用途的通用要求

4.1

臨床試驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析

4.1.1應(yīng)在臨床試驗方案或報告中明確申報產(chǎn)品、對比試劑和第三方試劑的試驗方法。

4.1.2臨床試驗病例總結(jié)表應(yīng)以列表方式表示，包括申報產(chǎn)品的結(jié)果、對比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測結(jié)果（如有）、臨床診斷、年齡和性別等。

4.1.3以交叉表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計方法進行統(tǒng)計分析，以驗證兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。

4.1.4

結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進行復(fù)核，并對差異原因進行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。

4.2

臨床試驗方案

各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由該實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程。

試驗方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結(jié)果判定時，應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機構(gòu)選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，申報產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

4.3臨床試驗報告

應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、《44號公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。

目前，該類產(chǎn)品已有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時應(yīng)提交連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的檢驗報告。目前，該產(chǎn)品已有國家參考品，產(chǎn)品檢驗應(yīng)滿足國家參考品的要求。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對該類產(chǎn)品說明書的重點內(nèi)容進行闡述。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于定性檢測人xx樣本基因組DNA中的α-和/或β-地貧xx突變，用于：α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷。

1.2介紹地貧相關(guān)的臨床背景信息及實驗室診斷方法等，介紹被測靶標(biāo)（突變位點）的相關(guān)情況。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以和醫(yī)療器械備案號（如有）等詳細(xì)信息。

3.【檢驗原理】

3.1對試劑盒的被測靶標(biāo)進行詳細(xì)描述（基因位置、突變位點及相關(guān)特征等），對試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進行詳細(xì)介紹；對不同樣本反應(yīng)管組合、對照品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進行介紹。

3.2試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機理進行適當(dāng)介紹。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限以及運送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗方法】

詳細(xì)說明實驗操作的各個步驟，包括：

7.1實驗條件：實驗室分區(qū)、實驗環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項。

7.2試劑配制方法和注意事項。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進行合理質(zhì)控，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

7.4擴增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5

PCR各階段的溫度、時間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動化檢測程序及相關(guān)注意事項。

7.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對待測樣本及其他對照品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗結(jié)果的解釋】

結(jié)合對照品、樣本管檢測結(jié)果以及檢測類型，以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

9.【檢驗方法的局限性】

9.1申報產(chǎn)品僅對下述檢測類型xx進行了驗證。

9.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

9.2.2未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】簡述以下性能指標(biāo)：

10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結(jié)果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應(yīng)驗證：同源性序列等交叉反應(yīng)驗證。

10.4.2干擾物質(zhì)驗證：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

10.5對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果。

11.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實驗室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增實驗室管理辦法》現(xiàn)行有效版本等有關(guān)分子生物學(xué)實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。

第三篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件1

酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對酶聯(lián)免疫法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。

三、基本要求

（一）基本原則

1.研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。— 2 — 2.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。

3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

4.試劑在研制、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質(zhì)量控制 1.主要生物原料

與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進行質(zhì)量檢驗，以保證其達到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進行變更申請。

主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生

— 3 — 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳，一般每個電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進行檢測。

（4）效價

效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進行。效價應(yīng)達到規(guī)定的要求。

（5）功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗：

（1）牛血清或羊血清

外 觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗：將血清直接37℃放臵7天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或— 4 — 沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥32mg/ml。

球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化鈉溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。

（2）牛血清白蛋白：

外 觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18?26℃時，溶解時間應(yīng)≤15分鐘，pH值應(yīng)為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。（3）酪蛋白：

應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（4）標(biāo)記用酶

應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。

生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。3.化學(xué)原材料

化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合《中國生物制品主要原輔材

— 5 — 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。

主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更。化學(xué)原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。

4.其他物料（1）酶標(biāo)板 ①外觀

明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。②吸附能力和精密性 采用合適的方法進行檢驗。

一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計算CV值。CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％，批間CV≤10％。

（2）液體試劑裝量瓶

包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。

（3）其他材料

包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。— 6 — 5.企業(yè)質(zhì)控品

企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（hook效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。

（三）試劑盒各組分的生產(chǎn)

酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。

1.各種工作液的配制

酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實驗室完成。

各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗并達到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。對于定量檢測試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。

應(yīng)對配制過程及配制的液體進行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的

— 7 — 功能性實驗及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、pH值等；酶作用底物應(yīng)測定在無相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對其終止酶促反應(yīng)的能力進行測定。

2.包被酶標(biāo)反應(yīng)板

包被前應(yīng)對酶標(biāo)反應(yīng)板進行質(zhì)量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號、數(shù)量、標(biāo)識。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗合格后方能用于包被。不同批號的板條不能混用。

選擇經(jīng)檢驗合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于2?8℃。

應(yīng)對包被過程進行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、pH值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監(jiān)控等。

3.分裝和包裝

樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于5%。

分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要求進行。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進行復(fù)核。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣

檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各— 8 — 組分，作號標(biāo)記、待檢。

（2）半成品檢驗

根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進行半成品的檢驗。半成品檢驗，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

檢驗指標(biāo)一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。對于精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對定量檢測試劑，同時應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時作37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.成品質(zhì)量控制

產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。

每一批酶聯(lián)免疫類檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。

（1）成品檢驗

成品檢驗時，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家

— 9 — 標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（2）穩(wěn)定性試驗

在批放行前，每一批試劑應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

四、名詞解釋

酶聯(lián)免疫法：是指在酶標(biāo)板上包被特定的抗原（和/或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關(guān)抗體（和/或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和/或抗原進一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和/或抗原的存在。

五、參考文獻：

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

— 10 —

第四篇：抗人球蛋白檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年）

附件3

抗人球蛋白檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。如申請人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補充。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、范圍

抗人球蛋白檢測試劑可進行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測等。

本指導(dǎo)原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。

本指導(dǎo)原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱“44號公告”）的相關(guān)要求。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從靈敏度、特異性、效價、重復(fù)性等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應(yīng)包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究資料。

1.抗體的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

明確抗體的來源，如為單克隆抗體應(yīng)明確細(xì)胞株、克隆號等內(nèi)容。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。

抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細(xì)生產(chǎn)及鑒定過程。

1.1靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種血型抗體（IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于1+。

1.2特異性：臨床有意義的已知血型系統(tǒng)至少7種，每種選1個抗體（IgG），與對應(yīng)的抗原陽性細(xì)胞均應(yīng)檢測陽性。

與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

1.3效價：如采用倍比稀釋的方法驗證抗人球蛋白試劑的效價，分別采用IgG和/或C3d致敏的細(xì)胞或根據(jù)廠家確立的研究方法進行驗證。

2.填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。應(yīng)提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。

3.填充緩沖液：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標(biāo)及功能性進行研究驗證。

4.液體試劑稀釋液：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標(biāo)及功能性進行研究驗證。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應(yīng)確保均勻無氣泡，以及質(zhì)量控制的要求。

4.主要反應(yīng)體系的研究資料、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。

反應(yīng)體系的設(shè)置應(yīng)符合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范、指南或標(biāo)準(zhǔn)的要求。如紅細(xì)胞懸液制備要求及紅細(xì)胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應(yīng)提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉(zhuǎn)數(shù)和時間的方式設(shè)置離心條件。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究目的、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內(nèi)或國際有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進行。

產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細(xì)胞、血型抗體等。

分析性能評估試驗中應(yīng)明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細(xì)胞的濃度、采用的試驗方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有試驗方法應(yīng)符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。

對于抗人球蛋白檢測試劑建議著重對以下分析性能進行研究：

1.間接抗人球蛋白試驗：

提供臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種不規(guī)則抗體（IgG）檢測靈敏度和特異性的驗證資料，明確所檢出抗體的抗體效價的具體要求，可參照以下要求進行實驗。

1.1靈敏度

與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結(jié)果。

C3d凝集強度≥2+。

1.2特異性

與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的O型相應(yīng)抗原陽性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陽性。

與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的O型相應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陰性。

與C3d陽性或陰性樣本反應(yīng)為陽性或陰性。

1.3重復(fù)性

分別采用IgG性質(zhì)抗D抗體，IgG性質(zhì)抗Jka/Jkb抗體，IgG性質(zhì)抗Fya/Fyb抗體進行重復(fù)性驗證。

批內(nèi)重復(fù)性采用同一批次檢測卡重復(fù)進行檢測，重復(fù)次數(shù)不少于10次。

日間重復(fù)性采用同一批次檢測卡每日重復(fù)進行檢測，重復(fù)天數(shù)不少于10天。

批間重復(fù)性采用至少三批檢測卡進行重復(fù)檢測。

批內(nèi)、日間、批間重復(fù)性檢測結(jié)果應(yīng)基本一致，檢測結(jié)果凝集強度差異不超過1+。

采用陰性結(jié)果的血清重復(fù)10次檢測，均應(yīng)出現(xiàn)陰性反應(yīng)。

1.4干擾

提供溶血、脂血、黃疸干擾的評估資料，應(yīng)至少采用強、中、弱性質(zhì)的抗體進行評價。

1.5血清、血漿比對的評估資料。

1.6抗凝劑的適用性研究驗證。

1.7采用部分臨床樣本進行檢測靈敏度和特異性的評價，應(yīng)考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應(yīng)包括陽性和陰性病例。

1.8分別進行每個預(yù)期用途的完整的性能評估資料，應(yīng)至少包括50例陽性病例。

2.直接抗人球蛋白試驗

使用被不規(guī)則抗體和/或C3d致敏的紅細(xì)胞進行反應(yīng)，評價產(chǎn)品性能，適用的性能評價內(nèi)容可以參照間接抗人球蛋白試驗。

（五）陽性判斷值

給出不同凝集強度的研究方法，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應(yīng)包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強度的圖例或相片。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、加熱穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實驗項目應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性等內(nèi)容。

穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗

臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內(nèi)容應(yīng)符合《辦法》、“44號公告”及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的規(guī)定，以下僅結(jié)合抗人球蛋白檢測試劑的具體特點對其臨床試驗中應(yīng)重點關(guān)注的內(nèi)容進行闡述。

1.研究方法

該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗單位的選擇

應(yīng)選擇符合相關(guān)法規(guī)要求的臨床試驗機構(gòu)進行臨床試驗，不得選擇血站進行臨床試驗。

3.病例選擇

臨床總病例數(shù)應(yīng)不少于3000例。應(yīng)采用臨床患者樣本進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應(yīng)包括對檢測易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。

4.實驗過程

無論直接抗人球蛋白試驗還是間接抗人球蛋白試驗，均應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途和適用人群分別進行臨床試驗。

在進行間接抗人球蛋白檢測試劑臨床試驗的過程中除與對比試劑進行比較外，陽性結(jié)果應(yīng)給出不規(guī)則抗體的具體鑒定結(jié)果。

產(chǎn)品如適用于不同的預(yù)期用途（如不規(guī)則抗體篩查、抗體致敏紅細(xì)胞檢測、交叉配血等），每種預(yù)期用途均應(yīng)分別進行至少3000例的臨床試驗，如適用于不規(guī)則抗體篩查或抗體致敏紅細(xì)胞檢測等，每種預(yù)期用途應(yīng)分別包含不少于100例陽性病例，如適用于交叉配血相關(guān)用途，應(yīng)包含不少于100例交叉配血不合病例。抗體致敏紅細(xì)胞檢測應(yīng)根據(jù)疾病的種類，分別進行臨床試驗。

交叉配血使用的供血者樣本，最多只能使用兩次，交叉配血不得使用血型不合的樣本進行實驗。

同時應(yīng)明確配合使用的試劑產(chǎn)品。

5.統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)進行考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，并對定性結(jié)果進行Kappa檢驗以驗證檢測結(jié)果的一致性。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致[考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果不一致、與對比試劑凝集強度差異較大（差異2個凝集強度及以上）]的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進行確認(rèn)試驗，同時應(yīng)給出最終的抗體鑒定結(jié)果。

7.臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)作為臨床試驗報告附件提交。臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強度和抗體鑒定結(jié)果，如有不符樣本應(yīng)列明第三方確認(rèn)的結(jié)果。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

產(chǎn)品風(fēng)險分析資料應(yīng)符合“44號公告”的基本要求，并參照相應(yīng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進行風(fēng)險分析。風(fēng)險分析中應(yīng)充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行抗人球蛋白檢測時可能存在一定的干擾、實驗過程不規(guī)范、有些抗體較弱導(dǎo)致的檢測結(jié)果不穩(wěn)定等，申請人應(yīng)根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應(yīng)用可能存在的風(fēng)險。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評估等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和“44號公告”的相關(guān)規(guī)定。

如果擬申報試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性等。

產(chǎn)品技術(shù)要求的附錄應(yīng)包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。主要原材料應(yīng)明確抗體來源、克隆號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應(yīng)明確填充物來源及主要特征、質(zhì)量控制要求，緩沖液應(yīng)明確組成、pH值等特性及質(zhì)控要求。主要生產(chǎn)工藝應(yīng)以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質(zhì)量控制點。半成品檢定應(yīng)明確半成品的檢驗要求及方法。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)進行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對抗人球蛋白檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進行編寫。

1.【預(yù)期用途】

1.1寫明本試劑用于直接抗人球蛋白試驗和/或間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測（明確疾病類型）等，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。

1.2說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。

2.【儲存條件及有效期】

說明試劑的儲存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。

3.【適用儀器】明確具體的離心機和/或孵育器型號（如適用）。

4.【樣本要求】

明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性。

明確適用的抗凝劑的要求。

明確具體的樣本采集、處理方法及過程。

明確紅細(xì)胞配制使用的LISS液的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。

5.【陽性判斷值】

明確各種試驗方法的結(jié)果判斷方法及標(biāo)準(zhǔn)，并通過不同凝集強度的圖例或照片進行詳細(xì)解釋。

6.【檢驗方法】

明確配合使用的抗體篩查用紅細(xì)胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。

須明確具體的檢驗步驟，反應(yīng)體系的描述應(yīng)準(zhǔn)確且應(yīng)與研究資料一致，不同的預(yù)期用途應(yīng)分別詳細(xì)描述實驗過程。如配合其他試劑進行試驗，需注明試驗方法應(yīng)完全符合配合試劑的試驗操作要求。

7.【檢驗方法的局限性】

未被檢出的抗IgG抗體在某些病例中可能有臨床意義。

8.【注意事項】

8.1上腔部分或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。

8.2濃度過高或過低的紅細(xì)胞懸液會引起異常結(jié)果。

8.3在不規(guī)則抗體篩查、交叉配血試驗中LISS液可以增強抗原抗體的反應(yīng)，應(yīng)嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書規(guī)范使用低離子液。

三、參考文獻

1.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）.2014年9月

2.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）.2014年9月

3.中國生物制品規(guī)程（2000年版）.化學(xué)工業(yè)出版社

四、起草單位

國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。

第五篇：核酸擴增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則3

附件3

核酸擴增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對核酸擴增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對核酸擴增法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于核酸擴增法檢測試劑的注冊技術(shù)審查，其他類核酸檢測試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。

三、基本要求

（一）基本原則

1.核酸擴增類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和

— 23 — 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴增檢測以及操作人員防護所需的設(shè)備。建立專用實驗室，實驗室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動，以最大限度地防止實驗過程中樣品之間的污染和避免擴增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。

3.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。

4.核酸擴增類檢測試劑的引物設(shè)計應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測設(shè)計的要求，擴增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴增產(chǎn)物須進行確證研究。

5.企業(yè)使用新型原材料時，應(yīng)提供與通行原材料比對研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。

（二）原材料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應(yīng)商發(fā)生變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進行變更申請。

核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。

1.脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為高效液相色譜（HPLC）純、PCR級，無DNase和RNase污染。—20℃保存。— 24 — 2.引物

由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。

凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達到電泳級（PAGE）或HPLC級，不含雜帶。應(yīng)提供合成機構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。

應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計測定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間，可視為合格引物。-20℃保存。

3.探針

是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'-端(和/或3'-端)進行標(biāo)記，如熒光素報告基團或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。

凍干粉，純度應(yīng)達到HPLC純。應(yīng)提供合成機構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進行核實，并作HPLC分析。應(yīng)以可見—紫外分光光度計進行200—800nm掃描，在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫。避光、-20℃保存。

4.DNA聚合酶

如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時后仍保持50%活性。-20℃保存。

5.尿嘧啶糖基化酶（UNG）

具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG

— 25 — 在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴增產(chǎn)物。-20℃保存。

6.逆轉(zhuǎn)錄酶

具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性。—20℃保存。

（三）生產(chǎn)工藝

核酸擴增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對電導(dǎo)率pH、等關(guān)鍵參數(shù)進行有效控制。

工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制

（1）按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。

（2）以參考品/對照品進行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進行檢定。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（3）半成品檢定內(nèi)容包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進行分裝和包裝。2.成品質(zhì)量控制

（1）每一批核酸擴增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。— 26 —（2）產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。（3）以參考品/對照品進行成品質(zhì)量檢驗。結(jié)果應(yīng)符合要求。（4）成品檢驗的內(nèi)容應(yīng)包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。

5．試劑批放行前，應(yīng)對需要進行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進行穩(wěn)定性試驗。穩(wěn)定性試驗可采用加速破壞試驗。

四、名詞解釋

核酸擴增法檢測試劑：核酸擴增技術(shù)泛指以擴增脫氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）為手段，檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴增反應(yīng)（TMA）等。核酸擴增法檢測試劑是基于核酸擴增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。

五、參考文獻

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社