第一篇：流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料 技術審評指導原則

一、前言

本指導原則旨為注冊申請人準備及撰寫流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料提供指導，同時也為技術審評部門對注冊申報資料進行技術審評提供參考。

本指導原則是對流式細胞儀配套用檢測試劑的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

二、范圍

本指導原則中“流式細胞儀配套用檢測試劑”是指標記有特定發光物質（如熒光素、量子點等）、針對各類血細胞或組織細胞分化抗原的單克隆抗體試劑以及相關 的質控品和校準品，這些抗體與血細胞或組織細胞的各類抗原分子特異性結合，與適用的流式細胞儀配套使用，對人血液、骨髓液或其它體液組織標本中的被標記細 胞或分子進行分類和計數。由于多方面差異，本文內容將不包括預期用途為利用流式細胞術進行特異性目的細胞分選的檢測試劑。

本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產品。

三、注冊申報要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產品上市情況介紹等內容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦 法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料形式與基本要求》（國食藥監械[2007]609號）的相關要求。

流式細胞分析是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析的檢測手段，可以在短時內高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞測得多個參數。流 式細胞分析主要靠流式細胞儀和各種特定發光物質標記的單克隆抗體試劑組合檢測來實現。流式細胞儀是集電子技術、計算機技術、激光技術、流體理論等技術原理 于一體進行流式細胞分析的儀器，其工作原理為：將待測細胞或微粒進行特異性染色標記后制成細胞懸液標本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動室，用不含細 胞或微粒的緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液噴出，包繞著細胞或微粒高速流動形成圓形流束（鞘流），依次通過流式細胞儀的檢測區域。被熒光染色的細胞在激光束 的照射下產生散射光和激發熒光。前向散射光（forward scatter,FSC）和側向散射光（side scatter,SSC）檢測器把散射光信號轉換成電信號，熒光則被聚光器收集，不同顏色熒光被雙色反光鏡轉向不同的光電倍增管（PMT）檢測器，把熒光 信號轉換成電信號。散射光信號和熒光信號經過放大后，再經過數據化處理輸入電腦并儲存，根據散射光和熒光信號對細胞或微利進行分類或計數。其中，FSC反 映了細胞體積的大小，SSC則反應細胞部分結構的信息；熒光信號強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其細胞內、核內物質的濃度。臨床流式細胞分析是將流 式細胞分析技術與方法應用于臨床醫學，與臨床疾病的診斷、分型、治療、預后及預防等相結合的綜合應用學科。其應用范圍廣泛，包括細胞生物學、血液免疫學、腫瘤學、感染性疾病、造血干細胞移植、器官移植等多個方面。臨床流式細胞分析要求實驗人員對整個分析系統、各種相關實驗技術和方法有深入理解和掌握，并能 對檢測結果給予合理的醫學解釋。

（二）產品說明書

說明書承載了產品預期用途、實驗操作方法、檢測結果解釋以及相關注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學 解釋的重要依據，也是體外診斷試劑注冊申報的重要文件之一。流式細胞儀檢測專業性較強，對產品說明書的編制進行必要的指導顯得更為重要。該類產品說明書除 對單克隆抗體試劑做必要的介紹外，還應對樣本采集、樣本處理及保存、儀器校準、檢測質量控制、結果分析等相關步驟做詳細描述，以保證分析結果的準確性和可 重復性。

產品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性及完整 性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以 規范格式對此內容進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。結合相關法規要求及流式細胞分析的特性，下面對流式細胞儀配套用檢測試劑說明書的重點內容作詳細說 明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產品名稱】

單色試劑通用名稱建議采取以下命名方式：被檢標志物名稱+檢測試劑盒（流式細胞儀法-熒光素）。多色試劑可以結合靶抗原、目標細胞或組織、熒光素及臨床預期用途等信息綜合判斷。

2.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容：

（1）適用的樣本類型：如全血、骨髓液、組織細胞等，并明確對所需抗凝劑的要求。

（2）待測靶抗原的特征簡介，如分子結構、分子量、產生和代謝主要途徑、表達細胞等。

（3）與被檢標志物相關的臨床背景介紹、正常表達情況、異常表達的主要疾病、與其他抗原的共表達情況以及可能的醫學解釋等。

（4）強調：實驗操作人員應接受過流式細胞儀檢測的專業培訓，具備相關的實驗操作資格，實驗室應具備合理的生物安全防備設施及防護程序。

3.【主要組成成份】

（1）主要是對特定熒光素標記的單克隆抗體特征的描述，應包括抗體特異性（CD標志），雜交瘤細胞，免疫球蛋白特征（Ig鏈），純化方式，熒光激發及發射波長，偶聯的熒光素，抗體濃度以及其他非抗體成分組成及濃度。

（2）如包括多種不同熒光素標記的單克隆抗體，則應對不同的抗體分別列表詳述上述特征。

（3）建議將實驗需要但本試劑盒未提供的主要成分進行列舉：如與之配套使用的紅細胞溶解試劑，稀釋劑，細胞/血球計數儀等。

4.【儲存條件及有效期】

試劑盒的效期穩定性、開封穩定性、運輸穩定性等。以及當試劑表面變化或變質時情況的描述及相關警示。

5.【樣本要求】

樣本采集和處理的目標是獲得均勻的單細胞懸液，同時必須盡量保證細胞的活力和完整性，防止目標細胞的損失。樣本操作不宜過度，避免對細胞結構和抗原性造成破壞。故對于流式細胞分析而言，樣本處理對實驗結果至關重要，應盡量減少由于樣本采集或處理不當對實驗造成的影響。

在產品說明書中應重點對以下內容予以明確：

（1）所需的樣本量、采樣方法（對抗凝劑或抗凝管的要求）及樣本采集的注意事項，盡量引述相關標準操作規程。

（2）樣本處理：溶血洗滌（或非洗滌）、細胞分離和提純描述、離心和固定等方法；樣本保存、轉運的條件和方法。

（3）染色前穩定性：即采樣后在合理的保存條件下，多長時間內必須進行抗體標記（染色）；如果不同抗凝劑樣本的穩定時間有差異，則應分別進行闡述。

（4）染色后穩定性：即樣本在完成抗體標記后至上機分析前可以穩定保存的條件及期限。最好結合染色前穩定性的要求對上機分析前的穩定性進行綜合評價。

（5）避免使用的樣本類型，如有微生物污染、乳糜、凝集或細胞活力不達標準等，在一般情況下應避免使用上述樣本，除非樣本有不可替代性，則應說明處理該種樣本的方法，并應在結果報告時明示。

（6）達到最佳染色效果所要求的目標細胞計數。①盡量采用公認的國際或國內標準操作方法進行細胞計數，保證計數準確性；②詳述計數與預期不符時應采取的處理方法（濃縮或稀釋等）；③提醒實驗操作人員細胞計數的注意事項。

（7）樣本活力要求及評估方法：為避免非活性細胞的非特異性結合，應評估細胞活性并設定有活力細胞的百分比下限，并推薦相關的有活力細胞評估方法。

（8）優化為最佳染色效果所需注意的重要信息；其他有關樣本采集、處理及保存的注意事項。

6.【適用機型】所有適用的儀器型號，如對配套用軟件有要求也應做特別說明，并提供與儀器或軟件有關的重要信息以指導用戶操作。

7.【檢驗方法】對于流式細胞分析而言，實驗操作步驟對實驗結果的影響至關重要，因此，應詳細說明達到最佳染色效果的實驗操作各個步驟，包括：

（1）試劑使用條件：溫度/濕度條件、試劑用量、染色時間、是否需無菌操作等。

（2）簡述試驗開始前流式細胞儀的設置方法，校準及質控程序。

（3）詳細闡述試驗操作步驟、注意事項。如對照的設定方式及類別（同型陰性對照、陽性對照、正常人血細胞對照等），設門方法舉例及代表性數據圖示；靶細胞分類計數的方法及步驟、計算公式以及相關注意事項。

（4）校準：適用校準品的生產企業、產品名稱及貨號等詳細信息，校準品的使用方法、推薦的校準周期及相關注意事項。

（5）質量控制：適用質控品的生產企業、產品名稱及貨號等詳細信息，質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質控結果與預期不符，提示檢測結果不可靠，不應出具檢測報告。如質控不合格應提供相關的解決方案。

8.【參考值（參考范圍）】

應注明待測標記細胞或分子在常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設定該參考值（范圍）所選健康人群的特征，如有必要，需對不同年齡段人群、不同性別或具有明確地理差異人群的參考值分別進行詳述。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

9.【檢驗結果的解釋】

由于流式細胞儀分析技術的專業性較強，檢測過程中的影響因素較多且同一分析目標在不同人群的表達復雜多樣，因此，流式細胞檢測的數據分析、結果解釋和出 具臨床報告經常具有較大的挑戰性，結果解釋不當可能對病人的診治造成很大影響。建議負責數據解釋和出具報告的實驗人員需經過正規的技術培訓且有一定的臨床 經驗，二者結合有助于對實驗數據做出合理的醫學解釋。

產品說明書中的本部分內容應對上述情況進行必要的建議，還應對設門方法、數據分析、異常值處理、臨床相關提示等內容做出合理解釋。

10.【檢驗方法局限性】

（1）本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

（2）使用該試劑的其他限制，如樣本、保存方法、保存時間，特殊患者可能出現的不正確結果，儀器設置不當的影響等。

（3）是否與經其他試劑或儀器獲得的同類數據具直接可比性。

11.【產品性能指標】 詳述以下性能指標：

（1）精密度：簡要說明精密度評價的方法，建議以列表的方式列出批內/批間、日內/日間、運行內/運行間精密度等信息，以標準差（SD）和變異系數（CV）的形式表示精密度研究結果。

（2）線性：包括細胞計數濃度范圍和待測目標物陽性細胞百分比濃度范圍兩類，申請人應至少對其中一個進行合理驗證并在此列出，簡要注明實驗方法、所用儀器及軟件等信息。

（3）對比試驗研究：簡要介紹參比試劑（方法）的信息、所采用的統計學方法及統計分析結果、圖示。

（4）分析特異性：有關交叉反應和干擾因素的驗證信息。如：對溶血、高脂、黃疸等內源性干擾因子的濃度限值要求（如有必要），樣本中可能存在某些內生物 質與待測抗原有相似化學結構或抗原表位，如自身抗體、蛋白、激素或近期服用的某些藥物（如生物制劑），這些物質可能與試劑中的單克隆抗體發生交叉反應而影 響檢測結果，如未進行相關研究也應提供相關警示說明。

12.【注意事項】應至少包括以下內容：

（1）生物安全性警告：接觸到的臨床樣本、質控/校準品、實驗廢棄物等材料應當作為潛在傳染物進行處理，并且采用符合法規的預防措施對其處理。

（2）有關儀器設置的警示，如：流式細胞儀未經正確校準、熒光滲漏未行合理補償以及檢測區域（設門）未精確定位，則可能產生錯誤的檢測結果。

（3）有關試劑準備的注意事項：如冷藏避光保存、切勿冷凍、使用前恢復室溫等

（4）針對某些白細胞濃度過高或過低的情況，在樣本處理時需采用的特殊處理方式，如血樣稀釋或細胞濃縮等操作。

（5）試劑特殊成分或操作使用試劑危害性的警告及注意事項：如疊氮化鈉、甲醛等；使用不當的處理方式

（6）保證試驗結果準確的其他操作注意事項。

（三）擬定產品標準及編制說明

擬定產品標準應符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》的相關規定。另外，對于國產第三類體外診斷試劑，應參考《中國生物制品規程》（2000年版），將擬申報產品的主要原材料、生產工藝及半成品檢定等內容作為附錄附于標準正文后，并在正文的“產品分類”項中引出該附錄內容。

該類產品注冊檢測的技術要求主要包括：準確度、線性、精密度、染色穩定性等相關指標，具體要求的設置應參考相關的國家/行業標準（如有）執行，企業標準要求不得低于國家/行業標準要求。

（四）注冊檢測

對于首次注冊產品，申請人擬定申報產品的產品標準后，應當在國家食品藥品監督管理局認可的、具有相應承檢范圍的醫療器械檢測機構進行連續3個生產批次樣品的注冊檢測。

對于已經有國家參考品的流式細胞檢測項目，在注冊檢測時應采用相應的國家參考品進行,對于目前尚無國家參考品的項目，生產企業應建立自己的質控體系并提供相應的內部參考品。

（五）主要原材料研究資料

應提供主要原材料如單克隆抗體、標記熒光素的選擇、來源、制備過程、質量標準和質檢報告等研究資料。若主要原材料為企業自行生產，則應詳述原材料（主要 是單克隆抗體）的制備及生產過程、雜交瘤細胞的選擇、技術指標、質量控制、國際相關權威機構（如國際人類白細胞分化抗原協作組織，HLDA）的認證情況（如有）等；如主要原材料來自外購，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，外購方名稱，提交外購方出具的有關單克隆抗體后雜交瘤細胞的性能分析或檢驗證書，詳 述申請人對該抗體技術指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據。對熒光染色方法、染料選擇依據，多色標記中熒光的交叉重疊驗證等研究。

（六）主要生產工藝及反應體系的研究資料

1、生產工藝的研究資料主要包含：

（1）主要生產工藝介紹，可以圖表方式（工藝流程圖）表示。

（2）生產工藝中關鍵步驟的質量控制要求及質控方法。

（3）生產工藝的確定資料，如：生產工藝的選擇依據，生產工藝的優化過程及方法等。

2、反應體系的研究資料主要包含：

（1）反應原理介紹。

（2）產品說明書中描述的最佳反應條件各步驟的確定方法，包括需要的樣本體積、樣本的處理、保存時間，反應時間、溫度的確定、抗體的用量（重要）、是否需反向加樣、溶血/洗滌操作、去除干擾等。

（3）如產品說明書中使用了其他前處理試劑或流式細胞儀、儀器設定方法、或分析軟件等達到最佳反應條件，則應將使用這些試劑或儀器的研究內容包含至該項資料中。

（4）應說明配合該產品所使用的分析方法并進行驗證，如不同平臺方法、不同軟件分析、操作注意事項等。

（5）不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。

（6）質量控制：同型陰性對照、正常成人樣本對照、商業化陽性質控品、熒光信號與散射光結合對各細胞群的確認等。

（七）分析性能評估資料

企業應提交原廠在產品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每一項性能的評價，都應包括研究目的、實驗設計、可接受標準、實驗數據、統計 方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、所用軟件、臨床樣本來源等。對用于多色流式細 胞分析的試劑（如CD3/CD4/CD8淋巴細胞亞群檢測試劑），其待測每個指標（如CD3、CD4和CD8三個指標）的所有分析性能均應分別進行相關的 驗證。分析性能評價的實驗方法可以參考相關的CLSI-EP文件或國內有關體外診斷產品性能評估的文件進行。

1.準確度

對測量準確度的評價主要包括：與國家標準品（和/或國際標準品）的偏差分析和方法學比對兩種方法，企業可根據實際情況選擇合理方法進行研究。

（1）國家（國際）標準品的檢測及偏倚情況

如果研究項目有相應國家（國際）標準品，則使用國家（國際）標準品進行驗證，重點觀察對相應標準品檢測結果的偏差情況。

（2）方法學比對

采用國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏 倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產生差異結 果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本采集及處理的差異、濃度分布范圍及不同濃度范圍的可接受標準及合理的統計學分析等要素。

2.精密度：

精密度是指在規定的檢測條件下，相互獨立的測試結果間的一致程度，本類試劑的精密度評價主要考慮細胞計數結果和熒光強度兩方面。建議采用多個水平的質控 品用于細胞計數精密度的評價，各個濃度均應在試劑盒的線性范圍內且有一定的臨床意義（醫學決定水平），通常包括該檢測指標的正常范圍、異常低值和高值樣 本。對于質控品或校準品的精密度評價，應包括其所有質控或校準項目，如熒光信號及散射光要求等。

在進行精密度評價時，除申報試劑本身的影響外，還應對操作者、適用機型、不同軟件及實驗地點等要素進行相關的驗證。企業應制定合理的精密度評價方案，例 如：在每個適用機型上進行至少20天的連續檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整運行，每天內兩次運行間的時間間隔不少于3小時，從而對批內/批間、日間、運行內/運行間、不同操作者間的精密度以及各變量綜合的總精密度進行評價。除精密度質控品外，建議選擇適量臨床采集的新鮮病人樣本（包括所有適用樣 本類型）作為無靶值質控品進行精密度評價，以更好地模仿臨床檢測環境。

3.線性范圍：

本類產品線性主要包括稀釋細胞濃度范圍和標記抗體陽性細胞的百分率范圍兩種線性范圍。企業可根據實際需要及以往的研究習慣自行選擇其中一種對線性的要求 進行驗證。企業應對每個測量參數建立合理的線性范圍，在建立一個參數的線性范圍時，應該盡量將預期測定范圍加寬，在合理范圍內選擇7-11個濃度水平，每 個水平2-4份復制液，取每個濃度水平重復測量的均值用于線性回歸分析，依據實驗結果逐漸減少數據點直至表現出最寬的線性范圍，擬合回歸直線的判定系數（R2）應大于0.95。

建立稀釋細胞濃度線性范圍時，所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，建議采用混合血漿或自體血漿進行稀釋，同時應考慮多倍稀釋可能造成的基 質效應。對于標記抗體陽性細胞百分率的線性范圍，建議企業選擇經確認的陽性細胞株和陰性細胞株按照恒定的細胞總數將兩種細胞進行不同比率的混合，陽性細胞 數與陰性細胞數比例可以從0%到100%不等，從而確認合理的有關陽性細胞百分率的線性范圍。

4．特異性：

（1）采用多種方法對申報抗體與靶抗原結合的特異性驗證研究，如采用競爭性抑制法、抗體與抗原純品的結合研究、免疫印跡技術或胞膜抗原的基因轉染技術等 方法對抗原抗體結合的特異性進行相關的驗證；有關靶抗原的細胞或組織分布特異性的研究，如抗體與不同細胞系的反應譜等。

（2）交叉反應性：驗證所申報單克隆抗體除與目標抗原的結合外，是否與樣本中可能存在其它內生或外源物質發生交叉反應，如與待測抗原有相似化學結構或抗原表位的蛋白、激素或近期服用的某些藥物等。

（3）干擾：本處所指的干擾是指經過生產商指定的樣本處理方法后，檢測時是否還存在其他影響結果干擾因素或干擾物質。如有，生產商應進行說明并驗證，使 用醫學相關水平的干擾物濃度進行驗證，另外，亦建議申請人在每種干擾物質的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進行評價。

（八）參考值（范圍）確定資料

應詳細描述用于參考值（范圍）確定健康人群的地域、年齡、性別等特征，并對統計分析方法進行詳細解釋?？梢詤⒖紘鴥然驀H有關參考值（范圍）制定的指南文件推薦的方法進行。不同種族、年齡或性別人群如有明顯差異應分別進行相關的統計分析并設置不同的參考值（范圍）。

（九）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究。前者主要包括實時穩定性（有效期）、高溫加速破壞穩定性、運輸穩定性以及 開瓶穩定性等研究，申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案。穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實施方案、詳細的研究數據以及結論。對于實時穩定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩定性主要考慮染色前和染色后穩定性，前者是指樣本采集后至染色（標記）前的穩定性，后者是指染色（標記）后到上機分析前的穩定性。樣本染色前、染 色后穩定性需結合試劑的穩定性研究綜合進行考慮?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥冗x擇多個時間點（應至少包括范圍的上限和下限溫度），每間隔一定的時間段對采集樣 本或標記后樣本進行全性能的分析驗證，從而確認樣本染色前和染色后的合理保存條件和有效期。

試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（十）臨床試驗研究

1.樣本例數

考慮到流式細胞儀配套用檢測試劑種類繁多、臨床用途廣泛但主要原料、生產工藝及檢測原理等非常相似的特點，該類試劑臨床試驗研究的總樣本數為不少于500例。

2.臨床研究單位的選擇

流式細胞儀配套用檢測試劑的臨床研究應在三家以上（含三家）省級醫療衛生單位進行，對于特殊使用目的產品可以在相應的市級以上?？漆t院或其它診療機構開 展臨床研究。建議在國內不同城市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性；臨床研究單位須具有流式細胞儀專業的技術人員及相應的儀器設備，確保該項研究的實施。實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統的各環節（儀器、試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試 劑都應處于有效的質量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數據的準確性及可重復性。流式細胞儀檢測的專業性較強，實驗操作人員須接受過流式細胞 儀技術的專業培訓，并經過考核合格后上崗，具備實驗室檢測和臨床病情相結合的流式細胞儀相關的檢測經驗，3.研究方法

（1）境內已有同類試劑批準上市產品的臨床研究：

選擇中國境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品作為對照試劑，采用擬申報產品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明考核試劑與已上市產品等效或優于已上市產品。

（2）境內尚無同類試劑批準上市的產品臨床研究：

可以選擇國外已上市、普遍認為質量較好的同類產品作為對照試劑，采用考核試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與對照試劑等效或優于對照試劑。同時，還應 結合每個患者的臨床病情對申報試劑的檢測結果進行綜合判斷，如有必要，需對研究對象進行相關的跟蹤監測研究，以綜合判斷申報試劑的檢測結果，驗證其與臨床 病情的一致性。

4.試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設置應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確 說明原因。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數據收集過程。

5.臨床病例選擇

絕大多數采用流式細胞儀方法檢測的血細胞或組織細胞抗原對于疾病診斷的靈敏度和特異性較低，與器官/組織定位、疾病良惡性區分以及與病情的進展程度雖有 一定關聯但多無明確的量值-病情相關關系，而且，多數情況下，該類試劑在用于病變的診療時需要多個標記物組合檢測才能體現其臨床意義。因此，在進行臨床研 究時，除有針對性選擇目的性較強的病例外，還應選擇部分其他相關的抗原表達類似或需鑒別診斷的病例。

臨床研究試驗中應包括對部分來自正常健康人群的樣本作為正常對照。驗證試劑的正常參考值（范圍），比較正常組和疾病組結果，以便對申報產品的臨床性能做 出全面分析。建議對健康人群例數的選擇以不超過50例為宜。對于新試劑或臨床意義有待明確的試劑，可適當增加正常樣本數。不管是健康人群或不同病種的患 者，每一組受試者的最小入選人數均須滿足統計學分析的基本要求。

6.結果差異樣本的驗證

在數據收集過程中，對于兩種試劑的檢測結果有明顯差異的樣本，應采用臨床上普遍認為質量較好的第三種同類試劑或其他標準方法進行驗證試驗，同時結合患者的臨床病情對差異原因及可能結果進行分析。

7.統計方法：對臨床試驗結果的統計應選擇合適的統計方法，如相關分析、線性回歸、ROC曲線分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對實驗試劑和 對照試劑的兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數（r值）或判定系數（R2）、回歸方程斜率及y軸截距等指標。在臨床研究方案中應明確統 計檢驗假設，即評價實驗試劑與對照試劑是否等效的標準。

8.臨床試驗結果報告

根據《體外診斷試劑臨床研究技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。

（1）臨床試驗總體設計及方案描述

①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

②病例納入/排除標準、不同病種的預期選擇例數及健康人群的選擇標準；

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

④統計學方法、統計軟件、評價統計結果的標準。

（2）具體的臨床試驗情況

①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

②對各研究單位的病例數、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數及百分比；

③質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估；

④具體試驗過程，樣本檢測、數據收集、樣本長期保存、結果不一致樣本的校驗等。

（3）統計學分析

①數據預處理、差異數據的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數據統計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數，同時應給出b的95%（或99%）置信區間，定量值結果應無明顯統計學差異。

另外考慮到某些檢測指標在不同的樣本濃度區間、不同年齡段人群或不同疾病來源的樣本可能有較明顯的差異，因此，如有必要，建議以上述相關要素為依據分組并對各組數據分別進行統計分析，以更好的驗證兩種試劑的相關性。

（4）討論和結論

對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

四、名詞解釋

1.準確度（accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

2.精密度（precision）：在規定條件下，相互獨立的測試結果之間的一致程度。精密度的程度是用統計學方法得到的測量不精密度的數字形式表示，如標準差（SD）和變異系數（CV）。

3.線性（linearity）：在給定測量范圍內，給出的測量結果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統的測量示值或測量結果相關于樣本的賦值符合直線的屬性。

4.分析特異性（analytical Specificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估 的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫學相關濃度值水平的分析干擾程度（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應物）。

五、參考文獻：

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（國食藥監械[2007]229號）

2.《體外診斷試劑臨床研究技術指導原則》（國食藥監械[2007]240號）

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國食藥監械[2007]240號）

4.NCCLS EP9-A2：Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline-Second Edition(September 2002).5.NCCLS EP5-A2:E, valuation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices;Approved Guideline-Second Edition(August 2004).6.NCCLS EP6-A: Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach;Approved Guideline.7.H20-A2:Reference Leukocyt(WBC)Differential Count(Proportional)and Evaluation of Instrumental Methods;Approved Standard—Second Edition.8.H42-A2:Enumeration of Immunologically Defined Cell Populations by Flow Cytometry;Approved Guideline—Second Edition.9.H43-A2:Clinical Flow Cytometric Analysis of Neoplastic Hematolymphoid Cells: Approved Guideline—Second Edition.10.H44-A2: Methods for Reticulocyte Counting(Automated Blood Cell Counters, Flow Cytometry, and Supravital Dyes);Approved Guideline—Second Edition.11.H52-A: Fetal Red Cell Detection;Approved Guideline.12.ILA26-A: Performance of Single Cell Immune Response Assays;A pproved Guideline.13.王建中：《臨床流式細胞分析》，上?？茖W技術文獻出版社

14.杜立穎，馮任青：《流式細胞術》，北京大學出版社

15.馮仁豐，《臨床檢驗質量管理技術基礎》（第二版），上海科學技術文獻出版社

16.《中國生物制品規程》（2000年版），化學工業出版社

第二篇：流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料技術指導原則征求意見稿

指導原則編號

流式細胞儀配套用檢測試劑 注冊申報資料技術指導原則

（征求意見稿）

二O一一年八月

目錄

一、前言………………………………………………………………

二、范圍………………………………………………………………

三、注冊申報資料要求

（一）綜述資料…………………………………………………

（二）產品說明書………………………………………………

（三）擬定產品標準及編制說明………………………………

（四）注冊檢測…………………………………………………

（五）主要原材料研究資料……………………………………

（六）主要生產工藝及反應體系的研究資料…………………

（七）分析性能評估資料………………………………………

（八）參考值（范圍）確定資料………………………………

（九）穩定性研究資料 …………………………………………

（十）臨床試驗研究資料…………………………………………

四、名詞解釋……………………………………………………………

五、參考文獻……………………………………………………………

一、前言

本指導原則旨為注冊申請人準備及撰寫流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料提供指導，同時也為技術審評部門對注冊申報資料進行技術審評提供參考。

本指導原則是對流式細胞儀配套用檢測試劑的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

二、范圍

本指導原則中“流式細胞儀配套用檢測試劑”是指標記有特定發光物質（如熒光素、量子點等）、針對各類血細胞或組織細胞分化抗原的單克隆抗體試劑以及相關的質控品和校準品，這些抗體與血細胞或組織細胞的各類抗原分子特異性結合，與適用的流式細胞儀配套使用，對人血液、骨髓 液或其它體液組織標本中的被標記細胞或分子進行分類和計數。由于多方面差異，本文內容將不包括預期用途為利用流式細胞術進行特異性目的細胞分選的檢測試劑。

本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產品。

三、注冊申報要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產品上市情況介紹等內容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料形式與基本要求》（國食藥監械[2007]609號）的相關要求。

流式細胞分析是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析的檢測手段，可以在短時內高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞測得多個參數。流式細胞分析主要靠流式細胞儀和各種特定發光物質標記的單克隆抗體試劑組合檢測來實現。流式細胞儀是集電子技術、計算機技術、激光技術、流體理論等技術原理于一體進行流式細胞分析的儀器，其工作原理為：將待測細胞或微粒進行特異性染色標記后制成細胞懸液標本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動室，用不含細胞或微粒的緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液噴出，包繞著細胞或微粒高速流動形成圓形流束（鞘流），依次通過流式細胞儀的檢測區域。被熒光染色的細胞在激光束的照射下產生散射光和激發熒光。前向散射光（forward scatter,FSC）和側向散射光（side scatter,SSC）檢測器把散射光信號轉換成電信號，熒光則被聚光器收集，不同顏色熒光被雙色反光鏡轉向不同的光電倍增管（PMT）檢測器，把熒光信號轉換成電信號。散射光信號和熒光信號經過放大后，再經過數據化處理輸入電腦并儲存，根據散射光和熒光信號對細胞或微利進行分類或計數。其中，FSC反映了細胞體積的大小，SSC則反應細胞部分結構的信息；熒光信號強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其細胞內、核內物質的濃度。臨床流式細胞分析是將流式細胞分析技術與方法應用于臨床醫學，與臨床疾病的診斷、分型、治療、預后及預防等相結合的綜合應用學科。其應用范圍廣泛，包括細胞生物學、血液免疫學、腫瘤學、感染性疾病、造血干細胞移植、器官移植等多個方面。臨床流式細胞分析要求實驗人員對整個分析系統、各種相關實驗技術和方法有深入理解和掌握，并能對檢測結果給予合理的醫學解釋。

（二）產品說明書

說明書承載了產品預期用途、實驗操作方法、檢測結果解釋以及相關注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學解釋的重要依據，也是體外診斷試劑注冊申報的重要文件之一。流式細 胞儀檢測專業性較強，對產品說明書的編制進行必要的指導顯得更為重要。該類產品說明書除對單克隆抗體試劑做必要的介紹外，還應對樣本采集、樣本處理及保存、儀器校準、檢測質量控制、結果分析等相關步驟做詳細描述，以保證分析結果的準確性和可重復性。

產品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性及完整性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規范格式對此內容進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。結合相關法規要求及流式細胞分析的特性，下面對流式細胞儀配套用檢測試劑說明書的重點內容作詳細說明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產品名稱】

單色試劑通用名稱建議采取以下命名方式：被檢標志物名稱+檢測試劑盒（流式細胞儀法-熒光素）。多色試劑可以結合靶抗原、目標細胞或組織、熒光素及臨床預期用途等信息綜合判斷。

2.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容：（1）適用的樣本類型：如全血、骨髓液、組織細胞等，并明確對所需抗凝劑的要求。

（2）待測靶抗原的特征簡介，如分子結構、分子量、產生和代謝主要途徑、表達細胞等。

（3）與被檢標志物相關的臨床背景介紹、正常表達情況、異常表達的主要疾病、與其他抗原的共表達情況以及可能的醫學解釋等。

（4）強調：實驗操作人員應接受過流式細胞儀檢測的專業培訓，具備相關的實驗操作資格，實驗室應具備合理的生物安全防備設施及防護程序。

3.【主要組成成份】

（1）主要是對特定熒光素標記的單克隆抗體特征的描述，應包括抗體特異性（CD標志），雜交瘤細胞，免疫球蛋白特征（Ig鏈），純化方式，熒光激發及發射波長，偶聯的熒光素，抗體濃度以及其他非抗體成分組成及濃度。

（2）如包括多種不同熒光素標記的單克隆抗體，則應對不同的抗體分別列表詳述上述特征。

（3）建議將實驗需要但本試劑盒未提供的主要成分進行列舉：如與之配套使用的紅細胞溶解試劑，稀釋劑，細胞/血球計數儀等。

4.【儲存條件及有效期】

試劑盒的效期穩定性、開封穩定性、運輸穩定性等。以及當試劑表面變化或變質時情況的描述及相關警示。5.【樣本要求】

樣本采集和處理的目標是獲得均勻的單細胞懸液，同時必須盡量保證細胞的活力和完整性，防止目標細胞的損失。樣本操作不宜過度，避免對細胞結構和抗原性造成破壞。故對于流式細胞分析而言，樣本處理對實驗結果至關重要，應盡量減少由于樣本采集或處理不當對實驗造成的影響。

在產品說明書中應重點對以下內容予以明確：（1）所需的樣本量、采樣方法（對抗凝劑或抗凝管的要求）及樣本采集的注意事項，盡量引述相關標準操作規程。

（2）樣本處理：溶血洗滌（或非洗滌）、細胞分離和提純描述、離心和固定等方法；樣本保存、轉運的條件和方法。

（3）染色前穩定性：即采樣后在合理的保存條件下，多長時間內必須進行抗體標記（染色）；如果不同抗凝劑樣本的穩定時間有差異，則應分別進行闡述。

（4）染色后穩定性：即樣本在完成抗體標記后至上機分析前可以穩定保存的條件及期限。最好結合染色前穩定性的要求對上機分析前的穩定性進行綜合評價。

（5）避免使用的樣本類型，如有微生物污染、乳糜、凝集或細胞活力不達標準等，在一般情況下應避免使用上述樣本，除非樣本有不可替代性，則應說明處理該種樣本的方法，并應在結果報告時明示。（6）達到最佳染色效果所要求的目標細胞計數。①盡量采用公認的國際或國內標準操作方法進行細胞計數，保證計數準確性；②詳述計數與預期不符時應采取的處理方法（濃縮或稀釋等）；③提醒實驗操作人員細胞計數的注意事項。

（7）樣本活力要求及評估方法：為避免非活性細胞的非特異性結合，應評估細胞活性并設定有活力細胞的百分比下限，并推薦相關的有活力細胞評估方法。

（8）優化為最佳染色效果所需注意的重要信息；其他有關樣本采集、處理及保存的注意事項。

6.【適用機型】所有適用的儀器型號，如對配套用軟件有要求也應做特別說明，并提供與儀器或軟件有關的重要信息以指導用戶操作。

7.【檢驗方法】對于流式細胞分析而言，實驗操作步驟對實驗結果的影響至關重要，因此，應詳細說明達到最佳染色效果的實驗操作各個步驟，包括：

（1）試劑使用條件：溫度/濕度條件、試劑用量、染色時間、是否需無菌操作等。

（2）簡述試驗開始前流式細胞儀的設臵方法，校準及質控程序。

（3）詳細闡述試驗操作步驟、注意事項。如對照的設定方式及類別（同型陰性對照、陽性對照、正常人血細胞對 照等），設門方法舉例及代表性數據圖示；靶細胞分類計數的方法及步驟、計算公式以及相關注意事項。

（4）校準：適用校準品的生產企業、產品名稱及貨號等詳細信息，校準品的使用方法、推薦的校準周期及相關注意事項。

（5）質量控制：適用質控品的生產企業、產品名稱及貨號等詳細信息，質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質控結果與預期不符，提示檢測結果不可靠，不應出具檢測報告。如質控不合格應提供相關的解決方案。

8.【參考值（參考范圍）】

應注明待測標記細胞或分子在常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設定該參考值（范圍）所選健康人群的特征，如有必要，需對不同年齡段人群、不同性別或具有明確地理差異人群的參考值分別進行詳述。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

9.【檢驗結果的解釋】

由于流式細胞儀分析技術的專業性較強，檢測過程中的影響因素較多且同一分析目標在不同人群的表達復雜多樣，因此，流式細胞檢測的數據分析、結果解釋和出具臨床報告 經常具有較大的挑戰性，結果解釋不當可能對病人的診治造成很大影響。建議負責數據解釋和出具報告的實驗人員需經過正規的技術培訓且有一定的臨床經驗，二者結合有助于對實驗數據做出合理的醫學解釋。

產品說明書中的本部分內容應對上述情況進行必要的建議，還應對設門方法、數據分析、異常值處理、臨床相關提示等內容做出合理解釋。

10.【檢驗方法局限性】

（1）本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

（2）使用該試劑的其他限制，如樣本、保存方法、保存時間，特殊患者可能出現的不正確結果，儀器設臵不當的影響等。

（3）是否與經其他試劑或儀器獲得的同類數據具直接可比性。

11.【產品性能指標】 詳述以下性能指標：

（1）精密度：簡要說明精密度評價的方法，建議以列表的方式列出批內/批間、日內/日間、運行內/運行間精密度等信息，以標準差（SD）和變異系數（CV）的形式表示精密度研究結果。

（2）線性：包括細胞計數濃度范圍和待測目標物陽性 細胞百分比濃度范圍兩類，申請人應至少對其中一個進行合理驗證并在此列出，簡要注明實驗方法、所用儀器及軟件等信息。

（3）對比試驗研究：簡要介紹參比試劑（方法）的信息、所采用的統計學方法及統計分析結果、圖示。

（4）分析特異性：有關交叉反應和干擾因素的驗證信息。如：對溶血、高脂、黃疸等內源性干擾因子的濃度限值要求（如有必要），樣本中可能存在某些內生物質與待測抗原有相似化學結構或抗原表位，如自身抗體、蛋白、激素或近期服用的某些藥物（如生物制劑），這些物質可能與試劑中的單克隆抗體發生交叉反應而影響檢測結果，如未進行相關研究也應提供相關警示說明。

12.【注意事項】應至少包括以下內容：

（1）生物安全性警告：接觸到的臨床樣本、質控/校準品、實驗廢棄物等材料應當作為潛在傳染物進行處理，并且采用符合法規的預防措施對其處理。

（2）有關儀器設臵的警示，如：流式細胞儀未經正確校準、熒光滲漏未行合理補償以及檢測區域（設門）未精確定位，則可能產生錯誤的檢測結果。

（3）有關試劑準備的注意事項：如冷藏避光保存、切勿冷凍、使用前恢復室溫等

（4）針對某些白細胞濃度過高或過低的情況，在樣本 處理時需采用的特殊處理方式，如血樣稀釋或細胞濃縮等操作。

（5）試劑特殊成分或操作使用試劑危害性的警告及注意事項：如疊氮化鈉、甲醛等；使用不當的處理方式

（6）保證試驗結果準確的其他操作注意事項。

（三）擬定產品標準及編制說明

擬定產品標準應符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》的相關規定。另外，對于國產第三類體外診斷試劑，應參考《中國生物制品規程》（2000年版），將擬申報產品的主要原材料、生產工藝及半成品檢定等內容作為附錄附于標準正文后，并在正文的“產品分類”項中引出該附錄內容。

該類產品注冊檢測的技術要求主要包括：準確度、線性、精密度、染色穩定性等相關指標，具體要求的設臵應參考相關的國家/行業標準（如有）執行，企業標準要求不得低于國家/行業標準要求。

（四）注冊檢測

對于首次注冊產品，申請人擬定申報產品的產品標準后，應當在國家食品藥品監督管理局認可的、具有相應承檢范圍的醫療器械檢測機構進行連續3個生產批次樣品的注冊檢測。

對于已經有國家參考品的流式細胞檢測項目，在注冊檢 測時應采用相應的國家參考品進行,對于目前尚無國家參考品的項目，生產企業應建立自己的質控體系并提供相應的內部參考品。

（五）主要原材料研究資料

應提供主要原材料如單克隆抗體、標記熒光素的選擇、來源、制備過程、質量標準和質檢報告等研究資料。若主要原材料為企業自行生產，則應詳述原材料（主要是單克隆抗體）的制備及生產過程、雜交瘤細胞的選擇、技術指標、質量控制、國際相關權威機構（如國際人類白細胞分化抗原協作組織，HLDA）的認證情況（如有）等；如主要原材料來自外購，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，外購方名稱，提交外購方出具的有關單克隆抗體后雜交瘤細胞的性能分析或檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據。對熒光染色方法、染料選擇依據，多色標記中熒光的交叉重疊驗證等研究。

（六）主要生產工藝及反應體系的研究資料

1、生產工藝的研究資料主要包含：

（1）主要生產工藝介紹，可以圖表方式（工藝流程圖）表示。

（2）生產工藝中關鍵步驟的質量控制要求及質控方法。（3）生產工藝的確定資料，如：生產工藝的選擇依據，生產工藝的優化過程及方法等。

2、反應體系的研究資料主要包含：（1）反應原理介紹。

（2）產品說明書中描述的最佳反應條件各步驟的確定方法，包括需要的樣本體積、樣本的處理、保存時間，反應時間、溫度的確定、抗體的用量（重要）、是否需反向加樣、溶血/洗滌操作、去除干擾等。

（3）如產品說明書中使用了其他前處理試劑或流式細胞儀、儀器設定方法、或分析軟件等達到最佳反應條件，則應將使用這些試劑或儀器的研究內容包含至該項資料中。

（4）應說明配合該產品所使用的分析方法并進行驗證，如不同平臺方法、不同軟件分析、操作注意事項等。

（5）不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。（6）質量控制：同型陰性對照、正常成人樣本對照、商業化陽性質控品、熒光信號與散射光結合對各細胞群的確認等。

（七）分析性能評估資料

企業應提交原廠在產品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每一項性能的評價，都應包括研究目的、實驗設計、可接受標準、實驗數據、統計方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、所用軟件、臨床樣本來源等。對用于多色流式細胞分析的試劑（如 CD3/CD4/CD8淋巴細胞亞群檢測試劑），其待測每個指標（如CD3、CD4和CD8三個指標）的所有分析性能均應分別進行相關的驗證。分析性能評價的實驗方法可以參考相關的CLSI-EP文件或國內有關體外診斷產品性能評估的文件進行。

1.準確度

對測量準確度的評價主要包括：與國家標準品（和/或國際標準品）的偏差分析和方法學比對兩種方法，企業可根據實際情況選擇合理方法進行研究。

（1）國家（國際）標準品的檢測及偏倚情況 如果研究項目有相應國家（國際）標準品，則使用國家（國際）標準品進行驗證，重點觀察對相應標準品檢測結果的偏差情況。

（2）方法學比對

采用國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產生差異結果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量 標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本采集及處理的差異、濃度分布范圍及不同濃度范圍的可接受標準及合理的統計學分析等要素。

2.精密度：

精密度是指在規定的檢測條件下，相互獨立的測試結果間的一致程度，本類試劑的精密度評價主要考慮細胞計數結果和熒光強度兩方面。建議采用多個水平的質控品用于細胞計數精密度的評價，各個濃度均應在試劑盒的線性范圍內且有一定的臨床意義（醫學決定水平），通常包括該檢測指標的正常范圍、異常低值和高值樣本。對于質控品或校準品的精密度評價，應包括其所有質控或校準項目，如熒光信號及散射光要求等。

在進行精密度評價時，除申報試劑本身的影響外，還應對操作者、適用機型、不同軟件及實驗地點等要素進行相關的驗證。企業應制定合理的精密度評價方案，例如：在每個適用機型上進行至少20天的連續檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整運行，每天內兩次運行間的時間間隔不少于3小時，從而對批內/批間、日間、運行內/運行間、不同操作者間的精密度以及各變量綜合的總精密度進行評價。除精密度質控品外，建議選擇適量臨床采集的新鮮病人樣本（包括所有適用樣本類型）作為無靶值質控品進行精密度評價，以更好地模仿臨床檢測環境。3.線性范圍：

本類產品線性主要包括稀釋細胞濃度范圍和標記抗體陽性細胞的百分率范圍兩種線性范圍。企業可根據實際需要及以往的研究習慣自行選擇其中一種對線性的要求進行驗證。企業應對每個測量參數建立合理的線性范圍，在建立一個參數的線性范圍時，應該盡量將預期測定范圍加寬，在合理范圍內選擇7-11個濃度水平，每個水平2-4份復制液，取每個濃度水平重復測量的均值用于線性回歸分析，依據實驗結果逐漸減少數據點直至表現出最寬的線性范圍，擬合回歸直線的判定系數（R）應大于0.95。

建立稀釋細胞濃度線性范圍時，所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，建議采用混合血漿或自體血漿進行稀釋，同時應考慮多倍稀釋可能造成的基質效應。對于標記抗體陽性細胞百分率的線性范圍，建議企業選擇經確認的陽性細胞株和陰性細胞株按照恒定的細胞總數將兩種細胞進行不同比率的混合，陽性細胞數與陰性細胞數比例可以從0%到100%不等，從而確認合理的有關陽性細胞百分率的線性范圍。

4．特異性：

（1）采用多種方法對申報抗體與靶抗原結合的特異性驗證研究，如采用競爭性抑制法、抗體與抗原純品的結合研究、免疫印跡技術或胞膜抗原的基因轉染技術等方法對抗原

2抗體結合的特異性進行相關的驗證；有關靶抗原的細胞或組織分布特異性的研究，如抗體與不同細胞系的反應譜等。

（2）交叉反應性：驗證所申報單克隆抗體除與目標抗原的結合外，是否與樣本中可能存在其它內生或外源物質發生交叉反應，如與待測抗原有相似化學結構或抗原表位的蛋白、激素或近期服用的某些藥物等。

（3）干擾：本處所指的干擾是指經過生產商指定的樣本處理方法后，檢測時是否還存在其他影響結果干擾因素或干擾物質。如有，生產商應進行說明并驗證，使用醫學相關水平的干擾物濃度進行驗證，另外，亦建議申請人在每種干擾物質的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進行評價。

（八）參考值（范圍）確定資料

應詳細描述用于參考值（范圍）確定健康人群的地域、年齡、性別等特征，并對統計分析方法進行詳細解釋?？梢詤⒖紘鴥然驀H有關參考值（范圍）制定的指南文件推薦的方法進行。不同種族、年齡或性別人群如有明顯差異應分別進行相關的統計分析并設臵不同的參考值（范圍）。

（九）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究。前者主要包括實時穩定性（有效期）、高溫加速破壞穩定性、運輸穩定性以及開瓶穩定性等研究，申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方 案。穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實施方案、詳細的研究數據以及結論。對于實時穩定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩定性主要考慮染色前和染色后穩定性，前者是指樣本采集后至染色（標記）前的穩定性，后者是指染色（標記）后到上機分析前的穩定性。樣本染色前、染色后穩定性需結合試劑的穩定性研究綜合進行考慮。可以在合理的溫度范圍內選擇多個時間點（應至少包括范圍的上限和下限溫度），每間隔一定的時間段對采集樣本或標記后樣本進行全性能的分析驗證，從而確認樣本染色前和染色后的合理保存條件和有效期。

試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（十）臨床試驗研究 1.樣本例數

考慮到流式細胞儀配套用檢測試劑種類繁多、臨床用途廣泛但主要原料、生產工藝及檢測原理等非常相似的特點，該類試劑臨床試驗研究的總樣本數為不少于500例。

2.臨床研究單位的選擇

流式細胞儀配套用檢測試劑的臨床研究應在三家以上（含三家）省級醫療衛生單位進行，對于特殊使用目的產品可以在相應的市級以上?？漆t院或其它診療機構開展臨床研究。建議在國內不同城市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性；臨床研究單位須具有流式細胞儀專業的技術人員及相應的儀器設備，確保該項研究的實施。實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統的各環節（儀器、試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數據的準確性及可重復性。流式細胞儀檢測的專業性較強，實驗操作人員須接受過流式細胞儀技術的專業培訓，并經過考核合格后上崗，具備實驗室檢測和臨床病情相結合的流式細胞儀相關的檢測經驗，3.研究方法

（1）境內已有同類試劑批準上市產品的臨床研究： 選擇中國境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品作為對照試劑，采用擬申報產品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明考核試劑與已上市產品等效或優于已上市產品。

（2）境內尚無同類試劑批準上市的產品臨床研究： 可以選擇國外已上市、普遍認為質量較好的同類產品作為對照試劑，采用考核試劑與之進行對比試驗研究，證明本 品與對照試劑等效或優于對照試劑。同時，還應結合每個患者的臨床病情對申報試劑的檢測結果進行綜合判斷，如有必要，需對研究對象進行相關的跟蹤監測研究，以綜合判斷申報試劑的檢測結果，驗證其與臨床病情的一致性。

4.試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設臵應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數據收集過程。

5.臨床病例選擇

絕大多數采用流式細胞儀方法檢測的血細胞或組織細胞抗原對于疾病診斷的靈敏度和特異性較低，與器官/組織定位、疾病良惡性區分以及與病情的進展程度雖有一定關聯但多無明確的量值-病情相關關系，而且，多數情況下，該類試劑在用于病變的診療時需要多個標記物組合檢測才能體現其臨床意義。因此，在進行臨床研究時，除有針對性選擇目的性較強的病例外，還應選擇部分其他相關的抗原表達 類似或需鑒別診斷的病例。

臨床研究試驗中應包括對部分來自正常健康人群的樣本作為正常對照。驗證試劑的正常參考值（范圍），比較正常組和疾病組結果，以便對申報產品的臨床性能做出全面分析。建議對健康人群例數的選擇以不超過50例為宜。對于新試劑或臨床意義有待明確的試劑，可適當增加正常樣本數。不管是健康人群或不同病種的患者，每一組受試者的最小入選人數均須滿足統計學分析的基本要求。

6.結果差異樣本的驗證

在數據收集過程中，對于兩種試劑的檢測結果有明顯差異的樣本，應采用臨床上普遍認為質量較好的第三種同類試劑或其他標準方法進行驗證試驗，同時結合患者的臨床病情對差異原因及可能結果進行分析。

7.統計方法：對臨床試驗結果的統計應選擇合適的統計方法，如相關分析、線性回歸、ROC曲線分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對實驗試劑和對照試劑的兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數（r值）或判定系數（R）、回歸方程斜率及y軸截距等指標。在臨床研究方案中應明確統計檢驗假設，即評價實驗試劑與對照試劑是否等效的標準。

8.臨床試驗結果報告

根據《體外診斷試劑臨床研究技術指導原則》的要求，2臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。

（1）臨床試驗總體設計及方案描述

①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

②病例納入/排除標準、不同病種的預期選擇例數及健康人群的選擇標準；

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等； ④統計學方法、統計軟件、評價統計結果的標準。（2）具體的臨床試驗情況

①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

②對各研究單位的病例數、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數及百分比；

③質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估；

④具體試驗過程，樣本檢測、數據收集、樣本長期保存、結果不一致樣本的校驗等。

（3）統計學分析 ①數據預處理、差異數據的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數據統計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R是判定系數，同時應給出b的95%（或99%）臵信區間，定量值結果應無明顯統計學差異。

另外考慮到某些檢測指標在不同的樣本濃度區間、不同年齡段人群或不同疾病來源的樣本可能有較明顯的差異，因此，如有必要，建議以上述相關要素為依據分組并對各組數據分別進行統計分析，以更好的驗證兩種試劑的相關性。

（4）討論和結論

對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

225

四、名詞解釋

1.準確度（accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

2.精密度（precision）：在規定條件下，相互獨立的測試結果之間的一致程度。精密度的程度是用統計學方法得到的測量不精密度的數字形式表示，如標準差（SD）和變異系數（CV）。

3.線性（linearity）：在給定測量范圍內，給出的測量結果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統的測量示值或測量結果相關于樣本的賦值符合直線的屬性。

4.分析特異性（analytical Specificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫學相關濃度值水平的分析干擾程度（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應物）。

五、參考文獻：

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（國食藥監械[2007]229號）

2.《體外診斷試劑臨床研究技術指導原則》（國食藥監械[2007]240號）

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國食藥監械[2007]240號）

4.NCCLS EP9-A2：Method Comparison and Bias Estimation Using

Patient

Samples;

Approved Guideline-Second Edition(September 2002).5.NCCLS

EP5-A2:Evaluation

of

Precision Performance of Clinical Chemistry Devices;Approved Guideline-Second Edition(August 2004).6.NCCLS EP6-A: Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach;Approved Guideline.7.H20-A2:Reference Leukocyt(WBC)Differential Count(Proportional)and Evaluation of Instrumental Methods;Approved Standard—Second Edition.8.H42-A2:Enumeration of Immunologically Defined Cell Populations by Flow Cytometry;Approved Guideline—Second Edition.9.H43-A2:Clinical Flow Cytometric Analysis of Neoplastic

Hematolymphoid

Cells:

Approved Guideline—Second Edition.10.H44-A2: Methods for Reticulocyte Counting(Automated Blood Cell Counters, Flow Cytometry, and Supravital Dyes);Approved Guideline—Second Edition.11.H52-A: Fetal Red Cell Detection;Approved Guideline.12.ILA26-A: Performance of Single Cell Immune Response Assays;A pproved Guideline.13.王建中：《臨床流式細胞分析》，上海科學技術文獻出版社

14.杜立穎，馮任青：《流式細胞術》，北京大學出版社 15.馮仁豐，《臨床檢驗質量管理技術基礎》（第二版），上海科學技術文獻出版社

16.《中國生物制品規程》（2000年版），化學工業出版社

第三篇：體外診斷試劑申報資料技術審評要求

體外診斷試劑申報資料技術審評要求及常見問題

安娟娟主講

裝訂成冊

首頁目錄、按順序排列，加分隔頁，資料編號 一式一份（說明書，標準均一式兩份）A4打印，內容完整清晰，不得涂改 各項申報資料內容一致 中外文資料，提交翻譯件 產品名稱符合要求 提交要求的電子版

部分診斷試劑產品，尤其是進口注冊產品，命名不符合要求，可能會產生發補和延期

企業發布的資料里，企業要注意提供可編輯功能的WORD電子版。這樣可以減少評審人員工作量，加快審評速度

申請表是一份很重要的文件資料，所有評審均以申請項目為依據，不要出現打字錯誤。境外申請人項目用英文填寫，申請表一經提交，不得更改。

企業在填寫的過程中，對電子上報資料要特別注意上述問題，避免在注冊過程中變更一些注冊事項。審評過程中，不允許增加該產品的適用范圍、規格等事項。

證明性文件

生產企業資質證明文件有產品類別描述，應覆蓋申報產品

注意生產企業名稱、地址等信息與申請表或體系資料等不一致的情況：比如企業生產地址與總部地址差異的問題;或者分公司情況 資質證明文件，注意有效期

境外上市文件，應為申請人所在國（地區）批準該產品在本國（地區）上市的證明 上市文件應完整并公正，如有變更應提交原產國注冊管理機構批準變更的證明

(樂爸：個人理解，與進口商充分溝通，了解進口產品生產企業情況。需要說明的內容及時利用CFG等渠道進行必要說明，避免信息不全或信息失真所導致的審批困難。)

對境外無需獲得醫療器械上市許可的產品應提交該產品不作為醫療器械管理的證明文件 對于豁免上市的，應該依據法規要求提交相關資料

證明文件中，產品名稱，包裝規格，預期用途等應與申報產品相同 涉及企業合并收購等情況應提供相關證明性文件 提供國外產品上市批件，需要提供批件的附件 同時提供

如果產品在國外有多次變更的，希望注冊申報時把所有的批件交全

涉及企業合并收購等情況應提供相關證明性文件——部分企業在510K批件情況下，企業合并收購等情況下原公司信息可能不會更改 所以需要提供額外資料說明情況

歐盟認證情況下，注意批件資料的充分性

比如list A 批批檢產品應該提供產品的批批檢報告 綜述資料

產品預期用途——用途，臨床背景，相關方法

產品描述——技術原理，原材料，生產工藝，質控校準溯源

生物安全性說明——人源材料，牛羊源性，其他動物源及微生物來源，病毒滅活措施及證明文件 產品主要研究結果的總結和評價——主要研究結果總結，產品評價 其他——同類產品上市情況，技術方法及臨床應用，與同類產品異同，新產品預期用途文獻

綜述資料不是索引，該描述的內容需要進行描述，不能因為其他資料中有相同內容就不做。綜述資料寫的質量好壞，決定主審人員對申報資料的評審態度（應該來說，他們第一眼看的就是綜述資料，并通過綜述資料整理對產品的概念）

“其他”這部分內容，大家在提交資料過程中要特別重視

說明技術及同類產品的來龍去脈，講清楚自己的產品技術與同類或現應用技術的異同點，并對自己產品所使用技術的情況做好評估。

不同方法學之間，彼此差異及特點。以及在本項目檢測過程中所具有的特性。綜述資料應按照法規要求，逐條展開。

安全性評價說明，尤其是牛源性材料的來源及安全性說明要重視 產品說明書部分

符合指導原則要求，批準的說明書作為附件隨注冊證發給企業，并蓋章。

境外說明書，應提供原文說明書，翻譯中文說明書，以及按法規要求的格式化說明書

如果原本產品在原產國不需要說明書，在國內注冊時還是需要按法規要求制作格式化的說明書 翻譯的中文說明書，其內容應與原文說明書完全一致，不得刪改任何內容

說明書中所聲稱的所有內容，均應在注冊申報資料中有相關數據支持，如果數據來自參考文獻，應在說明書中提供參考文獻出處。

過于籠統的內容，比如流感試劑。檢測流感A或B。在預期用途中需要將能夠檢出的毒株列明（安娟娟舉的例子）

注冊標準（文本符合GB/T 1.1）

即使采用國標行業標準未產品標準的，還是應當做一個適合自己企業的一個標準 進口產品標準應包含英文版和中文版，相關信息應與說明書一致。明確對國行標的引用，檢測項目技術要求應與說明書技術參數要求相符

國行標的動態，企業在目前國行標加速發布的情況下應及時跟進國行標的發布/更新情況 避免因為國行標的更新或者發布對企業正在進行的產品注冊工作的影響 國產第三類產品應該參照《生物制品規程》來寫 原材料、半成品要求作為標準附錄形勢添加 標準正文中引出附錄內容

原料不同廠家，不同來源的性能可能差距較大，所以應在標準中寫明，并在后續變更的情況下及時按要求進行變更

藥品轉器械產品，并執行試行規程的，必須先對規程進行轉正后，再進行藥轉械。試行標準必須轉正，非常重要。

檢測報告部分內容

三類要求連續三批

二類產品實際上要充分考慮批間差計算所需批次要求

企業送樣檢測時，需要確認檢測單位對該項目的檢測能力及承檢范圍

檢測報告，如有新的國行標實施，在將側過程中應執行，執行日期以檢測報告中的送檢日期為準。

重新注冊及變更注冊過程中，法規未要求注冊檢驗。但當企業編制產品標準發生改變時應當提交符合標準的注冊檢驗報告。如被檢項目有國家標準品，注冊檢驗應使用國家標準品。

企業應當管制檢測中心檢測過程中對標準的意見和建議，法規給了相應的責任，且檢測中心需要對國行標的執行情況進行跟進。所以，他們意見企業應充分參考 國家標準品的問題，中檢所負責國家標準品的制備發放等等

如果有國家標準品，但企業未使用的，審評過程需要企業重新進行注冊檢驗或符合性檢驗。標準的印制問題——今年6月實施的標準最近剛剛印刷完成，大家保持關注 企業應當主動關注國行標的動態，以保證產品標準與國行標的一致性

重新注冊及變更申請未要求注冊檢驗 但當企標發生改變時應當提交標準的驗證報告

即交一份企業自己的驗證報告，證明所改變的方法是成立的

國家標準品升級換代，重新注冊時應有一個符合新panel的符合性報告

主要原材料的研究資料

主要原材料選擇過程中，應通過相應數據證實原材料優選依據 相關數據，也應該寫到主要原材料選擇的資料中 如果同一原料，選擇多個供應商情況

可能出現多種配合檢驗的情況，所以申報資料難度加大 如果真的是自己研發的，這些都是現成的資料

質控需要有定值的過程

溯源如何來做？

1.按照國行標有關溯源要求 2.中檢所現有國家標準品標化

原材料無論外購還是生產的，都應該具有詳盡的質量要求 外購校準品應提交具體試驗資料

在任何產品設計過程中，輸入輸出過程檢驗碧波可少。主要生產工藝及反應體系研究資料

本部分內容要求的是技術資料，不是任何陳述或者描述性文字

工藝資料應該按照法規要求提交完整資料，不得使用簡單的圖表進行概述 分析性能評估資料

分析性能評估與標準檢測不是一個概念，是研發過程中一個操作

進口產品按照NCCLS的EP要求來做，建議國內企業參考EP要求進行，但并不強制 可以比注冊標準簡單，但應提供盡量詳盡的技術資料

不同產品，應該根據產品特性訂合理的性能要求，并在研發基礎上將分析性能確立下來 注意問題

1.不同適用機型，不同包裝規格。提交每個規格的性能評估，適用機型必須寫型號，不能寫系列

不同包裝規格僅僅是不同裝量問題，目前按照國家法規來做，有任何問題建議與國家局溝通 參考值，參考范圍確定資料

可以通過文獻得到參考范圍，也可以通過一定范圍人群試驗得到驗證結論 但均需要在說明書中進行明確

CUT-OFF值需要進行驗證

CUT-OFF值的確立，需要進行試驗得出驗證結論 穩定性研究資料 要求：

1.在說明書聲稱的條件下，留樣。長期穩定性

2.產品運輸等不利條件下可能產生的影響、溫濕度震動等，可以模擬條件 3.開瓶后上機（如有），可能會有積累的穩定性

其他根據產品特性來看，必要時提交加速破壞試驗； 做半年，提交注冊資料，然后接著做再變更是可以的 穩定性，至少三批。每批都要做到聲稱的有效期后。

凡是說明書中，對標準質控品有額外的開瓶穩定性要求，應在標準和研究資料中單獨提出。臨床試驗部分

省級以上衛生機構，比16號令放寬 中心情況：不是省級機構但是藥理基地，需要蓋藥理機構章，可以接受

?？漆t院等特殊情況，不能濫用。應特指一些特殊產品。在選擇單位時應優先考慮省級以上醫療單位 特殊傳染病在有些疾控中心可以做，但也可能要求增加臨床單位臨床數據 比如H1N1,雖然很多企業都在CDC做。但最后都被要求補充臨床單位病例 肝炎艾滋產品允許三家里有一家是中檢所 戒毒中心僅限毒品檢測

臨床數量，臨床標本數量不足的情況下可以多選醫院

倫理委員會——可以只通過牽頭單位倫理委員會，如果不通過倫理，必須由醫院出具不需要倫理的證明 臨床具體樣本數量并不是首要因素。臨床樣本選擇、人群選擇，干擾樣本的科學選擇比較重要。臨床試驗機構簽章指臨床試驗機構公章，和/或臨床試驗主管部門公章

臨床前檢驗報告，可以是企業自檢報告，目的是保證用于臨床的產品，其質量滿足產品的質量要求。生產及自檢記錄內容，一般沒什么問題，但進口產品往往會僅提交成品檢驗報告，不行的。包裝標簽樣稿，應提交每種包裝規格包裝標簽樣稿

體系考核報告覆蓋 誰考核向誰申請覆蓋 重新注冊部分

重點：體系有效，不良事件情況

重新注冊合并變更申請，必須在申請表中提出，目前國內法規要求不盡詳細，因此企業應以法規未依據，明確變更申請項目，讓評審人員了解企業變更具體內容 說明書作為注冊證附件，所以說明書有任何修改都視為變更（樂爸個人理解：企業應注意規避重新注冊合并變更情況；如無法規避則需要明確并保證藥監局能夠理解）許可事項變更

進口產品注意國外產品哪些變更屬于國內法規要求的許可事項變更？

說明書的改變，無論許可事項還是行政事項改變，都要按照變更來做，不能按說明書備案來做。增加適用機型

升級儀器產品，需要按照新增適用機型來進行 增加臨床測定用樣本類型——

如果適用的樣本類型有很大差異，不建議在同一個注冊單元來做

對于血清、血漿等樣本，可能存在符合性驗證差異并不大的情況，但對于定量檢測產品而言，往往不太可能。

注意問題——針對變更申請環節 1.變更事項要明確

2.提交對應詳細的試驗資料

3.提交變更前后說明書與標準的對比表 4.充分認識產品變更的復雜性 常見問題：

1.一致性問題，涉及面廣。對每一種情況的描述在不同的申報資料中均應該保持一致，甚至有些明顯是拿先前資料直接替換。出現這種問題的資料，評審老師會特別關注。企業在提交資料中，很明顯的錯誤應該盡量避免

2.收到補充資料后應當按要求補充齊全，并一次性提對不清楚的問題可以按照中心咨詢的規定進行咨詢 如果企業補充資料時，不能夠一次性補齊又缺乏必要溝通的可以按照退審處理。

如果主審提出的問題不合理，可以進行交流，但不能夠對評審中心主審人員提出的問題置之不理。企業咨詢應遵守審評中心規定時間要求 企業注冊申報資料，不可以反復修改

企業在遞交注冊資料前，應對資料內容及關鍵項目進行仔細的核查，如果在審評過程中應盡量避免隨意變更的情況，如有必要的變化，需要先與諸神人員溝通。

臨床簽章，藥理基地章醫院章聯合醫政處的章可以，單純檢驗科章不可以接收。

不能因為自己產品的某個問題某次沒有被評審老師發現而認為是評審中心的默許，目前在增強評審力量，評審內容也在逐漸趨于細致。其他問題：

1.審評中心僅針對產品技術資料審評，體系考核或者其它問題應按照法規要求自行或找相應部門解決

省級醫院——醫院執業許可證上主管部門為省級衛生機構的

為統一審評尺度，三處會加快指導原則的編寫，會及時公布的

第四篇：孕酮檢測試劑注冊技術審查指導原則

附件3 孕酮檢測試劑注冊技術審查指導原則 本指導原則旨在指導注冊申請人對孕酮檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對孕酮檢測試劑的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規強制執行，如有能夠滿足法規要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍 從方法學考慮，在本文中孕酮檢測試劑是指采用化學發光免疫分析技術，以競爭法為基本原理，利用全自動、半自動化學發光免疫分析儀，在醫學實驗室對人體樣本中孕酮的含量進行體外定量分析的試劑。依據《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法修正案》（國家食品藥品監督管理總局令第30號）和《食品藥品監管總局關于印發體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監械管〔2013〕242號），孕酮檢測試劑管理類別為Ⅱ類醫療器械，分類編碼為6840。

本指導原則不適用于：

（一）單獨申請注冊的孕酮校準品和質控品。

（二）化學發光免疫分析法原理之外的其他孕酮檢測試劑。

二、注冊申報材料要求 （一）綜述資料 孕酮是一種重要的孕激素，屬于類固醇激素，相對分子量 314.5，主要由卵巢黃體和妊娠期胎盤生成，是睪酮、雌激素及腎上腺皮質激素的前體。正常男性和女性卵泡期產生的孕酮水平很低，分泌入血后主要結合于白蛋白和性激素結合蛋白在體內進行循環。孕酮水平與黃體的發育和萎縮有關。

孕酮的主要功能是使子宮為受精卵的著床做好準備，并維持妊娠。在月經周期的卵泡期，孕酮水平很低。排卵之后，由黃體產生的孕酮迅速升高，并在排卵后5—7天達到濃度最大值10ng/mL—20ng/mL，使子宮內膜從增生狀態轉為分泌狀態。若未受孕，在月經周期的最后4天黃體萎縮，孕酮濃度降低。若受孕，黃體不會凋落，繼續分泌孕酮，使孕酮保持在相當于黃體中期的水平，并一直持續到妊娠的第六周。在懷孕期間，胎盤逐漸成為孕酮的主要來源，濃度從懷孕前3個月的10ng/mL—50ng/mL升高到7—9個月的50ng/mL—280ng/mL。臨床研究證明孕酮在非孕期女性體內發揮著促進排卵和維持黃體的正常功能。如果黃體產生的孕酮不足，可能說明黃體功能不足，而黃體功能不足與不孕及早期流產有關。

血中孕酮升高可見于以下情況：（1）觀察婦女排卵的時間及黃體酮的生成情況：在排卵的－1、0、+1天，孕酮含量成倍增加，提示為有排卵。（2）正常妊娠、雙胎和多胎妊娠時孕酮合成量明顯增加，血液中孕酮水平相對升高。（3）妊娠毒血癥、先兆子癇、葡萄胎及原發性高血壓時，孕酮含量也會升高。

血中孕酮含量降低見于以下情況：（1）先兆流產、宮外孕、早產、閉經、不孕癥。（2）黃體功能不全、卵巢黃體發育不全時，孕酮含量相應降低。（3）腎上腺、甲狀腺功能嚴重失調也可影響卵巢功能，使排卵發生障礙，孕酮含量也會相應降低。

孕酮的檢測方法主要為酶聯免疫法、化學發光免疫分析法，化學發光免疫分析法是目前臨床檢測孕酮應用較多的檢測方法。

綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、生物安全性方面的說明、產品主要研究結果的總結和評價以及同類產品上市情況介紹等內容，其中同類產品上市情況介紹部分應著重從方法學、臨床應用情況、申報注冊產品與目前市場上已獲批準的同類產品之間的異同方面進行介紹，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號）的相關要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）1.主要原材料的選擇、制備、質量標準及實驗驗證研究資料 檢測試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細試驗資料。如抗體為申請人自制，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，申請人對該抗體技術指標的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產工藝必須相對穩定，并對其工藝有相關的驗證。同時確定該抗體作為主要原材料的依據和質量標準；

如為申請人外購，則應詳述其名稱及生物學來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標及檢驗報告，詳述申請人對該抗體技術指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據。供貨商應相對固定。

其他主要原材料的選擇及驗證資料，申請人應詳述每一原材料技術指標的要求以及確定該原材料作為主要原材料的依據，確定質量標準。若為外購，應提供外購方名稱并提交外購方出具的檢驗報告。

2.質控品、校準品的原料選擇、制備、定值過程及實驗資料 3.校準品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗方法、數據及統計分析等詳細資料。申請人應根據GB/T21415—2008/ ISO17511:2003《體外診斷醫療器械生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》提供所用校準品的來源、賦值過程和相應指標，以及不確定度等內容。

（三）主要生產工藝及反應體系的研究資料（如需提供）1.主要生產工藝介紹，可以圖表方式表示；

2.反應原理介紹；

3.檢測方法的介紹：含樣本采集、標準品和質控品、測試步驟、結果計算等；

4.反應體系研究：含樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應條件、校準方法（如有）、質控方法等的研究資料；

5.不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。

（四）分析性能評估資料 申請人應提交在產品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、試驗數據、統計方法等詳細資料。應當對多批（至少3批）產品進行性能評估。對于孕酮檢測試劑，建議著重對以下分析性能進行研究。

1.通過重復性和批間差考察精密度 1.1重復性 在重復性條件下，對濃度（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L的樣品分別重復測定10次，計算10次測定結果的平均值（）和標準差（SD），根據公式（1）得出變異系數（CV），其測量結果的變異系數（CV）應不大于10%（儀器自動操作法）或不大于15%（手工操作法）。

CV=SD/×100%........................................（1）1.2批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內的樣本各重復測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標準差（SD）。按公式（1）計算變異系數（CV）。其測量結果的變異系數（CV）應不大于15%。

2.準確度性能評估 按以下優先順序選擇準確度性能評估方法：

2.1相對偏差 2.1.1用可用于評價常規方法的參考物質/有證參考物質（CRM）對試劑（盒）進行測試，重復檢測3次，取測試結果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果3次結果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結果不合格，即判為不合格。如果有1次結果不符合要求，則應重新連續測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結果符合要求，則準確度符合企業規定要求。

Bi =（Xi －T）/T………………………（2）式中：Xi—單次測試結果；

T—有證參考物質標示值或各濃度人源樣本定值；

Bi—單次相對偏差。

注：首選國家參考物質，如無國家參考物質可選用國際參考物質。

2.1.2對企業參考品進行檢測 用參考方法定值的企業參考品對試劑（盒）進行測試，重復檢測3次，取測試結果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果大于等于2次的結果不合格，即判為不合格。如果有1次結果不符合要求，則應重新連續測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結果符合要求，則準確度符合企業規定要求。

2.2回收實驗 選擇接近參考區間的常規檢測樣本，分為體積相同的3—4份，在其中2—3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標液制備待回收分析樣本，加入體積不大于原體積的10%，制成2—3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎樣本。用待評價系統對待回收分析樣本和基礎樣本進行測定，通常對樣本進行3次重復測定，計算均值，取其均值進行下述計算。

回收率應在85%—115%范圍內。用公式（3）計算回收率：

…………………………………（3）式中：R-回收率；

V-加入待測物標準液的體積；

V0-基礎樣本的體積 C-樣本加入待測標準物質后的檢測濃度；

C0-基礎樣本的檢測濃度；

Cs-待測物標準液的濃度。

2.3比對實驗 參考相關國際或國內有關體外診斷產品性能評估的文件進行準確度評估。

用不少于40個覆蓋檢測濃度范圍內不同濃度的人源樣品，以申請人指定的試劑（盒）作為比對方法，每份樣品按待測試劑（盒）及比對試劑（盒）的操作方法分別檢測。線性回歸計算兩組結果的相關系數（r）、斜率及偏差，結果應符合企業規定要求。

3.檢出限性能評估 申請人需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區間等相關信息。根據提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進行測定，每份樣本測定5次。對測量結果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認為所提供的空白限和檢出限的設置基本合理。

3.1低于申請人提供的空白限數值的檢測結果數量應小于等于3個；

3.2無高于3.18nmol/L的測量結果。

4.線性范圍性能評估 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度。其中，低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復測定最少2次，計算平均值，將結果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關系數（r）。

5.特異性性能評估 推薦參考《WS/T416-2013 干擾實驗指南》或相關國際、國內有關體外診斷產品性能評估的文件進行特異性評估。孕酮的干擾物質選取可參見表1，企業可在不低于行業標準的前提下根據實際情況選擇適用的干擾物質進行評估干擾程度。

5.1溶血（血紅蛋白）、脂血（甘油三酯）、黃疸（膽紅素）等干擾因素對檢測結果的影響；

5.2樣本中其他可能干擾試劑反應的物質對檢測結果的影響；

5.3資料中所提到的干擾物質，其干擾程度均不應使用模糊的描述方式，而應細化到干擾量，并提供相應的實驗數據予以支持。

表 1 孕酮干擾物參考表 序號 干擾物質 序號 干擾物質 序號 干擾物質 1 11-去氧皮質酮 6 17β-雌二醇 11 克羅米酚 2 孕烯醇酮 7 雌酮 12 11-脫氧皮質醇 3 皮質醇 8 雌三醇 13 保泰松 4 皮質酮 9 醛甾酮 14 睪酮 5 17a-羥基孕酮 10 丹那唑 15 強的松龍 評估方法：設置對照樣本組，使孕酮目標濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），重復測定（n≥7）并計算平均值（M）與標準差（SD）。設置待測樣本組，分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮的目標濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），待測樣本測量結果的平均值（n≥2）應在對照樣本組孕酮目標濃度M±2SD范圍內。其中，所添加潛在干擾物與含有孕酮的樣本之間體積比例為不大于1：9，對照樣本組的基質盡可能與待測樣本組樣本的基質一致。

6.校準品及質控品 參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業（工作）校準品及試劑盒配套校準品溯源相關資料，提供質控品賦值及其質控范圍確定的相關資料。同時，應對校準品、質控品的瓶間均勻性進行評價。

7.其他需注意問題 7.1對于適用多個機型的產品，應提供如產品說明書【適用機型】項中所列的所有適用機型的性能評估資料。

7.2如注冊申請中包含不同的包裝規格，需要對不同包裝規格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規格產品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規格產品進行的上述項目評估的試驗資料及總結。如不同包裝規格之間不存在性能差異，需要提交包裝規格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規格之間的差別及可能產生的影響。

（五）參考區間確定資料 應提交驗證參考值（區間）所采用樣本來源及詳細的試驗資料。參考區間可參考文獻資料，應明確參考人群的篩選標準，樣本來源應考慮不同性別、生理周期等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。建議參考相關國際、國內有關體外診斷產品性能評估文件開展評估。

孕酮參考區間的確定可以按性別（男性、女性）及女性的不同生理周期。如：非孕正常女性卵泡期、黃體期、絕經后 ；

孕早期、中期、晚期等，以下列舉具有代表性的國內外廠家參考區間僅供參考（見表2）。參考值研究結果應在說明書【參考區間】項中進行相應說明。

表2 各廠家參考區間篩選分組示例 廠家 篩選分組 A ng/mL B ng/mL C ng/mL D ng/mL 男性 0.27—1.22 0.2—1.4 0.026—2.75 0.1—2.0 卵泡期 0.15—1.39 0.2—1.5 0.4—2.3 0.2—2.40 排卵期 / 0.8—3.0 1.2—18.8 0.5—3.60 黃體期 3.33—25.55 1.7—27 / 6.0—20.5 絕經期 ND—0.73 0.1—0.8 0.4—1.4 0.1—1.8 早期妊娠 0—12周 / / 15.8—46 / 中期妊娠13—28周 / / 15.6—74 / 晚期妊娠 29—40 周 / / 45—143 /（六）穩定性研究資料 穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究。

試劑穩定性研究主要包括注冊單元中所有組成部分的效期穩定性及開瓶（復溶）穩定性等，如有需要可增加運輸穩定性、機載穩定性研究等。如試劑需要配制，還應對配制后試劑的穩定性進行研究。企業可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案。常用的穩定性研究方案為證實試劑在經過被作用于指定條件后仍能證明主要性能指標要求與未被作用于指定條件的試劑性能一致。穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體方法及過程。對于效期穩定性和開瓶（復溶）穩定性研究，應提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期/開封效期后的研究資料。

適用樣本的穩定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行穩定性驗證，從而確認不同類型樣本的保存穩定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數進行評價。試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究結果分別在說明書《儲存條件及有效期》和《樣本要求》兩項中進行詳細說明。樣本在不同儲存條件下的穩定性期限若有相關文獻中已明確說明，亦可作為依據。

（七）臨床評價資料 此項目已經列入《關于新修訂免于進行臨床試驗醫療器械目錄的通告》（國家藥品監督管理局通告2018年第94號）中免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄。根據體外診斷試劑臨床評價的相關要求，申請人可按照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監督管理總局通告2017年第179號）要求進行臨床評價。如無法按要求進行臨床評價，應進行臨床試驗。

對于通過臨床試驗方式進行臨床評價時，臨床試驗資料應符合《關于發布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》中臨床研究資料有關的規定。臨床試驗中的基本要求如下：

1.研究方法 選擇境內已批準上市的性能相近的同類產品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產品等效或優于已上市產品。建議企業盡量選擇方法學相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為對比試劑。

2.臨床試驗機構的選擇 應選擇不少于兩家（含兩家）已經在備案系統備案的醫療器械臨床試驗機構，臨床試驗機構實驗操作人員應充分熟悉檢測系統的各環節（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，定期對儀器進行校準、保養，最大限度保證試驗數據的準確性及可重復性。

3.臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設置應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數據收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。臨床試驗中所涉及的樣本類型應與產品說明書一致，且不應超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

開展體外診斷試劑臨床試驗，申請人應當按照試驗用體外診斷試劑的類別、風險、預期用途等特性，組織制定科學、合理的臨床試驗方案。一般應當包括以下內容：

3.1一般信息（包括產品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關信息、申請人相關信息等）；

3.2臨床試驗的背景資料；

3.3試驗目的；

3.4試驗設計；

3.5評價方法；

3.6統計方法；

3.7對臨床試驗方案修正的規定；

3.8臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本（如有）；

3.9數據處理與記錄保存; 3.10其他需要說明的內容。

4.研究對象的選擇 4.1總體要求 選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群/在進行結果統計分析時，建議對各類人群分別進行數據統計分析，孕酮檢測樣本通常為血清，總體樣本數不少于200例，參考區間范圍外的樣本數不少于30%。樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍。如果樣本類型包含血漿樣本，在上述樣本例數基礎上再增加100例與血清樣本的同源樣本比對，參考區間范圍外的樣本數不少于30%。建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質的樣本，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風濕因子陽性樣本及其他可能產生交叉反應的樣本等。

4.2非孕女性不同生理周期的考慮 非懷孕正常女性在不同的生理期，其孕酮的含量也不同，樣本選擇時，應含有一定數量的各生理周期的樣本。如:卵泡期、排卵期、黃體期、絕經期。

4.3懷孕女性不同孕期的考慮 選取一定數量的各孕期樣本，如：孕0—12周、孕13—28周、孕29—40周。

4.4樣本數量的考慮 申報的樣本類型均應在臨床試驗中進行驗證。如產品發生涉及檢測條件優化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數至少為100例，并在至少2家（含2家）臨床試驗機構開展臨床試驗；

變更抗體等主要原材料的供應商、參考區間的變化及增加臨床適應癥等變更事項，應根據產品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數。

4.5樣本類型的考慮 血清應明確存貯條件、可否凍融等。

血漿應明確抗凝劑的要求、離心速度及時間要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

5.統計學分析 對臨床試驗結果的統計應選擇合適的統計方法，如相關分析、Bland-Altman分析、線性回歸、配對t檢驗等。建議統計學負責人選擇合理的統計學方法進行分析，統計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無統計學差異。在臨床研究方案中應明確統計檢驗假設，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.結果差異樣本的驗證 對于比較研究試驗中測定結果不符的樣本，應采用“金標準”或其他合理的方法進行復核，以便對臨床試驗結果進行分析。如無需復核，應詳細說明理由。

7.臨床試驗總結報告撰寫 根據《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。

申請人或臨床試驗牽頭單位應對各臨床試驗機構的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結報告。臨床試驗報告的格式及內容如下：

7.1首篇 首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應包含該部分內容。

7.1.1封面標題 包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機構（蓋章）、統計學負責人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯系人及聯系方式、報告日期、原始資料保存地點。

7.1.2目錄 列出整個臨床試驗報告的內容目錄和對應頁碼。

7.1.3研究摘要 對臨床試驗情況進行簡單的介紹。

7.1.4試驗研究人員 列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統計學負責人、臨床試驗報告的撰寫人。

7.1.5縮略語 臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。

7.2正文內容和報告格式 7.2.1基本內容 介紹與臨床試驗產品有關的背景情況，包括：

7.2.1.1被測物的來源、生物及理化性質；

7.2.1.2臨床預期使用目的，所針對的目標適應癥人群，目前針對該適應癥所采用的臨床或實驗室診斷方法等；

7.2.1.3所采用的方法、原理、技術要求等；

7.2.1.4國內外已批準上市產品的應用現狀等。說明申請人和臨床試驗機構間的合作關系。

7.2.2研究目的 說明本臨床試驗所要達到的目的。

7.2.3試驗管理 對試驗管理結構的描述。

管理結構包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質量控制情況、統計/數據管理情況以及試驗中發生的問題及其處理措施等。

7.2.4試驗設計 7.2.4.1試驗總體設計及方案的描述 試驗的總體設計和方案的描述應清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應詳細敘述。應包括：

7.2.4.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

7.2.4.1.2病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例數及標準；

7.2.4.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

7.2.4.1.4統計學方法、統計軟件、評價統計結果的標準 7.2.4.2試驗設計及試驗方法選擇 試驗設計中應包括以下內容：

7.2.4.2.1樣本量及樣本量確定的依據。

7.2.4.2.2樣本選擇依據、入選標準、排除標準和剔除標準。

7.2.4.2.3樣本采集、保存、運輸方法等。

7.2.4.2.4對比試劑的確立。

7.2.4.2.5臨床試驗用所有產品的名稱、規格、來源、批號、效期及保存條件，對比試劑的注冊情況。考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

7.2.4.2.6質量控制方法。對質量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估；

7.2.4.2.7臨床試驗數據的統計分析方法。對各研究單位的病例數、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數及百分比。

數據預處理、差異數據的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數據統計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

定量值相關性和一致性分析：用相關分析、Bland-Altman分析、線性分析、配對t檢驗等進行定量值相關性和一致性分析，應給出相關系數、95%一致性界限、回歸分析的擬合方程y=ax+b和R2、t值、p值、95%（99%）置信區間等統計結果，定量值結果應無明顯統計學差異。

7.2.4.2.8具體試驗過程，樣本檢測、數據收集、樣本長期保存、結果不一致樣本的校驗等。

7.2.4.2.9試驗過程中方案的修改 一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應說明，對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進行詳細闡述并論證其對整個研究結果評價的影響。

7.2.5臨床試驗結果及分析 7.2.6討論和結論。對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

7.3有關臨床試驗中特別情況的說明 7.4附件 7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產品來源、產品說明書及注冊批準情況。

7.4.2臨床試驗中的所有試驗數據，需由臨床試驗操作者、復核者簽字，臨床試驗機構蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

7.4.3主要參考文獻 7.4.4主要研究者簡歷 7.4.5申請人需要說明的其他情況等。

（八）產品風險分析資料 申請人應考慮產品壽命周期的各個環節，從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知及可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析，應符合YY/T 0316—2016《醫療器械風險管理對醫療器械的應用》的要求。

（九）產品技術要求 產品技術要求應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》及《醫療器械產品技術要求編寫指導原則》的相關規定。產品注冊單元劃分應符合《醫療器械注冊單元劃分指導原則》的要求。如已有相應的國家/行業標準發布，則技術要求中不得低于其相關要求。

作為定量檢測試劑，孕酮檢測試劑的注冊檢測應主要包括以下性能指標：外觀、裝量、溯源性、準確度、檢出限、線性范圍、重復性、批間差、特異性、穩定性。各性能指標的檢驗方法應清晰明了且具可操作性。

下面就技術要求中涉及的相關內容作簡要敘述。

1.產品型號/規格及其劃分說明 明確試劑的組成、組成成分及規格。

注1：如不同包裝規格適用不同的儀器型號，則應在劃分說明中標明。

注2：如試劑盒注冊單元中包含校準品、質控品，校準品質控品可選購，但不能單獨銷售。包裝規格中可分別設計含校準品/質控品和不含校準品/質控品的兩種包裝規格。

2.性能指標 2.1外觀 外觀應做如下要求：

2.1.1試劑盒各組分組成、性狀；

2.1.2試劑盒內外包裝完整，文字符號標識清晰。

2.2溯源性 應根據GB/T21415及有關規定提供試劑盒校準品的來源、賦值過程以及不確定度等內容。

2.3檢出限 應符合企業規定要求。

2.4線性范圍 應規定線性范圍，在所規定的線性范圍內，試劑盒相關系數（r）應≥0.9900.2.5 重復性 使用同一批試劑盒測試同一份樣本，其測試結果的變異系數（CV）應不大于10%。

2.6批間差 用三批試劑盒測試同一份樣本，其測試結果的變異系數（CV）應不大于15%。

2.7 準確度 應規定準確度要求。

注：按相對偏差、比對實驗、回收實驗優先順序。

2.8特異性 分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮目標濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%，潛在干擾物濃度符合企業規定要求），各個樣本測量結果的均值應在目標濃度平均值（M）±2標準差（SD）范圍內。

2.9穩定性 根據產品特性，選擇以下方法進行驗證。

2.9.1應規定產品有效期，取到效期后一定時間內的樣品檢測試劑檢出限、線性、重復性、準確性、特異性應符合規定要求。

2.9.2根據所聲稱的熱穩定性條件取有效期內的試劑盒進行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復性、準確性，特異性，結果應符合要求。

3.檢驗方法 3.1外觀 目測檢查，應符合2.1的要求。

3.2溯源性 應根據GB/T21415—2008《體外診斷醫療器械 生物樣品中量的測量及有校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》要求提供試劑盒校準品的來源及溯源的賦值過程和不確定度的內容2.2的要求。

3.3檢出限 需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區間等相關信息。根據所提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進行測定，每份樣本測定5次。對測量結果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認為提供的空白限和檢出限的設置基本合理。

3.3.1低于提供的空白限數值的檢測結果數量應小于等于3個；

3.3.2無高于3.18nmol/L的測量結果。

3.4線性范圍 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復測定最少2次，計算平均值，將結果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關系數（r），所得結果應符合2.4的要求。

3.5重復性 使用同一批號試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內的樣本各重復測定10次，計算10次測量濃度結果的平均值（）和標準差（SD）。按公式（1）計算變異系數（CV）。所得結果應符合2.5的要求。

3.6批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內的樣本各重復測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標準差（SD）。按公式（1）計算變異系數（CV）。所得結果應符合2.6的要求。

3.7準確度 方法見（四）分析性能評估資料部分，結果符合2.7的要求。

3.8特異性 方法見（四）分析性能評估資料部分，結果符合2.8的要求。

3.9穩定性 3.9.1取到效期后一定時間內的產品，按照檢出限、線性、重復性、準確性、特異性檢測方法進行檢測，應符合2.9.1的要求。

3.9.2熱穩定性 根據所聲稱的熱穩定性條件取有效期內的試劑盒進行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復性、準確性，特異性，應符合2.9.2的要求。

如注冊單元中包含校準品或質控品，其性能指標的檢驗方法應在技術要求中予以描述。應當包括準確度、均勻性檢驗方法的詳細描述。

（十）產品注冊檢驗報告 根據《體外診斷試劑注冊管理辦法》要求，首次申請注冊的第二類產品應該在具有相應醫療器械檢驗資質和承檢范圍的醫療器械檢測機構進行注冊檢測。承接注冊檢測的機構在出具檢測報告的同時，應出具相應的預評價意見，預評價意見在提交注冊資料時應隨注冊檢測資料時一并提交。

（十一）產品說明書 產品說明書承載了產品預期用途、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學解釋的重要依據。因此，產品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

應符合《醫療器械說明書和標簽管理規定》（國家食品藥品監督管理總局令第6號）和《關于發布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求，以申報產品為基礎，以研究結果為依據，對孕酮測定試劑說明書的重點內容進行詳細說明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產品名稱】 1.1通用名稱：試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：孕酮測定試劑盒（化學發光免疫分析法）。名稱中不應當出現定性/定量等內容。

1.2英文名稱（適用進口產品）。如不適用，可刪除。

2．【包裝規格】 2.1應與產品技術要求包裝規格一致；

2.2應能清晰地描述出試劑盒的構成，不得出現試劑盒的組成成分與包裝規格中描述不一致的情況。

2.3應注明可測試的樣本數或裝量，如××測試/盒、××mL。

2.4如不同包裝規格有與之特定對應的機型，則應同時明確適用機型。

2.5單一包裝規格，可以不加標點符號；

多個包裝規格，按照分隔層次分別適用頓號、逗號、分號進行區分，以句號結束。不得采用列表形式進行描述。

3.【預期用途】 3.1第一段說明試劑盒用于體外定量測定血清或血漿中的孕酮的含量。

3.2第二段應強調臨床適應癥（可使用不同的描述方式），參考（一）綜述資料部分。

4.【檢驗原理】 應詳細闡明試劑的工作原理，例如采用基于磁微粒化學發光免疫分析技術的競爭法反應原理為：樣本中的孕酮和磁微粒包被的孕酮抗原競爭與吖啶酯標記的抗體結合，樣本中的孕酮越多，吖啶酯標記的抗體與固相磁珠包被的孕酮抗原結合的越少，樣本中的孕酮含量與光量子數成反比。

5.【主要組成成分】 5.1說明試劑盒包含組分的名稱信息，如果對于正確的操作或使用者理解其用途很重要，應詳細說明。對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.2如注冊單元含校準品或質控品也應對主要組成成分及生物學來源進行相應說明，校準品需注明其定值及溯源性。溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發布單位及編號。

如：校準品：校準品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標示，量值可溯源至國家標準物質GBW09199。

質控品需注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6．【儲存條件及有效期】 6.1對試劑盒的效期穩定性、開瓶穩定性等信息做詳細介紹，包括環境溫濕度、避光條件等。如注冊單元含校準品或質控品且其形態為干粉（包含試劑為凍干粉狀態），則應對復溶后的儲存條件、穩定性做詳細介紹。如試劑需要配制，則應對配制后的試劑的儲存條件、穩定性做詳細介紹。

6.2保存溫度不應有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應直接以℃為單位。小于3個月的穩定期限應以日或小時為單位，大于或等于3個月的穩定期限應以月為單位。

6.3如試劑盒各組分的穩定性不一致，則應對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

6.4對于可以冷凍的試劑應注明凍融次數限制。

6.5生產日期、使用期限或失效日期（可見標簽）。

7.【適用機型】 注明所適用的儀器類型，應細化到型號。如需要可提供與儀器有關的信息以指導用戶操作。

如適用儀器為酶標儀則需給出對酶標儀配置的要求，如適用儀器為非通用的儀器則需寫明其具體型號，避免“系列”。

8.【樣本要求】 　 應在以下幾方面進行說明：

8.1適用的樣本類型。

8.2在樣本收集過程中的特別注意事項。

8.3為保證樣本各組分穩定所必需的抗凝劑或保護劑等。

8.4已知的干擾物。

8.5能夠保證樣本穩定的儲存、處理和運輸方法。

9.【檢驗方法】 詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序。

9.2校準程序（如有）：應說明校準品的使用方法、注意事項、推薦的校準周期，以及何種情況須重新校準。

9.3質量控制程序：應說明質控品的使用方法、注意事項、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等。

9.4試驗結果的計算或讀取，包括對每個系數及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應舉例說明。

10.【參考區間】 簡要參考區間的確定方法。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及孕期等差異，建議各實驗室建立自己的參考區間”。

應與資料（五）參考區間確定性資料數據一致。

11．【檢驗結果的解釋】 應根據其臨床意義對可能出現的結果進行合理的解釋。

說明試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查等情況綜合考慮。

說明在何種情況下應對樣本進行重復測試，以及在重復測試時需要采取的樣本處理方式。

12.【檢驗方法的局限性】 明確常見干擾物質對檢測結果的影響，企業可根據自身情況對特殊干擾物進行說明，并注明可接受的最高限值，不應使用模糊的描述方式。不建議使用存在明顯干擾物如乳糜、黃疸等樣本。

試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據，為達到診斷目的，此檢測結果要與臨床檢查、病史和其他的檢查結果結合適用。

13.【產品性能指標】 與技術要求中主要性能指標保持一致，孕酮產品主要性能指標可包含：

13.1檢出限；

13.2線性范圍；

13.3重復性；

13.4準確度；

13.5特異性。

14.【注意事項】 14.1必要內容，如：“本品僅用于體外診斷”。

14.2如該產品含有人源或動物源性物質，應給出具有潛在感染性的警告。說明不同分析系統間的檢測結果可能存在的差異。

說明對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。

14.3說明檢測過程中應嚴格按照說明書提供的操作步驟及相關實驗室規范要求進行操作，否則可能對結果造成的影響。

14.4其他需要說明的注意事項。

15.【標識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。可參考相關標準：YY/T0466.1—2016。

16.【參考文獻】 注明引用參考文獻，其書寫應清楚、易查詢且格式規范統一，符合相關標準要求。

17.【基本信息】 17.1境內體外診斷試劑 17.1.1注冊人與生產企業為同一企業的，按以下格式標注基本信息：注冊人/生產企業名稱，住所，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，生產地址，生產許可證編號。

17.1.2委托生產的按照以下格式標注基本信息：注冊人名稱，住所，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，受托企業的名稱，住所，生產地址，生產許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑 按照以下格式標注基本信息：注冊人/生產企業名稱，住所，生產地址，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，代理人的名稱，住所，聯系方式。

18.【醫療器械注冊證編號/產品技術要求編號】 應當寫明醫療器械注冊證編號/產品技術要求編號。

19.【說明書核準日期及修改日期】 應注明該產品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關注點 （一）關注檢驗報告中檢測結果的報告單位，孕酮的結果報告單位分為兩種：ng/mL和nmol/L兩個單位的轉換公式為。ng/mL×3.18=nmol/L。

（二）關注產品技術要求及說明書中性能指標的一致性。

（三）關注臨床試驗所采用的樣本類型、樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統計方法及研究結果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》對相關內容的規定。

（四）由于孕酮在不同時期的參考范圍不同，因此需關注臨床評價資料中是否涵蓋了不同時期的臨床數據，并重點關注參考范圍研究資料。

（五）說明書中預期用途、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區間、產品性能指標、抗干擾能力等描述應分別與臨床評價資料、穩定性研究資料、主要生產工藝和反應體系研究資料、參考范圍研究資料、分析性能評估資料的研究結論相一致。

四、名詞解釋 （一）化學發光免疫分析法?；瘜W發光分析是根據化學反應產生的輻射光的強度來確定物質含量的分析方法。化學發光免疫分析是將化學發光系統與免疫反應相結合，用化學發光相關的物質標記抗體或抗原，與待測的抗原或抗體反應后，經過分離游離態的化學發光標記物，加入化學發光系統的其他相關物產生化學發光，進行抗原或抗體的定量或定性檢測。

（二）準確度（Accuracy）。一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

（三）分析特異性（Analytical Specificity）。測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫學相關濃度值水平的分析干擾程度。

（四）線性（Linearity）。在給定測量范圍內，給出的測量結果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統的測量示值或測量結果相關于樣本的賦值符合直線的屬性。

（五）精密度（Precision）。在規定條件下，相互獨立的測試結果之間的一致程度。精密度的程度是用統計學方法得到的測量精密度的數字形式表示，如標準差（SD）和變異系數（CV）。

（六）參考物質（Reference Material）。具有一種或多種足夠均勻和很好地確定了特性，用于校準測量裝置、評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質。對于該項目，指國家標準物質、可溯源至IFCC糖化血紅蛋白參考方法或標準品的標準物質、可溯源至NGSP參考方法或標準品的標準物質。

五、指導原則編寫單位和人員 吉林省食品藥品監督管理局。

第五篇：地中海貧血相關基因檢測試劑注冊技術審查指導原則（2020年）

附件3

地中海貧血相關基因檢測試劑

注冊技術審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對地中海貧血相關基因檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對地中海貧血相關基因檢測試劑的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究和驗證資料，相關人員應在遵循法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規和標準的不斷完善以及科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發生突變（包括點突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現，重者以進行性溶血性貧血為主要特征。根據珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數非洲地區，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達10%以上，廣西更是達到了20%以上。

α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達的2個基因（α2和α1），基因的排列順序為5’-α2-α1-3’。根據單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個α基因同時缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/），1個α1或α2基因發生點突變或少數幾個堿基的缺失。中國現已發現至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點突變。其中，6

種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377

T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數的98%。

α-地貧基因型和臨床分型的關系已經基本闡明。α-地貧的表型嚴重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個α-基因缺失或點突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學表現為小細胞低色素；（2）2個α-基因缺失或復合-α基因點突變，或點突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現為不貧血或輕度貧血，血液學檢查有小細胞低色素特征；（3）3個α-基因缺失或復合α基因點突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb

H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現為Hb

H病。通常，--/αTα的非缺失型

Hb

H病較單純缺失型Hb

H?。?-/-α）的臨床表現更為嚴重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb

H病患者，貧血程度較為嚴重；（4）4個α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb

Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個體一般無法存活到出生或分娩后半小時內死亡。

β-地貧是由于β-珠蛋白基因發生突變而引起，以點突變為主，少數為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個成人期表達基因（β和δ），基因的排列順序為5’-δ-β-3’。根據β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報道84種β-珠蛋白基因點突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：

c.79G>A，HBB：

c.316-197C>T和HBB：

c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。

β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學表型正?；蚺R界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現為小細胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎較為復雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會顯示中間型的表型。

2018年發布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應進行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標。2018年發布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據之一。

另外，國家衛生健康委員會發布的相關文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發省份實施地貧防控試點項目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進行血常規初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規檢查結果陽性的夫婦進行血紅蛋白分析復篩；（3）對血紅蛋白分析復篩結果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進行相應的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結果，判定為高風險夫婦。對高風險夫婦進行追蹤，及時了解受檢婦女懷孕情況，指導女方在懷孕后適宜時期接受產前診斷。產前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項目為相應的地貧基因檢測。

綜上，結合該類產品臨床使用的實際情況，本指導原則的預期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風險夫婦的評估，或胎兒的產前遺傳診斷等。

結合該類產品在中國注冊的實際情況以及當前的認知，本指導原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預期用途的相關內容進行了詳細闡述。針對其他預期用途，本指導原則僅對部分內容進行了闡述，申請人應根據產品特性，對本指導原則未涉及的內容進行補充并做出相應評價。

本指導原則的技術要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學檢測技術（如：PCR-反向點雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術指標不夠全面，申請人可以根據產品特性對不適用部分進行或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學合理性。

本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產品。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的說明、研究結果的總結評價以及國內外同類產品上市情況介紹等內容。其中，同類產品上市情況介紹部分應著重從方法學、檢驗原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細說明申報產品與目前市場上已獲批準的同類產品之間的主要區別。

綜述資料應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料研究資料包括主要反應成分、對照品（質控品）及企業參考品的研究資料。

1.此類產品的主要反應成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs、反應緩沖液等。申請人應提交相關原材料的選擇、制備和質量標準等的研究資料。如為申請人自制，應提交詳細的工藝穩定性研究資料；如為外購，還應提交供應商篩選資料以及供應商提供的原材料質量檢定報告。

1.1

核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關的驗證資料。

1.2

引物、探針

申請人應詳述引物、探針的設計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應情況。建議設計多套引物探針以供篩選，針對待測位點的特異性等進行評價，選擇最佳設計，并提交詳細的篩選研究數據。

申請人應針對選定的引物、探針原材料進行質量評價，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標記基團的激發波長和發射波長，以及功能性試驗等，并依據評價結果建立合理的質量標準。

1.3酶

酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應針對各種酶的活性進行驗證，提交功能性試驗資料，并確定酶的質量標準。

DNA聚合酶應具有DNA聚合酶活性，無核酸內切酶活性，具熱穩定性。UDG/UNG應具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內切酶活性。

1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應提交對其純度、濃度、保存穩定性等的驗證資料，以及功能性試驗資料，并確定質量標準。

2.對照品（質控品）

試劑盒的質控體系通過設置各種試劑盒對照品（質控品）來實現。陽性對照應至少包括代表性的突變位點和突變類型。陰性對照可以是含有野生型序列的核酸溶液。空白對照為不含核酸的溶液。

如該類產品所采用的方法學和檢驗原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變），其反應體系均可報出核酸序列結果，均可對管內抑制導致的假陰性結果進行質量控制，則無需另外設置內標；否則，試劑盒應另外設置內標。

對照品可采用人基因組DNA、細胞系或質粒等。空白對照應參與樣本核酸的平行提取。申請人應提供對照品原料選擇、制備、定值過程等的詳細研究數據，并對其檢測結果做出明確的范圍要求。

3.企業參考品

企業參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應提交企業參考品的原料選擇、制備方法、基因序列確認及檢驗標準的詳細研究資料等。

3.1

陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應與待測樣本一致。應至少包含所有檢測位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細胞系或質粒。

3.2

陰性參考品：應包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產生交叉反應的同源序列樣本，同時應盡量包含檢測范圍外其他檢測位點的樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測位點的雜合型樣本。

3.4

精密度參考品應至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應至少包括代表性的突變位點和突變類型，且在每一反應體系均有分布。

目前，該類產品已有國家參考品，對于申報產品所聲稱的檢測位點，企業參考品的要求應不低于國家參考品。

（三）主要生產工藝及反應體系的研究資料

主要生產工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標記（如有）等工藝過程的描述及確定依據。生產過程應對關鍵參數進行有效控制，可采用流程圖方式描述生產工藝，標明關鍵工藝質控步驟，并詳細說明該步驟的質控方法及質控標準。

反應體系研究指反應條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、PCR反應條件、閾值循環數（Ct值）等的確定。

不同適用機型的反應條件如有差異應分別提交。

（四）分析性能評估資料

申請人應針對下述各項分析性能提交詳細的評估資料，包括試驗地點、適用儀器、試劑規格、批號、試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數量、處理方法、基因型和濃度確認等）、可接受標準、統計方法、試驗數據及結論等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內外有關體外診斷產品性能評估的指導原則。

每項性能評估應盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細胞系等。

1.核酸提取/純化性能（如有）

在進行靶核酸檢測前，應有適當的核酸提取/純化步驟。該步驟應最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足該類產品的要求。

2.檢測準確性

建議采用若干份臨床樣本驗證該類產品的檢測準確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應涵蓋野生型、所有檢測位點的雜合突變型，同時盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細胞系或質粒。

3.最低檢測限

該類產品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準確性和精密度的條件下，能夠檢出目標序列的最低人基因組DNA的濃度。可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進行多次重復檢測，確定適當檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細胞系，并至少包含所有檢測位點的雜合突變型。應明確臨床樣本或細胞系與人基因組DNA濃度的對應關系。

4.分析特異性

4.1

應針對同源序列或檢測范圍外基因和位點進行交叉反應驗證，說明交叉反應樣本的制備方法、核酸序列確認方法，提交詳細的驗證資料。

4.2

應針對可能的內源和外源性干擾物進行干擾試驗研究。內源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。

干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質的方式，評價干擾物質對目標序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價；如有干擾，應確定不產生干擾的最高濃度。

5.精密度

精密度評價應采用臨床樣本進行試驗，試驗操作完全按照說明書執行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。應對每一反應體系進行精密度評價，并至少覆蓋代表性的突變位點和突變類型。

精密度評價需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進行驗證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點、時間、檢測輪次和試劑批次等。

5.2設定合理的精密度評價周期，對批內/批間、日內/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應選擇不同的實驗室進行重復實驗以對室間重復性進行評價。

5.3用于精密度評價的臨床樣本至少設置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標可設置為CV等（如有），申請人應對精密度指標評價標準做出合理要求。

（五）陽性判斷值確定資料

建議納入一定數量的臨床樣本，應包括所有檢測位點的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。

如試劑判讀存在灰區，應解釋說明灰區范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應說明理由。

（六）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要包括申報產品的穩定性研究和適用樣本的穩定性研究兩部分。前者主要包括申報產品的實時穩定性、開瓶/復溶穩定性、運輸穩定性及凍融次數限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時間等的研究。

實時穩定性研究應采用至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個時間點進行產品性能評價，從而確定產品保存條件和有效期。

如核酸提取液可保存，還需對核酸提取液的保存條件和保存時間進行研究。

（七）臨床試驗

應滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關法規、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。下面僅說明該類產品臨床試驗中應關注的重點問題。

1．針對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預期用途

1.1

臨床試驗機構及人員

申請人應根據產品特點及預期用途，綜合不同地區人種和流行病學背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規要求的臨床試驗機構開展臨床試驗。

1.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

具有地貧癥狀和/或體征，或血液學表現為小細胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進行鑒別診斷的其他疾病患者，如：缺鐵性貧血、鐵粒細胞性貧血或先天性紅細胞生成異常性貧血等。

臨床試驗所用樣本應為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應分別滿足申報產品說明書、對比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關要求。

1.3臨床試驗方法

1.3.1已有同類產品上市的申報產品

對于已批準的α-地貧突變和β-地貧突變，原則上選擇已上市同類產品作為對比試劑，評價申報產品的臨床檢測性能。

1.3.2無同類產品上市的申報產品

1.3.2.1

如新突變位點的臨床意義已獲行業認可（如：國內相關指南或專家共識），且上述認可基于充分的中國人群的臨床數據，則臨床試驗可選擇Sanger基因測序（針對新的點突變）或臨床普遍使用的其他公認方法（針對其他類型的新突變位點，如缺失）作為對比方法，評價新突變位點的臨床檢測性能。除此之外，還應提交新位點臨床意義已獲行業認可的相關證據，該部分資料可不納入臨床方案和報告。

1.3.2.2

如新突變位點的臨床意義未獲行業認可，則臨床試驗應包括兩個目的，新突變位點的臨床檢測性能評價和臨床意義評價。新突變位點的臨床檢測性能評價可參考1.3.2.1；新突變位點的臨床意義評價應提交基于中國人群的充分的臨床證據，證明基因型與表型的關系，如：隨訪或其他可證明基因型與表型關系的臨床驗證資料。

1.4最低樣本量和陽性例數

臨床試驗樣本量應采用適當的統計學方法進行估算，并詳細描述所使用統計方法及各參數的確定依據。

1.4.1

臨床檢測性能評價的樣本量估算

臨床檢測性能評價的樣本量估算可分為以下幾種情況。

對于常見突變位點，建議采用單組目標值法分別估算每個突變位點臨床試驗的最低樣本量，通過陽性符合率計算所需陽性樣本的例數，通過陰性符合率計算所需陰性樣本的例數，同時考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標值（臨床可接受的最低標準）建議均不低于95%。

對于罕見突變位點，陰性樣本的例數可根據上述方法進行估算，陽性樣本則應保證一定的例數。

對于極其罕見的、且有確切臨床證據證明其臨床意義的突變位點，陰性樣本的例數可根據上述方法進行估算，陽性樣本的例數則應結合臨床證據確定。

1.4.2

新位點臨床意義評價的樣本量估算

新位點臨床意義評價的樣本量估算，建議采用抽樣調查公式或其他合理方法進行估算。

2.針對“地貧高風險夫婦的評估”和“胎兒的產前遺傳診斷”預期用途

針對上述兩個預期用途，本指導原則僅對部分內容進行了闡述，申請人應根據產品特性，充分考慮本指導原則未涉及的內容，設計科學合理的臨床試驗并進行評價。

2.1臨床試驗機構和人員

如申報產品的預期用途為胎兒的產前遺傳診斷，除滿足法規要求外，臨床試驗機構還應取得產前診斷技術服務資質。臨床試驗人員應為經過專門培訓的取得資質的人員。機構和人員應遵循《產前診斷技術管理辦法》《母嬰保健專項技術服務許可及人員資格管理辦法》，機構應取得《母嬰保健技術服務執業許可證》，人員應取得《母嬰保健技術考核合格證書》。

2.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

如預期用途為地貧高風險夫婦的評估，則適用人群為：地貧表型篩查陽性的育齡人群。地貧表型篩查陽性的育齡人群可根據國家衛生健康委員會和地貧高發地區相關政策確定。

如預期用途為胎兒的產前遺傳診斷，則適用人群為：地貧高風險夫婦的胎兒。地貧高風險夫婦的確定可參考國家衛生健康委員會等相關文件。

臨床試驗所用樣本應為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應符合國家衛生健康委員會等相關文件的要求，并滿足產品說明書的要求。

2.3

最低樣本量和陽性例數

針對每種不同的預期用途，應分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等），也應分別采用合理方法估算最低樣本量。

3.如有其他預期用途，也應設計科學的臨床試驗，提供充分的證據，證明其預期用途。

4.不同預期用途的通用要求

4.1

臨床試驗方法、數據及統計分析

4.1.1應在臨床試驗方案或報告中明確申報產品、對比試劑和第三方試劑的試驗方法。

4.1.2臨床試驗病例總結表應以列表方式表示，包括申報產品的結果、對比試劑的結果、第三方試劑的檢測結果（如有）、臨床診斷、年齡和性別等。

4.1.3以交叉表分別總結兩種試劑的定性檢測結果，選擇合適的統計方法進行統計分析，以驗證兩種試劑檢測結果的一致性。

4.1.4

結果差異樣本的驗證

在數據收集過程中，對于兩種試劑檢測結果不一致的樣本，采用合理方法進行復核，并對差異原因進行分析。如無需復核，應說明理由。

4.2

臨床試驗方案

各臨床試驗機構的方案設置應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由該實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程。

試驗方案應確定嚴格的入選/排除標準，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結果判定時，應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的對比試劑/方法應保持一致，以便進行合理的統計學分析。另外，申報產品的樣本類型不應超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

4.3臨床試驗報告

應對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的數據和統計分析方法。

（八）產品技術要求

產品技術要求應符合《辦法》、《44號公告》和《醫療器械產品技術要求編寫指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的相關要求。該類產品作為三類體外診斷試劑，應將主要原材料、生產工藝及半成品要求等內容作為附錄附于技術要求正文后。

目前，該類產品已有行業標準，產品技術要求的相關要求應不低于行業標準的要求。

（九）產品檢驗報告

根據《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時應提交連續三個生產批次樣品的檢驗報告。目前，該產品已有國家參考品，產品檢驗應滿足國家參考品的要求。

（十）產品說明書

產品說明書應滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求，產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料的相關研究結果保持一致。下面對該類產品說明書的重點內容進行闡述。

1.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容：

1.1本產品用于定性檢測人xx樣本基因組DNA中的α-和/或β-地貧xx突變，用于：α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風險夫婦的評估，或胎兒的產前遺傳診斷。

1.2介紹地貧相關的臨床背景信息及實驗室診斷方法等，介紹被測靶標（突變位點）的相關情況。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱或數量等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業應列出相關試劑/耗材的名稱及其他相關信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應在此注明經過驗證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產企業、產品名稱以和醫療器械備案號（如有）等詳細信息。

3.【檢驗原理】

3.1對試劑盒的被測靶標進行詳細描述（基因位置、突變位點及相關特征等），對試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進行詳細介紹；對不同樣本反應管組合、對照品設置及熒光信號檢測原理等進行介紹。

3.2試劑盒技術原理的詳細介紹，建議結合適當圖示進行說明。如反應體系中添加了相關的防污染組分（如UNG酶），也應對其作用機理進行適當介紹。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩定性等，應明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限以及運送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復至室溫，凍融次數的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關的重要信息以指導用戶操作。

7.【檢驗方法】

詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：

7.1實驗條件：實驗室分區、實驗環境的溫度、濕度和空調氣流方向控制等注意事項。

7.2試劑配制方法和注意事項。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項（如適用），對核酸提取純化環節進行合理質控，明確提取核酸的濃度純度等質量要求。

7.4擴增反應前準備：加樣體積、順序等。

7.5

PCR各階段的溫度、時間設置、循環數設置或相應的自動化檢測程序及相關注意事項。

7.6儀器設置（如適用）：特殊參數、探針的熒光素標記情況、對待測樣本及其他對照品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗結果的解釋】

結合對照品、樣本管檢測結果以及檢測類型，以列表形式詳述所有可能出現的結果及相應的解釋。如存在檢測灰區，應詳述對于灰區結果的處理方式。

9.【檢驗方法的局限性】

9.1申報產品僅對下述檢測類型xx進行了驗證。

9.2有關假陰性結果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運送及處理或核酸過度降解均有可能導致假陰性結果。

9.2.2未經驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導致假陰性結果（如有）。

10.【產品性能指標】簡述以下性能指標：

10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應驗證：同源性序列等交叉反應驗證。

10.4.2干擾物質驗證：樣本中常見干擾物質對檢測結果的影響。

10.5對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統計學方法及統計分析結果。

11.【注意事項】應至少包括以下內容：

11.1如該產品含有人源或動物源性物質，應給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增實驗室管理辦法》現行有效版本等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規范執行。

三、起草單位

國家藥品監督管理局醫療器械技術審評中心。