第一篇：總膽汁酸測定試劑注冊技術審查指導原則

附件7 總膽汁酸測定試劑注冊技術審查指導原則 本指導原則旨在指導注冊申請人對總膽汁酸（Total bile acids，TBA）測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對總膽汁酸測定試劑的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中的具體內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特征對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員適用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規、國家標準、行業標準的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍 本指導原則適用于基于采用3α-羥基類固醇脫氫酶（3α-HSD）催化的酶促循環反應（酶循環法）原理，利用全自動生化分析儀、半自動生化分析儀或分光光度計，體外定量測定人血清或血漿中總膽汁酸含量的試劑盒。本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產品。

反應原理如圖所示。膽汁酸被3α-HSD及β-硫代氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NAD+）特異性地氧化，生成3α-酮類固醇（3α-KS）及β-硫代還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。此外，生成的3α-KS在3α-HSD及還原型輔酶I（NADH）存在下，又生成膽汁酸和氧化型輔酶I（NAD+）。這樣，血清或血漿中微量的膽汁酸在多次酶循環的過程中被放大，同時可使生成的Thio-NADH擴增，其擴增速率與膽汁酸的含量相關。通過測定Thio-NADH在405nm波長附近吸光度的變化率，從而計算出血清或血漿中膽汁酸的含量。

Thio-NAD+ Thio-NADH 3α-HSD 膽汁酸 3α-酮類固醇 Bile acid 3α-KS NAD+ NADH 依據《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）、《食品藥品監管總局關于印發體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監械管〔2013〕242號），總膽汁酸檢測試劑盒屬于用于其他生理、生化或免疫功能指標檢測的檢測試劑，管理類別為二類，分類代碼為6840。

二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性方面的說明、研究結果總結以及同類產品上市情況介紹等內容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號）的相關要求。相關描述應至少包含如下內容：

1.產品預期用途及相關的臨床適應癥背景情況 1.1總膽汁酸測定試劑用于體外定量測定血清或血漿中總膽汁酸的含量。

1.2總膽汁酸的生物學特征、結構與功能，在體內正常和病理狀態下的代謝途徑和存在形式。

1.3與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，如臨床相關疾病的發生、實驗室診斷方法等。

2.產品描述：包括產品所采用的技術原理，主要原材料的來源及制備方法，主要生產工藝過程，校準品的制備方法及溯源情況（如需提供）、質控品的制備方法及定值情況（如需提供）。

3.有關生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經處理或添加某些物質制備而成，人源性材料須對有關傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關的證明文件，其他動物源及微生物來源的材料，應當提供相應的說明文件。為保證產品在運輸、使用過程中對使用者和環境的安全，應提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。

4.有關產品主要研究結果的總結和評價。

5.其他：包括同類產品在國內外批準上市的情況。相關產品所采用的技術方法及臨床應用情況，申請注冊產品與國內外同類產品的異同等。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）包括主要反應成分、質控品（如適用）、校準品（如適用）等的選擇、制備、質量標準確定的方法及研究資料；

校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；

質控品應提供詳細的定值資料。

（三）主要生產工藝和反應體系的研究資料（如需提供）主要工藝包括：配制、分裝、凍干等描述及確定依據，應包含產品的工藝流程圖和關鍵控制點；

反應體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應條件（溫度、時間等）等。不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。

（四）分析性能評估資料 申請人應當提交不少于3批產品的全部分析性能評估資料，對于每項分析性能的評估都應包括具體的研究項目、實驗設計、研究方法、可接受標準、試驗數據、統計方法、研究結論等詳細資料。性能評估時應將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統的性能是否符合要求。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括實驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規格和批號、所選用的校準品和質控品（品牌、規格、批號等）、臨床樣本來源等。

對于TBA定量測定試劑，分析性能評估應至少包括試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率、準確度、精密度、線性區間、分析靈敏度、分析特異性等性能指標。干粉或凍干試劑還應包括批內瓶間差。

1.空白吸光度 用指定空白樣本測試試劑盒，在405nm 波長附近、1cm光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A1），扣除反應的非線性段或約5 分鐘（T）后的吸光度（A2），A2測試結果即為試劑空白吸光度測定值，結果均值應符合產品技術要求性能指標的要求。

2.試劑空白吸光度變化率 記錄測試啟動時的吸光度（A1），扣除反應的非線性段或約5分鐘（T）后的吸光度（A2），計算出吸光度變化值（），即為試劑空白吸光度變化率（（A/min），結果應符合產品技術要求性能指標的要求。

3.準確度 對測量準確度的評價依次包括：與國家參考物（和/或國際參考物）的偏差分析、回收試驗、方法學比對等方法，申請人可根據實際情況選擇合理方法進行研究。

3.1與國家參考物（和/或國際參考物）的偏差分析 用有證參考物質（CRM）或其他公認的參考物質或由參考方法定值的高、低2個濃度的人源樣品，對試劑盒進行測試，重復測定3次，取測試結果均值（M），根據公式（1）計算相對偏差。如果3次結果都符合規定，即判為合格；

如果大于等于2次的結果不符合，即判為不合格；

如果有1次結果不符合規定，則應重新連續測試20次，分別計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結果符合規定，即判為合格。

………………………（1）式中：

B—相對偏差；

M—測試結果均值；

T—有證參考物質標示值，或各濃度人源樣品定值。

3.2回收試驗 在人源樣品中加入一定體積標準或校準品或純品溶液，每個濃度重復測定3次，計算回收率。

回收試驗注意事項：

3.2.1加入的標準或校準品或純品溶液體積與人源樣品體積比應不大于1:19或其體積比不會產生基質的變化。

3.2.2加入標準溶液或校準品溶液或純品溶液后，樣品總濃度應在試劑盒測定線性范圍內。

3.2.3標準或校準品或純品溶液應有溯源性。

3.3比對試驗 采用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比試劑，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產生差異結果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統計學分析。

方法學比對注意事項：

3.3.1樣本貯存時間及條件由被測組分的穩定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品；

3.3.2應采用人源樣品，并且此樣本對于被測組成的影響應明確，盡量不使用含有干擾此方法的組分或條件；

3.3.3分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內均勻分布；

3.3.4商品質控物或者校準物可能存在基質效應，應避免使用。

4.精密度 4.1批內精密度 批內精密度評估應至少選擇高、低兩個濃度水平的樣本（或質控品）進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的正常參考值附近和異常值樣本，建議采用人源樣品或與人源樣品基質接近的樣本進行試驗。批內精密度（變異系數CV）應不大于5.0%，批內瓶間差（干粉或凍干試劑適用）應不大于5.0%。

4.2批間精密度 用同一質控品分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測定3次，分別計算每批3次測定的均值。相對極差應不大于10.0%。

5.線性區間 建立試劑線性范圍所用的樣本基質應與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清（或其他人源樣品），且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。

建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預期測定范圍內選擇7—11個濃度水平。例如，將預期測定范圍加寬至130%，在此范圍內選擇更多的濃度水平，然后依據實驗結果逐漸減少數據點直至表現出線性關系，確定線性范圍。

也可以采用高濃度樣本稀釋的方法驗證線性，將接近線性區間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區間的下限。按試劑盒說明書操作，對每一濃度的樣本均重復檢測2次，計算其平均值，將結果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，計算線性相關系數r，應不低于0.9900。

6.分析靈敏度 試劑盒測試給定濃度的被測物時，在試劑盒規定參數下所得的單位濃度吸光度變化率（ΔA/min）應符合申請人規定范圍。

7.分析特異性 對樣本中常見的干擾物質進行檢測，干擾物濃度的分布需覆蓋人體生理及病理狀態下可能出現的物質濃度，如膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、維生素C、血紅蛋白等，方法為對模擬添加樣本分別進行驗證，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準，確定可接受的干擾物質濃度（結果應量化表示，避免使用輕度、嚴重等模糊表述）。

藥物干擾的研究可根據需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

8.校準品溯源及質控品賦值（如產品中包含）在注冊單元包括質控品和校準品時，校準品應當提交完整的溯源性文件，包括賦值試驗資料和溯源SOP文件等。應參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算相關資料，提供質控品賦值及其質控范圍確定的相關資料。同時，應對校準品、質控品的賦值結果的瓶內均勻性、瓶間均勻性，以及其賦值結果的準確度進行評價。如校準品或質控品的基質不同于臨床常用樣本類型，還應提交校準物質互換性的相關研究資料。

9.其他需注意的問題 應當對不少于3批產品進行性能評估，對結果進行統計分析。不同適用機型、不同包裝規格，應分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規格，需要對不同包裝規格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規格產品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規格產品進行的上述項目評估的試驗資料及總結。如不同包裝規格之間不存在性能差異，需要提交包裝規格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規格之間的差別及可能產生的影響。如注冊申請中包括不同適用機型，需要提交在不同機型上進行上述項目評估的試驗資料及總結。

試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應對二者進行相關性研究以確認二者檢測結果是否完全一致或存在某種相關性（如系數關系）。對于血漿樣本，申請人應對不同的抗凝劑進行研究以確認最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結果。

性能指標的評價方法并無統一的標準可依，可根據不同的試劑特征進行，前提是必須保證研究的科學合理性。具體研究方法建議參考相關的國內外有關體外診斷產品性能評估的文件進行。

（五）參考區間確定資料 應提交建立參考區間所采用樣本來源及詳細的試驗資料。應明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數應符合統計學要求。

若引用針對中國人群參考區間研究的相關權威指南，應明確說明出處，提交文獻資料并說明引用依據，應采用一定數量的臨床樣本對該參考區間進行驗證。參考區間研究結論應與說明書【參考區間】的相應描述保持一致。

（六）穩定性研究資料 穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究。

試劑的穩定性包括實時穩定性、運輸穩定性、開瓶（待機）穩定性及凍融次數限制（如適用）等。對于實時穩定性研究，申請人應提供不少于3個生產批次在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料，并提供至少1個生產批次的開瓶穩定性和運輸穩定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結論等。如產品包含校準品和質控品，還應提供相應穩定性試驗研究資料。試劑的穩定性研究應注意選取代表性包裝規格進行研究。適用樣本的穩定性主要包括室溫保存、冷藏或冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本的穩定性進行分析驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數進行評價。

試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料 根據《關于公布新修訂免于進行臨床試驗醫療器械目錄的通告》（國家藥品監督管理局通告2018年第94號），總膽汁酸檢測試劑可免于進行臨床試驗，申請人可依照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》開展評價。申請人如無法或不適于按照上述要求對產品進行臨床評價，則應按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求開展臨床試驗。下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡述。

1.研究方法 采用國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，采用擬申報產品與之進行對比試驗研究，證明擬申報產品與已上市產品等效。

對比試驗結果不一致（檢測值差異較大）的樣本應采用參考方法進行驗證。

2.臨床研究單位的選擇 應在至少兩家經國家藥品監督管理局備案的臨床試驗機構開展臨床試驗。臨床試驗機構實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統的各環節（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和對照試劑都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數據的準確性及可重復性。

3.倫理要求 臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學準則，必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意，如該臨床試驗對受試者幾乎沒有風險，可經倫理委員會審查和批準后免于受試者的知情同意。

4.臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構的方案設置應保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由本實驗室承擔本實驗的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數據收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的參比試劑應保持一致，以便進行合理的統計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。

5.研究對象選擇 臨床試驗應選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。注冊申請人在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結果統計分析時，建議對各類人群分別進行數據統計分析。總體樣本數不少于200例，異常值樣本比例應不低于試驗總量的30%。樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

應明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數據分析時應考慮其影響。

如果待評試劑同時適用于血清和血漿樣本類型，可完成一個樣本類型不少于200例的臨床研究，同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結果間的一致性（采用待評試劑檢測），其中不同濃度樣本分布情況與總例數中分布情況應一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《關于發布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規定的200例進行試驗，異常值參照上述規定。

涉及產品檢測條件優化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產品與變更前產品或者已上市同類產品進行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機構開展臨床試驗，總樣本數不少于100例，異常值樣本數不少于30%。陽性判斷值或參考區間的變化及增加臨床適應癥等變更事項，應根據產品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數。

6.統計學分析 對臨床試驗結果的統計應選擇合適的統計方法，結合臨床試驗數據的正/偏態分布等情況，建議統計學負責人選擇合理的統計學方法進行分析，統計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統計學差異。如相關分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析、配對t檢驗等?？己嗽噭┖蛯Ρ仍噭﹥山M檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數（r值）或判定系數（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。在臨床研究方案中應明確統計的檢驗水準及檢驗的假設，即評價考核試劑與對比試劑是否等效的標準。

如試劑盒同時適用于血清和血漿樣本，可采用如相關分析、線性回歸、配對t檢驗等統計學方法來評價血漿和血清樣本測試結果間的一致性。

7.臨床試驗總結報告撰寫 根據《關于發布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。

7.1臨床試驗總體設計及方案描述 7.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

7.1.2納入/排除標準、不同人群的預期選擇例數及標準。

7.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

7.1.4統計學方法、統計軟件、評價統計結果的標準。

7.2具體的臨床試驗情況 7.2.1待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

7.2.2對各研究單位的病例數、人群分布情況進行總合。

7.2.3質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估。

7.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數據收集、樣本長期保存等。

7.3統計學分析 7.3.1數據預處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

7.3.2定量值相關性和一致性分析 用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和r、R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結果，x是對比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，r是相關系數（要求r＞0.975），如r＜0.975，應適當擴大樣本量以擴大數據范圍，R2是判定系數（通常要求R2≥0.95），計算回歸系數及截距的95%可信區間。

分別計算醫學決定水平處（或正常參考區間上限）相對偏倚/偏差及95%置信區間。醫學決定水平處（或正常參考區間上限）相對偏倚應不大于允許誤差（建議參照1/2CLIA’88、1/2室間質評可接受范圍、1/2來源于生物變異的總允許誤差、衛生行業標準等相關要求設定允許誤差）。

應給出考核試劑與對比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）或比值（相對偏倚/偏差）散點圖，觀察并分析各點的偏倚分布情況。

通過相關性分析、配對t檢驗等統計分析方法綜合評價考核試劑與對比試劑等效性。

7.4討論和結論 對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

（八）產品風險分析資料 對體外診斷試劑產品壽命周期的各個環節，從產品設計開發、原材料的采購控制、生產、預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析、風險評價和相應的風險控制基礎上，形成風險管理報告。應當符合相關行業標準的要求。

風險分析應包含但不僅限于以下方面的內容：

預期用途錯誤包括：設計開始時未設定預期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩定性失效、測量范圍失效、定量失效、量值溯源失效、校準失效。不正確的結果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產者未按照生產流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組分、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當，客戶未參照產品說明書設置參數或使用。與安全性有關的特征包括：有毒化學試劑的化學污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環境污染。

（九）產品技術要求 申請人應當在原材料質量和生產工藝穩定的前提下，根據申請人產品研制、前期臨床評價等結果，依據國家標準、行業標準及有關文獻，按照《關于發布醫療器械產品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產品技術要求，內容主要包含產品性能指標和檢驗方法。

下面就產品技術要求中涉及的產品適用的相關標準和主要性能指標等相關內容作簡要敘述。

1.產品適用的相關標準 GB/T 21415—2008《體外診斷醫療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》 GB/T 29791.1—2013《體外診斷醫療器械 制造商提供的信息 標示 第1部分：術語定義和通用要求》 GB/T 29791.2—2013《體外診斷醫療器械 制造商提供的信息 標示 第2部分：專業用體外診斷試劑》 GB/T 26124—2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》 YY/T 1204—2013《總膽汁酸測定試劑盒（酶循環法）》 YY/T 1227—2014《臨床化學體外診斷試劑（盒）命名》 2.主要性能指標 2.1外觀 符合制造商規定的正常外觀要求。

2.2裝量 液體試劑的裝量應不少于標示量。

2.3試劑空白吸光度 2.3.1空白吸光度 在405nm波長附近，測定指定空白樣品的吸光度值，重復兩次，均值即為空白吸光度，試劑空白吸光度應不大于0.8（光徑1.0cm）。

2.3.2試劑空白吸光度變化率 在405nm波長附近、光徑1.0cm下，空白吸光度的變化率應不大于0.04/min。

2.4線性區間 線性區間上限至少達到150μmol/L，在線性區間內，理論濃度與實測濃度的線性相關系數r應不小于0.9900。

2.5準確度 2.5.1提供參考物質或用參考方法定值的人源樣品測定，實測值與標示值的偏差在±15.0%內。

2.5.2以標準或校準品或純品溶液測定，試劑盒回收率在90%～110%內。

2.5.3無具有溯源性的標準或校準品或純品溶液，以比對方法測定，相關系數r應不小于0.9900。

2.6分析靈敏度 試劑盒測試被測物時，單位濃度吸光度變化率應符合制造商給定區間。

2.7精密度 2.7.1批內精密度 在重復性條件下，用高、低值質控品測試同一批號試劑盒，重復測試至少10次，計算批內變異系數（CV），應不大于5.0%。

用高、低值質控品分別測試同一批號的20個待檢試劑盒，并計算20個測量值的平均值（1）和標準差（s1）。

用高、低質控品對該批號的1個待檢測試劑盒重復測試20次，計算結果的均值（2）和標準差（s2）。按公式（2）、（3）計算瓶間差的變異系數（CV），批內瓶間差（干粉或凍干試劑適用）均應不大于5%。

……………………………（2）……………………………（3）當s1＜s2時，令CV=0 2.7.2批間精密度 用同一質控品分別測試3個不同批號的試劑盒，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值。相對極差應不大于10.0%。

2.8穩定性 取到效期后一定時間內或制造商規定的加速實驗條件下的試劑盒測試，產品性能應符合外觀、試劑空白、線性區間、準確度、分析靈敏度、批內精密度要求。干粉或凍干試劑還應同時進行復溶穩定性試驗，產品性能應符合試劑空白、線性區間、準確度、分析靈敏度、批內精密度要求。注：加速穩定性不能用于推導產品有效期，除非是采用基于大量的穩定性研究數據建立的推導公式。

如注冊單元中包含校準品或質控品，其性能指標的檢驗方法應在技術要求中予以描述。應當包括準確度、均勻性、開瓶/復溶穩定性的檢驗方法的詳細描述。如有新版強制性國家標準、行業標準發布實施，應參照執行。

（十）注冊檢驗報告 根據《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》的要求，應提供具有相應醫療器械檢驗資質和承檢范圍的醫療器械檢驗機構出具的產品注冊檢驗報告和產品技術要求預評價意見?？偰懼崛缬袊覙藴势?，應采用國家標準品。如有相應的國家法規發布或更新，按其要求執行。

（十一）產品說明書 說明書承載了產品預期用途、檢驗原理、檢驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學解釋的重要依據，因此，產品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

結合《關于發布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對總膽汁酸測定試劑盒說明書的重點內容進行詳細說明。

1.【產品名稱】 通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：總膽汁酸測定試劑盒（酶循環法）。通用名稱應當按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）規定的命名原則進行命名，可適當參考相關“分類目錄”和/或國家標準及行業標準。

2.【包裝規格】 注明可測試的樣本數或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內容均應采用中文進行表述。

2.1包裝規格應明確單、雙試劑類型。

2.2不得多于產品技術要求中所列的包裝規格。

2.3如不同包裝規格有對應不同的機型，應分別明確適用機型。

3.【預期用途】 應至少包括以下幾部分內容：

3.1說明試劑盒用于體外定量測定血清/血漿中總膽汁酸的含量；

同時應明確與目的檢測物相關的臨床適應癥背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法等。

3.2總膽汁酸含量異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫學解釋。如：血清TBA測定可反映肝細胞的合成、攝取和排泌功能。TBA增加是肝細胞損害的敏感指標，并有助于估計其預后和提示病情復發。

3.3作為支持性資料，申請人應提供有關臨床適應癥背景的文獻資料。

4.【檢驗原理】 應結合產品主要成分詳細說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示。

5.【主要組成成分】 應明確以下內容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、數量、每個組成成分在反應體系中的比例或濃度。明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑內如包含校準品和/或質控品，除明確組成成分及生物學來源外，還應明確其定值及溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發布單位及編號，質控品應明確靶值范圍。

6.【儲存條件及有效期】 6.1對試劑的效期穩定性、復溶穩定性、開瓶穩定性等信息作詳細介紹。包括環境溫濕度、避光條件等。

6.2不同組分保存條件及有效期不同時，應分別說明，產品總有效期以其中效期最短的為準。

6.3 生產日期，使用期限或者失效日期。

注：保存條件不應有模糊表述，如“室溫”，應明確貯存溫度，如2℃~8℃，有效期12個月。穩定期限應以月或日或小時為單位。

7.【適用儀器】 7.1說明可適用的儀器，并提供與儀器有關的必要信息以便用戶能夠作出最好的選擇。

7.2應寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器。

8.【樣本要求】 重點明確以下內容：

8.1樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求。

8.2樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，凍融次數。對儲存樣本的添加劑要求等。

8.3應與樣本穩定性的研究一致。

9.【檢驗方法】 詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項。

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準程序：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

9.4質量控制程序：質控品的使用方法、質量控制方法。

9.5試驗結果的計算或讀取：應明確檢驗結果的計算方法。

10.【參考區間】 應注明常用樣本類型的正常參考區間，并說明參考值確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區間”。

11.【檢驗結果的解釋】 說明可能對試驗結果產生影響的因素；

說明在何種情況下需要進行確認試驗。

若超過線性范圍上限的高濃度樣本可稀釋后測定，則應說明樣本的最大可稀釋倍數、稀釋溶液等信息。

12.【檢驗方法的局限性】至少應包括以下內容：

說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結果產生偏離，或測量結果還不能完全滿足臨床需要。如：干擾（膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、維生素C、血紅蛋白）等。

13.【產品性能指標】 至少應詳述以下性能指標：

13.1試劑空白 13.2分析靈敏度 13.3準確度 13.4精密度（批內精密度和批間精密度）13.5線性區間（線性相關系數）14.【注意事項】 應至少包括以下內容：

14.1本試劑的檢測結果僅供臨床參考，不應作為臨床診治的唯一依據，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

14.2使用不同生產商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會存在差異。

14.3如無確切的證據證明其安全性，對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護措施。

14.4試劑中含有的化學成分如接觸人體后會產生不良的影響，應明確給予提示。

14.5其他有關總膽汁酸測定的注意事項。

15.【標識的解釋】 如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】 注明引用參考文獻，其書寫應清楚且格式規范統一。

17.【基本信息】 17.1境內體外診斷試劑 17.1.1注冊人與生產企業為同一企業的，按以下格式標注基本信息：

注冊人/生產企業名稱，住所，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，生產地址，生產許可證編號。

17.1.2委托生產的按照以下格式標注基本信息：

注冊人名稱，住所，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，受托企業的名稱，住所，生產地址，生產許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑 按照以下格式標注基本信息：

注冊人/生產企業名稱，住所，生產地址，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，代理人的名稱，住所，聯系方式。

18.【醫療器械注冊證編號/產品技術要求編號】 應當寫明醫療器械注冊證編號/產品技術要求編號 19.【說明書核準日期及修改日期】 應注明該產品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關注點 （一）產品技術要求中性能指標的設定及檢驗方法是否符合相關行業標準的要求；

技術要求的格式是否符合《關于發布醫療器械產品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的相關規定。

（二）產品說明書的編寫內容及格式是否符合《關于發布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求，相關內容是否符合《醫療器械說明書和標簽管理規定》（國家食品藥品監督管理總局令第6號）中對說明書的要求。

（三）分析性能評估指標及結果是否支持產品技術要求的確定；

是否滿足本指導原則中各指標驗證的要求。

（四）參考區間確定使用的方法是否合理，數據統計是否符合統計學的相關要求，結論是否和說明書聲稱一致。

（五）試劑的穩定性研究方法是否合理，穩定性結論是否和說明書聲稱一致。

（六）臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑盒聲稱的預期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統計方法及研究結果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《關于發布體外診斷試劑臨床研究技術指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）對相關內容的規定。

（七）產品風險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316—2016《醫療器械風險管理對醫療器械的應用》的要求。

四、編寫單位 江西省醫療器械技術審評中心。

第二篇：甘油三酯測定試劑盒注冊技術審查指導原則

附件5

甘油三酯測定試劑盒注冊技術審查指導原

則

本指導原則旨在指導注冊申請人對甘油三酯（Triglyceride，TG）測定試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對甘油三酯測定試劑盒的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規強制執行，如有能夠滿足法規要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

甘油三酯測定試劑盒是指利用酶法對人血清、血漿或其他體液中的甘油三酯含量進行體外定量測定的試劑。本指導原則適用于進行產品注冊和相關許可事項變更的產品。

脂肪酶分解血清中甘油三酯為甘油和脂肪酸。在ATP存在下，甘油激酶將甘油磷酸化成3-磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫。過氧化氫與過氧化物酶、4-氨基比林進行顯色反應，生成有色苯醌亞胺，在500nm（480nm—550nm）處吸光度值與甘油三酯含量成正比。本文不適用于干化學類測定試劑。

依據《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）、《食品藥品監管總局關于印發體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監械管〔2013〕242號），甘油三酯檢測試劑屬于酯類檢測試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

甘油三酯（Triglyceride，TG）是3分子長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人體內含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進行甘油三酯的合成，在脂肪組織中貯存。人血清中甘油三酯水平呈明顯正偏態分布。病理性升高：原發性見于家族性高甘油三酯血癥與家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發性見于糖尿病、糖尿累積病，甲狀腺功能衰退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。病理性降低：原發性見于無β-脂蛋白血癥和低β-脂蛋白血癥。繼發性見于繼發性脂質代謝異常，如消化道疾?。ǜ渭不?、吸收不良綜合征）、內分泌疾患（甲狀腺功能亢進癥、慢性腎上腺皮質不全）及肝素等藥物的應用。綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產品上市情況介紹等內容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號）的相關要求。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

包括主要反應成分、質控品、校準品等的選擇、制備、質量標準確定的方法及研究資料；校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質控品應提供詳細的定值資料。

（三）主要生產工藝和反應體系的研究資料（如需提供）1.主要生產工藝介紹，可用流程圖方式表示，并說明主要生產工藝過程的研究資料、每一步生產工藝的確認資料及試驗數據。包括：工作液的配制和分裝，顯色系統的描述和確定依據等。

2.主要反應體系的研究資料，包括：樣本采集及處理、樣本要求，確定反應溫度、時間、緩沖體系比較等條件的確認資料及試驗數據，確定樣本和試劑盒組分加樣量的確認資料及試驗數據，校準方法、質控方法等。

（四）分析性能評估資料

申請人應當提交產品研制或成品驗證階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體的研究項目、實驗設計、研究方法、可接受標準、試驗數據、統計方法、研究結論等詳細資料。性能評估時應將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統的性能是否符合要求。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括實驗地點、適用儀器、試劑規格和批號、所選用的校準品和質控品、臨床樣本來源等。

性能評估應至少包括準確度、精密度、線性范圍、最低檢測限、分析靈敏度、分析特異性、其他影響檢測的因素等。

1.準確度

對測量準確度的評價方法依次包括：相對偏差、回收試驗、比對試驗等方法，甘油三酯項目目前有國家標準品和國際參考物質，建議申請人優先采用相對偏差的方法，申請人也可根據實際情況選擇其他合理方法進行研究。

1.1相對偏差

使用國家標準品或國際參考物質作為樣本進行測試，重復測定3次，計算平均值與標示值的相對偏差。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清對試劑盒進行測試，每個濃度樣品重復測定3次，分別取測試結果均值，計算相對偏差。

1.2回收試驗

在人血清樣品中加入一定體積標準或校準品溶液或純品，每個濃度重復測定3次，計算回收率。

回收試驗注意事項：

1.2.1加入的標準液體積與血清體積比應不大于1:20或其體積比不會產生基質的變化；

1.2.2加入標準或校準品溶液后樣品總濃度應在試劑盒測定線性范圍內；

1.2.3標準品或校準品應有溯源性； 1.3比對試驗

采用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產生差異結果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統計學分析。

2.精密度

測量精密度的評估應至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的臨界值附近樣本和異常高值樣本。

3.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。

超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應做相關研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數，研究過程應注意基質效應影響，必要時應提供基質效應研究有關的資料。

4.最低檢測限

最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準品（或樣品稀釋液）進行至少20次重復檢測，平均值加2倍SD（≥95%臵信區間）即試劑的最低檢測限。

5.分析靈敏度

試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度差值（ΔA）應符合生產企業給定范圍。6.分析特異性

應明確已知干擾因素對測定結果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸對檢測結果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應覆蓋人體生理及病理狀態下可能出現的物質濃度。待評價的甘油三酯樣本濃度至少應為高、中、低三個水平，選取線性范圍內有臨床代表性意義的濃度。

藥物干擾的研究可根據需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

7.校準品溯源及質控品賦值（如產品中包含）校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質控品應提供詳細的定值資料。應參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算記錄，提供質控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

8.其他需注意問題

不同適用機型、不同包裝規格，應分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規格，需要對不同包裝規格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規格產品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規格產品進行的上述項目評估的試驗資料及總結。如不同包裝規格之間不存在性能差異，需要提交包裝規格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規格之間的差別及可能產生的影響。

（五）參考區間確定資料

應明確研究采用的樣本來源、詳細的試驗資料、統計方法等，參考區間可參考文獻資料，但應當對至少120例的健康個體進行驗證。研究結論應與產品說明書【參考區間】的相應描述保持一致。

（六）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究。

試劑的穩定性包括實時穩定性、運輸穩定性、開瓶（待機）穩定性等，申請人應至少提供3個生產批次的實時穩定性、開瓶穩定性和運輸穩定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結論等。試劑的穩定性研究應注意選取代表性包裝規格進行研究（例如：校準品穩定性應選取最易受影響的最小裝量）。

適用樣本的穩定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數進行評價。

試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

臨床試驗資料應符合《關于發布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關的規定。下面僅對臨床實驗中的基本問題進行闡述。

1.研究方法

選擇境內已批準上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產品等效。

2.臨床試驗機構的選擇

應選擇至少兩家經國家食品藥品監督管理總局資質認可的臨床試驗機構，臨床試驗機構實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統的各環節（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數據的準確性及可重復性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構的方案設臵應保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數據收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的參比試劑應保持一致，以便進行合理的統計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。

4.研究對象選擇

臨床試驗應選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結果統計分析時，建議對各類人群分別進行數據統計分析?？傮w樣本數不少于200例，異常值樣本數不少于80例。樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

應明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數據分析時應考慮其影響。

如果聲稱待評試劑同時適用于血清或血漿樣本類型，可完成一個樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時可選至少100例血清或血漿同源樣本進行比對研究，異常值樣本不少于40例進行臨床研究，其中不同濃度樣本分布情況與總例數中分布情況應一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規定的200例進行試驗，異常值樣本數不少于80例。

涉及產品檢測條件優化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產品與變更前產品或者已上市同類產品進行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機構開展臨床試驗，總樣本數不少于100例，異常值樣本數不少于40例。

5.統計學分析

對臨床試驗結果的統計應選擇合適的統計方法，如相關分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數（r值）或判定系數（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗數據的正/偏態分布情況，建議統計學負責人選擇合理的統計學方法進行分析，統計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統計學差異。在臨床研究方案中應明確統計檢驗假設，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.臨床試驗總結報告撰寫

根據《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。

6.1臨床試驗總體設計及方案描述

6.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

6.1.2納入/排除標準、不同人群的預期選擇例數及標準。6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。6.1.4統計學方法、統計軟件、評價統計結果的標準。6.2具體的臨床試驗情況

6.2.1待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

6.2.2對各研究單位的病例數、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數及百分比。

6.2.3質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估。

6.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數據收集、樣本長期保存等。

6.3統計學分析

6.3.1數據預處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

6.3.2定量值相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數（通常要求R2≥0.95）。

6.4討論和結論

對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

（八）產品風險分析資料

對體外診斷試劑產品壽命周期的各個環節,從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析、風險評價和相應的風險控制基礎上，形成風險管理報告。應當符合相關行業標準的要求。

風險分析應包含但不僅限于以下方面的內容：預期用途錯誤包括：設計開始時未設定預期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準失效。不正確的結果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應體系不正確、試劑與包裝材料不相容。可能的使用錯誤包括：生產者未按照生產流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組份、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當，客戶未參照產品說明書設臵參數或使用。與安全性有關的特征包括：有毒化學試劑的化學污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環境污染。

（九）產品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產工藝穩定的前提下，根據申請人產品研制、前期臨床評價等結果，依據國家標準、行業標準及有關文獻，按照《關于發布醫療器械產品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產品技術要求，內容主要包含產品性能指標和檢驗方法。

進口產品的產品技術要求應當包括英文版和中文版，英文版應當由申請人簽章，中文版由申請人或其代理人簽章。

下面就產品技術要求中涉及的產品適用的相關標準和主要性能指標等相關內容作簡要敘述。

1.產品適用的相關標準：（1）GB/T 21415—2008體外診斷醫療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

（2）GB/T 26124—2011臨床化學體外診斷試劑（盒）（3）YY/T 1199—2013甘油三酯測定試劑盒（酶法）2.主要性能指標： 2.1外觀

應與申請人聲稱試劑外觀一致。這里可以包括試劑盒包裝外觀、試劑內包裝外觀、試劑的外觀。

2.2裝量

試劑裝量應不少于標示裝量。2.3試劑空白吸光度

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度A(申請人指定的波長，37℃，1.0 cm)≤0.2。

2.4分析靈敏度

試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度差值（ΔA）應符合生產企業給定范圍。

2.5線性范圍

線性范圍應至少達到1.13 mmol/L—9.04 mmol/L。2.5.1相關系數（r）

線性相關系數r應不小于0.990（線性范圍下限應不低于產品的最低檢測線，不高于參考區間下限）。

2.5.2線性偏差

線性偏差應不超過申請人給定值。線性偏差可分段描述或連續描述，若分段描述，應注意分段點的確定。

2.6精密度 2.6.1重復性

用同一樣本或質控品重復測試至少10次，所得結果的精密度（變異系數CV）應≤5.0%。

測定樣本應至少包含兩個濃度點，一般應按醫學決定水平取甘油三酯臨界值和異常高值濃度點。

2.6.2批間差

試劑（盒）批間相對極差應≤10.0%。樣本選取同前。2.7準確度

2.7.1相對偏差 提供參考物質或用參考方法定值的血清測定，實測值與標示值偏差應在±15.0%范圍內。

2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與臨床樣本體積應不會產生基質的變化，加入標準溶液后樣品總濃度必須在試劑（盒）測定線性范圍內）或純品，回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行，回收率應在90%—110%之間。

2.7.3比對試驗 用待測試劑盒與申請人選定分析系統（已在國內上市）分別檢測不少于40個在檢測范圍內的人源樣品，用線性回歸方法計算兩組結果的相關系數r≥0.990以及每個濃度點的偏差，偏差應不超過申請人給定值。偏差可分段描述或連續描述，若分段描述，應注意分段點的確定。

建議按上述優先順序，采用上述方法之一測試試劑盒的準確度。

2.8穩定性

檢測申請人聲稱已到期試劑，產品性能應符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、精密度、準確度要求。凍干品應同時進行復溶穩定性試驗，復溶后放臵到有效期末，產品性能應符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性、測量精密度、準確度要求。

2.9校準品和質控品的性能指標（如產品中包含）應至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準確性、均一性、穩定性。凍干型校準品和質控品還應檢測批內瓶間差和復溶穩定性。

（十）產品注冊檢驗報告

具有相應醫療器械檢驗資質和承檢范圍的醫療器械檢驗機構出具的注冊檢驗報告和產品技術要求預評價意見。甘油三酯項目目前有國家標準品，應當使用國家標準品進行注冊檢驗，并符合相關要求。

（十一）產品說明書

說明書承載了產品預期用途、檢驗方法、對檢驗結果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學解釋的重要依據，因此，產品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

結合《關于發布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對甘油三酯測定試劑盒說明書的重點內容進行詳細說明。

1.【產品名稱】

根據《體外診斷試劑注冊管理辦法》中的命名原則，產品名稱通常由被測物質的名稱、用途、方法或原理三部分組成，方法或原理部分應能體現具體反應原理，建議參考分類目錄或行業標準。2.【包裝規格】

包裝規格應明確單、雙或其他多試劑類型；如不同包裝規格有與之特定對應的機型，則應同時明確適用機型。如有貨號，可增加貨號信息。

如:試劑1:1×40 mL,試劑2: 1×20 mL 日立7170生化分析儀

3.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容： 3.1說明試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿或其他體液中甘油三酯的含量。

3.2明確與甘油三酯檢測相關的臨床適應癥背景情況。如：病理性升高：原發性見于家族性高甘油三酯血癥與家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發性見于糖尿病、糖尿累積病，甲狀腺功能衰退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。病理性降低：原發性見于無β-脂蛋白血癥和低β-脂蛋白血癥。繼發性見于繼發性脂質代謝異常，如消化道疾?。ǜ渭不?、吸收不良綜合征）、內分泌疾患（甲狀腺功能亢進癥、慢性腎上腺皮質不全）及肝素等藥物的應用。

4.【檢驗原理】應結合產品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢驗原理的描述應結合產品主要組成成分、被測物和產物的關系進行描述：

如：用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中的甘油三酯（TG）水解成甘油與脂肪酸，將生成的甘油用甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）磷酸化。以磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化3-磷酸甘油（G-3-P），然后以過氧化物酶（POD），4-氨基安替比林（4-AAP）與4-氯酚（三者合稱PAP）反應顯色，在特定波長處監測吸光度值，可計算甘油三酯含量。

反應式如下：

5.【主要組成成分】應明確以下內容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準品或質控品，除明確組成成份及生物學來源外，還應明確其定值及溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發布單位及編號，質控品應明確靶值范圍。

例如：

本試劑盒由試劑1、2和校準品組成：

試劑1：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100 mmol/L、三磷酸腺苷（ATP）0.20 mmol/L、甘油激酶（GK）1200 U/L、甘油磷酸氧化酶4000 U/L、氯化鎂23 mmol/L、過氧化物酶5 KU/L；

試劑2：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100 mmol/L、4-氨基安替比林1.0 mmol/L、脂蛋白脂酶2500 U/L、三磷酸腺苷0.20 mmol/L、3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉2.0 mmol/L； 校準品：為甘油三酯溶液，校準品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標示，量值可溯源至GBW09148或國際參考物質SRM1595。

6.【儲存條件及有效期】應明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開封后在生化分析儀上待機穩定期。干粉校準品（如適用）應明確復溶穩定性。

注：保存條件不應有模糊表述，如“室溫”、“常溫”。7.【適用儀器】應明確可適用的具體品牌、型號的儀器。8.【樣本要求】重點明確以下內容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運輸條件等。如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求（如果草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽等對甘油三酯濃度造成干擾，應明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，可凍融次數。特殊體液標本還應詳細描述對采集條件、保存液、容器要求等可能影響檢測結果的要求。應對已知的干擾物進行說明，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、藥物等干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。

9.【檢驗方法】詳細說明試驗操作的各個步驟，包括： 9.1試劑配制方法、注意事項。

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

9.4質量控制：質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質控結果與預期不符，提示檢測結果不可靠，不應出具檢測報告。

9.5檢驗結果的計算：應明確檢驗結果的計算方法。超出線性范圍的樣本如進行稀釋，應結合可檢測范圍研究結果明確稀釋液類型和最大可稀釋比例。

10.【參考區間】應注明常用樣本類型的參考區間，并簡要說明其確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區間”。

11.【檢驗結果的解釋】說明可能對檢驗結果產生影響的因素，在何種情況下需要進行確認試驗。

12.【檢驗方法的局限性】說明該檢驗方法的局限性。

13.【產品性能指標】 至少應詳述以下性能指標，性能指標應與產品技術要求中相關技術指標保持一致。

13.1試劑空白吸光度； 13.2分析靈敏度； 13.3準確度；

13.4精密度（重復性和批間差）； 13.5線性范圍； 13.6特異性。

14.【注意事項】應至少包括以下內容：

14.1本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學成分接觸人體后是否會產生不良的影響后果。

14.3采用不同方法學的試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫學解釋；建議實驗室在發給臨床醫生的檢測報告注明所用試劑特征。

14.4有關人源組分的警告，如：試劑盒內的質控品、校準品或其他人源組分，雖已經通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組份作為潛在傳染源對待。

14.5樣本：（1）采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；（2）對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。

14.6其他有關甘油三酯測定的注意事項。

15.【標識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】應當注明在編制說明書時所引用的參考文獻。

17.【基本信息】 17.1境內體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產企業為同一企業的，按以下格式標注基本信息：

注冊人/生產企業名稱，住所，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，生產地址，生產許可證編號

17.1.2委托生產的按照以下格式標注基本信息： 注冊人名稱，住所，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，受托企業的名稱，住所，生產地址，生產許可證編號

17.2進口體外診斷試劑 按照以下格式標注基本信息： 注冊人/生產企業名稱，住所，生產地址，聯系方式，售后服務單位名稱，聯系方式，代理人的名稱，住所，聯系方式

18.【醫療器械注冊證編號/產品技術要求編號】應當寫明醫療器械注冊證編號/產品技術要求編號。

19.【說明書核準日期及修改日期】應注明該產品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

三、參考文獻

（一）《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）

（二）《醫療器械說明書和標簽管理規定》（國家食品藥品監督管理總局令第6號）

（三）《關于發布醫療器械產品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）

（四）《關于發布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的那廣告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）

（五）《關于發布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）

（六）《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號）

（七）《關于含有牛、羊源性材料醫療器械注冊有關事宜的公告》（國食藥監械〔2006〕407號）

（八）國家食品藥品監督管理部門發布的其他規范性文件

（九）GB/T 21415—2008體外診斷醫療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

（十）GB/T 26124-2011臨床化學體外診斷試劑（盒）

（十一）YY/T 0316—2008醫療器械 風險管理對醫療器械的應用

（十二）YY/T 1199—2013甘油三酯測定試劑盒（酶法）

甘油三酯測定試劑盒注冊技術審查指導原

則編寫說明

一、指導原則編寫目的

編制本指導原則旨在指導和規范注冊申請人對甘油三酯（Triglyceride，TG）測定試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫工作，同時幫助審查人員理解和掌握該類產品原理、組成、性能、預期用途等內容，把握技術審評工作基本要求和尺度，對產品安全性、有效性作出系統評價。

由于甘油三酯測定試劑盒產品仍在不斷發展，審查人員仍需從風險分析的角度認真確定申報產品的預期用途與風險管理是否相當；由于我國醫療器械法規框架仍在構建中，審查人員仍需密切關注相關法規、標準及最新進展，關注審評產品實際組成、原理、預期用途等方面的個性特征，以保證產品審評符合現行法規安全、有效的要求。

二、指導原則部分內容說明

（一）指導原則主要根據體外診斷試劑產品注冊申報資料的要求，借鑒國家食品藥品監督管理部門已發布的相關產品注冊技術審查指導原則的體例進行編寫，以便于注冊技術審評人員理解。

（二）產品應適用相關標準中給出了現行有效的國家標準、行業標準（包括產品標準、基礎標準）。

（三）產品的主要性能指標中給出了產品需要考慮的各個方面，主要提出共性要求，具體量化指標需要參照相關的國家標準、行業標準和生產商技術能力予以確定。

（四）關于線性偏差以及準確度偏差說明：考慮到，如技術要求中線性偏差以及準確度（比對試驗）偏差均采用相對偏差進行表述，當對線性范圍中某一極低值樣本進行線性范圍以及準確度（比對試驗）試驗時，其試驗結果采用絕對偏差符合申請人的規定更為合理。因此，本指導原則建議企業可對產品線性偏差以及準確度（比對試驗）偏差進行分段要求，分別采用絕對偏差和相對偏差進行表述。

（五）關于產品技術要求中分析靈敏度描述的說明：行業標準YY/T 1199—2013中分析靈敏度指的是產品功能靈敏度，而國家標準GB/T 26124—2011中分析靈敏度，指的是產品校準曲線斜率。鑒于甘油三酯測定試劑盒功能靈敏度指標目前并沒有實際臨床意義，本指導原則中分析靈敏度要求采用國家標準GB/T 26124—2011中校準曲線斜率的描述。

（六）關于參考區間的驗證資料中對健康個體至少120例的說明：此例數的規定，結合已發布產品技術審查指導原則，并參考《WS/T 402—2012臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》以及《C28-A2 如何確定臨床檢驗的參考區間：批準指南（2000）》。

（七）關于臨床試驗“總體樣本數不少于200例，異常值樣本數不少于80例”的說明：參照國家局已發布實施的缺血修飾白蛋白、肌酸激酶、堿性磷酸酶產品注冊技術指導原則。

（八）關于綜述資料、產品說明書中有關與甘油三酯檢測相關的臨床適應癥背景的說明：臨床意義的描述參考自《全國臨床檢驗操作規程（第4版）》。

三、指導原則編寫單位和人員

本指導原則編寫人員由浙江省醫療器械技術審評人員、行政審批人員、檢驗和臨床專家、產品專業廠家代表等共同組成。

第三篇：地中海貧血相關基因檢測試劑注冊技術審查指導原則（2020年）

附件3

地中海貧血相關基因檢測試劑

注冊技術審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對地中海貧血相關基因檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對地中海貧血相關基因檢測試劑的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究和驗證資料，相關人員應在遵循法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規和標準的不斷完善以及科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發生突變（包括點突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現，重者以進行性溶血性貧血為主要特征。根據珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數非洲地區，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達10%以上，廣西更是達到了20%以上。

α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達的2個基因（α2和α1），基因的排列順序為5’-α2-α1-3’。根據單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個α基因同時缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/），1個α1或α2基因發生點突變或少數幾個堿基的缺失。中國現已發現至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點突變。其中，6

種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377

T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數的98%。

α-地貧基因型和臨床分型的關系已經基本闡明。α-地貧的表型嚴重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個α-基因缺失或點突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學表現為小細胞低色素；（2）2個α-基因缺失或復合-α基因點突變，或點突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現為不貧血或輕度貧血，血液學檢查有小細胞低色素特征；（3）3個α-基因缺失或復合α基因點突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb

H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現為Hb

H病。通常，--/αTα的非缺失型

Hb

H病較單純缺失型Hb

H?。?-/-α）的臨床表現更為嚴重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb

H病患者，貧血程度較為嚴重；（4）4個α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb

Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個體一般無法存活到出生或分娩后半小時內死亡。

β-地貧是由于β-珠蛋白基因發生突變而引起，以點突變為主，少數為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個成人期表達基因（β和δ），基因的排列順序為5’-δ-β-3’。根據β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報道84種β-珠蛋白基因點突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：

c.79G>A，HBB：

c.316-197C>T和HBB：

c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。

β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學表型正常或臨界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現為小細胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎較為復雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會顯示中間型的表型。

2018年發布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應進行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標。2018年發布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據之一。

另外，國家衛生健康委員會發布的相關文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發省份實施地貧防控試點項目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進行血常規初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規檢查結果陽性的夫婦進行血紅蛋白分析復篩；（3）對血紅蛋白分析復篩結果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進行相應的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結果，判定為高風險夫婦。對高風險夫婦進行追蹤，及時了解受檢婦女懷孕情況，指導女方在懷孕后適宜時期接受產前診斷。產前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項目為相應的地貧基因檢測。

綜上，結合該類產品臨床使用的實際情況，本指導原則的預期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風險夫婦的評估，或胎兒的產前遺傳診斷等。

結合該類產品在中國注冊的實際情況以及當前的認知，本指導原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預期用途的相關內容進行了詳細闡述。針對其他預期用途，本指導原則僅對部分內容進行了闡述，申請人應根據產品特性，對本指導原則未涉及的內容進行補充并做出相應評價。

本指導原則的技術要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學檢測技術（如：PCR-反向點雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術指標不夠全面，申請人可以根據產品特性對不適用部分進行或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學合理性。

本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產品。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的說明、研究結果的總結評價以及國內外同類產品上市情況介紹等內容。其中，同類產品上市情況介紹部分應著重從方法學、檢驗原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細說明申報產品與目前市場上已獲批準的同類產品之間的主要區別。

綜述資料應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料研究資料包括主要反應成分、對照品（質控品）及企業參考品的研究資料。

1.此類產品的主要反應成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs、反應緩沖液等。申請人應提交相關原材料的選擇、制備和質量標準等的研究資料。如為申請人自制，應提交詳細的工藝穩定性研究資料；如為外購，還應提交供應商篩選資料以及供應商提供的原材料質量檢定報告。

1.1

核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關的驗證資料。

1.2

引物、探針

申請人應詳述引物、探針的設計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應情況。建議設計多套引物探針以供篩選，針對待測位點的特異性等進行評價，選擇最佳設計，并提交詳細的篩選研究數據。

申請人應針對選定的引物、探針原材料進行質量評價，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標記基團的激發波長和發射波長，以及功能性試驗等，并依據評價結果建立合理的質量標準。

1.3酶

酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應針對各種酶的活性進行驗證，提交功能性試驗資料，并確定酶的質量標準。

DNA聚合酶應具有DNA聚合酶活性，無核酸內切酶活性，具熱穩定性。UDG/UNG應具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內切酶活性。

1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應提交對其純度、濃度、保存穩定性等的驗證資料，以及功能性試驗資料，并確定質量標準。

2.對照品（質控品）

試劑盒的質控體系通過設置各種試劑盒對照品（質控品）來實現。陽性對照應至少包括代表性的突變位點和突變類型。陰性對照可以是含有野生型序列的核酸溶液?？瞻讓φ諡椴缓怂岬娜芤骸?/p>

如該類產品所采用的方法學和檢驗原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變），其反應體系均可報出核酸序列結果，均可對管內抑制導致的假陰性結果進行質量控制，則無需另外設置內標；否則，試劑盒應另外設置內標。

對照品可采用人基因組DNA、細胞系或質粒等?？瞻讓φ諔獏⑴c樣本核酸的平行提取。申請人應提供對照品原料選擇、制備、定值過程等的詳細研究數據，并對其檢測結果做出明確的范圍要求。

3.企業參考品

企業參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應提交企業參考品的原料選擇、制備方法、基因序列確認及檢驗標準的詳細研究資料等。

3.1

陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應與待測樣本一致。應至少包含所有檢測位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細胞系或質粒。

3.2

陰性參考品：應包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產生交叉反應的同源序列樣本，同時應盡量包含檢測范圍外其他檢測位點的樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測位點的雜合型樣本。

3.4

精密度參考品應至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應至少包括代表性的突變位點和突變類型，且在每一反應體系均有分布。

目前，該類產品已有國家參考品，對于申報產品所聲稱的檢測位點，企業參考品的要求應不低于國家參考品。

（三）主要生產工藝及反應體系的研究資料

主要生產工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標記（如有）等工藝過程的描述及確定依據。生產過程應對關鍵參數進行有效控制，可采用流程圖方式描述生產工藝，標明關鍵工藝質控步驟，并詳細說明該步驟的質控方法及質控標準。

反應體系研究指反應條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、PCR反應條件、閾值循環數（Ct值）等的確定。

不同適用機型的反應條件如有差異應分別提交。

（四）分析性能評估資料

申請人應針對下述各項分析性能提交詳細的評估資料，包括試驗地點、適用儀器、試劑規格、批號、試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數量、處理方法、基因型和濃度確認等）、可接受標準、統計方法、試驗數據及結論等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內外有關體外診斷產品性能評估的指導原則。

每項性能評估應盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細胞系等。

1.核酸提取/純化性能（如有）

在進行靶核酸檢測前，應有適當的核酸提取/純化步驟。該步驟應最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足該類產品的要求。

2.檢測準確性

建議采用若干份臨床樣本驗證該類產品的檢測準確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應涵蓋野生型、所有檢測位點的雜合突變型，同時盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細胞系或質粒。

3.最低檢測限

該類產品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準確性和精密度的條件下，能夠檢出目標序列的最低人基因組DNA的濃度?？刹捎锰荻葷舛鹊娜嘶蚪MDNA樣本進行多次重復檢測，確定適當檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細胞系，并至少包含所有檢測位點的雜合突變型。應明確臨床樣本或細胞系與人基因組DNA濃度的對應關系。

4.分析特異性

4.1

應針對同源序列或檢測范圍外基因和位點進行交叉反應驗證，說明交叉反應樣本的制備方法、核酸序列確認方法，提交詳細的驗證資料。

4.2

應針對可能的內源和外源性干擾物進行干擾試驗研究。內源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。

干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質的方式，評價干擾物質對目標序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價；如有干擾，應確定不產生干擾的最高濃度。

5.精密度

精密度評價應采用臨床樣本進行試驗，試驗操作完全按照說明書執行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。應對每一反應體系進行精密度評價，并至少覆蓋代表性的突變位點和突變類型。

精密度評價需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進行驗證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點、時間、檢測輪次和試劑批次等。

5.2設定合理的精密度評價周期，對批內/批間、日內/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應選擇不同的實驗室進行重復實驗以對室間重復性進行評價。

5.3用于精密度評價的臨床樣本至少設置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標可設置為CV等（如有），申請人應對精密度指標評價標準做出合理要求。

（五）陽性判斷值確定資料

建議納入一定數量的臨床樣本，應包括所有檢測位點的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。

如試劑判讀存在灰區，應解釋說明灰區范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應說明理由。

（六）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要包括申報產品的穩定性研究和適用樣本的穩定性研究兩部分。前者主要包括申報產品的實時穩定性、開瓶/復溶穩定性、運輸穩定性及凍融次數限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時間等的研究。

實時穩定性研究應采用至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個時間點進行產品性能評價，從而確定產品保存條件和有效期。

如核酸提取液可保存，還需對核酸提取液的保存條件和保存時間進行研究。

（七）臨床試驗

應滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關法規、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。下面僅說明該類產品臨床試驗中應關注的重點問題。

1．針對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預期用途

1.1

臨床試驗機構及人員

申請人應根據產品特點及預期用途，綜合不同地區人種和流行病學背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規要求的臨床試驗機構開展臨床試驗。

1.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

具有地貧癥狀和/或體征，或血液學表現為小細胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進行鑒別診斷的其他疾病患者，如：缺鐵性貧血、鐵粒細胞性貧血或先天性紅細胞生成異常性貧血等。

臨床試驗所用樣本應為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應分別滿足申報產品說明書、對比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關要求。

1.3臨床試驗方法

1.3.1已有同類產品上市的申報產品

對于已批準的α-地貧突變和β-地貧突變，原則上選擇已上市同類產品作為對比試劑，評價申報產品的臨床檢測性能。

1.3.2無同類產品上市的申報產品

1.3.2.1

如新突變位點的臨床意義已獲行業認可（如：國內相關指南或專家共識），且上述認可基于充分的中國人群的臨床數據，則臨床試驗可選擇Sanger基因測序（針對新的點突變）或臨床普遍使用的其他公認方法（針對其他類型的新突變位點，如缺失）作為對比方法，評價新突變位點的臨床檢測性能。除此之外，還應提交新位點臨床意義已獲行業認可的相關證據，該部分資料可不納入臨床方案和報告。

1.3.2.2

如新突變位點的臨床意義未獲行業認可，則臨床試驗應包括兩個目的，新突變位點的臨床檢測性能評價和臨床意義評價。新突變位點的臨床檢測性能評價可參考1.3.2.1；新突變位點的臨床意義評價應提交基于中國人群的充分的臨床證據，證明基因型與表型的關系，如：隨訪或其他可證明基因型與表型關系的臨床驗證資料。

1.4最低樣本量和陽性例數

臨床試驗樣本量應采用適當的統計學方法進行估算，并詳細描述所使用統計方法及各參數的確定依據。

1.4.1

臨床檢測性能評價的樣本量估算

臨床檢測性能評價的樣本量估算可分為以下幾種情況。

對于常見突變位點，建議采用單組目標值法分別估算每個突變位點臨床試驗的最低樣本量，通過陽性符合率計算所需陽性樣本的例數，通過陰性符合率計算所需陰性樣本的例數，同時考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標值（臨床可接受的最低標準）建議均不低于95%。

對于罕見突變位點，陰性樣本的例數可根據上述方法進行估算，陽性樣本則應保證一定的例數。

對于極其罕見的、且有確切臨床證據證明其臨床意義的突變位點，陰性樣本的例數可根據上述方法進行估算，陽性樣本的例數則應結合臨床證據確定。

1.4.2

新位點臨床意義評價的樣本量估算

新位點臨床意義評價的樣本量估算，建議采用抽樣調查公式或其他合理方法進行估算。

2.針對“地貧高風險夫婦的評估”和“胎兒的產前遺傳診斷”預期用途

針對上述兩個預期用途，本指導原則僅對部分內容進行了闡述，申請人應根據產品特性，充分考慮本指導原則未涉及的內容，設計科學合理的臨床試驗并進行評價。

2.1臨床試驗機構和人員

如申報產品的預期用途為胎兒的產前遺傳診斷，除滿足法規要求外，臨床試驗機構還應取得產前診斷技術服務資質。臨床試驗人員應為經過專門培訓的取得資質的人員。機構和人員應遵循《產前診斷技術管理辦法》《母嬰保健專項技術服務許可及人員資格管理辦法》，機構應取得《母嬰保健技術服務執業許可證》，人員應取得《母嬰保健技術考核合格證書》。

2.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

如預期用途為地貧高風險夫婦的評估，則適用人群為：地貧表型篩查陽性的育齡人群。地貧表型篩查陽性的育齡人群可根據國家衛生健康委員會和地貧高發地區相關政策確定。

如預期用途為胎兒的產前遺傳診斷，則適用人群為：地貧高風險夫婦的胎兒。地貧高風險夫婦的確定可參考國家衛生健康委員會等相關文件。

臨床試驗所用樣本應為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應符合國家衛生健康委員會等相關文件的要求，并滿足產品說明書的要求。

2.3

最低樣本量和陽性例數

針對每種不同的預期用途，應分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等），也應分別采用合理方法估算最低樣本量。

3.如有其他預期用途，也應設計科學的臨床試驗，提供充分的證據，證明其預期用途。

4.不同預期用途的通用要求

4.1

臨床試驗方法、數據及統計分析

4.1.1應在臨床試驗方案或報告中明確申報產品、對比試劑和第三方試劑的試驗方法。

4.1.2臨床試驗病例總結表應以列表方式表示，包括申報產品的結果、對比試劑的結果、第三方試劑的檢測結果（如有）、臨床診斷、年齡和性別等。

4.1.3以交叉表分別總結兩種試劑的定性檢測結果，選擇合適的統計方法進行統計分析，以驗證兩種試劑檢測結果的一致性。

4.1.4

結果差異樣本的驗證

在數據收集過程中，對于兩種試劑檢測結果不一致的樣本，采用合理方法進行復核，并對差異原因進行分析。如無需復核，應說明理由。

4.2

臨床試驗方案

各臨床試驗機構的方案設置應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由該實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程。

試驗方案應確定嚴格的入選/排除標準，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結果判定時，應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的對比試劑/方法應保持一致，以便進行合理的統計學分析。另外，申報產品的樣本類型不應超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

4.3臨床試驗報告

應對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的數據和統計分析方法。

（八）產品技術要求

產品技術要求應符合《辦法》、《44號公告》和《醫療器械產品技術要求編寫指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的相關要求。該類產品作為三類體外診斷試劑，應將主要原材料、生產工藝及半成品要求等內容作為附錄附于技術要求正文后。

目前，該類產品已有行業標準，產品技術要求的相關要求應不低于行業標準的要求。

（九）產品檢驗報告

根據《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時應提交連續三個生產批次樣品的檢驗報告。目前，該產品已有國家參考品，產品檢驗應滿足國家參考品的要求。

（十）產品說明書

產品說明書應滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求，產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料的相關研究結果保持一致。下面對該類產品說明書的重點內容進行闡述。

1.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容：

1.1本產品用于定性檢測人xx樣本基因組DNA中的α-和/或β-地貧xx突變，用于：α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風險夫婦的評估，或胎兒的產前遺傳診斷。

1.2介紹地貧相關的臨床背景信息及實驗室診斷方法等，介紹被測靶標（突變位點）的相關情況。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱或數量等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業應列出相關試劑/耗材的名稱及其他相關信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應在此注明經過驗證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產企業、產品名稱以和醫療器械備案號（如有）等詳細信息。

3.【檢驗原理】

3.1對試劑盒的被測靶標進行詳細描述（基因位置、突變位點及相關特征等），對試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進行詳細介紹；對不同樣本反應管組合、對照品設置及熒光信號檢測原理等進行介紹。

3.2試劑盒技術原理的詳細介紹，建議結合適當圖示進行說明。如反應體系中添加了相關的防污染組分（如UNG酶），也應對其作用機理進行適當介紹。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩定性等，應明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限以及運送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復至室溫，凍融次數的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關的重要信息以指導用戶操作。

7.【檢驗方法】

詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：

7.1實驗條件：實驗室分區、實驗環境的溫度、濕度和空調氣流方向控制等注意事項。

7.2試劑配制方法和注意事項。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項（如適用），對核酸提取純化環節進行合理質控，明確提取核酸的濃度純度等質量要求。

7.4擴增反應前準備：加樣體積、順序等。

7.5

PCR各階段的溫度、時間設置、循環數設置或相應的自動化檢測程序及相關注意事項。

7.6儀器設置（如適用）：特殊參數、探針的熒光素標記情況、對待測樣本及其他對照品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗結果的解釋】

結合對照品、樣本管檢測結果以及檢測類型，以列表形式詳述所有可能出現的結果及相應的解釋。如存在檢測灰區，應詳述對于灰區結果的處理方式。

9.【檢驗方法的局限性】

9.1申報產品僅對下述檢測類型xx進行了驗證。

9.2有關假陰性結果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運送及處理或核酸過度降解均有可能導致假陰性結果。

9.2.2未經驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導致假陰性結果（如有）。

10.【產品性能指標】簡述以下性能指標：

10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應驗證：同源性序列等交叉反應驗證。

10.4.2干擾物質驗證：樣本中常見干擾物質對檢測結果的影響。

10.5對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統計學方法及統計分析結果。

11.【注意事項】應至少包括以下內容：

11.1如該產品含有人源或動物源性物質，應給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增實驗室管理辦法》現行有效版本等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規范執行。

三、起草單位

國家藥品監督管理局醫療器械技術審評中心。

第四篇：酶聯免疫法檢測試劑注冊技術審查指導原則

附件1

酶聯免疫法檢測試劑注冊技術審查指導原則

一、前言

本指導原則主要針對酶聯免疫類檢測試劑的主要原材料、生產工藝及反應體系、產品質量控制等環節提出指導性技術要求。

本指導原則系對酶聯免疫法檢測試劑的一般要求，申請人應依據產品特性確定其中的具體內容是否適用，若不適用，需詳細闡述其理由及相應的科學依據。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規和標準的不斷完善、科學技術的不斷發展，其相關內容也將進行適時的調整。

二、適用范圍

本指導原則適用于有關病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術審查。其他酶聯免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導原則執行。

三、基本要求

（一）基本原則

1.研制、生產用的各種原料、輔料等應制定其相應的質量標準，并應符合有關法規的要求。— 2 — 2.試劑生產企業應具備相應的專業技術人員、儀器設備以及適宜的生產環境，獲得《醫療器械生產許可證》；同時，應按照《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》的要求建立相應的質量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應通過《體外診斷試劑生產企業質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。企業應對試劑的使用范圍做出明確規定，并經國家藥品監督管理部門批準。

3.診斷試劑的研制應當按照科學、規范的原則，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。

4.試劑在研制、生產過程中所用的各種材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產和質量控制的總體目標：保證試劑使用安全、質量穩定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質量控制 1.主要生物原料

與產品質量最密切相關的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標反應板、標記相關酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應用抗原或抗體、制備校準品（標準品）等。使用前應按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規定的質量標準。主要生物原料若為企業自己生產，其工藝必須相對穩定；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據國家相關法規的要求進行變更申請。

主要生物原料的常規檢驗項目一般包括：（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質；特殊生

— 3 — 物原料應具備相應外觀標準。

（2）純度和分子量

主要經SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳，一般每個電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質量標準，分子量大小應在正確的條帶位臵。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進行檢測。

（4）效價

效價的測定一般根據蛋白含量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效價應達到規定的要求。

（5）功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩定性等，并比較其與上批次原料的相關性。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質量標準應符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質控標準》規定的標準要求，并且要適合于本企業的生產。建議作以下檢驗：

（1）牛血清或羊血清

外 觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗：將血清直接37℃放臵7天，明亮處觀察，不得出現混濁或— 4 — 沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥32mg/ml。

球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化鈉溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應≤2mg/ml。

（2）牛血清白蛋白：

外 觀：應為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其它雜質顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18?26℃時，溶解時間應≤15分鐘，pH值應為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲法，其標準為≥95％。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標準為≥90%。（3）酪蛋白：

應符合生產所需的質量標準。（4）標記用酶

應在產品的質量標準中明示所使用的標記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應根據不同生產廠家的檢驗方法和質量標準進行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應大于3.0。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行酶聯免疫測定，均不能出現非特異性反應。

生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。3.化學原材料

化學原材料的質量標準，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應符合《中國生物制品主要原輔材

— 5 — 料質控標準（2000年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業的生產。

主要化學原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發生變更。化學原材料在購入時，原材料的生產商必須提供該批次化學原材料的質量保證材料和質量檢驗報告。

4.其他物料（1）酶標板 ①外觀

明亮處用肉眼觀察板條的外觀質量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應剔除。②吸附能力和精密性 采用合適的方法進行檢驗。

一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結合物吸附，通過顯色反應，使用酶標儀讀數，計算CV值。CV值結果應符合相關產品的功能性質量標準，一般批內CV≤5％，批間CV≤10％。

（2）液體試劑裝量瓶

包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應有相應的裝量瓶，并建立相應的質量控制標準，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。

（3）其他材料

包括試劑瓶標簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應參照國家食品藥品監督管理局發布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫療器械說明書、標簽和包裝標識管理規定》建立相應質量控制標準?！? 6 — 5.企業質控品

企業質控品一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應（hook效應）等質控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質控品樣品。如該產品具有國家標準品或參考品，應使用國家標準品（參考品）進行標化；若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

企業質控品的基質應與診斷試劑的待測樣品的基質基本一致，如待測樣品為血清/血漿，質控品基質也應為血清/血漿。

（三）試劑盒各組分的生產

酶聯免疫法檢測試劑主要組分的生產包括酶標記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標反應板、分裝及包裝等步驟；并通過產品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質控過程來保證其質量符合規定。

1.各種工作液的配制

酶聯免疫診斷試劑研制生產過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標準品（或校準品）溶液。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應在相應的生物安全實驗室完成。

各種工作液在配制過程中應嚴格按質量標準中的配方進行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進行相應的質量檢驗并達到質量標準后，方可使用或分裝。對于定量檢測試劑，其標準品（或校準品）溶液應具有量值溯源性。

應對配制過程及配制的液體進行的質量控制，主要包括酶結合物的

— 7 — 功能性實驗及穩定性；各種溶液的外觀、pH值等；酶作用底物應測定在無相應酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標；終止液應對其終止酶促反應的能力進行測定。

2.包被酶標反應板

包被前應對酶標反應板進行質量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標反應板的批號、數量、標識。酶標反應板經檢驗合格后方能用于包被。不同批號的板條不能混用。

選擇經檢驗合格的包被原料（如抗原、抗體等），經一定的方法確定最佳包被濃度和酶結合物工作濃度，按照診斷試劑的生產規程，配制包被緩沖液、封閉液，經檢驗合格后，包被酶標反應板，經干燥后，已包被的酶標反應板用鋁箔紙封閉（內臵干燥劑），保存于2?8℃。

應對包被過程進行相應的質量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質量檢驗、包被液和封閉液的質控（如配方、外觀、pH值）、包被過程的監控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監控等。

3.分裝和包裝

樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應嚴格按照質量標準中的量進行過濾后再分裝，分裝量的誤差應小于5%。

分裝及包裝均應按照相應的標準操作規程要求進行。包裝前，應嚴格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數量，并在關盒前進行復核。

（四）質量控制 1.半成品質量控制（1）半成品抽樣

檢驗人員按試劑的批號，根據抽樣申請單抽取規定數量的半成品各— 8 — 組分，作號標記、待檢。

（2）半成品檢驗

根據試劑盒的企業標準或者制檢規程進行半成品的檢驗。半成品檢驗，一般使用國家標準品（參考品）或經國家標準品（參考品）標化后的企業參考品。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業參考品，企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

檢驗指標一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應達到相應的質量標準要求。對于精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對定量檢測試劑，同時應分析其線性相關系數和定量質控品檢測結果的準確性。

企業應該對每一批試劑的半成品進行穩定性研究。試劑盒各組分應留樣，2?8℃定期作穩定性考核，同時作37℃熱穩定性試驗，試驗結果應符合產品的質量標準。

2.成品質量控制

產品包裝完成后，質檢人員根據試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進行抽樣，同時填寫抽樣數量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數量應包括檢驗用數量和留樣數量。質檢人員同時應檢查相關原始記錄。

每一批酶聯免疫類檢測試劑的試生產量應滿足工藝研究、分析性能驗證、穩定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。

（1）成品檢驗

成品檢驗時，一般使用國家標準品（參考品）或經國家標準品（參考品）標化后的企業參考品，并達到相應質量要求。若該診斷試劑沒有國家

— 9 — 標準品（參考品），則使用企業參考品，企業參考品的制備應有規范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監督管理局已經批準的同類產品的質量。

（2）穩定性試驗

在批放行前，每一批試劑應完成37℃熱穩定性試驗，試驗結果應符合產品的質量標準。

四、名詞解釋

酶聯免疫法：是指在酶標板上包被特定的抗原（和/或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關抗體（和/或抗原）反應，形成的抗原抗體復合物再與相應的酶標記的抗體和/或抗原進一步反應，經過酶催化底物發生顯色反應，由形成的顏色的強弱來判斷樣本中相應的抗體和/或抗原的存在。

五、參考文獻：

1.《中國生物制品規程》（2000年版），化學工業出版社

— 10 —

第五篇：抗人球蛋白檢測試劑注冊技術審查指導原則（2018年）

附件3

抗人球蛋白檢測試劑注冊技術審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內容，可自行補充。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、范圍

抗人球蛋白檢測試劑可進行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細胞的檢測等。

本指導原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。

本指導原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產品注冊和相關許可事項變更的產品。其他未盡事宜，應當符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關法規要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱“44號公告”）的相關要求。內容主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的說明、有關產品主要研究結果的總結和評價以及同類產品在國內外批準上市的情況介紹等內容，其中同類產品上市情況介紹部分應著重從靈敏度、特異性、效價、重復性等方面寫明擬申報產品與目前市場上已獲批準的同類產品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質量標準的研究資料。

1.抗體的選擇及質量標準

明確抗體的來源，如為單克隆抗體應明確細胞株、克隆號等內容。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。

抗體如為自行生產，提供抗體的詳細生產及鑒定過程。

1.1靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統至少7種血型抗體（IgG）的最高稀釋倍數的凝集強度不小于1+。

1.2特異性：臨床有意義的已知血型系統至少7種，每種選1個抗體（IgG），與對應的抗原陽性細胞均應檢測陽性。

與不規則抗體陰性樣本檢測結果應為陰性。

1.3效價：如采用倍比稀釋的方法驗證抗人球蛋白試劑的效價，分別采用IgG和/或C3d致敏的細胞或根據廠家確立的研究方法進行驗證。

2.填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質量控制要求。應提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。

3.填充緩沖液：應說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功能性進行研究驗證。

4.液體試劑稀釋液：應說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功能性進行研究驗證。

（三）主要生產工藝及反應體系的研究資料

1.主要生產工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產工藝的確定依據。

2.產品基本反應原理介紹。

3.主要生產工藝過程的研究資料、每一步生產工藝的確認資料及試驗數據。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應確保均勻無氣泡，以及質量控制的要求。

4.主要反應體系的研究資料、每一步反應體系的確認資料及試驗數據。

反應體系的設置應符合《全國臨床檢驗操作規程》等公認標準操作規范、指南或標準的要求。如紅細胞懸液制備要求及紅細胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉數和時間的方式設置離心條件。

（四）分析性能評估資料

申請人應提交在產品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體研究目的、實驗設計、研究方法、可接受標準、實驗數據、統計方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內或國際有關體外診斷產品性能評估的指導原則進行。

產品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內或境外已批準上市的產品，如抗體篩查紅細胞、血型抗體等。

分析性能評估試驗中應明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的試驗方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有試驗方法應符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。

對于抗人球蛋白檢測試劑建議著重對以下分析性能進行研究：

1.間接抗人球蛋白試驗：

提供臨床有意義的血型系統至少7種不規則抗體（IgG）檢測靈敏度和特異性的驗證資料，明確所檢出抗體的抗體效價的具體要求，可參照以下要求進行實驗。

1.1靈敏度

與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數的凝集強度不小于1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結果。

C3d凝集強度≥2+。

1.2特異性

與已知抗體類型的血型抗體對應的O型相應抗原陽性紅細胞的反應為陽性。

與已知抗體類型的血型抗體對應的O型相應抗原陰性紅細胞的反應為陰性。

與C3d陽性或陰性樣本反應為陽性或陰性。

1.3重復性

分別采用IgG性質抗D抗體，IgG性質抗Jka/Jkb抗體，IgG性質抗Fya/Fyb抗體進行重復性驗證。

批內重復性采用同一批次檢測卡重復進行檢測，重復次數不少于10次。

日間重復性采用同一批次檢測卡每日重復進行檢測，重復天數不少于10天。

批間重復性采用至少三批檢測卡進行重復檢測。

批內、日間、批間重復性檢測結果應基本一致，檢測結果凝集強度差異不超過1+。

采用陰性結果的血清重復10次檢測，均應出現陰性反應。

1.4干擾

提供溶血、脂血、黃疸干擾的評估資料，應至少采用強、中、弱性質的抗體進行評價。

1.5血清、血漿比對的評估資料。

1.6抗凝劑的適用性研究驗證。

1.7采用部分臨床樣本進行檢測靈敏度和特異性的評價，應考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應包括陽性和陰性病例。

1.8分別進行每個預期用途的完整的性能評估資料，應至少包括50例陽性病例。

2.直接抗人球蛋白試驗

使用被不規則抗體和/或C3d致敏的紅細胞進行反應，評價產品性能，適用的性能評價內容可以參照間接抗人球蛋白試驗。

（五）陽性判斷值

給出不同凝集強度的研究方法，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強度的圖例或相片。

（六）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究。前者主要包括實時穩定性（有效期）、加熱穩定性、開瓶穩定性等研究，申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案，實驗項目應至少包括靈敏度、特異性、重復性等內容。

穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實施方案、詳細的研究數據以及結論。對于實時穩定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應對樣本穩定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數進行評價。

試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究結果應分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗

臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內容應符合《辦法》、“44號公告”及《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）的規定，以下僅結合抗人球蛋白檢測試劑的具體特點對其臨床試驗中應重點關注的內容進行闡述。

1.研究方法

該類試劑已有同類產品上市，按照法規要求應選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明本品與已上市產品等效。

2.臨床試驗單位的選擇

應選擇符合相關法規要求的臨床試驗機構進行臨床試驗，不得選擇血站進行臨床試驗。

3.病例選擇

臨床總病例數應不少于3000例。應采用臨床患者樣本進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應包括對檢測易產生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。

4.實驗過程

無論直接抗人球蛋白試驗還是間接抗人球蛋白試驗，均應根據產品的預期用途和適用人群分別進行臨床試驗。

在進行間接抗人球蛋白檢測試劑臨床試驗的過程中除與對比試劑進行比較外，陽性結果應給出不規則抗體的具體鑒定結果。

產品如適用于不同的預期用途（如不規則抗體篩查、抗體致敏紅細胞檢測、交叉配血等），每種預期用途均應分別進行至少3000例的臨床試驗，如適用于不規則抗體篩查或抗體致敏紅細胞檢測等，每種預期用途應分別包含不少于100例陽性病例，如適用于交叉配血相關用途，應包含不少于100例交叉配血不合病例?？贵w致敏紅細胞檢測應根據疾病的種類，分別進行臨床試驗。

交叉配血使用的供血者樣本，最多只能使用兩次，交叉配血不得使用血型不合的樣本進行實驗。

同時應明確配合使用的試劑產品。

5.統計學分析

應進行考核試劑與對比試劑檢測結果的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，并對定性結果進行Kappa檢驗以驗證檢測結果的一致性。

6.結果差異樣本的驗證

對于兩種試劑檢測結果不一致[考核試劑與對比試劑檢測結果不一致、與對比試劑凝集強度差異較大（差異2個凝集強度及以上）]的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認試驗，同時應給出最終的抗體鑒定結果。

7.臨床試驗數據記錄表應作為臨床試驗報告附件提交。臨床試驗數據記錄表應列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強度和抗體鑒定結果，如有不符樣本應列明第三方確認的結果。

（八）產品風險分析資料

產品風險分析資料應符合“44號公告”的基本要求，并參照相應的行業標準進行風險分析。風險分析中應充分考慮到各種可能影響檢測結果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行抗人球蛋白檢測時可能存在一定的干擾、實驗過程不規范、有些抗體較弱導致的檢測結果不穩定等，申請人應根據這些不確定的因素分析產品應用可能存在的風險。

（九）產品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產工藝穩定的前提下，根據產品研制、性能評估等結果，依據國家標準、行業標準及有關文獻，按照《醫療器械產品技術要求編寫指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產品技術要求。產品技術要求應符合《辦法》和“44號公告”的相關規定。

如果擬申報試劑已有相應的國家/行業標準發布，則企業標準的要求不得低于上述標準要求。

產品技術要求的性能指標應至少包括靈敏度、特異性、重復性等。

產品技術要求的附錄應包括主要原材料、生產工藝及半成品檢定要求。主要原材料應明確抗體來源、克隆號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應明確填充物來源及主要特征、質量控制要求，緩沖液應明確組成、pH值等特性及質控要求。主要生產工藝應以流程圖形式描述主要生產工藝過程，并明確主要生產工藝的具體條件和質量控制點。半成品檢定應明確半成品的檢驗要求及方法。

（十）產品注冊檢驗報告

根據《辦法》要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產品應在國家食品藥品監督管理部門認可的、具有相應承檢范圍的醫療器械檢驗機構進行連續三個生產批次樣品的注冊檢驗。

（十一）產品說明書

說明書承載了產品預期用途、檢驗原理、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學解釋的重要依據，因此，產品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求，境外產品的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規范格式對此內容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。

以下內容僅對抗人球蛋白檢測試劑說明書的重點內容進行詳細說明，說明書其他內容應根據《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》要求進行編寫。

1.【預期用途】

1.1寫明本試劑用于直接抗人球蛋白試驗和/或間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細胞的檢測（明確疾病類型）等，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。

1.2說明與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法。

2.【儲存條件及有效期】

說明試劑的儲存條件及有效期、加速穩定性、開瓶穩定性等。

3.【適用儀器】明確具體的離心機和/或孵育器型號（如適用）。

4.【樣本要求】

明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據穩定性研究結果寫明樣本穩定性。

明確適用的抗凝劑的要求。

明確具體的樣本采集、處理方法及過程。

明確紅細胞配制使用的LISS液的生產廠家、規格、貨號等內容。

5.【陽性判斷值】

明確各種試驗方法的結果判斷方法及標準，并通過不同凝集強度的圖例或照片進行詳細解釋。

6.【檢驗方法】

明確配合使用的抗體篩查用紅細胞的生產廠家、規格、貨號等內容。

須明確具體的檢驗步驟，反應體系的描述應準確且應與研究資料一致，不同的預期用途應分別詳細描述實驗過程。如配合其他試劑進行試驗，需注明試驗方法應完全符合配合試劑的試驗操作要求。

7.【檢驗方法的局限性】

未被檢出的抗IgG抗體在某些病例中可能有臨床意義。

8.【注意事項】

8.1上腔部分或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。

8.2濃度過高或過低的紅細胞懸液會引起異常結果。

8.3在不規則抗體篩查、交叉配血試驗中LISS液可以增強抗原抗體的反應，應嚴格按產品說明書規范使用低離子液。

三、參考文獻

1.國家食品藥品監督管理總局.體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）.2014年9月

2.國家食品藥品監督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導原則（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）.2014年9月

3.中國生物制品規程（2000年版）.化學工業出版社

四、起草單位

國家食品藥品監督管理總局醫療器械技術審評中心。