第一篇：分子生物學復習總結

分子生物學

一．緒論

1．分子生物學研究的主要內容包括：1）DNA重組技術；2）基因表達調控的研究；3）生物大分子的結構功能研究；4）基因組、功能基因組與生物信息學研究。P11

2.分子生物學研究的三大理論和兩大技術保證 ：1）40年代確定了遺傳信息的攜帶者，即基因的分子載體是DNA而不是蛋白質，解決了遺傳的物質基礎問題；2）50年代提出了DNA分子的雙螺旋結構模型和半保留復制機制，解決了基因的自我復制和世代交替問題；3）50年代末至60年代，相繼提出了“中心法則”和操縱子學說，成功地破譯了遺傳密碼，充分認識了遺傳信息的流動和表達。兩大技術保證：1）DNA的體外切割和連接；2）DNA的核苷酸序列分析技術。

二．染色體與DNA

3.核小體是由H2A、H2B、H3、H4各兩個分子生成的八聚體和由大約200bpDNA組成的。八聚體在中間，DNA分子盤繞在外，而H1則是在核小體的外面。每個核小體只有一個H1。核小體的形成是染色體中DNA壓縮的第一個階段。

4.原核生物DNA的主要特征：1）原核生物中一般只有一條染色體，且大都帶有單拷貝基因，只有少數基因（如rRNA基因）是以多拷貝形式存在的；2）整個染色體DNA幾乎全部由功能基因與調控序列所組成；3）幾乎每個基因序列都與它所編碼的蛋白質序列成線性對應狀態。

5．真核細胞染色體具有如下特征：1）分子結構相對穩定；2）能夠自我復制，使親、子代之間保持連續性；3）能夠指導蛋白質的合成，從而控制整個生命過程；4）能夠產生可遺傳的變異。

6.染色體上的蛋白質包括組蛋白和非組蛋白。組蛋白是染色體的結構蛋白，它與DNA形成核小體。

7．組蛋白具有如下特性：1）進化上的極端保守性；2）無組織特異性；3）肽鏈上氨基酸分布的不對稱性，堿性氨基酸集中分布在N端的半條鏈上；4）組蛋白的修飾作用，包括甲基化、乙酰化、磷酸化及ADP核糖基化等；5）富含賴氨酸的組蛋白H5，H5的磷酸化在蛋白質的失活過程中起重要作用。

8.非組蛋白有：HMG蛋白、DNA結合蛋白、H24非組蛋白。

9.C值反?，F象：真核細胞基因組的最大特點是它含有大量的重復序列，而且功能DNA序列大多被不編碼的蛋白質的非功能DNA所隔開。所謂C值，通常是指一種是生物體單倍體基因組DNA的總量。

10.DNA的二級結構：是指兩條多核苷酸反向平行盤繞所生成的雙螺旋結構。二級結構的分類，右手螺旋：A-DNA和B-DNA;右手螺旋：Z-DNA。

11.DNA的半保留復制機制：DNA在復制過程中堿基間的氫鍵首先斷裂，雙螺旋被分開，每條鏈分別作為模板合成新鏈，產生互補的兩條鏈。這樣新形成的兩個DNA分子與原來DNA分子的堿基順序完全一樣。因此，每個子代分子的一條鏈來自親代DNA,另一條鏈則是新合成的，所以這種復制方式被稱為DNA半保留復制。

12.真核生物DNA的復制與原核生物DNA復制的區別：1）真核生物每條染色體上可以有多處復制起點，而原核生物只有一個復制起點；2）真核生物的染色體在全部完成復制之前，各個起始點上DNA的復制不能再開始，而在快速生長的原核生物中，復制起始點上可以連續開始新的DNA復制，表現為雖只有一個復制單元，但可以有多個復制叉。

13.原核細胞染色體DNA復制的功能單位是復制子，由起始物位點和復制起點兩個部分組成。起始物位點編碼復制調節蛋白質，復制起點與蛋白質相互作用并啟動復制。

14.錯配修復系統修復的原則是“保存母鏈，修復子鏈”，找出錯誤堿基所在的DNA鏈，進行修復。

15.轉座子是存在于染色體DNA上可自主復制和移位的基本單位?？煞譃椋篒S序列、復合式轉座子、Tna家族。

三、生物信息的傳遞（上）從DNA到RNA

16.DNA是儲藏遺傳信息的最重要的生物大分子，DNA雙鏈可以分為：編碼鏈和模板鏈。

17.轉錄的基本過程：模板識別、轉錄起始、通過啟動子及轉錄的延伸和終止。

18.?因子的作用：使RNA聚合酶全酶識別啟動子序列的特異性總共提高了107倍。

19.轉錄起始復合物：當新生RNA鏈達到6-9個核苷酸使才能形成穩定的RNA聚合酶-DNA-RNA三元復合物，釋放?因子，表示轉錄起始的終止，轉錄進入延伸期。，20.啟動子是一段位于結構基因5端上游區的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之與模板

DNA準確地相結合并具有轉錄起始的特異性。啟動子結構：1）轉錄起始點；2）-10區(TATA區)；3）-35區(TTGACA區)。

21.原核生物DNA的-10區與-35區的距離為16-19bp時，能夠維持啟動子的活性。另外，增強子也具有強化轉錄起始的作用。

22.真核生物啟動子區包括:TATA區、CAAT區、GC區、增強子，習慣上將TATA區上游的保守序列稱為上游啟動子元件或上游激活序列。

23.原核生物mRNA與真核生物mRNA的特征比較：

原核生物mRNA的特征：1）原核生物mRNA的半衰期短；2）許多原核生物mRNA以多順，反子的形式存在；3）原核生物mRNA的5端無帽子結構，3端沒有或只有較短的poly(A)

結構。，真核生物mRNA的特征：1）真核生物mRNA的5端存在帽子結構；2）絕大多數真核生物

mRNA具有poly(A)尾巴。

四、生物信息的傳遞（下）mRNA-蛋白質

24.三聯子密碼：mRNA上每3個核苷酸翻譯成蛋白質多肽鏈上的一個氨基酸，這三個核苷酸就稱為密碼，也叫三聯子密碼。

25.移碼突變：在開放閱讀框內插入非3的倍數的密碼子引起的突變叫做移碼突變。

26.密碼子的簡并性：由一種以上密碼子編碼同一種氨基酸的現象稱為密碼子的簡并性，對應于同一種氨基酸的密碼子稱為同義密碼子。

27.rRNA的三葉草型二級結構，由受體臂、TΨC臂、多余臂、反密碼子臂、D臂組成，其中最重要的兩條臂是受體臂和反密碼子臂。

28.核糖體由大、小兩個亞基組成，小亞基組要負責對模板mRNA進行特異性識別，mRNA的結合位點也在小亞基上；大亞基負責攜帶氨基酸及tRNA的功能，肽鍵的形成，AA-tRNA、肽基-tRNA的結合等，A位、P位、轉肽酶中心等主要在大亞基上。

29.蛋白質合成的生物學機制。大致步驟：氨基酸的活化，肽鏈的起始，肽鏈的延伸，肽鏈的終止及釋放，肽鏈的折疊和加工。

A.氨基酸的活化：氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下生成活化氨基酸：AA-tRNA。（原核

fMetMet生物首先被活化的是fMet-tRNA,真核生物則是Met-tRNA）

B.翻譯的起始：（IF因子的參與）核糖體上三個與氨酰-tRNA結合的位點：A位、P位、E位。在原核細胞核糖體翻譯起始時，只有fMet-tRNAfMet能與第一個P位點結合，其他所有tRNA都必須通過A位到達P位，再由E位離開核糖體。

C.肽鏈的延伸：包括后續AA-rRNA與核糖體結合、肽鍵的生長、移位三個步驟。

D.肽鏈的終止：RF與終止密碼子相結合后，誘導肽基轉移酶把一個水分子而不是氨基酸加到延伸中的肽鏈上，水解P位上與多肽鏈與tRNA之間的二脂鍵。

E.蛋白質的前體加工：包括N端fMet或Met切除，二硫鍵的形成，特定氨基酸的修飾，切除新生肽鏈中非功能片段。

30.信號肽的結構特點：1）一般帶有10-15個疏水氨基酸；2）在靠近該序列N端常常有1個或數個帶正電荷的氨基酸；3）在其C-末端靠近蛋白酶切割位點處常常帶有數個極性氨基酸，離切割位點最近的那個氨基酸往往帶有很短的側鏈（丙氨酸或甘氨酸）。

31.信號肽假說:1）完整的信號肽是保證蛋白質運轉的必要條件；2）僅有信號肽還不足以保證蛋白質運轉的發生；3）信號序列的切除并不是運轉所必需的；4）并非所有的轉運蛋白質都有可降解的信號肽。

32.信號肽的定義：能啟動蛋白質轉運的任何一段多肽。

33.前導肽對線粒體蛋白質的識別和跨膜有關鍵作用。

34.前導肽的結構和功能：1）前導肽通常是疏水的；2）帶正電荷的堿性氨基酸（特別是精氨酸）含量較為豐富，它們分散于不帶電荷的氨基酸序列之間；3）羥基氨基酸（特別是絲氨酸）含量較高；4）有形成兩親α-螺旋結構的能力；5）帶正電荷的堿性氨基酸在前導肽中有重要作用，如果它們被不帶電荷的氨基酸所取代，就不能發揮牽引蛋白質的過膜的作用。

五、分子生物學研究方法：

35.電泳：指帶電粒子在電場中向與自身電荷相反的電荷的電極移動的現象。

36.遷移率：電泳分子在電場作用下遷移的速度，它與電場強度和電泳分子本身攜帶的凈電荷成正比，與分子的摩擦系數成反比。

37.分子雜交：標記的探針DNA變性后與變性后的靶DNA/RNA通過堿基互補配對結合，形成雜種分子的過程。

38.核酸探針：是指能與特定核苷酸序列發生特異性互補的已知核苷酸片段，因而可檢測樣品中特定的基因序列。

39.聚合酶鏈式反映(PCR)技術

原理：將雙鏈DNA分子在臨近沸點的溫度下加熱分離成兩條單鏈DNA分子，DNA聚合酶以單鏈DNA作為模板并利用反應混合物中的四種脫氧核苷三磷酸合成新生的DNA互補鏈。PCR三步曲:DNA解鏈（變性，90-95℃）；引物與模板DNA相結合（退火，45-55℃）；DNA合成（延伸，72℃左右）。

2+PCR反應應加入：模板DNA、PCR引物、四種核苷酸及適當濃度的Mg。

40.瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳的區別：

1）前者是水平電泳，后者是垂直電泳；2）前者為DNA本身的電荷，后者為SDS復合后的電荷；3）前者為EB染色，后者為考馬斯亮藍染色。

41.DNA序列分析：Sanger雙脫氧終止法。

六、基因的表達調控（上）

42.組成型合成蛋白質：合成速率不受環境變化或代謝狀態影響的蛋白質。與之對應的是適應型或調解型蛋白質。

43.順式作用元件（DNA上）與反式作用因子（蛋白質上）

順式作用元件:是指對基因表達有調節活性的DNA序列，其活性只影響其自身處在同一個DNA

分子上的基因，同時，DNA序列通常不編碼蛋白質，多位于基因旁側內含子

中，如增強子。

反式作用因子：是能調節與它們接觸的基因表達的擴散分子（通常是蛋白質），如轉錄子；

其編碼基因與其識別或結合的靶核苷酸序列不在同一個DNA分子上。

44.原核基因調控機制的類型：負控誘導和負控阻遏，其調節產物是阻遏蛋白；正控誘導和

正控阻遏，其調節產物是激活蛋白。

45.通過代謝物調節的基因活性主要有可誘導和可阻遏兩大類。

可誘導調節：是指一些基因在特殊的誘導物或化合物的作用下，由原來關閉的狀態轉變為工

作狀態即在某些物質的誘導下使基因活化，如大腸桿菌的乳糖操縱子。

可阻遏調節：這類基因平時都是開啟的，處在生產蛋白質或酶的工作過程中，由于一些特殊

代謝物或化合物的積累而將其關閉，阻遏了基因的表達。

46.弱化子：當操縱子被阻遏，RNA合成被終止時，起終止轉錄信號作用的那一段核苷酸被

稱為弱化子。

47.葡萄糖效應（降解物的抑制作用）：指當葡萄糖和其他糖類一起作為細菌的碳源時葡萄糖總是優先被利用，葡萄糖的存在阻止了其他糖類的利用的現象。

48.轉錄因子：是轉錄起始過程中，RNA聚合酶所需要的輔因子，它是能參與正調控的反式

作用因子。

49．乳糖操縱子包括三個結構基因：Z、Y和A，以及啟動子、控制子和阻遏子等。

50．Lac操縱子的控制模型：

1）Z、Y、A基因的產物由一條多順反子的mRNA分子所編碼；

2）該mRNA分子的啟動區（P）位于阻遏基因（I）與操縱區（O）之間，不能單獨起始半乳糖苷酶和透過酶基因的高效表達；

3）操縱區是DNA上的一小段序列（僅為26bp），是阻遏物的結合位點；

4）當阻遏物與操縱區相結合時，lac mRNA的轉錄起始受到抑制；

5）誘導物通過與阻遏物結合，改變它的三維構象，使之不能與操縱區相結合，從而激發lac mRNA的合成。

51．Lac操縱子的誘導物：異乳糖，異丙基巰基半乳糖苷（IPTG），巰甲基半乳糖苷（TMG）。

52．Trp操縱子的負控阻遏系統：trpR基因突變常常引起trp mRNA的組成型合成，該基因產物因此被稱為輔阻遏蛋白。當培養基中的色氨酸含量較高時，它與游離的輔阻遏蛋白相結合，并使之與操縱區DNA緊密結合；當培養基中色氨酸供應不足時，輔阻遏物失去色氨酸并從操縱區上解離，trp操縱子去阻遏。

53．trp操縱子的弱化作用：前導肽基因中有兩個相鄰的色氨酸密碼子，所以這個前導肽的翻譯必定對tRNATrp十分敏感。1）當培養基中色氨酸的濃度很低時，負載有色氨酸的tRNATrp也就少，這樣翻譯通過兩個相鄰的色氨酸密碼子的速度就會很慢，當4區被轉錄完成時，核糖體才進行到1區（或停留在兩個相鄰的Trp密碼子處），這時的前導區結構是2-3配對，不形成3-4配對的終止結構，所以轉錄可以繼續進行，直到將trp操縱子中的結構基因全部轉錄。2）而當培養基中色氨酸的濃度高時，核糖體可順利通過兩個色氨酸密碼子，在4區被轉錄之前，核糖體就到達2區，這樣使2-3不能配對，3-4區可以著有配對形成莖-環狀終止結構，轉錄停止，trp操縱子中的結構基因被關閉而不再合成色氨酸。所以，弱化子對RNA聚合酶的影響依賴于前導肽翻譯中核糖體所處的位置。

54．半乳糖操縱子包括3個結構基因：異構酶（galE），半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷轉移酶（galT），半乳糖激酶（galK）。這三個酶的作用是使半乳糖變成葡萄糖-1-磷酸。

55．Gal操縱子與lac操縱子所不同的是galR與galE、T、K及操縱區O等的距離都很遠，而galR產物對galO的作用與lacI-lacO的作用相同。

56．基因表達的轉錄調控是生物最經濟的調控方式。轉錄生成mRNA以后，再翻譯生成或翻譯后水平進行“微調”，是對轉錄調控的補充，它使基因表達的調控更加適應生物本身的需求和外界條件的變化。

57．mRNA 3’端poly(A)的長短對翻譯效率有很大影響。細胞中蛋白質合成旺盛時，mRNA鏈上核糖體數量就多，mRNA鏈上的poly(A)也較長。當某些mRNA鏈不再被翻譯時，核糖體就被釋放出來，其poly(A)也相應縮短。

七、基因的表達與調控（下）

58．基因擴增：指某些基因的拷貝數專一性大量增加的現象，它使細胞在短時期內產生大量的基因產物以滿足生長發育的需要，是基因活性調控的一種方式。

59．基因重排：將一個基因從遠離啟動子的地方移到距離它很近的位點從而啟動轉錄，這種方式被稱為基因重排。

60．DNA的甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變，從而控制基因表達。

61．真核生物的轉錄調控大多數是通過順式作用元件和反式作用因子復雜的相互作用來實現的。

順式作用元件：是指存在于基因DNA中的特異性調控序列。真核基因的順式作用元件按照功能可以分為啟動子和增強子。

反式作用因子：是能直接或間接地識別或結合在各種順式作用元件8-12bp核心序列上，參與調控靶基因轉錄效率的一組蛋白質。順式作用元件必須與反式作用因子結合才能對轉錄起到調控作用。

62．蛋白激酶根據底物蛋白質被磷酸化的氨基酸殘基種類可以分為三大類：1）絲氨酸/蘇氨酸型；2）酪氨酸型；3）組氨酸型。

63．依賴于cAMP的蛋白激酶稱為A激酶（PKA）。依賴于Ca2+的蛋白激酶稱為C激酶（PKC）。

64．酪氨酸激酶（PTK）包含跨膜受體家族與胞質非受體家族兩大類?？缒な荏w家族由胞外結合配體結構域、跨膜結構域和細胞質激酶結構域組成。

65．應答元件：能與某個（類）專一蛋白因子結合，從而控制基因特異性表達的DNA上游序列。

66．熱激蛋白調控基因表達的機制：1）在沒有受熱或其他環境脅迫時，HSF主要以單體形式存在于細胞質和核內。2）受到熱激活其他環境脅迫時，細胞內變形蛋白增多，它們都與HSF競爭結合Hsp70，從而釋放HSF，使之形成三體并輸入核內，HSF被迅速磷酸化。3）HSF與HSE的特異性結合，引起包括Hsp70在內的許多熱激應答基因表達，大量產生Hsp70蛋白。4）隨著熱激溫度的消失，細胞出現大量游離的Hsp70蛋白，它們與HSF結合，形成沒有DNA結合能力的單體并脫離DNA。

八、疾病與人類健康

67．癌基因可分為兩大類：病毒癌基因和細胞轉化基因。

第二篇：分子生物學復習知識總結

分子生物學復習知識總結

一、名詞解釋

1．Gene and Genome基因和基因組

基因：是遺傳的物質基礎，是DNA（脫氧核糖核酸）分子上具有遺傳信息的特定核苷酸序列的總稱，是具有遺傳效應的DNA分子片段。能夠表達和產生蛋白質和RNA的DNA序列，是決定遺傳性狀的功能單位。

基因組：細胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質的總和。一般的定義是單倍體細胞中的全套染色體為一個基因組，或是單倍體細胞中的全部基因為一個基因組

2.Signal peptide信號肽

分泌蛋白新生肽鏈N端的一段20～30氨基酸殘基組成的肽段。將分泌蛋白引導進入內質網，同時這個肽段被切除?，F這一概念已擴大到決定新生肽鏈在細胞中的定位或決定某些氨基酸殘基修飾的一些肽段。

3.Opening Reading Frame開放式閱讀框

開放閱讀框是DNA上的一段堿基序列，由于擁有特殊的起始密碼子和直到可以從該段堿基序列產生合適大小蛋白才出現的終止密碼子，該段堿基序列編碼一個蛋白。

4.Sense strain有意鏈：DNA雙鏈中序列和方向與mRNA的序列完全相同的那條DNA鏈，又稱編碼鏈。

5.Expressed sequence tag(EST)表達序列標準

從互補DNA(cDNA)分子所測得部分序列的短段DNA(通常300~500bp)。從cDNA文庫所得到的許多表達序列標簽集合組成表達序列標簽數據庫，代表在一定的發育時期或特定的環境條件下，特定的組織細胞基因表達的序列?？捎糜隍炞C基因在特定組織中的表達，推導全長cDNA序列，或作為標簽標志基因組中的特殊位點以確定基因的位置等。

6.Microarray基因芯片

DNA芯片技術是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，即可獲得樣品的遺傳信息。由于常用計算機硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。

7.Genomics and RNomics

RNomics：RNA組學，既是核糖核酸組學，研究所有RNA的不同時空表達譜及其生物學意義。研究RNA組的學科，主要是直接鑒定生物體中非信使小RNA(snmRNA)在特定條件和不同狀態下的種類、功能、差異及其與蛋白質的相互作用，是基因組學和蛋白質組學研究的擴充、發展和延伸。

Genomics：基因組學，研究基因組的結構與功能的學科，主要包括DNA的核苷酸序列、遺傳信息含量、基因組織和基因數目等，基因組的產物不僅是蛋白質，還有許多復雜功能的RNA。包括三個不同的亞領域，即結構基因組學、功能基因組學和比較基因組學。

8.RNAiRNA干擾

RNA干擾，利用雙鏈小RNA分子高效、特異的降解細胞內同源RNA，從而阻斷體內靶基因的表達，使細胞出現靶基因缺失的表型。

9.MicroRNA微小分子RNA

是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發夾結構的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（雙鏈）但是和siRNA密切相關。據推測，這些非編碼小分子RNA（miRNAs）參與調控基因表達，10.intron and exon內含子和外顯子

內含子，在不連續基因中無編碼功能的區段（在初始轉錄產物hnRNA加工產生成熟的mRNA

時，被切除的非編碼序列是內含子）

真核生物細胞DNA中的間插序列。這些序列被轉錄在前體RNA中，經過剪接被去除，最終不存在于成熟RNA分子中。內含子和外顯子的交替排列構成了割裂基因。在前體RNA中的內含子常被稱作“間插序列”。

外顯子，在不連續基因中有編碼功能的區段（在初始轉錄產物hnRNA加工產生成熟的mRNA時，留下的編碼序列是外顯子）

真核生物基因的一部分，它在剪接(Splicing)后仍會被保存下來，并可在蛋白質生物合成過程中被表達為蛋白質。外顯子是最后出現在成熟RNA中的基因序列,又稱表達序列。既存在于最初的轉錄產物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。術語外顯子也指編碼相應RNA外顯子的DNA中的區域。所有的外顯子一同組成了遺傳信息，該信息會體現在蛋白質上。

二、簡答題

1病毒、原核生物基因組與真核生物基因組結構特點是什么？

①種類單一；②單倍體基因組：每個基因組在病毒中只出現一次；③形式多樣；④大小不一；⑤基因重疊；⑥動物/細菌病毒與真核/原核基因相似：內含子；⑦具有不規則的結構基因；⑧基因編碼區無間隔：通過宿主及病毒本身酶切；⑨無帽狀結構；⑩結構基因沒有翻譯起始序列。

2、原核基因組的特點：

①為一條環狀雙鏈DNA；②只有一個復制起點；③具有操縱子結構；④絕大部分為單拷貝；⑤可表達基因約50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因一般是連續的，無內含子；⑦重復序列很少。

3、真核基因組的特點：

①真核生物基因組遠大于原核生物基因組，結構復雜，基因數龐大，具有多個復制起點；②基因組DNA與蛋白質結合成染色體，儲存于細胞核內；③真核基因為單順反子，而細菌和病毒的結構基因多為多順反子；④基因組中非編碼區多于編碼區；⑤真核基因多為不連續的斷裂基因，由外顯子和內含子鑲嵌而成；⑥存在大量的重復序列；⑦功能相關的基因構成各種基因家族；⑧存在可移動的遺傳因素；⑨體細胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。2舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法

制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。

例如：在腫瘤發生和發展過程中，腫瘤細胞會呈現于正常細胞表達水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關的基因。也可利用誘導的方法，篩選出誘導表達的基因。

3分別寫出6種以上RNA的功能

m RNA

t RNA

r RNA

silencing RNAsiRNA主要參與（RNAi）現象，以帶有專一性的方式調節基因的表達

miRNAmicroRNAs（miRNAs）是一種小的，類似于siRNA的分子，由高等真核生物基因組編碼，miRNA通過和靶基因mRNA堿基配對引導沉默復合體（RISC）降解mRNA或阻礙其翻譯。miRNAs在物種進化中相當保守，在植物、動物和真菌中發現的miRNAs只在特定的組織和發育階段表達，miRNA組織特異性和時序性，決定組織和細胞的功能特異性，表明miRNA在細胞生長和發育過程的調節過程中起多種作用。

HnRNA:核內不均一RNA胞核中的一大類分子質量不一致的RNA分子。被視為信使核糖核酸(mRNA)的初級轉錄產物，經過一系列加工步驟才能產生成熟的、有功能的Mrna SnRNA;核內小RNA參與HnRNA的剪切和轉運

SnoRNA:核仁小RNA: rRNA的加工與修飾 SCRNA/7SL RNA:

真核細胞有細胞核和細胞漿中都含有許多小RNA，它們約有100到300個堿基，每個細胞中可含有105-106個這種RNA分子。它們是由RNA聚合酶Ⅱ或Ⅲ所合成的.scRNA則參與蛋白質的合成和運輸, 如SRP顆粒就是一種由一個7SRNA和蛋白質組成的核糖核蛋白體顆粒,主要功能是識別信號肽, 并將核糖體引導到內質網。

小胞漿RNA(scRNA,small cytosol RNA)又稱為7SL?RNA，長約300個核苷酸，主要存在于細胞漿中，是蛋白質定位合成于粗面內質網上所需的信號識別體(signal recognization particle)的組成成分

:

4以你將要開展的分子生物學研究為例，如何撰寫開題報告？

開題報告包括綜述、關鍵技術、可行性分析和時間安排等四個方面。由于開題報告是用文字體現的論文總構想,因而篇幅不必過大,但要把計劃研究的課題、如何研究、理論適用等主要問題寫清楚。開題報告的總述部分應首先提出選題，并簡明扼要地說明該選題的目的、目前相關課題研究情況、理論適用、研究方法。

開題報告的內容大致如下：課題名稱、承擔單位、課題負責人、起止年限、報名提綱。開題報告以及怎么寫

1、課題來源及研究的目的和意義；

2、國內外在該方向的研究現狀及分析；

3、主要研究內容及創新點；

4、研究方案及進度安排，預期達到的目標；

5、為完成課題已具備和所需的條件和經費；

6、預計研究過程中可能遇到的困難和問題及解決的措施；

7、主要參考文獻；

5舉出分子生物學研究中常用的工具酶及良好載體的條件

工具酶

連接酶：①DNA連接酶：T4DNA連接酶、大腸桿菌DNA連接酶②RNA連接酶

聚合酶：①DNA聚合酶：

1、依賴于DNA的DNA聚合酶：大腸桿菌DNA聚合酶 Ⅰ、Klenovo酶、T4 DNA聚合酶、天

然的T7 DNA聚合酶、經修飾的T7 DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶

2、不依賴于DNA的DNA聚合酶（末端轉移酶）

3、依賴于RNA的DNA聚合酶（反轉錄酶）

②RNA聚合酶：依賴于DNA的RNA聚合酶、不依賴于DNA的RNA聚合酶（Poly（A）聚合酶）激酶、磷酸酶：堿性磷酸酶、T4多核苷酸激酶

核酸酶：①核酸外切酶：

1、單鏈5ˊ→3ˊ和3ˊ→5ˊ核酸外切酶（exoⅦ）

2、雙鏈5ˊ→3ˊ末端外切酶：λ噬菌體核酸外切酶、T7基因6核酸外切酶

3、雙鏈3ˊ→5ˊ核酸外切酶（exoⅢ）

②核酸內切酶：Bal 31核酸酶、核酸酶S1、綠豆核酸酶、微球菌核酸酶

③脫氧核糖核酸酶（DNase I）

④核糖核酸酶（RNase）：核糖核酸酶A（RNaseA）、核糖核酸酶H（RNaseH）、核糖核酸T1（RNaseT1）

其他常用酶：①DNa甲基化酶②DNA結合蛋白：單鏈DNA結合蛋白（SSB）、RecA蛋白③拓撲異構酶I

良好載體的條件：

1能在宿主細胞中大量復制，得到大量的重組DNA分子

2載體上的內切酶微點對于一種酶來說只能有一個（置換型載體上被置換片段的兩側各有一個內切酶位點

3克隆載體要有復制起點，表達載體要有啟動子

4載體上有報告基因或選擇標記基因

5在不影響載體復制和表達的DNA序列上有內切酶酶切位點

6具有較高的外源DNA裝載能力

第三篇：分子生物學總結

SectionA 1 三個域：真細菌，古細菌，真核生物 2 組裝中的主要作用力：非共價健作用力

SectionB 1 蛋白質純化的分析方法

正電荷：天冬氨酸 谷氨酸

負電荷：賴氨酸 精氨酸

組氨酸

極性：天冬酰胺 谷氨酰胺

蘇氨酸 絲氨酸 半胱氨酸

非極性：脂肪族 甘氨酸 丙氨酸 纈氨酸 亮氨酸

異亮氨酸 甲硫氨酸 脯氨酸

芳香族 苯丙氨酸

酪氨酸 色氨酸 Cys 二硫鍵 Gly 無手性 Pro 亞氨基酸

芳香族氨基酸最大吸收峰280mm 3 蛋白質的一級(決定蛋白折疊及其最后的形狀的最重要的因素)：氨基酸脫水縮合形成肽鏈 N端到C端

共價鍵

二級：多肽鏈中空間結構鄰近的肽鏈骨架通過氫鍵形成的特殊結構。

α轉角

β螺旋 氫鍵為主要作用力

三級： 多肽鏈中的所有二級結構和其他松散肽鏈區域（散環結構）通過各種分子間作用力（非共價鍵為主），彎曲、折疊成具有特定走向的緊密球狀構象。

非共價鍵

四級： 許多蛋白分子由多條多肽鏈（亞基，subunits）構成。組成蛋白的各亞基以各種非共價鍵作用力為主，結合形成的立體空間結構即為四級結構。非共價鍵 偶極：電子云在極性共價鍵的兩原子間不均勻分布，使共價鍵兩端的原子分別呈現不同的電性

兼性離子：具有正電荷（堿性），又具有負電荷（酸性）的分子 雙極性分子：

Section C 1核酸的光學特性：

增色性：一種化合物隨著結構的改變對光的吸收能力增加的現象 減色性：一種化合物隨著結構的改變對光的吸收能力減少的現象 Reason: 堿基環暴露在環境中的越多，對紫外的吸收力越強 Absorbance（吸收值）：Nucleotide > ssDNA/RNA > dsDNA 核酸的最大吸收峰260mm(堿基有芳香環)芳香族氨基酸最大吸收峰280mm A260/A280:

純的 dsDNA：1.8 純的 RNA：2.0 純的 Protein：0.5 2 Tm 值（熔解溫度）：熱變性時，使得DNA雙鏈解開一半所需要的溫度。

Tm=2x(A+T)+ 4x(G+C)

Tm值與DNA分子的長度，及GC的含量成正比

Annealing（退火）:熱變性的DNA經過緩慢冷卻后復性

快速冷卻： Stay as ssDNA

緩慢冷卻: 復性成dsDNA 3 脫氧核糖核酸與核糖核苷酸得到畫法 支持雙螺旋結構的兩個實驗：查戈夫規則

X射線晶體衍射 5 雙螺旋的內容：

雙鏈之間的關系：DNA分子由兩條鏈組成

雙鏈反向平行(5’?3’ 方向)

兩鏈的堿基通過氫鍵互補配對，A:T;G:C。

雙鏈序列反向互補

各基團排列方式：糖-磷酸骨架DNA分子排列在外;

堿基對平面相互平行，排列在DNA分子的內部。空間結構為：右手雙螺旋結構

每轉一圈~10個堿基對，每一圈長度33.2A

雙鏈螺旋中形成大溝，小溝。堿對DNA的影響：高pH值對DNA的影響比低pH值的要小。

高 pH 值(pH>11)會改變堿基構象，使DNA變性（雙鏈解旋，成單鏈）

RNA的影響：高pH值，2’羥基會攻擊磷酸二酯鍵，使其斷裂，形成2’，3’-環式磷酸二酯鍵，從而使RNA分子斷裂 共價閉合環狀DNA(convalently closed circular DNA, cccDNA）。即通過共價鍵結合形成的封閉環狀DNA分子。超螺旋DNA（Supercoil DNA）:松弛型雙鏈DNA進一步旋轉后，再形成閉環結構時，就會形成DNA超螺旋結構

L=T+W 判斷是否為超螺旋 正負超螺旋 拓撲異構酶：暫時斷裂DNA分子中一條或兩條單鏈上的磷酸二酯鍵，改變DNA分子的連接數及拓撲狀態。

功能：消除DNA復制和轉錄等過程產生的超螺旋。

細胞中，Ⅰ型酶與Ⅱ型酶的活性保持一種平衡狀態。Ⅱ型酶的“使DNA超螺旋化” 與Ⅰ型酶“使DNA松馳化” 相抗衡，從而使DNA保持適當的超螺旋密度。EB: 嵌入DNA配對堿基之間，使DNA分子在嵌入處局部解旋，增加ccDNA其它部位的正超螺旋 Type II RE

二型限制性內切酶:識別位點一般為４～8個堿基對的回文序列

如：EcoRI

5’-GAATTC-3’

3’-CTTAAG-5

Section D 1 染色體的折疊：串珠結構 ：核心組蛋白:H2A, H2B, H3 and H4.連接組蛋白 H1

核小體

30nm纖絲

高級環狀結構（染色質的最高結構）

緊密纏繞結構 著絲粒：兩側是大量的名叫衛星DNA的重復序列

端粒：上百個短的重復序列

作用：端粒DNA 形成特殊的環狀二級結構，保護染色體末端不被核酸外切酶降解。

抵消DNA復制時每一輪復制都導致兩末端形成的后隨鏈比母鏈要短一截的現象對染色體的影響 異染色質：高度濃縮，無轉錄活性

常染色質：結構松散，有轉錄活性

DNaseI 敏感區域：對區域內DNA的轉錄活躍

串珠結構

DNaseI 超敏感區域：轉錄活躍的基因的調控區域

DNA裸露 4 原核染色體結構：非特異性DNA結合蛋白：類組蛋白

位點特異性DNA結合蛋白：與特殊的DNA序列結合

有其他特殊的生理功能：RNA polymerases

對結構域的形成也很重要

復性動力曲線：

Low C0t: 高重復 衛星DNA Moderate C0t : 中重復 串聯基因簇

反轉座子 High C0t :單拷貝或低重復

大腸桿菌基因組 染色體結構對基因轉錄的影響

CpG 抑制→CpG位點中的胞嘧啶的C-5常發生甲基化(CpG甲基化），CpG 甲基化可能可以DNA轉錄被限制→哺乳動物基因組中，有些區域含有很多未甲基化的CpG 位點，被稱為CpG 孤島。

甲基化—轉錄抑制

去甲基化—恢復轉錄

組蛋白的乙酰化：核心組蛋白N-端的Lys被乙酰化，DNA與核心組蛋白體解聚。Gene 表達被激活

去乙?；阂种?gene表達

組蛋白的磷酸化:對組蛋白 H1 磷酸化，抑制基因表達 其他組蛋白中心法則

Section E 1 DNA復制：細胞中，一條雙鏈DNA分子通過堿基配對，形成兩條與其序列相同的DNA雙鏈分子的過程。2

確定DNA半保留復制

半不連續復制 3 復制的基本步驟 復制為雙向

大腸桿菌的復制：

起始AT含量高的區域

參與蛋白：DnaA（復制起始因子)：識別并結合于重復序列上，驅使富含AT的重復序列解鏈，需負超螺旋，及ATP

DnaB(DNA解旋酶):DNA雙鏈解旋，形成復制叉

SSB:(單鏈結合蛋白):保持解旋部分的單鏈狀態

DnaG(引發酶/引物酶):RNA引物合成，引發復制 延伸

參與蛋白：DNA Pol III全酶：負責新鏈的合成:前導鏈，岡崎片段

DNA pol

I：復制中除去引物，填補引物處空缺

終止： 真核生物的復制：

一個細胞周期內，一個DNA分子只能復制一次

Section F 1 復制忠實性的機制：

DNA復制的高精度：模板連和進入核苷酸在DNA聚合酶的作用位點正確配對

3’到5’外切核酸酶對錯誤堿基的校正

錯配修復 2 holiday模型 3

Section K 編碼鏈 模板鏈 2 大腸桿菌的轉錄

RNAP酶：核心酶：a 亞基：aNTD對核心酶的組裝很重要。

aCTD在識別啟動子、調節轉錄水平中起著非常重要的作用。

b 亞基：RNAP的催化中心。

與模板DNA、RNA產物、及底物核糖核苷酸緊密結合。

抗生素利福平結合在在b 亞基上，可以抑制RNAP的轉錄活性。

利福平只抑制轉錄的起始。

利迪鏈菌素只抑制延伸而不抑制轉錄起始

b’ 亞基：可能與RNAP的催化有關。

肝素與b’亞基結合后，能干擾RNAP與DNA的結合，抑制轉錄。

w 亞基：可能與RNAP的組裝及維持RNAP結構的穩定性有關

s factor(s因子)：s factor 在啟動子特異性識別過程中至關重要 移動慢的原因：可以保持與翻譯同步。

與有些基因轉錄調控相關。

有利于轉錄終止

RNAP沒有3’ →5’外切酶活性，不能進行轉錄校正。其錯配率達10-4。RNAP倒退暴露新合成的錯配堿基，可以有利于其他輔助核酸酶將錯配堿基切除，增加轉錄的忠實性。s70基礎啟動子的一般結構

-10 序列：它對轉錄起始時，RNAP打開DNA雙鏈的過程非常重要。-

10序列到TSS位點的距離對轉錄效率也有很大的影響-35 序列：增強RNAP s factor 的識別能力及與DNA的結合能力 4 影響啟動子效率的DNA序列：

核心啟動子的序列：與保守序列越像，效率越高。

TSS周圍序列：影響起始效率。

轉錄單位的前30個核苷酸的堿基序列：影響RNAP從啟動子處移動出去（啟動子區清空）的速率。

核心啟動子附近的調控元件。轉錄的起始：開放復合物 閉合復合物 無效起始

延伸：啟動子的清空，鏈的延伸轉錄泡，s因子的循環利用

終止：依賴性 不依賴性

反復重復序列

Section L 1.順式作用元件（cis-acting elements）：一般為DNA上較為保守的、有著特異性序列或結構的特定區域。它們只能影響與其在同一條染色體上的基因的活動。如：啟動子，轉錄激活因子結合位點等。

反式作用基因/調節基因（trans-acting genes，regulator genes）

可以影響與他們不在同一條染色體上的基因的表達水平的DNA元件。2 乳糖操縱子 色氨酸操縱子 正負調控都可以有誘導和阻遏兩種調控方式。

正控誘導：誘導因子活化激活因子，使其可以增加基因的表達。（Lac operon，CRP調控）正控阻遏：共阻遏物使激活因子失活，減少基因的表達。負控誘導：誘導因子使阻遏蛋白失活，增加基因的表達。（Lac operon，lac repressor）負控阻遏:共阻遏物活化阻遏蛋白，使其可以降低基因的表達。（Trp operon，trp repressor）

Section M 增強子 沉默子 TFIID：可與多種核心啟動子元件或特異性轉錄因子結合，啟動二類轉錄預起始復合物組裝的通用轉錄因子。

TBP(TATA-box binding protein):可識別并結合TATA-box TAFII（TBP-associated factor II）：TBP關聯蛋白，TFIID中與TBP形成復合體的所有蛋白，～13個。

TFII H的結構與功能：蛋白激酶(4 個亞基)：催化蛋白磷酸化。將NTP（一般為ATP）的g-磷酸基團轉移到蛋白上。

磷酸化 RNA pol II 中的CTD 結構域。TFIIE 刺激TFIIH介導的磷酸化反應。DNA 解旋酶/ATPase(5 亞基)：

水解ATP，利用其能量打開DNA的雙鏈 TBP(TATA-binding protein): 確保 RNA Pol I能正確定位到轉錄起始區域上。

SP1 為組成性表達的轉錄因子，在所有的細胞中都存在，與基因本底表達水平有關 SL1，選擇因子,RNA Pol I起始轉錄所必需的因子 CTD:羧基末端結構域，的磷酸化狀態與轉錄進程有關

轉錄起始時期，CTD結構域一般處于去磷酸化形式，與結合啟動子有關。

轉錄延伸時期，CTD結構域常處于磷酸化形式，與mRNA的加工有關。

Section N 1 DNA-binding domains（DBD）:DNA結合結構域

螺旋-轉角-螺旋結構（域）

鋅指結構（域）

堿性結構（域）

Dimerization domains：二聚體化結構域

亮氨酸拉鏈 螺旋 散環 螺旋 DBD+DM 激活結構域 酸性激活結構域 富含谷氨酰胺結構域 富含脯氨酸的結構域 LBD

Section O 真核生物中mRNA 加工的一般過程 5’加帽: CTD作用：轉錄起始時，參與加帽反應的三種酶結合在RNA Pol II的CTD結構域上。轉錄產物剛開始合成時，即對其5’端進行加帽反應。

作用：防止降解：核糖核酸酶一般不能降解帽結構中的三磷酸鍵

幫助轉運mRNA到細胞質中

增強翻譯水平：mRNA需要帽結合蛋白的幫助才能更好的與核糖體結合 幫助去除pre-mRNA中的第一個內含子。3’加Poly(A)尾：

作用：防止被核酸酶降解：增加mRNA的穩定性

有助于mRNA從細胞核到細胞質的轉運

參與pre-mRNA的最后一個內含子的剪接。

增強mRNA的翻譯水平，增加基因的表達 剪接 甲基化 2 核酶有：有催化功能的RNA即為核酶

U2 U6 RNAP 3 RNA的多樣性：可變加工，反式剪接，RNA編輯 原核生物核糖體

真核生物核糖體 原核rRNA 加工的大致過程：形成多個莖環結構，與蛋白結合形成RNP，核苷酸修飾，逐級切割

真核rRNA 加工的大致過程：甲基化，切割。內含子剪接 原核tRNA 加工的大致過程:將多順反子前體切割，分離出單順反子前體

單順反子前體進一步被切割，形成與成熟tRNA長度一致分子（RNases D, E, F，P

.堿基修飾，形成成熟tRNA 真核tRNA 加工的大致過程：5’-末端成熟，3’-末端成熟（添加5’-CCA-3’）去除內含子 7 miRNA and siRNA的調控機制：mRNA降解，抑制翻譯，抑制轉錄

Section P 1 遺傳密碼的特性:

蛋白的編碼信息由三聯體密碼子組成。

密碼子為連續的，之間無間隔、無重疊。

除三個終止密碼子之外，每個密碼子對應一種氨基酸

有密碼簡并現象。即：多個密碼子對應同一種氨基酸。

標準遺傳密碼子在各類生物中基本通用，不過少數生物體或細胞器中，有一些密碼子對應的氨基酸與標準的不同。

生物對同義密碼子的使用經常有偏好性。不同生物的密碼子偏好性不同。

基因一般不重疊。一段核酸分子一般只有一個開放閱讀框（open reading frame, ORF/可讀框），被翻譯成一個蛋白。

有些物種也有重疊基因的現象。開放閱讀框:ORF 從起始密碼子ATG 到終止密碼子

TGA,TAA or TAG 之間的連續的蛋白編碼序列

CDS 編碼序列 當ORF可以預測一個蛋白時 3 tRNA 二級結構:三葉草結構 4 tRNA的特異性加載：（翻譯的高保真性）

氨酰-tRNA合成酶對相應tRNA分子有很強的專一性：第二密碼子：

氨酰-tRNA合成酶接受相應氨基酸時有很強的忠實性：校正：雙篩選機制—酶的活性中心，酶中的編輯位點 氨酰-tRNA（AA-tRNA）： 3’-end加載了一個氨基酸的tRNA分子。是在蛋白質合成中，將密碼子轉換氨基酸的適配器。

Section Q 1 密碼子與反密碼子的反向互補配對 一個tRNA可識別的密碼子數由反密碼子的第一位堿基決定

擺動學說：第三位密碼子與第一位反密碼子的配對可以擺動

反密碼子第一位為A或C時，配對無搖擺現象。3 核糖體的E，P，A位點 A位：接受AA-tRNA部位.除了起始氨酰-tRNA，其他所有AA-tRNA都只能進A位點。P位：肽?；?tRNA結合部位。起始氨酰-tRNA也進入此位點。E位：空載tRNA離開核糖體的位點。4 核糖體各亞基的功能

核糖體小亞基功能：結合mRNA

促進密碼子與反密碼子的正確結合 mRNA移位

大亞基的功能A位、P位、肽酰轉移酶（轉肽酶）中心等在大亞基上。

負責攜帶AA-tRNA、肽鍵/肽鏈的形成 5 翻譯的基本內容 核糖體與mRNA結合

氨酰tRNA逐個進入核糖體

氨酰tRNA通過反密碼子與mRNA互補配對 氨酰tRNA分子的氨基酸之間形成肽鍵。空載tRNA的釋放 肽鏈的釋放

第四篇：現代分子生物學總結

醫學細胞與分子生物學習題庫

一、名詞解釋

1．基因組

2．基因文庫

3．衛星DNA

4．SD序列

5．分子克隆

6．載體

7．反式作用因子

8．粘性末端

9．限制性內切酶

10．cDNA文庫

11．轉化率

12．質?？截悢?/p>

13．體外重組

14．感受態細胞

15．探針

16．核酸雜交

17．陽性克隆

18．固相雜交

19．解鏈溫度

20．C值悖理

21．基因家簇

22．反義RNA

23．RNA干擾

24．魔斑

25．順式作用元件

二．填空題

1.真核生物基因組DNA序列可分為（）、（）和（）。

2.真核生物基因組高度重復序列包括（）、（）、（）和（）四種。

5.原核生物轉錄水平調控的方式有（）和（）兩種方式；前者又可分為（）和（）；后者可分為（）和（）。

6.真核生物基因表達調控包括（）、（）、（）、（）和（）五個層次。

7.真核生物基因組DNA水平的調控包括（）、（）、（）、（）和（）五種方式。

8.反式作用因子可劃分為（）、（）和（）三類。

12.影響雜交的因素有（）、（）、（）、（）和（）。

15.逆轉錄酶是多功能酶，具有（）、（）、（）三種功能，但無（）作用。

16.DN的損傷突變類型有（）、（）、（）、（）和（）。

17.引起DNA損傷突變的因素是（）、（）、（）、（）和（）。

18.DNA的損傷修復方式有（）、（）、（）和（）。

20.病毒基因組可由（）或（）組成；細菌基因組由一條（）組成；真核生物基因組由（）和（）形成（）。

21.原核生物基因表達調控的方式有（）和（）；其中（）是主要的方式。

22.、操縱子由（）、（）和（）組成；受（）產物的調控。

23．順式作用元件按功能可劃分為（）、（）、（）和（）。

24．分子克隆技術的操作包括（）、（）、（）和（）等四個基本過程。

25．限制性內切酶分為（）、（）、（）三種，其中只

有（）在基因工程操作中被應用。

26.限制性內切酶識別（）序列； DNA分子在該酶切割下可產生（）、（）或（）末端。

27．分子克隆中常用的工具酶有（）、（）、（）和（）。

28．分子克隆中常用的載體有（）、（）、（）和（）。

29．目的基因制備的常用方法有（）、（）、（）。

30．體外重組常用方法有（）、（）、（）和（）。

31．重組體導入原核生物細胞中的常用方法有（）和（）；重組體導入真核生物細胞中的常用方法有（）、（）和（）。

32．重組體的篩選方法有（）、（）、（）、（）。

33．cDNA文庫的構建步驟是（）、（）（）、（）。

34．常用的核酸探針包括（）、（）和（）。

35．放射性同位素標記常用的標記方法有（）、（）、（）。

36．分子克隆中常用的非放射性同位素標記物有（）、（）、（）等；常用的標記方法有（）、（）。

37．核酸雜交技術可分為（）和（）兩種類型；后者又可分為（）和（）。

39．PCR技術的基本過程是（）、（）、（）。

40．影響PCR的因素有（）、（）、（）、（）、（）。

41．PCR反應的特點是（）、（）、（）、（）。

45．限制性核酸內切酶的作用特點是（）、（）、（）、（）。

50．DNA切除修復需要的酶有（）、（）和（）。

三、判斷題

1、生物越高度，基因組越龐大，基因數目就越多。（）

2、真核生物結構基因都是單拷貝，rRNA基因為多拷貝。（）

3、同基因是一類結構上完全相同，表達產物功能也相同的一組基因。（）

4、真核細胞基因轉錄產物為單順反子。（）

5、原核細胞基因轉錄產物為多順反子。（）

6、真核生物基因組中不編碼的區域多于編碼的區域。（）

7、衛星DNA實際上是出現在非編碼區的串聯重復序列。

8、串聯重復序列是形成衛星DNA 的基礎。

9、所有真核生物基因組中都有α衛星DNA。

10、高度重復序列在真核生物細胞基因組中重復出現可達106次以上。

11、中度重復序列的長度和拷貝數很不均一。

12、短分散片段重復順序的平均長度約為3500-5000bp。

13、長分散片段重復順序的平均長度約為300bp。

14、中度重復序列大多不編碼蛋白質。

15、高度重復序列中有一些可編碼蛋白質。

16、中度重復順序一般具有種特異性。

17、每種組蛋白的基因在同一種生物中拷貝數是相同的。

18、不同生物中組蛋白基因在基因組中的排列不一樣。

19、端粒是所有生物染色體末端的一種特殊結構。

20、以RNA為模版合成出的DNA鏈叫負股鏈。

21、顛換是指原為嘧啶突變后變為嘌呤。

22、置換是指原為嘧啶突變后變為嘌呤。

23、重組修復也叫復制后的修復。

24、原核細胞和真核細胞中許多mRNA都是多順反子轉錄產物。

25、限制性內切酶切割的DNA片段都具有粘性末端。

26、原核生物中mRNA一般不需要轉錄后加工。

27、增強子并沒有啟動子活性，卻具有增強啟動子活性，促進轉錄起始的效能。

28、在雙向復制中一條鏈按5′→3′的方向合成，另一條鏈按3′→5′的方向合成。

29、原核細胞和真核細胞復制在多個位點同時起始進行。

30、真核細胞的基因是不連續的，轉錄出來的所有RNA都必須經過加工。（31、生物DNA分子的大小等于基因的總和。（）

32、所有多肽鏈經核糖體翻譯出來即有正常生理功能。

33、核糖體是蛋白質和rRNA構成的功能復合體。

34、機體的各種細胞中含有相同的遺傳信息，所以有相同的表達，35、在負控誘導系統中，阻遏蛋白不與效應物結合時，結構基因不轉錄。

36、在負控阻遏系統中，阻遏蛋白不與效應物結合時，結構基因不轉錄。

37、CAP結合在啟動子上時，能促進RNA聚合酶與啟動子結合，促進轉錄。）

38、CAP首先與cAMP形成復合物才能與啟動子結合。

39、RBS是指mRNA起始密碼AUG前的一段非翻譯區。

40、反義RNA由反義基因轉錄而來。

41、轉錄后基因沉默被稱為RNAi。

42、細胞中蛋白質合成旺盛時，mRNA鏈上核糖體數量就多，poly（A）也較長。

43、限制性核酸內切酶是原核生物所特有的酶。

44、只有Ⅱ型限制性核酸內切酶在分子生物學中被應用。

45、COS區是指λ噬菌體粘性末端構成的區域。

53、基因擴增是指某些基因的拷貝數大量增加的現象。

54、基因重排是DNA水平調控的重要方式之一

55、所有核酸的合成都是以堿基配對為基礎的。

56、甲基化程度與基因的表達一般呈反比關系。

57、基因的甲基化程度愈高，其表達則降低。

58、去除組蛋白基因轉錄活性降低。

59、常染色質:結構松散，基因不表達。

60、異染色質:結構緊密，基因表達。

61、有基因表達活性的染色質DNA對DNaseⅠ更敏感。

62、真核生物基因調控主要也是在轉錄水平上進行的。

四、選擇題：

1.原核生物基因組中的復制起始點有（）

A．1個B．2個C．多個D．1000個以上

2．真核生物基因組中的復制起始點有（）

A．1個B．2個C．多個D．1000個以上

3.真核生物基因之間的間隔區與基因組大?。ǎ?/p>

A．有關B．無關C．成正比E．成反比

４.衛星DNA的長度一般為()

A．5-10bpB．300bpC．100bpD．500-1000bp

５.在大腸桿菌細胞中DNA復制的保真性主要是下列哪個酶的作用（A．DNA聚合酶ⅠB．DNA聚合酶Ⅱ

C．DNA聚合酶ⅢD．DNA連接酶

６.既有內切酶活力，又有連接酶活力的是

A．拓撲異構酶B．DNA聚合酶Ⅱ

C．解螺旋酶D．DNA連接酶）

7.轉錄過程中遺傳信息的轉遞方向是()

A．DNA→RNAB．RNA→DNAC．DNA→DNAD．RNA→RNA

8.hnRNA是()

A．存在于細胞核內的tRNA前體B.存在于細胞核內的mRNA前體

C.存在于細胞核內的rRNA前體D.存在于細胞核內的snRNA前體

9.以RNA為模板合成DNA的酶是（）

A．DNA聚合酶ⅢB．DNA聚合酶ⅠC．RNA聚合酶D．反轉錄酶

10.蛋白質的生物合成中肽鏈延伸方向是（）

A．5→3B．從N端到C端C．3→5D．從C端到N端，，11.蛋白質翻譯后的加工主要包括（）。

A．氨基酸側鏈修飾B．水解修飾

C．二硫鍵的形成D． 上述各種修飾都包括

12.操縱子調控系統屬于哪一種水平的調控（）

A．復制水平的調節B。轉錄水平的調節

C．翻譯水平的調節D。轉錄后加工的調控

13.與乳糖操縱子操縱基因結合的物質是（）

A．RNA聚合酶B．DNA聚合酶C．阻遏蛋白D．誘導物

14、參與線粒體DNA復制的酶是（）

A．polαB．polδC．polβD．polγ

15、參與領頭鏈DNA復制的酶是（）

A．polαB．polδC．polβD．polγ

16、端粒酶是一種()

A．逆轉錄酶B．RNA聚合酶C．DNA聚合酶D．DNA酶

17.含稀有堿基最多的RNA是（）

A．mRNAB、rRNAC．5S-rRNAD．tRNA

18.大腸桿菌DNA連接酶需要下列哪一種輔助因子？（）

A．FAD作為電子受體B．NADP+作為磷酸供體

C．NAD+形成活性腺苷酰酶D．NAD+作為電子受體

19.真核生物RNA聚合酶I催化轉錄的產物是（）

A．mRNAB．45S-rRNAC．5S-rRNAD．tRNA

20.魔斑是指（）

A．ppGppB．cAMPC．cGMPD．7mGppp

21.CAP復合體與操縱子結合的部位是（）

A．啟動子B．操縱基因C．結構基因D．調節基因

22.基因的甲基化修飾一般發生在（）

A．CpGB．ApGC．GpTD．TpG

23.有基因表達活性的染色質DNA對下列那個酶敏感性增加？（）

A．DNaseⅠB．DNA polⅠC．DNA polⅡD.Rnase H

24.真核生物的RNA聚合酶識別的是（）

A．啟動子B．增強子C．TF-DNA復合體D．RF

25.在分子生物學中被應用的限制性核酸內切酶是（）

A．Ⅰ型B．Ⅱ型C．Ⅲ型D．以上都沒用

26.限制性核酸內切酶錯位切割產生（）

A．粘性末端B．平頭末端C．3’-磷酸D．5’-羥基

27.大腸桿菌DNA連接酶只能連接（）

A．粘性末端B．平頭末端C．3’-磷酸D．5’-羥基

28.pBR322是（）

A．復制型載體B．表達型載體C．穿梭載體D．噬菌體載體

29、pUC載體是（）

A．復制型載體B．表達型載體C．穿梭載體D．噬菌體載體

30.M13噬菌體是（）

A．單鏈DNA噬菌體B．雙鏈DNA噬菌體

C．RNA噬菌體D．都不是

31、B．表達型載體C．穿梭載體D．噬菌體載體

五．問答題

1．分子克隆中常用的工具酶有哪些？各有何用途？

2．何謂載體？分子克隆中常用的載體有哪些？理想的載體應具備哪些條件？

3．何謂PCR？試述PCR基本技術原理和影響因素。

4．常用的核酸探針有哪些類型？各有何優缺點？

5．將目的DNA與載體DNA連接起來的方法有哪些？并用文或圖表示各種連接過程。

6．簡述原核生物與真核生物基因組結構特點。

9．體外重組常用的連接方法有哪些？各有何優缺點？

13．何謂核酸雜交？常用的雜交方法有哪些？

28.何謂宿主細胞？分子克隆中常用的宿主細胞有哪些？宿主細胞應具備哪些條件？

31.簡述重組體導入哺乳動物細胞的方法

35、DNA損傷修復有哪些類型？試述各類型的修復方式。

第五篇：分子生物學實習總結

分子生物學實習總結

三天的分子生物學實習，我能認真聽老師的講解和很好的按照老師的安排完成實驗。期間，接觸和學習到了很多有關分子生物學實驗的方法、儀器的使用、技術，而且對分子生物學實驗有一個大致的了解，學習到很多以前沒有接觸過的知識。

這幾天來做的不足的地方有：

1.預習不夠充分。只是瀏覽了實驗報告上的原理、操作等內容，并沒有深入了解每一個步驟的操作會對實驗有什么的作用和影響。實驗失敗了，不能自主找到原因。

2.實驗操作過程不夠細心。實驗要求十分細心，嚴謹和專注。實驗中很多細小的地方還是沒有很好的注意到。

3.遇到不懂的沒有及時發問。實驗就是一個讓我們實操的過程，一邊操作一邊鞏固書本上的知識。過程中，遇到不明白的地方應該及時問別人活著自己翻閱資料，力求把實驗弄透徹。

但是我還是有很多收獲的：

1.對分子生物學實驗有了了解。例如實驗的基本的流程和操作，常用的方法等基礎知識已經有了一定了解，對以后的實驗會有一定的幫助。

2.最基本的移液槍、離心機、渦旋器等的使用還有實驗中的PCR儀、電泳等有一定的認。3.學會了嚴謹和細心。實驗所用的材料都是比較昂貴的，而且實驗只要一步錯了，就得重做。所以需要非常嚴謹。不僅僅是分子生物學實驗，其他實驗也要求，所以培養這個有點對以后的實驗非常有好處。

4.學會了堅持。很多次因為實驗做的時間很長，大家都會很累，但是，還是要堅持，一點點累都受不了是不能把實驗做好的。開始慢慢了解到做科研的人員的辛酸，長時間整天呆在實驗室做實驗，這需要很大的毅力。

5.把握實驗機會，讓自己學得更多。實驗過程中，只要有實操的機會，我都會去操作。因為說和做是不一樣的。而且在操作中能加深鞏固知識和學得更加深入。

三天的分子生物學實習雖然很累，因為要天天去院樓，而卻實驗時間都比較長。但是還是很有意義的，因為學習到很到東西，收獲了很多。

老師也為我們準備了很多的材料和準備，實驗才做得那么快和順利，其實，實驗室簡化了很多了，而且我們所做的實驗都是已經設計好的，按照操作做就行了。如果時間和資金允許，應該設立一些自主完成的實驗，這樣可以培養我們更加多的能力，開闊知識面和拓寬思維。