第一篇：淺談對實驗動物學地位和作用的認識

淺談對實驗動物學地位和作用的認識

【摘要】實驗動物學是一門專門研究實驗動物和動物實驗的新興邊緣學科，其具有較強的綜合性和應用性。實驗動物學是生命科學研究的基礎和重要支撐條件。為提高對實驗動物學的認識，在結合教學經驗的基礎上對實驗動物學的地位和作用進行了簡要的探討，并對其發展趨勢進行展望。

【關鍵詞】實驗動物學地位作用發展趨勢

實驗動物學雖然是一門于2 0世紀 5 O年代新崛起的獨立的綜合性邊緣學科，但 由于對科學研究 的特殊作用，受到 了國家科技部 門及相關管 理部 門的高度重視，因此其發展非常迅速。在經過幾十年的整合與飛速發展，現 已形成了自己獨特的科學體系，且在全國各大高校的相關專業針對不同層次的學生均 已開設實驗動物學課程。由于實驗動物學是一門新興的學科，故對其地位和作用的認識 尚不透徹、完整。在現代科學的帶動下，實驗動物學已發展成為一門綜合性的新興學科，其發展和應用程度被作為衡量一個國家、一個地區、一個部門或行業。

1、實驗動物學的地位

實驗動物學是一門獨立的綜合性邊緣學科。實驗動物學衍生 自畜牧獸 醫科學，隨著醫學、生物學 的發展而興起 的一門融合生物學、動物學、遺傳學、微生物學、寄生蟲學、醫學、畜牧獸醫學等學科知識為一體，具有 自身 的基本概念基本 內容及 自身 的理論體系的邊緣基礎學科。實驗動物學主要研究實驗動物的標準化和動物實驗的規范化兩大方面的內容。實驗動物標準化包括實驗動物生物學、實驗動物生態學、實驗動物遺傳學、實驗動物營養學、實驗動物繁殖學、實驗動物微生物和寄生蟲學、實驗動物醫學等。而動物實驗 的標準化包括動物實驗技術、動物實驗倫理學、動物實驗替代方法學等。實驗動物學在社會生產和科學實驗的許多領域 中具有廣泛的應用價值，其發展和研究成果對于相關學科 的發展、研究 和應用具有十分重要 的意義，故實驗動物學也是一門應用性的學科。

2、實驗動物學的作用

人類社會 已進入以生命科學為主宰的 2 1 世紀，作為生 命科學研究的基礎和支撐條件 的實驗動物學是現代生命科 學前沿領域研究 中最為活躍的學科 門類之一 ：同時由于其研究成果應用較廣，如生命科學領域、制藥工業和化學工業 領域、畜牧獸醫科 學方面、國防和軍事科學方面等等，故實驗動物學已作為上至衡量一個 國家下至衡量一個科學研究。所和高等院校科研發展水平的主要標志之一l 6。由于實驗動物學是一門應用性學科，故其作用主要體現在實驗動物和動物實驗方法所起到的作用方面。

2.1實驗動物是生命科學研究的重要基礎

在生命科學研究領域 ． 目前公認 “ A E I R” 是生命科學研究的四大基本條件，“ A” 即 A n i ma l(實驗動物)，“ E ” 即 E q u i p me n t(設備)，“ I ”即 I n f o r m a t i o n(信息)，“ R ” 即 R e a g e n t(化學試劑)。其中實驗動物是最主要的． 居于首位。由于科學技術的發展，要獲得高、精、尖的儀器設備和高

純度 的試劑、必要的情報信息，已是非常容易辦到的事。而培育并應用標準化的實驗動物卻不易。由于動物質量不標準，會造成動物實驗的敏感性、準確性、重復性差，致使實驗動物嚴重浪費，導致科研的科學性及可信度降低，在國際學術界得不到公認 ； 還會造成生物制劑和藥品的安全性、有效性評價試驗得不到國際承認，影響 出 口。

2.2實驗動物是生命科學的支撐條件

在 生命科學領域內． 由于道德觀念、道德規范、道德評價和倫理學的限制，我們不能用人去做實驗，必須借助實驗動物去探索生命的起源，揭開遺傳的奧秘，攻克癌癥的堡壘，研究各種疾病與衰老的機理，監測公害、污染，保護人類生存的環境，生產更多更好的農畜產品，為人類生活造福。因此實驗動物在生命科學中被譽為“ 活的試劑”、“ 最精密的儀器”。從一定意義上來說，實驗動物科學的發展水平，代表著一個國家或地區生命科學的發展水平。實驗動物作為生命科學的支撐條件主要體現在 ： 為生物醫學基礎研究提供標準的實驗材料 ； 作為人類疾病研究中人的替身或模型 ； 作為藥品、食品等安全性評價和效果試驗的活試劑 ；作為生物制劑及制品研制的原材料： 為生物學、醫學、畜牧獸醫學等提供教學材料等。

2.3動 物 實驗 是 生 命 科 學研 究 及 其 他 一些 自然 科 學 研 究的重要手段。動物實驗是實驗動物學兩大研究內容之一。其主要研究以各學科的研究 目的為 目標，研究實驗動物的選擇、試驗手段、試驗方法、動物模型，以及在試驗中采用各種手段和方法在實驗動物身上進行實驗，研究實驗過程中實驗動物的反應、表現及其發生機制、發展規律，以探討生命科學 的疑難問題。實驗結果的好壞不僅與實驗動物有關，也 L J j 動物實驗方法有關，如實驗動物的選擇、實驗季節、溫度、濕度、麻醉深度、實驗藥物、手術技巧等技術環節處理不當，將直接影響動物實驗結果。實驗動物學研究動物實驗基本方法與技術，建立 了科學 的、標 準化的動物實驗方法，將避免或減少動物實驗過程 中由于某些技術環節給實驗結果帶 來的不 良影 響。

3、實驗 動物 學和 其他學 科的 關 系

實驗動物學衍生 自畜牧獸 醫科學，隨著醫學、生物學的發展而興起的一門融合生物學、動物學、遺傳學、微生物學、寄生蟲學、醫學、畜牧獸醫學等學科知識為一體，具有 自身的基本概念、基本內容及 自身的理論體系的邊緣基礎學科由于實驗動物學引入或借鑒了這些學科 的研究成果和研究 方法，岡此這些學科 的迅猛發展，不斷豐富和更新實驗動物學 的內容。同時實 驗 動物 學 的發展 和提 高 又把 這些 學科 的研究引入新的境界，提高到一個更高的水平，從而促進這些學科的發展。如有些實驗動物是來自家禽家畜經過人工培育而成 ．同時這些培育而成的實驗動物為家禽家畜業的發展提供 了新的品種或品系，因此促進 了家禽家畜業的發展。雖然實驗動物學和這些學科相互有關聯，但各 A研究 的對象與 目的不同，研究方法也不盡相同，如實驗動物學研究實驗動物的 目的是服務于動物實驗 ：研究動物實驗的目的是服從于實驗動物。由此可見，實驗動物學和其他學科是相互促進，共同發展的相輔相成的關系。世紀將是高科技激烈競爭的年代，現代生物高科技已成為時代競爭的熱點和制高點，因此，實驗動物科學倍受重視。發達國家每年都投入大量資金，以促進實驗動物學的發展。實驗動物在科學研究中占有重要地位，如美國生物科學課題投資的 40% 涉及實驗動物，60% 的生物學課題需要實驗動物。美國腫瘤研究中心，每年的研究經費為 2.2 億美元，而需要利用實驗動物進行研究的課題占 1.4 億美元。有人統計，我國生物醫學科研課題的 60% 以上需要實驗動物。由此可見實驗動物在科學研究中所占的重要位置。

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第二篇：對職業教育的地位與作用再認識

對職業教育的地位與作用再認識

我國經過近10 年職業教育的快速發展, 已經從規模發展向內涵發展、文化發展前進。理論的充實, 觀念的共識, 比任何時候都要更感迫切。不僅教育界要對職業教育的地位與作用形成共識, 而且全社會都要對職業教育的地位與作用形成共識。一些重大的理論問題, 比如黨的教育方針內涵的再思考, 職業教育與其他教育的關系問題, 職業教育自身的改革與發展問題, 都需要從理論的高度加以闡釋。職業教育具有全局性的戰略地位的共識, 將影響我國未來十幾年經濟與社會的發展。教育作為國家發展的基石, 關乎民族的興旺, 人民的福祉和國家的前途命運, 而職業教育的擺位對不對, 將影響中華民族振興的步伐。

一、經濟的發展要以教育為基礎, 大力發展職業教育是綜合國力彰顯的必然選擇溫家寶總理2009 年1 月4 日在國家科教領導小組會議上的講話中指出:..教育是國家發展的基石。當今世界, 知識成為提高綜合國力和國際競爭力的決定性因素, 人力資源成為推動經濟社會發展的戰略性資源, 人才培養與儲備成為各國在競爭與合作中占據制高點的重要手段。我國是人口大國,教育振興直接關系國民素質的提高和國家振興。只有一流的教育才有一流的國家實力, 才能建設一流的國家。!職業教育作為直接培養一線的實用人才, 直接為社會創造財富的群體的教育, 在國民經濟發展中具有重要的地位。解決國民經濟發展面臨的困難, 應對國際金融危機蔓延與加劇的局面, 緩解人口、資源、環境壓力越來越大的矛盾,..保持經濟平穩較快發展, 推動產業結構升級, 轉變經濟發展方式, 建設資源節約型和環境友好型社會, 必須緊緊依靠科技進步和提高勞動者素質 , 大力發展職業教育是國家發展戰略的重要組成部分。

這是因為, 我們的基本國情是東強西弱, 貧富差距大, 城鄉、地區發展不平衡, 解決這些現狀實現均衡發展最有效的手段之一就是發展職業教育。..職業教育的根本目的是讓人學會技能和本領, 從而能夠就業, 能夠生存, 能夠為社會服務,.就這個優勢來講, 其他教育還無法與之爭鋒。

此外, 經濟全球化、信息化和知識經濟的迅速發展, 使科學技術產品的質量和服務水平的競爭越來越激烈, 這個競爭的實質是人才與教育的競爭, 特別是技能型人才和職業教育與培訓的競爭。培養數以億計的熱愛勞動的技藝技能型人才, 職業教育是承擔此重任的主力軍。看一個國家的綜合實力,固然要看國民生產總值, 但最主要的還是要看教育的質量, 人才的質量, 特別是勞動者# # # 直接為社會創造財富的人群的質量, 這是最具決定性作用的東西。同樣是瑞士手表的零件, 我們工人裝配出來的產品價格比瑞士工人裝配出來的產品價格低好幾倍。原因就是我們的裝配技能比不上人家。就全球范圍看來, 凡是職業教育搞得好的國家和地區, 他的產品質量就有競爭力, 同樣, 全球500 強的企業, 他的職業教育與培訓也是好的、有特色的。因此, 哪個國家, 哪個地區, 哪個企業把職業教育與培訓放在了全局戰略地位, 必然在競爭中處于高點優勢。

二、城鄉二元化結構的轉換要以職業教育為載體, 農村勞動力轉移需要職業教育承載歷史的重任我國13 億人口9 億在農村, 農耕經濟不適應工業化發展的需求, 調整農村經濟結構, 需要農民的職業分化, 至少有2 億人口要成為..農民工 , 從事工業服務業等勞動。農村的智力勞動者、個體工商戶、鄉鎮企業管理者、私營企業主, 在農村農業結構戰略性調整中, 將影響未來發展的格局, 如何兼顧他們的利益是社會主義新農村建設不可忽視的一個課題。而廣大農業勞動者又是弱勢群體, 他們的個人純收入最低, 如何使他們..富 起來, 也是社會主義新農村建設不可忽視的又一個課題。社會主義新農村建設至少包括20 多個評價指標, 如二、三產業產值占GDP 的比重;農民產均集體固定資產價值增長率, 科技投入占GDP 的百分比;科技進步對經濟增長貢獻率;每千人擁有科技人員數;農民人均純收入;農民人均生活消費支出;農民生活消費恩格爾系數;農村社會養老覆蓋率;農村合作醫療覆蓋率;道路硬化率;林地覆蓋率;三廢污染面積比重;小城鎮人口居住比例;統一規劃和功能分區等, 其中適齡兒童入學率;農民人均受教育年限;成人積學率;農村文化生活(平均每村固定的文化活動場地數、固定文化娛樂活動經費、公共文化娛樂設施配備情況), 則是最體現農村從..經濟為中心 轉向..以人為本 的指標性數據。而要盡快實現新農村建設的指標, 只有大力發揮職業教育的主力軍作用, 才能縮短新農村建設的進程, 加快實現農村現代化。因為職業教育與培訓能提供新農村建設的實用型人才, 提供新農村建設的知識與技術, 提供文化與智力支持。

此外, 農村勞動力有序轉移是我國工業化進程的必然趨勢。其動因一是經濟因素, 二是資源因素,三是農村經濟發展方向, 資源組合、生產條件綜合因素的影響。資料表明1978~ 2007 年, 我國勞動就業量增長91.7% , 其中城鎮增加了1.9836 億人。但是在我國, 由于歷史形成的原因, 有的地區有資源無勞動力, 有的地區有剩余勞動力, 無用工的去向, 因此, 使農村勞動力有序轉移是我國人力資源管理的一項大政策。而要解決農村勞動力的有序轉移, 必須使這些被轉移的勞動力有技能, 有異地生存的條件, 所以必須通過職業教育與培訓才能保證他們轉移得出去, 留得住, 并能得到較好的生存與發展。

還有一個重要的問題在于: 實現農業現代化需要解決四個關鍵性問題, 一是要素投入集約化問題;二是資源配置市場化問題;三是生產手段科技化問題;四是產業經營一體化問題, 歸根到底是農村的可持續發展問題, 這些問題的解決, 同樣需要大力發展職業教育。因為科技化, 集約化, 市場化, 社會化, 最終需要人才有職業素質, 需要農村有一大批懂得現代化農業的人, 這些人才靠引進是不行的,只能是..土里生, 土里長 , 靠農村有志青年成為現代化農業的主力軍。職業教育的責任就是為農村培養數以億計的..觀念正確, 有文化、講文明、懂技術、會經營 的農村智力勞動者和專業人才, 所以, 承載社會主義新農村建設的歷史重任, 職業教育應該..一馬當先。

三、教育結構的變化突顯了職業教育的地位, 職業技術是構成生產力發展的主要因素科學技術是第一生產力。特別是實用技術對推動社會的進程與發展, 起著至關重要的作用。而職業技術教育是以培養人才獲得實用技術為特征的, 因此, 大力發展職業教育的目的, 就是要推動生產力又好又快地發展。我國的教育要跟上時代的發展, 第一要堅持面向未來、面向世界、面向現代化,辦出具有中國特色、中國風格、中國氣派的現代化;第二要服務于經濟建設, 服務于實現工業化和城鎮化;第三要把教育放在優先發展的地位, 堅持教育興國、教育立國、教育強國;第四要辦人民滿意的教育, 實現教育公平;第五要立足于國情, 要充分考慮我國人口眾多, 現階段農村人口大規模遷徙和流動的特征。為此我國的教育結構布局必須處理好義務教育、農村教育、職業教育與高等教育的關系。讓每個受教育的人都能在相應的教育形態下找到自己受教育的位置。而..職業教育是面向人人的教育,是面向整個社會的教育 %, 所以..大力發展職業教育, 既是經濟發展的需要, 也是促進社會進步的需要 &, 這也是為什么要突顯職業教育地位的原因。

1.大力發展職業教育, 首先是大力發展技術工人教育。因為實現工業化首要的是提升裝備制造業勞動者的素質, 提高他們的勞動生產率, 原因在于他們對生產力的提高是基礎性的, 是直接的。而我國產業工人大軍整體素質不高是不可否認的事實, 原因在于經濟發展, 產業結構調整, 產品結構變化, 新技術和新工藝的應用向大潮一樣涌來以后, 我們的職業技術教育與培訓跟不上, 所以很多地區、很多企業都出現了..技工荒。這就要求我們的國家必須大力發展職業技術教育, 否則它將成為經濟發展的..瓶頸 , 制約我國生產力的進一步提高。

2.大力發展職業教育, 最關鍵的是解決專業技術人員結構不合理的狀況。我國的高級技術工人嚴重缺乏, 大力發展高職教育和技術本科教育, 仍是未來10~ 20 年的主要方向。科學技術越發展, 越需要智能型的產業大軍, 也越來越需要一大批適應經濟快速發展的高級操作工人和高級技術人員。

為此, 如何實現中職、高職與技術本科的銜接是教育改革不可回避的問題, 不從教育體制上理順關系,將影響經濟的可持續發展。

3.大力發展職業教育要符合科學發展觀。一要解決好職業技術教育結構與人才結構相適應的矛盾;二要解決好職業技術教育與普通教育、培訓溝通與協調的矛盾;三要解決好人文素質教育與專業技術、技能相結合,..做人與做事 ,..學做統一 的矛盾;四要解決統籌規劃與教育資源合理利用的矛盾。國家這個層面的教育還是要按胡錦濤總書記所要求的辦:..大力發展職業教育, 提高高等教育質量, 普及九年義務教育 , 發展、提高與普及, 各有各的重點。當然優先的的位置仍是大力發展職業教育, 這個擺位不能互換。

4.大力發展職業教育要吸納、弘揚先進的教育思想。什么是先進的教育思想? 就是符合中國特色社會主義理論和黨的教育方針的思想, 就是符合世界先進教育理念和教育經驗的思想, 就是符合時代發展的思想, 就是符合職業教育發展規律的思想。由于我國傳統教育的影響很深,..學而優則仕 ,鄙視勞動的思想在社會上還有廣泛的影響。..讀書做官 ,..讀書當白領 , 仍是相當多學生與家長的..欲望 , 職業教育的地位在社會認同度上并不高。這一方面要從教育理論上要讓職業教育有權威性,有學術性, 確立職業教育理論的學術地位;另一方面要大力宣傳職業教育的思想與理論基礎, 強化它的社會性地位, 為大眾化,平民化教育提供理論支撐。同時要讓社會認同職業教育的成果及它對國家發展的貢獻, 要讓全社會尊重..工人階級。為此, 專家學者應當站出來, 呼吁社會尊重職業教育, 因為職業教育正如著名教育先驅黃炎培先生所說: 是..用教育的方法, 使人人一方獲得生活之供給與樂趣,一方盡其對群之義務 , 它是生活不可或缺的內容。

四、鞏固黨的執政地位, 需要職業教育提供基礎保證.中國共產黨章程(明確提出:..中國共產黨是工人階級的先鋒隊。中國的產業大軍及其知識分子是黨的階級基礎和執政基礎, 是黨的先進性的階級來源。中國工人階級認同不認同黨的領導, 認同不認同社會主義制度, 認同不認同走中國特色社會主義道路, 認同不認同鄧小平理論、..三個代表 重要思想與科學發展觀作為指導思想與行動指南, 關乎著中國共產黨的執政地位是否牢固, 忽視對工人階級隊伍的建設, 是一件很危險的事情。

中國的工人階級必須認同社會主義核心價值體系, 認同馬克思主義指導思想是社會主義核心價值體系的靈魂;認同中國特色社會主義共同理想是社會主義核心價值體系的主題;認同民族精神和時代精神是社會主義核心價值體系的精髓;認同社會主義榮辱觀是社會主義核心價值體系的基礎, 也就是說, 思想信仰、理想信念、精神支柱和道德基礎, 是工人階級必須具備的思想素質。由于中國的產業工人大軍主要是由職業教育培養的, 所以職業教育培育有道德、有文化、有紀律, 德智體美全面發展的中國特色社會主義事業合格建設者和勞動者, 是時代賦予職業教育的歷史責任。

要使中國工人階級隊伍壯大起來, 職業教育必須做好四項基礎工作。

一是給工人階級隊伍職業技能和社會化技能, 這是提升他們自身發展能力的基礎, 也是..安身立命 的本錢。工人階級有技能才有生產能力、服務能力和創造能力, 才能發揮..科學技術是第一生產力 的作用, 這是最重要的基礎工程。

二是給工人階級隊伍良好的職業道德和職業精神, 這是提升他們自身品味的基礎, 也是..立志高遠 的本錢。工人階級有精神追求和奉獻精神才能樂業愛業, 才能在直接為社會創造財富中體現自身的價值。

三是給工人階級隊伍可持續發展的機會, 讓他們在學習、培訓的過程中獲得提升..基本素質+ 職業素質 的發展成果。他們的..智慧結構+ 技能結構 適應時代的要求, 他們的無限創造力才能迸發出來, 促進工業化的發展進程。職業教育應當是工人階級的成才教育, 這才是職業教育的本質所在。

四是給工人階級隊伍實現中華民族偉大復興的歷史機遇, 使他們在人才強國中發揮自己的巨大作用。職業教育能使數以億計的高素質勞動者和數以千萬計的專業人才脫穎而出, 成為建設中國特色社會主義的棟梁, 他們用..雙手 實現了中國經濟實力的大幅度提升, 他們用..雙手 創造著中華民族的燦爛文化, 他們以自己的歷史責任鞏固著我國人民民主專政國家的政權基礎, 所以職業教育已經為鞏固黨的執政地位提供了基礎保證。

綜上所述, 職業教育在經濟又好又快發展, 農村勞動力轉移, 教育結構變化和鞏固黨的執政地位中發揮著重要作用, 其歷史地位應當得到全社會的認同。大力發展職業教育不僅是推進社會和諧與促進教育公平的戰略舉措, 更是鞏固黨的執政地位的最重要的保障。職業教育應當在..服務社會, 造福人群 中發揮成為讓..人民滿意的教育 的優勢。關鍵是職業教育工作者要有崇高精神境界和社會責任感, 踏踏實實地做好自己的工作。

該信息出自“中國職業教育與成人教育網” http://www.tmdps.cn

第三篇：實驗動物學重點匯總

一、實驗動物、近交系動物、轉基因動物、屏障環境

實驗動物(Laboratory Animal): 是指經人工飼養、繁育，對其攜帶的微生物及寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚的，應用于科學研究、教學、生產和檢定以及其他科學實驗的動物。包括四個基本內涵：

1.遺傳背景明確（近交系、封閉群、雜交群）

2.對攜帶微生物和寄生蟲實施控制（普通動物、清潔動物、無特定病原體動物、無菌動物）3.在特定的環境條件下，人工培育而成的動物 4.應用范圍明確

近交系(Inbred Strain)是指至少連續經過20代以上全同胞兄妹或親子交配，品系內所有個體都可追溯到起源于第20代或以后代數的一對共同祖先。近交系動物的近交系數（Inbreeding Coefficient）應大于99%。近交系動物的特點：

1．基因純合性和同基因性 2．各品系均具有獨特的特性

3．研究結果的一致性

4．可作為有價值的動物模型

5．具有標準實驗材料特性

6.遺傳背景清楚

通過實驗手段將新的遺傳物質(外源性的基因片段)導入到動物的胚細胞中，并能穩定的遺傳，由此獲得的動物稱為轉基因動物。常用的方法有顯微注射法、逆轉錄病毒載體法、胚胎干細胞介導法、精子載體法、電轉移法、基因直接導入法等。

屏障環境：與外界隔離，是飼養清潔級動物和SPF級動物的設施。進入實驗動物生存環境的空氣須經過濾凈化處理，其潔凈度相對于10000級，進入屏障內的人、動物和物品如飼料、水、墊料及實驗用品等均需有嚴格的微生物控制。

二、實驗動物環境設施分類

實驗動物設施是指實驗動物和動物實驗設施的總和。一個設施可以大到動物中心或生產繁殖機構，小至某一實驗動物室。總體的原則是提供實驗動物最適宜的環境，保障實驗動物的質量和為動物實驗的準確性提供可靠保障。

（一）、按其功能分類

1．動物生產設施（Animal Production Facility）指用于實驗動物的飼育繁殖、生產的建筑物、設備以及運營管理在內的總和。

2．動物實驗設施（Animal Experimental Facility）指用于研究、試驗、教學、生物制品、藥品生產、檢定等為目的進行實驗動物飼育、試驗的建筑物、設備以及運營管理在內的總和。

3．特殊動物實驗設施（Special Animal Experimental Facility）指用于感染、毒理動物實驗、病原微生物和細胞培養、重組DNA、轉基因動物實驗、克隆和胚胎干細胞、細胞實驗和應用特殊化學物質等進行實驗的建筑物、設備以及包括運營管理在內的總和。

（二）按微生物控制程度分類

1．普通環境（Open System）

直接與外界大氣相通，是飼養普通級實驗動物的場所。飼料、飲水要符合衛生要求，墊料要消毒，飼養室內要有防鼠、防昆蟲等措施。

2．屏障環境（Barrier System）

與外界隔離，是飼養清潔級動物和SPF級動物的設施。進入實驗動物生存環境的空氣須經過濾凈化處理，其潔凈度相對于10000級，進入屏障內的人、動物和物品如飼料、水、墊料及實驗用品等均需有嚴格的微生物控制。3．隔離環境(Isolation System)

與外界環境完全隔離的環境內。工作人員通過隔離器上組裝的無菌手套進行操作，不直接接觸動物。飼料、飲水，墊料，籠具等都應高壓、高溫滅菌。進入隔離器內的一切物品均需通過傳遞艙滅菌。適合飼養SPF、無菌動物、動物的保種育種或同等級的動物實驗。

（三）按設施的平面布局分類

1．無走廊式(No Corridors)

用于飼養品種單一或以實驗為主的設施。一般飼養普通級動物

2．單走廊式（Single Corridors）

一般的研究機構在進行中、短期動物實驗。相對于雙走廊其優點是占用空間小，設施利用率較高，維護費用低。缺點為清潔籠具和污染材料之間常常存在污染的危險，走廊相對擁擠。

3．雙走廊式（Double Corridors）

常用的一種實驗動物屏障設施類型。可以有效分割為清潔區和污染區。作為屏障設施使用，比較容易控制微生物污染。缺點是有效利用面積減少。

4．三走廊式（Three Corridors）

三走廊式壓力梯度從中間的潔凈走廊、前室、動物飼養室、污物走廊逐漸降低，是目前常用的動物實驗設施。

三、地鼠的習性、特點（頰囊、冬眠）地鼠的習性： 1．生活習性

中國地鼠，灰色，個體小，體長約10cm，背部中心有黑色條紋。白天基本上睡眠，行動笨拙。晝伏夜行動物，一般在夜晚8～11點最為活躍，運動時腹部著地，行動不敏捷，巧手營巢，牙齒十分堅硬，可咬斷細鐵絲，興奮時發出強烈的金屬性音響。地鼠好斗，雌性比雄性大而且兇猛，受驚時會咬人。除發情期外，雌鼠不易與雄鼠同居，且雄鼠易被雌鼠咬傷。

2．采食性

有很強的貯食習性，可將食物存貯于頰囊內。其頰囊可充分擴張，貯藏能力極大，便于冬眠時食用。地鼠口腔內兩側各有一個很深的頰囊，一般深度為3.5～4.5厘米，直徑為2～3厘米，一直延續到耳后頸部。通過頰囊將大量食物搬于巢中。

3．嗜睡性

睡眠很深時，全身肌肉松弛，且不易弄醒，有時誤認為死亡。室溫低時出現冬眠，一般于8～9℃時可出現冬眠，此時體溫、心跳、呼吸頻率、基礎代謝率均降低。室溫低于13℃則幼仔易于凍死，室溫最好保持20～25℃，相對濕度40～70%。

地鼠的特點：

（一）解剖學特點：

1．頭骨較長，門齒孔小，臼齒呈三棱形，齒式為2（門1/1，犬0/0，前臼0/0，臼齒3/3）=16，門齒能終生生長。

2．口腔內兩側各有一個頰囊。頰囊缺少腺體和完整的淋巴通路，因此對外來組織不產生免疫排斥反應，可用于異體移植。中國地鼠頰囊容易翻脫。

3．在臀髖部有一種腺體，當地鼠處于性興奮狀態時，分泌物會使局部皮膚濕潤。雌性地鼠不如雄性發育完全，腺體外露也不明顯。

（二）生理學特點：（略看）1．地鼠生殖周期短。

金黃地鼠性周期開始出現年齡為30～32日齡，妊娠為16（14～17）d，為嚙齒類動物中妊娠期最短者。哺乳期20～25d，離乳后雄鼠2月齡，雌鼠 1.5月齡可配種。成熟期時除發情期以外雌鼠不許雄鼠靠近。年產5～7胎，每胎產仔約7只。平均壽命2～3年。

2．出生仔鼠體重2～3.3g，離乳時體重可達25～28g，成年體重約為150g，雌鼠體重比雄鼠稍大。成年中國地鼠體重約為35g，雄鼠則比雌鼠大。

3．地鼠對皮膚移植的反應特別，封閉群內個體間皮膚移植常可存活，并能長期生存下來，但不同群體間移植則100%被排斥。這一現象正吸引著許多免疫工作者進行深入的研究。4．中國地鼠（黑線倉鼠）與金黃地鼠解剖生理特點基本相似，但也存在一些差異，如中國地鼠的染色體少而大，二倍體細胞 2n=22，大多數能相互簽別，定位明確，尤其Y染色體在形態上是獨特的，極易識別。無膽囊，大腸長度比金地鼠短1倍，但腦重、睪丸大均比金地鼠重近1倍。

三、實驗動物人性化及3R 至少要滿足動物五種基礎需要:1.足夠飲水和營養良好的食物；2.任何時間不受飲水的限制3.免受痛苦和疾病的折磨；4.免受焦慮和害怕的折磨；5.能夠表達正常生理學行為，如躲藏、犢和互相關照等。3R的基本內涵：

減少 Reduction）是指在科學研究中，使用較少量的動物獲取同樣多的實驗數據或使用一定數量的動物能獲得更多實驗數據的科學方法。

替代(Replacement)是指使用其它方法而不用動物所進行的試驗，或者說是使用沒有知覺的試驗材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎動物進行試驗的一種科學方法。

優化（Refinement）是指在符合科學原則的基礎上，通過改進條件，善待動物，提高動物福利或完善實驗程序和改進實驗技術，避免或減輕給動物造成的與實驗目的無關的疼痛和緊張不安的科學方法。

3R研究的意義：

（一）3R作為提升突破技術壁壘能力的載體和具體體現“標尺”，在經濟發展和國際貿易中發揮不可替代的重要作用

（二）為科學發展提供了新思路和新方法

（三）開展“3R”研究，從保護動物，或是關注動物福利的角度出發，這也是時代發展、社會進步在科技上的一種體現。

五、小鼠的行為和生理學特點

（一）行為學特點

1.性情溫順，膽小怕驚，對環境反應敏感。

2.喜居于光線暗的安靜環境，晝伏夜動，喜歡啃咬。3.社會群居性。

（二）生理學特點

1．小鼠體型小

2．體溫與能量代謝。對小鼠需要供給充足的飲水。小鼠飲水量為4～7ml/d。

3．泌尿 小鼠尿量較小，一次排尿僅1～2滴。與其他哺乳動物不同的是，小鼠尿液中含有蛋白質和肌酸酐。

4．生殖 生長期短、成熟早、繁殖力強。小鼠6～7周齡時性成熟，性周期為4～5d，妊娠期為19～21d；哺乳期為20～22d；有產后發情特點，每胎產仔數為8～15頭，一年產仔胎數6～10胎，繁殖率很高，生育期為1年。小鼠為全年多發情動物，發情周期可分為前期、發情期、后期和間情期四個階段，每個階段陰道粘膜均發生典型變化，通過陰道涂片可判斷處于哪個階段。交配后10～12h，雌鼠在陰道口形成一個白色的陰道栓，這是受孕的標志。

六、近交系繁殖生產

近交系動物繁殖方法的選擇原則：保持近交系動物的同基因性及其基因的純合性。

（一）引種：繁殖用原種的近交系動物必須遺傳背景明確、來源清楚、有較完整的資料（包括品系名稱、近交代數、遺傳基因特點及主要生物學特征等）。引種動物必須來自近交系的基礎群。

（二）繁殖：近交系動物的繁殖可分為：基礎群（Foundation Stock）血緣擴大群（Pedigree Expansion Stock）生產群(Production Stock),當近交系動物生產供應數量不是很大時，一般不設血緣擴大群，僅設基礎群和生產群。

1.基礎群：嚴格以全同胞兄妹交配方式進行繁殖；對動物個體記錄要詳細，包括品系名稱、近交代數、動物編號、出生日期、雙親編號、離乳日期、交配日期、生育記錄和繁殖系譜等。基礎群（包括血緣擴大群）的動物不超過5～7代都應能追溯到一對共同祖先。基礎群應定期對遺傳特性和均一性、病原微生物和寄生蟲、環境等檢查和監測。基礎群動物保種方式：1.平行線式2.單線式3.綜合式。也可用于近交系動物的培育（1）平行線式：基礎群中的每對全同胞作為一個家系，每個家系繁殖一代后選留一對動物進行全同胞交配，以此類推，以保持基礎群。（2）單線式：基礎群每對同胞交配繁殖一代后，選留其中一個家系，淘汰其他家系，選中的家系再留數對進行同胞交配繁殖，下一世代仍保留其中一對的后代，淘汰其他后代，如此一代一代繁殖保種。（3）綜合式：基礎群中每個家系作全同胞交配，每個世代每個家系留一對繼續繁殖，若其中某一家系不能繼續繁殖下去，則由繁殖力高的一個家系補足，以維持數個家系同步延續，以保證種群和延續。

2.血緣擴大群：種用動物應該來自基礎群,，以全同胞兄妹交配方式進行繁殖，設個體繁殖記錄卡，血緣擴大群動物不超過5～7代都應能追溯到其在基礎群的一對共同祖先。

3.生產群：種動物來自基礎群或血緣擴大群。生產群動物一般以隨機交配方式進行繁殖。應設繁殖記錄卡，生產群動物隨機交配繁殖代數一般不應超過4代。

七、封閉群引種

以非近親交配方式進行繁殖生產的一個實驗動物種群，在不從其外部引入新個體的條件下，至少連續繁殖 4 代以上，稱為封閉群，亦稱遠交群（Outbred Stock）。

引種：繁殖用原種的封閉群動物必須遺傳背景明確，來源清楚，有較完整的資料（包括種群名稱、來源、遺傳基因特點及主要生物學特性等）。一般小型嚙齒類封閉群動物引種數目不能少于25對。

哈迪-溫伯格Hardy-Weinberg定律，也稱基因平衡定律。等位基因頻率:群體中，一條染色體上某種等位基因數與該染色體上全部等位基因數之比。基因型頻率:群體中，某基因型個體數與該群體全部個體數之比。

八、大鼠解剖學特點、肝臟再生、無膽囊、環尾病、裸大鼠的免疫學特點

解剖學特點：

1.門齒終生不斷生長，需磨損維持其定。

2.食道與十二指腸相距很近，胃中有一條皺折，收縮時會堵住噴門口，這是大鼠不會嘔吐的原因。3.肝臟再生能力強，無膽囊，來自各葉的膽管形成總膽管，開口于十二指腸的乳突上。4.肺結構特別，左肺為1個大葉，右肺分成4葉。5.心臟和外周循環與其他哺乳動物不同。心臟的血液供給既來自冠狀動脈，也來自冠狀外動脈。6.右腎比左腎靠近頭側，腎為蠶豆形，右側比左側稍高。單乳頭腎，腎臟前端有一米粒大的腎上腺。7.雌性生殖器呈圓形，有凹溝，子宮為丫型雙角子宮，左右子宮角的腔是完全分開的。兩個子宮頸獨立地開口于陰道。胸部和腹部各有3對乳頭。

大鼠無膽囊，肝臟再生能力強，不能嘔吐，因此不能用于做催吐實驗。

當環境濕度低于40％時，大鼠易患環尾病（環狀壞死癥）。

裸大鼠的免疫缺陷特征：①免疫器官的組織學與裸小鼠相似，幼齡裸大鼠的解剖發現，有胸腺殘跡，內有未分化的上皮細胞，但未見淋巴細胞；②先天性無胸腺，無T細胞，T細胞功能缺失，但B細胞功能正常，NK細胞的活力較正常鼠高。

附：裸大鼠的一般特征：

①體毛稀少，裸大鼠并不像裸小鼠一樣完全無毛，而是體毛稀少，尾根往往多毛； ②發育遲緩與裸小鼠一樣發育相對較緩慢，體重為正常大鼠的70％左右；

③繁育能力差，由于裸大鼠與裸小鼠一樣在妊娠期間乳腺發育缺損，故其繁殖方式同裸小鼠相同，即用純合子的雄鼠與雜合子的雌鼠交配方式進行繁育；

④易患呼吸道疾病，由于其無胸腺，免疫力低下，因此易感各種疾病，特別是在環境較差時，易感潰瘍性氣管炎和化膿性支氣管炎等，生存時間約6～7個月。

九、豚鼠的補體、常用犬品種

豚鼠特別是老齡雌鼠的血清中含有豐富的補體，是所有實驗動物中補體含量最多的一種動物，易引起變態反應。其補體非常穩定，免疫學實驗中所用的補體多來源于豚鼠血清。豚鼠是速發型過敏性呼吸道疾病的動物模型，是過敏性休克和變態反應的首選實驗動物。常用實驗動物接受致敏物質的反應程度不同，其順序為：豚鼠＞家兔＞犬＞小鼠＞貓＞蛙。（注：變態反應也叫超敏反應，指機體對某些抗原初次應答后，再次接受相同抗原刺激時發生的一種以機體生理功能紊亂或組織細胞損傷為主的特異性免疫應答。）

國際上用于醫學科學研究的常用犬主要有小獵兔犬、墨西哥無毛犬、四系雜交犬、Boxer黑白斑點短毛犬等。

十、兔解剖特點

1．口腔小，上唇分開 齒式為2（門2/1，犬0/0，前臼3/2，臼齒3/3）=28。唾液腺有4對，即腮腺、頜下腺、舌下腺和眶下腺。

2．家兔為單胃。盲腸非常大，占腹腔的1/3。在回盲處有特有的圓小囊。

3．雄兔睪丸可以自由地下降到陰囊或縮回腹腔。雌兔為雙子宮，有乳頭3～6對。兔為單乳頭腎。

4．兔的胸腔構造:縱隔將胸腔分左右兩室，互不相通。頸神經血管束中減壓神經易于分離。

5．幼兔的消化道發生炎癥時，消化道壁即成為可滲透的，這樣消化道中的有害物質易被吸收，這就是幼兔腹瀉時容易自身中毒而死亡的原因。

十一、動物飼養室有害氣體

主要有害氣體：氨、甲基硫醇、硫化氫、硫化甲基、甲基丁烷、三甲胺、苯乙烯、乙醛和硫化二甲基。

附：信息素（pheromone）或叫引物信息素（primer pheromone）

①Lee-Boot效應，是指小鼠群養時常常發生假性妊娠和發情周期混亂的現象。

②Whitten效應，是指由于雄性動物分泌的信息素促使雌性動物的發情周期出現有規律的現象。③Bruce效應，是指懷孕初期的雌性小鼠與交配對象以外的雄性接近或同居時產生的中止妊娠反應。

十二、動物實驗前準備：

準備工作的內容有： 1.飼養室和飼養器具的準備 2.動物數目的確定 3.動物的購入 4.動物的稱重

5.動物的分組標記及動物的管理等。

動物的購入時注意事項 ：

1．各項實驗前的準備工作是否已落實，如動物籠具數量、清潔衛生情況、動物觀察室內是否已消毒。

2．購入動物時應向供應部門索取動物的遺傳背景資料、實驗動物有效的質量合格證、實驗動物微生物控制的檢查資料以及動物的年齡和健康等方面的資料。

3．如若是清潔級以上級別的動物，其運輸工具應嚴格檢查密封狀況。購入動物回到實驗室的時間不宜太長。如若是長途運輸，還應考慮到途中各種因素對動物的影響，如運輸環境的溫度、濕度、飲食等等。尤其要注意動物在途中不能被污染和引起窒息死亡。

4．動物健康檢查：應對購入動物的健康情況進行詳細檢查，檢查包括：（1）外觀。一般常發生異常的部位及其外觀檢查內容有：

皮毛：有無光澤和脫毛變化。

口腔：流涎、出血、粘膜湯瘍、口臭等。

鼻腔：鼻汁、出血、干燥（有些動物鼻鏡干燥）。

眼：眼屎、流淚、白內障、角膜損傷等。

耳：外傷、耳殼曲折、貧血、中耳炎等。

尾：彎曲、斷折等。

四肢：彎曲、脫臼、外傷、關節炎等。

肛門：下痢、血便、脫肛等。

（2）營養狀況。被毛逆立、精神倦怠、瘦弱或過肥等屬于營養不良。（3）飼料、水攝入量。有無采食減少、食欲低下、過食等。

（4）動物狀態。不活動、轉圈運動、臥地不起、跛行、痙攣等屬不正常。

十三、動物分組標記

1．染色法

染色法是用化學試劑在動物身體明顯部位如被毛、四肢等處進行涂染，或用不同顏色等來區別各組動物，是實驗室最常用、最容易掌握的方法。常用的標記液有：①3％～5％苦味酸溶液（黃色）。②0.5％中性紅或品紅浴液（紅色）。③2％硝酸銀溶液（咖啡色，涂后需光照10分鐘）。④煤焦油酒精溶液（黑色）。

標記時用標記筆蘸取上述溶液，在動物體表不同部位涂上斑點，以示不同號碼。編號的原則是：先左后右，從前到后。2．烙印法 3．掛牌法

4．耳孔法

一般來說，小型動物適宜用耳孔法和染色法，中型動物適用掛牌法和烙印法。

十四、影響動物和實驗的因素

? 氣候因素（溫度、濕度、氣流速度等）? 理化因素（照明、聲音、氣味等）? 居住因素（房屋、籠具、墊料等）

? 同種動物間因素（飼養密度、社會地位、勢力范圍等）

附：

1、實驗動物科學的定義：是研究實驗動物和動物實驗的一門新興學科。

2、實驗動物:略。動物實驗:以實驗動物為材料，采用各種手段和方法在實驗動物身上進行實驗，研究實驗過程中實驗動物的反應、表現及其發生機制、發展規律，以探討生命科學的疑難問題。

3、種（Species）：是生物學分類系統中最基本單位。同種間可相互交配且后代有繁殖能力的同一類的動物。

品種（Stock，Breed）：是研究者根據不同需要而對同一“種”的動物進行改良和選擇（即定向培育），并具有某種特定外形和生物學特征，并能較穩定地遺傳的動物群體。

品系（Strain）：指動物群體來源明確，在其內部采用某種交配方法繁殖，個體間具有相似的外貌、群體內都有獨特的生物學特征和基本穩定的遺傳特性，可用于不同實驗目的的動物群體。

亞系（Substrain）：是由同一個近交系分離出來的具有各不相同特性的品系。殘余雜合性和突變而導致部分遺傳組成的改變。

支系(Subline)：是指品系或亞系經過人工技術處理后稱為支系。

4、普通動物（conventional animal，CV；一級動物）：指不攜帶主要人獸共患病病原和動物烈性傳染病病原的動物。僅可用于示教、科研的探索方法、預試之用。清潔動物（clean animal，CL；二級動物）：指除普通級動物應排除的病原外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原的動物。

無特定病原體動物（specific pathogen free animal，SPF；三級動物）：指除普通、清潔級動物應排除的病原外，還不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的病原的動物。

無菌動物（germ free animal，GF；四級動物）：指無可檢出一切生命體的動物。

悉生動物（gnotobiotic animal，GN；四級動物）：又稱已知菌（叢）動物，飼養于隔離系統。具有更強的生活力和抵抗力，更易于飼養管理。

第四篇：實驗動物學實驗報告

實驗動物學實驗報告

一、實驗動物：小鼠

二、操作流程：抓取，固定，編號，給藥，取血，麻醉，絕育，解剖。

三、具體操作

1、抓取：抓取小鼠時，右手抓住小鼠尾巴，不要過于用力，以免驚嚇小鼠。左手從小鼠身體后部向前抓（以免小鼠向后縮咬傷自己），抓住小鼠頸部。固定住小鼠后，將小鼠皮膚往上抓，盡量將小鼠背部皮膚抓住。左手將小鼠腹部朝向自己，把小鼠尾巴用左手無名指和小指夾住，這時小鼠腹部皮膚緊繃，不能動彈。

2、固定： 通常使用固定器進行固定。將固定器擰開后，抓住小鼠尾巴，使其鉆入固定器中，再將擰下的固定器部分裝好，使小鼠尾部露出，再將可旋轉的鐵片固定住即可進行后續實驗。

3、編號：編號方式有兩種：①剪腳趾編號：把小鼠腹面朝上，在下的腳趾從左至右依次編為1~10號，剪10號腳趾加1~9號腳趾依次編為11~19號，在上的腳趾依次編為20,30,40,50,60,70,80,90號，其余編號與11~19號類似。②打耳釘編號：耳釘上均有唯一編號，通過使用耳釘鉗將耳釘打在小鼠耳朵上即可。實驗時通常使用的是第一種方式進行編號，第二種編號通常用于需要長距離運輸的動物。

4、給藥：常用的給藥方式有：

①口服給藥：即灌胃。將注射器裝入藥物溶液，裝上灌胃針（灌胃針有直頭和彎頭兩種，區別不大）。如上所述，抓取小鼠后，使其頭部朝上，盡量呈一直線，取灌胃針，從小鼠嘴角一側緩緩插入（保持刻度在自己能看到的位置），順著小鼠口腔食道的弧度讓小鼠將針咽入，灌胃過程中如果遇到阻礙一定要及時拔出灌胃針，不可強行灌胃以免傷及小鼠食道以及肺部。灌胃針順利進入后基本與小鼠身體呈一條直線，注入適量體積后再順著食道緩緩取出灌胃針。

②靜脈注射：小鼠尾部有3條靜脈和1條動脈，3條靜脈非別位于背部，及兩側。靜脈注射時一般選取兩側靜脈，因為其相對于背部靜脈更為清晰飽滿。將小鼠固定后，用酒精擦拭其尾部靜脈，使其充血，以便注射。之后使注射器針孔處朝上，針與尾部呈約30°扎入尾部后向上輕挑，再向內扎入部分，此過程應該比較順暢，沒有阻礙，若阻礙較大則有可能扎入到了皮膚中。扎入后將活塞向后回抽一點可見到有血回流，則說明成功扎入靜脈當中，注射適當體積后迅速拔針，用酒精進行消毒。

5、取血：有斷尾取血法和眼眶取血法兩種。本次實驗使用的是眼眶取血法。抓取小鼠，固定其頭部用手指將其上下眼瞼分開，露出其眼球并且不能閉上。用玻璃毛細管從其上眼角處扎入眼球后方毛細血管從，使血液順著毛細管留下，取血完成后快速將毛細管取下。

6、麻醉：抓取老鼠，使其頭部朝下，使其腹部臟器向胸腔靠攏，露出腹部空腔，以免刺傷臟器。將注射器豎直扎入靠近后腿部腹腔，刺入之后稍微向前傾斜但不要向前刺入，一般注入0.5mL麻醉劑即可。隨后拔出針，方向小鼠，等待幾分鐘后即可麻醉。

7、絕育：絕育手術是通過剪除雌鼠卵巢或雄鼠輸精管來實現的。將麻醉的雌鼠背面朝上，從其胸腔和尾部之間向下三分之一處剪開一個小口，用鑷子將其卵巢取出，上面呈現紅色斑點的部分即為卵巢，用剪刀將這一部分剪除，然后用縫合針線將其縫合，縫合方法為將針穿過后，將線纏繞鑷子兩圈再逆時針纏繞兩圈，再重復纏繞一遍，將鑷子夾住線頭把纏繞的線移至線頭系緊即可（縫合過程全程用鑷子和剪刀操作），里面肌肉層以及外面皮層均需縫合。雄鼠則從外生殖器向上1-2cm處剪開小口，用鑷子在其中找出輸精管（較細長的乳白色小管），盡量多減掉一些，以免其長長愈合，以上述方法縫合傷口即可。

9、解剖：以頸椎脫臼法處死小鼠，使其腹面朝上。用鑷子將其腹部皮膚夾起，然后用剪刀剪開，觀察各個器官所在位置和形態，解剖完的小鼠放入尸體袋中。

第五篇：實驗動物學實驗

實驗一 常用實驗動物技術介紹

目的

了解并熟悉實驗動物實驗操作的基本方法和技術。內容

注射方法；麻醉方法；動物編號的方法；采血；動物性別鑒定；動物的致死。學習打結、縫合、固定動物等。播放錄像《太行山獼猴》、《動物的捉拿和給藥途徑》。用品

大白鼠、小白鼠、蟾蜍、家兔，常用手術器械、注射器、小木錘、大小鼠固定器，戊巴比妥鈉，乙醚、士的寧、乙醚、氯仿、氯化鉀、一氧化碳、二氧化碳

常用實驗動物性別鑒定

1、大、小鼠的性別鑒定

離乳仔鼠性別鑒定主要以生殖器與肛門之間的距離長短及肛門與生殖器有無被毛為標志。識別要點是：① 雄性的生殖器與肛門之間的距離較遠，雌鼠較近；② 雄性的生殖器與肛門之間有毛；③ 雄性的生殖器突起較雌鼠大；④ 雌鼠乳頭較雄鼠明顯。成熟后，雄性可見陰囊,雌性乳頭明顯而易于區分。

2、豚鼠的性別鑒定

豚鼠的性別鑒定主要是通過生殖器形態來判斷。雌性外生殖器陰蒂突起比較小，用拇指按住陰蒂突起，余指撥開大陰唇的皺褶，可見陰道口呈”V”形（注意發情間期的閉鎖現象，即一種除了發情和分娩時外，關閉陰道口的細胞結構）；雄性外生殖器有包皮覆蓋的陰莖小隆起，用拇指按住其基部包皮，可見龜頭向外突出。

3、兔子的性別鑒定

幼兔的性別鑒定主要以尿道開口部與肛門之間的距離及尿道開口部的形狀來判別。哺乳期仔兔，雄性尿道開口部與肛門之間的距離較遠，為雌性的1.5－2倍，雌性較近。雌性尿道開口扁形，大小與肛門同；雄性圓形，略小于肛門。1月齡仔兔，雄性生殖孔呈圓形，翻出可見呈圓柱體的突起；雌性生殖孔呈Y形，翻出僅見有裂縫，裂縫及于肛門。3月齡以上成年兔，雄性陰囊明顯而雌性無陰囊；雄性頭大短而圓而雌性頭小略呈長形。

4、貓的性別鑒定

幼貓的性別是根據生殖器與肛門的距離來判斷。距離遠者為雄性，距離近者為雌性。

5、猴類的性別鑒定

猴類性別的區分較為困難。首先檢查尿道開口，許多雌性動物有較大的陰蒂，其腹側形成溝狀通向尿道口，而雄性動物的尿道開口在陰莖頭上。觸摸陰囊內是否有睪丸是確定其雌雄的最可靠辦法。

常用實驗動物處死

大鼠和小鼠的處死方法

1、脊椎脫臼法

右手抓住鼠尾用力向后拉，同時左手拇指與食指用力向下按住鼠頭，將脊髓 與腦髓拉斷，鼠便立即死亡。

2、斷頭法

實驗者戴上棉紗手套，用右手握住大鼠頭部，左手握住背部，露出頸部，助手用剪刀在鼠頸部將鼠頭剪掉。小鼠處死法相同。

3、擊打法

右手抓住鼠尾，提起，用力摔擊其頭部，鼠痙攣后立即死亡。用小木錘用力擊打鼠頭部也可致死。

4、急性大失血法

可采用鼠眼眶動脈和靜脈急性大量失血方法使大小鼠立即死亡。

5、化學致死法

吸入一氧化碳，大、小鼠在一氧化碳濃度為0.2-0.5%環境中即可致死。皮下注射士的寧，吸入乙醚、氯仿，均可致死。士的寧注射量，小鼠為0.76～2.0mg/kg體重，大鼠3.0-3.5ml/kg體重。氯化鉀處死大鼠劑量：25%溶液0.6ml/只靜脈注入。

實驗動物的處死方法很多，應根據動物實驗目的、實驗動物品種（品系）、以及需要采集標本的部位等因素，選擇不同的處死方法。無論采用哪一種方法，都應遵循安樂死的原則。安樂死是指在不影響動物實驗結果的前提下，使實驗動物短時間無痛苦地死亡。處死實驗動物時應注意，首先要保證實驗人員的安全；其次要確認實驗動物已經死亡，通過對呼吸、心跳、瞳孔、神經反射等指征的觀察，對死亡作出綜合判斷；再者要注意環保，避免污染環境，還要妥善處理好尸體。

一、頸椎脫臼處死法

此法是將實驗動物的頸椎脫臼，斷離脊髓致死，為大、小鼠最常用的處死方法。操作時實驗人員用右手抓住鼠尾根部并將其提起，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按壓鼠頭及頸部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成頸椎脫臼，脊髓與腦干斷離，實驗動物立即死亡。

二、斷頭處死法

此法適用于鼠類等較小的實驗動物。操作時，實驗人員用左手按住實驗動物的背部，拇指夾住實驗動物右腋窩，食指和中指夾住左前肢，右手用剪刀在鼠頸部垂直將鼠頭剪斷，使實驗動物因腦脊髓斷離且大量出血死亡。

三、擊打頭蓋骨處死法

主要用于豚鼠和兔的處死。操作時抓住實驗動物尾部并提起，用木錘等硬物猛烈打擊實驗動物頭部，使大腦中樞遭到破壞，實驗動物痙攣并死亡。

四、放血處死法

此法適用于各種實驗動物。具體做法是將實驗動物的股動脈、頸動脈、腹主動脈剪斷或剪破、刺穿實驗動物的心臟放血，導致急性大出血、休克、死亡。

犬、猴等大動物應在輕度麻醉狀態下，在股三角做橫切口，將股動脈、股靜脈全部暴露并切斷，讓血液流出。操作時用自來水不斷沖洗切口及血液，既可保持血液暢流無阻，又可保持操作臺清潔，使實驗動物急性大出血死亡。

五、空氣栓塞處死法

處死兔、貓、犬常用此法。向實驗動物靜脈內注入一定量的空氣，形成肺動脈或冠狀動脈空氣栓塞，或導致心腔內充滿氣泡，心臟收縮時氣泡變小，心臟舒張時氣泡變大，從而影響回心血液量和心輸出量，引起循環障礙、休克、死亡。空氣栓塞處死法注入的空氣量，貓和兔為20~50ml，犬為90~160ml。

六、過量麻醉處死法

此法多用于處死豚鼠和家兔。快速過量注射非揮發性麻醉藥（投藥量為深麻醉時的30倍），或讓動物吸入過量的乙醚，使實驗動物中樞神經經過過度抑制，導致死亡。應用戊巴比妥鈉注射麻醉致死。豚鼠可用其麻醉劑量3倍以上劑量腹腔注射。貓可采用本藥麻醉量的2～3倍藥量靜脈注射或腹腔內注射。兔可用本藥80～100ml／kg的劑量急速注入耳緣靜脈內。狗可用本藥100mg／kg靜脈注射。

七、毒氣處死法

讓實驗動物吸入大量CO2等氣體而中毒死亡。吸入二氧化碳，此法安全、人道、迅速，被認為是處理嚙齒類的理想方法，國外現多采用此法。可將多只動物同時置入一個大箱或塑料袋內，然后充入CO2，動物在充滿CO2的容器內l～3min內死去。

人類為什么總拿小白鼠做實驗？

原因一：

老鼠中的小白鼠的基因序列和人類的差不多，一些醫學的科研和臨床實驗都是有小白鼠來完成的。當中以小白鼠做遺傳學實驗很好，因為它的全基因組和人類的相似度極高，很多人類難以治愈的疾病可以在小白鼠身上找到相似性狀，從而加以實驗發現治病基因。

原因二：

實驗專用白鼠的生物學意義較大，純系小鼠的培育方法經過百年探索已經形成固定流程，培育出的小鼠幾乎完全沒有個體差異(生理上)，而在一般的自然種群中,同種動物間的個體差異是很大的(盡管外表相同)，主要表現在先天的身體素質上。生理上沒有個體差異是否意味著氣質上沒有差異尚不明了，不過選擇純系實驗白鼠主要還是為了盡可能的減少先天的個體差異。

原因三：

數量充足，許多實驗需要統計學分析，這就要求一定的數量，大白鼠和小白鼠，特別是小白鼠，在人工繁殖條件下，能滿足這一要求。種系純，好的實驗要對實驗動物的品種嚴格控制，這用小白鼠就容易解決。

還有動物等級，小白鼠好歹也是哺乳動物，除了體形小，與其它哺乳動物的進化水平相比并不差。體形小反而成為人工繁殖喂養的有利條件。

原因四：

其實很多實驗用猩猩等與人更近似的動物做最好，但使用猩猩太昂貴了。許多實驗，比如認知類的，實驗結束后時需要將動物殺死，來檢查其內部變化的。這樣，大量的實驗肯定就不能用比較“貴重”的猩猩了。

實驗

二、常用實驗動物采血、血細胞計數

1、小白鼠的采血 目的：

了解并熟悉小白鼠的采血方法； 掌握小白鼠眼眶后靜脈叢采血。

用品: 二甲苯棉球、1%肝素溶液、1%可卡因、乙醚、刀片、無鉤彎鑷子、彎止血鉗、微量采血針、剪刀、剪毛剪、鋒利刀片、注射器。內容：

1、剪尾采血：需血量少時可用此方法。將動物固定，顯露尾部，將尾尖剪去約5mm，從尾根部向尾端部按摩，血即從斷端流出。若用二甲苯棉球涂擦尾部或事先將鼠尾浸在45℃水中數分鐘，使尾部血管充盈，可采到較多的血，但注意二甲苯可致溶血。也可用鋒利刀片割破尾動脈或尾靜脈，讓血液自行流出，采血后，消毒，止血。如將動物麻醉取血量可更多些。小鼠每次采血約0.1ml，大鼠約0.4 ml。為了多次反復取血應盡量從鼠尾末端開始。

2、摘眼球采血：此法常用于鼠類大量采血。用左手固定動物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用無鉤彎鑷子或彎止血鉗迅速摘除眼球，立即將鼠倒置，頭朝下，眼眶內很快流出血液。一般只適用于一次采血。大部動物采血后可以存活，可采另一側眼球取血。

3、眼眶后靜脈叢采血：用7—10cm長的微量采血針。將取血管浸入1%肝素溶液，干燥后使用。采血時，左手拇指和食指抓住鼠兩耳之間的皮膚使鼠固定，并用中指配合，輕輕壓迫頸部兩側，阻礙靜脈回流，使眼球充分外突，提示眼眶后靜脈叢充血。可用少量1%可卡因滴入動物眼內，使眼部局部麻醉。右手持取血管，將其尖端插入內眼角與眼球之間，輕輕向眼底方向刺入，小鼠刺入約2—3mm，大鼠刺入約4—5 mm，當感到有阻力時即停止刺入，旋轉取血管以切開靜脈叢，血液即流入取血管中，采血結束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。用本法短期內可重復采血。小鼠一次可采血0.2—0.3 ml，大鼠一次可采0.5—0.1ml。

4、頸靜脈或頸動脈采血：將鼠麻醉，剪去一側頸部外側被毛，作頸靜脈或頸動脈分離手術，用注射器即可抽出所需血量。也可插入導管，反復采血。

5、斷頭采血：操作者左手拇指和食指握住鼠頸部，頭朝下，用利剪在頭頸間1/2處迅速剪動物頭部，提起動物，血液即可流入準備好的容器中。

6、心臟采血：將動物麻醉，使其仰位固定，剪去胸前區毛，消毒皮膚，在左側第3—4肋間選擇心博最強處穿刺，血液借心臟跳動的力量進入注射器。亦可在動物麻醉后，切開動物胸腔，直視心臟內抽血或剪破心臟，直接用注射器、吸管等吸血。

2、豚鼠的采血 目的

了解并熟悉豚鼠的采血方法； 用品

刀片、注射器、消毒干棉球、75%酒精棉球、20%的檸檬酸鈉溶液、紗布、脫脂棉。

方法與步驟：

1、耳緣切口采血：先將豚鼠耳消毒，用刀片割破耳緣，在切口邊緣涂上20%的檸檬酸鈉溶液，防止血凝，則血可自切口處流出。此法采血每次可采0.5ml左右。

2、背中足靜脈采血：固定豚鼠，將其右或左后肢膝關節伸直，腳背消毒，找出背中足靜脈，左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手將注射針刺入靜脈，拔針后立即出血。采血后用紗布或脫脂棉壓迫止血。

3、心臟采血：選心跳最明顯的部位把注射針刺入心臟，血液即流入針管。心臟采血時所用的針頭應細長些，以免發生采血后穿刺孔出血。

3、家兔的采血 目的 了解并熟悉家兔的采血方法； 掌握家兔的耳緣靜脈采血方法。用品

常用手術器械、玻璃取血管、計數板、注射器、顯微鏡。內容

1、耳緣靜脈采血：將兔固定，拔去耳緣靜脈局部的被毛，消毒，用手指輕彈兔耳，使靜脈擴張，用針頭刺耳緣靜脈末端，血液即流出。本法為兔最常用的采血方法，可多次重復使用。

2、耳中央動脈采血：在兔耳中央有一條較粗的、顏色較鮮紅的中央動脈。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央動脈的末端，沿著與動脈平行的向心方向刺入動脈，即可見血液進入針管。由于兔耳中央動脈容易痙攣，故抽血前必須讓兔耳充分充血，采血時動作要迅速。采血所用針頭不要太細，一般用6號針頭，針刺部位從中央動脈末端開始，不要在近耳根部采血。

3、頸靜脈采血：將家兔麻醉，剪去一側頸部外側被毛，作頸靜脈或頸動脈分離手術，用注射器即可抽出所需血量。也可插入導管，反復采血。

4、心臟采血：穿刺部位在第三肋間胸骨左緣1mm處，選心跳最明顯的部位把注射針刺入心臟，血液即流入針管。心臟采血時所用的針頭應細長些，以免發生采血后穿刺孔出血。

4、小白鼠RBC、WBC計數 目的

1、復習小白鼠眼眶后靜脈叢采血；

2、學習微量采血法和紅、白細胞計數法。原理

用加有抗凝劑的溶液將定量的血液稀釋，滴入血細胞計數室內，于顯微鏡下計數，求出一定容積的稀釋血液中的RBC、WBC數，再將其換算成1L血液中的RBC、WBC個數。用品

血細胞計數板、計數器、顯微鏡、微量吸血管、酒精棉球、消毒脫脂棉球、RBC稀釋液（0.9%NaCl溶液）或RBC稀釋液：NaCl（維持滲透壓）0.5g，Na2SO4（使溶液比重增加，紅細胞均勻分布不易下沉）2.5g，HgCl2（固定紅細胞并防腐）0.25g，蒸餾水加至100ml。

WBC稀釋液，其成分為：冰醋酸1ml（破壞紅細胞），1%龍膽紫1ml（染白細胞核，便于計數），加蒸餾水至100ml。方法與步驟

1、熟悉血細胞計數板和微量吸血管的構造

（1）計數板是一塊厚厚的長方形玻璃板，板的中部有四條直槽，內側兩槽中間有一條橫槽，把中部隔成兩個長方型的平臺。此平臺比整個玻璃板的平臺低0.1mm，當放上蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間的高度為0.1mm,平臺中部有3mm×3mm精確劃分的9個大方格，稱為計數室,每個大方格的面積為1mm×1mm=1mm2, 體積為0.1mm3。中央的大方格則由雙線精確劃分為25個中方格，每個中方格的面積為0.2mm×0.2mm=0.04mm2,體積為0.004mm3,每個中方格又用單線精確劃分成16個小方格。適用于RBC計數。

（2）微量吸血管 一次性玻璃細管，以防交叉感染。該管長12cm，在4.5cm處和9cm處各有一定量標記，分別10μl和20μl。在11cm處有一色標，為連 結橡膠吸頭的標記。

2、微量采血和稀釋

（1）先準確吸取3.98mlRBC稀釋液于一潔凈的試管內。

（2）手持微量吸血管，將其管口浸入血滴，緩緩吸入血液至20μl處，如吸入血液稍過量，可用手指或干棉球輕觸管口，緩緩轉動，可使血液吸出，至恰好與刻度相符。用干棉球將管口外面的血液擦拭干凈。將血液加入到準備好的RBC稀釋液中。注意，應將采血管垂直插入稀釋液底部，緩緩擠出血液使之不擴散，輕吸上清液再擠出，使血液完全轉入到試管中。

（3）將血液和稀釋液混勻。

3、充液

取潔凈計數板及蓋玻片，將蓋玻片平放在計數板的計數室上。用干凈吸血管或小吸管吸少量混勻的RBC稀釋液，然后將管口斜置于蓋玻片邊緣的計數板毛玻璃斜面上，擠出少量稀釋液，此時液體即由于毛細管作用而進入計數室內。但須注意，如果計數室內留有氣泡或稀釋液過多以致溢出室外的凹溝中，都應該洗去，再重新充液。

4、計數

充液后應讓計數板靜置8min，待RBC充分下沉后方可進行計數。先在低倍顯微鏡下觀察RBC分布是否均勻，如果分布很不均勻，應洗去重做。在低倍鏡下找到中央大方格，看清其橫、豎線后即可用高倍鏡來計數。顯微鏡的光圈應縮小并降低聚光器使得視野較暗，這樣RBC的輪廓可更清楚些。通常選擇中央大方格四角的4個中格和中央的1個中格來計數。計數為了防止遺漏，應按一定的順序：即第一行先從左向右數到最后一格，下一行則從右向左數，以此類推。對于分布在雙線上的RBC，則可計數左側和上方線上的RBC，即按照“數上不數下，數左不數右”的原則。計數時應將每個中格的RBC數記錄下來，若發現各中格之間的RBC數相差超過15個時，表示其分布不均勻，應將計數室洗凈，重新搖勻吸管中的稀釋血液，再充液進行計數。

5、計算

RBC的稀釋倍數為200倍：（0.02ml+3.98ml）/0.02ml=200 計數室5個中格的總容積為0.02mm3，設5個中格RBC總數為X，則1mm3稀釋液RBC總數為X×50個。由此可知，每毫升血液中實際RBC數目：X×50×200個，即10000X，再乘以106得出每升血液中的RBC數。WBC基本與RBC相同，不同之處：

1、WBC稀釋液，其成分為：冰醋酸1ml（破壞紅細胞），1%龍膽紫1ml（染白細胞核，便于計數），加蒸餾水至100ml。

2、計數板四角的四個大方格又各分為16個中方格，適用于WBC計數。

3、吸取WBC稀釋液為0.38ml，血液稀釋了20倍。

4、在計數WBC時，計數四角的4個大方格中的WBC總數。其總容積為0.4mm3,換算成每升血液中的WBC數時，4個大方格內WBC數×2.5×20×106=WBC數/L。

5、計數時，如發現大方格之間的WBC數相差超過10個時，表示WBC分布不均勻，應重新充液計數。思考題：

1、在實際操作中，你認為哪種采血方法效果好？為什么？

2、小結在操作過程中，哪些因素可能影響計數的準確性？ 實驗

三、常用實驗動物的給藥、胰島素驚厥

1、小白鼠的給藥 目的：

1、了解并熟悉小白鼠、豚鼠、家兔的給藥方法；

2、掌握小白鼠的皮下注射、腹腔注射。

3、了解胰島素調節血糖水平的機能。

用品：小鼠專用灌胃針、注射器、75%酒精棉球。

內容：

1．灌胃給藥

小鼠專用灌胃針由注射器和喂管組成，喂管長約1nm，喂管尖端焊有一金屬小圓球，金屬球中空，用途是防止喂管插入時造成損傷。金屬球彎成20度角，以適應口腔與食道之間彎曲。將喂管插頭緊緊連接在注射器的接口上，吸入定量的藥液；左手捉住小鼠，右手拿起準備好的注射器。將喂管針頭尖端防放進小鼠口咽部，順咽后壁輕輕往下推，喂管會順著食管滑入小鼠的胃，插入深度約3cm。用中指與拇指捏住針筒，食指按著針竿的頭慢慢往下壓，即可將注射器忠的藥液灌入小鼠的胃中。在插入過程中如遇到阻力或可看見1/3的針管，則江喂管取出重新插入，因為這時灌胃并沒有插入胃中。

2．注射給藥

（1）皮下注射給藥

皮下注射給藥是將藥液推入皮下結締組織，經毛細血管、淋巴管吸收進入血液循環的過程。作皮下注射常選項背或大腿內側的皮膚。操作時，常規消毒注射部位皮膚，然后將皮膚提起，注射針頭取一鈍角角度刺入皮下，把針頭輕輕向左右擺動，易擺動則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸，如無回血，可緩慢地將藥物注入皮下。拔針時左手拇、食指捏住進針部位片刻，以防止藥物外漏。注射量約為0.1-0.3ml/10g體重。

（2）皮內注射給藥

是將藥液注入皮膚的表皮和真皮之間，觀察皮膚血管的通透性變化或皮內反應，接種、過敏實驗等一般作皮內注射。先將注射部位的被毛剪掉，局部常規消毒，左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊，在兩指之間，用結核菌素注射器連接4.5針頭穿刺，針頭進入皮膚淺層，再向上挑起并梢刺入，將藥液注入皮內。注射后皮膚出現一白色小皮丘，而皮膚上的毛孔極為明顯。注射量為0.1ml/次。

（3）肌肉注射給藥

小鼠體積小，肌肉少，很少采用肌肉注射。當給小鼠注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時，采用肌肉注射。操作時1人保定小鼠，另一人用左手抓住小鼠的1條后肢，右手拿注射器。將注射器與半腱肌呈60°角迅速插入1/4，注入藥液。用藥量：不超過0.1ml/10g體重。

(4)靜脈注射給藥

將小鼠放在金屬籠或鼠夾中，通過金屬籠或鼠夾的孔拉出尾巴，用左手抓住小鼠尾巴中部，小鼠的尾部有2條動脈和3條靜脈，2條動脈分別在尾部的背側面和腹側面，3條靜脈呈品字型分布，一般采用左右兩側的靜脈。拔去沿尾部靜脈走向的毛，置尾巴于45-50℃溫水中浸泡幾分鐘或用75%酒精棉球反復擦拭尾部，以達到消毒和使尾部血管擴張及軟化表皮角質的目的。當尾部靜脈注射時,以左手拇指和食指捏住鼠尾兩惻，使靜脈更為充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指夾住尾巴的末梢，右手持4號針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于30° 角)，從尾巴的下1/4處進針，開始注入藥物時應緩慢，仔細觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現，說明已刺入血管，可正式注入藥物。有的實驗需連日反復尾靜脈注射給藥，注射部位應盡可能從尾端開始，按次序向尾根部移動，更換血管位置注射給藥。注射量為0.05-0.1ml/10g體重。拔出針頭后，用拇指按住注射部位輕壓1-2min，防止出血。

（5）腹腔注射

左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部，右手持注射器將針頭在下腹部近腹白線的兩側進行穿刺，針頭刺入皮膚后進針3nm左右，接著使注射針頭與皮膚呈45°角刺入腹肌，穿過腹肌進入腹膜腔，當針尖穿過腹肌進入腹膜腔后抵抗感消失。固定針頭，保持針尖不動，回抽針栓，如無回血、腸液和尿液后即可注射藥液。注射量為0.1-0.2ml/10g體重。

2、豚鼠的給藥

1）皮下注射給藥

皮下注射部位取頸背、腋下、側腹或豚鼠后大腿的內側，注射時以左手拇指和食指提起豚鼠皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下。

2）肌肉注射給藥

選用大腿外側肌肉進行注射。操作時1人保定豚鼠，另一人用左手抓住豚鼠的1條后肢，右手拿注射器。將注射器與半腱肌呈60°角迅速插入1/4，注入藥液。用藥量：不超過0.1ml/10g體重。

3、家兔的給藥

1）靜脈注射 兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動脈，耳外緣為靜脈。內緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號針頭盡量從靜脈的遠端刺入，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。

2）皮下注射 注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側，豚鼠在后大腿的內側或小腹部；大白鼠可在側下腹部。兔在背部或耳根部注射。

3）肌肉注射

肌肉注射應選肌肉發達，無大血管通過的部位，一般多選臀部。注射時垂直迅速刺入肌肉，回抽針栓如無回血，即可進行注射。

4）腹腔注射

用家兔做實驗時，進針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。

小白鼠胰島素驚厥

基本原理

胰島素是調節機體血糖的激素之一，當體內胰島素含量增高時，便引起血糖下降，動物出現驚厥現象。動物與器材

小白鼠數只、1ml注射器、鼠籠、胰島素溶液（2μ/ml）、50%葡萄糖溶液、酸性生理鹽水。方法與步驟

1．取4只小白鼠稱重后，分實驗組和對照組，每組2只。2．給實驗組動物腹腔注射胰島素溶液（0.1ml/10g體重）。3．給對照組動物腹腔注射等量的酸性生理鹽水。4．將兩組動物都放在30—37℃的環境中，并記下時間，注意觀察并比較兩組動物的神態、姿勢及活動情況。

5．當動物出現角弓反張、亂滾等驚厥反應時，記下時間，并立即皮下注射葡萄糖溶液（0.1ml/10g體重）。

6．比較對照組動物、注射葡萄糖的動物、以及出現驚厥而未經搶救的動物的活動情況，并分析所得的結果。注意事項

1．動物在實驗前必須饑餓18—24h。2．一定要用pH2.5—3.5的酸性生理鹽水配制胰島素溶液。因為胰島素在酸性環境中才有效應。

3．酸性生理鹽水的配制將10ml0.1mol/LHCl加入300ml生理鹽水中，調整其pH值在2.5—3.5，如果偏堿，可加入同樣濃度的鹽酸調整。

4．注射了胰島素的動物最好放在30—37℃環境中保溫，夏天可為室溫，冬天則應高些，可到36—37℃。因溫度過低，反應出現較慢。思考題

試分析糖尿病產生的原因及治療方法。

實驗

四、實驗動物的全身麻醉、損毀小白鼠小腦的效應

1、實驗動物的全身麻醉 目的：

了解影響實驗動物麻醉的因素； 了解并熟悉實驗動物的麻醉方法； 掌握大、小白鼠的吸入麻醉法。原理：

麻醉(anesthesia)的基本任務是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。

全身麻醉方法：麻醉藥經呼吸道吸入或靜脈、肌肉注射，產生中樞神經系統抑制，呈現神志消失，全身不感疼痛，肌肉松弛和反射抑制等現象，這種方法稱全身麻醉。其特點為抑制深淺與藥物在血液內的濃度有關，當麻醉藥從體內排出或在體內代謝破壞后，動物逐漸清醒，不留后遺癥。

用品：注射器、乙醚、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙酯、內容：實驗動物的麻醉是一項復雜系統的工作。正確的麻醉處理，是動物實驗成功的有力保障。而麻醉處理不當，會給實驗結果帶來難以分析的誤差。要想獲得良好的麻醉效果，除掌握實驗動物麻醉的基本知識和技術、遵循科學的麻醉程序外，還應了解影響實驗動物麻醉的各種因素，如動物因素、環境因素等。

1、動物因素

1、年齡和體重

動物對藥物的反應隨年齡的不同而有差異。有人將大鼠、小鼠按年齡分成幼年、成年和老年3組，觀察年齡對乙醇、戊烷和二氯乙烷等急性毒性的影響。按LD50及麻醉濃度觀察，敏感性顯示為幼年>成年>老年。

體重小的動物每單位體重的基礎代謝率較大動物高，因此，動物越小，每單位體重所需的麻醉藥劑量越大。一些慢性實驗，觀察時間較長，可選擇年幼、體重較小的動物做實驗。

2、性別 實驗證明，不同性別的動物對同一藥物的敏感性不同，對各種刺激的反應也不盡一致，雌性動物性周期不同階段和懷孕、授乳時的機體反應性有較大的改變，因此，一般情況優先選雄性動物或雌雄各半做實驗。

3、生理和健康狀況 體瘦、肌肉發達的動物較脂肪多的動物所需麻醉藥量大，這是因為相對非代謝組織，其基礎代謝率較低。活動可增加代謝率，因此，好動的動物所需的麻醉量大。身體狀況差的動物，所需麻醉藥量小耐受性降低。易發生中毒現象。

4、動物飼養

保證足夠的營養供應是維持動物健康的重要因素，其中飼料對動物的關系更為密切。動物的生長、發育、繁殖、抵御疾病的能力及一切生命活動都依賴于營養豐富的飼料。動物在麻醉之前一周應提前到位，給于精心的飼養管理，使其處于良好的健康狀態。

2、環境因素

1、溫度

在一定范圍內，溫度緩慢的變化，機體可以進行自動調節與之相適應。但變化莫測過大或過急，對機體將產生行為和生理等不良影響。因此，實驗環境溫度過高或過低都能導致機體抵抗力下降，對麻醉藥物的敏感性升高，易發生中毒現象。因此影響麻醉效果。

2、濕度；

3、空氣的流速和清潔度 方法：

1.吸入麻醉法 麻醉藥以蒸氣或氣體狀態經呼吸道吸入而產生麻醉者，稱吸入麻醉，常用乙醚作麻醉藥。吸入法對多數動物有良好的麻醉效果，其優點是易于調節麻醉的深度和較快的終止麻醉，缺點是中、小型動物較適用，對大型動物如狗的吸入麻醉操作復雜，通常不用。

具體方法是：使用乙醚麻醉兔及大小鼠時，可將動物放入玻璃麻醉箱內，把裝有浸潤乙醚棉球的小燒杯放入麻醉箱，然后觀察動物。開始動物自主活動，不久動物出現異常興奮，不停地掙扎，隨后排出大小便。漸漸地動物由興奮轉為抑制，倒下不動，呼吸變慢。如動物四肢緊張度明顯減低，角膜反射遲鈍，皮膚痛覺消失，則表示動物已進入麻醉，可行手術和操作。在實驗過程中應隨時觀察動物的變化，必要時把乙醚燒杯放在動物鼻部，以維持麻醉的時間與深度。2.注射麻醉法 常用的麻醉藥有戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙酯等。大、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射法進行全身麻醉。狗、兔等動物既可腹腔注射給藥，也可靜脈注射給藥。在麻醉興奮期出現時，動物掙扎不安，為防止注射針滑脫，常用吸入麻醉法進行誘導，待動物安靜后再行腹腔或靜脈穿刺給藥麻醉。在注射麻醉藥物時，先用麻醉藥總量的三分之二，密切觀察動物生命體征的變化，如已達到所需麻醉的程度，余下的麻醉藥則不用，避免麻醉過深抑制延腦呼吸中樞導致動物死亡。注意事項

1、麻醉劑的用量，除參照一般標準外，還應考慮個體對藥物的耐受性不同，而且體重與所需劑量的關系也并不是絕對成正比的。一般說，衰弱和過胖的動物，其單位體重所需劑量較小，在使用麻醉劑過程中，隨時檢查動物的反應情況，尤其是采用靜脈注射，絕不可將按體重計算出的用量匆忙進行注射。

2、動物在麻醉期體溫容易下降，要采取保溫措施。

3、靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張、角膜反射和對皮膚夾捏的反應，當這些活動明顯減弱或消失時，應立即停止注射。配制的藥液濃度要適中不可過高，以免麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。

4、作慢性實驗時，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應加熱至動物體溫水平。思考題

小結在操作過程中，哪些因素可能影響實驗動物麻醉效果？

常用的麻醉劑

動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發性麻醉劑、非揮發性麻醉劑和中藥麻醉劑。1.揮發性麻醉劑 這類麻藥包括乙醚、氯仿等。乙醚是常用的吸入麻醉劑，乙醚揮發性很強，有特殊的氣味，為易燃品，適用于各種動物（雞除外），乙醚的作用是抑制中樞神經系統。其特點是安全范圍大，肌肉能完全松弛，對肝和腎的毒性較小，麻醉的誘導期和蘇醒較短，動物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后蘇醒較快。其副作用是對呼吸道和結膜刺激性強，胃腸道反應增高，局部刺激作用大，可引起上呼吸道黏膜液體分泌增多，易發生呼吸道阻塞，使用時應小心。2.非揮發性麻醉劑 這類麻醉劑種類較多，包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平穩，動物無明顯掙扎現象。但缺點是蘇醒較慢。（1）戊巴比妥鈉：為中效巴比妥類藥物。戊巴比妥鈉，是常用的麻醉劑，有獸用、人獸共用的產品，使用時應注意藥品質量。（2）硫噴妥鈉：硫噴妥鈉為超速效巴比妥類藥物，為淡黃色粉末，有硫臭，易吸水，裝在安瓶中保存。其水溶液不穩定，故必須臨時配制，常配濃度為1%~5%，在0～4℃冰箱中保存，置7天之內，其分解甚微；在室溫中則只能保存24h。如見溶液色呈深黃、混濁，即表示已分解，不能使用。該藥麻醉誘導和蘇醒時間短，一次用藥僅可維持數分鐘。因此，一般用作為誘導麻醉或基礎麻醉。其副作用：對呼吸系統有明顯的抑制作用，不宜與嗎啡合用。（3）氯胺酮：為中效巴比妥藥物，常用其鹽酸鹽。靜脈或肌肉給藥后，很快起到麻醉作用，但維持時間較短，一般僅10～20min。為了延長時間，可重復給藥。其副作用是心率加快，血壓升高，有時還可引起動物嘔吐等。（4）水合氯 11 醛：此藥為無色透明棱狀結晶，有穿透性的臭氣及腐蝕性苦味。其溶解度較小，常配濃度為5％～10％。配制后的溶液易沉淀，用時先在水浴鍋中適量加熱，促其融解。作用特點與巴比妥類藥物相似，似一種安全有效的鎮靜催眠藥，能起到全身麻醉作用，其麻醉量與中毒量很接近，故安全范圍小，使用時應注意。其副作用為對皮膚和粘膜有較強的刺激作用。（5）氨基甲酸乙酯（烏拉坦）：此藥是比較溫和的麻醉藥，安全度大。多數實驗動物都可使用，更使用于小動物。一般用作基礎麻醉，如實驗全部過程都用此藥麻醉時，動物保溫尤為重要。使用時常配成20%～25%水溶液，犬、貓、兔直腸灌注1.5g/kg體重；皮下、靜脈、腹腔注射0.75～1g/kg體重。當與水合氯醛按1：1比例合并麻醉時，效果更好。但在作靜脈注射時必須溶在生理鹽水中，配成5%或10%的溶液，即每千克體重注射10～20ml。蛙類：2g/kg體重，由背部淋巴囊注射。鳥類：1.25g/kg體重，由肌肉注入。鼠：1.5～2g/kg體重，由腹腔注射。（6）異戊巴比妥鈉：常配成5％～10％的水溶液，作用和戊巴比妥鈉相似。使用劑量和方法：犬、貓、兔腹腔和肌肉注射80～100mg/kg體重；靜脈注射40～50mg/kg體重；直腸灌注100mg/kg體重。鼠：腹腔注射100mg/kg體重。3.中藥麻醉劑 動物實驗時有時也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪菅堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得及普及，因而，多數實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。

2、豚鼠的局部麻醉 目的

1、了解并熟悉豚鼠的局部麻醉方法

2、掌握局部浸潤麻醉方法。用品

刀片、注射器、消毒干棉球、75%酒精棉球、普魯卡因、利多卡因。原理

用局部麻醉藥阻滯周圍神經末梢或神經干、神經節、神經叢的沖動傳導，產生局部性的麻醉區，稱為局部麻醉。其特點是動物保持清醒，對重要器官功能干擾輕微，麻醉并發癥少，是一種比較安全的麻醉方法。適用于大中型動物各種短時間內的實驗。豚鼠對麻醉藥物很敏感。內容

1.表面麻醉 利用局部麻醉藥的組織穿透作用，透過粘膜，阻滯表面的神經末梢，稱表面麻醉。在口腔及鼻腔粘膜、眼結膜、尿道等部位手術時，常把麻醉藥涂敷、滴入、噴于表面上，或尿道灌注給藥，使之麻醉。

2.局部浸潤麻醉：沿手術切口逐層注射麻醉藥，靠藥液的張力彌散，浸入組織,麻醉感覺神經末梢，稱局部浸潤麻醉。常用藥為普魯卡因。在施行局部浸 潤麻醉時，先固定好動物，用0.5～1％鹽酸普魯卡因皮內注射，使局部皮膚表面呈現一桔皮樣隆起，稱皮丘，然后從皮丘進針，向皮下分層注射，在擴大浸潤范圍時，針尖應從已浸潤過的部位刺入，直至要求麻醉區域的皮膚都浸潤為止。每次注射時，必須先抽注射器，以免將麻醉藥注入血管內引起中毒反應。3.區域阻滯麻醉：在手術區四周和底部注射麻醉藥阻斷疼痛的向心傳導,稱區域阻斷麻醉。常用藥為普魯卡因。

4.神經干(叢)阻滯麻醉：在神經干(叢)的周圍注射麻醉藥，阻滯其傳導,使其所支配的區域無疼痛，稱神經干(叢)阻滯麻醉。常用藥為利多卡因。

3、損毀小白鼠小腦的效應 目的：

1、掌握小白鼠的麻醉方法；

2、了解小腦的機能。基本原理

小腦具有維持身體平衡，調節肌緊張和協調肌肉運動等機能。當小腦損傷后，隨著破壞程度的不同，可表現出不同程度的肌緊張失調及平衡失調。動物與器材

小白鼠、常用手術器械、大頭針、麻醉口罩、乙醚、棉花。方法與步驟

1．用乙醚麻醉小鼠（注意仔細觀察呼吸，若呼吸變慢時則表示動物已麻醉）。2．自頭頂部至耳后沿正中線剪開皮膚，將頸肌向下剝離。透過透明的顱骨即可看清小腦的位置（圖9-6）用大頭針刺穿顱骨，直達小腦（2—3mm），攪毀該側小腦（注意不可深刺，以免損傷腦干）。

3．待小鼠清醒后，可見其向一側旋轉或翻滾。如損傷較輕，小鼠向健側旋轉；當損傷重時，則向損傷側翻滾。

4．將實驗用完的小鼠拉斷頸椎處死后棄之。思考題

根據實驗結果說明小腦的生理機能。

實驗

五、家兔的熱原實驗

目的

1、練習家兔的各種注射方法；

2、了解家兔熱源反應的基本原理。原理

家兔體溫變化十分靈敏，最易產生發熱反應，發熱反應典型、恒定，因此常選用家兔進行這方面的研究。方法與步驟

1、用體溫計測量實驗前家兔的正常體溫。

2、采用以下方法進行熱源實驗：給家兔靜脈注射傷寒一副傷寒四聯菌苗0.5～2.0ml/kg，菌苗含量應不低于100億/ml；皮下注射2%二硝基酚溶液（30毫克）15～20分鐘后開始發熱；肌注10%蛋白胨1.0g/Kg；皮下注射消毒脫脂牛奶3～5ml。

3、一至兩小時后，用體溫計再次測量家兔的體溫，看其有何變化。思考題

在熱源實驗操作過程中，你認為應注意哪些方面？

實驗

六、動物體內常見寄生蟲卵檢查

目的

1、學習常見實驗動物蟲卵標本的采集和檢查方法。

2、學會對不同蟲卵進行鑒定。用品

大鼠、小鼠、獼猴的糞便、示范片、蓋玻片、載玻片、目鏡測微尺、物鏡測微尺 方法

1、直接涂片法

包括糞便、血液、腸內容物等直接涂片檢查。取一載玻片,在其上加一滴生理鹽水,取少許糞便或腸內容物與生理鹽水混勻后于顯微鏡下觀察。血液可直接滴于載玻片上，制成涂片，加蓋玻片觀察。

2、蟲卵收集法

a.沉淀集卵法:取糞便加適量清水,混勻后過濾,重復數次至液體清亮為止,靜止沉淀十分鐘后,取底部沉淀物作鏡檢。此法適于檢查血吸蟲卵。

b.飽和鹽水漂浮法:利用蟲卵的比重小于飽和鹽水的原理,使線蟲卵和幾種絳蟲卵或包囊漂浮于液面上,提高檢查效果。實驗步驟和內容：

1、自然感染蠕蟲的調查

取獼猴糞便在盛有生理鹽水的培養皿中漂洗,直接查找寄生蟲蟲體和蟲卵,根據蟲體和蟲卵的形態,簽別蟲種。

2、直接涂片法或沉淀集卵法檢查寄生蟲卵。

3、觀察蛔蟲、蟯蟲、絳蟲和血吸蟲卵標本裝片。

注意:觀察各種蟲卵的大小、形狀、顏色、卵膜結構等以及各種蟲卵的特征

A、蛔蟲卵(線蟲綱一蟲體線形或長圓柱形,雌雄異體)受精卵為橢圓形,大小約40-60微米(35-50×45-76),卵殼的表面有一層凸凹不平的蛋白質膜,被膽汁染成棕黃色,整個蟲卵呈棕黃色。卵殼厚而透明。卵內有一近圓形的卵細胞。

未受精卵多為長橢圓形,大小約40一60微米(39-40×88-94),卵殼與蛋白質膜較薄,卵內充滿大小不等的屈光顆粒。

無論受精卵和未受精卵其蛋白質膜有時缺失,無蛋白質膜的受精卵是無色透明,請注意與其它蟲卵的區別。

B、蟯蟲(線蟲綱：蟲體細小,乳白色,似一白色線頭。)蟲卵為橢圓形,兩側不對稱,一側扁平,一側稍凸。大小約25-55微米(20-30×50-60),卵殼較厚,無色透明,內含幼蟲。

C、絳蟲(絳蟲綱：腹背扁平、帶狀、分節,雌雄同體,常見的有鏈狀帶絳蟲。)蟲卵近球形,較小,大小約45-70微米,蟲卵自孕節排出時卵殼己脫落,鏡下所見是具胚膜的六鉤蚴,胚膜較厚,棕黃色有放射狀的條紋。

D、血吸蟲(吸蟲綱一多有腹背扁平,舌狀或葉狀,有吸盤,雌雄異體,常見的有日本血吸蟲等。)蟲卵為橢圓形,淡黃色。大小約74-106×55-80微米,卵殼較薄無蓋,殼 的一側有小棘,一般在鏡下不易見到。成熟的卵內含有一個毛蚴。注意事項

1.高倍鏡下觀察必須加蓋玻片；

2.采用直接涂片法時，不要涂得太多，必須分散開，均勻； 3.觀察寄生蟲卵前，需在高倍鏡下校對目鏡每格的長度，才能算出蟲卵大小； 4.先在低倍鏡下觀察，發現后換為高倍鏡。實驗報告內容

1、繪出鏡下觀察到的蛔蟲、蟯蟲、絳蟲和血吸蟲卵。

2、概括總結蛔蟲、蟯蟲、絳蟲和血吸蟲卵的形態區別要點。

3、在整過操作過程中的注意事項。

實驗

七、雌性小鼠動情周期的檢查

目的

1、學習小鼠陰道內液體的采集方法；

2、了解在動情周期的不同階段，小鼠陰道涂片的組織學變化。原理

哺乳類的雌性動物在性成熟后，出現動情周期變化，其中嚙齒類動物在動情周期不同階段，陰道粘膜發生比較典型的變化。因此，根椐陰道涂片的細胞學改變，可以推斷卵巢功能的周期性變化。

未成熟的大、小白鼠尚無自然的動情周期，但當注射絨毛膜促性腺激素后，則可使其提前出現。用品

顯微鏡、棉簽、載玻片、生理鹽水、堿性美藍溶液（配制：美藍0.3g，溶于95%的乙醇30ml中，再加蒸餾水至100ml及10%NaOH溶液0.1ml）等。動物

性成熟的雌性小白鼠。方法與步驟

1、小鼠陰道內液體取法

取陰道內液體有下列三種方法：

（1）沖洗法 將裝有消毒生理鹽水的滴管輕輕插入動物陰道內，按壓滴管橡皮頭，將生理鹽水打入陰道，然后吸出，如此2-3次。最后將滴管中的陰道沖洗液滴在載玻片上。

（2）沾取法 將消毒的細棉簽用生理鹽水潤濕，輕輕插入動物陰道內0.5cm，慢慢轉動一下取出。

（3）刮取法 用光滑的玻璃小勺或牛角制 小刮片慢慢插入陰道內，在陰道壁輕輕刮取一點陰道內含物。

2、涂片

將帶有陰道內含物的細棉簽等在載玻片上均勻的轉動做成涂片，然后將涂片在空氣中自然干燥。

3、染色

用堿性美藍溶液染色5min左右，用蒸餾水沖洗剩余的美藍溶液（注意：應從涂片邊緣慢慢沖洗，切不要把細胞沖洗掉），并使之干燥。

4、觀察結果

在顯微鏡下觀察陰道分泌物涂片的組織學變化，確定動情周期變化的不同階 段。

階段

表 小白鼠性周期陰道分泌物涂片變化 持續時卵巢變化 涂片可見 間/h 卵泡加速大量有核上皮細胞，少量角化

生長 細胞

卵泡成熟、滿視野角化上皮細胞，少量有

排卵 核上皮細胞

黃體生成 角化上皮細胞及白細胞 動情前期

動情期

動情后期

動情 黃體退化 大量白細胞及少量黏液 間期

注意事項：

1.采取陰道（下口）內分泌物，不是腸道內容物（上口）； 2.制作涂片要均勻；

3.自然干燥后，再染色8-10min；

4.用蒸餾水沖洗剩余的美藍溶液時，應從涂片邊緣慢慢沖洗； 5.在鏡下鏡檢（如用高倍鏡，必須加蓋玻片）。

實驗

八、小鼠下頜骨形態分析

目的與原理

小鼠的下頜骨形態有高度的遺傳穩定性，不同品種或品系小鼠下頜骨的形態、大小不同，因此該項技術可以作為純系小鼠、純系大鼠遺傳質量的檢測方法之一。下頜骨形態分析是一種定量技術。可闡明許多遺傳學差異。主要是對小鼠或大鼠右側下頜骨形態做對比分析，通過多變量分析，建立判別函數進行性別判別。

常規標本制備方法

1.隨機抽取小鼠數只（60日齡，體重相當）處死，取下頭顱。

2.投入沸水中煮約10分鐘，冷卻后把頭顱上的組織仔細剔除，放在含有木瓜蛋白酶的自來水中（下頜骨帶的殘肉與酶的比例為1:25)，水的PH為4.5，消化溫度為40—60℃，最適溫度為52 ℃，保溫過夜，取出下頜骨，用小鑷子去掉殘肉和門齒，再用水洗凈。

3.自然干燥，存放于塑料袋中。

4.制作坐標底片，用于測量下頜骨有關變量。

5.在坐標底片上用兩個平直的玻璃細條粘成直角，成L型，與坐標的縱軸和橫軸相吻合，壓平待用。動物

小白鼠 方法與步驟

1.下頜骨的11個測量點參見下圖。

2.將待測標本平放在解剖鏡載物臺的標尺上，下頜骨前端和下部邊緣與標尺上的L型玻璃條的X及Y軸分別貼緊放平，將每個標本11個變量的結果記錄下來，交給老師，統一處理。

3、打開SPSS，輸入數據；定義變量；

4、操作步驟：Analyze→Classify →Discriminant →open discriminant analyze;Gender →grouping variables(define range);all variables →independent;Method →enter independent together;open statistics →function coefficients →Fisher’s,unstandardized →continue;open classify →display→summary table,casewise results;prior probabilities →All groups equal → continue →OK。結果分析：求出判別系數和判別函數；

2、得到判別代結果和判別率；

3、驗證回代和新標本判別。注意事項

1、標本要保證完整性；

2、小白鼠雌雄的體重要分別相近；

3、突變性的標本要舍去；

4、測量要注意準確；

5、每組標本的性別，不要混淆。

實驗

九、家兔的神經分離、氣管插管

目的

1、學習氣管插管術；

2、學習分離及識別有關的血管和神經；

3、學習測定家兔呼吸運動的方法。用品

常用手術器械、氣體插管、玻璃分針、刺激器、張力換能器、鐵夾臺、25%氨基甲酸乙酯、3%乳酸。動物

家兔 方法與步驟

1、麻醉并固定動物

每組取家兔一只,稱重,按40mg/kg體重的劑量由耳緣靜脈緩慢注射戊巴比妥鈉溶液，將動物麻醉。當動物四肢松軟,呼吸變深變慢,角膜反射遲鈍時,表明動物己被麻醉，即可停止注射。將麻醉動物仰臥于兔體手術臺上,固定好頭部和四肢，將兔舌拉出以免阻塞呼吸道。注意：緩慢注射；兔舌拉出；頸部必須放正拉直。

2、頸部手術

用剪毛剪剪去頸部被毛,用手術刀切開頸部皮膚(5-7cm)長,分離皮下結締組織和肌肉,暴露氣管,分離氣管和食管,在氣管下穿一棉線備用。

3、頸部神經及血管分離術

3.1 頸總動脈的分離 在頸部,神經與頸總動脈被結締組織膜束在一起,形成血管神經束,位于氣管的外側,其腹面被胸骨舌骨肌和胸骨甲狀肌所覆蓋。用玻璃分針將氣管兩側上述肌肉分離后,用左手拇指和食指輕輕捏住分離的左側肌肉和皮膚,稍向外翻,即可將血管神經束翻于食指之上。然后用玻璃分針分離頸總動脈外的結締組織膜,將動脈分離約4cm長,并向頭端追索到甲狀軟骨上緣,暴露頸動脈竇,在頸動脈下穿一棉線。用同樣的方法可分離右側頸總動脈。3.2 頸部神 經的分離 輕輕提起左側頸總動脈下的線,即可清楚看到三條粗細不同的神經。其中迷走神經最粗,呈白色，一般位于外側,易于識別；交感神經較細,略呈灰色，一般位于內側；減壓神經最細，呈白色,一般位于迷走神經和交感神經之間。

由于家兔品種不同及個體間的差異,三條神經的位置有較大的變異,應注意識別。識別準確后,用玻璃分針順著神經的方向,小心分離其外的結締組織膜,-般先分離減壓神經,然后再分離交感神經和迷走神經,并分別在各神經下穿不同顏色的線（雙線）備用。

4、氣管切開術

在喉頭下2-3cm處的氣管上作一“T”型切口,將與氣管口徑相近的氣管插管向心方向插入氣管中，用線結扎,并將余線固定于氣管插管的分叉處,以防氣管插管脫落。

5、腹部手術

剪去劍突部位腹部被毛,切開胸骨下端劍突部位的皮膚,并沿腹白線再切開長約2cm的切口。細心分離劍突軟骨并結扎,線的另一端連于張力換能器上,張力換能器連接于計算機BL-410的 1 通道上。

6、開機→BL-410生物機能實驗系統→實驗項目→呼吸實驗→呼吸運動調節 這時可看到在屏幕上顯示4個波形窗口,鼠標左雙擊1通道窗口,即只顯示出1通道波形窗口,在屏幕右下角選實驗標記。鼠標點開始即可描記呼吸運動曲線。

7、觀察項目

7.1 慢速記錄正常的呼吸運動曲線,注意分清吸氣與呼氣時的曲線方向； 7.2 增加無效腔對呼吸運動的影響 將橡皮管(長約lm,內徑0.7cm)連于氣管插管的一個側管上,用止血鉗夾閉另一側管,使無效腔增加,觀察并記錄呼吸運動的變化。當呼吸運動出現明顯改變后立即去掉橡皮管使呼吸運動恢復正常；

7.3 窒息對呼吸運動的影響 將氣管插管的兩個側管同時夾閉,觀察并記錄呼吸運動的變化；

7.4 血中酸性物質增多的效應 取5ml注射器,由耳緣靜脈較快地注入3%乳酸溶液2m1,觀察呼吸運動的變化；

7.5 分別刺激迷走神經中樞端和外周端,觀察并記錄呼吸運動。注意事項

1、實驗過程中，要防止動脈套管刺破頸總動脈和發生凝血現象；

2、剪去一段劍突軟骨時，不能剪得過深，以免傷及其下附著的膈肌，并要保證劍突軟骨與胸骨完全分離；

3、在分離神經及穿線時,切勿損傷與其伴行的神經；

4、在頸總動脈近甲狀腺處有甲狀腺前動脈,分離時應稍靠下方,以免損傷；

5、注射要緩慢，兔舌要拉出，頸部必須放正拉直。

實驗

十、實驗動物環境因子檢測

目的

1、正確使用環境因子檢測儀器；

2、了解噪音計、光度計、溫度計、濕度計的測定原理；

3、學習測定方法。內容

測定各種實驗動物環境的照度、噪音、溫度和濕度。

實驗

十一、小白鼠走迷宮

目的

1.通過觀察、分析小白鼠學習和記憶過程，理解大腦在動物行為機制建立中的作用。

2.通過實驗，了解影響動物學習和記憶能力的因素。

3.通過實驗，了解數據統計分析在科學研究中的重要作用。實驗原理

老鼠接近人類，通過老鼠的實驗可以間接地了解人腦的功能。學習和記憶是神經系統高級中樞的重要機能之一。學習是神經系統不斷接受環境刺激而獲得的行為習慣或經驗；獲得的行為習慣或經驗維持一定時間的能力就是記憶。動物的學習和記憶能力對其生存具有重要意義。

在人為設置的迷宮里，動物通過不斷感受復雜通道的結構，調整和改進自己的行為。隨著訓練次數的增加，條件反射逐漸建立，以至在大腦皮層形成記憶。通過記錄動物搜尋食物的時間長短可以對此加以評價。同時也可以考察一些刺激（如饑餓和化學藥劑）對記憶力的影響。

實驗材料

小白鼠。用品

由學生根據實驗需要自行準備。實驗步驟

（一）實驗準備

1.用硬紙板或木板構建迷宮。高度以小白鼠不能爬上為宜，上面也可以蓋上一玻璃板。

1、選擇健康活潑的小白鼠5只，要求年齡和體重一致，實驗前饑餓一天，但提供水。另選擇一只未經饑餓處理的小白鼠備用。在迷宮內特定位置放置一塊面包。

（二）實驗項目

1.饑餓處理的小白鼠1只，放置在迷宮入口，記錄其找到食物所需時間。5分鐘后，重復上述步驟，同樣的間隔時間對其進行四次實驗，每只小白鼠共計進 行5次實驗。

2.對其余四只饑餓處理的小白鼠進行5次實驗，記錄每只小白鼠找到食物所需時間。

3.數據處理 根據實驗數據，求出5只小白鼠每次實驗找到食物所需時間的平均值。以實驗次數為橫坐標，找到食物的時間為縱坐標，建立直角坐標系，制作標準曲線。把上述平均值標在坐標紙上并連接各點，從而得到實驗數據與尋找時間的關系曲線。觀察圖形的變化趨勢。

4.取未經饑餓處理的小白鼠進行步驟1，把記錄的時間與標準曲線進行對比，分析小白鼠記憶力的變化。

5.取1只饑餓處理的小白鼠稱重，皮下注射120mg/kgNaNO2，然后讓其走迷宮，重復步驟1，將所記錄的時間與標準曲線對比，分析小白鼠記憶力的變化。

6.另取1只饑餓處理的小白鼠稱重，測試前半小時將小白鼠灌服20%-40%酒精100ml/kg。將所記錄的時間與標準曲線進行對比，分析小白鼠記憶力的變化。

7.再取1只饑餓處理的小白鼠靜脈注射乙酰膽堿，重復步驟1，將所記錄的時間與標準曲線對比，分析小白鼠記憶力的變化

實驗改進點

1、實驗用年老的小鼠與小白鼠進行對比考察年齡對學習和記憶力的影響。

2、實驗考察乙酰膽堿和NaNO2對小白鼠學習和記憶力的影響。

3、實驗注意事項

1、選材為活潑健康的小白鼠，不能選運動機能和記憶力差的小白鼠。

2、為了避免嗅覺對測試的影響，做每一個實驗項目前都應對迷宮進行清潔。實驗分工

和 負責找資料，負責整理和制作，實驗改進點由這幾人討論。

實驗預期結果

1、隨著小白鼠學習和記憶過程的進行，小白鼠找到食物的時間會越來越短。

2、未經饑餓處理的小白鼠由于沒有饑餓的刺激，找到食物的時間會更長。

3、由于NaNO2是缺氧劑，會造成腦部缺氧，從而破壞記憶的保持，因此小白鼠找到食物的時間會變長。

4、測試前半小時將小白鼠灌服20%-40%酒精可以明顯干擾記憶的再現，因此小白鼠找到食物的時間會變長。

5、小白鼠腦部乙酰膽堿的增加會增強記憶力，因此小白鼠找到食物的時間會變短。思考

1.小白鼠的年齡對學習和記憶有沒有影響？ 2.人的大腦也和小白鼠有類似的結果嗎？ 3.乙酰膽堿在該實驗中的作用機理是什么？

實驗參考資料

《實驗動物和動物實驗技術》苗明三主編中國醫藥出版社.北京.1997.6 《動物生物學實驗技術》黃詩箋主編高等教育出版社 施普林出版社2001.8：109，131，132 《實驗動物學》羅滿林、顧為望主編中國農業出版社 2002.8P127-143.實驗十二 消化系統疾病動物模型建立及驗證（設計）

（一）病毒性肝炎模型

常用方法是注射乙型肝炎病人血清復制乙型肝炎模型。但大部分實驗動物對甲型肝炎病毒不易感。我國已有報導紅面獼猴、恒河猴、人及野生樹鼩種毒后出現人甲型肝炎現象。近年來發現某些鴨肝炎病毒的特征與人肝炎病毒十分相似，故用鴨作為人肝炎模型也開始增多。

（二）免疫性肝炎模型

慢性或遷延性肝炎患者體內存在著抗肝細胞成分抗體。1959年國外有人用肝組織懸液加弗氏佐劑免疫豚鼠，成功地誘發了肝細胞變性及壞死病變。也有人報導肝膜蛋白（LSP）加佐劑分次注射產生動物免疫性肝炎模型。

（三）胃、腸道潰瘍模型

在動物身上復制胃、腸道潰瘍的方法較多，但所用的方法不同，引起的潰瘍病變也各有特點。常用的方法有：

1．應激法 以各種強烈的傷害性刺激（如強迫制動、饑餓、寒冷等），引起動物發生應激性潰瘍。如把動物浸入冷水中或放在應激箱中不斷地遭受電刺激，使之劇烈不安，一晝夜即能引起胃粘膜出血及潰瘍。這種方法簡單，成功率達99%以上。

2．藥物法 給動物投服或注射一定量的組織胺、胃泌素、腎上腺類固醇、水楊酸鹽、血清素、利血平、保泰松等可造成動物胃腸潰瘍。如給豚鼠小劑量的組織胺，連續數天，可引起胃、十二指腸、食道等發生潰瘍。又如可用利血平、血清緊張素、阿斯匹林等誘發大白鼠或小白鼠的胃潰瘍。

3．燒灼法 用電極燒灼胃底部的胃壁，可造成象人的胃潰瘍病變；用濃醋酸給大鼠胃壁內注射或涂抹于胃壁漿膜面上可造成慢性潰瘍。燒灼法復制胃、腸道潰瘍模型的優點是方法簡便，潰瘍部位可由作者自己選擇。

4．結扎幽門法 選用大鼠、小鼠或豚鼠，麻醉后，無菌技術下在劍突下由腹正中切開腹壁皮膚及肌層，切口長約3cm，暴露胃，沿胃向右，辯清幽門和十二指腸的聯結處，避開血管，于其下穿線，將幽門完全結扎。術后絕對禁食禁水。幽門結扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，造成胃潰瘍。這類潰瘍復制方法簡單，發生快，成功率高，但病變較表淺，嚴格地說仍然屬于胃粘膜急性出血性糜爛，與人類胃潰瘍的典型病變差距較大，適于作探索抗潰瘍病藥物研究和胃潰瘍發病學方面的研究。

其他還可用外科手術方法從腸道上部排除可中和胃酸的堿性膽汁、胰 液或十二指腸液造成潰瘍。還可用刺激、損傷或毀損腦組織等方法造成潰瘍。

（四）胰腺炎模型

復制胰腺炎模型可采用使胰液外分泌發生潴留；使各種胰酶在胰管系統內活化；感染或某些微生物毒素的作用，影響胰腺的營養、代謝等。實驗動物選用狗、兔和大鼠。將狗自身膽注按0.5ml/kg體重緩慢注入狗胰腺體尾交界處的胰腺實質內，則可引起胰腺局部組織壞死及炎性浸潤，與人類急性胰腺炎和病變相似。用大腸桿菌懸液9億/ml，按1ml/kg體重，向兔胰管內逆進注射可誘發急性胰腺炎。另外也可采用大鼠腹腔內連續注射乙硫胺酸誘發成功胰腺炎模型。隨著乙硫胺酸注射時間的延長，胰腺組織可以出現廣泛進行性破壞和退化及胰酶水平的持續下降。

（五）糖尿病模型

糖尿病模型的復制方法采用注射致高血糖因子；手術切除胰腺的全部或大部；用四氧嘧啶（Alloxan）破壞胰島β細胞，造成胰性糖尿病；注射根皮苷使腎小管對糖的再吸收發生障礙并破壞酯酶致使葡萄糖磷酸化過程和脫磷酸過程障礙，引起根皮苷糖皮。

四氧嘧啶復制的糖尿病動物模型是目前研究人類糖尿病較好的方法，其實驗性糖尿病近似人類糖尿病，體內代謝障礙時有可能產生此種衍生物，胰島外分泌部不受損傷，幾乎所有常用實驗動物都可用來進行實驗研究。模型胰島的β細胞不是功能消失，而是功能不同程度的降低，有利于研究胰島組織再生和功能恢復，動物不必注射胰島素即可存活很久。大鼠造型劑量為12mg/100g體重，家兔為150～200mg/kg體重，狗約為50～60mg/kg體重。家兔根皮苷皮糖尿病造型劑量為0.5%根皮苷按15m/kg體重，皮下注射。注意所用四氧嘧啶和根皮苷溶液必須現配現用。

實驗

十三、骨質疏松動物模型建立和驗證（設計）