第一篇：術(shù)中快速冰凍切片技術(shù)工作制度

術(shù)中快速冰凍切片技術(shù)工作制度

手術(shù)中快速冷凍切片病理診斷（以下簡(jiǎn)稱“冷凍”）是將手術(shù)切下的病變組織在冷凍切片機(jī)中迅速冷凍后制成切片，進(jìn)行病理診斷。一般在30分鐘左右得出診斷意見，為臨床手術(shù)提供參考。冷凍是一種高技術(shù)、高難度、高風(fēng)險(xiǎn)的病理項(xiàng)目。其主要作用：⑴確定送檢標(biāo)本組織是否有病變存在；⑵確定病變或腫瘤的性質(zhì)；⑶確定手術(shù)切緣有否腫瘤；⑷確定送檢組織有否癌浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移等。但由于取材局限、標(biāo)本冰晶及時(shí)間短等問(wèn)題，冷凍切片質(zhì)量不能達(dá)到常規(guī)石蠟切片的精確度，診斷準(zhǔn)確率受到影響。可以出現(xiàn)以下情況： ⑴只能做良、惡性鑒別，為臨床提供一個(gè)參考性意見；（2）診斷困難，允許發(fā)延遲報(bào)告或等待石蠟切片診斷，發(fā)出最終報(bào)告；（3）冷凍診斷與常規(guī)石蠟診斷不符時(shí)，以石蠟切片報(bào)告為準(zhǔn)。“三甲”醫(yī)院要求冷凍診斷的準(zhǔn)確率≥96%。為減少和防止醫(yī)療差錯(cuò)和糾紛，有利于此項(xiàng)工作的規(guī)范化開展，特制定該制度。

1.“冷凍”預(yù)約規(guī)定：需做術(shù)中快速冷凍病理診斷時(shí)，各手術(shù)科室提前1～2天詳細(xì)填寫冷凍申請(qǐng)單（可用普通病理申請(qǐng)單代替）送病理科。要求盡可能填全各項(xiàng)內(nèi)容，注明做冷凍的具體年、月、日、時(shí)，以便病理科做好準(zhǔn)備；除填臨床診斷外，請(qǐng)?zhí)岢鲆鉀Q的問(wèn)題，如確定“病變性質(zhì)”、“切緣有否浸潤(rùn)”、”淋巴結(jié)有否轉(zhuǎn)移“等等。一般不提倡急診“冷凍”申請(qǐng)。如確需急診冷凍時(shí)，要及時(shí)與病理科主任聯(lián)系，說(shuō)明情況。病理科盡量創(chuàng)造條件，滿足臨床需要。2.病理科實(shí)行“冷凍查房“制度：病理各級(jí)醫(yī)師在手術(shù)前1日應(yīng)下病房查病人、看病歷或請(qǐng)病人來(lái)病理科接受查體，與主管醫(yī)師交換意見，全面了解有關(guān)冷凍方面的病人情況。

3.實(shí)行“手術(shù)中快速冷凍病理診斷知情同意書”（樣本附后）簽字制度。術(shù)前由臨床醫(yī)師向病人及其家屬談話，交代冷凍有關(guān)事項(xiàng)，征得其理解、同意并簽字。最后將知情同意書放入病歷中。4.單件標(biāo)本的冰凍切片制片應(yīng)在15分鐘內(nèi)完成。

5.冷凍病理報(bào)告實(shí)行三級(jí)醫(yī)師檢診及雙簽字制度。初級(jí)醫(yī)師參與取材閱片、中級(jí)醫(yī)師診斷、高級(jí)醫(yī)師復(fù)診。報(bào)告由中、高級(jí)醫(yī)師雙簽字。一般30分鐘左右發(fā)報(bào)告，遇特殊情況時(shí)間可以適當(dāng)延長(zhǎng)。6.遇到冷凍病理診斷中的交界性病變及“灰色病變”難以確診時(shí)，首先在科內(nèi)討論，如意見仍難以統(tǒng)一，不能勉強(qiáng)發(fā)報(bào)告。要及時(shí)向手術(shù)醫(yī)師通報(bào)情況，可向醫(yī)務(wù)處報(bào)告，協(xié)助派車去外院會(huì)診；或允許延緩出報(bào)告，必要時(shí)待常規(guī)石蠟切片后再診斷。臨床醫(yī)師和/或病理醫(yī)師要向患者及家屬講明情況，取得理解并記錄于病歷中。

7.建立冷凍報(bào)告登記及隨診制度：冷凍切片剩余組織，一律做石蠟切片對(duì)照。對(duì)與最后診斷不符的報(bào)告要組織相關(guān)醫(yī)師討論和隨診，以利提高診斷水平。

第二篇：卵巢腫瘤術(shù)中快速冰凍切片病理診斷分析

卵巢腫瘤術(shù)中快速冰凍切片病理診斷分析

【摘要】 目的 探討卵巢腫瘤術(shù)中快速冰凍切片的診斷價(jià)值，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)。方法 本次收集85例卵巢腫瘤患者作為研究對(duì)象，均為本院2009年3月～2013年9月收治，術(shù)中進(jìn)行快速冰凍切片病理診斷，并與術(shù)后常規(guī)石蠟切片進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果 本組85例患者快速冰凍切片與術(shù)后石蠟切片對(duì)照，總確診率為95.3%（81/85）。其中良性腫瘤確診率為100%（58/58），交界性腫瘤確診率為80%（8/10），惡性腫瘤確診率為88%（15/17）。誤診4例，誤診率為4.7%。結(jié)論 病理醫(yī)生與臨床醫(yī)生在術(shù)前及術(shù)中密切溝通，從實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果、病史、手術(shù)觀察等多方面分析，最終做出診斷，為臨床醫(yī)師提供卵巢腫瘤性質(zhì)，有助于臨床醫(yī)師選擇適宜的手術(shù)方式，應(yīng)用快速冰凍切片病理診斷的方法是確定手術(shù)方式和切除范圍的最佳手段。

【關(guān)鍵詞】 卵巢腫瘤；快速冰凍切片；病理診斷；準(zhǔn)確性

卵巢腫瘤種類繁多，可分為良性、惡性、交界性腫瘤，在婦科常見疾病類型占較高病發(fā)率，術(shù)前不易確診，婦產(chǎn)科醫(yī)生在手術(shù)中如僅憑肉眼觀察，難以確定腫瘤性質(zhì)。因腫瘤性質(zhì)不同，在治療方案的選擇上也存在較大差異。所以手術(shù)過(guò)程中確定腫瘤性質(zhì)及制定合理的手術(shù)治療方案所進(jìn)行的行快速冰凍切片病理診斷是完全必要的，更是對(duì)生育機(jī)能是否保留對(duì)側(cè)卵巢及手術(shù)范圍的選擇具有決定性作用[1]。作者就本院病理科2009年3月～2013年9月卵巢病變術(shù)中快速冰凍切片病理診斷進(jìn)行回顧性分析，旨在提高卵巢腫瘤冰凍切片病理診斷的準(zhǔn)確性。資料與方法

1.1 一般資料 本次共選擇研究對(duì)象85例，年齡16～77歲，平均年齡（38.4±3.1）歲。均與WHO卵巢腫瘤組織學(xué)制定的相關(guān)分類標(biāo)準(zhǔn)符合，其中良性58例，交界性10例，惡性17例。術(shù)后均行常規(guī)石蠟切片病理診斷，與術(shù)中快速冰凍切片病理診斷對(duì)照。

1.2 方法 標(biāo)本均為術(shù)中送檢新鮮組織，由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師取材，術(shù)中仔細(xì)觀察腫物表面并逐層切開腫物，選代表性的部位取材，腫塊病變直徑2.5 cm的腫塊根據(jù)腫瘤情況酌取2～3塊，置標(biāo)本于涂有OCT包埋劑的凍頭上，恒溫冷凍切片機(jī)內(nèi)冰凍切片，HE染色、光鏡診斷。20 min發(fā)出冰凍報(bào)告，報(bào)告分為惡性腫瘤、良性腫瘤、交界性腫瘤及延遲診斷。冰凍報(bào)告發(fā)出后，將原冰凍剩余組織做石蠟切片，復(fù)習(xí)原冰凍切片及石蠟切片，將診斷分為三類：①確診：指冰凍切片診斷與石蠟切片診斷完全相同或良惡性原則一致。②描述性診斷（延遲診斷）：指冰凍切片不能明確診斷，需待石蠟切片最后診斷。③誤診：腫瘤良惡性診斷錯(cuò)誤。分假陽(yáng)性和假陰性（假陽(yáng)性指良性誤診為惡性，假陰性指惡性誤診為良性）。結(jié)果

本組85例患者快速冰凍切片與術(shù)后石蠟切片診斷結(jié)果對(duì)照，總確診率為95.3%（81/85）。其中良性腫瘤確診率為100%（58/58）；交界性腫瘤確診率為80%（8/10），惡性腫瘤確診率為88%（15/17）。誤診4例，誤診率4.7%，85例冰凍切片確診81例，診斷符合率95.3%，見表1。2例交界性腫瘤的誤診原因，1例由于為取材不當(dāng)，另1例由于制片不良，加上讀片經(jīng)驗(yàn)不足，未考慮由于制片不良導(dǎo)致的假象及干擾因素；而2例惡性腫瘤的誤診原因，1例由于取材的局限性，送檢標(biāo)本的體積大，取材不夠準(zhǔn)確及不夠全面，局部癌變的區(qū)域未被發(fā)現(xiàn)；另1例為送檢組織過(guò)少，加上患者年齡年輕，診斷時(shí)過(guò)于保守。討論

從臨床治療的角度，術(shù)中冰凍切片病理診斷解決了手術(shù)過(guò)程中難以診斷其疾病良、惡性的問(wèn)題。近年來(lái)，經(jīng)濟(jì)體制改革的迅猛發(fā)展顯著帶動(dòng)了醫(yī)療科技水平，公眾對(duì)診療服務(wù)要求不斷提高，婦科卵巢腫瘤患者在臨床具有一定特殊性，及時(shí)明確診斷，并制定有效治療方案是保障預(yù)后，提高患者生存質(zhì)量，維護(hù)家庭和諧和社會(huì)安寧的關(guān)鍵。卵巢腫瘤種類繁多，臨床無(wú)法確診。卵巢腫瘤患者的治療中，手術(shù)治療是最常用的也是最重要的治療方法。而即使輔以B超，CT等檢查，卵巢腫瘤在術(shù)前不易確診，手術(shù)醫(yī)生憑其肉眼也無(wú)法判定腫瘤性質(zhì)。而術(shù)中快速冰凍切片作為一項(xiàng)快速組織學(xué)診斷手段，在臨床已普遍應(yīng)用。術(shù)中冰凍可以為婦科醫(yī)生在手術(shù)中提供病變性質(zhì)（良性、交界性、惡性），從而決定適當(dāng)?shù)氖中g(shù)方案。冰凍切片診斷可預(yù)防手術(shù)切除過(guò)度或不足，有的也可避免不必要的二次手術(shù)。

本次研究以快速冰凍切片在卵巢腫瘤臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值為重點(diǎn)，選取相關(guān)病例展開探討，結(jié)合本次選取患者年齡結(jié)構(gòu)示，平均年齡（38.4±3.1）歲，提示處于生育期、有活躍且旺盛生育功能的女性為卵巢腫瘤高發(fā)人群，與相關(guān)研究[3，4]結(jié)論一致。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出卵巢腫瘤采用快速冰凍切片診斷準(zhǔn)確性居較高水平，確診率為95.3%，與文獻(xiàn)報(bào)道冰凍切片診斷腫瘤的準(zhǔn)確率為94%～97%[2]接近。熟練掌握WHO卵巢腫瘤分類是具備開展快速冰凍切片診斷的病理醫(yī)生的基本要求。較高的確診率是臨床制定恰當(dāng)?shù)闹委煼桨傅目煽勘ＷC。

提高快速冰凍切片診斷卵巢腫瘤的準(zhǔn)確率在于以下幾個(gè)方面：①在手術(shù)前對(duì)卵巢腫瘤患者的CT、B超等常規(guī)檢查結(jié)果和各種臨床表現(xiàn)等方面病史及腫瘤分布情況進(jìn)行詳細(xì)掌握，并且在手術(shù)過(guò)程中及時(shí)和臨床醫(yī)師進(jìn)行溝通；②對(duì)送檢的冰凍標(biāo)本要認(rèn)真仔細(xì)的檢查確定病變部位和器官，要查看標(biāo)本的完整性，有無(wú)包膜，包膜破損否，與周圍組織有無(wú)粘連，切面為囊性、實(shí)性，還是囊實(shí)性，囊性區(qū)囊壁局部是否有乳頭，都要仔細(xì)查看，卵巢腫瘤往往體積大，較大的漿液性和粘液性腫瘤大體標(biāo)本特征常有明顯局部差異，盡可能知道最可能存在何種腫瘤或病變，做到心中有數(shù)；③冰凍切片的取材是非常重要的環(huán)節(jié)，取材局限是造成延遲診斷的主要原因，取材時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察標(biāo)本的切面，選取腫塊的實(shí)性區(qū)、囊壁增厚處及襯有豐富的乳頭狀突起的囊壁等處。實(shí)性區(qū)應(yīng)取灰白色魚肉區(qū)域及不同質(zhì)地和不同顏色區(qū)域，易發(fā)現(xiàn)上皮增生改變和癌變的區(qū)域；④優(yōu)良的冰凍切片是保證冰凍切片診斷正確的關(guān)鍵，必須要制作優(yōu)質(zhì)的冰凍切片，要防止冰晶的發(fā)生，把握最佳切片溫度，在冰凍組織的在速凍板上出現(xiàn)冰凍包埋劑周邊開始變白，最后中央透明消失，這時(shí)就得及時(shí)從速凍板上取下冷凍頭，固定切片機(jī)夾頭上并開始修組織塊，為最佳的切片溫度（-25～-23℃）和切片時(shí)間。冰凍切片中出現(xiàn)的空泡，大都是取材時(shí)標(biāo)本接觸到水的原因，應(yīng)盡量避免，若不小心接觸到水后，制片過(guò)程中要多用無(wú)水酒精沖洗即可。切片要做到組織平整、厚薄均勻一致，細(xì)胞染色清晰，對(duì)比染色好。⑤病理醫(yī)師要客觀、冷靜，充分了解患者病史、體征及各項(xiàng)術(shù)前檢查，診斷時(shí)要嚴(yán)格把握惡性腫瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)防假陽(yáng)性診斷，以免造成過(guò)度手術(shù)，引起醫(yī)療糾紛或致殘等嚴(yán)重后果。但對(duì)部分特殊病例，特別是交界性腫瘤，并且年齡年輕的，有生育要求的患者，又確實(shí)難以明確診斷的，應(yīng)及時(shí)與臨床醫(yī)師溝通并講明情況，臨床醫(yī)師根據(jù)患者的具體情況決定手術(shù)方式。

總之，快速冰凍切片作為手術(shù)中病理診斷，在明確腫瘤的良、惡性、明確邊緣組織有無(wú)腫瘤組織、淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移，具有重大幫助和指導(dǎo)意義。病理科醫(yī)師只有緊密與臨床聯(lián)系，不斷更新專業(yè)知識(shí)，認(rèn)真總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，才能提高冰凍切片診斷的準(zhǔn)確性，減少誤診，為臨床提供快速準(zhǔn)確的診斷，滿足廣大患者的需要。

參考文獻(xiàn)

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[4] 齊曼麗，陳壽松，任勇.卵巢腫塊術(shù)中冰凍切片診斷的臨床與病理分析.腫瘤防治研究，2007，34（5）：382-383.

第三篇：冰凍切片技術(shù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

冰凍切片制作技巧

1.從鋒利的刀片開始

我發(fā)現(xiàn)使用新的鋒利的刀片時(shí)常常做出高質(zhì)量的片子。我覺(jué)得在醫(yī)療場(chǎng)合中某些盡量省錢的做法顯得有些因小失大。一般我對(duì)每位患者的標(biāo)本都使用一組新的刀片，當(dāng)片子的質(zhì)量開始下降時(shí)，我會(huì)立刻更換刀片。某些組織如質(zhì)地較硬的膠原和鈣化組織會(huì)使刀片很快變鈍，因此，經(jīng)常更換刀片顯得很有必要，有時(shí)候我在切片過(guò)程中要連續(xù)更換2-3次刀片。

2.坐著還是站著

我切片時(shí)總是坐在一張凳子上。要學(xué)會(huì)把刷子作為一種便捷的輔助工具來(lái)操作，從而精細(xì)地控制顯微厚薄程度的片子。切片時(shí)俯身彎腰，頸部過(guò)伸的姿勢(shì)有些不妥，要盡量處于放松和舒適的姿勢(shì)以便能最大程度控制你的左手。

3.刷子

我是一位刷子的使用者。我相信要想切好片子首先學(xué)會(huì)使用刷子。刷子的作用就在于粘住片子并把片子弄到臺(tái)子上。冷凍的片子會(huì)自發(fā)的卷縮并從刷子上脫離下來(lái)，因此，我使用一把有硬毛、夾取面寬的刷子。我發(fā)現(xiàn)來(lái)自中國(guó)的野豬毛十分堅(jiān)硬，非常管用。你可以花3美元從工藝店買一把1/4英寸長(zhǎng)的#2號(hào)扁平無(wú)色的刷子，把毛削成一個(gè)角度。由于是個(gè)有角的頭端，加上握持刷子成一定的角度，這樣刷子與組織接觸時(shí)就會(huì)象掃帚一樣的平。我不能理解為什么有人使用脆弱的駱駝毛刷子，組織片很容易從這些柔軟的毛上掉下來(lái)。

4.握持刷子

左手象拿筆一樣握持刷子，將第五指輕壓于臺(tái)面上以穩(wěn)定握筆的手(或根據(jù)手和切片機(jī)尺寸的大小置于你感覺(jué)合適的地方)，這樣可以保證操作者動(dòng)作的靈活及可控性。我把刷子削成一個(gè)角度，大致與左手握持刷子的角度相同，這樣使刷子平著接觸組織的1/4。

5.搖柄的旋轉(zhuǎn)

以連續(xù)均勻的力量轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)的搖柄，且要毫不猶豫。我看到很多冰凍切片者手握著刷子在開始切片時(shí)總要停一下，緩慢的抓取組織，然后再開始轉(zhuǎn)動(dòng)搖柄。依我的經(jīng)驗(yàn)看來(lái)，這種動(dòng)作增加了起始切片假象的可能，會(huì)使片子的厚度不均勻，也增加了處理脂肪類組織的難度。我切片時(shí)，象前面所說(shuō)的那樣手握刷子，以一種連續(xù)的動(dòng)作抓取組織，這個(gè)動(dòng)作與刀片接觸組織同時(shí)開始并貫穿于整個(gè)過(guò)程。

6.刷子的移動(dòng)

組織塊移向刀片時(shí)刷子也要同步地向下移動(dòng)，當(dāng)組織塊剛好接觸刀片時(shí)刷子輕輕停在其底部2mm處并迅速抽離。正是刷子的向下移動(dòng)使你能連續(xù)地抓取組織，當(dāng)開始的幾毫米組織穿過(guò)刀片時(shí)便有自發(fā)卷曲的現(xiàn)象，這時(shí)，運(yùn)動(dòng)中的刷子立刻粘住其游離的邊緣部分并水平地拖向切片者。刷子的運(yùn)動(dòng)路徑是一個(gè)朝下的“肘”形，然后再朝向你自己，連續(xù)不斷。但要注意有時(shí)候把組織壓向臺(tái)面時(shí)會(huì)使組織粘在臺(tái)面上，可能會(huì)導(dǎo)致碎片，應(yīng)盡量避免。當(dāng)然預(yù)先將組織包埋起來(lái)可以使刷子不用接觸到組織，切片也容易多了。

7.貼片

可以從切片機(jī)的臺(tái)面上也可直接從組織塊面粘貼組織片，我一般采用前者。片子切好后，手持玻片在片子上方，向下以一個(gè)角度粘住片子的一角，在靜電作用下片子會(huì)吸附在玻片上并迅速融化。當(dāng)然在周圍涂一些包埋物對(duì)貼片有利，這種多余的包埋物可以保護(hù)片子的邊緣免受皺縮的損壞。有時(shí)候碰到貼片困難，我會(huì)在切到最后2mm包埋物的時(shí)候停下來(lái)，讓片子留在組織塊上，然后倒轉(zhuǎn)搖柄，使組織塊退離刀片，再用刷子從邊緣把組織片攤平，這樣就可以從組織塊面貼片了，這對(duì)卷曲的片子或者脂肪組織非常管用。

8.快速固定

我右手轉(zhuǎn)動(dòng)搖柄也同時(shí)拿著玻片，片子一切好，立刻粘起片子并將它浸沒(méi)于固定液中。固定液需置于方便夠到的地方，我一般將染色架放在染色缸的旁邊，先將片子置于95%的乙醇溶液中固定，然后插于染色架上。如果組織固定延遲會(huì)出現(xiàn)風(fēng)干的假象，我的經(jīng)驗(yàn)是組織片還在切片機(jī)的臺(tái)面時(shí)，風(fēng)干效應(yīng)很小，當(dāng)組織片粘在有溫度的玻片上時(shí)就會(huì)出現(xiàn)明顯的風(fēng)干假象，表現(xiàn)為核的細(xì)節(jié)丟失及胞漿液的溢出。下面幾張圖片是延遲15秒固定和立刻固定的相同組織的比較，差異非常明顯。

9.切片的厚度

對(duì)于一般的手術(shù)病理我推薦切6um厚，這種厚度使染色更加飽滿，層次清晰，病理學(xué)家通常在2x 和 4x的放大倍數(shù)下可以獲得更多的信息。太薄的片子在這種放大倍數(shù)下顯得蒼白，容易忽略一些細(xì)節(jié)。6um的片子可以有更多的時(shí)間去避免風(fēng)干假象，也會(huì)減少冰晶所造成的細(xì)胞核空洞。當(dāng)然特殊情況下可能需要更厚或更薄的片子。

10.為什么會(huì)掉片

我不能確定組織片粘附到玻片的具體機(jī)制，但我相信可能與組織內(nèi)的液體與玻片發(fā)生分子交聯(lián)有關(guān)。下面我例出幾種染色過(guò)程中組織片脫落的情況： 1）本身非常干燥或過(guò)度脫水的組織；

2）組織片的周長(zhǎng)與面積比過(guò)大，象細(xì)條形的組織容易受染色缸內(nèi)液體渦旋應(yīng)力的影響而脫落，同樣包括薄的纖維囊腫及不規(guī)則的壞死組織，太厚的組織也不例外； 3）返藍(lán)用的氨水濃度太高；

4）少數(shù)情況需要使用100%的乙醇固定；

5）一張玻片貼多個(gè)片子時(shí)，片子周圍的包埋物相互重疊。

組織塊的準(zhǔn)備

1.調(diào)整好組織與刀片的方向

這是冰凍切片準(zhǔn)備中極為重要的方面，使用一些包埋物可以使這項(xiàng)工作變得簡(jiǎn)單，在我的工作中我總結(jié)出一些經(jīng)驗(yàn)可供參考。

a.脂肪放在最后切。脂肪由于硬度不夠，對(duì)絕大多數(shù)組織均合適的溫度卻切不好脂肪組織，如果一刀下去，組織中的脂肪先接觸刀片，就會(huì)破碎并使整個(gè)片子損壞。如果脂肪最后接觸刀片，則切片過(guò)程不受干擾。最糟糕的情況是脂肪部分先接觸刀片而沒(méi)有包埋物的保護(hù)，包埋物可以給片子提供一個(gè)起始的緩沖，如果沒(méi)有包埋，脂肪就會(huì)切碎并把整個(gè)片子破壞。當(dāng)切片過(guò)程中由于脂肪的出現(xiàn)而影響質(zhì)量時(shí)，我要么把搖柄轉(zhuǎn)回去盡量避免，要么把脂肪挖出來(lái)。

b.組織與刀片垂直或成角是關(guān)鍵。讓我們假設(shè)組織由起始端、中間部分及末尾端三部分構(gòu)成，起始端容易卷縮，或受到刷子的損害，還可能由于操作者的猶豫而引起片子的厚薄不均，這些都增加了假象的風(fēng)險(xiǎn)。末尾端在貼片時(shí)容易拉長(zhǎng)，最好的是中間部分，最不可能出現(xiàn)假象，并且組織學(xué)上最干凈，這是片子中最理想的部分。

非常堅(jiān)實(shí)的組織容易產(chǎn)生橫皺，切片時(shí)應(yīng)包埋成角且盡可能的加溫。成角包埋就像坐著船沖浪一樣，如果你直線行駛，就會(huì)承受波浪線上最大的沖擊，如果成角行駛，波浪線就會(huì)拉伸，所受的顛簸也會(huì)減小。跟公路上的減速脊一樣的原理。

上皮和粘膜貼附的組織如皮膚，胃腸，膀胱，子宮，頸部等，應(yīng)當(dāng)使上皮面垂直于刀片。

2.組織塊的溫度

任何組織都有一個(gè)理想的切片溫度，在此溫度下切片，組織片以平滑均一的形式流過(guò)刀片，幾乎沒(méi)有卷縮。當(dāng)溫度、組織類型、刀片均處于理想狀態(tài)時(shí)，切片十分流暢，幾乎不用刷子。如果溫度太低，片子容易卷曲和破碎；如果溫度太高，片子就會(huì)皺成一堆。如果需要加溫，只需要把大拇指置于組織塊面幾秒鐘；如果需要降溫，可以使用機(jī)子的精確低溫包埋系統(tǒng)，簡(jiǎn)單的做法就是把過(guò)凍的凍臺(tái)放在組織面上幾秒鐘，大多數(shù)的冰凍切片機(jī)都有一種熱吸收器可以使用。

3.組織塊的填涂——基本的修復(fù)

填涂可以解決組織塊自身的缺陷，下面我舉幾個(gè)具體的例子。

扁平包埋組織的填涂 包埋扁平的組織時(shí)，只有一層薄薄的包埋物貼附在底面，而且包埋物會(huì)輕微地收縮與組織塊分離，如果想以最小的休整開始切片，那么收縮的空間必須填涂上包埋物，如果不填涂，切片時(shí)組織便會(huì)與包埋物分離，從而很難獲得一張完整的片子。下面這個(gè)簡(jiǎn)單的技巧可以使你獲得一個(gè)整齊的組織面。

針頭的移除

在工作中經(jīng)常會(huì)收到布滿針頭的標(biāo)本，有時(shí)候針頭會(huì)穿過(guò)整個(gè)組織，導(dǎo)致刀片的損壞并使片子一分為二，下面有一種簡(jiǎn)單的解決辦法。

縫線的移除

同樣的方法移除組織塊中的縫合線

挖鑿的技術(shù)

當(dāng)組織塊中某些部分不需要或阻礙我們獲得高質(zhì)量的切片時(shí)，我們就可以將它挖除掉。最好的例子就是脂肪組織干擾切片，常見于切除的淋巴瘤用于檢查是否癌轉(zhuǎn)移。如果脂肪先于組織塊中的其他部分接觸刀片，你首先可以試著轉(zhuǎn)動(dòng)組織塊，如果不行，就可以將它挖掉，然后用包埋物填充。

學(xué)會(huì)看片子

這里指的是片子滑過(guò)刀片時(shí)就要辨別出質(zhì)量的好壞，如果到鏡下才發(fā)現(xiàn)片子的缺陷那就無(wú)法挽救。

1.觀察片子的厚薄

盡管冰凍切片機(jī)可以設(shè)置厚度，但人為辨別片子的厚度是否合適仍然很重要。片子太薄看起來(lái)象半透明的鏡紙，片子太厚看起來(lái)混濁、柔性差，對(duì)我來(lái)說(shuō)，5-6um的片子較合適，象一張薄的打印紙。

2.片子破裂

這種假象往往是組織塊冷凍過(guò)度所致，可以通過(guò)升溫來(lái)解決，含水量多的組織切片很容易破裂，必須升高到一個(gè)合適的溫度使裂開程度降到最小。水腫或血液組織經(jīng)常有這種問(wèn)題，活檢的腦組織也很明顯。下面的片子來(lái)源于腎腫瘤，含水量豐富，破裂也比較明顯，我覺(jué)得水性的腫瘤組織在常規(guī)溫度下冷凍將會(huì)變得異常的堅(jiān)硬。

我覺(jué)得組織破裂的過(guò)程同一塊濕布結(jié)冰一樣的道理，當(dāng)你用刀去挑這塊濕布時(shí)它會(huì)自然彎曲，當(dāng)濕布已經(jīng)結(jié)冰時(shí)刀會(huì)將冰片弄裂。下面有6張片子，上面的3張破裂很明顯，底部的3張很輕微，你必須仔細(xì)看才能發(fā)現(xiàn)，如果在切片時(shí)你集中注意力，你能感覺(jué)到甚至聽到碎裂的聲音。

3.片子上的條紋

垂直于刀片的細(xì)條紋為刀片缺口所致，這往往是切到鈣化組織、針頭或縫線的結(jié)果。寬條紋，組織破碎或突然無(wú)法解釋的切片困難往往意味著組織粘在刀片下面了，這在脂肪組織比較常見，這時(shí)刀片需要取下來(lái)清洗干凈，注意清洗刀片時(shí)不要傷到自己。

4.波浪線樣的橫皺

這是切片機(jī)零件松動(dòng)的征象，可能需要修理，切片時(shí)刀片有移動(dòng)或支撐刀片的機(jī)子有移動(dòng)時(shí)，往往有這種規(guī)則的條紋出現(xiàn)。為了獲得干凈整齊的片子，所有固定刀片、刀架、支撐臺(tái)、支撐栓子及切片機(jī)的旋鈕、螺釘、軸承都必須上緊，并且不帶有垃圾殘骸，支撐臺(tái)或刀片下面有一點(diǎn)包埋物都會(huì)影響切片的質(zhì)量。

脂肪組織的處理

脂肪組織無(wú)疑是冰凍切片者的絆腳石，道理很簡(jiǎn)單脂肪不會(huì)結(jié)冰，把溫度降低讓脂肪變硬可以切出較薄的片子，但是這個(gè)溫度對(duì)同一組織中的其他成分來(lái)說(shuō)顯得太低而不合適切片，當(dāng)脂肪破碎影響切片時(shí)這個(gè)問(wèn)題就變得明顯，下面是一些我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。

1.盡可能的削掉不需要的脂肪組織

當(dāng)我準(zhǔn)備切淋巴結(jié)時(shí)，我會(huì)先檢查一遍，小心翼翼地除掉表面及髓內(nèi)的脂肪，結(jié)內(nèi)的脂肪用解剖刀刮擦掉，被膜線附近的脂肪用刀切除，這樣就不需要切開整個(gè)淋巴結(jié)被膜。有人會(huì)說(shuō)，我把一些組織去掉后，可能導(dǎo)致漏判一些陽(yáng)性的淋巴結(jié)，但我的經(jīng)驗(yàn)是好的干凈的片子比含有太多脂肪的差片子更容易獲得陽(yáng)性的結(jié)果。當(dāng)你在休整組織或切片的過(guò)程中脂肪組織意外出現(xiàn)時(shí)，你也可以使用前面的挖鑿技術(shù)。

2.調(diào)整組織塊的方向使脂肪最后接觸刀片

切片時(shí)盡量避免脂肪先接觸刀片，因?yàn)橹緯?huì)脫離包埋物，在切片上留下一個(gè)洞，如果不能避免，也要在其周圍加上包埋物，讓包埋物先接觸刀片。

3.保證刀片、臺(tái)面的干凈及組織塊的冷凍程度

切片機(jī)的臺(tái)面和刀片必須保持干凈，假如你弄碎了一張片子必須即時(shí)用一塊干紗布清理干凈，但要防止刀片割手，如果你發(fā)現(xiàn)切出來(lái)的片子有條紋或者堆積成束，可能是組織粘著在刀片的下方了，必須除掉刀片上的組織，并將刀片清理干凈。

組織塊越冷就越容易切脂肪，只是其他非脂肪組織就變得堅(jiān)硬難切，同時(shí)水性的組織會(huì)裂開，這就有必要在切片溫度的最冷端和最溫端取一個(gè)二者兼顧的中間值，以使脂肪和非脂肪組織都能切好。我一般將組織塊凍在-24度，可以獲得滿意的結(jié)果，冷凍噴霧劑有用，但要注意先清掉切片機(jī)內(nèi)的污穢。

4.靈活地轉(zhuǎn)動(dòng)搖柄而不猶豫

假如組織塊是脂肪和結(jié)締組織的混合物，那要好切于純脂肪組織，有時(shí)候按照我前面所講的技巧來(lái)做，片子會(huì)出乎意料的好。用運(yùn)動(dòng)的刷子快速粘住組織片并把它拖上臺(tái)面，不要把刷子和組織片壓上臺(tái)面，以免粘在一起使切片完全中斷。同樣，好的刀片也很重要，如果你能用刷子敏捷地做出這套動(dòng)作，那你肯定也能對(duì)脂肪組織切出理想的片子，脂肪在片子上會(huì)留下空的間隙，但它們之間的纖維條卻保存完好。下面這塊乳腺癌及其周圍有數(shù)毫米覆蓋著墨水的脂肪組織，假如你調(diào)整好組織塊的方向使脂肪邊緣垂直于刀片，腫瘤組織就切得好，脂肪切片的角度會(huì)有變動(dòng)，也會(huì)留下空隙，但總有一條墨跡線指示著邊緣的所在。很多時(shí)候我都用這種方法來(lái)區(qū)別腫瘤和脂肪組織。

5.試著對(duì)脂肪過(guò)多的組織切厚些

厚的片子對(duì)閱讀薄片上的細(xì)節(jié)也是一種輔助，厚片可以通過(guò)各種方法獲得，我先試著按一下切片機(jī)上的精細(xì)前進(jìn)按鈕，如果組織塊保持完整，我繼續(xù)嘗試按一下粗前進(jìn)按鈕，這樣會(huì)切出很厚的片子。你也可以調(diào)節(jié)機(jī)子的厚度刻度盤，或者讓搖柄轉(zhuǎn)兩次，先向前1/4圈，再向后，再向前，采用這些技巧會(huì)切出厚度不一的片子。如果你連續(xù)均與地轉(zhuǎn)動(dòng)搖柄并配合使用刷子，你最后會(huì)在玻片上貼出良好的片子，后面的固定和染色還是一樣的，只是時(shí)間可能要加倍或翻兩番，染液中的片子輕拿輕放，不要?jiǎng)×覕噭?dòng)。費(fèi)盡全力后最后回報(bào)給你的是一張有三維立體感染色優(yōu)良的片子，而且脂肪組織也變得相當(dāng)?shù)耐该髑逦憧梢钥吹窖馗鱾€(gè)方向走行的毛細(xì)血管，我還可以幸運(yùn)地識(shí)別非脂肪部分的結(jié)構(gòu)，這種用墨跡標(biāo)記組織邊緣的方式包含于整個(gè)組織面，有助于解讀脂肪邊緣有缺損的薄片，粉刺癌中高度惡性的細(xì)胞核和壞死同樣可以識(shí)別。在切脂肪組織的過(guò)程中，如果你連做了兩三次而沒(méi)做好，你可能會(huì)耗盡了一些寶貴的組織標(biāo)本，可以在切那些乳腺癌組織之前用正常的脂肪練練手。

冰凍切片的局限 1.時(shí)間的限制

確實(shí)在冰凍切片室經(jīng)常受到快速出結(jié)果的壓力，我的經(jīng)驗(yàn)是欲速則不達(dá)，急躁和慌亂容易出錯(cuò)。我們最好的辦法就是樹立自信，良好的態(tài)度及教育外科醫(yī)生，受到加快制片的催促時(shí)應(yīng)當(dāng)學(xué)會(huì)從各方面抵制壓力，假如你是一位專業(yè)的受過(guò)良好訓(xùn)練的冰凍切片家，從切片到染出一張片子只需要幾分鐘，如果你對(duì)組織的處理很粗糙，這個(gè)過(guò)程可能要幾分鐘到十分鐘，碰到比較大的復(fù)雜的組織需要多重染色則需要的時(shí)間會(huì)更多，對(duì)病理學(xué)家來(lái)說(shuō)，閱片需要幾秒到數(shù)十秒的時(shí)間，有時(shí)候需要搜尋一些細(xì)小的線索，翻閱書籍，或向同行咨詢等，所需時(shí)間會(huì)更多。考慮到外科醫(yī)生的處境，我們必須動(dòng)作迅速，但是當(dāng)所做的結(jié)論會(huì)更改手術(shù)的進(jìn)程時(shí)，我們會(huì)顯得格外謹(jǐn)慎。我們會(huì)要求提供患者的詳細(xì)資料以便得到正確的答案，即使耽誤幾分鐘，總比重做手術(shù)或提供錯(cuò)誤的結(jié)論所付出的代價(jià)小很多，如果連續(xù)碰到幾例患者，或復(fù)雜的病例，多個(gè)標(biāo)本，那我們只有尋求幫助，當(dāng)然，在手術(shù)不過(guò)急的依賴冰凍切片的結(jié)果時(shí)，這些事情盡量不做。不要粗糙地準(zhǔn)備和閱讀片子，這是最可能出錯(cuò)的地方，同時(shí)，也要識(shí)別超出你個(gè)人能力的處境，很多需要尋求外界咨詢的場(chǎng)合，我象一根樹樁一樣站在那里閱片，幾分鐘都無(wú)法得出結(jié)論，就象看到一只從來(lái)沒(méi)有在后院出現(xiàn)過(guò)的老虎一樣。這個(gè)時(shí)候我會(huì)不顧一切的尋找就近的幫助，并且告訴我的外科醫(yī)生要耐心的等待。2.特殊染色的局限

這個(gè)問(wèn)題討論起來(lái)很難，我們只能面對(duì)，當(dāng)今時(shí)代如果沒(méi)有免疫過(guò)氧化物酶染色和基因突變的檢測(cè)，仍然無(wú)法對(duì)淋巴瘤和肉瘤及其他類似的疾病進(jìn)行分類，也許不久的將來(lái)能有快捷的方法用于冰凍切片，但是現(xiàn)在，確實(shí)是一個(gè)缺陷。

3.冰凍假象

這是水的特性，水在結(jié)冰時(shí)因氫鍵的交聯(lián)而膨脹，正是這個(gè)原因，冰塊才能浮在水面上。我相信組織在冰凍時(shí)候的變化與水結(jié)冰膨脹是密切相關(guān)的，在此，我會(huì)盡量解釋冰凍片子和石蠟片子的差異。象處理其他病理假象一樣，正確的識(shí)別這些冰凍假象有助于我們不至于誤判。

冰晶的形成

含水量特別多的組織冷凍時(shí)會(huì)出現(xiàn)肥皂泡樣的空隙，我認(rèn)為當(dāng)組織中的水分凝固時(shí)形成球形的冰晶，擠壓纖維組織條而產(chǎn)生泡沫樣的形狀。下面的冰凍對(duì)照顯示當(dāng)組織片進(jìn)一步處理時(shí)泡沫樣的水分又重新分布于間質(zhì)，而未曾冷凍的組織顯示出間質(zhì)的水腫。這些水分巨多的組織在切片時(shí)很難保證不裂開，應(yīng)盡可能高切片的溫度。

擠壓假象

細(xì)胞實(shí)性的組織會(huì)受到冰泡膨脹的擠壓，這在水腫組織非常明顯，下面的腎細(xì)胞癌提供了一個(gè)很好的例子，中間的圖片顯示腎小管被透明的冰晶所擠壓，右邊的圖片為來(lái)源于同一組織的非冷凍切片。

核性的冰晶

細(xì)胞核產(chǎn)生冰晶的趨勢(shì)不一，根據(jù)我的觀察，這似乎跟組織的類型及狀態(tài)有關(guān)，我注意到在損傷的組織出現(xiàn)較多，從道理上講也是如此，燒傷的組織或缺血損傷的組織由于失去了滲透壓的平衡從而導(dǎo)致眾多數(shù)量的核水腫，同時(shí)，囊狀的核越多，核冰晶形成的可能性越大。我也注意到：片子切得越薄，這種冰晶越容易留下空洞，下面的例子可以很好的說(shuō)明我的觀點(diǎn)。

核染色質(zhì)的改變

中間這張片子先前冷凍過(guò)，顯示染色質(zhì)特別明顯，與左邊冰凍后立刻固定的圖片相比，核的密度更大，更深染，注意到冰凍片中胞漿含有較多的空泡，也是冷凍假象的一種。探討如何合理的保養(yǎng)冰凍切片機(jī)

技術(shù)員除了要做好冰凍切片之外，合理的保養(yǎng)冰凍切片機(jī)也至關(guān)重要，合理的保養(yǎng)有利于工作順利地進(jìn)行，同時(shí)又能延長(zhǎng)冰凍切片機(jī)的壽命。

1、冰凍切片機(jī)對(duì)電壓穩(wěn)定性要求較高-------安裝穩(wěn)壓電源。

2、為了保證工作人員的安全及設(shè)備安全可靠運(yùn)行，設(shè)備安裝時(shí)應(yīng)有接地。

3、應(yīng)注意機(jī)箱周圍通風(fēng)網(wǎng)清理避免阻塞，不可使機(jī)器緊靠墻壁，應(yīng)保證空氣的自由流通。

4、冰凍切片機(jī)對(duì)環(huán)境的溫度要求較高，特別是夏天所在的房間應(yīng)安裝空調(diào)，以減少氣溫過(guò)高引起的壓縮機(jī)連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)。

5、設(shè)備應(yīng)專人使用和保養(yǎng)，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，非專業(yè)人員不準(zhǔn)操作機(jī)器。

6、因停電或其它原因停機(jī)后再啟動(dòng)一定要間隔十分鐘后進(jìn)行。

7、有機(jī)玻璃窗開啟時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。

8、及時(shí)清理冷室內(nèi)的組織碎屑，保證室內(nèi)外清潔。

9、移動(dòng)機(jī)器后應(yīng)注意使機(jī)器著地平穩(wěn)。

10、設(shè)備不可帶故障使用，出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)及時(shí)修理。

11、冰凍量大的醫(yī)院，建議購(gòu)置兩臺(tái)冰凍切片機(jī)。

12、關(guān)機(jī)時(shí)，CT溫度和OT溫度下調(diào)10度，關(guān)閉OT的壓縮機(jī)，然后再關(guān)機(jī)。

冰凍切片機(jī)的使用

1.切片前先安裝好刀片，調(diào)整切片厚度及切片角度，確認(rèn)標(biāo)本組織類型，根據(jù)不同組織類型調(diào)整好最佳切片溫度。

2.盡可能快地取新鮮活體標(biāo)本，不經(jīng)任何試劑處理，切成2.0cm×2.0cm×0.2cm大小的組織塊放到組織托上，涂敷包埋劑后即放到冷臺(tái)上冷凍，待包埋劑稍凝后(以組織塊不流動(dòng)為宜)，迅速固定到冷凍頭上急凍。一般在取材后就要立刻對(duì)組織塊進(jìn)行速凍，使組織溫度驟降，縮短降溫的時(shí)間，減少冰晶的形成。

3.待組織塊凍好后用快進(jìn)鍵將其移近刀口，利用按鈕修片，修好后即可放下防卷板切片。切片時(shí)，低溫室內(nèi)溫度以-15℃～-20℃為宜，溫度過(guò)低組織易破碎，根據(jù)各種組織的軟硬度來(lái)掌握切片速度，軟組織切片速度較慢，較硬的組織切片速度快。

4.調(diào)節(jié)防卷板。防卷板的位置及角度要適當(dāng)，載玻片附貼組織切片時(shí)，切勿上下移動(dòng)。5.將切好的切片附貼在載玻片上，固定、染色、脫水、封固。冰凍切片制作完成。

第四篇：術(shù)中冰凍病理工作制度

冰凍切片檢查工作制度

1.由于取材、技術(shù)固有缺陷等因素，應(yīng)在術(shù)前向病人或家屬介紹冰凍切片有一定局限性，簽署冰凍快速診斷知情同意書。

2.應(yīng)在手術(shù)前一天通知病理科并送病理申請(qǐng)單。送標(biāo)本時(shí)，應(yīng)電話詳細(xì)介紹手術(shù)所見、取材部位及手術(shù)診斷情況，骨科患者應(yīng)送軟組織并提供X光照片參閱。

3.冰凍標(biāo)本必須新鮮立即送檢，避免過(guò)度濕潤(rùn)，切忌以鹽水等浸泡,嚴(yán)禁放入福爾馬林固定液中，最好用干紗布包裹組織送檢。

4.單件標(biāo)本的冰凍切片制片應(yīng)在15分鐘內(nèi)完成，診斷應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成。保留所剩組織，固定后作常規(guī)石蠟切片。

5.對(duì)于難以明確診斷、交界性病變、送檢組織不適宜等狀況，病理醫(yī)師可以不作出明確診斷，等待石蠟切片報(bào)告。

6.術(shù)中快速診斷僅作為手術(shù)中治療的參考，不是最終診斷。7.冰凍切片診斷報(bào)告必須采用書面形式（可傳真），為防止誤聽和誤傳，嚴(yán)禁采用口頭或電話報(bào)告的形式。

8.從標(biāo)本接收到發(fā)出報(bào)告的時(shí)間，應(yīng)在病理申請(qǐng)單上注明。9.冰凍病理診斷醫(yī)師應(yīng)具有副高級(jí)以上病理學(xué)專業(yè)技術(shù)任職資格，并有5年以上病理閱片診斷經(jīng)歷。

10.冰凍切片診斷報(bào)告書應(yīng)由病理醫(yī)師簽署全名。

11.冰凍切片標(biāo)本驗(yàn)收、核對(duì)、編號(hào)、登記、報(bào)告及切片管理同常規(guī)病理檢查。

第五篇：冰凍切片中常見問(wèn)題分析

冰凍切片中常見問(wèn)題分析

鄭則欽

龐瑾昱

陳斌

【摘要】 目的 探討冰凍切片技術(shù)在臨床病理診斷中的應(yīng)用。方法 收集外科手術(shù)中冰凍診斷病例，應(yīng)用快速冰凍切片法、快速冰凍染色法等對(duì)冰凍診斷病例進(jìn)行分析。結(jié)論 冰凍切片技術(shù)中常見的問(wèn)題及改進(jìn)；影響冰凍切片質(zhì)量的因素；冰凍切片在病理診斷中的作用。

【關(guān)鍵詞】 冰凍切片； 病理診斷

冰凍切片是借助低溫使組織凍結(jié)達(dá)到一定的硬度進(jìn)行切片的一種方法，是手術(shù)過(guò)程中采取活體標(biāo)本，進(jìn)行快速的組織學(xué)診斷的方法，其便捷的優(yōu)點(diǎn)，利于術(shù)中確診病變性質(zhì)，決定手術(shù)范圍，但由于各種原因，影響冰凍切片的質(zhì)量，拖延病理報(bào)告發(fā)出的時(shí)間，直接影響著病理診斷的及時(shí)性、準(zhǔn)確性，間接影響病人的預(yù)后。

材料與方法

1.材料：收集外科手術(shù)中冰凍診斷病例

2.方法：應(yīng)用快速冰凍切片法、快速冰凍染色法等

結(jié)

果 組織取材大小要適宜，約為1.5×1.5㎝,厚2㎜。2 壞死組織影響冰凍切片的完整性。3 冰凍時(shí)間根據(jù)組織的大小及性質(zhì)所決定。4 冰凍溫度一般設(shè)置在－18～－20℃。5 染液的酸堿度要適宜。1 組織取材對(duì)制片的影響 組織取材大小：組織塊大小要適宜，冷凍切片機(jī)內(nèi)切片刀移動(dòng)的范圍有一定的限制，超出其范圍時(shí)，易致切片不全。一般情況下，冰凍切片的組織大小為1.5×1.5㎝,厚2㎜。但卵巢腫瘤及脂肪組織可稍微大些。組織塊過(guò)大，切片時(shí)阻力過(guò)大，易產(chǎn)生皺折，刀痕，組織易崩碎，增加制片難度，影響診斷。如需在同一標(biāo)本托上放大于兩塊組織時(shí)，應(yīng)盡量?jī)龀梢粋€(gè)平面，與刀鋒平齊，以防切片不完整，發(fā)生漏診。若送檢組織過(guò)小，請(qǐng)預(yù)先速凍一冷臺(tái)面，再行包埋，利于制片。另外，包埋時(shí)，應(yīng)將組織平放在凍頭的中央。組織內(nèi)含過(guò)多的脂肪或壞死組織：脂肪或壞死組織較一般的組織冷凍的溫度要低些，當(dāng)活組織達(dá)到所需的溫度時(shí)，其還比較軟，從而影響切片的完整性和拖延冷凍報(bào)告發(fā)出的時(shí)間。組織塊過(guò)冷：組織冷凍過(guò)度易致切片破碎或呈粉沫狀，不能制作一張完整的切片。組織塊冷凍不均勻：在配合使用液氮時(shí)，組織塊放入液氮時(shí)不能保持水平狀態(tài)且液氮量不足的情況下，可產(chǎn)生此現(xiàn)象。凍頭的溫度不足：冷凍切片時(shí)要求凍頭的溫度保持在－25℃～－30℃左右，凍頭的溫度達(dá)不到要求時(shí)，組織很快回軟，也不能保證切片的完整。冷凍時(shí)間對(duì)制片的影響：根據(jù)組織塊的大小、性質(zhì)，確定冷凍時(shí)間，一般13～17s（使用液氮者），若組織較大或脂肪組織時(shí)間可適當(dāng)長(zhǎng)些，而甲狀腺、腦組織和淋巴組織等冷凍的時(shí)間相對(duì)要短些。冷凍時(shí)間要嚴(yán)格掌握，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，切片易脆碎，其處理方法是：切出完整平面后用戴乳膠手套的拇指按壓回溫，直到切片完整為止，反之，時(shí)間過(guò)短，則需繼續(xù)冷凍，直到組織不粘刀片出現(xiàn)完整切片為基準(zhǔn)。冷凍箱體工作溫度對(duì)制片的影響：一般組織設(shè)定為－18～－20℃。但對(duì)一些較特殊的組織標(biāo)本，溫度應(yīng)適當(dāng)調(diào)整，如脂肪成分較多的組織以－30～－35℃為宜，纖維腺瘤，子宮等為－20℃，淋巴結(jié)，甲狀腺為－18℃，切片時(shí)，表面玻璃機(jī)器蓋子不要打開過(guò)大，以免箱體回溫過(guò)快，影響制片。保持凍箱的溫度，做到每次做完冷凍切片應(yīng)關(guān)好冷凍箱的蓋子。染色對(duì)制片的影響：尤以細(xì)胞核的染色最為關(guān)鍵，在寒冷的冬季，室溫過(guò)低時(shí)，影響核的著色，可適當(dāng)加溫，用以增色，蘇木素的酸堿度應(yīng)適宜，經(jīng)常觀察其染液的ph值，過(guò)堿時(shí)應(yīng)及時(shí)更換，鹽酸酒精分化適度，時(shí)間控制到位，否則易造成核著色不佳，染色質(zhì)不清晰，影響診斷的準(zhǔn)確性。冰晶的形成對(duì)制片的影響：此原因主要取決于組織含水量的大小，尤以組織細(xì)胞水腫，淋巴結(jié)，縱隔腫瘤，卵巢腫瘤為甚，送檢取材過(guò)程中接觸水源，速凍過(guò)程中使用的液氮時(shí)間尚未控制好，同是造成冰晶形成的原因，其解決方法為，使用液氮時(shí)間上控制到位，保證一次凍透標(biāo)本，組織送檢取材時(shí)，盡量避開水源，如遇含水量高的標(biāo)本時(shí)，應(yīng)盡量用干紗布吸干水分后再行冷凍，避免由于冰晶形成出現(xiàn)診斷上的失誤。操作者的動(dòng)作應(yīng)迅速。6 切片皺縮或卷縮：這也是影響切片質(zhì)量的重要因素之一。常見的原因有：①刀鋒變鈍。② 防卷板粘有異物，防卷板的作用是防止切片卷縮，但若粘有異物，切片時(shí)組織會(huì)被擠壓而縮在一起。③ 防卷板與刀鋒的位置不平行、不協(xié)調(diào)。④ 組織塊包埋不完全，缺乏支撐作用。

預(yù)防與處理的方法：① 注意檢查刀具，及時(shí)更換刀口，定期磨刀。② 保持防卷板的清潔，每做一例冷凍切片，均應(yīng)將刀口及防卷板拭擦干凈，防止切片的污染和切片皺縮。③ 調(diào)整刀、防卷板的位置，保證兩者平行，且防卷板比刀鋒前0.2㎜左右。④ 包埋組織應(yīng)完全，沒(méi)法切片者再滴加包埋膠。7 切片脫落：冷凍切片是利用溫度差（即玻片與組織切片的溫度差）將切片粘貼在玻片上，然后進(jìn)行固定、染色。下面幾種情況下可影響切片粘貼的牢固程度，而導(dǎo)致切片脫落：① 組織內(nèi)含過(guò)多的壞死組織。組織細(xì)胞壞死崩解后，局部的滲透壓升高，吸收水分，切片一經(jīng)固定，水分逸出，壞死組織失去支撐作用，染色時(shí)組織容易脫落。② 固定液濃度過(guò)低，這是最常見的原因。③ 載玻片不干凈。④ 切片太厚。

預(yù)防及處理方法：避免組織內(nèi)帶有壞死組織，條件允許者重新取材；若沒(méi)有組織可代替，切片固定時(shí)間長(zhǎng)些，經(jīng)95％乙醇雙重固定后，用電吹風(fēng)將切片吹干（溫度不能過(guò)高，以防破壞組織結(jié)構(gòu)）然后再進(jìn)行染色且動(dòng)作應(yīng)輕柔。② 定期更換固定液。一般每周更換一次，例數(shù)較多者，適當(dāng)增加次數(shù)；另外，每次做完冷凍，應(yīng)及時(shí)將盛固定液的瓶蓋蓋好，以防固定液揮發(fā)而降低其濃度。③ 保持載玻片干凈，平時(shí)應(yīng)將玻片蓋好，防止灰塵或其它異物的污染。若新購(gòu)買的玻片較臟，洗滌過(guò)后才使用。④ 調(diào)好切片的厚度，切片厚度以5～7um較為合適（脂肪組織可稍為厚些）。組織塊脫落：冷凍切片一般要求在30min內(nèi)發(fā)出病理報(bào)告，以便手術(shù)醫(yī)生能盡快選擇手術(shù)方式。但若組織塊脫落，會(huì)拖延病理報(bào)告發(fā)出的時(shí)間，而耽誤病人的手術(shù)時(shí)間。常見原因有：① 凍頭在冷凍機(jī)內(nèi)放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，致使包埋膠還來(lái)不及滲到凍頭的底部便凝固了，導(dǎo)致包埋膠與凍頭粘連不緊，稍受外力的作用便脫落；② 凍頭上的包埋膠沖洗不干凈。

總之，對(duì)于冰凍切片的質(zhì)量因素主要有以上幾點(diǎn)。如果能正確對(duì)待以上幾方面的問(wèn)題，冰凍切片的質(zhì)量方可得到保證，且能制備出一張質(zhì)量?jī)?yōu)秀的切片，為明確病理診斷提供較為便利的客觀條件。