第一篇：華農普通植物病理學實驗指導

實驗

一、植物病害的認識

一、目的要求

通過室內、外觀察，對什么是病害，病害的病狀表現，病害發生原因及條件，病害對農業生產的危害性等問題，有一個感性認識，從而加深對病害基本概念的理解，并為病害的診斷打下基礎。

二、內容及方法

癥狀是植物生病后所表現的病態。病狀和病征總稱為癥狀，病狀是指植物本身所表現出來的不正常的疾病狀態（如植株矮縮、黃化、萎蔫、壞死、斑點等），病征是指植物病部上病原物所構成的宏觀外貌（如霉狀物、粉狀物、溢膿等）。

癥狀是診斷病害的佐證，也是病害命名的依據之一，有的病害病狀顯著（如花葉病等），有的病害則病征顯著（如白粉病等），有的病害則二者都顯著（如黑穗病、甘薯軟腐病等），不少病害就是以病狀（如水稻徒長病、花生叢枝病等）或病征（如小麥黑穗病、銹病、白粉病等）命名的。

通過下列病害癥狀的觀察，初步掌握植物病害癥狀的主要類型。根據病害的表現，可把病狀分為：變色、壞死、腐爛、萎蔫和畸形五類：

（一）變色類：植物受害后，局部或全株失去正常的綠色，稱為變色。1．黃化——植物綠色部分的葉綠素形成受抑制呈退綠或被破壞呈黃化。2．花葉——植物綠色部分局部的葉綠素受抑制或破壞，呈現黃綠相間。3．條紋——黃色部分呈條狀稱為條紋。

4．紅葉——葉綠素形成受抑制，花青素形成過旺，葉片變成紅色或紫色。

（二）班點狀：植物的細胞和組織受到病原物的破壞而死亡，形成各式各樣的病斑。由于病斑的顏色不同，有黑斑、褐斑、灰斑、白斑等。病斑的形狀不一，有圓形、橢圓形、棱形、不規則形等。有時具有輪紋或花紋，有的病斑受葉脈限制而形成角斑。有的沿葉脈發展而形成的條紋或條斑。有的病斑周圍有明顯的邊緣，有的邊緣不明顯。在根、莖、葉、葉柄、果和穗等部位都可以發生壞死性病斑。

（三）腐爛類：植物組織細胞受到病原物的破壞和分解而發生腐爛。如根腐、莖基腐、塊莖和塊根腐爛等。

1．軟腐和干腐——含水分較多的軟柔組織，有的細胞間的中膠層被病原物所分泌的酶所分解，導致細胞分離，組織崩潰，造成軟腐或濕病，組織腐爛后，水分散失而干硬收縮，成為干腐。

2．立枯及猝倒——幼苗的根或莖基腐爛、幼苗直立枯死而不倒伏，稱為立枯，幼苗迅速整株倒伏稱為猝倒。

（四）萎蔫：植株的根或莖部的維管束受病原物的侵害，大量菌體堵塞導管或產生毒素，阻礙或影響水分運輸，使枝葉失去膨脹狀態而下垂，葉片枯黃，凋萎，以致植株死亡。

（五）畸形：植物受害后，發生增生性或抑制性的病變，造成不正常的形態結構的狀態，稱為畸形。

1．腫瘤——植物受害后，組織細胞增生，生長發育過度，病部膨大而形成腫瘤。2．叢枝和發根——枝或根過度分枝，產生叢枝或發根現象。

3．矮縮、皺縮——植物受病后，發生抑制性病變，生長發育不良，使植株或器官萎縮、皺縮。4．畸形、卷葉、線葉和葉變——病部組織發育不均勻，呈現扭曲畸形、卷葉、葉片畸形變成細線狀，稱為線葉。有的器官轉化為葉狀，稱為葉變。

病原物的營養體或繁殖體在植物病部上的宏觀結構，稱為癥征，主要有下列幾類：

①霉狀物——真菌的繁殖體或營養體在植株病部上表現為明顯的霉層，因顏色不同，有綠霉（柑桔青綠霉病），黑霉（甘薯軟腐病），灰霉（稻瘟病），赤霉（小麥赤霉病，水稻徒長病）等，有些呈白色或灰色如霜狀，則稱為霜霉（霜霉病）。

②粉狀物——真菌的繁殖體在病部上表現各種粉狀結構。1．白粉狀物——在病部上呈白粉狀，如白粉病。2．黑粉狀物——在病部上呈黑色粉狀，如黑穗病。

3．銹色粉狀物——自病部表皮下泡狀病斑破裂后，散出鮮黃色或深褐色粉末，狀如鐵銹。如銹病。

③小黑粒或小黑點——病原真菌的繁殖體在植物病部產生表面較粗糙的黑色小點（分生孢子盤），如炭疽病、或產生表面較光滑的黑色粒狀結構（分生孢子器、子囊殼），稱為小黑粒，如黃麻立枯病、小麥白粉病，小麥赤霉病等。

④菌核——病原真菌的營養體在植物受病部位的表面或組織內，形成形狀及大小不一的團粒結構，如水稻紋枯病、菌核桿腐病等。

⑤菌膿狀物或膠狀物——病原細菌在病部常涌出黃色或污白色的膿狀或粘膠狀溢滴，或用水擠壓病部常見污白色混濁液，如水稻白葉枯病，花生青枯病等。

三、注意事項

1．癥狀及為害情況，常因病原和寄主的種類及不同的發病部位、不同的生育期及環境條件的不同而有差異。

2．細心觀察和比較健株與受害后的異常表現，比較各種類型癥狀的差異及特點。

四、作業

1． 思考題：

①什么叫病害？病害與蟲害，機械傷有何不同？ ②認識病害的癥狀有何意義？ 實驗二 植物原真菌——鞭毛菌亞門（Mastigomycotina）

鞭毛菌亞門的真菌多為水生，少數為土生和陸生。

低等的鞭毛菌其營養體為原質團。其它為無隔、多核、發達的菌絲體。

無性繁殖均較發達，產生孢子囊和游動孢子。游動孢子有一根或二根鞭毛，前生、后生或側生，鞭毛又分尾鞭和茸鞭二種，是鞭毛菌分類的主要依據之一。

有性生殖均以同形配偶子配合產生休眠孢子（囊）或異形配偶配合產生卵孢子。

根據鞭毛特點，鞭毛菌亞門分為四個綱：

1．根鐘菌綱（Plasmodiophoromycetes）不等長雙根尾鞭。2．壺菌綱（Chytridiomycetes）后生單根尾鞭。3．絲壺菌綱（Hyphochytridiomycets）前生單根茸鞭。4．卵菌綱（Oomycetes）側生一根尾鞭一根茸鞭。

一、實驗內容和材料

1．根腫菌目（Plasmodiophorales）——蕓苔根腫菌（Plasmodiophora brassicae）。和十字花科根腫病。2．壺菌目（Chtridiales）——玉米節壺菌（Physoderma maydis）和玉米褐斑病。

3．水霉目（Saprolegniales）——水霉屬（Saprolegnia）和綿霉屬（Achlya）及水稻綿腐病（爛秧）。4．霜霉目（Peronosporales）

（1）瓜果綿腐菌（Pythium aphanidermatum）和猝倒病。

（2）致病疫霉菌（Phytophthora infestans）和馬鈴薯晚疫病。（3）荔枝霜疫霉菌（Peronophthora litchii）和荔枝霜疫霉病。

（4）禾生梗霉菌（Sclerospora graminicola）和谷子白發病。

（5）古巴擬霜霉菌（Pseudoperonospora cubensis）和黃瓜霜霉病。

（6）寄生霜霉菌（Peronospora parasitica）和十字花科霜霉病。

（7）白銹菌（Albugo candida）和十字花科白銹病。

（8）1~2個霜霉病未鑒定的標本，要求鑒定到屬。

二、實驗方法與步驟

1． 顯微鏡觀察十字花科根腫病組織切片，有無見到膨大的根細胞內不定形的蕓苔根腫菌的原質團？有無見到根細胞內有大量圓球形、厚壁、密集呈魚卵塊狀的休眠孢子囊堆？（繪圖）

觀察白菜根腫病標本，根部的癥狀屬何種類型？地上部表現什么癥狀？

2．顯微鏡觀察玉米褐斑病組織切片，有無見到病組織的細胞內有許多扁球形、深黃色的菌體，這是什么？菌體上有蓋狀的痕跡這又是什么？

觀察玉米褐斑病標本，病斑發生在什么部位，有什么特點？

3．顯微鏡觀察水霉菌和綿霉菌玻片（或新鮮材料），比較兩個屬的孢子囊釋放游動孢子和孢子囊再生方法有何不同？

觀察水霉菌或綿霉菌的卵孢子，雄器和藏卵器是什么形狀？如何配合？藏卵器內有幾個卵球？

觀察水稻綿腐病（爛秧）標本，表現什么特征？癥狀屬何種類型？

4．從培養皿內挑取少許瓜果綿腐菌制成玻片，在顯微鏡下觀察其菌絲體，有無分隔？有無見到姜瓣狀或不規則形的孢子囊（繪圖）？孢子囊如何釋放游動孢子的？有無見到排孢管和泡囊？

雄器和藏卵器如何配合？藏卵器內有幾個卵球？ 觀察蔬菜苗期猝倒病和瓜果綿腐病的標本，其癥狀屬何種類型？

5．顯微鏡觀察致病疫霉菌玻片，其孢子囊梗與Pythium有何不同？有無見到呈節狀膨大的部分？孢子囊什么形態？（繪圖）

觀察馬鈴薯晚疫病的標本，病塊莖和病葉各表現什么特征？有無見到病葉上的霉輪？這是什么？

6．從培養皿上挑取少許荔枝霜疫霉菌制片，在顯微鏡下觀察注意其孢子囊梗與Phytophthora的有何不同？有無見到卵孢子，什么形態？

觀察荔枝霜疫霉病的標本，葉部、花穗和果實等部位各表現什么癥狀？有無見到霉狀物？

7．顯微鏡觀察禾生指梗霉的玻片，其孢子囊梗有何特征？孢子囊什么形態？

取谷子白發病株，有無見到病部有許多黃色粉末狀物，這是什么？取一塊載玻片滴一滴清水其上，輕輕抖動病株讓黃色粉末狀物落在水滴上，制成玻片在顯微境下觀察，卵孢子什么形態？顏色？外壁分多少層？觀察谷子白發病各階段的癥狀（灰背、白尖、白發）。

8．顯微鏡觀察十字花科白銹組織切片，可見到寄主表皮下面的孢子囊堆，什么形狀？孢子囊便什么形狀？孢子囊如何著生？病組織內有無見到卵孢子，什么形狀？外壁有無花紋？

觀察十字花科白銹病標本，葉部和花梗上的癥狀有何區別？病征有什么特點？

9．任意選取所供的1~2種作物霜霉病標本（黃瓜霜霉病、白菜霜霉病、葡萄霜霉病、菠菜霜霉病、萵苣霜霉病等），挑取病斑背面的霜霉狀物少許制成玻片，在顯微境下觀察，注意其孢子囊梗分枝的方式，孢子囊的形態，查霜霉菌科分屬檢索表，鑒定出其屬名。

觀察上述各種霜霉病的標本，注意葉部和莖部的癥狀有無區別比較其病斑形態和霜霉狀物的顏色有無不同？

附：霜霉科主要屬簡明分類檢索表

1．孢囊梗菌絲狀，短，很少分枝······················ 指梗疫霉屬（Sclcrophthora）1．孢囊梗分枝明顯······················· 2 2．孢囊梗上部膨大，分枝呈指掌狀·············· 指梗霉屬（Sclerospora）2．孢囊梗細長，直徑均勻···················· 3 3．孢囊梗單軸，直角分枝，頂端平切狀············ 單軸霉屬（Plasmopara）3．孢囊梗叉狀銳角分枝········· ··········· 4 4．分枝不對稱···················

· 假霜霉屬（Pseudoperonospora）4．分枝兩側對稱························ 5 5．頂端尖細······················· 霜霉屬（Peronospora）5．頂端膨大呈掌狀，上生小梗，小梗上生孢子囊······· 盤梗霉屬（Beremia）

三、作業

1．指明繪圖的，按要求繪出，并注明所繪各部分的名稱。2． 未知霜霉病菌分屬鑒定。實驗三

植物病原真菌——接合菌亞門（Zygomycotina）

接合菌亞門的真菌大多數為腐生菌，少數寄生于人、動物、植物及其它真菌上。有一類與高等植物的根共生，結合成互為有利的共生體——內生菌根。

接合菌的營養體多數為發達的、多分枝的無隔菌絲體。無性繁殖在孢子囊內形成不動的孢囊孢子。

有性生殖多以同形配偶囊接觸配合的方式產生接合孢子。

接合菌亞門包括接合菌綱（Zygomycetes）和毛菌綱（Trichomycetes）。其中接合菌綱的毛霉目（Mucorales）內有一些是植物的兼寄生菌。

一、實驗內容和材料

毛霉目，毛霉科（Mucoraceae）

1．匍枝根霉菌（Rhizopus stolonifer）和番薯軟腐病。2．生長在培養基上的毛霉屬（Mucor）或犁頭霉屬（Absidia）。3．接合菌有性生殖異宗結合形成接合孢子的示范材料。

二、實驗方法與步驟

1．顯微境觀察匍枝根霉的營養體和無性繁殖體，注意分清其匍伏枝、假根、孢囊梗、孢子囊、孢囊孢子、囊軸等各部，觀察匍枝根霉的接合孢子（繪圖）。

觀察番薯軟腐病標本，其癥狀屬何種類型？

2．從培養皿中挑取少許毛霉或犁頭霉的菌落制成玻片，在顯微境下觀察，與根霉有何差別？ 3．觀察接合菌異宗結合的示范材料，在（＋＋）（――）和（＋－）三個組合中哪一個組合才能產生接合孢子。

三、作業

繪匍枝根霉的無性階段和接合孢子圖，并注明各部分名稱。實驗四 植物病原真菌——子囊菌亞門（Ascomycotina）

子囊菌是真菌中種類最多的一個亞門，多數為腐生菌，也有不少植物的寄生菌，引起許多重要的植物病害。有一些寄生在昆蟲上可作生防菌。子囊菌的營養體除一些低等的種類為單細胞或不發達的絲狀體外，大多數均為分枝發達的有隔菌絲體。菌絲體有的還可以構成菌核、子座和子實體等各種組織結構。

無性繁殖：多數子囊菌的無性繁殖很發達，低等的以芽殖方式產生芽孢子。多數子囊以分生孢子梗產生各種類型的分生孢子。

有性生殖：子囊菌有性生殖的共同特征是通過多種方式進行性結合后均產生囊狀結構的子囊，子囊內再形成一定數目的子囊孢子。低等的子囊菌其子囊為裸生的。多數子囊菌的子囊形成于發育不同、形態有別的組織結構——有性子實體（子囊果）內，子囊的壁有單層和雙層的。

子囊菌亞門便根據其子囊果的類型、子囊壁是單層還是雙層等特點分為6個綱。1．半子囊菌綱（Hemiascomycetes）2．不整囊菌綱（Plectomycetes）3．核菌綱（Pyrenomycetes）4．腔菌綱（Loculoascomycetes）5．盤菌綱（Discomycetes）6．蟲囊菌綱（Laboulbeniomycetes）

一、實驗內容和材料

除蟲囊菌綱外的五個綱，以核菌綱和腔菌綱為主。1．畸形外囊菌（Taphrina deformans）和桃縮葉病。2．紫紅曲霉（Monascus purpureus）的閉囊殼玻片。3．禾白粉菌（Erysiphe graminis）和小麥白粉病。4．待鑒定的幾種白粉菌標本。

5．番薯長喙殼菌（Ceratocystis fimbriata）和番薯黑斑病。6．圍小絲殼菌（Glomerella cingulata）和炭疽病。7．黑腐皮殼菌（Valsa）和樹木腐爛病。8．玉蜀黍赤霉菌（Gibberella zeae）和小麥赤霉病。9．痂囊腔菌（Elsinoe）和瘡痂病。

10．球腔菌（Mycosphaerella）和瓜類褐斑病。11．黑星菌屬（Venturia）和瓜類褐斑病。

12．核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）和十字花科蔬菜菌核腐爛病。

二、實驗方法與步驟

（一）半子囊菌綱，外囊菌目（Taphrinales）

顯微境觀察桃縮葉病的組織切片，有無見到病葉角質層下有一層排列整齊的裸生子囊層，子囊內有幾個子囊孢子？有無見到成熟子囊基部的腳胞？（繪圖）注意病葉的柵欄組織發生何種變形？病葉屬何種病變？

（二）不整囊菌綱，散囊菌目（Eurotiales）

顯微境觀察紫紅曲霉菌的閉囊殼玻片，其外壁有幾層細胞，是緊密的還是松散的？閉囊殼內有無見到完整的子囊，為什么不易見到？

（三）核菌綱

1．白粉菌目（Erysiphales）

（1）顯微鏡觀察白粉菌的分生孢子玻片（或挑取少許禾谷類作物白粉病的白粉狀物制片），分生孢子呈什么狀態著生？什么形態？

挑取白粉病葉上的小黑粒點制片，在顯微鏡下觀察，有無見到褐色圓球形的閉囊殼？附屬絲什么形狀？在低倍視野下用小針尖對準成熟的閉囊殼，輕壓蓋玻片將閉囊殼的外壁壓破，閉囊殼內有幾個子囊，什么形狀？有無見到成熟的子囊孢子，什么形狀？每個子囊內有幾個子囊孢子？（繪一壓破的閉囊殼圖，有附屬絲、子囊、子囊孢子）顯微鏡觀察禾白粉菌吸器玻片，什么形狀？

（2）觀察所供的幾種植物的白粉病標本，其癥狀有何共同特點？

任選1~2種白粉病標本，挑取其上的黑褐色小粒點制成玻片，在顯微鏡下觀察，查下列檢索表，鑒定出其屬名。附：白粉菌科主要屬簡明分屬檢索表 1．閉囊殼內有多個子囊 2 1．閉囊殼內只有一個子囊 3 2．附屬絲針形，基部膨大 球針殼屬（Phyllactinia）2．附屬絲菌絲狀 白粉屬（Erysiphe）

3．附屬絲頂部卷曲呈鉤狀 鉤絲殼屬（Uncinula）3．附屬絲頂部呈叉狀分枝 叉絲殼屬（Microsphaera）4．附屬絲菌絲狀，不分枝 單絲殼屬（Sphaerotheca）4．附屬絲頂部呈叉狀分枝 叉絲單囊殼屬（Podosphaera）

球殼菌目（Sphaeriales）

（1）顯微鏡觀察番薯長喙殼菌，有無見到具一根長喙的子囊殼？子囊殼內有無完整的子囊？為什么不易見到？子囊孢子什么形狀？（繪圖）

從病組織上挑取少量黑色霉狀物制片，在顯微鏡下觀察，可見到幾種類型的內生分生孢子？其形狀和細胞壁的厚薄有無區別？

觀察番薯黑斑病標本，病苗和病薯塊表現什么癥狀？病部有無見到黑色刺狀物和霉層？（2）在顯微鏡下觀察圍小絲殼菌引起的炭疽病切片，注意其子囊殼與子座的關系，子囊殼什么形狀、顏色？子囊什么形狀，如何排列，子囊間有無側絲？子囊孢子什么形狀，單胞？多胞？有無顏色？

觀察各種植物的炭疽病標本，有什么病征？

（3）顯微鏡下觀察蘋果樹腐爛病組織切片，有無見到黑色子座組織，子囊殼什么形狀，有無長頸，與子座的關系怎樣？子囊內有幾個子囊孢子，什么形狀、單胞或多胞？有無顏色？ 觀察黑腐皮殼菌的無性階段（Cytospora）、分生孢子器什么形狀？有無見到發達的子座組織，孢子器有幾個腔室？分生孢子什么形狀？單胞、多胞？有無色澤？

觀察果樹腐皮病標本，屬何種類型的癥狀？病部有無見到黑色小粒點或孢子角？

（4）顯微鏡觀察小麥赤霉病穗的組織切片，注意子囊殼與子座的關系？子囊殼什么形狀、顏色？子囊什么形狀？有無見到子囊間的擬側絲？子囊內有幾個子囊孢子，怎樣排列？子囊孢子什么形狀、顏色、有幾個分隔？（繪圖）

觀察小麥赤霉病標本，病穗上有無見到粉紅色霉層和藍黑色小粒點，是什么？ 3．

（四）腔囊菌綱

1．多腔菌目（Myriangiales）

顯微鏡觀察痂囊腔菌引起的瘡痂病組織切片，可見到子座內有許多散亂排列的子囊腔，每個子囊腔內有幾個子囊？什么形狀？子囊壁是單層還是雙層的？子囊孢子什么形狀，有幾個分隔？ 觀察柑桔瘡痂病、葡萄黑痘病標本，在葉、莖和果實上的癥狀有何特點？ 2．座囊菌目（Dothidiales）

顯微鏡觀察瓜褐斑病組織切片，子座內的假囊殼什么形狀？假囊殼內的子囊什么形狀？如何排列？子囊孢子什么形狀，單胞還是雙胞？有無色（繪圖）

觀察瓜褐斑病標本，莖部和葉部的癥狀為何不同，有無見到黑色小粒點，是什么？ 3．格孢腔菌目（Pleosporales）

顯微鏡觀察梨或蘋果黑星病組織切片，假囊殼什么形態？假囊殼內的子囊什么形態？如何排列？有無見到子囊間的擬側絲？子囊孢子在子囊內如何排列？什么形狀？什么顏色？雙細胞是否大小均等？（繪圖）

觀察黑星病標本，葉、枝、果實等部的癥狀各有何特征？

（五）盤囊菌綱，柔膜菌目（Helotiales）

觀察核盤菌的菌核萌發形成子囊盤的標本，每一菌核可形成幾個子囊盤？子囊盤外觀呈什么形狀？

顯微鏡觀察核盤菌子囊盤切片，子囊盤可分為子實層、囊層基和囊盤被等部分，仔細觀察子囊層的構造，子囊什么形狀？如何排列？有無見到子囊間的側絲？子囊內有幾個子囊孢子，什么形狀？單胞還是多胞（繪圖）

觀察核盤菌引起的十字花科作物菌核腐爛病標本，寄主被害部的癥狀屬何種類型？有無見到黑色鼠糞狀的菌核？

三、作業

1．上述指明的繪圖。2．白粉菌鑒定到屬的結果。

實驗五 植物病原真菌——擔子菌亞門（Basidiomycotina）

擔子菌亞門的真菌其中低等的多為寄生或專性寄生菌（活物營養寄生菌），引起許多重要的植物病害，如多種作物上的黑粉病和銹病，高等擔子菌多數為腐生的，亦有一些兼寄生菌，一些高等擔子菌與高等植物的根共生聯結成互為有利的外生菌根。

擔子菌的營養體為發達的，分枝有隔菌絲體。一些擔子菌的菌絲體上有鎖狀聯合。高等擔子菌的營養體能組織成結構緊密的大型子實體，如蘑菇。

擔子菌的無性繁殖除銹菌產生雙核的夏孢子外，多數都不很發達。有性生殖配合方式簡單，性結合后從擔子上形成外生型的擔孢子。

擔子菌根據擔子果有無和擔子果的發育類型分為三個綱。1．冬孢菌綱（Teliomycetes）2．層菌綱（Hymenomycetes）3．腹菌綱（Gasteromycetes）

一、實驗內容和材料

僅做冬孢菌綱

1．柵銹屬（Melampsora）和亞麻銹病（M.lini）。

2．柄銹屬（Puccinia）和小麥稈銹病（P.graminis）、條銹病（P.striiformis）和葉銹病（P.recondita）3．單孢銹屬（Uromyces）和豆類銹病。

4．膠銹屬（Gymnosporangium）和蘋果銹病（G.yamadai）的性子器和銹子腔階段以及檜柏上的冬孢子角。

5．黑粉屬（Ustilago）和腥黑粉屬（Tilletia）典型的冬孢子萌發玻片。6．黑粉菌的主要屬及其引起的黑粉、黑穗病。

（1）黑粉屬：小麥散黑穗病（Ustilago tritici）或玉米黑粉病（U.maydis）。（2）軸黑粉屬（Sphacelotheca）和高梁或玉米絲黑穗病（S.reiliana）。（3）腥黑粉屬：小麥腥黑穗病（Tilletia caries）。（4）條黑粉屬（Urocystis）和小麥桿黑粉病（U.tritici）。

二、實驗方法與步驟

（1）銹菌目（Uredinales）

1.顯微鏡觀察觀察亞麻銹病的組織切片，有無見到寄主角質層下排列整齊的冬孢子堆？冬孢子什么形狀？有沒有柄？相互如何聯結的？

觀察亞麻銹病標本，表現什么癥狀？

2．顯微鏡觀察并比較小麥三種銹病的冬抱子有何差別？（給其中一個冬孢子圖）

顯微鏡觀察小麥銹菌的夏孢子，什么形狀、什么顏色，有無見到外壁的微刺？有無見到發芽孔？（繪圖）

觀察小麥三種銹病標本，比較其夏孢子堆和冬孢子堆有何差別？

3．從豆類銹病病葉上挑取少許夏孢子和冬孢子分別制片，在顯微鏡下觀察，（繪圖）和柄銹屬的冬孢子比較有何不同？

4．顯微鏡觀察蘋果銹病組織切片，可見到病葉的表面有瓶狀的性子器，有無見到性抱子和受精絲？病葉的背面有袋狀的銹子腔，銹孢子是如何著生？ 從檜柏上的冬孢子堆挑取少量膠狀物制片，在顯微鏡下觀察，有無見到有長柄、雙細胞的冬孢子（繪圖）？從細胞壁的厚薄程度、冬孢子柄的長短、是否膠化等，比較膠銹屬和柄銹屬的冬孢子，有什么不同？

觀察蘋果銹病在蘋果葉上和檜柏枝條上的癥狀，分別為膠銹菌的什么發育階段？

（二）黑粉菌目（Ustilaginales）

1．顯微鏡觀察黑粉菌屬和腥黑粉屬的冬孢子萌發的玻片，比較它們的萌發方式有什么不同（擔子有無分隔、擔孢子側生還是頂生、擔抱子的數目和形態）。（繪圖）

2．取小麥散黑穗病或玉米黑粉病、高粱或玉米絲黑穗病、小麥黑穗病和小麥稈黑粉病的標本，分別挑取少許黑粉狀物制片，在顯微鏡下觀察，比較黑粉屬、軸黑粉屬、腥黑粉屬和條黑粉屬的冬孢子有什么不同。（繪2個屬的冬孢子圖）

觀察上述各種黑穗、黑粉病的標本，注意其發病部位，是局部性的還是全株性？

三、作業

上述指明的幾個繪圖。

實驗六

植物病原真菌——半知菌亞門（Deuteromycotina）

半知菌亞門的真菌很多是腐生的。有些在工業上有重要的用途；有些是人和動物的寄生菌；還有一些可引起重要的植物病害。

其共同特點是不進行或自然情況下不常進行有性生殖；營養體除少數為單細胞外，大多數為發達的有隔菌絲；無性繁殖產生各種類型的分生孢子。

半知菌根據其營養體、無性繁殖體的形態以及分生孢子發育的特點分為三個形式綱。芽孢綱（Blastomycetes）：營養體單細胞，以芽殖方式產生芽孢子。

絲孢綱（Hyphomycetes）：營養體為菌絲體，分生孢子產生于散生的孢子梗或分生孢子座上。還有一些不產生任何分生孢子，只有營養菌絲和菌核。

腔孢綱（Coelomycetes）：營養體為菌絲體，分生孢子產生于孢子盤上或孢子器內。

一、實驗內容和材料

（一）絲孢綱

1．稻梨形孢菌（Pyicularia oryzae）和稻瘟病。

2． 黃萎輪枝菌（Verticilium albo-atrum）或大麗花輪枝菌（V.dahliae）和植物的黃萎病。3． 長蠕孢屬（Bipolaria）和玉米小斑病（B.maydis）。4．尾孢屬（Cercospora）和芹菜葉斑病（C.apii）。5．鐮孢屬（Fusarium）和植物的枯萎病。

6．立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）和植物的幼苗立枯病。7．齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）和植物的白絹病。

（二）腔孢綱

8．刺盤孢屬（Colletotrichum）和盤長孢屬（Gloeosporium）和植物的炭疽病。9．莖點屬（Phoma）或大莖點屬（Macrophoma）和果實的黑腐病。10．殼針孢屬（Septoria）和芹菜斑枯病（S.apii）。

二、實驗方法和步驟

1．顯微境下觀察稻梨孢菌的玻片，分生孢子梗什么形態？分生孢子什么形狀？有幾個分隔？有無顏色？（繪圖）

2．顯微鏡觀察輪枝菌的玻片，分生孢子梗什么形態？怎樣分枝？

3．顯微鏡觀察玉米小斑病菌，分生孢子什么形狀，有幾個分隔？有無顏色？（繪圖）4．顯微鏡觀察芹菜葉斑病菌（自制玻片）：分生孢子梗和分生孢子什么形態？幾個分隔？有無顏色？（繪圖）

5．從培養皿的菌落上挑取少許鐮孢菌制成玻片，在顯微鏡下觀察，有無見到兩種分生孢子？各呈什么形態？分生孢子梗什么形態？

6．從培養皿的菌落上挑取少許立枯絲核菌制成玻片，在顯微鏡下觀察，菌絲如何分枝的。（繪圖）

7．觀察齊整小核菌的培養特性，培養基表面生長的菌絲有何特征？菌核什么形狀？顯微鏡觀察菌核的切片，表層細胞和內部細胞有何不同？

8．顯微鏡觀察炭疽病的組織切片，分生孢子盤什么形狀？分生孢子梗和分生孢子什么形狀？

有無見到黑色的剛毛？（繪圖）

9，顯微鏡觀察果實黑腐病的組織切片，分生孢子器什么形狀？有無見到孔口？分生孢子什么形狀？有無分隔？有無顏色？（繪圖）

10．顯微鏡觀察芹菜斑枯病的組織切片，分生孢子什么形狀？有幾個分隔？ 11．觀察半知菌主要屬引起的植物病害，屬何種類型的癥狀？產生什么病征？

實驗七

植物細菌病害的癥狀觀察及細菌病害的室內診斷

一、實驗材料及用具

各種細菌病害癥狀類型的標本、圖片、掛圖；待診斷的細菌病害的新鮮病株，已知血清的稀釋液；手持放大鏡、干凈的載玻片、蓋玻片、生理鹽水、吸水紙、刀、針、剪等用具。

二、實驗步驟

（一）癥狀觀察

1．腐爛

柔嫩多計肥厚的植物器官或組織，尤其是貯藏器官組織、受病原細菌寄生后往往發生腐爛，造成這類癥狀的細菌，大多是從植物的傷口侵人的。歐氏桿菌屬（Erwinia）中的許多種都可以引起多種植物發生腐爛，如白菜軟腐病。

2．葉斑、葉枯

葉斑病主要是葉片局部的細胞或組織受細菌侵染后壞死而形成的癥狀。在具有網狀葉脈的寄主植物上葉斑常呈多角形，如黃單胞桿菌（Xanthomonas sp.）引起的棉花角斑病、豆類葉斑等。在禾谷類作物及其它具平行脈的植物上葉斑多呈現為長條形，如水稻白葉枯病和水稻細菌性條斑病等。

細菌性葉斑病發生初期常呈現半透明的水漬狀，大多數葉斑病的病斑周圍由于毒素的作用，有一黃色的暈圈所包圍，有些葉斑病的壞死部分，容易在后期脫落形成穿孔，如黃單胞桿菌（Xanthomonas sp.）引起的桃細菌性穿孔病。

3．萎蔫

是侵染維管束組織的細菌所引起的癥狀，如棒狀桿菌（Clavibacter sp.）所引起的馬鈴薯環腐病，假單胞桿菌（Pseudomonas sp.）引起的花生、煙草、番茄、桑樹等的青枯病。4．癌腫和其它畸形

植物的薄壁組織局部受病原細菌侵染后發生的刺激性病變，引起癌腫的病原細菌可以產生一些生長激素，刺激細胞分裂增多或體積增大，而呈現癭瘤或簇生等現象，如癌腫野桿菌（Agrobacterium tumefaciens）所引致的蘋果毛根病，仁果類，核果類及葡萄的根癌病。

（二）細菌病害的室內診斷 1．顯微鏡檢驗法

將典型、新鮮的病組織洗刷干凈，用解剖刀或剪刀在病健交界處剪取一小塊病組織，置于干凈的載玻片上，加一滴無菌水，蓋上蓋玻片，在低倍顯微鏡下觀察，若有大量的細菌從病組織中溢出，則可初步診斷該病組織可能是由細菌引起的病害。

2．血清反應法（載玻片凝集反應）

（1）在干凈的載玻片上滴一滴生理鹽水，取一小塊病組織浸于其中，靜置片刻，讓細菌自行涌出，（可在顯微鏡下觀察）制成細菌懸浮液。

（2）將病組織移去，加一滴已知病原細菌的抗血清，充分混合，觀察是否有凝集集物形成，可另設一滴不加抗血清的作對照。

三、作業

1． 描述所觀察的各類細菌病害的癥狀特點。2． 細菌病害血清診斷法的檢驗結果。

實驗八 植物病原細菌的分離

一、目的

學習從感病的植物組織中分離出病原細菌純培養物的操作技術。

二、實驗材料及用具 新鮮的病組織。

酒精燈、滅菌的細菌培養基、滅菌的干凈培養皿、分離接種用具、升汞液（0.1%）、漂白粉液（1:14）70％酒精、油性筆、火柴。

三、分離前的準備工作

1．將實驗室打掃干凈，關閉門窗，減少空氣流通； 2．用0.1％升汞液將實驗臺面抹洗干凈，再鋪上濕毛巾； 3．將所需用品都放好在工作臺，操作時盡量避免走動。

四、病原細菌的分離

（一）平板劃線分離法

1．將沖洗干凈的新鮮病組織剪切成小塊，在70%酒精中浸一會迅速移入0.1%升汞液中處理1－2分鐘（時間的長短因材料不同而異），后移入漂白粉液中浸1－2分鐘，再用無菌水沖洗干凈。（如分離的材料為肥厚多汁的組織或較粗的莖、根、枝條等，可將其表面蘸上酒精并在火焰上灼燒進行表面清毒，然后以滅菌的解剖刀削去表皮，在病部邊緣挑取一小病組織塊）。

2．取一滅菌的培養皿，加一滴無菌水在皿內，將上述已經過表面消毒的病組織置于其中，用滅菌的解剖刀將病組織切碎，靜置片刻，制成細菌懸浮液。

3．用滅菌的移植環蘸少許細菌懸浮液，在瓊脂平板上自左至右劃數條線，使用過的移植環再經火焰滅菌，移動培養皿的位置，移植環，連接上線末再劃數條線，如此操作。在該培養皿的瓊脂平板上重劃3－4次，便可能獲得分散的單個菌落。

4．將培養皿倒置，在26－28℃的恒溫培養箱中培養1－2天后，觀察檢查，如見分散的單個細菌落則進行移種，純化并保存。

（二）平皿稀釋法 1．取四個滅菌的培養皿按順序排列，每一個皿內各加入一滴無菌水。2．細菌懸浮液的制備（同上項2）

3．用滅菌的移植環蘸取1－2環菌液移入第二個培養皿中，略略攪動，再從第二個培養皿內蘸取1－2環稀釋后的菌液移入第三個培養皿內，如此依次移至第四個培養皿或至最后一個培養皿為止。

4．將已完全熔化的培養基待其冷卻至45℃左右，在各培養皿內倒入10－15毫升培養基，輕輕搖動使其與皿內的細菌懸液充分混勻，靜置待其冷凝后即按上項方法培養、檢查、純化和保存。

五、作業

交分離所得的純培養菌種1支。

實驗九

植物病毒的傳染試驗

一、實驗材料

TMV病葉

健康的心葉煙植株

白菜花葉病

健康的白菜植株

無毒菜蚜

金鋼砂、紗布、消毒研缽、毛筆、標簽等。

二、實驗步驟和方法

（一）植物病毒汁液摩擦傳染試驗 1．制備病毒汁液：取一小塊TMV病葉，用水洗干凈，放在研缽中磨碎，加蒸餾水2~10倍再進行研磨使得到病毒汁液。

2．用肥皂洗凈雙手，取健康的心葉煙植株一盆，在其上部已展開的三片葉的正面撒上一層薄薄的金鋼砂。

3．左手托住葉片，用右手的拇指和食指夾住紗布沾取少許病毒汁液，輕抹葉片，注意葉片各部位都要抹到，但不要重復以免擦傷葉表面，抹后用蒸餾水沖洗葉面以去除多余的病毒汁液及殘存的金鋼砂，接種后即告完畢。

4．用肥皂將雙手充分洗干凈，按上法用健株煙葉研磨的汁液進行接種作對照。5．將接過種的植株及對照植株放入無蟲溫室中，三天后觀察發病情況，記錄結果。

（二）介體蚜蟲傳染試驗

1．用毛筆取無毒菜蚜20頭，放在小皿中餓半小時后，移到白菜花葉病株上（病葉上先放上一張1平方厘米的白紙，將蚜蟲先移到紙片上，讓其慢慢爬到病葉上）飼毒5－10分鐘。

2．將飼過毒的蚜蟲用毛筆轉移到4株白菜健苗上，每株5頭（每一健苗先放一張1平方厘米的白紙片，將帶毒蚜蟲移到紙片上，任其爬到葉片上取食）傳毒接種24小時后，噴樂果將所有蚜蟲殺死。

3．用無毒菜蚜直接移到白菜健苗取食作為對照。4．2－3周后，觀察發病情況并記錄。

三、作業

兩種傳染病毒試驗記錄結果及寫出分析報告。

實驗十

植物病毒的物理性質測定

一、實驗材料 TMV病

健康的心葉煙幼苗

消毒研缽、紗布、薄壁小管、燒杯、水浴箱、試管、棉花、1毫升及10毫升吸管、小碟等。

二、實驗步驟和方法

（一）失毒溫度的測定

1．取TMV病葉在研缽中研碎，用雙層紗布過濾壓取汁液，1毫升吸管將病毒汁液分別裝入5個薄壁小管中，分別標記處理的溫度。

2．將恒溫水浴箱調至95℃、90℃、80℃、70℃和60℃五個溫度等級。

3．從高溫至低溫，依次每種溫度放入一支裝有TMV病毒汁液的薄壁小試管，各處理10分鐘，取出立即置冷水中冷卻。

4．按常規汁液摩擦接種法，分別將五種不同溫度處理過的病毒汁液接種在心葉煙的健康植株上，掛好標簽，放置于無蟲溫室中。

5．接種后第三天觀察接種過的葉片壞死枯斑出現的情況，記錄結果。失去侵染力的最低溫度即為該病毒的失毒溫度。

（二）稀釋終點的測定

l．取六個小碟分別標記稀釋度為1:10，1:102，1:103，1:104，1:105、1:106。2．用10毫升的吸管吸取蒸餾水分別放入六個小碟內，每碟9毫升。吸取1毫升TMV汁液，放入1:10的小碟中，攪勻。

4．從1:10的小碟中吸取1毫升稀釋1O倍的病毒汁液移入第二個小碟中，獲得1:102的病毒稀釋液。按同法依次稀釋至第六個小碟，分別獲得六種不同稀釋度的病毒汁液。5．從稀至濃，將六種不同稀釋度的病毒汁液分別用常規接種法接種在健康的心葉煙植株上，置無蟲的溫室中。

6．接種后第三天觀察接種過的葉片壞死枯斑出現的情況，記錄結果。失去浸染力前一個稀釋度即為該病毒的稀釋終點。

三、作業

病毒致死溫度和稀釋終點試驗記錄結果及寫出分析報告。

實驗十一 植物線蟲病的癥狀觀察、病原線蟲的識別及線蟲的常規分離方法

一、實驗材料及用具

1．常見的農作物線蟲病害標本：小麥粒線蟲病；甘薯莖線蟲病；花生或柑桔根結線蟲病；大豆胞囊線蟲病；水稻潛根線蟲病；水稻干尖線蟲病等。

2．顯微鏡鏡檢用具。

3．帶有活線蟲的植物病組織或土壤標樣。

4．分離線蟲用的漏斗、紗布、小燒杯、吸管、離心管等。

二、實驗步驟和方法

1． 取所提供的各種植物線蟲病害的標本，觀察其受害部位及癥狀特點并作記載。

2．顯微鏡觀察幾種植物線蟲各蟲態的形態特征。注意其是雌雄同形還是雌雄異形，及其內部主要器官。

3． 用漏斗法分離病植物或土壤中的活線蟲，取病組織或土壤20克，置于盛有清水的紗網漏斗中（用雙層紗布包扎亦可），在20－25℃的室溫下靜置24小時。線蟲即會慢慢游出滑落到漏斗底部的乳膠管中，然后輕輕打開乳膠管的止水夾，用小燒杯收集漏斗底部的液體，用每分鐘約1000轉的離心機將此液體進行離心去掉上層清液，用吸管吸取一滴沉淀液置載玻片上，在低倍顯微鏡下檢查有無活動的線蟲？注意區別土壤中的寄生線蟲和非寄生線蟲。

三、作業

1．描述2－3種線蟲病的癥狀特點。2．繪一種植物病原線蟲的形態圖。

3．記述線蟲分離的結果。

第二篇：植物病理學實驗大綱

實驗部分

實驗

一、植物病原學（3學時）

實驗目的：認識植物傳染性病原物的主要類型及其形態特征、致病機制等，明確重要病原生物的主要分類鑒別特征及其致病特點，初步掌握不同類型病原生物的診斷和鑒定要點，學會識別診斷和防治不同類型病原物所引起病害的一般方法。

實驗內容：植物病害的描述方法，包括的病害的病狀和病癥，病狀類型主要有變色、壞死、萎蔫、腐爛、畸形等，病癥主要有霉狀物、點狀物、粉狀物等類型；非侵染型病害主要包括缺素、環境因素、藥害等類型。

實驗

二、植物病原真菌形態與分類（3學時）

實驗目的：認識病原物致病性因素及其變異,明確寄主抗病性的類型及其復雜性,初步掌握寄主─病原物相互關系的理論學說，學會用運所學理論分析解決生產上品種抗性喪失問題及其相應的對策。

實驗內容：植物病害病原物的營養體形態特征、營養體的變態與組織，真菌繁殖方式：有性無性繁殖類型，以及繁殖體孢子類型；真菌分類概述；病原生物其他類型如：原核生物、病毒、線蟲、寄生性種子植物等形態特征。

實驗

三、植物病害循環與病程與防治（3學時）

實驗目的：認識病害循環和侵染過程，明確病害流行的時空動態、流行類型及影響因素，掌握病害預測預報的一般方法，為今后制訂有效的防治病害對策提供理論依據。

實驗內容：了解植物病害侵染植物原物侵染植物病發病的過程，影響病程的因素，以及植物病害循環的特點，越冬越夏場所，了解植物病害的防治方法，保護作用、治療作用，并掌握病害防治的常用技術。

實驗

四、小麥病害和雜谷病害（3學時）

實驗目的：掌握小麥和雜谷主要病害的癥狀和病原菌形態。

實驗內容：小麥三種銹病；小麥白粉病；小麥根腐病；小麥黃矮病；玉米大斑病；玉米小斑病；玉米絲黑穗；玉米病毒病等的癥狀標本和玻片標本。

實驗

五、薯類和棉花病害（3學時）

實驗目的：掌握薯類和棉花主要病害的癥狀和病原菌形態。

實驗內容：馬鈴薯晚病病；馬鈴薯病毒病；馬鈴薯環腐病；棉花苗期病害；棉花枯萎病；棉花黃萎病的癥狀標本和玻片標本。

主要實驗用書及參考書：

《普通植物病理學實驗指導》，許志剛主編，中國農業出版社1997； 《農業植物病理學實驗實習指導》，李宏連主編，北京農業出版社2001 《植病研究方法》，方中達主編，中國農業出版社1996

第三篇：植物病理學 實驗講稿

園藝植物病理學實驗講稿

生命科學與農林學院

2014年8月

目錄

實驗一

植物病害癥狀的觀察 實驗二

植物病理徒手切片制作 實驗三

真菌的形態觀察

實驗四

鞭毛菌亞門真菌形態觀察 實驗五

接合菌亞門真菌形態觀察 實驗六

子囊菌亞門真菌形態觀察 實驗七

擔子菌亞門真菌形態觀察 實驗八

半知菌亞門真菌形態觀察 實驗九

培養基的制作 實驗十

病原菌的分離培養 實驗十一

植物的抗病性鑒定

實驗一

植物病害癥狀的觀察

一、實驗目的

1.認識各類病害對植物造成的危害，了解植物病害的種類及其多樣性，2.初步掌握主要病害的癥狀表現及其特點，學會植物病害癥狀的描述，為今后病害的診斷奠定基礎。

二、實驗原理

植物病害的癥狀是植物患病后由于異常生理活動而發生在細胞和組織上的病理變化，最后表現為肉眼可見的形態變化。有些癥狀也可用嗅覺、味覺或觸摸進行觀察。有的癥狀是單個細胞表現的癥狀，在這類癥狀中，最常見的是受某種病毒侵染的植株中所見到的細胞質內含體。

植物病害的癥狀可區別為兩類不同性質的特征：病狀和病征。病狀是一定的寄主植物和病原在一定外界條件的影響下相互作用結果的外部表現，是以各自的生理機能或特性為基礎的，而每種生物的生理機能，都是在質上有特異性，并且是相對穩定的。病變，作為這種相互作用過程的結果，一般說其發展是定向的。病狀作為病變過程的表現，其特征也是較穩定的和具有特異性的。這就是利用病狀診斷植物病害的基礎。

病征是由病原微生物的群體或器官著生在病體表面所構成的，它更直接地暴露了病原物在質上的特點。如真菌子實體在寄主表面形成的霉層、黑點等。由植物病毒、植原體、許多病原細菌、非侵染性植物病害等沒有病征的表現。病征的出現與否和出現的明顯程度，雖受環境條件的影響很大，但一經表現出來卻是相當穩定的特征，所以根據病征能夠正確的判定病害。不同植物的任何病害都具有其獨特癥狀，通常在病害發生過程中按一定順序出現。病理學家正是根據這種順序出現的癥狀在田間診斷植物病害。

病狀和病征，尤其是前者，作為診斷病害的依據也有其局限性。首先是許多植物病害常產生相似的病狀，因此要從各方面的特點去綜合判斷；其次，植物常因作物品種的變化或受害器官的不同，而使病狀有一定幅度的變化；第三，病害的發生發展是一個過程，有初期和后期，病狀也隨之而發展變化；第四，環境條件對病狀和病征有一定的影響，尤其是濕度對病征的產生有顯著地作用，加之發病后期病部往往會長出一些腐生菌的繁殖器官。因此，癥狀的穩定性和特異性只是相對的，要認識癥狀的特異性和變化的規律，在觀察植物病害時，須認真地從癥狀的發展變化

中去研究和掌握癥狀的特殊性；觀察和采集植物病害標本，仔細地區別病征的那種微小的、似同而異的特征，這樣才能正確地診斷病害。

三、實驗材料、試劑與器材

1.按照植物病害的病狀類型（變色、壞死、斑點、腐爛、畸形）和病征類型（粉狀物、霉狀物、點狀物、菌核、溢膿等）準備植物病害的盒裝標本、瓶裝浸漬標本及新鮮標本（不同類型的病狀和病征的標本可根據當地的情況準備）。

2.各類癥狀的掛圖、模型、多媒體課件等。3.實體顯微鏡、手持擴大鏡、水果刀、載玻片等。

四、實驗步驟

（一）病狀的觀察

1．斑點 觀察玉米大斑病、棉花角斑病、棉花黑斑病、大麥條紋病、小麥根腐葉斑病、大蔥或大蒜紫斑病、花生網斑病、番茄早疫病、十字花科霜霉病等標本，注意不同類型病害所表現病斑的形狀、大小、顏色等的異同以及病斑上有無輪紋、花紋伴生，同時注意觀察各類病斑上有無病征以及病征的特點。斑點類發生在葉、莖、果等部位，受病組織局部壞死，一般有明顯的邊緣。斑點中還可以伴生輪紋、花紋等特點，根據病斑的顏色、形狀等特點而分為褐斑、黑斑、紫斑、角斑、條斑、大斑、小斑、胡麻斑、輪紋斑、網斑等多種類型。

2．腐爛 觀察甘薯黑斑病和干腐病病薯、馬鈴薯晚疫病和環腐病病薯、棉苗立枯病、柑桔潰瘍病等病害標本，認識該類病害對植物所造成的危害，同時掌握這類病害的病狀特點。腐爛類病狀發生在植物的各個部位，由于組織分解的程度不同，有軟腐、干腐之分。根據腐爛的部位，有根腐、基腐、莖腐、果腐、花腐等名稱，還伴隨有各種顏色變化的特點，如褐腐、白腐、黑腐等。

3．萎蔫 觀察棉花、黃瓜等植物枯萎病、棉花和茄子黃萎病、玉米和茄科植物青枯病、馬鈴薯環腐病等標本，注意區別枯萎、黃萎、青枯等病狀類型，必要時可以剖開病株莖桿觀察微管束是否褐變。典型的萎蔫病狀是植物根、莖的維官束組織受到破壞而發生的葉片或枝條萎垂現象，皮層組織完好，萎蔫病害常無外表的病征。植物受萎蔫菌侵染后，不一定都能引起萎蔫，發病初期有半邊葉片、半個枝條萎垂的現象，但更常見的是全株性萎蔫。

提示 對于萎蔫類病害病狀的觀察應以新鮮標本為主，有條件時最好在田間進行，這類病害發生具有一定的地域性，觀察時要注意其微管束組織的病變，干標本則失去了原有的特點。

4．變色 變色主要有兩種類型。一種表現為黃化，是整個植株或葉片部分地或全部地均勻褪綠、變黃，或呈現其它的顏色。多數伴生有整株或部分的畸形。另一種為花葉，病株葉片色澤濃淡不均，深綠與淺綠部分相間夾雜，一般遍及全株，上部葉片較為顯著，無病征表現。比較觀察煙草花葉病、蘋果花葉病、小麥黃矮病、瓜類、十字花科和茄科植物的病毒病病狀、注意每一種病害的病狀特點。

5．畸形 畸形類病狀由不同組織、器官的病變，如葉片的膨腫、皺縮、小葉、蕨葉；果實的縮果及其它畸形；整個植株的徒長、矮縮；局部器官如花器和種子的退化變形和促進性的變態等。瘤、癭、癌、叢枝和發根也是常見的畸形病狀。觀察桃縮葉病、十字花科根腫病、馬鈴薯癌腫病、果樹根癌病、桑樹根結線蟲病、油菜白銹病、番茄蕨葉病、棗瘋病、泡桐叢枝病、玉米黑粉病、小麥粒線蟲病、水稻惡苗病等，歸納各類標本的病狀類型。

（二）病征的觀察

1．粉狀物 借助手持擴大鏡或實體解剖鏡觀察麥類銹病、十字花科白銹病、麥類白粉病、、玉米黑粉病和麥類黑粉病等病害標本，注意粉狀物的顏色、質地和著生狀況等。

2．霉狀物 借助手持擴大鏡或實體解剖鏡觀察黃瓜霜霉病、甘薯軟腐病、瓜類軟腐病、柑桔青霉病、番茄灰霉病和番茄葉霉病等病害標本或瓶裝標本。注意區別霜霉、黑霉、綿霉、青霉和灰霉等不同類型的霉狀物。

3．點狀物 取小麥白粉病、瓜類炭疽病、棉花莖枯病、芹菜斑枯病、蘋果樹腐爛病和麥類赤霉病等病害標本，借助手持擴大鏡或實體解剖鏡觀察，注意點狀物是埋生、半埋生還是表生，以及在寄主表面的排列狀況、顏色等。

4．菌核 觀察油菜菌核病和水稻紋枯病等病害標本，注意菌核的大小、形狀、顏色、質地等，并觀察菌核萌發狀況。

5．溢膿 溢濃為細菌性病害特有的病征。觀察水稻白葉枯病、水稻細菌性條斑病、十字花科細菌性軟腐病、棉花角斑病和黃瓜角斑病等病害標本，注意溢膿的顏色、出現位置等。用剪刀將植物病組織剪成 4mm 2的小塊，放于載玻片上，加一滴水，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察或直接用載玻片對光觀察噴菌現象。

五、實驗報告及作業

將上述病害標本的發病部位，病狀類型和病癥類型，填于下表：

植物病害癥狀觀察表

病害名稱

發病部位

病狀類型

病癥類型

1.植物病害的主要特征是什么? 2.癥狀在病害診斷上有什么作用? 3.植物病害對農業生產的危害性如何?

實驗二

植物病理徒手切片制作

一、實驗目的

觀察植物病害病原物的形態，進行病原物的分類鑒定，研究受病組織的組織結構病變，受病植物組織與病原物的解剖學關系，以及對于難得一見病原物的保存備用等，都需將材料制成適當的顯微玻片標本。因此，徒手制片技術也是植物病理學研究的重要手段之一。通過本次實驗系統學習實踐常用的徒手制片技術，為以后開展植物病理學的有關研究工作奠定堅實的制片技術基礎。

二、實驗材料、試劑和器材 1．受病植物組織

2.解剖針、刀片、剃刀、移置環、酒精燈、載玻片、蓋玻片、毛筆、淺玻皿、浮載劑、70%酒精、乳酚油、展片臺、光學顯微鏡

三、實驗內容及方法

徒手制片的方法有整體封藏法、徒手切片法、組織透明制片法和涂抹制片法等多種。限于時間本實驗實踐最為常用的整體封藏法和徒手切片法兩種。(一)

整體封藏法

對于生長在植物病部表面或培基上的菌絲體、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及線蟲等，可直接擇取少許封藏在適當的浮載劑中，在顯微鏡下觀察，根據材料的特點和觀察的目的可采用不同的方法封藏制片。常用的方法的概括為挑、刮、撥、撕四種。

1挑：對于在植物受病部位或基質表面生長繁茂的霉狀病原體(如霜霉菌)粉狀病原體(如銹菌、白粉菌)以及培養基上的許多培養菌，可用尖細的解剖針等直接挑取封埋制片，挑取病原體的量，在保證選材典型的前提下，越少越好，以免互相重疊，分辯不清。

取黃瓜霜霉病葉，小麥白粉病葉分別挑取霉狀物和粉狀物鏡檢病原菌的形態特點。

2刮：對病部病原體稀少，或用放大鏡也難辯認霉層的病害標本，可采用兩側具刀的三角刮針(或可用刀片代替)刮取病原物制片。刮的方法是，用刮針的一刃，蘸浮載劑少許，在病部順同一個方向刮取2—3次，將刮得的病原蘸在載玻片的浮載劑

中封片鏡檢。浮載劑在保證浮載質量的前提下要盡量少，否則少量的病原體在大滴的浮載劑中極易分散漂流，在顯微鏡下難以尋找。取玉米小斑病葉，在病斑背面刮制片，鏡檢分生孢子梗和分生孢子的形態。

3撥：對于產生在植物表皮下或半埋生于基物內的病原體孢子器官。如子囊殼、分生孢子器、閉囊殼等，可將病原體連同寄主組織一同撥下，放入浮載劑中，用兩支解剖針，一支穩定材料，另一支撥出植物組織，使病原體外露制片。取小麥全蝕病或白粉病標本，撥小黑點制片，鏡檢子囊果的形態。

4撕：對于寄生在植物表皮細胞上的病原真菌，也可以將此有病原物的表皮撕下來制片鏡檢，這種方法不僅能看到病原物形態，而且可以觀察病原物與寄主的解剖學關系。

在毛毛雨天自田間取回感染白粉病的麥苗(或在保溫箱中取接種染病的麥苗)。用刀片割破葉背表皮再用小鑷子輕輕撕下，放在浮載劑中制片鏡檢白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形態。(二)徒手切片法

欲觀察受病組織病變，病菌侵入和寄主體內擴展過程，以及埋生在基物內真菌子實體的形態結構等，都需將有關材料切成薄片，進行鏡檢，徒手切片是最常用的簡便易行的方法，不需要特殊的設備，而且節省時間，切成的片子不僅可作臨時觀察，也可進一步制成永久性玻片標本。

徒手切片的基本用具是剃刀或刀片。切片時先選取材料并作適當的修整，以左手的食指和姆指捏住材料，中指頂住材料下端，使材料上端突出于手指以上2—3毫米。右手握穩刀，從左向右后方斜向切割。注意刀口必須以材料面垂直。否則所得切面不正。同時雙手不應緊靠身體，而是要活動自如。用臂力均勻地沿刀口后部起拉向前方，連續切割4—5片后，用毛筆蘸水輕輕沿刀口取下，放入盛有水的淺玻皿中，在此過程中左手握著的材料不要放下，否則再切時難按原位置拿材料，此外，在切片過程中，必須常用毛筆蘸水濕潤材料，以免材料干涸不便切割。

對于過于柔軟或較薄的材料，可以夾在“夾持物”中，進行切片更為方便。新鮮胡鮮卜和馬鈴薯塊都可作“夾持物”用。實驗室中通常將通草、接骨木或向日葵的莖髓，剪成適當大小，浸于70%酒精中備用。

切割一定數量的薄片后，用移置環在淺玻皿中選取合用的材料薄片，放在載玻片的水滴中，鏡檢合格者即酒精燈上將水烘干并擺正材料，然后加一滴乳酚油或其浮載劑；放在展片臺上略加熱，鏡檢如無氣泡，即可小心加蓋片，用吸水紙吸除多余的浮載劑，最后貼好標簽，平放于切片板上，待干燥適宜時封固。

徒手切片的缺點是對于微小或過大，柔軟、多汁、肉質及堅硬的材料不易切取，也難制成連續切片，此外切片的厚薄也難一致。切片機切片即可克服這些缺點。

病名： 學名： 制片人： 時間：

切片的標簽制法

四、實驗報告及作業

1．每人交兩片符合質量要求的玻片標本。

2.整體封藏法和徒手切片法兩種基本徒手制片技術都在什么情況下使用? 徒手切法制片有什么優缺點? 怎樣解決這種方法本身存在的問題? 附：常用浮載劑及封固劑

1.水作浮載劑：最常用，但易于干燥，僅適于暫時性檢查，不易封固保存，且易形成氣泡(檢查材料以酒精、5%明膠、水或稀肥皂水稍浸，洗凈后再以水浮載可除去氣泡)。

2.乳酚油：也較常用，成分及配比如下：

苯酚結晶(加熱熔化)20ml

乳酸20ml

甘油40ml

蒸餾水20ml

乳酚油不易干燥，標本可存放幾天以上，為使標本易于辯別，常在其中加染料苯胺藍(棉藍)，用量是0.05—0.1%(也有的加0.2—0.5%的錐蟲藍等)，因其是酸性染料，可染真菌原生質而不染細胞壁，故對分隔難辨的真菌孢子等可由此染色而看清。此法一般只用觀察菌態，不適于測量孢子的大小(因為乳酚油的折射率近于孢子和菌絲體，1.43左右)。另一方面，此法制片，封固比較困難(因為乳酚油易于和封固劑起化學作用而分解)，可用達馬樹脂(和乳酚油不起化學作用)和等量蜂蠟混配做封固劑，蜂蠟放于玻璃皿中在水槽上熔化(溫度勿過高)，達馬樹脂在鐵罐中熔化(溫勿過度)，然后將蜂蠟倒入熔化的達馬樹脂中攪和而成(加少量的貼金膠水，可增進與玻璃的附著力)，封固時以“L”形銅棒等在煤氣燈上燒熱后，蘸少許封固劑在蓋玻片周圍封固，此封固劑干燥快，經久不壞。但由于其致癌作用而逐漸被淘汰而改用甘油乳酸液。

3.甘油乳酸液：也可加苯胺藍等染料，其成分如下：

乳酸

500ml

甘油

1000ml

蒸餾水

500ml

4.水合氯醛碘液：成分配比如下：

水合氯醛

100g

碘化鉀

5g

碘

1.5g

水

100ml

碘與碘化鉀研和，加水溶解。然后與水合氯醛混合，此浮載劑較好，能使真菌組織透明，并染上顏色，能彌補乳酚油的不足，一一看清細胞壁和其它結構，此法制片只可保存幾天，不宜久存，為保存，可除去碘液再用乳酚油浮載后封存。5.甘油：此浮載劑適于保存藻類、水霉菌等柔軟標本將標本放在一滴10%的甘油中，加蓋玻片，水分蒸發后，隨時補加甘油至水分蒸發凈，制成的標本玻片平放可經久不壞，(擦去多余甘油，用香脂油或其它封固劑封固，可永久保存)。6.甘油明膠：成分及配方如下：

明膠

5g

甘油

35ml

水

30ml

明膠在水中浸透，加熱至35℃溶化，加甘油攪和，用紗布過濾后使用。

徒手切片及其它標本，都可用此劑浮載制片，標本染色(或不染)后，先用甘油脫水(干燥標本可不脫水)，挑取小團甘油明膠放在載片上，微加熱，待其熔化而氣泡消失后，將標本取出吸除去多余甘油后移入熔化的甘油明膠中，加蓋玻片輕輕下壓，擦去蓋玻片周圍的多余甘油明膠。平放十幾天，干后長期保存，用香脂或其它固劑封固后長久保存。

此浮載劑對于干燥標本易出氣泡，用醋酸甘油先予處理可防此弊，成分配比如下：

醋酸鉀(2%水溶液)300ml

甘油

120ml

酒精

180ml

標本放在載玻片上加小滴醋酸甘油，微加熱以除氣泡，并蒸去大部分油劑，趁熱加入小團甘油明膠，熔化后加蓋玻片，其后步驟同上。

實驗三

真菌的形態觀察

真菌分布廣泛，種類繁多，已報導的將近

45000多種，是植物病原生物中最主要的一大類群，它所引起的病害占植物病害的80%以上，盡管真菌形態差異很大，但基本結構相似，大多數真菌有營養體和繁殖體之分，營養體是指吸收養分的器官，繁殖體是指從營養體上產生的各種類型的孢子。

真菌產生孢子的機構，無論是有形性的還是無性的，統稱為子實體。真菌的孢子分為無性孢子和有性孢子兩類。無性孢子有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子；有性孢子有休眠孢子囊、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子。真菌孢子的形態特征是鑒定和分類學上的重要依據，其營養體及其變態和菌組織體則是真菌分類的重要參考依據，有的還是重要的鑒別特征和分類依據。

一、實驗目的

通過本次實驗熟悉真菌的營養體和繁殖體的基本形態，為以后真菌病害的病原物鑒定和真菌分類奠定初步基礎。

二、實驗內容、材料和方法(一)真菌的營養體 1菌絲和菌絲體

除少數原始的類群以外，真菌典型的營養體是極為細小的絲狀體，這種絲狀體稱為菌絲，生長成叢的菌絲稱為菌絲體，低等真菌的菌絲是無隔的，大多數真菌是有隔的。

(1)挑取馬鈴薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)或瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)制片，鏡檢無隔菌絲。

(2)挑取立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)制片鏡檢有隔菌絲。

(3)觀察各種病原真菌在平面和斜面培養基上形成的菌落，注意菌落大小、形狀、厚薄、質地、顏色等形態特點。2菌絲組織體

有些真菌的菌絲體，在一定的條件下或一定的發育階段，可形成特殊的組織體，常見有菌核、子座和根狀菌索。

(1)菌核：菌核是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的一種休眠體，既是真菌貯藏養分的器官，又是真菌用以度過不良環境的休眠機構，菌核大小不一，色澤和形狀也各不相同。菌核中的菌絲組織已有分化現象，外皮組織細胞排列緊密，色深壁厚，具有保護作用，為擬薄壁組織；內層細胞壁薄色淡，排列疏松，仍可維持營養作用，為疏絲組織。

肉眼觀察麥角病、油菜菌核病、黃瓜菌核病和大蔥菌核病標本，比較菌核形狀、大小、顏色；鏡檢細辛菌核病的菌核制片，注意比較表皮與內部組織細胞的排列特點。

(2)子座：子座是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的容納子實體的座墊狀結構，或由菌絲體與部分寄主組織結合而成的稱為假子座。子座是真菌從營養體到繁殖體的過渡機構，除可在其上或其內形成子實體外，也有度過不良環境的作用。

肉眼觀察稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)的分生孢子座；鏡檢蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali)和稻

香

柱菌(Epichloe typhina)所形成的子座制片，注意子座形狀，著生部位及內部繁殖體類別。

(3)根狀菌索：少數高等真菌的菌絲體還可糾結成繩索狀的組織體，形如高等植物的根，故稱根狀菌索，其作用是幫助菌體蔓延和抵抗不良環境，根狀菌縈組織也有表皮和內部組織的分化。

肉眼觀察林木上根狀菌索的外部形狀，注意和菌核比較，找出二者區別。

3菌絲體上分化出的吸收養分組織

(1)吸器：是寄生在細胞間的真菌，特別是一些專性寄生菌在菌絲體上形成的吸收養分的器官，形狀有球狀、絲狀、掌狀、裂片狀等。

鏡檢小麥白粉病菌(Blumeria graminis)吸器制備片，注意吸器的形狀及其形成的部位。

(2)假根：為伸入基物內的菌絲體，形如高等植物的根系，故稱假根。假根除用其吸收養分外，還有固著菌體的作用。

挑取培養基中培養的甘薯軟腐病菌(Rhizopus nigricans)的菌絲(注意針尖要插入培養基內)制片鏡檢或鏡檢根足霉(Rhizopus sp.)制備片，注意假根與普通營養菌絲的區別。

(3)附著胞：從幻燈片或照片觀察病菌侵染寄主植物形成附著胞的形態。

(4)菌環和菌網：捕食性真菌常由菌絲分化成菌環和菌網組織來捕捉線蟲等小動物，然后再由菌絲侵入線蟲體內吸取營養。(二)真菌的繁殖體——孢子

真菌的繁殖方式分無性和有性兩種，分別產生無性孢子和有性孢子兩大類型。真菌的無性繁殖包括斷裂、出芽和產生孢子等，真菌的有性生殖包括質配、核配和減數分裂三個階段。

1無性孢子：不經過性細胞或性器官的結合便能產生孢子，稱為無性孢子。真菌產生的無性孢子類型很多，主要的有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子。

(1)游動孢子：游動孢子為鞭毛菌亞門真菌特有的無性孢子，產生在由菌絲頂端細胞或由菌絲分化成的孢子囊梗的頂端細胞膨大形成的孢子囊內、具鞭毛，能游動。

制片鏡檢用線麻粒誘發的綿霉和水霉的游動孢子囊和游動孢子，鏡檢番茄晚疫病菌(Phytophthora infestans)的游動孢囊梗、游動孢子囊和游動孢子。(2)孢囊孢子：孢囊孢子為接合菌亞門真菌特有的無性孢子，生成方式和游動孢子相似，也是內生的，但無鞭毛，不能游動。

挑取黑根霉(Rhizopus sp.)制片(或取制備片)鏡檢孢子囊梗，孢子囊和孢囊孢子，注意觀察孢子囊的形態及其著生位置及孢囊孢子的形態，顏色和產生的數目。(3)分生孢子：子囊菌亞門真菌和大部分半知菌亞門真菌都產生分生孢子，分生孢子外生在分生孢子梗上，形狀、大小、顏色不一，單生，鏈生或集生，分生孢子梗

有的散生，有的束生，有的產生在分生孢子盤上或分生孢子器內，產生在分生孢子器內的分生孢子也叫器孢子。

取玉米大斑病(Exserohilum turcicum)的病葉，用刀片輕輕刮取病斑上的霉狀物制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子或挑取斜面培養基上培養的小麥根腐病菌(Bipolaris sativum)制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子，另取蘋果灰斑病(Phyllosticta pirina)制片鏡檢分生孢子器和器孢子，注意分生孢子的形狀，色澤，細胞數目及著生情況。(4)厚垣孢子：鏡檢厚垣孢子制備片，菌絲中或孢子中個別細胞膨大、細胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。

2有性孢子：由兩個不同的性細胞或性器官相結合而產生的孢子叫有性孢子，有性孢子主要有以下4種。

(1)卵孢子：部分鞭毛菌亞門真菌的有性孢子，由菌絲上產生的兩種異形配子囊交配產生。制片鏡檢谷子白發病菌(Sclerospora graminicola)的卵孢子或鏡檢大豆霜霉病菌(Peronospora manshurica)卵孢子制備片，注意卵孢子形狀、大小、顏色，孢壁形態。

(2)接合孢子：為接合菌亞門真菌的有性孢子，由兩個同形配子囊交配而成。鏡檢毛霉(Mucor)接合孢子制片，注意接合孢子的大小，形狀，顏色及表現特點。(3)子囊孢子：為子囊菌亞門真菌產生的有性孢子，由兩個異形配子囊交配生成，子囊孢子產生在子囊內，多為8個，子囊除極少數子囊菌裸生外，多數子囊菌生于子囊果中。取山楂白粉病(Podosphaera oxyacanthae)病葉，用解剖針將白粉上的小黑點(閉囊殼)仔細撥至載玻片上的水滴中，加蓋片并輕輕壓破閉囊殼，鏡檢閉囊殼，子囊、子囊孢子和附屬絲的形態，特別注意子囊的數目和附屬絲的特點，另取油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotium 132)制備片，鏡檢子囊盤、子囊和子囊孢子。

(4)擔孢子：為擔子菌亞門真菌的有性孢子，由菌絲結合后減數分裂而成，外生于擔子或先菌絲上。挑取萌發的玉米絲黑穗病菌(Sphacelotheca reiliana)制片鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態，另取小麥腥黑穗病菌(Tilletia caries)冬孢子萌發的制備

片，鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態，比較兩種黑粉病菌的區別。

另外還有一種有性孢子為休眠孢子囊，由兩個游動配子結合而成，為二倍體，萌發時減數分裂釋放出單倍體的游動孢子。如壺菌、根腫菌可產生休眠孢子囊，根腫菌產生的休眠孢子囊萌發時通常只釋放出一個游動孢子，有時也稱為休眠孢子。

三、實驗報告及作業

1繪有隔菌絲，無隔菌絲和菌核剖面圖。

2繪分生孢子、孢囊孢子、卵孢子及子囊孢子的形態圖。 3菌絲有無隔膜是否反應一定的進化關系? 4菌核和子座在形態和功能上有何不同?

5真菌吸器的有無與寄生性的強弱是否有一定關系?

6分生孢子和孢囊孢子的生成過程，形成數量(與產孢細胞比較)及著生部位等方面

有何不同?

7卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子在有性生殖過程中形成的時期有何不同?

實驗四

鞭毛菌亞門真菌形態觀察

鞭毛菌是一類低等真菌，其中不少是水生的。它們的共同特征是無性繁殖時產生有鞭毛的游動孢子。根據菌體的形態和游動孢子鞭毛的特征分為根腫菌綱、壺菌綱、絲壺菌綱和卵菌綱。其中與植物病害關系較為密切的有根腫菌綱、壺菌綱、卵菌綱。

一、實驗目的

了解鞭毛菌亞門中根腫菌綱、壺菌綱和卵菌綱真菌的主要形態特征，掌握與植物病害有關的重要屬的形態特征、分類依據及所致病害的癥狀特點，同時學習使用檢索表來鑒定病菌，為分類鑒定打下初步基礎。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備；載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、酒精燈、無菌水等。

三、實驗材料

1．蕓苔根腫菌（Plasmodiophora brassicae）2.馬鈴薯粉痂菌（Spongospora subterranea）3．禾谷多粘霉（Polymyxa graminis）

4.玉蜀黍節壺菌（Physoderma maydis）

5．串囊水霉（Saprolegnia.monilifera）

6.稻綿霉（Achlya oryzae）

7.瓜果腐霉（Ｐythium aphanidermatum）

8.致病疫霉（Phytophthora infestans）

9.禾生指梗霉(Sclerospora graminicola)

10.葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola）

11.寄生霜霉（Peronopora parasitica）

12.瓜類霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）

13.萵苣盤梗霉（Bremia lactucae）

14.十字花科白銹病菌（Albugo candida）

以上病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片，多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）以及水霉和腐霉游動孢子形成與釋放的錄相帶等。

四、實驗內容和方法

（一）根腫菌綱（Plasmodiophoromycetes）

1.蕓苔根腫菌 取甘藍根腫菌切片，鏡檢切片中的病原菌。有的寄主細胞內可見到許多堆集在一起的魚籽狀顆粒，是病菌的休眠孢子。休眠孢子近球形。

2.馬鈴薯粉痂菌 鏡檢馬鈴薯粉痂病菌切片，在寄主根的皮層組織的受害細胞中可看

到病原菌的休眠孢子，球形至多角形，多個休眠孢子聚集呈海綿狀或空心球。

3.禾谷多粘霉 選取有褐點的根，用解剖刀或鑷子撕取小麥根基皮層，制成臨時玻片，鏡檢。病菌的休眠孢子常有規律地呈條狀排列。

提示 被寄生的表皮細胞呈褐色小點，必須仔細觀察才能見到。

（二）壺菌綱（Chytridiomycetes）

玉蜀黍節壺菌（Physoderma maydis）觀察由玉蜀黍節壺菌引起的玉米褐斑病標本。用針挑取受害病組織內呈黃色粉末狀物制成臨時玻片，或對病組織作徒手切片，鏡檢可見到許多金黃色扁球狀的休眠孢子，休眠孢子橢圓形，一面扁平有蓋。

（三）卵菌綱(Oomycetes)水霉目(Saprolegniales)

1.串囊水霉 引起水稻爛秧，又稱水稻爛秧水霉菌。孢子囊圓筒形或棍棒狀，層出式，即新的孢子囊從老的空孢子囊內基部長出，游動孢子具明顯的兩游現象。

2.水稻爛秧綿霉菌 孢子囊圓筒形或棍棒狀，合軸分枝，新的孢子囊從老孢子囊的基部外側長出，呈聚傘形排列，游動孢子第一個活動時期很短，休止孢在孢子囊頂部孔口處聚集成團。

霜霉目（Peronosorales）

1.腐霉屬（Pythium）觀察瓜果的腐爛病病果上的白色菌絲體，將生長旺盛的小塊菌絲體移至清水中培養24～48h，菌絲頂端即形成大量游動孢子囊，用針挑取在清水中培養過的菌絲，觀察腐霉菌的游動孢子囊，絲狀、姜瓣狀或球狀等，頂生或間生，無特殊分化的孢囊梗。孢子囊不脫落，萌發時在其頂端產生一管狀物，原生質經管狀物排出而形成泡囊。游動孢子產生在泡囊內。

2.疫霉屬（Phytophthora）取馬鈴薯或番茄晚疫病標本制片觀察。孢囊梗2~3支成叢自氣孔伸出，假軸狀分枝，小梗基部膨大，多次產生孢子囊，使孢子囊梗上部呈節狀；孢子囊近球狀、卵形或梨形等，具乳突。

3.霜疫霉屬（Peronophthora）取荔枝霜疫霉病標本挑取霉層觀察，孢囊梗直立，雙叉銳角分枝，孢囊梗多級有限生長。孢子囊檸檬形、橢圓形，乳突明顯。

4.霜霉屬（Peronospora）取十字花科植物（油菜、白菜等）的霜霉病標本從葉背面刮取霉層觀察，孢囊梗二叉狀銳角分枝，末端尖銳。

按照寄生霜霉的觀察方法，選取禾生指梗霉、葡萄霜霉病菌、瓜類霜霉病菌、萵苣盤梗霉等材料，對照下列檢索表，制片觀察各種霜霉病的病原菌或觀察病菌永久玻片標本，掌握霜霉科幾個常見屬的主要形態特征。霜霉科主要屬的檢索表

1.孢囊梗粗壯，上部為重復2～3次的不規則二叉分枝…………指梗霉屬（Sclerospora）1.孢囊梗較細……………………………………………………………………………………2 2.孢囊梗單軸分枝，小軸與主軸成直角，分枝末端平鈍………單軸霉屬（Plasmopara）2.孢囊梗呈現銳角二叉分枝……………………………………………………………………3 3.分枝兩側不對稱，頂端尖銳……………………………假霜霉屬（Pseudoperonospora）3.分枝兩側對稱…………………………………………………………………………………4 4.分枝頂端尖細……………………………………………………… 霜霉屬（Peronospora）4.分枝頂部膨大，呈盤狀，具3～4個指狀周生小梗…………………盤梗霉屬（Bremia）5.白銹菌屬（Albugo）鏡檢莧菜白銹病菌組織切片，或取以上病葉徒手切片制成臨時玻片鏡檢。孢囊梗平行排列在寄主表皮下，短棍棒形，孢子囊串生。白銹菌危害癥狀是在寄主表面產生乳白色或粉狀的皰斑，這是病菌在寄主表皮下形成的孢子囊堆，白色粉狀物是成熟的孢子囊。

五、實驗報告及作業

1.鞭毛菌亞門真菌的共同特征和分類依據是什么？

2.以營養體、無性繁殖、有性生殖來比較鞭毛菌亞門三個綱的區別。

3.觀察十字花科蔬菜根腫病菌、馬鈴薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌、水霉菌或綿霉菌，繪休眠孢子囊或游動孢子囊圖。

4.繪瓜果腐霉病菌、馬鈴薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白銹病菌孢囊梗、孢子囊，卵孢子圖。

5.繪瓜類霜霉病菌、萵苣霜霉病菌、葡萄霜霉病菌孢囊梗、孢子囊圖。6.詳繪大白菜霜霉病和粟白發病的病原形態圖（包括無性繁殖和有性生殖）。7.卵菌綱真菌有哪些特點？結合它們的生物學特性、寄生性及病害特點說明本綱真菌進化的情況。

實驗五

接合菌亞門真菌形態觀察

接合菌亞門真菌的共同特征是有性生殖產生接合孢子。大多數是腐生的，少數可以引起農產品的腐爛。接合菌營養體為發達的無隔菌絲體，無性繁殖產生具細胞壁的孢囊孢子，有性生殖產生接合孢子。孢子囊的形態、孢囊孢子釋放以及寄生性等是重要的分類依據。

一、實驗目的

通過實驗掌握接合菌的一般形態及其所致病害的癥狀類型，了解同宗配合和異宗配合的含義及同型配子囊、異型配子囊的差別。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備；滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子等。

三、實驗材料

甘薯軟腐病新鮮標本、掛圖、病原菌永久玻片，多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）等；根霉屬的甘薯軟腐病、犁頭霉和毛霉“﹢、﹣”菌株的斜面培養物或培養皿平板培養物；三角瓶裝PDA培養基。

四、實驗內容和方法

（一）甘薯軟腐病癥狀觀察

受害甘薯變軟腐爛，有時散發出酒味，病薯表面長出白色、灰色至黑色毛狀物。仔細觀察，能見到白色菌絲體中有許多小黑點。小黑點是病菌的孢子囊。

用針挑取霉層制片、鏡檢，觀察孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗及囊軸、假根的形態。

（二）匐枝根霉培養物的鏡檢觀察

用挑針仔細地從培養的匐枝根霉菌中挑取少許連有培養基的培養物，制成臨時玻片，在低倍鏡下檢查。或者用實體解剖鏡直接觀察培養皿上的菌體。觀察菌絲的形態和具有分枝的孢囊梗及其基部的假根，孢囊梗之間有匍枝狀的菌絲相連，在孢囊梗基部有深入寄主細胞或基質中分枝狀的假根。在每一個孢囊梗的頂端產生一個圓球狀的孢子囊，用高倍鏡觀察孢子囊內部的構造，在未成熟的孢子囊內，往往只有大量的小顆粒體，接近成熟的或成熟的孢子囊內則充滿了許多褐色圓形的孢囊孢

子。孢子囊壁破裂后，孢子散出，露出鑼錘形的囊軸。

（三）接合孢子觀察

取根霉屬和犁頭霉屬接合孢子玻片觀察，并注意原配子囊、配囊柄及配子囊的發育特點。成熟的接合孢子深褐色，表面粗糙。犁頭霉菌的接合孢子在配子囊柄的著生處有附屬絲，注意觀察配囊柄的形狀及大小。

（四）異宗配合現象觀察

取融化了的PDA培養基、滅菌培養皿置于鋪有濕紗布的桌上，在灑精燈火焰附近，按無菌操作要求，將培養基倒進滅菌培養皿內，每個 9cm 皿內倒入10～15ml培養基，冷卻后即成平板。取具有“﹢、﹣”性征分化并有親和性的匐枝根霉、犁頭霉或毛霉兩個菌株，分別按下列圖示方式接種到三個培養皿的平板上，在培養皿的底部寫上所接種的菌株編號、接種日期，在 25°C 溫箱中培養一周，觀察異宗配合現象。記錄哪個培養皿中形成了接合孢子。

五、實驗報告及作業

1.接合菌亞門真菌的主要特點是什么？與鞭毛菌亞門有何區別？

2.根據+、-菌株平板接種培養結果，說明其產生接合孢子的原因？

3.何為同型配子囊、異型配子囊？

4.哪些接合菌與病蟲害的生物防治有關？怎樣利用它們？

5.繪匍枝根霉菌孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐菌絲和接合孢子形態圖。

實驗六

子囊菌亞門真菌形態觀察

子囊菌是一類高等真菌。菌絲體一般都很發達，有隔膜，具分枝，有的菌絲體可以形成菌核、子座等機構。子囊菌的共同特點是有性生殖產生子囊和子囊孢子。子囊菌所致病害的種類很多，其中許多是重要的經濟作物病害。子囊菌亞門分綱的主要依據是子囊果及子實層的有無、子囊果的類型、子囊的特征等。據此分6個綱：半子囊菌綱、不整囊菌綱、核菌綱、腔菌綱、盤菌綱和蟲囊菌綱。

一、實驗目的

通過實驗，了解子囊菌亞門各個綱病原菌的主要形態特征，掌握子囊菌中與植物病害有關的重要屬的形態特征、分類依據及所致主要病害的癥狀特點。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備；滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、擦鏡紙、無菌水等。

三、實驗材料

1.桃縮葉病(Tapharina deformans)和李袋果病(T.pruni)2.散囊菌(Eurotium sp.)3.禾白粉病菌(Blumeria graminis)

4.向日葵白粉病菌(Erysiphe cichoracearum)5.瓜白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)

6.桃白粉病菌(Podosphaera tridactyla)7.洋槐白粉病菌(Microsphaera sp.)

8.桑里白粉病菌(Phyllactinia corylea)9.葡萄白粉病菌(Uncinula necator)

10.甘薯黑斑病菌(Ceratocystis fimbriata)11.玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)

12.蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali)13.小麥全蝕病菌(Gaeumannomyces graminis)14.黑麥麥角菌(Claviceps purpurea)15.竹多腔菌(Myriangium haraeanum)

16.蔥葉枯病菌(Mycosphaerella sp.)17.苜蓿輪紋病菌(Pleospora herbarum)

18.核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）

19.紫云英菌核病菌(S.trifoliorum)

以上病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片、多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

四、實驗內容和方法

（一）半子囊菌綱(Hemiascomycetes)

外囊菌屬(Taphrina)取桃縮葉病或李袋果病材料作臨時玻片，在顯微鏡下檢

查。可看見子囊在寄主葉片的表皮下排列成柵欄狀，形成無包被的子囊層，子囊下有足胞，常含孢子4～8個。子囊圓筒形，近球形或橢圓形。

（二）不整囊菌綱(Plectomycetes)

散囊菌屬(Eurotium)觀察示范鏡下散囊菌的閉囊殼、子囊或散在閉囊殼內的子囊孢子。閉囊殼壁薄，只有2~3層細胞構成。子囊孢子單胞、近圓形。

（三）核菌綱(Pyrenomycetes)白粉菌目(Erysiphales)

本目是專性寄生菌。白粉菌侵染植物可引起多種植物的白粉病。白粉菌菌絲表生，在寄主體表擴展蔓延。一般在葉部引起褪綠或黃色斑，以后葉面出現白色或灰白色的粉狀物，即白粉菌的無性繁殖形成的分生孢子。生長后期，在病部形成許多黑色小顆粒。這些小黑點是白粉菌的閉囊殼。閉囊殼有附屬絲，附屬絲呈絲狀，其形態因種而異。閉囊殼內子囊數目也不一樣，一至多個。附屬絲的形狀和子囊數目的多少是分屬的依據。

選取小麥白粉病、向日葵白粉病、瓜白粉病、桃白粉病、洋槐白粉病、桑里白粉病、葡萄白粉病等不同材料。在實體解剖鏡下觀察閉囊殼及附屬絲的輪廓及形態。挑取閉囊殼作臨時玻片，在顯微鏡下檢查。注意閉囊殼的形狀、有無孔口、閉囊殼表面附屬絲的形狀和著生部位。然后輕輕擠壓蓋玻片，使閉囊殼破裂。觀察閉囊殼內的子囊，數數是單子囊還是多子囊。

對照下列檢索表，觀察各種白粉病的病原菌永久玻片或標本，掌握白粉菌科幾個常見屬的主要形態特征及所致病害癥狀。白粉菌主要屬檢索表

1.閉囊殼內單個子囊……………………………………………………………………………2 1.閉囊殼內多個子囊……………………………………………………………………………3 2.附屬絲菌絲狀…………………………………………………… 單囊殼屬(Sphaerotheca)2.附屬絲剛直，較粗，頂端二叉狀重復分枝，分枝末端螺旋狀卷曲………… ………………………………………………………………叉絲單囊殼屬(Podosphaera)3.附屬絲菌絲狀…………………………………………………………………………………4 3.附屬絲非菌絲狀………………………………………………………………………………5 4.附屬絲發育不良，較短……………………………………… 布氏白粉菌屬（Blumeria）

4.附屬絲較長………………………………………………………………粉菌屬(Erysiphe)5.附屬絲剛直，基部膨大，頂端尖銳…………………………………球針殼屬(Phyllactinia)5.附屬絲基部不膨大……………………………………………………………………………6 6.附屬絲粗，剛直，頂端二叉狀重復分枝，分枝末端卷曲……叉絲殼屬(Microsphaera)6.附屬絲不分枝，頂端卷曲………………………………………… 鉤絲殼屬(Uncinula)

球殼菌目（Sphaeriales）

1.長喙殼屬(Ceratocystis)觀察甘薯黑斑病菌培養物，挑取病菌灰白色物中間深褐色或黑色毛刺狀小點，觀察病菌的子囊殼。子囊殼深色、球形，有長頸，開口處有須狀物，稱口須。輕壓蓋玻片將子囊殼壓破，成熟的子囊孢子頭盔狀，子囊壁早期膠化消解。

2.赤霉屬（Gibberella）取培養在麥粒上的玉蜀黍赤霉菌子囊殼，制成臨時玻片鏡檢，在顯微鏡下觀察。子囊殼藍色或紫色，散生或聚生。子囊孢子多個細胞，梭形。

3.黑腐皮殼屬（Valsa）取蘋果樹腐爛病菌切片鏡檢，子囊殼埋生在子座內，有長頸伸出子座。子囊孢子單細胞，香蕉形。

4.頂囊殼屬（Gaeumannomyces）觀察小麥全蝕病害標本，注意病株基部根系生長不良，莖基部葉鞘枯腐，葉鞘內有黑色小顆粒狀物，即病菌的子囊殼。取含有子囊殼葉鞘做切片，置顯微鏡下觀察子囊殼形態，子囊殼頂端有短喙；子囊孢子細線狀，多細胞。

5.麥角菌屬（Claviceps）取黑麥麥角菌切片，置顯微鏡下觀察，頭狀子座內壁周圍有瓶狀子囊殼，子囊殼開口向外。子囊殼內有子囊和子囊孢子。子囊細長，子囊孢子線形。

（四）腔菌綱(Loculoascomycetes)

1.多腔菌屬（Myriangium）取竹多腔菌切片置顯微鏡下觀察，可見到很發達的子囊座組織。子囊球形，單生，子囊孢子有縱橫隔膜, 磚格狀。

2.球腔菌屬（Mycosphaerella）取蔥葉枯病菌切片，置顯微鏡下觀察,單腔多子囊。子囊圓柱形至棍棒形，有雙層壁。子囊初期束生，后平行排列；子囊孢子橢圓形，雙胞。

3.格孢腔菌屬（(Pleospora)取苜蓿輪紋病病菌切片，置顯微鏡下觀察，囊孢子長圓

形或卵圓形，磚格狀（多細胞，有縱橫分隔）。

(五)盤菌綱(Discomycetes)核盤菌屬（Sclerotinia）取油菜菌核病菌子囊盤切片，置顯微鏡下觀察，子囊盤具長柄；子囊孢子橢圓形或紡錘形。觀察油菜菌核病癥狀及菌核萌發標本，菌核球形至豆瓣形，鼠糞狀，一般生子囊盤4～5個。菌核上形成的子囊盤具長柄。

五、實驗報告及作業

1.子囊菌亞門各綱的主要特征是什么？ 2.繪外囊菌屬和散囊菌屬的形態圖。

3.白粉屬和單絲殼屬、叉絲殼屬和叉絲單囊殼屬的主要區別是什么？ 4.繪白粉屬、叉絲單囊殼屬、球針殼屬、鉤絲殼屬的形態圖。5.繪赤霉屬、多腔菌屬、核盤菌屬形態圖。6.子囊菌有性繁殖體的病征類型和特點是什么？

實驗七

擔子菌亞門真菌形態觀察

擔子菌亞門真菌一般稱作擔子菌，是真菌中最高等的。其共同特征是有性生殖產生擔孢子。擔子菌亞門的分綱依據是擔子果的有無，擔子果的發育類型可分為三個綱：冬孢菌綱、層菌綱、腹菌綱。與植物病害關系密切的是冬孢菌綱。根據擔子的來源及特征，擔孢子的數目及位置，冬孢菌綱分為銹菌目和黑粉菌目。銹菌的分類主要依據冬孢子的形態，排列和萌發的方式。而黑粉菌的分類主要依據冬孢子的萌發方式，孢子的分隔，排列及其大小，形狀及是否有不孕細胞等進行分類。

一、實驗目的

通過實驗了解擔子菌亞門冬孢菌綱主要病原菌的形態特征，掌握銹菌目和黑粉菌目中與植物病害有關的重要屬的形態特征、分類依據及所致主要病害的癥狀特點。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備，滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、蒸餾水滴瓶、通草、刀片、擦鏡紙、酒精燈、無菌水、PDA培養基等。

三、實驗材料

銹菌目（Uredinales）：

1.菜豆銹菌（Uromyces.appendiculatus）2.禾柄銹菌（Puccinia graminis f.sp.tritici）3.禾葉銹菌（Puccinia recondita）

4.禾條銹菌（Puccinia striiformis）

5.梨膠銹菌（Gymnosporangium haraeanum）6.薔薇多胞銹菌（Phragmidium rosae-multiflorae）7.亞麻銹菌（Melampsora lini）

8.花椒鞘銹菌（Coleosporium xanthoxyli）9.松櫟銹菌（Cronartium quercum）

10.棗層銹菌（Phakopsora zizyphi-vulgaris）

黑粉菌目（Ustilaginales）：

1.小麥散黑粉菌（Ustilago tritici）

2.玉蜀黍黑粉菌（U.maydis）

3.絲軸黑粉菌（Sphacelotheca reiliana）

4.高粱堅粒黑粉菌（Sphacelotheca sorghi）5.高粱散粒黑粉菌（Sphacelotheca cruenta）6.高粱團黑粉菌（Sorosporium ehrenbergii）7.小麥網腥黑穗菌（Tilletia caries）

8.小麥光腥黑穗菌（Tilletia tritici）9.稻尾孢黑粉菌（Neovossia horrida）

10.稻葉黑粉菌（Entyloma oryzae）11.小麥條黑粉菌（Urocystis tritici）

以上病菌引起的病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片和病菌的PDA培養物;多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

四、實驗內容和方法

（一）冬孢子萌發試驗

冬孢菌綱不同類型冬孢子萌發方法是不同的，幾種常見的冬孢子的萌發方法如下：

1．小麥網腥黑穗菌和光腥黑穗菌 將冬孢子撒在保濕器皿內的用1%硝酸鈣液潤濕的濾紙上，在17～ 22℃ 下培養，每天于日光燈下照射4h，3d后檢查萌發情況。

2．小麥條銹病菌 取帶冬孢子病葉在0.5～1%檸檬酸中浸15min，再放于兩層潮濕的濾紙之間，于-2~-5℃ 下冷凍5d后，挑取冬孢子置于水滴內，在冰箱內（4℃）保存48h即可萌發。

（二）銹菌目（Uredinales）

1.單胞銹菌屬（Uromyces）觀察菜豆銹病或茭白銹病標本，挑取冬孢子制成玻片觀察。冬孢子具柄，單細胞。

2.柄銹菌屬 觀察小麥桿銹病、小麥葉銹病或小麥條銹病標本，冬孢子堆黑色。將有冬孢子堆的寄主葉片組織切下，制切片于顯微鏡下觀察。冬孢子有一隔膜，分隔處稍縊縮，柄不膠化。

4.膠銹菌屬（Gymnosporangium）從用水浸泡過的膠銹菌冬孢子角上用挑針挑取冬孢子制片觀察，冬孢子雙胞，分隔處不縊縮或稍縊縮。柄絲狀，很長，含膠質。

5.多胞銹屬（Phragmidium）挑取玫瑰銹病組織上的冬孢子，制片觀察，冬孢子多細胞，通常下部膨大易膠化。

6.柵銹菌屬（Melampsora）取亞麻銹菌病組織制作徒手切片觀察。冬孢子無柄，集成殼狀或墊狀，冬孢子僅側面結合成一層，埋生于寄主表皮下。

7.鞘銹菌屬（Coleosporium）取花椒銹病組織制作切片觀察，冬孢子堆生于葉背或排列成環狀，圓形黃褐色。冬孢子無柄，集成殼狀或墊狀的孢子粒，集生于寄主表皮層下。

8.柱銹菌屬（Cronartium）取馬尾松銹病標本制片觀察，冬孢子堆生于葉背，毛狀，冬孢子梭形。

9.層銹菌屬（Phakopsora）取棗銹病組織制作切片觀察，冬孢子堆呈黑色，冬孢子

排成2～4層，長橢圓形或多角形。

（三）黑粉菌目（Ustilaginales）

1.黑粉菌屬（Ustilago）孢子堆外露，很少由寄主組織長期包裹，擔子分隔，擔孢子生在擔子每一細胞的側面。

挑取小麥散黑粉（穗）病組織上的冬孢子制成玻片觀察。冬孢子球形或近球形。另取冬孢子萌發切片觀察。冬孢子萌發產生4個細胞的擔子，從擔子的不同細胞分別生出絲狀分枝，不產生擔孢子。

挑取玉米瘤黑粉病組織上的冬孢子制片觀察，冬孢子球形至卵形。另取冬孢子萌發切片觀察。冬孢子萌發時產生有隔擔子，擔子頂端或分隔處側生梭形的擔孢子。

2.軸黑粉菌屬（Sphacelotheca）冬孢子堆周圍有膜（不孕菌絲），中央有寄主組織，擔子分隔，擔孢子生在擔子每一細胞的側面。

挑取高粱絲黑穗病組織上的冬孢子制片觀察。冬孢子卵圓形或球形，暗褐色，有時混生有不孕細胞，不孕細胞無色透明。

取高粱堅粒黑穗病標本觀察。孢子堆生于子房中，冬孢子多圓形或近圓形，不孕細胞長圓形至近圓形。

取高粱散粒黑穗病標本觀察。冬孢子堆有由菌絲體組成的灰白色被膜，冬孢子球形，分散。

3.團黑粉菌屬（Sorosporium）觀察高粱長粒黑穗病標本，病粒（即菌癭）外層包有一層淺黃色薄膜。孢子堆結合成孢子球，孢子球的結合很松。稍加壓就分散，無不孕細胞。

4.腥黑粉菌屬（Tilletia）取小麥網腥黑穗病或小麥光腥黑穗病標本觀察。冬孢子單生，孢子堆成熟時呈粉未狀，冬孢子較小。孢子堆生于子房內，外包果皮，內部充滿黑紫色粉狀孢子，有腥味。

5.尾孢黑粉菌屬（Neovossia）取水稻粒黑穗病標本挑片觀察，孢子堆寄生于子房內，產生黑粉。挑取黑粉制片，顯微鏡下可見，孢子球形，常有一部分未成熟的透明孢子。

6.葉黑粉菌屬（Entyloma）取水稻葉黑粉病標本，切片觀察。孢子堆生于葉的兩面，圓形至長條形。孢子多角形，結合緊密。取萌發的擔孢子玻片觀察，擔孢子頂

生于擔子上，紡錘形。

7.條黑粉菌屬（Urocystis）取小麥稈黑粉病標本，制片觀察。一至多個厚垣孢子集結成牢固的孢子球，孢子球外有淡色而小的不孕細胞包圍。

五、實驗報告及作業

1.繪黑粉菌屬、腥黑粉菌屬和條黑粉菌屬冬孢子形態圖。2.繪腥黑粉菌屬冬孢子萌發圖。

3.繪柄銹菌屬、單胞銹菌屬、柵銹菌屬和膠銹菌屬冬孢子形態圖。

實驗八

半知菌亞門真菌形態觀察

半知菌亞門真菌的種類很多，其中不少是植物病害的重要病原菌。半知菌的分類主要是根據無性階段的形態特征，包括分生孢子的形態、載孢體的類型、產孢方式等。半知菌亞門分3個綱。芽孢綱：營養體為單細胞或發育程度不同的菌絲體或假菌絲，通過產生芽孢子繁殖；絲孢綱：營養體是發達的菌絲體，分生孢子不產生在分生孢子盤或分生孢子器內；腔孢綱：分生孢子產生在分生孢子盤或分生孢子器內。與植物病害關系比較密切的是絲孢綱和腔孢綱。

一、實驗目的

通過實驗認識半知菌子實體的類型及重要致病菌屬的形態特征，掌握常見植物病原半知菌屬的鑒別特征。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備，滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、酒精燈、放大鏡，恒溫箱，方木塊，剪刀等。

三、實驗材料

半知菌引起的病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片和病菌的PDA培養物；多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

絲孢綱（Hyphomycetes）

1.立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）

2.齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）

3.稻梨孢（Pyricularia oryzae）

4.玉蜀黍平臍蠕孢（Bipolaris maydis）

5.玉米大斑突臍蠕孢（Exserohilum turcicum）

6.大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）

7.蕓苔鏈格孢（Alternaria brassicae）

8.球座尾孢（Cercospora personata）

9.梨黑星孢（Fusicladium virescens）

10.灰葡萄孢（Botrytis cinerea）

11.粉紅聚端孢（Trichothecium roseum）

12.意大利青霉（Penicillium italicum）

13.褐孢霉（Fulvia fulva）

14.尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）

腔孢綱（Coelomycetes）

1.膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）2.葡萄痂圓孢（Sphaceloma ampelinum）

3.梨殼囊孢（Cytospora carphosperma）

4.芹菜生殼針孢（Septoria apiicola）

5.高粱生殼二孢（Ascochyta sorghina）

6.甜菜蛇眼病菌（Phoma beta）

7.梨葉點霉（Phyllosticta pyrina）

四、實驗內容和方法

（一）絲孢綱

1.絲核菌屬（Rhizoctonia）觀察預先培養的棉花立枯病菌或小麥紋枯病菌菌落。菌核褐色至黑褐色。挑取菌絲制片觀察，菌絲粗壯，菌絲分枝呈直角，分隔處常縊縮。

2.小核菌屬（Sclerotium）取花生白絹病或小麥、大豆、棉花、煙草等白絹病菌標本或培養觀察，病菌菌絲白色絹絲狀；菌核圓形至長圓形，褐色至黑色，表面暗色，中心無色，組織致密，干時極硬，彼此無菌絲相連。

3.梨孢屬（Pyricularia）取水稻稻瘟病標本，用挑針挑取病葉上的霉狀物制片觀察。分生孢子梗細長，淡褐色，頂部以合軸式延伸，呈曲膝狀，分生孢子多胞，梨形。

4.平臍蠕孢屬（Bipolaris）取玉米小斑病葉，挑取病斑上的霉層觀察。分生孢子梗單生或叢生，上部呈曲膝狀彎曲；分生孢子蠕蟲形或長橢圓形，多胞，臍點稍微突出，平截狀。

5.突臍蠕孢屬（Exserohilum）取玉米大斑病病葉，用挑針挑或刮取其上的黑色霉狀物制片，置顯微鏡下觀察。其分生孢子梗暗色，具分隔，一般少分枝，上部呈曲膝狀。分生孢子棱形，多胞，臍點明顯突出于基細胞外部。

提示 觀察時注意與平臍蠕孢屬的區別，主要在于其臍點是否突出。

6．鐮孢屬（Fusarium）取瓜類枯萎病菌培養觀察，氣生菌絲白色，絨毛狀，在PDA培養基上底部呈淡黃色或淡紫色；挑針挑取培養物制片觀察，小型分生孢子量大，無色，卵圓形，單胞，偶爾雙胞；大型分生孢子無色，紡鍾形或鐮刀形，1～5個隔膜，基部有時有一顯著的突起，稱足胞。

提示 有時可觀察到厚垣孢子，頂生或間生于菌絲體上。

7.輪枝孢屬（Verticillium）取培養好的棉花黃萎病菌平皿，直接放于顯微鏡載物臺上觀察，其分生孢子梗細長直立具分隔，呈輪狀分枝。分生孢子梗呈直角分枝，分生孢子單胞，生于分枝頂端。

提示 培養菌用的培養基不宜太厚以便透射光能穿透，平皿放到載物臺上小心移動，使視野覆蓋菌落邊緣，這樣才能找到理想的輪狀分枝結構。

8.鏈格孢屬（Alternaria）取白菜黑斑病病葉，用挑針挑取病斑上的黑色霉狀物制片，顯微鏡下觀察。分生孢子長棍棒狀，具縱橫分隔，呈磚格狀，頂端有一長條形喙狀細胞。

9.尾孢屬（Cercospora）取芹菜早疫病（斑點病）病葉，挑取霉層制片，分生孢子梗不分枝或少有分枝；分生孢子單生，鞭狀，具多數分隔。

10.黑星孢屬（Fusicladium）挑取梨黑星病葉上的煤煙狀霉層制片，分生孢子梗暗色，頂部稍屈曲，孢痕明顯；分生孢子淡褐色，1～2胞，瓜子形。

提示 注意分生孢子梗的孢痕，在顯微鏡透射光源照射下呈現亮點。

11.葡萄孢屬（Botrytis）取黃瓜或番茄灰霉病標本，挑取其上的灰霉狀物制片觀察。分生孢子梗頂端分枝，末端膨大并產生小突起，其上著生多數分生孢子，外觀呈葡萄穗狀。

12.聚端孢屬（Trichothecium）取棉鈴紅粉病標本，挑取霉層制片觀察，分生孢子梗直立，少分隔或不分隔，分生孢子無色雙胞，洋梨形，常以基部交錯相連的方式在孢子梗頂端聚集成孢子鏈。

13.青霉屬（Penicillium）取柑桔青霉病標本或病菌培養，挑片觀察。分生孢子梗集結成束，“掃帚狀”分枝，分枝末端為瓶狀小梗，生孢子著生在瓶狀小梗上。褐孢霉屬（Fulvia）取番茄葉霉病標本，挑取霉層制片顯微鏡下觀察。分生孢子梗基部細，上部粗，分生孢子串生，孢子鏈常分枝并有芽狀突起。

（二）腔孢綱

1.炭疽菌屬（Colletotrichum）取蘋果炭疽病標本制片觀察，分生孢子盤埋生于寄主表皮下，墊狀無剛毛，成熟后突破表皮，分生孢子梗平行排列成一層，分生孢子單胞。

提示 切片時最好用新鮮采集的標本，如果標本干燥可用蒸餾水濕潤一下再進行切片，切出的絲條越薄越好，若用乳酚油作浮載劑效果更好。

2.痂圓孢屬（Sphaceloma）取葡萄黑痘病標本，切片觀察，孢子梗排列緊密，自盤狀子座基部產生；分生孢子盤黑色；分生孢子梗極短，緊密排列于子座上，分生孢子無色單胞，中部縊縮，內含1—2個油球。

3．殼囊孢屬（Cytospora）取梨樹腐爛病病樹皮，徒手切片觀察，子座暗褐色，多腔室，似迷宮狀，分生孢子器著生于瘤狀子座組織內；分生孢子香蕉形。分生孢子與膠體物質混合，吸水膨脹后連同孢子自孔口擠出成為分生孢子角。

4．殼針孢屬（Septoria）取芹菜斑枯病病葉，做徒手切片，分生孢子器球形；分生孢子無色，針狀，多胞。

提示 分生孢子的橫隔須經染色后才能觀察清楚；切片操作的最后一步即將切片放到載物臺上時再加水浮載樣品，這樣立即觀察可看到分生孢子自孔口向外噴射的現象。

5.殼二孢屬（Ascochyta）取高粱粗斑病標本制作切片觀察，分生孢子器黑色，分生孢子器扁球形，分生孢子圓筒形，雙胞無色。

6．莖點霉屬（Phoma）取甜菜蛇眼病標本，切片觀察，分生孢子器著生于寄主表皮下，呈輪紋狀排列，分生孢子器球形，分生孢子無色單胞，卵圓形。

7．葉點霉屬（Phyllosticta）多寄生于葉上。取蘋果灰斑病葉，制作徒手切片觀察，分生孢子器球形，有孔口，分生孢子極小（小于15μm），卵圓形。

提示 葉點霉屬的形態與莖點霉屬很難區分，應結合發病部位一起認識。

五、實驗報告及作業

1.繪梨孢屬、尾孢屬和鐮孢霉屬的分生孢子梗和分生孢子形態圖。2.繪炭疽菌屬、盤二孢屬的分生孢子盤和分生孢子形態圖。

實驗九

培養基的制作

一、實驗目的

了解培養基的配制原理，掌握培養基的制備方法。

二、實驗原理

在植物病理學研究工作中經常要使用各種不同的培養基。培養基是按照生物生長繁殖所需要的各種營養，用人工方法配制而成的營養基質。其中含有碳源、氮源、無機鹽、維生素以及水份等。微生物在培養基上生長繁殖還必須在最適pH范圍內才能生長得更好，因此對不同種類的微生物應將培養基調節到一定的pH值范圍。

培養基的種類很多，不同的微生物所需要的培養基不同。依物理性狀可分為液體的、固體的和半固體的三種。固體培養基是在液體培養基中加入1.5～2%的瓊脂，半固體培養基是加入0.2～0.5%的瓊脂。瓊脂（agar）又稱瓊膠或洋菜，是由海藻加工而成，其化學性質穩定，一般微生物均不能分解利用。它在 95℃ 熱水中溶化成溶膠，冷卻到 45℃ 以下時又重新凝固，故一般實驗中常用它作為凝固劑。

根據營養物質來源的不同，培養基可分為天然、半合成和合成培養基三類。天然培養基是以自然界原有的有機物為材料經滅菌后制成，如馬鈴薯、胡蘿卜、水果、大麥粒、高粱粒等。半合成培養基中既有一些天然的有機物質，又有一些成分簡單或明確的化合物。如常用的馬鈴薯葡萄糖培養基（PDA），肉汁胨培養基（NA）等。合成培養基是由一些成分明確的化合物配制而成的，沒有任何成分不明確的物質，常用于研究微生物的生理生化性狀，如查氏（Czapek）培養基等。

根據培養基用途不同，可分為生長繁殖培養基、富集培養基、貯存培養基、選擇性培養基和鑒別培養基等。在植物病理學研究中，最常用培養基有馬鈴薯葡萄糖培養基，主要用于分離培養病原真菌。

在培養基配制完之后，必須經過滅菌，以便徹底殺死其中原有的一切微生物。

三、實驗材料、試劑與儀器

1．材料 馬鈴薯。

2．試劑 葡萄糖、瓊脂等。

3．儀器與用品 高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙（或酸度計）、試管、鋁鍋、攪拌棒、三角瓶、燒杯、漏斗、量筒、紗布、棉花、天平等。

四、實驗步驟

PDA培養基（馬鈴薯葡萄糖培養基）配方

去皮馬鈴薯 200g

葡萄糖 20g 瓊脂 15～20g

蒸餾水 1000ml 自然pH

在PDA培養基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，這樣配制的培養基也稱為PSA培養基。1．稱量 稱量去皮馬鈴薯 200g，葡萄糖 20g，瓊脂15-20g。

提示 瓊脂加入的量取決于瓊脂的質量，質量好的 15g 就夠了，質量差的應適當增加。另外，在夏天氣溫較高時，適當增加用量。

2．將馬鈴薯切成小塊，放入鍋中，加水1000ml，煮沸30min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣。

3．將馬鈴薯濾液放回鍋中，加入瓊脂，加熱熔化。

提示在瓊脂融化的過程中，需要用玻璃棒不斷攪拌，并控制火力不要使培養基溢出或燒焦。

4．加入葡萄糖。葡萄糖容溶解后，加入適量的水以補充加熱過程中損失的水分，定容至1000ml。

提示 通常在制作培養基的鍋內用紅藍鉛筆標記出不同體積的刻度，1000ml，2000ml等，在定容時直接將水加至已標記的刻度即可。

5．分裝 根據不同的實驗目的，可將配制的培養基分裝于試管內或三角瓶內。分裝試管，其量為管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。

6．加塞 在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經彈松的棉花，棉塞可過濾空氣，防止雜菌侵入并可減緩培養基水分的蒸發，故在植物病理學研究工作中普遍使用。正確的棉塞是形狀、大小、松緊與管口或瓶口完全適合，過緊時妨礙空氣流通，操作不便；過松則達不到濾菌的目的且棉塞過小往往容易掉進試管內。正確的棉塞頭較大，約有1/3在外，2/3在試管內。分裝過程中注意不要使培養基沾染在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金屬、塑料試管帽，為讓空氣可以自由進出，橡皮塞不要過緊，滅菌前應夾一紗線在管口。

7．包扎 加塞后，將試管用線繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養基名稱、配制日期、組別、制作人等

8．滅菌 將上述培養基以0.103Mpa，121C , 高壓蒸氣滅菌20min。

9．擱置斜面 將滅菌的試管培養基冷至 50C 左右（以防斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。

培養基經滅菌后，必須放在 37℃ 溫箱培養24h，無菌生長者方可使用。PDA培養基一般不需要調pH。對于要調節pH的培養基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏堿時，可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液進行調節。調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿破壞培養基成分。

提示 pH不要調過頭，以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。配制低pH的瓊脂培養基時，若預先調好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調整pH。

五、實驗報告及作業

各組上交按計劃制備的培養基。

1．為什么有的培養基要調pH值，有的可以不調

2．加壓蒸氣滅菌為什么比干熱滅菌所要求的溫度低、時間短

3．想一想，試一試，將幾只試管包扎在一起比較牢固？

第四篇：《普通植物病理學》理論和實踐教學的創新

《普通植物病理學》理論和實踐教學的創新

《普通植物病理學》理論和實踐教學的創新

武俠，劉潤進

（青島農業大學農學與植物保護學院，山東青島266109）

摘要：本文總結了《普通植物病理學》課程的師資隊伍建設、理論課程教學大綱修訂及教學內容更新、實驗課和教學實習課程大綱及內容的重新設置、多媒體課件建設和教學全程錄像、改革考試考查方法等方面的教學研究成果。通過教學體制的改革，促進了教學質量的明顯提高，為培養植物病理學創新型和實用型人才奠定了牢固基礎。

關鍵詞：普通植物病理學；理論教

學；實驗教學；教學實習

基金項目：山東省普通本科高校應用型人才培養專業發展支持計劃項目

作者簡介：武俠（1963-），男，吉林省吉林市人，博士，教授，主要從事植物病理學和植物線蟲學研究與教學。

《普通植物病理學》課程是植保專業本科生重要的專業基礎課之一，是一門理論性和實踐性很強的骨干課程。本門課程是理論和實踐相結合，通過理論課講授、驗證性和綜合性實驗以及教學實習3個環節的系統訓練，理論聯系實際，提升了學生的專業理論水平、動手能力和獨立思考能力，增強了學生的創新意識和解決分析農業生產中病害發生原因、流行規律和控制措施。課程改革總體目標為，一是創建一支學術水平高、結構合理穩定、教學質量優秀的德才兼備的師資隊伍；二是抓好系列教材的配套建設，優化教學手段和教學過程，使課程內容具有系統性、新穎性和實用性；三是加強綜合實踐能力、創新能力和獨

立思考能力培養，提升學生動手能力；四是提高教師的科研和教研水平，推動課程建設，促進教學質量的提高。課程組在師資隊伍建設、教材建設、更新教學內容、優化教學過程、豐富教學手段、改進考試和考察方法、加強綜合實踐和創新能力培養等方面，進行了改革的探索與實踐，取得了較好的效果。

一、理論課程教學大綱修訂及教學內容創新

課程組成員由一支學術水平高、結構合理穩定、具有奉獻精神的博士學位教師構成，為教學研究和教學改革奠定了堅實的基礎，是完成高水平教學質量的重要保證。教材采用面向21世紀課程教材《普通植物病理學》（第三版），根據教材內容與第二版的內容差異較小，依據課程組成員在相關領域的研究優勢，對教學內容和大綱進行大規模修訂，以便學生在掌握植物病理學傳統理論的基礎上，引導學生關注最新的學科發展動態。

在植物病原真菌章節中，因為教材中采用的Ainsworth分類體系（1973）以傳統的形態學為基礎，存在很大的局限性，所以重點介紹分子生物學技術在真菌分類中應用及意義，增補Alexopoulus主編的《菌物學概論》（Introductory of Mycology 1996）關于真菌分類系統的變動內容。對于半知菌亞門真菌分類地位的變化進行了詳細介紹；對于子囊菌亞門和半知菌亞門分類的復雜性進行了簡要分析。對“真菌”和“菌物”2個概念的內涵和外延進行了詳細闡明。同時對有益真菌在農業、醫藥和釀造業等行業中的成功應用進行舉例介紹，以便引導學生對真菌學習的興趣，以利于拓展知識面。在植物病原原核生物章節中，對于植物病原細菌和原核生物的分類地位和分類依據變化，介紹對植物病原原核生物的分類演替過程。在原有經典病害講解的基礎上，重點介紹目前北方果蔬細菌性瘡痂病Xanthomonas campestris pv.vesicatoria和潰瘍病

Clavibactermichiganensis subsp.michiganensis以及姜瘟病Ralstonia solanacearum等病害的逐年加重的原因，這些細菌性病害為我國進出口相關農產品的重要檢疫對象，已成為國際間制衡農產品進出口新的技術壁壘。在植物病原線蟲章節中，重點講解大豆胞囊線蟲Heteroderaglycines、甘薯莖線蟲（Ditylenchus destructor）、根結線蟲（Meloidogyne spp.）和松材線蟲（Bursaphelenchusxylophalus）的國內外研究概況。結合這些線蟲病害給我國農林生產造成的嚴重損失，其中根結線蟲病害已上升為我國保護地果蔬生產亟待解決的難題；甘薯莖線蟲已成為甘薯安全生產的主要限制因素；松材線蟲病害的疫區蔓延迅速，并明顯快速向北方地區擴展，已成為引致重大泥石流和水土流失等生態災難的潛在隱患。在植物病害流行學章節中，補充了宏觀植物病理學理論，借助分子生物學手段研究植物病原菌的時空動態變化。將病原物寄生

性和致病性章節和植物的抗病性章節合并講授，引進了病原物和寄主植物識別的分子基礎內容，使教學內容具有新穎性和前瞻性。在植物病害防治原理章節中，在植物病害綜合治理（IPM）理論的基礎上，引入了植物病害可持續治理理念，解決困擾人類的資源浪費、環境污染、農產品殘留和生物安全問題，補充講解了農田生態環境恢復和生物防治措施優缺點等內容。

積極建立和完善了教材體系，課程組成員1人副主編編寫“農業植物病理學”教材；1人副主編“中國檢疫性植物線蟲”，參編“植物病原線蟲學”和“植物線蟲志”等教學參考書。依據課程組成員的研究優勢，為本科生自編“植物病害流行學”、“植物線蟲學概論”和“真菌分類學”等，教材質量處于國內先進水平。教學參考書選用Agrios主編的“Plant Pathology”、Alexopoulus主編的“Introductary of Mycology”以及“植物病原真菌學”、“植物病原線蟲學”和“植物病

原細菌學”等。

二、實驗課和教學實習課程內容和大綱修訂

本課程的實驗課中綜合性實驗課時占47％；另外在春學期末安排周的教學實習。重新修訂了普通植物病理學實驗課程指導書，使其更具有實用性和可操作性。新的實驗體系增加了實用性強的綜合性試驗5個：（1）植物真菌病原菌的分離和鑒定，學生自由采集或選擇根病、葉部病害、貯藏期或苗期病害病樣，獨立完成培養基制作和分離純化過程，對于分離結果出現的問題進行分析。（2）植物病毒粒體的分離和純化，以及摩擦接種試驗。（3）植物病原細菌的分離鑒定和純化，要求學生自己采集或選用病樣標本，獨立完成試驗過程。（4）植物病原線蟲的分離鑒定，針對病原線蟲在寄主植物為害特點，采用直接剖檢法、過篩－重糖離心法和貝曼漏斗法分離線蟲，并掌握分離原理。（5）病原物生理小種鑒定方法，本課程組現保存有

番茄葉霉病和大豆胞囊線蟲生理小種鑒定的國際標準鑒別寄主，學生自由選擇其中一種病原物進行生理小種進行鑒定。開放植物病理學實驗平臺，鼓勵學生在教師的指導下，開展研究工作，增加學生試驗操作能力和獨立開展試驗研究的機會，培養學生的理論和實踐相結合的能力。

在教學實習教學環節，根據膠東半島主要植物病害發生種類和分布情況，選擇具有代表性病害發生區域進行病害調查。實習基地在原有基礎上，增加了青島市園林局下設的中山公園和世紀公園，重點調查花卉和園林植物病害發生的種類，進行典型標本的采集和制作，病害發生的時期和為害部位，對病害發生規律和可行的控制措施進行分析；結合昆蟲實習，調查青島浮山和嶗山森林病害發生的種類；與城陽區夏莊鎮郝家營村蔬菜科技示范區建立了固定的教學實習基地，主要針對保護地蔬菜病害進行調查，從病害癥狀識別、田間發病分

布型、危害損失估計進行系統調查，同時對栽培條件和種植品種情況進行記載，分析病害發生的原因。實習報告除完成采集標本量以及診斷結果外，要求學生提交一份實習體會。

三、開展多媒體網絡課件和教學錄像建設，優化教學過程

根據普通植物病理學課程理論教學內容比較抽象、實踐性強的特點。輔助多媒體教學在提高教學效果上發揮了重要作用，吸引學生的學習興趣，使學生盡快進入狀態。完善現有教學課件，使之內容更加豐富實用。制作了普通植物病理學教學課件；植物病害診斷模擬訓練系統多媒體課件；植物病害流行模擬模型的構建及其在實驗教學中的應用；果樹病理學多媒體課件的開發；梨黑星病的發生與防治多媒體課件等5個教學軟件。其中植物病害流行時空動態模擬教學軟件開發獲國家版權局計算機軟件注冊。錄制了理論課和實驗課的全程教學和實驗操作錄像片。大大地豐富

了教學手段，學生可以選擇多種學習方式，教學質量明顯提高。

四、改革考試考查方法，綜合評定本門課程的成績

完善課堂教學和實踐教學。采用筆試、實驗操作和平時考查等多種形式，測試學生的真實水平，試卷理論聯系實際。將理論課考試與實驗課考試分開，分別計分。理論課考試以筆試為主，側重基礎理論、基本概念和實驗原理，占本課程總成績的70％，平時課堂提問和討論占20%，考勤占10%。實驗課成績以實驗操作為主，實驗操作考試采用抽簽方式進行，占總成績的50％，主要進行驗證性實驗操作，如真菌病原菌的形態觀察，鑒定到屬，寫出拉丁名和中文名，采用的實驗材料均為平時實驗中觀察過的真菌；平時實驗課操作及實驗報告撰寫占總成績的40％；考勤占10%。通過近3年來的考試考察結果表明，成績為90分以上學生占學生總數的6%~8%；80~90分的學生為68%~73%；

70~80分的學生占18%~21%；60~70分的學生占8%~11%；60分以下的學生占1%~3%。本考試考查方法，能夠客觀地反映學生的真實課程學習成績，取得了很好的效果。

五、結論

綜上所述，通過3年的理論課、實驗課和教學實習環節教學內容的創新，學生能夠牢固地掌握普通植物病理學的基本理論和研究手段，為以后的農業植物病理學和相關選修課的學習奠定了堅實的基礎。每屆植保專業本科生考取國內各高等院校和科研院所研究生的比例穩定在60%~70%，其中20%~30%考取了重點高等院校和國家級科研單位。

參考文獻

[1]劉維志。植物病原線蟲學[M].北京：中國農業出版社，2000.[2]姚一建，李玉。菌物學概論[M].北京：中國農業出版社，2002.

第五篇：植保專業普通植物病理學課程教改研究

植保專業普通植物病理學課程教改

研究

植保專業普通植物病理學課程教改研究

普通植物病理學是植物保護專業的的重要課程之一，課程涉及的主要內容有植物病害產生的原因、發生發展的規律及其防治的方法。隨著當前新技術及成果的不斷出現，需要不斷創新教學方法，利用現有的資源，提高學生的主觀能動性，提高教學質量。普通植物病理學實踐性較強，需要不斷創新該課程的實驗教學方式，在教學理念、教學內容及教學方法方面進行深入探討。

一 教材和參考書的選擇

教學內容的開展主要依靠教材，這是學生獲取專業知識的最佳途徑，也是

教師開展教學的主要工具。

隨著科學技術及科學成果的不斷涌現，在選擇教材方面要緊跟時代科技的潮流，反應最近的科技和信息的動態。本校選擇的教材恰恰反映了本課程的最新知識及發展動態，充分反應了進你那來植物病原學、分子植物病原學等方面的最新成果和動向，內容的見解和語言由淺入深，容易被學生理解。為了提高本門課程的教學效果，充實課堂的教學內容，教師在備課及授課的過程中可以給學生推薦、植物線蟲學、植物病害診斷及植物病原真菌學等相關的專業參考書目，還可以推薦專業的雜志例如，植物保護學報等。

二 教學方法改革

（一）堅持啟發式教學的指導思想

普通植物病理學這門課程專業性較強，有很多抽象的概念和理論，還有很多難以記憶的拉丁學名及變化多樣的病原形態，然而，長期以來的教學方式

都是堅持以老師講授為主的滿堂灌及填鴨式教學為主。

一方面學生對老師形成了極大的依賴性，缺乏創新思維及獨立自主的學習習慣，另一方面，枯燥的知識讓學生對這門課程的興趣降低，影響了教學質量的提高。

啟發式教學方法注重對學生的引導和啟發，讓學生參與到探索知識的過程中，在傳授新知識之前利用原有的學習過的知識啟發學生，建立該學科與其它學科的關系，這樣能夠活躍課堂氣氛，激發學生學習的積極性，有效提高教學質量，提高學生的探索性及創新性。

（二）引入新成果、新問題

在普通植物病理學的教學過程中，要避免照本宣科，應該將近幾年在實際的生產中碰到的和植物病害相關的尚未解決的問題或者對農業的生產造成危害的情況講授給學生，讓學生運用所學的知識探索相關的問題，思考解決的辦法，此外，對于植物病理學的學科的最新成

果和罪行信息動態告知學生，然后讓學生運用新知識解決問題，這樣可以有效激發學生對這門課程的興趣，提高解決實際問題的責任感。

（三）運用現代化教學手段

現代科學技術的進步，促使教學植物病理學這門學科教學手段的更新，在這個信息化社會中，大學課堂很難僅僅依靠掛圖、黑板或者教材完成教學任務，需要加強教學的基礎設施建設，運用現代化的教學手段，例如，投影、幻燈片或者多媒體，豐富課堂知識，提高授課效果。本專業課程的教師應該根據授課的實際情況，購置相關的教學光碟、投影膠片、錄像帶或者電視投影的顯微鏡等，充分結合電教手段和直觀教具等教學方式，便于學生掌握植物病理學的專業知識，提高學生的想象力。

（四）培養學生的自學能力

在現代化的知識經濟時代，知識更新很快，各方面信息豐富，很多學生在學校內獲得的知識很難及時適應今后的

工作，更多的信息和知識恰恰是在工作實踐后獲得的。所以，大學生只有不管提高自己的自學能力，豐富自己才能更好地適應社會的發展，適應工作的需要。為了達到這一目的和要求，讓學生在獲取知識方面能動性增強，需要對授課方式進行變革，在教師精講的同時，留出更多的時間給學生，讓學生自己獨立思考、分析，然學生通過查閱資料及參考書，歸納整理相關的專業內容，從而探索新知識。

（五）探索課堂的情感教學

任何課堂的教學過程都不僅僅是知識的傳授過程，還涉及到師生的情感問題，植物病理學的教學也是如此，教師的教是外部因素，學生的學是內部因素，任何事情的發展都要依靠內因，內因起決定作用，所以在教學過程中必須調動學生的內在的學習的動力，發揮主觀能動性，擺脫傳統的滿堂灌式教育方式，充分利用師生的情感教育，創建寬松的教學氛圍。

情感教育理論是指師生真誠的情感交流，創設的一種合作式寬松的教學氛圍，這樣學生能夠避免約束感，積極快樂地參與到教學過程中，這樣可以給學生創造一種安全感和寬松感，最大限度地發揮其潛能，教師要多關注學生的學習及身心狀況，讓學生受到鼓舞，教師要增加情感投入，滿腔熱血，愛崗敬業，提高治學的嚴謹性，增強互信。

師生在授課的過程中盡量能夠創造教學的情緒場，運用各種手段激發學生的興趣，教學的對象是有獨立豐富情感的學生，他們有自己的興趣愛好，有理想，希望得到老師更多的關注和理解，一旦進入課堂就是師生情感交流的開始，教師在課堂上的一舉一動、情緒情感，都牽扯到學生的學習狀態，也就是說，知識和情感在課堂上不可分割，教師出了要具備專業理論知識，還要有崇高的情感態度，運用幽默、機智的手段帶動學生，提高教學效果。

三 加強實驗和實踐的教學環節

普通植物病理學的教學比較注重實驗和實踐的環節，通過實驗和實踐的教學過程能夠有效提高學生自己動手操作的能力、觀察能力及創新方法解決問題的能力，這也是新時代對實踐技能型、復合型人才的要求。在普通植物病理學課堂上開展實驗教學可以調動學生的積極主動性，給予學生更多的動手機會。在設計內容方面，傳統的實驗方法是老師設計好實驗的步驟，學生根據程序進行操作，目前，可以讓學生設計實驗，教師只負責給定題目，學生通過查閱資料，經過討論提交實驗設計的方案，然后再通過實驗驗證設計方案，最終得出科學的實驗路線。在實踐教學方面，學校可以利用暑假期間，安排普通植物病理學學科的學生到課外實習，有老師帶領到各地采集植物病理標本，教給學生識別水稻、玉米、棉花、各種蔬菜可鞥呢遭受的病害的癥狀，一方面可以豐富暑假生活，積累實踐經驗，另一方面可以將課本上學到的知識運用到實踐中。

大三大四的學生面臨寫畢業論文，畢業工作的關鍵時期，學校可以安排學生到重點的學校或者科學研究院完成畢業論文的寫作，掌握關鍵的操作技術，提高科研素養，或者安排學生到大型企業的一線實習，為找工作打下基礎。有的學生對科研比較感興趣，可以鼓勵學生參與教師的科研課題，和老師一起進步，提高科研能力。學生可以嘗試開放實驗室，將學生的實驗研究項目和校外的實踐結合，在教師的指導下擬定科研項目，嘗試填寫創新項目申報書。在講授普通植物病理學的過程中，結合實驗和實踐教學環節，能夠不斷提高學生發現問題，解決問題的能力，培養創新意識，和社會接軌。

四 處理好多媒體教學和常規教學的關系

隨著多媒體技術在各個學科的廣泛應用，在教育領域不斷滲透，給教學帶來了便利，在普通植物病理學教學中運用多媒體技術，將圖片、文字、視屏

等相結合，使教學內容豐富多彩，給學生帶來多維立體的教學效果，一方面能夠給教學節省時間，增加教學內容，另一方面能夠加大教師授課的信息量。通過運用多媒體，教師可以把授課內容形象地呈現在學生面前，提高授課的效率，將微觀教學轉化為宏觀教學，很多瞬間難以觀測的現象通過放慢過程讓學生觀察更細致，輔助植物病理學的教學過程，幫助學生深入理解理論知識。但是需要注意的是，多媒體教學和實物標本教學還存在一定的差距，不能完全取代，在實驗教學過程中，一旦過多借助多媒體課件教學，那么學生的做實驗就變成看實驗了，那么很難培養學生的思維創新能力，所以，在運用多媒體教學時，要注意結合常規的教學方法，通過二者的互相配合使用，才能有效提高教學效果。

五 結語

普通植物病理學是植物保護專業的骨干課程，對于提高學生的專業技能有不可忽視的作用。相關專業的學校應

該引起重視，在教材、參考書及實驗標本方面的選擇上都要認真研究，確保學生可以緊跟時代步伐。堅持啟發式教學思想，運用現代化的教學手段，提高學生的自學能力，教師也要在授課過程中投入個人情感，避免知識傳授過于枯燥，同時為了學生未來的就業，要重視實驗和實踐環節的訓練，借助多媒體教學設備完善常規教學模式。

參考文獻

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