第一篇：重醫(yī)細(xì)菌學(xué)檢驗復(fù)習(xí)題

1、實驗室生物安全(Laboratory biosafety): 實驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相差法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對實驗室生物安全責(zé)任的要求。

2、生物安全防護基本要求

實驗室生物安全防護（biosafety protection for laboratories）實驗對象：致病的微生物及其毒素

綜合措施：實驗室設(shè)計建造、個體防護設(shè)施、工作及操作程序和規(guī)程等 確保：實驗室工作人員不受實驗對象侵染，周圍環(huán)境的生物安全。實驗室生物安全通用原則

積極防止操作者在污染的環(huán)境中接觸生物危害物；

主動封閉生物危害材料產(chǎn)生之源，防止從操作部位向周圍環(huán)境釋放； 盡量減少生物危害材料向周圍環(huán)境意外釋放所造成的后果。

3、實驗室必須設(shè)有專職的生物安全負(fù)責(zé)人

實驗室負(fù)責(zé)人為實驗室生物安全的第一責(zé)任人。生物安全等級

生物安全防護實驗室根據(jù)所處理的微生物及其毒素的危害程度分為四級。實驗室生物安全防護要求：一級最低，四級最高。

4、在主實驗室合理設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)

5、各級生物防護實驗室特點 一級生物安全防護實驗室（BSL-1/P1）：適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實驗室等。

二級生物安全防護實驗室（BSL-2/P2）

實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。

在處理危險度2 級或更高危險度級別的微生物時，在實驗室門上應(yīng)標(biāo)有國際通用的生物危害警告標(biāo)志。

三級生物安全防護實驗室（BSL-3/P3）：適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有預(yù)防傳染的疫苗。

四級生物安全防護實驗室（BSL-4/P4）：適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。

6、控制措施

安全設(shè)備和個體防護是實驗室工作人員與致病微生物及其毒素直接接觸的一級屏障。所有可能使致病微生物及其毒素濺出或產(chǎn)生氣溶膠的操作，都必須在生物安全柜內(nèi)進行。

7、生物安全柜（BSC）biosafety cabinet(概念、分級及特點)具備氣流控制及高效空氣過濾裝置的操作柜，可有效降低實驗過程中產(chǎn)生的有害氣溶膠對操作者和環(huán)境的危害。(凈化排氣)根據(jù)生物安全防護水平的差異，生物安全柜可分為I、Ⅱ、Ⅲ級3種類型。實驗室應(yīng)按要求分別配備I、Ⅱ、Ⅲ級生物安全柜。Ⅰ級生物安全柜：外部空氣

保證工作人員不受侵害，但不保證實驗對象不受污染。Ⅱ級生物安全柜：經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣 既保證工作人員不受侵害，也保證實驗對象不受污染； Ⅲ級生物安全柜：經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣

8、生物安全柜和超凈工作臺的區(qū)別

超凈工作臺：保護樣品，不保護操作者和環(huán)境 生物安全柜：保護操作者、環(huán)境以及實驗材料

正壓、簡單 負(fù)壓、復(fù)雜 不能以凈化工作臺代替生物安全柜，反之則可以。

9.標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)菌等微生物操作要求

實驗室負(fù)責(zé)人......工作人員洗手、工作區(qū)域不允許吃/喝/抽......戴護目鏡或面罩、食物儲存

禁止口吸吸管、減少飛濺物/氣溶膠、工作臺表面的去污/滅活、廢物去污后處理

10、注：高壓蒸汽滅菌：負(fù)責(zé)消毒者不準(zhǔn)離開消毒室。

制備培養(yǎng)基.....無菌操作.、使用酒精燈、滅菌吸管......10倍遞增稀釋......無菌操作；

三三制：稀釋三級，每一稀釋度用三個平行平板；取供試液加注于平皿時，供試液須充分混勻。

培養(yǎng)基傾注于平皿：45℃±1℃、整個操作過程應(yīng)在lh內(nèi)完成、無菌檢驗......第二章、細(xì)菌學(xué)檢驗基本技術(shù)

臨床樣本的采集與送檢

樣本 血骨髓 發(fā)病早期、急

成人10ml，兒童3～性期或

5ml；骨髓1～2ml。

癥狀典型時

晨起

中段尿

膿血、黏液的糞便；絮狀物；

直腸拭子

自然咳痰、支氣管鏡、胃內(nèi)采痰法等； 鼻咽拭子

樣本切勿冰箱存放；無菌操作； 廢棄物高壓滅菌。采樣時間

采樣方法

注意事項

尿液

糞便 痰 上呼吸道樣本

防雜菌污染，無菌操作。盡快送檢，不得加防腐劑或消毒劑。

急性期 無菌采樣；新鮮；立即送檢。

晨間

無限制 漱口；

立即送檢或4℃保存。

1、食品樣本采集原則

根據(jù)檢驗?zāi)康摹⑹称诽攸c、批量、檢驗方法、微生物的危害程度等確定采樣方案。隨機采樣→代表性

無菌操作，防污染。（外源性污染、樣本變質(zhì)和細(xì)菌生長）食物中毒時，采集可疑食物樣本。

2、食品樣本采集種類 大樣、中樣、小樣。大樣：一整批樣本。

中樣：從樣本各部分所取得的混合樣本，一般為200g。小樣：分析用，檢樣，25g。

注：檢驗結(jié)果報告后，剩余樣品或同批樣品不進行微生物項目的復(fù)檢

3、細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查法

借助顯微鏡，對細(xì)菌形態(tài)、大小、排列、結(jié)構(gòu)進行直接觀察。在細(xì)菌檢驗中極其重要，是細(xì)菌分類和鑒定不可缺少的組成部分。樣本中有無細(xì)菌及其大致的數(shù)量。

細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列、結(jié)構(gòu)和染色反應(yīng)性。培養(yǎng)物是否為純種。

普通光學(xué)顯微鏡（0.2μm ×1000＝0.2mm）細(xì)菌染色樣本；弱光下用于不染色樣本活菌的運動情況

暗視野顯微鏡（0.04μm：50倍）不染色樣本活菌的形態(tài)

相差顯微鏡 ：活體細(xì)胞的外形和運動方式；細(xì)胞內(nèi)部某些細(xì)微結(jié)構(gòu)及這些結(jié)構(gòu)的數(shù)量

4、不染色檢查：主要用于觀察細(xì)菌的動力 有鞭毛的細(xì)菌為真正運動

無鞭毛的細(xì)菌則為布朗運動(即分子運動)染色檢查

細(xì)菌染色→顯微鏡觀察。

常用的細(xì)菌染料：人工合成帶苯環(huán)的染料，色基+助色基 單純?nèi)玖希禾K丹染料

酸性染料：伊紅、酸性品紅、剛果紅等

堿性染料：美藍(lán)、孔雀綠、甲紫和堿性復(fù)紅等 復(fù)合染料：姬姆薩染料、瑞氏染料等

5、單染色法：用一種染料染色，使各種細(xì)菌均染成同一顏色。操作簡單，易于使用。只能顯示細(xì)菌的形態(tài)及大小。如用美藍(lán)或稀釋石炭酸復(fù)紅等

6、復(fù)染色法：用兩種以上染料染色細(xì)菌，顯示細(xì)菌形態(tài)大小，鑒別細(xì)菌種類 鑒別染色法:革蘭染色法、抗酸染色法

Grams染色操作步驟 ：初染、媒染、脫色、復(fù)染

抗酸染色法：抗酸菌：分枝桿菌/分枝菌酸。一般不易著色，一旦染上色后又不易被鹽酸酒精脫色。

經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使抗酸菌著色。

步驟：初染、脫色、復(fù)染

7、負(fù)染色法：背景著色而細(xì)菌本身不著色。

細(xì)菌莢膜常用墨汁負(fù)染色法配合單染色法(如美藍(lán))，背景呈黑色，菌體染成藍(lán)色，莢膜不著色，包繞在菌體周圍成為一層透明的空圈。

該法具有快速、經(jīng)濟、簡便易行、高度反差、分辨率高的特點。

8、培養(yǎng)基的種類－－按物理性狀分 液體培養(yǎng)基：增菌、作生化試驗等

半固體培養(yǎng)基：觀察細(xì)菌的動力、分類鑒定、保存菌種及噬菌體效價滴定等。瓊脂用量為0.5%～1% 固體培養(yǎng)基：主要用于分離培養(yǎng)；平板、斜面、高層及高層斜面；瓊脂用量為1.5%～2%

9、培養(yǎng)基的種類－－按用途分

基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basic medium)營養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient medium)增菌培養(yǎng)基(enrichment medium)選擇性培養(yǎng)基(selective medium)鑒別培養(yǎng)基(differential medium)專用培養(yǎng)基(dedicated medium)

10、增菌培養(yǎng)基：多為液體。↑目的菌，↓雜菌。營養(yǎng)成分＋抑制物質(zhì)

選擇性增菌培養(yǎng)基；非選擇性增菌培養(yǎng)基 7.5%NaCl肉湯：金葡増菌

11、鑒別培養(yǎng)基：幾種細(xì)菌由于對培養(yǎng)基中某一成分的分解能力不同，其菌落的生長特征(顏色、形狀等)不同而被區(qū)分開。＋某些特定的化學(xué)物質(zhì)

鑒別和區(qū)分不同細(xì)菌

12、制備培養(yǎng)基的一般程序 ○1調(diào)配溶化； ○2矯正pH；○3過濾澄清；○4分裝；○5滅菌；○6檢定

13、平板劃線接種法

平板劃線接種法是常用的細(xì)菌分離培養(yǎng)方法。

使樣本或培養(yǎng)物中混雜的多種細(xì)菌分開成長為單個菌落，并根據(jù)菌落的形態(tài)和特征，挑選所需的單個菌落，經(jīng)移種獲得純種細(xì)菌。

不同的細(xì)菌在平板上所形成的菌落有其固有的形態(tài)特征，可以作為細(xì)菌鑒定的依據(jù)之一。

14、平板劃線方法

分區(qū)劃線接種法；曲線/連續(xù)劃線接種法；棋盤格劃線接種法；放射法；四格法；平板涂布接種法

15、分區(qū)劃線接種法 ：多用于含菌數(shù)量較多樣本的細(xì)菌分離

16、半固體培養(yǎng)基：可用于觀察細(xì)菌動力和保存菌種。

17、菌落：細(xì)菌經(jīng)一定時間培養(yǎng)后，在固體培養(yǎng)基表面所形成的，肉眼可見的物體(群落)。

18、菌落特征

菌落形狀；大小：mm；表面性狀；邊緣情況；顏色；透明度；質(zhì)地；粘度；乳化性......等

19、細(xì)菌在鑒定培養(yǎng)基上的特征 溶血特征；卵黃；蛋白；色素；氣味 在血平板上的溶血特征

α溶血：狹窄的草綠色的半透明區(qū)域 β溶血：完全透明清楚的寬帶 γ溶血：看不到溶血帶的溶血

卵黃瓊脂中的反應(yīng)：檢查細(xì)菌是否產(chǎn)生卵磷脂酶和脂酶 卵磷脂酶：降解卵黃，菌落周圍出現(xiàn)沉淀環(huán) 脂酶：出現(xiàn)“珍珠包膜”

蛋白水解作用：在菌落周圍出現(xiàn)清晰的環(huán)。色素

水溶性色素溶在培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基著色。綠膿色素、熒光色素等； 脂溶性色素則使細(xì)菌菌落著色。金黃色葡萄球菌的金黃色菌落。氣味

假單胞菌屬細(xì)菌→葡萄汁氣味；變形桿菌→巧克力燒焦的臭味；鏈球菌→地窖里的霉臭； 梭菌→糞臭、腐敗味；產(chǎn)黑色素類桿菌屬細(xì)菌→辛辣味 20、細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗

不同的細(xì)菌－→不同的酶系統(tǒng)－→不同的新陳代謝產(chǎn)物－→產(chǎn)物不同的生化特性－→鑒別細(xì)菌的類別

21、糖發(fā)酵試驗結(jié)果判斷

反應(yīng)現(xiàn)象

酸性變色、有氣泡 酸性變色、無氣泡 培養(yǎng)基不變色

結(jié)果描述

分解××糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣 分解××糖產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣 不分解××糖

22、甲基紅(MR)試驗 ：檢查細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生并保持穩(wěn)定的酸性終末產(chǎn)物和克服體系緩沖作用的能力。

分解葡萄糖→丙酮酸→乳酸、乙酸、甲酸等→培養(yǎng)基的pH↓＜4.5＋甲基紅指示劑→紅色：陽性； 分解葡萄糖→產(chǎn)酸少→培養(yǎng)基pH較高＋甲基紅指示劑→黃色：陰性。

23、β-半乳糖苷酶試驗 ：預(yù)測細(xì)菌發(fā)酵乳糖的能力。

β-半乳糖苷酶：一種能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。

發(fā)酵乳糖的大腸菌類能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶-滲透酶(P)和β-半乳糖苷酶(G)

24、靛基質(zhì)(吲哚)試驗

分解：蛋白胨中的色氨酸→吲哚

吲哚＋二甲氨基苯甲醛→玫瑰吲哚(紅色)

25、硫化氫試驗

分解：含硫氨基酸→H2S H2S＋鉛或鐵離子→黑色硫化物。

26、觸酶試驗

過氧化氫酶又稱觸酶，可使細(xì)菌代謝過程中的過氧化氫分解為水和氧。

27、血漿凝固酶試驗

金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生凝固酶,使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,附著于細(xì)菌表面,產(chǎn)生凝固。

玻片法：與細(xì)胞壁結(jié)合的凝固酶

試管法：菌體生成后釋放于培養(yǎng)基中的游離凝固酶

28、血清學(xué)鑒定serological identity：確定致病菌的種或型 未知純種細(xì)菌＋已知特異性抗體

常用方法：玻片凝集試驗、免疫熒光、協(xié)同凝集、對流免疫電泳、酶免疫、間接血凝、乳膠凝集

29、血清學(xué)診斷

輔助診斷：抗原性較強的病原菌和病程較長的傳染病。抗體有無及其抗體效價變化 已知的細(xì)菌/特異性抗原＋特異抗體 常用方法：試管凝集試驗。

直接凝集試驗、顯微鏡凝集試驗、沉淀試驗、乳膠凝集試驗、ELISA、免疫熒光試驗等。急性期和恢復(fù)期雙份血清樣本，恢復(fù)期的抗體效價比急性期升高4倍或4倍以上。30、細(xì)菌毒素的檢測方法 外毒素

細(xì)菌外毒素的免疫血清(抗體)＋被檢細(xì)菌培養(yǎng)物濾液(抗原)細(xì)菌外毒素(抗原)＋被檢患者血清 動物試驗 內(nèi)毒素

家兔熱原試驗,鱟試驗,免疫學(xué)方法、生物學(xué)方法、化學(xué)發(fā)光法、流式細(xì)胞術(shù)、高效液相色譜

31、鱟試驗(limulus test，LT)：定量及半定量檢測細(xì)菌內(nèi)毒素； 血液中含有一種獨特的有核變形紅細(xì)胞，紅細(xì)胞裂解物＋內(nèi)毒素→凝膠

外毒素與內(nèi)毒素的主要區(qū)別

特 性 外 毒 素 內(nèi) 毒 素

來源 革蘭陽性菌與部分革蘭陰性菌 革蘭陰性菌

存在部分 從活菌分泌出，少數(shù)細(xì)菌崩解后釋出 細(xì)胞壁組分，細(xì)菌死亡裂解后釋出

化學(xué)成分 蛋白質(zhì) 脂多糖

穩(wěn)定性 多不耐熱，60～80℃，30分鐘被破壞 耐熱，160℃，2～4小時才被破壞

毒性作用 強，對組織器官有選擇性毒性效應(yīng)，引較弱，各菌的毒性效應(yīng)大致相同，引起發(fā)熱、起特殊臨床表現(xiàn) 白細(xì)胞增多、微循環(huán)障礙、休克、DIC等

抗原性 強，刺激機體產(chǎn)生抗毒素；甲醛液處理弱，刺激機體產(chǎn)生的中和抗體作用弱；甲醛

脫毒形成類毒素 液處理不形成類毒素

基因定位 常由質(zhì)粒、噬菌體等染色體外基因編碼 由染色體基因編碼

32、細(xì)菌數(shù)量的測定：物理計數(shù)法 ；生物計數(shù)法 物理計數(shù)法

細(xì)菌總數(shù)計數(shù)法：利用工具和儀器對樣本中的細(xì)菌進行計數(shù)，其結(jié)果表示樣本中的所有細(xì)菌(活菌＋死菌)。

Breed計數(shù)法：Direct microscopic count 比濁管計數(shù)法：細(xì)菌懸液的濁度與菌數(shù)成正比 分光光度計測定法：吸光度同細(xì)菌總數(shù)成正比

生物計數(shù)法

活菌計數(shù)法：利用各種培養(yǎng)方法檢測樣本中細(xì)菌的數(shù)目,計數(shù)培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)＝樣本中活菌數(shù)。

半定量計數(shù)法；傾注平板法；旋管計數(shù)法；滴液計數(shù)法；瓊脂表面計數(shù)法；膜濾過計數(shù)法； 微菌落快速計數(shù)法；最可能數(shù)(MPN)的估計

33、L-型細(xì)菌檢查 L forms bacterium：一種細(xì)菌通過變異而產(chǎn)生的細(xì)胞壁缺陷型。必須在高滲溶液中方能存活，并失去原有形態(tài)而變成圓球形或多形性。致病?

第四章、細(xì)菌的分型及其檢驗技術(shù)

1、細(xì)菌分型—“傳統(tǒng)方法”

僅進行病原的菌種鑒定是不夠的，需要進一步的分型診斷。

血清學(xué)分型；生物化學(xué)分型；噬菌體分型；細(xì)菌素分型；耐藥譜分型；質(zhì)粒圖譜分型;PCR技術(shù)；染色體酶切物脈沖場凝膠電泳分型

2、噬菌體的作用具有高度特異性（種、型）

一種噬菌體只能裂解一種或與該種相近的細(xì)菌，故可用于細(xì)菌的分類鑒定。用己知型噬菌體鑒定細(xì)菌，可對細(xì)菌進行分型。

3、毒性噬菌體：Virulent Phage：能在宿主菌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、增殖，產(chǎn)生許多子代噬菌體，最終裂解細(xì)菌。

4、溫和噬菌體 ：Temperate Phage：與宿主菌的染色體整合，隨細(xì)菌DNA的復(fù)制而復(fù)制，隨細(xì)菌的分裂而傳代，不產(chǎn)生子代噬菌體。

5、噬菌斑(plaque)在液體培養(yǎng)基中，噬菌體可使渾濁的菌液變?yōu)槌吻澹?在固體培養(yǎng)基上，噬菌體對宿主菌細(xì)胞的裂解作用可使菌落溶解，導(dǎo)致在帶菌瓊脂平板上產(chǎn)生空斑，易于觀察，稱噬菌斑(plaque)。

6、噬菌體的效價測定

噬斑形成單位(pfu)的測定 ： 若將噬菌體按一定倍數(shù)稀釋，通過噬斑計數(shù)，可測定一定體積內(nèi)的噬斑形成單位(plaque forming units, pfu)數(shù)目，即噬菌體的數(shù)目。

7、細(xì)菌素分型技術(shù) 細(xì)菌素(bactericin)：某些細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)類抗菌物質(zhì)，這種物質(zhì)只對產(chǎn)生菌親緣關(guān)系近的細(xì)菌有抗菌作用，而對產(chǎn)生菌本身不敏感。

細(xì)菌素是蛋白質(zhì)，質(zhì)粒控制，多處于抑制狀態(tài)。

細(xì)菌素的應(yīng)用主要是細(xì)菌的分型和流行病學(xué)調(diào)查，是血清學(xué)分型的補充。

8、藥敏試驗(drug susceptibility test)在體外測定抗菌藥物抑制或殺死細(xì)菌能力的試驗。

抗菌藥物：具有殺菌或抑菌活性的抗生素和化學(xué)合成藥物。

9、藥敏試驗方法 紙片法：測定抑菌環(huán)大小，其結(jié)果以敏感、中度敏感、中介度、耐藥表示。

稀釋法：找出能抑制細(xì)菌生長的最小抑菌濃度(MIC)或最小殺菌濃度(MBC)表示。E試驗(E-test)：

最小抑菌濃度 MIC：在特定環(huán)境下孵育24小時，可抑制某種微生物出現(xiàn)明顯增長的最低藥物濃度。

最小殺菌濃度 MBC：殺死99.9%（降低3個數(shù)量級）的供試微生物所需的最低藥物濃度

10、紙片擴散法

是國際上推薦使用的標(biāo)準(zhǔn)實驗方法 ；細(xì)菌耐藥譜分析中最常用的方法。

原理：將含定量抗菌藥物紙片貼在已接種待測細(xì)菌的瓊脂平板表面，培養(yǎng)后，形成一個透明抑菌環(huán)。

抑菌環(huán)的大小反映待測菌對該藥物的敏感程度，與MIC成反比。0.5麥?zhǔn)媳葷岫?1×108cfu/ml 結(jié)果判斷：針對抑菌環(huán)直徑測量值報告敏感、中介或耐藥。

敏感(S)：被測細(xì)菌所引起的感染可以用常用劑量的該抗菌藥物治愈。中介(I)耐藥(R)：被測細(xì)菌不能被常用劑量抗菌藥物抑制,或具有特定耐藥機理，臨床治療效果不佳。

11、肉湯稀釋法

原理：將藥物按一定規(guī)律用M-H肉湯稀釋成一系列濃度后，與一定量的細(xì)菌作用，經(jīng)培養(yǎng)后定量測定其MIC，反映細(xì)菌的藥物敏感性。

校正0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，1∶200稀釋（1∶10×1∶20）。（5×105 cfu/ml）結(jié)果判定：無肉眼可見細(xì)菌生長的藥物最低濃度即為該待測菌MIC。

12、瓊脂稀釋法

原理：將待測菌接種于含不同濃度藥物的瓊脂平板上，經(jīng)培養(yǎng)后觀察菌落的生長情況，以能抑制細(xì)胞生長的最低藥物濃度為該菌的MIC。

第五章、細(xì)菌的分類與命名P91

1、細(xì)菌分類等級

種是細(xì)菌分類的基本單位，將生物學(xué)性基本相同的細(xì)菌群體歸成一個菌種； 性狀相近、關(guān)系密切的若干菌種組成一個菌屬；

2、細(xì)菌DNA中G＋C mol/%測定

細(xì)菌DNA中G＋C mol%含量不同是細(xì)菌的一個重要遺傳特征。

單一菌種中許多不同菌株的G＋C mol%平均值極為接近或者是一致的。

3、細(xì)菌命名

細(xì)菌的科學(xué)名稱(學(xué)名)為生物雙名式。屬名＋種名(＋人名、地名)。斜體 屬名在前，名詞，首字母大寫 種名在后，形容詞，小寫 屬名可用第一個字母代表

M.tuberculosis(結(jié)核分枝桿菌)、S.typhi(傷寒沙門菌)常見的細(xì)菌也可用習(xí)慣通用俗名

tuberculosis(結(jié)核桿菌)、typhoid bacillus(傷寒桿菌)泛指某一屬細(xì)菌：屬名＋sp(菌種species)Mycobacterium sp，Salmonella sp 亞種的名稱：屬名＋種名＋亞種

Klesbsiella penumoniae subspecies pneumoniae 中文譯名則種名在前，屬名在后。

4、細(xì)菌分類系統(tǒng) ：《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊》 第七章、消毒學(xué)試驗技術(shù)

1、消毒學(xué)試驗

原理：將試驗微生物暴露于消毒因子(物理、化學(xué)、生物學(xué))，作用預(yù)定的時間之后，檢查試驗的微生物是否被殺滅或抑制。

主要目的：檢查一種消毒劑或消毒方法是否能達(dá)到殺滅或消除病原微生物的要求。

2、消毒 disinfection ：殺滅或清除傳播媒介上病原微生物，使其達(dá)到無害化的處理。

滅菌：殺滅或清除傳播媒介上一切微生物（包括病原體和非病原體的繁殖體和芽胞）的處理。

3、微生物學(xué)檢驗：中和試驗、定性/量殺菌試驗、病毒滅活試驗、能量試驗、現(xiàn)場試驗等

4、消毒藥械鑒定測試的項目

理化性能檢驗 微生物學(xué)檢驗

其他 消毒劑

有效成分含量；pH；金屬腐蝕性

微生物殺滅

模擬現(xiàn)場試驗與現(xiàn)場試驗 穩(wěn)定性試驗

性

實驗室殺滅微生物 模擬現(xiàn)場和現(xiàn)場試驗 安全性試驗(電器、毒理)消毒器械

殺菌因子強度或濃度；金屬腐蝕

5、菌片：用于測定各種消毒劑、消毒器械與方法對不同物品上微生物的殺滅作用。

6、殘留消毒劑的去除方法：化學(xué)中和法（稱中和劑法）、過濾沖洗法、稀釋法等 中和劑法：在消毒劑與微生物作用到達(dá)規(guī)定時間的終點時，取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中，將殘留消毒劑迅速中和，使其不再持續(xù)抑制或殺滅微生物的方法。

中和劑 ：能及時中止消毒劑的殺微生物作用

本身及其與消毒劑的反應(yīng)產(chǎn)物對微生物無抑制或殺滅作用，對培養(yǎng)基無不良影響。

7、中和試驗 操作方法

用PBS將指示菌制成5×105～5×106cfu/ml懸液。將消毒劑用滅菌蒸餾水配制成3種不同濃度，在不加中和劑的情況下，測知該消毒劑10min抑殺指示菌99.9％以上的最低有效濃度。

取消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效濃度與待選擇中和劑進行試驗，選出中和劑種類并依據(jù)等當(dāng)量中和原則，調(diào)整中和劑濃度，選出試驗濃度的消毒劑使用中和劑的濃度。

中和劑選擇試驗時，先將消毒劑1.0mL與中和劑溶液9.0mL混合，制成中和產(chǎn)物溶液，再分組進行。

試驗分組

消＋菌：消毒劑對試驗菌有無殺滅或抑制能力。

(消＋菌)＋中： 殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗菌是否能恢復(fù)生長。中＋菌：中和劑是否抑菌。(消毒劑＋中和劑)＋菌液：中和產(chǎn)物，或未被完全中和的殘留消毒劑對試驗菌的生長繁殖是否有影響。

稀＋菌： 菌數(shù)對照。

稀＋中＋培養(yǎng)： 陰性對照。

8、消毒劑定性消毒試驗：測定受消毒因子作用后的樣本有無細(xì)菌生長的試驗方法。試驗方法

5×105～5×106cfu/mL的菌懸液。

滅菌試管10，標(biāo)號。每管：滅菌蒸餾水2.5mL，20±2℃水浴。＋消毒液2.5mL，倍比稀釋，至第9管。第10管中不加消毒液作對照。加菌懸液2.5mL于各管中，混勻并記錄各管加菌時間，使菌藥混合液中含菌量均為105～106cfu/mL。

各管分別于加菌后4個不同間隔時間，取0.5mL ＋ 4.5mL中和劑內(nèi)，中和10min后，取出0.5mL加入4.5mL營養(yǎng)肉湯管內(nèi)。

將接種細(xì)菌的肉湯管放37℃培養(yǎng)48h，觀察初步結(jié)果，無菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第7天。試驗重復(fù)5次。結(jié)果判定

若肉湯管混濁，則表示有菌生長，記為陽性，以（+）表示。

若培養(yǎng)至第7天，肉湯管澄清，則表示無菌生長，記為陰性，以（—）表示。

對難以判定的肉湯管，取0．1mL接種于營養(yǎng)瓊脂平板，用滅菌L棒涂勻，放37℃培養(yǎng)48h，觀察菌落形態(tài)；并做涂片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長。有指示菌生長記為陽性。

5次試驗，均無指示菌生長表示達(dá)到滅菌。

9、消毒劑定量消毒試驗：測定受消毒因子作用后，樣本殘存微生物數(shù)量的試驗方法，以殺滅率表示結(jié)果。

用于對消毒劑殺滅效果的評價。

原理：將一定量的細(xì)菌懸液或菌片(載體)，暴露于設(shè)計濃度的消毒液中，作用至規(guī)定時間后，取細(xì)菌與消毒液的混合物或取出載體，與中和劑反應(yīng)，終止消毒劑的繼續(xù)作用，并接種于營養(yǎng)瓊脂平板，培養(yǎng)之后，計數(shù)菌落。

以存活的菌落數(shù)與最初加入的菌數(shù)比較，計算出殺滅率，或殺滅效果(germicidal effect，GE)。

10、懸液定量殺菌試驗-----活菌培養(yǎng)計數(shù) 消毒液：濃度為待測濃度的1.25倍

實驗用菌懸液：(1×108～5×108)cfu/ml 菌0.5ml＋干擾0.5ml，混勻，20±1℃水浴5min，＋消毒液4.0ml，迅速混勻并立即計時。待菌藥相互作用至預(yù)定時間，分別吸取0.5ml菌藥混合液加于4.5ml經(jīng)滅菌的中和劑中，振蕩混勻。

11、定量殺菌試驗的評價規(guī)定

在產(chǎn)品說明書指定的最低濃度與最低作用時間，重復(fù)試驗3次。

在懸液定量殺滅試驗中，各次的殺滅對數(shù)值均≥5.00，可判定為消毒合格。

12、破壞效果判定

以S/N＜2.1作為HBsAg抗原性破壞合格標(biāo)準(zhǔn)。

S是消毒因子作用后被檢樣品或陽性對照樣品平均每分鐘脈沖數(shù)（cpm）值或光密度（OD）值。N是試驗中陰性對照樣品平均cpm值或OD值。

細(xì)菌學(xué)檢驗各論一般性思考題：

1、ⅹⅹⅹⅹ菌的培養(yǎng)特征如何？（增菌、選擇性平板）

2、ⅹⅹⅹⅹ菌的形態(tài)與染色有何特點。

3、ⅹⅹⅹⅹ菌的生化特性有哪些？其中最有特點的是哪個項目，如何利用這個項目，診斷某細(xì)菌是否是ⅹⅹⅹⅹ菌。

4、ⅹⅹⅹⅹ菌的分型特點是什么？ 致病菌檢測的一般思路？

§2 副溶血性弧菌

是一種海洋細(xì)菌，主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產(chǎn)品。進食含有該菌的食物致可食物中毒，也稱嗜鹽菌食物中毒。神奈川現(xiàn)象（KP）: KP陽性：絕大多數(shù)致病性副溶血性弧菌產(chǎn)生的耐熱溶血毒素能使人或家兔的紅細(xì)胞溶解。溶血反應(yīng)是鑒定致病性與非致病性菌株的一項重要指標(biāo)。第十三章 與醫(yī)學(xué)有關(guān)的其他細(xì)菌

§1 軍團菌屬

營養(yǎng)要求特殊，常接種于復(fù)合培養(yǎng)基中，生長環(huán)境中必須含半胱氨酸和鐵鹽。需氧，2.5%～5%CO2能促進生長。

分離: 各取0.1ml上述3種經(jīng)處理樣品，分別接種BCYE或GVPC平板。BCYC：可溶性焦磷酸鐵，L-半胱氨酸鹽酸鹽 鑒定：培養(yǎng)確證：BCYE生長 / BCYE-Cys不生長

軍團病主要是通過呼吸道吸入帶菌飛沫、氣溶膠而感染，多流行于夏秋季，為全身性疾患。

§2 綠膿桿菌

假單胞菌中同人類與動物疾病有重要關(guān)系的大約有10種：綠膿桿菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、蔥頭假單胞菌、類鼻疽假單胞菌、嗜麥芽假單胞、腐敗假單胞菌、斯氏假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌、類產(chǎn)堿假單胞菌

2種水溶性色素：

①綠膿素，為藍(lán)綠色的吩嗪類分合物，無熒光性，具有抗菌作用。綠膿素只有綠膿桿菌產(chǎn)生，故有診斷意義。

②熒光素，呈綠色。

1、增菌：1∶10樣品稀釋液10ml + 90ml SCDLP液體培養(yǎng)基

SCDLP：用于疏水性化妝品樣品處理及化妝品和一次性使用衛(wèi)生用品增菌培養(yǎng)。

2、分離：乙酰胺培養(yǎng)基

3、綠膿菌素試驗

可疑菌落接種綠膿菌素測定用培養(yǎng)基 氯仿提取→藍(lán)色

+鹽酸→粉紅色、紫紅色→陽性(被檢物中有綠膿菌素存在)

§3 李斯特菌

單核細(xì)胞增多性李斯特菌與人類關(guān)系較密切，是人和動物的致病菌。嗜冷菌：2～42℃(也有報道在0℃能緩慢生長)。“冰箱殺手” 與醫(yī)學(xué)有關(guān)的其他細(xì)菌大家所出思考題匯總

綠膿桿菌的鑒定方法有：革蘭染色、鏡檢，氧化酶試驗，硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗、明膠液化試驗、42℃生長試驗 綠膿桿菌能產(chǎn)生兩種水溶性色素：

①綠膿素具有抗菌作用有診斷意義。②熒光素

1.李斯特菌穿刺SIM動力培養(yǎng)5d的培養(yǎng)特性：倒立傘狀生長 2.李斯特菌生化反應(yīng)中觸酶試驗：陽性

幽門螺桿菌

1.Hp與下列哪種疾病無關(guān)？D A.十二指腸潰瘍 B.胃炎 C.肝癌 D.肺炎 2.Hp的快速檢測方法是下列哪種？C A.氧化酶試驗 B.觸酶試驗 C.尿素酶實驗 D.硝酸鹽還原實驗

布魯菌屬

1以下不屬于布魯菌屬的生物學(xué)特性的是:D A革蘭陰性桿菌 B嚴(yán)格需氧菌C硝酸鹽還原實驗陽性 D具有運動性

2布魯菌的實驗室常用培養(yǎng)基是_____或____.（肝浸液培養(yǎng)基、改良厚氏培養(yǎng)基）

氣單胞菌屬

1、氣單胞菌屬的選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基分別是什么？（RS培養(yǎng)基、AHM培養(yǎng)基）

2、使用堿性蛋白胨水增菌的細(xì)菌有哪些？（霍亂弧菌、氣單胞菌）

彎曲菌屬

彎曲菌屬中導(dǎo)致腹瀉的最常見病源菌？ 空腸彎曲菌 彎曲菌屬生化鑒定的三個試驗？ 快速馬尿酸鈉試驗、快速硫化氫試驗、快速DNA酶水解試驗

軍團菌 在軍團菌標(biāo)本處理時，哪些平板可用來培養(yǎng)？ GVPC平板，巧克力平板，血瓊脂平板 2 軍團菌鑒定的試驗及結(jié)果有哪些？

發(fā)酵試驗（-）、氧化酶試驗（+/-）觸酶實驗（+）、動力試驗（+）、馬尿酸水解試驗（+）、明膠液化試驗（+）為軍團菌

第＋四章 螺旋體屬

螺旋體是一類菌體細(xì)長、柔軟、彎曲呈螺旋狀、無鞭毛而能活潑運動的原核單細(xì)胞微生物。與宿主組織磷脂形成的復(fù)合抗原：當(dāng)螺旋體侵入組織后，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復(fù)合抗原，此種復(fù)合抗原可刺激機體產(chǎn)生抗磷脂的自身免疫抗體(非特異性抗體)，稱為反應(yīng)素。

鉤體是唯一可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)的螺旋體

人是梅毒的唯一傳染源，由于感染方式不同可分先天性梅毒和后天性梅毒。

1、暗視野顯微鏡檢查梅毒螺旋體：是診斷梅毒螺旋體感染唯一快速、直接的方法，為診斷早期梅毒所必需。

2、非特異性梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗： 梅毒螺旋體→抗原性心磷脂→反應(yīng)素

反應(yīng)素＋從牛心中提取的心磷脂→抗原抗體反應(yīng) 抗原是心磷脂、卵磷脂和膽固醇的乙醇溶液。

VDRL、USR、RPR 抗原微粒＋抗體(反應(yīng)素)→粘附→肉眼可見的顆粒凝集和沉淀，即為(＋)； 可用作臨床篩選，并可作定量，用于療效觀察。

3、RPR：

快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 VDRL抗原＋活性炭顆粒→RPR抗原

試驗在特制的白色紙卡上進行，在白色底板上出現(xiàn)黑色凝集顆粒或絮片為陽性反應(yīng)

第十五章 立克次體

我國發(fā)現(xiàn)的立克次體病主要有斑疹傷寒、恙蟲病和Q熱等。

1、立克次體是一類專性寄生于真核細(xì)胞內(nèi)的G-原核生物，是介于細(xì)菌與病毒之間，而接近于細(xì)菌的一類原核生物。以二分裂方式繁殖。

2、常用Gimenez或Giemsa法染色。

Gimenez染色：呈紅色，背景為藍(lán)色。Giemsa染色：呈紫紅色，常顯兩端濃染。除恙蟲病立克次體多采用Giemsa法外，其他立克次體常用Gimenez法。

3、立克次體有兩種主要抗原：

群特異性抗原：與細(xì)胞壁表層的脂多糖成分有關(guān)，為可溶性抗原，耐熱。種特異性抗原：與外膜蛋白有關(guān)，為顆粒性抗原，不耐熱。

4、外斐(氏)反應(yīng) 原理：斑疹傷寒等立克次體的脂多糖(群特異性抗原)與變形桿菌某些菌株的菌體抗原具有共同的抗原成分。

外斐氏反應(yīng)：

用與立克次體有共同菌體抗原的變形桿菌OXl9、OX2、OXk進行非特異性凝集反應(yīng)，檢測病人血清中有無立克次體抗體。

變形桿菌凝集試驗WFR，用以診斷流行性斑疹傷寒、恙蟲病等急性傳染病。

5、埃立克體：×雞胚，×無生命培養(yǎng)基，∨體外細(xì)胞培養(yǎng)。

6、磺胺類藥物不能抑制立克次體的生長

第十六章 衣原體 Chlamydia

1、衣原體是一類具有獨特生長發(fā)育周期、專性細(xì)胞內(nèi)寄生、能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物。

2、衣原體具有獨特的發(fā)育周期，可觀察到兩種不同的顆粒，即原體(EB)和始體(IB)。

原體較小而致密，有胞壁，胞外穩(wěn)定，是發(fā)育成熟的衣原體，具有感染性。Giemsa染色呈紫色，Macchiavello染色呈紅色。

始體又稱為網(wǎng)狀體(RB)，較大而疏松，無胞壁，胞外不穩(wěn)定，無感染性，是繁殖型。經(jīng)Giemsa和Maechiavello染色后均呈藍(lán)色。

3、顯微鏡檢查Giemsa染色：光鏡下，原體呈紫紅色，始體為嗜堿呈藍(lán)色，查見包涵體有診斷價值。

第十七章 支原體Mycoplasma

1、無細(xì)胞壁、形態(tài)上呈高度多形性，可通過除菌濾器，在無生命的培養(yǎng)基中能生長繁殖的最小的原核細(xì)胞型微生物。革蘭染色陰性，但不易著色，姬姆薩染色較好，結(jié)果呈淡紫色。

2、人工培養(yǎng)基培養(yǎng)：營養(yǎng)需求高于一般細(xì)菌。基礎(chǔ)：牛心浸液

提供膽固醇及其他長鏈脂肪酸：人或動物血清 提供核苷前體和維生素等：10%的新鮮酵母浸液

3、典型的菌落呈“油煎蛋/荷包蛋”樣，菌落大小0.1～1.0mm。

解脲脲原體的菌落最小，直徑僅為10～40μm，須在低倍顯微鏡下觀察，故原稱為“T”株(tiny strain)。

4、病毒學(xué)研究中細(xì)胞培養(yǎng)常被支原體污染。

5、對青霉素、頭孢等作用于細(xì)胞壁的抗生素不敏感，但對干擾蛋白質(zhì)合成或作用于核蛋白體的抗生素如強力霉素、四環(huán)素、紅霉素、螺旋霉素、鏈霉素等敏感。

6、支原體無細(xì)胞壁，而細(xì)菌L型是細(xì)菌失去細(xì)胞壁所形成的細(xì)胞壁缺陷型，二者在許多生物學(xué)性狀上相似。

支原體

自然界中廣泛存在 絕大多數(shù)生長需膽固醇

遺傳上與細(xì)菌無關(guān)，且無論在什么條件下也不能變成細(xì)菌

菌落較小，0.1～0.3mm

L型細(xì)菌 自然界很少存在 生長不一定需要膽固醇

遺傳上與原菌相關(guān)，并可在誘導(dǎo)因素去除后回復(fù)為原菌

菌落稍大，0.5～1.0mm 第八、九章 病 原 性 球 菌

1.名詞解釋：

1）血漿凝固酶：使含抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類，分為結(jié)合凝固酶和游離凝固酶。血漿凝固酶:是多數(shù)致病菌株能產(chǎn)生凝固酶，能使含有肝素等抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質(zhì),致病株大多數(shù)能產(chǎn)生,是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)

2）SPA：(Staphylococcal protein A,SPA)葡萄球菌A蛋白，存在于細(xì)胞壁的一種表面蛋白，為完全抗原，具屬特異性。90%以上的金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的一種表面蛋白。

本質(zhì)為單鏈多肽，與肽聚糖形成共價鍵結(jié)合，SPA可與IgG1、IgG2、IgG4分子的Fc段發(fā)生非特異性結(jié)合，IgG的Fab段與特異性抗原結(jié)合，可用于協(xié)同凝集試驗(coagglutination)用于抗原檢測。

SPA與IgG結(jié)合后復(fù)合物具有抗吞噬，促細(xì)胞分裂，超敏反應(yīng)等多種生物學(xué)活性。

3）Optochin試驗：奧普托欣試驗原理：幾乎所有肺炎鏈球菌對奧普托欣試驗敏感，而奧普托欣試驗對其他鏈球菌則無抑制作用。挑取待測定的菌落密集接種在血平板上，貼5μg/片的Optochin的紙片與平皿表面，35℃18h后，抑菌環(huán)直徑＞15mm為肺炎球菌。

2.根據(jù)色素和生化反應(yīng)將葡萄球菌分成哪幾種？ 金黃色葡萄球菌-----致病菌 表皮葡萄球菌-----偶爾致病 腐生葡萄球菌-----一般不致病

3.金黃色葡萄球菌的鑒定依據(jù)有哪些？

?1.產(chǎn)生脂溶性金黃色色素2.血平板上菌落周圍產(chǎn)生透明溶血環(huán) 3.發(fā)酵甘露醇4.血漿凝固酶陽性5.耐熱核酸酶陽性6.涂片鏡檢為革蘭陽性葡萄狀排列的球菌 7.G+Cmol%為30mol %—38mol %

4.根據(jù)鏈球菌在血平板上的溶血現(xiàn)象，將其分成哪些類型？ 在血平板上根據(jù)溶血現(xiàn)象分為甲、乙、丙三型。

α（甲）溶血性鏈球菌菌落周圍有狹窄的草綠色溶血環(huán)-----多為條件致病菌，草綠色鏈球菌 β（乙）溶血性鏈球菌菌落周圍有明顯寬廣的完全透明環(huán)-----致病性最強，溶血性鏈球菌 γ（丙）溶血性鏈球菌菌落周圍無溶血環(huán)-----一般不致病，不溶血性鏈球菌，常存在于乳類及動物的糞便中。

5.腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些異同點？ 腦膜炎球菌可發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖產(chǎn)酸，淋球菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸，還可用血清學(xué)試驗加以鑒別。

比 較 內(nèi) 容 生物學(xué)性狀 形態(tài)結(jié)構(gòu) 培養(yǎng)特性 腦膜炎奈瑟菌

G－雙球菌；有莢膜、菌毛(新)高營養(yǎng)、5%CO2露滴狀、自溶酶

淋病奈瑟菌 同左

高營養(yǎng)、5%CO2 生化反應(yīng) 抗原與分類

抵抗力

致病性 致病物質(zhì) 所致疾病 防治原則 分解葡萄糖、麥芽糖

莢膜多糖群特異Ag外膜蛋白型特異Ag脂多糖Ag 核蛋白Ag 冷、熱、干燥、消毒劑均敏感 莢膜、菌毛、內(nèi)毒素 流行性腦脊膜炎 莢膜多糖疫苗

只分解葡萄糖

菌毛蛋白Ag ；脂多糖Ag ； 外膜蛋白Ag(PⅠ、PⅡ、PⅢ)

同左

莢膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1 淋病 潔身自好

6.葡萄球菌屬的生物學(xué)特性? 1）形態(tài)染色與培養(yǎng)

革蘭染色陽性，球形，呈葡萄狀排列，無鞭毛，無芽孢 培養(yǎng)特點: 1.營養(yǎng)要求不高；2.需氧或兼性厭氧；3.最適生長溫度28-38℃；4.某些菌株耐鹽(10％NaCl)菌落觀察：在普通瓊脂平板上，35℃孵育18-20h葡萄球菌均形成中等大小、圓形凸起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、不透明菌落，并可產(chǎn)生不同的脂溶性色素，使菌落呈現(xiàn)不同的顏色，如金黃色葡萄球菌呈金黃色、表皮葡萄球菌大多呈白色、腐生葡萄球菌大多呈檸檬色。

在血瓊脂平板上，三種葡萄球菌的菌落特點與它們在普通瓊脂平板上的菌落相同，但金黃色葡萄球菌菌落周圍有完全溶血環(huán)(β溶血)，而腐生葡萄球菌和大多數(shù)表皮葡萄球菌菌落周圍無溶血環(huán)。

2）生化反應(yīng) 觸酶試驗陽性。致病株分解甘露醇。

金黃色葡萄球菌耐熱核酸酶試驗陽性。金葡菌血漿凝固酶陽性。3）抗原構(gòu)造

葡萄球菌A蛋白(SPA)多糖抗原 ：具有群特異性，是存在于細(xì)胞壁上的一種半抗原。莢膜多糖 4）致病物質(zhì)

毒素：葡萄球菌溶血素，腸毒素，殺白細(xì)胞素，表皮剝脫毒素，毒性休克綜合征毒素-1 酶類：脂酶，觸酶，凝固酶，葡激酶，耐熱核酸酶，透明質(zhì)酸酶 超抗原 5）免疫性

人對金黃色葡萄球菌有一定的天然免疫力。當(dāng)皮膚粘膜發(fā)生損傷或機體免疫力降低時才易引起感染。病后能獲得一定的免疫力，但作用不強，一般認(rèn)為不足以預(yù)防再次感染。

6）抵抗力

耐干燥；對外界因素的抵抗力強于其他無芽胞菌； 對青霉素耐藥株高達(dá)90%以上；

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）已經(jīng)成為醫(yī)院內(nèi)感染最常見的致病菌之一。7.簡述葡萄球菌和鏈球菌的檢驗程序和檢驗方法。（重點掌握葡萄球菌）葡萄球菌檢驗程序：

檢驗方法：

直接涂片檢查-----可作初步報告，革蘭染色陽性，呈葡萄狀排列的球菌，即可作初步報告。培 養(yǎng)：

1.增菌培養(yǎng)——7.5%NaCl肉湯，胰酪大豆肉湯

2.分離培養(yǎng)——普通平板、血平板、Baird-Parker平板、高鹽甘露醇平板、卵磷脂高鹽平板等 金葡球菌鑒定培養(yǎng)基 — S.aureus ID：灰綠色菌落為金葡球菌 法國科瑪嘉金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基（CHROMagar? Staph aureus）：金黃色葡萄球菌：紫色； 其他：藍(lán)色、無色。鏈球菌檢驗程序

檢驗方法：

膿汁、咽拭、痰液和滲出物可直接涂片檢查。增菌培養(yǎng)接種肉浸液葡萄糖肉湯或匹克肉湯。

分離培養(yǎng)接種血平板做需氧和厭氧培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)。鑒定試驗

β溶血者做桿菌肽敏感試驗，敏感者為A群鏈球菌，耐藥者做膽汁-七葉苷試驗（陽性為黑色反應(yīng)），陽性者為B群鏈球菌，同時做CAMP試驗也應(yīng)為陽性；陰性者為A、B、C群以外的其他鏈球菌；

α溶血者做Optochin試驗，敏感者為肺炎鏈球菌，耐藥者做膽汁-七葉苷試驗，陰性者為草綠色鏈球菌；

不溶血者做6.5%氯化鈉試驗，陰性者為其他鏈球菌。

鏈激酶試驗：取草酸鈉血漿0.2ml，用生理鹽水稀釋，再加入鏈球菌培養(yǎng)物0.5ml和0.25%氯化鈣溶液0.25ml混合，放37℃水浴，觀察血漿凝固。從血漿凝固起記錄溶化時間，溶化時間越短，鏈激酶越多。

馬尿酸鈉水解試驗： B群鏈球菌陽性。陽性產(chǎn)紫色或深紫色。

第十章 腸科桿菌

1、簡述腸道桿菌共同特點，怎樣初步區(qū)別腸道致病菌與非致病菌？ 腸桿菌科共同特性

相似的形態(tài)染色 中等大小，G –桿菌，無芽胞，多數(shù)有動力，致病性菌株多有菌毛，具有質(zhì)粒。簡單的培養(yǎng)條件 活潑的生化反應(yīng)

抗原構(gòu)造: 包括菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原3種。O抗原和H抗原是分群和分型的依據(jù)。

抵抗力: 不強，不耐干燥，對一般的化學(xué)消毒劑均敏感。變異性:（1）S-R變異：新鮮分離的細(xì)菌菌落為光滑性，反復(fù)傳代或保存過久，菌落變成粗糙型。

（2）H-O變異：鞭毛從有到無。

（3）質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、結(jié)合子等的轉(zhuǎn)移改變菌株遺傳信息，如耐藥菌株的出現(xiàn)。乳糖發(fā)酵試驗------初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌 腸道致病菌------不發(fā)酵乳糖 腸道非致病菌----發(fā)酵乳糖

2、何謂肥達(dá)試驗？肥達(dá)試驗結(jié)果判斷須注意哪些要點？

肥達(dá)試驗(Widal test):用已知傷寒沙門菌的O、H抗原，以及引起副傷寒的甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌的H抗原(稱為PA、PB)作為診斷菌液，與受檢血清做試管或微孔板凝集試驗，檢測受檢血清中有無相應(yīng)的抗體及其效價的一種半定量試驗。可輔助診斷腸熱癥

結(jié)果分析及臨床意義：

1）正常值 ：首先應(yīng)考慮當(dāng)?shù)厝巳旱恼Ｐr。

傷寒沙門菌O凝集價 >1：80，傷寒沙門菌H凝集價 > 1：160 甲型副傷寒H凝集價 >1：80，肖氏沙門菌H凝集價 >1：80 或在疾病早期及中后期分別采集兩次血清，若第二份血清比第一份的效價增高4倍或以上具有診斷的參考價值。

2）O與H抗體的診斷意義：

O抗體出現(xiàn)較早，為IgM，持續(xù)時間短（約半年），消退后不易受非特異性病原刺激而重現(xiàn)。H抗體出現(xiàn)較晚，為IgG，持續(xù)時間長達(dá)數(shù)年，消退后易受非特異性病原刺激而重現(xiàn)。

① O、H凝集價均超過正常值，則腸熱癥的可能性大； ②若兩者均低，腸熱癥的可能性小；

③若O不高H高，可能為疾病的晚期，是預(yù)防接種或非特異性反應(yīng)；

④若O高H不高，則可能為感染早期，或與其他沙門菌有交叉反應(yīng)，或H-O變異的沙門菌引起的感染等，建議一周后復(fù)查，如一周后H也有升高，可證實為腸熱癥。

3）注意事項：

確診為傷寒的患者中約有10%肥達(dá)反應(yīng)始終為陰性，故陰性結(jié)果不能排除傷寒的確診。其原因可能由于早期使用抗生素治療，患者免疫功能低下或與肥達(dá)反應(yīng)診斷菌液等有關(guān)。

采血的時間不同，肥達(dá)反應(yīng)的陽性率也不同。發(fā)病第一周陽性率為50%，第二周為80%，第四周90%，恢復(fù)期凝集價最高。以后逐漸下降以至轉(zhuǎn)陰。臨床上一般以雙份血清（早期和恢復(fù)期）的凝集價有4倍增高作為新近感染的指標(biāo)。

3、疑似傷寒病人在病程不同階段應(yīng)采取何種標(biāo)本？ 不同疾病、不同病程采集不同標(biāo)本

傷寒、副傷寒：第1、2周采血；第2、3周采糞、尿；全程可采骨髓。血清學(xué)檢查：第二周起即可采血清。敗血癥：采血。

腸炎：糞便、嘔吐物、可疑食物

4、SS培養(yǎng)基中有哪些成分，各有何作用？ 用途:用于志賀菌和沙門菌分離

成分（g/L）牛肉浸粉5；眎胨或多價蛋白胨5；乳糖10；膽鹽8.5；枸櫞酸鈉8.5；硫代硫酸鈉8.5；枸櫞酸鐵1；瓊脂17.0；中性紅水溶液0.025；煌綠水溶液0.33ml；蒸餾水1LpH7.0～7.1（25℃）

原理:SS瓊脂為強選擇性培養(yǎng)基。其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他則為選擇性抑制劑和緩沖劑。

枸櫞酸鈉、膽鹽、硫代硫酸鈉的協(xié)同作用與煌綠共同來抑制腸道非病原性細(xì)菌及部分大腸埃希菌的生長；對志賀菌屬及沙門菌屬相對抑制性較弱。硫代硫酸鈉有助于大腸菌的菌落著色，枸櫞酸鐵能緩解某些藥物對病原菌的毒性作用，同時與細(xì)菌產(chǎn)物起反應(yīng)呈黑色菌落。

中性紅可把分解乳糖和不分解乳糖的細(xì)菌鑒別開，前者為紅色菌落，后者為無色菌落 瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑

【觀察結(jié)果】沙門菌其菌落呈無色半透明，產(chǎn)生H2S者菌落中心呈黑色，部分菌株如亞利桑那亞屬Ⅲ有分解乳糖的菌落呈紅色、中心黑色，志賀菌屬的菌落呈無色透明。大腸埃希菌呈紅色混濁。宋內(nèi)志賀菌能延緩發(fā)酵乳糖，培養(yǎng)24h厚可以出現(xiàn)紅色菌落。腸道致病菌的菌落均可達(dá)1.5mm以上。

5.名詞解釋：

1）KIA: 克氏雙糖鐵瓊脂,常用于觀察微生物發(fā)酵葡萄糖和乳糖的能力，可以把腸桿菌科細(xì)菌和其他科細(xì)菌區(qū)別出來以及區(qū)別腸道內(nèi)的致病菌和大腸埃希菌。

KIA成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例為 1：10； 指示劑為酚紅，其在PH<6.8時變?yōu)辄S色，而KIA的PH為7.4(紅色)，產(chǎn)少量的酸就可導(dǎo)致顏色變化。

2）MIU：動力、吲哚及脲酶（MIU）復(fù)合試驗

【原理】：培養(yǎng)基為含尿素、蛋白胨的半固體培養(yǎng)基，指示劑為酚紅。具色氨酸酶的細(xì)菌能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，加入吲哚試劑后，培養(yǎng)基上層的吲哚會變紅；具脲酶的細(xì)菌能分解尿素產(chǎn)氨，使整個培養(yǎng)基變堿呈紅色；有動力的細(xì)菌沿穿刺線擴散生長。

【方法】：將大腸埃希菌和普通變形桿菌穿刺線接種于MIU培養(yǎng)基，35oC，18-24h，觀察動力和脲酶反應(yīng)后，再滴加吲哚試劑。

【結(jié)果】：擴散生長為動力陽性；滴加吲哚試劑后呈玫瑰紅色為陽性；培養(yǎng)基變紅脲酶陽性。用途：生化培養(yǎng)基，用于細(xì)菌脲酶檢測（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）3）IMViC：用來測定菌的生理生化特征的4個實驗.主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，多用于水的細(xì)菌學(xué)檢查。I:吲哚試驗 ；M:甲基紅試驗 ；V:V.P試驗 ；C:檸檬酸實驗

4）V-W變異:異：指沙門菌失去Vi抗原的變異。

——初次分離得到的具有Vi抗原、O不凝集的沙門菌稱為V型菌；

——Vi抗原部分喪失，既可與O抗血清發(fā)生凝集又可與Vi抗血清凝集者稱VW型菌； ——Vi抗原完全消失，與O抗血清發(fā)生凝集而與Vi抗血清不凝集者稱W型菌。

V-W變異的過程是V型菌經(jīng)人工培養(yǎng)，逐漸喪失部分Vi抗原而稱為VW型菌，進而成為W型菌 5）Vi抗原:由聚-N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸組成。不穩(wěn)定，新從患者標(biāo)本中分離出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。Vi抗原存在于細(xì)菌表面，具有微莢膜功能，能抵抗吞噬細(xì)胞的殺傷和吞噬，并阻擋抗體、補體等破壞菌體作用。測定Vi抗體有助于對傷寒帶菌者的檢出。

6）外斐反應(yīng)：變形桿菌屬的X19,X2.Xk菌株的菌體O抗原與斑疹傷寒立克次體和恙蟲病立克次體有共同抗原，故可用OX19，OX2，OXk代替立克次體作為抗原與相應(yīng)患者血清進行交叉凝集反應(yīng)，此稱外斐試驗，輔助診斷立克次體病

第十二章 革蘭陽性桿菌

1.名詞解釋：

1）串珠試驗：接種待檢菌于含有0.05-0.1IU/ml青霉素的普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；37℃，6h后，炭疽桿菌可發(fā)生形態(tài)

變化；鏡下觀察，抑菌和生長臨界處，菌體膨隆相連似串珠狀菌鏈，而類炭疽桿菌無此現(xiàn)象。2）異染顆粒：常見于白喉棒狀桿菌等，在細(xì)胞內(nèi)呈顆粒狀，主要成分為RNA及嗜堿性的多偏磷酸鹽，用美藍(lán)或奈瑟染色（Neisser stain）后，這些顆粒與菌體顏色不同，兩端或一端可見著色較深的異染顆粒（metachromatic granules）；異染顆粒有時僅位于菌體兩端，常稱為極體。

3）純蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD)PPD有兩種，由人結(jié)核分枝桿菌來源的PPD-C和卡介苗制成的BCG-PPD。目前主要用PPD，每0.1ml含5單位。

4）抗酸桿菌：(acid-fastbacilli)又稱分歧菌。該菌屬無鞭毛、無芽胞、不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素，其致病性和菌體成分有關(guān)。引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽腫。分歧桿菌種類較多，可分為結(jié)核分歧桿菌復(fù)合群、非結(jié)核分歧桿菌和麻風(fēng)分歧桿菌三類。一般不易著色，染色時需要加溫或延長時間，著色后能抵抗酸酒精的脫色，故稱抗酸桿菌。

5）結(jié)核菌（OT）素試驗：用于診斷結(jié)核菌感染所致IV型超敏反應(yīng)的皮膚試驗。對診斷活動性結(jié)核病和測定機體細(xì)胞免疫功能有參考意義。機體受結(jié)核桿菌感染4～8周后，即可產(chǎn)生免疫變態(tài)反應(yīng)。

6）卡介苗：即將有毒力的牛型結(jié)核分枝桿菌在甘油膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基上長期培養(yǎng)傳代，得到減毒菌株，可用于預(yù)防結(jié)核菌感染。

2．簡述結(jié)核分枝桿菌的形態(tài)及培養(yǎng)特性

形態(tài)：結(jié)核分枝桿菌細(xì)長略彎，有時呈分枝狀，大小約1～4mm×0.4mm，無芽胞、鞭毛和莢膜。抗酸染色陽性：由于結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁中含有大量的脂質(zhì)，不易著色，一般不用革蘭染色法染色。用齊—尼氏抗酸染色法（Ziehl-Neelsen acid-fast stain），以5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后能抵抗3%鹽酸酒精的脫色作用，結(jié)核分枝桿菌被染成紅色，而其他非抗酸菌及背景則被美籃復(fù)染呈藍(lán)色。此外，結(jié)核分枝桿菌在藥物如異煙肼的影響下，亦可變?yōu)榭顾崛旧幮浴?/p>

菌落特征：表面干燥、粗糙、隆起、呈顆粒、結(jié)節(jié)或“花菜狀”，乳白色或淡黃色，不透明 培養(yǎng)特性： 專性需氧

最適生長溫度為37℃，低于30℃不生長。最適酸堿度為pH6.5～pH6.8 營養(yǎng)要求高，生長緩慢，必須在含有血清、卵黃、馬鈴薯、甘油以及某些無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能良好生長。常用羅-琴(Lowenstein-Jensen,L-J)固體培養(yǎng)基，內(nèi)含蛋黃(含脂質(zhì)生長因子，能刺激生長)、馬鈴薯、甘油(甘油對人型菌生長有促進作用。一定濃度對牛型及鼠型菌有抑制作用)、無機鹽和孔雀綠(抑制雜菌，利于分離和長期保存)等。

本菌生長緩慢，一般2-4周才能長出菌落。

3.簡述結(jié)核菌素試驗原理、結(jié)果判斷及意義 原理：結(jié)核菌素皮膚反應(yīng)是遲發(fā)型細(xì)胞超敏反應(yīng)。它是抗原(結(jié)核菌或卡介苗)進入機體使機體的免疫T淋巴細(xì)胞致敏，并大量分化增殖。當(dāng)已致敏的機體再次遭受到抗原入侵時，致敏淋巴細(xì)胞就會與之結(jié)合，引起變態(tài)反應(yīng)性炎癥。表現(xiàn)在結(jié)核菌素注射部位形成硬結(jié)甚至發(fā)生水泡、壞死。結(jié)素試驗陽性表明機體曾經(jīng)受到結(jié)核菌感染或接種過卡介苗，也表示機體對結(jié)核菌有一定免疫力。

方法：取兩種PPD 5單位注入兩前臂皮內(nèi)，48～72小時后觀察紅腫直徑 結(jié)果：陰性：＜5mm；陽性：＞5mm；強陽性：≥15mm 結(jié)核菌素試驗應(yīng)用

選擇卡介苗接種對象、測定卡介苗接種后的免疫效果 了解人群自然感染率

作為嬰幼兒結(jié)核病的輔助診斷 測定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能 4.簡述炭疽芽孢桿菌的抗原構(gòu)造

細(xì)菌性抗原：菌體多糖、莢膜抗原、芽孢抗原

炭疽毒素：水腫因子、致死因子、保護性抗原三種蛋白質(zhì)組成的外毒素復(fù)合物。

1)菌體多糖：由D-葡萄糖胺，D-半乳糖及乙酸組成，與毒力無關(guān)。能耐熱、耐腐敗。環(huán)狀沉淀反應(yīng)（Ascoli熱沉淀反應(yīng)），對炭疽病診斷有一定價值。不僅有抗原性，而且是多種植物凝集素受體。如大豆凝集素、相思豆凝集素等，故可用植物凝集素來鑒定菌。

2)莢膜: 非保護性抗原；有抗吞噬作用，與毒力有關(guān)，是重要的毒力因子和特異性抗原，有鑒別診斷價值。

3)芽孢抗原: 芽孢外膜含有抗原決定簇，具有免疫性和血清學(xué)診斷價值

炭疽毒素：水腫因子（EF）、致死因子（LF）、保護性抗原（PA）EF 和LF的作用，都需PA的協(xié)同

細(xì)菌分型___統(tǒng)一

實驗室生物安全通用原則 糖發(fā)酵試驗 KIA 衣原體特殊發(fā)育周期 卡介苗 ；細(xì)菌學(xué)命名 革蘭染色 炭疽抗原 非特異性梅毒螺旋 ；食物中毒實例簡述細(xì)菌學(xué)檢驗流程。

第二篇：細(xì)菌學(xué)檢驗試題

細(xì)菌學(xué)檢驗

一、名詞解釋 Imvic實驗 Sop 基因突變 Sos顯色實驗 探針 芽孢

二、選擇題 【A型題】

1．證明細(xì)菌具有鞭毛結(jié)構(gòu)的常用方法是：E A．革蘭染色法 B．抗酸染色法 C．普通瓊脂培養(yǎng)法 D．液體培養(yǎng)法 E．半固體培養(yǎng)法

2．革蘭染色法在臨床上常用于： B A．鑒別細(xì)菌的血清型別 B．協(xié)助臨床選擇用藥 C．診斷疾病 D．解釋發(fā)病機制 E．判定細(xì)菌的免疫性 3．測量細(xì)菌的常用單位是：B A．mm B．μm C．nm D．pm E．

4．不屬于細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)的是：D A．細(xì)胞壁 B．細(xì)胞膜 C．細(xì)胞漿 D．細(xì)胞器 E．核質(zhì)

5．細(xì)菌細(xì)胞壁的最主要成分是： B A．脂類 B．蛋白質(zhì) C．糖類 D．脂蛋白 E．***聚糖

6．不屬于細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)的是： A A．鞭毛 B．中介體 C．細(xì)胞膜 D．核糖體 E．核質(zhì) 7．青霉素抗菌作用的機理是： A A．干擾菌細(xì)胞壁的合成 B．破壞菌細(xì)胞壁上的磷壁酸 C．干擾菌細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成 D．破壞菌細(xì)胞膜的通透性 E．破壞菌細(xì)胞壁的多糖骨架 8．溶菌酶的殺菌機理是：E A．干擾菌細(xì)胞壁交聯(lián)橋的合成 B．干擾二氨基庚二酸的活性 C．破壞聚糖骨架上四***側(cè)鏈的連接 D．干擾菌細(xì)胞核質(zhì)的活性

E．破壞菌壁多糖骨架β-

1、4鍵的連接 9．關(guān)于L型細(xì)菌敘述錯誤的是：C A．由于細(xì)胞壁缺陷常呈多形態(tài) B．染色體不易著色 C．無致病力

D．常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢查多呈陰性

E．除去誘導(dǎo)因素可回復(fù)成原來的細(xì)菌 10．質(zhì)粒是細(xì)胞的：A A．染色體以外DNA B．核質(zhì)RNA C．儲存高能的胞漿顆粒 D．胞漿中rRNA E．中介體 11．關(guān)于菌毛敘述錯誤的是：A A．是細(xì)菌的運動器官 B．分為普通菌毛和性菌毛 C．成分是蛋白質(zhì)

D．普通菌毛與細(xì)菌的致病性有關(guān) E．普通光學(xué)顯微鏡下不能看見

12．細(xì)菌的革蘭染色性不同主要是因為：D A．形態(tài)不同 B．營養(yǎng)需要不同 C．生理功能不同 D．細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同 E．致病性不同

13．細(xì)菌學(xué)形態(tài)學(xué)檢查中最常用染色方法是：A．抗酸性染色法 B．特殊染色法 C．暗視野墨汁染色法 D．美蘭單染色法 E．革蘭染色法

14．細(xì)菌的繁殖形式是：D A．接合 B．裂殖 C．胞子 D．二分裂 E．復(fù)制

E 15．在細(xì)菌生長曲線中菌數(shù)增加最快的是：B A．遲緩期 B．對數(shù)期 C．穩(wěn)定期 D．衰亡期 E．全部生長過程

16．有關(guān)熱原質(zhì)敘述錯誤的是：D A．是多數(shù)G-菌少數(shù)G+菌合成代謝產(chǎn)物 B．是G-菌細(xì)胞壁中脂多糖 C．注入人、動物體可引起發(fā)熱 D．可被121℃20分鐘處理破壞 E．可經(jīng)吸負(fù)劑、石棉濾板除掉

17．下列那種不是細(xì)菌的合成代謝產(chǎn)物：E A．色素 B．細(xì)菌素 C．抗生素 D．維生素 E．抗毒素

18．關(guān)于噬菌體生物學(xué)特性敘述錯誤的是：B A．是細(xì)菌的病毒 B．不具有抗原性

C．主要成分是核酸和蛋白質(zhì) D．形態(tài)多呈蝌蚪狀 E．較細(xì)菌的抵抗力強 19．不產(chǎn)毒的白喉棒狀桿菌，攜帶了β—棒狀桿菌噬菌體后便可產(chǎn)生這種現(xiàn)象稱為：D A．轉(zhuǎn)導(dǎo) B．轉(zhuǎn)化 C．接合 D．溶原性轉(zhuǎn)換 E．原生質(zhì)體融合

20．病原菌引起疾病的最佳組合是： A A．毒力+侵入門戶+細(xì)菌數(shù)量 B．毒素+侵襲力+侵入門戶 C．侵襲力+細(xì)菌數(shù)量 D．細(xì)菌數(shù)量+侵襲酶類

E．侵入門戶+毒素+細(xì)菌表面結(jié)構(gòu)

21．細(xì)菌內(nèi)毒素的特點下列哪項是錯誤的： C A．主要由G—菌產(chǎn)生 B．化學(xué)成分主要是脂多糖 C．對人體組織有選擇性毒性作用 D．可單獨激活補體旁路途徑 E．可使鱟血液變形細(xì)胞溶解物凝固

三、問答題

1、中和劑對消毒劑的消毒效果起著至關(guān)重要的作用，試簡述具體實驗分組。

2、簡述細(xì)菌分子檢測的技術(shù)，至少說出三種，并解釋其原理與步驟。

3、生物安全實驗室的具體分類與分別檢測的微生物類型。4.簡述菌種保藏方法及原則。

第三篇：腦脊液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗操作規(guī)程

單位及實驗室名稱 項 目

漢源縣人民醫(yī)院檢驗科 腦脊液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗操作 編號：LAB/SOP/HY/微-007 日期：2010年5月3日

版本：第一版，第0次修訂

第1頁，共3頁

一、【標(biāo)本采集】

腦脊液的采集由臨床醫(yī)師以無菌操作腰穿采取腦脊液3-5ml，置于無菌試管內(nèi)立即送檢。如做厭氧菌培養(yǎng)，則需將注射器針頭封口，立即送檢。

二、【檢驗方法】

1、一般細(xì)菌的培養(yǎng)

（1）一般細(xì)菌培養(yǎng)主要適用于腦脊液內(nèi)的葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌和大腸桿菌等的分離培養(yǎng)。

（2）用無菌接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心的沉渣，非別接種于血平板和普通肉湯培養(yǎng)基。經(jīng)35℃培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。若有細(xì)菌生長，挑取可疑菌落，并涂片染色鏡檢。根據(jù)菌落特征、細(xì)菌形態(tài)、染色特點得出初步印象，再進一步鑒定，然后做出報告。若血平板無細(xì)菌生長，肉湯有細(xì)菌生長，則移種于血平板分離培養(yǎng)，按上述方法鑒定。如血平板、肉湯均無細(xì)菌生長，再延長培養(yǎng)數(shù)天，仍無細(xì)菌生長時，即可報告：“經(jīng)培養(yǎng)×天無細(xì)菌生長。” 2.腦膜炎奈瑟菌的培養(yǎng)

以無菌方法取腦脊液，經(jīng)3000r/min，離心30min，取沉淀物立即接種于事先預(yù)溫的巧克力或血平板上，置于5%-10%CO2環(huán)境中，經(jīng)35℃ 培養(yǎng)18-24小時后，觀察結(jié)果。若發(fā)現(xiàn)平板上有光滑、濕潤、透明、邊緣整齊、粘性的中等大小的菌落，經(jīng)革蘭染色為陰性雙球菌者，可做出初步報告：“有腦膜炎奈瑟菌生長”。經(jīng)純培養(yǎng)后做糖發(fā)酵、氧化酶試驗、自凝試驗、血清玻片凝集試驗、乳膠凝集以做出最后的鑒定。3.新型隱球菌的培養(yǎng)

以無菌方法采取腦脊液標(biāo)本，經(jīng)離心沉淀后，取其沉淀物接種于沙保弱氏斜面或血平板培養(yǎng)基上，分別置于37℃及25℃培養(yǎng)。數(shù)日后可見有白色或淡褐色酵母樣的菌落（如培養(yǎng)較久、菌落則變?yōu)闈駶櫋⒄骋籂睿绻藭r菌落用墨汁染色法染色鏡檢，可見有出牙的細(xì)胞及短芽管（培養(yǎng)時間過長則芽管可消失，莢膜形成）。桿菌菌落及染色鏡檢特征，可做出初步報告：“真菌培養(yǎng)有新型隱球菌生長。”必要時再做生化反應(yīng)及動物試驗等進一步鑒定。

三、【檢驗程序】 腦脊液

↓ ↓ ↓ 離心涂片染色 分離培養(yǎng) 結(jié)核桿菌檢查 鏡檢 ———————— ——————

↓ ↓ ↓ ↓

厭氧環(huán)境培養(yǎng) 普通及

5%-10%CO2培養(yǎng)

羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng) 取沉淀物

涂片抗酸染色

↓ ↓35℃18-24h ↓35℃3-4W

————————————————

↓

菌落觀察

↓ ↓ ↓ 生化反應(yīng) → 血清學(xué)檢查 ← 自動化鑒定

↓

藥敏試驗

↓

報告結(jié)果

作者：肖德慧

時間：2010-5-3 3

第四篇：實驗一 糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗

課程名稱：微生物學(xué)檢驗技術(shù) 授課專業(yè)：醫(yī)學(xué)檢驗 學(xué)時：4學(xué)時

實驗一

糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗

一、實驗?zāi)康?/p>

⒈熟悉糞便標(biāo)本的采集方法與注意事項。⒉掌握糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)鑒定方法。

二、試驗器材

糞便

培養(yǎng)基

接種環(huán)

酒精燈 顯微鏡

抗血清等

三、實驗內(nèi)容

㈠標(biāo)本的采集：

多見于急性腹瀉及用藥前采用自然排便法采集，也可用直腸拭子法采集。⒈自然排便法：取新鮮的糞便2-3克放無菌容器內(nèi)立即送檢，挑取膿血粘液便，液體糞便取絮狀物。

⒉直腸拭子法：排便困難患者或幼兒，將拭子前端用無菌生理鹽水或甘油濕潤，然后插入肛門約4-5厘米（幼兒2-3厘米），輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，取其粘液放于無菌試管中送檢。

⒊注意事項： ⑴在用藥前采集

⑵注意無菌操作，防止雜菌污染，用無菌的廣口瓶或潔凈的容器裝 ⑶及時送檢和接種

⑷標(biāo)本用完后及時進行消毒處理，防止實驗室污染。㈡檢驗程序

糞便或肛拭子

↓

分離培養(yǎng)

SS MAC

↓35℃

24小時

觀察細(xì)菌生長情況

Gs染色鏡檢

純培養(yǎng)（KIA）藥敏試驗

↓35℃24小時

需氧培養(yǎng)

厭氧培養(yǎng)

KIA.MIU 初步生化反應(yīng)查編碼

氧化酶

↓

四、實驗安排

制作培養(yǎng)基

第一臺SS平板16個，第二臺MAC

16個，第三臺雙糖鐵16支，五、實驗準(zhǔn)備

無菌中號試管 32無菌小號試管 16無菌中號平板 32SS 32*20MAC

KIA

枸櫞酸鹽

蛋白胨水 16葡胨水

尿素培養(yǎng)基 16半固體 1620%葡萄糖

0.4%酚紅 150%尿素 1血清學(xué)鑒定

↓ 報告結(jié)果

葡萄糖蛋白胨水 32支

尿素16支

蛋白胨水16支

支／班 支*5／班 ／班 毫升／班 32*20毫升／班 16支*3毫升／班 16支*3毫升／班 支*2毫升／班 16支*2*2毫升／班 支*2毫升／班 支*2毫升／班 1瓶/教室 瓶/教室 瓶/教室

枸櫞酸鹽16支半固體16支

無菌5ml吸管 2筒 無菌1ml吸管 2筒

第五篇：病毒學(xué)檢驗復(fù)習(xí)題

《病毒學(xué)檢驗》復(fù)習(xí)題

第一章 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

1.什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)、傳代細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞系、細(xì)胞株？

2.體外培養(yǎng)細(xì)胞有何特性？貼壁細(xì)胞有何特性？

3.體外培養(yǎng)細(xì)胞一代周期有幾個階段，各有何特點？

4.消化液有哪些？胰酶有何作用特點？

5.以雞胚為例，如何制備原代細(xì)胞培養(yǎng)？注意事項有哪些？

6.如何控制細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)菌、真菌、支原體污染？

7.怎樣保存細(xì)胞？

第二章 雞胚接種技術(shù)

1.雞胚有哪些結(jié)構(gòu)？分別適合何種病毒的接種培養(yǎng)？

2.活胚的檢查有幾個方面？

第三章 動物實驗技術(shù)

1.實驗動物類型有哪些？

2.常用實驗動物有哪些？有何用途？

3.小鼠和大鼠的常見接種途徑有哪些？

4.如何給實驗動物編號？

5.使用實驗動物有何原則？

第四章 病毒滴度測定

1.病毒滴度測定有哪些方法？其原理分別是什么？

2.簡答空斑形成單位法的原理。

3.簡答血凝和血凝抑制試驗的原理、用途和注意事項。

4.50%終點法的原理和注意事項。

5.活細(xì)胞染料有哪些？

6.何為重復(fù)感染數(shù)？CCID50、PFU？CCID50和PFU如何換算？

第5章病毒的純化與保存

1.病毒純化有何原則？

2.常見病毒純化的方法有哪些？

3.病毒保存的方法有哪些？各有何特點？

第六章 病毒血清學(xué)實驗方法

1.簡答中和試驗原理和用途。中和試驗中標(biāo)準(zhǔn)血清的抗體濃度是多少？

2.補體結(jié)合試驗原理與結(jié)果判定？

3.簡答血凝試驗與血凝抑制試驗的原理、結(jié)果判斷和應(yīng)用。

4.4個血凝單位的含意是什么？用途是什么？

5.補體結(jié)合試驗中使用的溶血素是多少個血凝單位？

第八章核酸雜交技術(shù)

1.何為探針？

2.核酸雜交的方法有哪些？

第九章聚合酶鏈反應(yīng)

1.何為PCR？

2.簡答PCR的原理。

3.PCR反應(yīng)體系包括哪些成分？

第十三章電子顯微鏡技術(shù)

1.電子顯微鏡技術(shù)有哪些方法？

第十四章 病毒分離培養(yǎng)

1.如何采集病毒檢驗標(biāo)本？有哪些注意事項？

2.如何做病毒的鑒定？

第十五章 病毒感染的早期診斷技術(shù)

病毒早期感染的診斷項目有哪些？

第十七章 皰疹病毒及其檢驗

1.皰疹病毒生物學(xué)特性怎樣？

2.單純皰疹病毒臨床表現(xiàn)有哪些？一般潛伏于哪些部位？

3.EBV所致疾病有哪些？如何做培養(yǎng)？

4.水痘-帶狀皰疹病毒有何感染特點？怎樣傳播？

第十八章 乳頭瘤病毒及其檢驗

1.乳頭瘤病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)有何特點？

2.怎樣進行HPV的實驗室檢驗？

3.宮頸癌普查常用的方法是什么？