第一篇：實(shí)驗(yàn)室生活小結(jié)

平時(shí)在實(shí)驗(yàn)室最常聽到的一句話就是“今天某某試驗(yàn)沒做好是為什么？今天某某試驗(yàn)沒出結(jié)果是什么原因？今天某某試驗(yàn)為什么會是這樣的呢？” 等等。然后仔細(xì)一查找原因，往往是由于操作上面的不認(rèn)真，或是一些小小的細(xì)節(jié)沒有注意到。以下是集各路朋友的一些經(jīng)驗(yàn)，與大家分享：

1跑page膠的時(shí)候，小電壓跑會避免高電壓產(chǎn)生的熱量爾導(dǎo)致的膠層變形。低電壓泳道會比大電壓泳道跑的直一些，且分離效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分離。

2.提取質(zhì)粒的時(shí)候，最后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵，基本上是其后續(xù)的酶切反應(yīng)的決定性因素。所以這一步盡量揮發(fā)長一點(diǎn)時(shí)間，最好是空調(diào)吹熱風(fēng)，或是37度溫箱放長一點(diǎn)的時(shí)間，我試過室溫過夜，酶切很好。3.做WESTERN BLOT 的時(shí)候，大家往往會摸索一抗、二抗的濃度，封閉時(shí)間，曝光時(shí)間等等，而每次變換其中的一個(gè)條件就需要從新跑膠、轉(zhuǎn)膜，甚至重新提蛋白，這樣會浪費(fèi)大量的時(shí)間。其實(shí)完全沒有必要這樣。一次轉(zhuǎn)膜后，將PVDF膜晾干，裁減成小塊，保存起來，用的時(shí)候取出一塊，沒有任何影響。這對于摸索條件的戰(zhàn)友來說，節(jié)約了大量的時(shí)間。4.有關(guān)緩沖液和培養(yǎng)基配置

1）將緩沖液配方中的成分分別以10－100倍配成母液儲存，需要的時(shí)候只需將相應(yīng)的母液混合，補(bǔ)加水稀釋即可

2）配培養(yǎng)基時(shí)通常會忘記各成分的量，如配LB時(shí)的三個(gè)成分不記得到底哪個(gè)是5g，哪個(gè)要10個(gè)，因此可以在常用的試劑瓶的標(biāo)簽上注明所需的量，如配LB時(shí)，在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很方便，不需要每次配之前臨時(shí)翻書 5.有關(guān)PCR主反應(yīng)液配置: 在做克隆鑒定的時(shí)候經(jīng)常需要在酶切鑒定前進(jìn)行PCR鑒定，每次配置PCR反應(yīng)液很繁瑣，可以將其配置類似kit的形式，按你需要的反應(yīng)體系列表，然后放大100倍配置100×主反應(yīng)液（100次反應(yīng)），其中含buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和Taq酶，然后可以10×分裝或一管儲存在－20度，在需要的時(shí)候拿出融開，然后按所需的PCR反應(yīng)個(gè)數(shù)吸取相應(yīng)的倍數(shù)，再補(bǔ)加相應(yīng)反應(yīng)倍數(shù)的Taq和引物，混勻后分裝，這樣做的好處如下：

1）可極大的節(jié)省寶貴的時(shí)間，可早點(diǎn)收工，看球 2）避免每次反應(yīng)加樣不均的可能 3）大大減少PCR假陽性的產(chǎn)生 6.有關(guān)酶切反應(yīng)液的配置: 在做酶切時(shí)，也可以象PCR一樣配置主反應(yīng)液，每次反應(yīng)前先列好反應(yīng)的體系，算好需要的反應(yīng)數(shù)，然后按所需反應(yīng)的體系按所需反應(yīng)數(shù)放大，加入buffer、酶、水，質(zhì)粒欄空缺，然后混合后按除質(zhì)粒DNA的體積分裝，然后再在每管中加入相應(yīng)體積的質(zhì)粒DNA酶切，這樣做的好處如下，特別是當(dāng)同時(shí)有10幾個(gè)陽性克隆需要鑒定時(shí)尤為明顯： 1）各反應(yīng)成分均一

2）可大大減少限制型內(nèi)切酶的使用 3）節(jié)省時(shí)間

7.有關(guān)SDS－PAGE：

1）可將SDS－PAGE的積層膠，分離膠預(yù)先配好大體積如100ml儲存在4度冰箱（注：10％AP，TEMED不加，切記！！），每次配置時(shí)只需吸取相應(yīng)體積的預(yù)制膠加入AP，TEMED即可，沒必要每次制膠時(shí)候翻分子克隆，特別方便，而且，這樣的預(yù)制膠可儲存半年以上，不失為偷懶的絕佳方法；更關(guān)鍵的是可大大減少與丙稀酰胺的接觸，因此大大減少中毒的機(jī)會。

2）電泳時(shí)雖然小電泳分離效果要好一些，但2小時(shí)以上的等待的時(shí)間實(shí)在是痛苦，因此可以提高電泳至150V，但需要將整個(gè)電泳槽放在放滿冰水的臉盆里散熱，這樣跑出來的膠分離效果絲毫不比低電壓來的差，關(guān)鍵是時(shí)間大大節(jié)省，不需1h即可看結(jié)果了

8.實(shí)驗(yàn)中小竅門我想能夠分成兩類：一類是“非常規(guī)”操作；一類是常規(guī)操作過程中一些省時(shí)省事手段。前一類，我舉個(gè)例子：有時(shí)候第一天涂的轉(zhuǎn)化平板、次日早晨轉(zhuǎn)化子可能長成的菌落比較大（1~2毫米以上，BL21就長得快），下一步轉(zhuǎn)化子做質(zhì)粒鑒定。這個(gè)情況下可以直接挑取一塊菌苔（勿帶出培養(yǎng)基），50微升酚/氯仿懸浮菌體，放置兩分鐘，加40微升TE抽提，上層TE吸出后再氯仿抽提一次，吸取上層TE即是質(zhì)粒提取液。提取的質(zhì)粒可以直接用于電泳和酶切。這樣操作，可以省去轉(zhuǎn)接液體試管的培養(yǎng)步驟，至少節(jié)省6~8小時(shí)的時(shí)間。但是，要在各步驟都控制得很好的情況下才能保證提取和酶切的效果，不同的實(shí)驗(yàn)室或者操作者未必能夠很方便地重復(fù)----其實(shí)，其它的一些“小竅門”也是如此。

后一類的小竅門則在實(shí)驗(yàn)室中無處不在。如：平行作不同樣本的PCR,模板DNA加量一樣，配置PCR體系可以一起配制后分裝----這點(diǎn)做過試驗(yàn)的都知道，但是配制的時(shí)候配制量可以比預(yù)期分裝量稍多一點(diǎn)（如用100微升則配110微升），這樣可以避免有時(shí)候分裝不夠的尷尬，因?yàn)椴煌貏e是大小不同的槍，會有誤差。再比如：樓上有站友說的sds-page膠預(yù)配（APS和TEMED、或者后者先不加）的問題，實(shí)際上時(shí)間放置過長肯定影響效果，如果要在一天內(nèi)連續(xù)地跑兩次板，何嘗不可？又比如，配sds-page膠的時(shí)候，上層膠和下層膠可以只用一個(gè)大槍頭：先取膠，次取水，取6.8的tris后再取8.8的tris，省時(shí)省料。20021108站友開的這個(gè)帖子很好，在上上層樓的帖子說得也有道理。但我想，“竅門”和“偷懶”不應(yīng)該是因果關(guān)系。其實(shí)，不管是那一類的小竅門，都是在充分地理解實(shí)驗(yàn)各步驟的原理、經(jīng)過多次試驗(yàn)積累、再加上一點(diǎn)點(diǎn)思索然后嘗試的結(jié)果。知其然知其所以然和勤于思考敢于探索，是根本。否則，別人的小竅門對你也未必能夠有用。才進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的新手，務(wù)必要先練好規(guī)范扎實(shí)的操作，然后才能弄“竅門”。本末倒置，貽害無窮。

9.我一直是把SDS－PAGE的積層膠，分離膠預(yù)先配成mixture，APS制膠時(shí)加入，半年內(nèi)使用，絕對沒有問題，我保證。

10.做SDS-PAGE的時(shí)候，除了蛋白量上樣一致，最好體積也一致，這樣跑出來的膠各個(gè)泳道之間的band能做到一樣寬，方便后面的比較，特別是WB。做法就是拿1X的上樣緩沖補(bǔ)全要加的樣做到體積一致，否則跑出來會有的寬有的窄，特別是上樣體積相差較大的。

11.在把蛋白膠做成干膠時(shí)，很多時(shí)候會因?yàn)橛袣馀菔鼓z裂掉，我的經(jīng)驗(yàn)是在做膠時(shí)加上層膜前在膠上多加些水就不容易進(jìn)氣泡了，還有就是高溫烘膠，我喜歡放到60度烘箱里烘，這樣水分蒸發(fā)速度快，即使有一些小的氣泡也不會有影響，呵呵，這是經(jīng)驗(yàn)之談，我從來都沒失手過，大家可以試試

12.做大腸表達(dá)時(shí)確定蛋白是否表達(dá)一般要煮樣做誘前誘后檢測,但很多時(shí)候煮出來的很黏影響跑膠效果.我發(fā)現(xiàn)如果現(xiàn)用8M Urea重懸細(xì)菌再煮效果會有極大改善.注:不能用Gu-HCl代替 13.我也推薦幾個(gè)偷懶的方法 做SDS-PAGE跑膠通常都是現(xiàn)配現(xiàn)用,但配膠要>1h,所以如果想第二天睡個(gè)懶覺而又不耽誤跑膠可以于前一天晚上做好濃縮膠和分離膠,待凝聚后不要拔下梳子,把含膠玻璃板從制膠槽取下,用保鮮膜包上,注意玻璃板上下兩邊緣會有氣體,所以需要加一點(diǎn)電泳緩沖液以避免膠內(nèi)水分蒸發(fā).然后放4度過夜.第二天直接拔下梳子行后續(xù).國外好多公司出售腳既是如此,可以保存上星期.2 配置分離膠或者非變性膠時(shí)因膠凝時(shí)收縮可導(dǎo)致加樣孔變淺.可以將加剩的膠放入4度以降低凝聚速度,而將凝膠放入37度促聚,并隨時(shí)用4度加剩的膠補(bǔ)充下降的膠面.另外將膠橫放與水平面成~10度角也可以減少收縮的影響.3 推薦一個(gè)節(jié)約抗體/時(shí)間的做法: 同時(shí)跑2塊膠,同時(shí)轉(zhuǎn)膜,然后兩塊膜背靠背放入同一封口膜同時(shí)封閉,同時(shí)一抗二抗(最好是用轉(zhuǎn)輪,這樣效果好.如果是搖床,隔一段時(shí)間幫它們翻個(gè)身以保證兩張膜的正面都有機(jī)會與液體充分接觸.一起洗膜(可以稍微加強(qiáng)洗膜也可以不做.我最多一張盤子里放4張膜而沒有影響洗膜).可分別或同時(shí)壓片.這樣就可以節(jié)約一半抗體和接近一半時(shí)間而不會影響結(jié)果.或者另外一個(gè)就是孵育后的抗體不要扔,好的抗體可以反復(fù)做好幾張膜呢.但每次都會減弱,效果不如上面一種方法.14.做western blotting 轉(zhuǎn)膜時(shí)，膠放在轉(zhuǎn)膜緩沖液中一段時(shí)間，待膠在含有甲醇的緩沖夜中縮小的差不多后裝好轉(zhuǎn)膜裝置，我的經(jīng)驗(yàn)是把膜印在膠上直接在膜上畫出預(yù)染maker條帶，方便的很。因?yàn)楹芏鄷r(shí)候跑電泳時(shí)膠上的預(yù)染maker很清楚，等轉(zhuǎn)膜后就不是分辨的很清楚了。不過要注意畫好預(yù)染maker后就不要使膠和膜發(fā)生對位移動了，以防m(xù)aker失去參照價(jià)值。

15.超濾最合適用于蛋白的濃縮，更換緩沖液和除鹽，對于按照分子量進(jìn)行初分離的效果不是很好，理論和現(xiàn)實(shí)是有很大差別的^_^ 16.關(guān)于Western Blot 1）器具的清潔非常重要，開始做前，為了安全，尤其是裝膠的厚薄玻璃板，可以先用中性洗滌劑和自來水反復(fù)沖洗，確保無洗滌殘液后用蒸餾水沖洗2－3遍，然后用去離子水沖洗一遍。最后用95％酒精再擦一遍后晾干備用。

2）配膠最好現(xiàn)用現(xiàn)配，先配下層膠（分離膠），后配上層膠（濃縮膠或積層膠），而且在臨灌膠前加APS并迅速混勻，即用移液槍抽吸與注入1－2次即可。

17跑蛋白page的時(shí)候，一開始用加樣針，太麻煩，發(fā)現(xiàn)用20ul槍+普通小白槍頭點(diǎn)，非常省事。另外，點(diǎn)樣時(shí)有可能看不清孔在哪，看遠(yuǎn)離你的那面膠，孔有反光的。點(diǎn)樣也點(diǎn)你對面的那塊膠，省的總低頭，干咱這行的容易得頸椎呀，愛惜自己。

18.垂直電泳時(shí)，可在電泳糟中放入青霉素小瓶等，可自然使液面提高而不影響電泳，又很節(jié)約電泳緩沖液。

19.我們有時(shí)要沉淀東西時(shí)，由于沉淀量很少，離心完之后不知道到底有沒沉淀下來東西，由于量很少，不好觀察，所以離心時(shí)建議按特定的方向放置離心管，這樣你就可以在離心之前確定沉淀該沉淀到管子的大致部位，這樣離心后就可直接觀察那有沒有沉淀，避免滿管子找，另外看沉淀時(shí)可以對光看，這樣就是顆粒狀的細(xì)小沉淀也能看見的。

20.大家都知道PMSF有劇毒，以前都是知道濃度和要配的體積的基礎(chǔ)上,算出要稱多少毫克的PMSF,其實(shí)也可以先稱PMSF,稱多少算多少,再調(diào)整異丙醇的體積，到達(dá)你所要的濃度。這樣就避免了你長時(shí)間和它接觸。

21.跑好SDS-PAGE膠的一些體會。

1.清洗好玻璃板，不要偷懶，很多時(shí)候跑完電泳撬膠時(shí)會因?yàn)椴ＡО宀桓蓛裟z粘在板上把膠撬破。2.配膠時(shí)不要反復(fù)用槍混，稍微搖混就可以了，用槍混多次會導(dǎo)致膠凝不好影響電泳圖的分辨率。3.AP分裝成500微升一管保存放-20度，避免AP用太久失效。

4.倒膠時(shí)把玻璃板中的水用濾紙盡量吸干，因?yàn)槲⒘康乃嬖跁绊懪涞哪z濃度。5.盡量不用過夜放室溫或者四度的膠，也回影響膠 的分離效果。

6.電泳完撬膠時(shí)根本不需要用撬膠板，在一平皿里裝好水，把有膠一面的放在水中晃動幾次膠很容易就脫落下來，一點(diǎn)沒有問題，方便的很。

7.點(diǎn)樣時(shí)樣品別忘了離心這步，因?yàn)樯蠘雍泄腆w沉淀會影響電泳圖分辨效果。8.盡量在冰浴狀態(tài)下跑。

22.做 ２－ＤＥ 做的比較多，總結(jié)了幾個(gè)小竅門：

１．一向電泳時(shí)，鹽離子容易聚在 膠槽的兩側(cè)．剪一小段ＩＰＧ膠條放在兩側(cè)，構(gòu)成鹽橋，電壓就容易上去了．避免一向電泳不好影響最后實(shí)驗(yàn)

結(jié)果．

２． SDS－PAGE時(shí),在灌膠之前,一般大家都會用凡士林封底, 在SDS－PAGE 電泳之前又必須把凡士林搽干凈,很是麻煩,我的經(jīng)驗(yàn)是:不用凡士林,取少量未加Ap的分離膠,按比例加2倍量的Ap,然后灌入板間,等上幾分鐘,待膠凝固后就可以接著灌分離膠了.方面,效果好!23.蛋白質(zhì)純化時(shí)，蛋白質(zhì)降解可能與超聲破菌保持冰浴有關(guān)，之前建議加pmsf，建議在上柱子洗脫的時(shí)候也加pmsf（蛋白降解抑制劑），一定要用之前再加。

24.做透析的時(shí)候，拿一個(gè)5ml的槍頭或者是其他類似的東西，剪短，穿過個(gè)塑料泡沫之類的面積比燒杯大東西，然后把透析帶一端扎緊，另一端開口綁緊在5ml槍頭下端，扎緊得那端也可以彎過來綁成u字型。這樣就可以用1ml的槍穿過5ml的槍頭的孔，另一只手調(diào)整透析帶，來加樣取樣，省去了總綁透析帶的麻煩，對同一個(gè)蛋白大量多次透析非常方便 25.第一次發(fā)貼說一下自己的小經(jīng)驗(yàn)，希望版主能給我一分，每次看到好東西因?yàn)闆]分都沒法下，好羨慕有分的人啊。當(dāng)然也不能不勞而獲，說一下自己的實(shí)驗(yàn)技巧給大家分享。

1.配SDS-PAGE膠時(shí)，用槍頭混勻比較麻煩，而且費(fèi)時(shí)費(fèi)力，效果也不好。可以剪一小段夾文件的那種曲針做轉(zhuǎn)子放到配膠的小燒杯里，在磁力攪拌器上邊攪邊加入各溶液，這樣加完也就混勻了，直接灌膠即可。2.上面的站友也說過，上樣用黃槍頭就行，我也一直在用，根本不用注射器，方便的很，建議大家也試試。3.電泳后考馬斯亮藍(lán)染色一般要1h到2h，脫色也要2h左右，麻煩的很。現(xiàn)在給大家說一個(gè)簡單的方法，是我從一個(gè)師姐那里學(xué)到的。

加入染色液后，先放入微波爐里加熱5-10秒，使染色液微熱即可（千萬不要加熱太久，否則冰醋酸就揮發(fā)了）。然后放水平搖床上搖20分鐘，最多半小時(shí)就染好了。

脫色也很簡單，不用脫色液，直接用去離子水，放微波爐里煮沸5分鐘左右，然后將水倒掉，再換上新的去離子水煮，這樣反復(fù)幾次，就可以了。效果可能比正常的脫色稍差一點(diǎn)點(diǎn)，不如那樣清楚，只要電泳時(shí)比平時(shí)多上1/5的樣品就可以了，關(guān)鍵是這樣省時(shí)省材料（用不著含甲醇和冰醋酸的脫色液）。方便快捷！放心，反復(fù)煮膠不會把膠煮壞的。

26.我也說說我的小經(jīng)驗(yàn)。可能大家都知道，請別笑話我。

1、配膠時(shí)一定要掌握好時(shí)間，不要因?yàn)檫^度趕時(shí)間，而造成以后的條帶粗大，壓不成條帶，且消耗很多試劑和時(shí)間。

2、加樣時(shí)，沖洗加樣器可用雙蒸水，用電泳液會使加樣器中有很多的泡沫。或許是因?yàn)镾DS的原因吧？

3、對于大分子蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)膜過夜更好。濾紙的張數(shù)可以適當(dāng)減少。

4、在跑樣時(shí)同時(shí)加入MARKER有助于正確識別所需的蛋白位置，減少NC膜的消耗。

5、一抗、二抗的濃度不要太高。

6、做ECL顯影時(shí)，根據(jù)熒光的亮度調(diào)整時(shí)間。泡完顯影液，膠片應(yīng)用水洗一下，以減少定影液變黃。

7、和有經(jīng)驗(yàn)的同學(xué)交流，也是非常重要的。知識的交流絕對有助于試驗(yàn)的成功。這是我目前的一點(diǎn)拙見。

27.推薦一個(gè)省質(zhì)粒試劑盒硅膠柱與溶液的方法：

所有試劑使用手提質(zhì)粒自己配置的溶液

一、溶液

二、溶液三（代替試劑盒的solution1、2、3），然后一比一的與飽和碘化鉀或碘化鈉（代替結(jié)合緩沖液）混合，就可以讓質(zhì)粒在硅膠上結(jié)合，而試劑盒的硅膠柱可以重復(fù)使用，沒有試劑盒溶液量的限制，只要是一樣的質(zhì)粒我想提幾管就提多少。

順便說一句硅膠柱也可以用自己買的硅膠粉末代替，離心后倒掉硅膠柱上面的上清就可以，用起來不象柱子方便。效果比手提的要好要快。

28.做WB時(shí),樣品比較多, 又怕放時(shí)間長了對蛋白樣品不好,而且確定以后肯定要做某個(gè)抗體,只是一時(shí)沒有決定.那么你可以選擇先做SDS-PAGE,并轉(zhuǎn)膜.然后把PVDF膜涼干, 放四度保存.以后拿出來封閉后,加抗體就行了.蛋白在膜上,且已經(jīng)分離, 比保存在BUFFER里面的蛋白肯定更可靠。呵呵

29.今天作his純化的時(shí)候，又琢磨了一個(gè)竅門，與大家分享。我得樣品比較多，幾百ml，而柱子不夠大，只有10幾ml，跑來跑去的上樣，還總得記著，太麻煩了。于是，我就刷干凈了一個(gè)燒杯，裝了我的樣品，找了一個(gè)細(xì)膠皮管，當(dāng)連通器，就像魚缸換水一樣，用5ml槍在一頭一吸，液體流出來，放到純化柱里，調(diào)好燒杯的位置，兩個(gè)液面一樣平了，呵呵，上了好幾個(gè)小時(shí)了，沒有問題，現(xiàn)在調(diào)低速度，過夜上樣：）30.能導(dǎo)致PAGE膠不凝的原因主要有三個(gè)：

1、配膠中用到的主要試劑的配置。

主要就是30％的丙稀酰胺的配置。粉末狀的丙稀酰胺和甲叉丙稀酰胺使用不應(yīng)該超過一年，因?yàn)楸□０窌彼猓@樣以來丙烯酸的含量就會加大，從而導(dǎo)致page膠不凝。

2、溫度。

溫度高時(shí)凝固快，但是亦不宜過高，因?yàn)闇囟茸兓瘯绊懡贿B物的孔徑大小。所以溫度在25度最為合適。

3、氧氣。

氧氣是凝固的終止劑，所以不能讓膠中出現(xiàn)氣泡。雖然都是些看起來聽低級的錯(cuò)誤，但是不注意還是會犯。31.我做2維蛋白電泳，也有些心得：

1、向電泳玻璃板內(nèi)加入膠條時(shí)，先在縫隙中加入配好的溴芬蘭緩沖液，要加滿，再將膠條貼后面玻璃板壁用薄塑料片將膠條緩緩?fù)葡轮聊z上緣，這樣可以很好的避免膠條下形成空氣泡。

2、能做出好的圖譜已經(jīng)很不容易了，如果在掃圖時(shí)撕破實(shí)在可惜，所以掃圖要小心，將凝膠轉(zhuǎn)移到掃描儀時(shí)可以用塑料隔片在下面托著，同時(shí)保持有些水，這樣就安全多了。32.湊個(gè)熱鬧說兩句吧

1、sds-page膠如果配好裝好倒入內(nèi)槽液以后，發(fā)現(xiàn)內(nèi)槽液稍有滲漏，可以把外槽液多加一些，加滿，加到與內(nèi)槽液相齊，這樣就可以繼續(xù)正常跑膠，不用浪費(fèi)已經(jīng)加進(jìn)去的內(nèi)槽液

2、至于染色脫色的問題，我們這里一直是染色：加熱半分鐘，搖20分鐘；如果染液不是新配的，就加熱半分鐘搖十分鐘，涼透了再重復(fù)一次即可 脫色也一直是用去離子水煮兩三次即可

3、不知道大家都是怎么做酶切的，我的體會是，酶切質(zhì)粒時(shí)，兩個(gè)酶分別單酶切比直接雙酶切效果要好很多。我有一次雙酶切兩次都沒連出來，后來分步單酶切，連接效率幾乎100%。

可以第一個(gè)酶切完后直接把體系熱失活，（根據(jù)酶說明書上一般是65度20min）然后直接向里面補(bǔ)第二個(gè)酶

或者第一個(gè)切完后用氯仿抽提，把蛋白提出

或者中間做一次回收，這個(gè)就要考慮回收效率和損失的問題了，但是這樣除蛋白最徹底 前兩個(gè)方法我們這都是有人做過的，已經(jīng)都很好用了

33.俺也來說說關(guān)于Bradford法蛋白濃度定量和DTNB法巰基濃度定量的一點(diǎn)體會：

我是做蛋白修飾巰基后，通過這兩種方法的定量來間接反應(yīng)修飾的程度。一路摸索過來，也有半年有余；最大的體會就是不要急于求成，直接實(shí)驗(yàn)，首先檢測修飾體系是否對方法有影響，修飾基團(tuán)是否會在595nm和412nm下有特定的吸收，修飾后修飾試劑本身是否會有變化，對蛋白整體結(jié)構(gòu)造成影響，其次再談具體修飾比例和程度。對于巰基濃度測定方法，有四種（Anal Biochem.1998 Dec 1;265(1):8-14），而DTNB本身雖然靈敏度不高，但是重復(fù)性和抗干擾是最佳的了。

34.考馬斯亮藍(lán)染色后的脫色，如在脫色液中加數(shù)張捏成條狀的Kimwipes紙（國外實(shí)驗(yàn)室常用，相當(dāng)我們的擦鏡紙，全棉纖維制造），由于染料吸附到紙纖維上，脫色加速。待紙著色較深時(shí)，更換新紙條，不用換液。我想脫脂棉或紗布也是一樣的。但濾紙等可能不行，會溶掉。

半貼壁細(xì)胞如SP/0或雜交瘤細(xì)胞傳代時(shí)，不用吹打或刮落。先將上清吸出，適當(dāng)拍打培養(yǎng)瓶（當(dāng)然是塑料瓶，玻璃瓶拍碎了別找我），即可見貼壁細(xì)胞脫落，加培養(yǎng)基混懸即可。注意，過力拍打培養(yǎng)瓶會裂，特別是瓶頸。

35.一向電泳時(shí)，鹽離子容易聚在 膠槽的兩側(cè)．剪一小段ＩＰＧ膠條放在兩側(cè)，構(gòu)成鹽橋，電壓就容易上去了．避免一向電泳不好影響最后實(shí)驗(yàn)結(jié)果． 36.我也推薦幾條：

1、關(guān)于20021108戰(zhàn)友的說法，我覺得我們制備好了一批感受態(tài)，最好馬上轉(zhuǎn)化一種已知質(zhì)粒，與此同時(shí)，取一點(diǎn)感受態(tài)接種到含抗性的固/液體培養(yǎng)基培養(yǎng)來做對照。這樣第二天即可以知道這批感受態(tài)是否還有外源質(zhì)粒，又可以知道這批感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率的高低。如果合格，那以后就可以放心使用！因?yàn)槲乙苍?jīng)遇到其實(shí)是因?yàn)楦惺軕B(tài)不好而導(dǎo)致試驗(yàn)不成功，但是當(dāng)時(shí)不知道，結(jié)果費(fèi)時(shí)費(fèi)力。

2、做克隆挑斑時(shí)，我們可以在將沾有菌體的牙簽丟到試管前，在一塊相應(yīng)抗性的平板上點(diǎn)一下，標(biāo)注清楚，培養(yǎng)時(shí)間稍長一點(diǎn)，待長成較大菌落后收取。以后需要哪一個(gè)菌,就在平板上挑取。這樣既方便快捷，又可以保證菌的一致。

3、抽提質(zhì)粒時(shí)，加入Sloution II和III后要求輕柔混勻。我個(gè)人覺得不用這樣，只要不是非常劇烈，可以快速混勻。尤其可以運(yùn)用在一次抽提多管質(zhì)粒的時(shí)候，這樣可以快速，而且效果一點(diǎn)也不差。

4、抽提質(zhì)粒時(shí)，用無水乙醇沉淀的時(shí)間可以由實(shí)驗(yàn)操作者來決定，如果時(shí)間充裕可以30min，否則8-10min也可以。至于溫度，個(gè)人覺得-20度好于常溫。如果加入可醋酸鈉，會較容易形成鹽類雜質(zhì)，所以時(shí)間短一些更好！

今天想到這些，先寫到這里，以后想到了在上來與大家分享。希望我的小經(jīng)驗(yàn)對大家有所幫助！37.首先聲明：實(shí)驗(yàn)中的一些技巧要用在首先對基本的操作有深刻了解的基礎(chǔ)上，在力求省時(shí)、省力、節(jié)約成本等的同時(shí)，實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性是最重要的。

對大多數(shù)做蛋白的戰(zhàn)友們來說，培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該是不陌生的，我這里談一個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞的小技巧，大家知道，對于一定的空間（如某種尺寸的細(xì)胞培養(yǎng)瓶）來說，細(xì)胞數(shù)目太多或者太少都不利于其生長，太多了就要消化，太少了要換一個(gè)小點(diǎn)兒的培養(yǎng)瓶，我的做法是：如果細(xì)胞數(shù)目太少，可以不必去找小一點(diǎn)兒的培養(yǎng)瓶，可把原來的培養(yǎng)瓶由原來的平放改為豎著放，這樣底部的空間就小了，有利于細(xì)胞的生長，當(dāng)細(xì)胞數(shù)目增加到一定程度的時(shí)候還可以在平過來，避免了來回?fù)Q培養(yǎng)瓶而增加污染的機(jī)會（對沒有小培養(yǎng)瓶的更實(shí)用）。

個(gè)人體會，僅供參考。

38.說說關(guān)于SDS-PAGE的幾個(gè)小經(jīng)驗(yàn)

1、做好膠后，把所有的加樣孔都加上樣，這樣可以防止邊緣的樣品脫尾。

2、高電壓/高電流電泳時(shí)，可以把電泳槽放到4度冰箱中進(jìn)行電泳，省時(shí)省力，1hr搞定。

3、膠考染時(shí)間40min，放在凝膠搖床上（沒有膠床可以放到28度普通搖床上，但要控制好搖床速度）緩緩搖動，使染色均勻，同時(shí)可提高檢測的靈敏度，根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)可以達(dá)到銀染的級別，就是脫色時(shí)間比較長，一般需要脫色2－3d，夏天的時(shí)候要勤換脫色液，防止變臭哦

39.質(zhì)粒小提如果是用作鑒定或酶切，不必進(jìn)行酚仿抽提，將溶液1.2.3 離心后的清液移入一個(gè)新的1.5ml離心管中，再次離心3-5分鐘，小心取出上清液后，直接沉淀，不必?fù)?dān)心DNA切不開，我已經(jīng)這樣使用一年多，沒出過什么問題。當(dāng)然這樣的質(zhì)粒不很干凈，但是做鑒定足夠了。尤其是實(shí)驗(yàn)室女同胞們，可以減少酚仿的侵害，而且節(jié)省時(shí)間。

分子生物學(xué)當(dāng)中的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)及技巧[copy](2009-03-23 15:02:08)大家平時(shí)做實(shí)驗(yàn)，肯定都有很多小的技巧，在書上都看不到的，也沒有系統(tǒng)的整理，但是確實(shí)能夠起到很好的作用，不妨在這里與大家分享一下。

任何專業(yè)任何點(diǎn)滴的東西都行，也許就對別人有一點(diǎn)好處哦！舉個(gè)例子：

我在用酶標(biāo)板加樣的時(shí)候，蛋白樣品常常會產(chǎn)生很多氣泡，如果做熒光實(shí)驗(yàn)，由于靈敏度非常高，一點(diǎn)點(diǎn)微小的氣泡都會影響很大，常常又不可能加消泡劑，我就用衛(wèi)生紙，撕下來一下條，搓成小針，碰一碰氣泡就破了，很好使：）

1、酶切或者PCR體系混合好以后，大家都會用手指輕彈EP管的底部來混勻溶液，常常出現(xiàn)很多氣泡。這時(shí)候輕彈液面上方的管壁，消除氣泡就輕而易舉了。千萬別彈液面下方的，氣泡會越來越多。

2、CR不要一次做太多樣品 有時(shí)候機(jī)器不穩(wěn)定 影響結(jié)果

3、用衛(wèi)生紙是一個(gè)，我覺得最好的是用接種針燒熱了之后去戳一下，防止被衛(wèi)生紙污染哈 建議瞬間離心一下是最好的，不但消除氣泡，還有將管壁上的液體離下來，否則可能不夠分裝

4、衛(wèi)生紙主要成分是纖維素，一般并不會污染樣品，除非你做分析實(shí)驗(yàn)，之所以用衛(wèi)生紙是因?yàn)樗鼤瑴p少水的表面張力，很容易就讓氣泡破裂了

5、磁珠回收時(shí)，不要貪多，收集上層即可，太過影響DNA的純度和質(zhì)量，對鏈接、轉(zhuǎn)化有影像。

6、各種buffer都要完全融化后才能用，而且不管什么藥品，如果只剩下最后一點(diǎn)底子了，最好放棄，因?yàn)榭赡軙绊懩愕膶?shí)驗(yàn)

7、動手前，一定要思路清晰，盡量把要做的事情列出來

8、做前一定要在筆記上寫上1、2、3.....，在按照筆記一步一步做，否則容易出錯(cuò)。

9、要加的酶阿，dNTP，水啊之類的能分裝的話最好分裝好一點(diǎn)，萬一污染的話就全完了

10、實(shí)驗(yàn)前,列個(gè)表單,列明關(guān)鍵點(diǎn).避免出錯(cuò).這樣費(fèi)一點(diǎn)時(shí)間是值得的.不要太相信自己的記憶.孤風(fēng)逐日：任何試劑反復(fù)凍融對其效率都有很大地影響。所以買來的試劑第一次使用時(shí)要注意按每次實(shí)驗(yàn)用量分裝保存。提取的模板或純化的樣品也最好分裝保存，以備不測。

很多個(gè)人經(jīng)驗(yàn)在個(gè)板塊相關(guān)分析中都有一些提及，只要多加留意就可以學(xué)到很多高手的不傳經(jīng)驗(yàn)。

11、同時(shí)做很多管PCR時(shí)的加樣技巧 例如，需要做n管PCR：

1.如果用同一對引物擴(kuò)不同的模板，可以先按照事先確定的比例，按照n+2的量把水，反應(yīng)緩沖液，dNTP，鎂鹽，引物和Tag酶先加到一個(gè)大管里面，混勻后就是“預(yù)混合液”了，然后把“預(yù)混合液”分裝到做PCR用的小管里面，通常我會分裝n+1管，最后向前n管里面入模板，混勻，最后一管不加模板而是加入和模板等量的無菌水，作為對照，以檢查加樣過程中是否引入了污染，接下來就可以進(jìn)行PCR反應(yīng)。2.如果用不同的引物擴(kuò)同一模板（不做多重PCR），則將第1點(diǎn)的引物和模板次序調(diào)換即可。3.同理，如果用不同的引物分別擴(kuò)不同的模板，則將引物和模板留在最后分裝后再分別加入。

這樣做的優(yōu)點(diǎn)：可以大量減少取樣次數(shù)，減少了不同PCR管之間的誤差（這一點(diǎn)對于熒光定量PCR尤其重要）；節(jié)省時(shí)間。

缺點(diǎn)：如果在制備預(yù)混合液時(shí)的任何一步引入了污染則會導(dǎo)致這一批次的所有PCR反應(yīng)都被污染，所以我每次都做一個(gè)陰性對照（用無菌水替換模板），以檢測是否被污染。

12、如果遇到試驗(yàn)有很多步，只是自己看protocol做，沒有人帶而且是第一次，我建議確立好步驟，然后每做一步的時(shí)候只注重眼前這一步，認(rèn)真的做，不出錯(cuò)。這樣每一步都只是關(guān)心眼下，可以集中精力，并且每一步都保證無誤，最后結(jié)果應(yīng)該不會太壞，而且即使出了問題，可以排除操作的因素。

13、跑PAGE膠染色的技巧吧：

其實(shí)是我自己的親身體會，大家都知道如果嚴(yán)格按照protocol上的去做不但浪費(fèi)藥品，也浪費(fèi)時(shí)間，程序還繁瑣，當(dāng)然代價(jià)也高些。

1、如果你跑的是小板的（SSR之類的分析足夠），那么先找來4個(gè)1升左右的空塑料瓶，洗干凈（我用的是上海國藥的裝尿素瓶，帶蓋的），用來分別裝銀染要用的固定液、染色液（硝酸銀）、顯影液、純水，在每個(gè)上面分別寫上名字，以免弄錯(cuò)，每次回收這些溶液后，把蓋子擰緊，以阻止一些揮發(fā)或分解吧，延長使用“壽命”。

2、一般的書上都說顯影液只能用一次，其實(shí)完全不至，我一般都是至少用2次，根本一點(diǎn)問題都沒有。還有固定液和染色液也可以適當(dāng)多用幾次，只要能然出來就行。

3、有的時(shí)候?qū)嶒?yàn)室用超純水so多，也so浪費(fèi)，或是一時(shí)半會制不出來，而染色要用怎么辦呢，我無意中就用蒸餾水代替，什么問題都沒有，根本沒啥差別，甚至于后來我壓根都不用蒸餾水了，干脆改自來水，也沒啥問題，完全可行，不信大家可以試試，呵呵，雖然說是可能某些地方不是很合理，但對一般像做分子標(biāo)記之類的根本沒啥影響，替老板能省就省點(diǎn)吧，大家都不容易，哈哈!還有我忘了說了，以前經(jīng)常跑完膠后來不及染色就得回寢室了，怎么辦呢，不用熬夜，就把膠剝離下來泡在固定液里，第二天早上再來接著下面的步驟一點(diǎn)問題都沒有，就是可能膠尺寸會有些變化，但絕對不影響你的結(jié)果。

最后一個(gè)就是讀帶問題，我見過別人好多種方法，但我自己“發(fā)明”了一種實(shí)用、準(zhǔn)確的：

找一塊大點(diǎn)的普通玻璃板(我當(dāng)時(shí)用的是跑大垂直板膠的），帶上手套（保護(hù)好自己，雖然聚合后毒性小，但還是有的），快速把膠撈出來，放在玻璃板上，再迅速把玻璃翻個(gè)面，平放在觀片燈上，只要你速度快，膠是不會掉下來的，會緊緊貼在玻璃上的，最好玻璃板和管片燈的平面有點(diǎn)空隙，否則膠粘住觀片燈表面就會把燈面弄臟，膠也可能會掉，一切弄好后，你就可以直接那筆在玻璃的這個(gè)干凈面上一清二楚的讀帶，直接可以往上面寫帶型，然后為了以后檢查用，最好用數(shù)碼相機(jī)快速拍照保存，不但膠上的帶可以看清，你在玻璃上寫的帶型數(shù)字也是非常清楚的，當(dāng)然讀完的膠就可以立即扔掉，沒必要保存

14、做實(shí)驗(yàn)時(shí)，認(rèn)真做好記錄，寫好實(shí)驗(yàn)結(jié)果，過一段時(shí)間再去看看，溫故而知新

15、有些時(shí)候做完ＰＣＲ，由于條帶很淡，但你想回收．不妨將有目的條帶的膠切下來．放到－２０度凍一會，拿出吸它的液體作摸板，再擴(kuò)增效果很好！

16、做轉(zhuǎn)染，我養(yǎng)過四五種細(xì)胞，都做了轉(zhuǎn)染，但每種的轉(zhuǎn)染率都不一樣，本人當(dāng)時(shí)就吃了這個(gè)虧，提醒大家，誰做轉(zhuǎn)染事前先查一下要轉(zhuǎn)的細(xì)胞轉(zhuǎn)然率怎么樣。

還有就是我在用脂質(zhì)體2000做轉(zhuǎn)染時(shí)，一次發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染6小時(shí)后的液體打到其他細(xì)胞里仍可以轉(zhuǎn)進(jìn)去，所以為了提高轉(zhuǎn)染率，我以后在6小時(shí)的時(shí)候都沒有把轉(zhuǎn)染液體打出去，只是又加了含血清的培養(yǎng)基。但有一個(gè)問題就是，不打出去的話，細(xì)胞會死很多，這個(gè)也與養(yǎng)的細(xì)胞種類，狀態(tài)都有關(guān)。PCR預(yù)混:預(yù)混一般根據(jù)樣品的多少，一般我在預(yù)混的時(shí)候大概每個(gè)樣品管中預(yù)計(jì)損失0。5－0。6微升，這樣計(jì)算需要的總的預(yù)混液數(shù)量，比較合適。

18、做實(shí)驗(yàn)前 一定先寫出步驟和列出實(shí)驗(yàn)所需要的試劑和器材，下面看看哪些是要購買的，哪些是需要清洗的，哪些是要前處理的如過濾、高壓。

定試劑一定要打提前量，不好買的試劑一定要在3周左右前訂購，如在SIGMA訂貨。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一定要坐好標(biāo)記！什么時(shí)間，多少濃度，如PH值,是否過濾了，做完實(shí)驗(yàn)有寫離心或過濾的殘液，先不要丟棄，萬一實(shí)驗(yàn)失敗，還要重復(fù)的。實(shí)驗(yàn)中的每個(gè)環(huán)節(jié)都很重要 忽略任何一個(gè)都可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗

每個(gè)人在實(shí)驗(yàn)中都有自己的一些好的細(xì)小的習(xí)慣

例如tip頭吸完后馬上從移液器上取下來，以免忙亂的時(shí)候又以同一tip汲取另一種試劑 用完量桶或者燒杯后，及時(shí)清洗，并放入烘箱。不管大小實(shí)驗(yàn)，做完后都要認(rèn)真做記錄。

一個(gè)槍頭如果可以連續(xù)吸兩次的話，也不能吸，主要是第二次吸時(shí)不準(zhǔn)，同時(shí)也不能完全打出來。做完實(shí)驗(yàn)擦干桌子，一切東西歸位，有些東西可以回收的就回收，很多實(shí)驗(yàn)室的槍頭是回收的 實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真設(shè)計(jì)，作實(shí)驗(yàn)時(shí)不胡思亂想，嘰嘰喳喳，做完后在海闊天空，認(rèn)真分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)

做之前認(rèn)真設(shè)計(jì),做時(shí)就不要老是想著結(jié)果,平心靜氣,注意細(xì)節(jié)，認(rèn)真記錄，因?yàn)槭∈浅Ｊ拢灰剡^頭不知道該從哪里找原因。

每次的實(shí)驗(yàn)結(jié)束，要及時(shí)做好記錄，不要等。好記性不如爛筆頭，這雖然是俗語，但是不要放棄筆的重要性！

加入試劑之前,把它混勻一下,以免放置時(shí)間長了濃度不均

做完實(shí)驗(yàn)，清理實(shí)驗(yàn)臺，以便下次能夠更快、更好，更方便的繼續(xù)工作！藥品歸位，儀器歸位！做實(shí)驗(yàn)一定要有計(jì)劃,最好在有部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)出來時(shí),就著手寫文章,這個(gè)不是為了出文章,而是在寫文章的時(shí)候,可以清晰自己的思路,知道后面該先做什么,該重點(diǎn)做什么.不然有時(shí)候辛苦半死,數(shù)據(jù)太分散,不能說明問題.不輕易用別人的東西，用時(shí)先打招呼，記錄要詳細(xì)，配液體時(shí)要記錄試劑的批號等? 所有的東西都要即時(shí)標(biāo)記好，日期，藥品名稱，濃度，等

移液槍用完之后要?dú)w到最大計(jì)量的位置，防止久而久之彈簧失去彈性。

不用酶標(biāo)槍時(shí)不要一直拿在手里，不可以倒過來（特別是里面還有液體的時(shí)候）不要一直說話、聊天~~ 筆記要全~要多全有多全~ 還有一點(diǎn)很關(guān)鍵，筆記要放好，最近我的筆記掉了~哭死 最后，做完實(shí)驗(yàn)要洗手~ 離開實(shí)驗(yàn)室前或進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前注意水，電是否安全

試驗(yàn)之前看資料的時(shí)候，最好規(guī)類存放，看過后記下重點(diǎn)內(nèi)容，并將出處標(biāo)明，以免日后找不到 一定要記著關(guān)水浴箱，切記切記。

第二篇：實(shí)驗(yàn)室實(shí)習(xí)小結(jié)

實(shí)習(xí)小結(jié)（11.3-11.14）

這兩周我們的實(shí)習(xí)腳步來到了實(shí)驗(yàn)室，第一天，付青松經(jīng)理先簡單的給我們做了一些介紹和安全教育。然后我們被安排到靜態(tài)點(diǎn)爆實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行學(xué)習(xí)，來到點(diǎn)爆試驗(yàn)室先對我們介紹了一下試驗(yàn)設(shè)備，靜態(tài)點(diǎn)爆實(shí)驗(yàn)室的主要設(shè)備有：1）步入式環(huán)境箱，溫度范圍是-65 ℃~+180 ℃，此設(shè)備能保證溫度一致性，波動度未正負(fù)2K,升溫速率未3K/分鐘。2）離位點(diǎn)爆試驗(yàn)，3）安全帶預(yù)拉緊試驗(yàn)系統(tǒng)，4）影響分析系統(tǒng)。5）跌落塔實(shí)驗(yàn)，主要用于驗(yàn)證各種氣囊。6）發(fā)生器密閉容器試驗(yàn)，7）靜態(tài)點(diǎn)爆試驗(yàn)，8）線性沖擊機(jī)和軀干模塊發(fā)射器，主要用于進(jìn)行向汽車的零部件發(fā)射沖擊模塊的沖擊試驗(yàn)，并同時(shí)滿足自由線路沖擊和導(dǎo)向沖擊試驗(yàn)要求。整個(gè)系統(tǒng)主要由以下部分組成：主系統(tǒng)——軀干沖擊工裝，線性導(dǎo)向沖擊模塊工裝，支撐結(jié)構(gòu)，驅(qū)動發(fā)射系統(tǒng)，控制電柜。速度測量裝置，軀干模塊。9）翻門點(diǎn)爆環(huán)境試驗(yàn)箱，溫度控制范圍：-50°C ~+110°C，試驗(yàn)過程是在箱門上加緊試驗(yàn)工裝，當(dāng)溫度達(dá)到制定溫度時(shí)，箱門動作，在8秒內(nèi)打開，氣囊被展開，高速攝錄記錄氣囊展開的過程。在點(diǎn)爆實(shí)驗(yàn)室的一周主要跟隨實(shí)驗(yàn)室人員學(xué)習(xí)氣囊點(diǎn)爆的相關(guān)內(nèi)容，并觀察試驗(yàn)后的樣件狀態(tài)。

后來我們又來到了臺車實(shí)驗(yàn)室，在臺車實(shí)驗(yàn)室我們主要了解臺車實(shí)驗(yàn)室主要做的是座椅試驗(yàn)、安全帶試驗(yàn)和系統(tǒng)試驗(yàn)（正面碰撞、側(cè)面碰撞和角度碰撞）。

對于現(xiàn)場實(shí)驗(yàn)室工作人員以及一個(gè)試驗(yàn)的流程一般是從接受委托單（包含其他公司產(chǎn)品試驗(yàn)委托）開始，后面的步驟是安裝Buck（車身）相機(jī)支架、擬合坡形后等待工程師確認(rèn)、聯(lián)系工程師領(lǐng)零件、聯(lián)系項(xiàng)目工程師確認(rèn)試驗(yàn)信息、組裝零件、按照試驗(yàn)信息調(diào)整零件、檢查臺車內(nèi)無工具和零件、調(diào)試假人位置、安裝相機(jī)和調(diào)試、調(diào)試前假人上裝和拍照、試驗(yàn)系統(tǒng)設(shè)置。通常在這過程中，該實(shí)驗(yàn)室的工作人員對于內(nèi)部可控的程序中，第一次調(diào)試假人位置這一步驟所花費(fèi)的時(shí)間較長，需要進(jìn)行相關(guān)分析及改善。

最后我們來到了物理實(shí)驗(yàn)室和環(huán)境實(shí)驗(yàn)室，王純經(jīng)理帶我們參觀并詳細(xì)講解了實(shí)驗(yàn)室的情況，并為我們講解了試驗(yàn)委托的流程，和在委托試驗(yàn)的過程中需要注意的一些的情況。物理實(shí)驗(yàn)室主要從事SW、AB、SB的光學(xué)、力學(xué)性能的分析，關(guān)于SW試驗(yàn)主要有：扭轉(zhuǎn)強(qiáng)度、彎曲強(qiáng)度、扭轉(zhuǎn)疲勞、觸點(diǎn)疲勞、輪轂緊固性能、輪轂縮回性能、肖氏L硬度； SB試驗(yàn)主要有：靜態(tài)強(qiáng)度、傾斜鎖止、拉出卷收力試驗(yàn)、帶扣鎖啟力、車感帶感試驗(yàn)、六工位卷收器疲勞循環(huán)試驗(yàn)機(jī)；其它試驗(yàn)：燃燒特性、鏡面光澤、色差測定、大眾氣味、粉塵試驗(yàn)。

物理實(shí)驗(yàn)室中的扭轉(zhuǎn)強(qiáng)度、彎曲強(qiáng)度較容易搞混淆。扭轉(zhuǎn)強(qiáng)度是通過固定輪緣，然后通過電機(jī)帶動花鍵進(jìn)行扭轉(zhuǎn)，此試驗(yàn)的奇瑞標(biāo)準(zhǔn)：20Nm的預(yù)載荷、然后250Nm扭矩30s，要求彈性變形≤3°，永久變形≤0.5°。大眾標(biāo)準(zhǔn)：在5s內(nèi)從載荷從50Nm加載到250Nm，要求彈性變形≤3°。彎曲強(qiáng)度是將SW按45°方向固定，然后在垂直方向施加標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的向上與向下的力，記錄變形情況，標(biāo)準(zhǔn)要求：在500N下，彈性變形≤7.5%，塑性變形≤0.5%。而在700N下，彈性變形≤10%，塑性變形≤0.7%。扭轉(zhuǎn)強(qiáng)度主要測試角度的變形，而彎曲強(qiáng)度主要測試的是位移的變形量。

環(huán)境試驗(yàn)室主要是模擬各種環(huán)境（包括溫度、濕度、鹽分、粉塵、震動等）測定SW、SB、AB等性能。環(huán)境室設(shè)備包括：（1）光照箱，主要用于測定SW、AB、儀表板等，測試溫度15℃~80℃，濕度10RH%~80RH%；（2）熱沖擊箱，測試溫度50℃~220℃，-75℃~70℃，主要測試SW、AB的熱沖擊試驗(yàn)；（3）鹽霧箱，測試溫度21℃~50℃，4）振動臺，主要用于測試SW、手球、AB、SB；（5）中元電磁振動臺，ACT2000-R0400L，上下振動；（6）Weiss大環(huán)境箱；（7）WSZ615三綜合試驗(yàn)臺，銀河儀器。

在實(shí)驗(yàn)室的兩周實(shí)習(xí)雖然很快就結(jié)束了，但是這兩周的實(shí)習(xí)使我們受益匪淺，學(xué)習(xí)到了很多試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)，也了解了很多試驗(yàn)的流程，這對于我們以后作試驗(yàn)是有很大的幫助的。

2014隋建峰

年11月18日

第三篇：實(shí)驗(yàn)室工作小結(jié)

實(shí)驗(yàn)室工作總結(jié)

在上級部門和學(xué)校領(lǐng)導(dǎo)的指導(dǎo)下，本學(xué)期的教育教學(xué)工作已經(jīng)過半。現(xiàn)將本學(xué)期前一階段的實(shí)驗(yàn)室工作做如下總結(jié)：

1、實(shí)驗(yàn)室和儀器室的管理工作方面

根據(jù)學(xué)校工作的相關(guān)安排，實(shí)驗(yàn)室管理和使用已經(jīng)達(dá)到規(guī)范化，所有的實(shí)驗(yàn)學(xué)科教學(xué)均在實(shí)驗(yàn)室完成。在教學(xué)中，能做的實(shí)驗(yàn)必須做，條件不具備的實(shí)驗(yàn)，教師通過自制簡易教具也盡可能做，使學(xué)校的實(shí)驗(yàn)室充分發(fā)揮了其自身作用。儀器室管理方面，每周對實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行一次清理，出現(xiàn)損壞及時(shí)查明原因并按規(guī)定進(jìn)行賠償和維修。對損壞的物品及時(shí)報(bào)損并入帳，做到帳上日清月結(jié)，使教學(xué)儀器的使用監(jiān)督常規(guī)化，對所缺物品及時(shí)和學(xué)校及相關(guān)部門聯(lián)系，通過匹配和購進(jìn)保證了實(shí)驗(yàn)教學(xué)的正常開展。

2、儀器借用和管理方面：

儀器借用是保證實(shí)驗(yàn)教學(xué)開展的前提，本學(xué)期，通過學(xué)校會議及教研會議，要求教師只要學(xué)校有的都盡可能借用。在借用過程中，按著實(shí)驗(yàn)通知單內(nèi)容對教師借出的儀器及時(shí)進(jìn)行登記，根據(jù)教學(xué)中的使用情況，督促教師及時(shí)歸還。完善相關(guān)的借用手續(xù)，對于人為損壞的，及時(shí)報(bào)告學(xué)校并按規(guī)定進(jìn)行賠償，并做到全天候向師生開放。

3、實(shí)驗(yàn)教學(xué)開課情況：

化學(xué)演示實(shí)驗(yàn)開了8個(gè).物理演示實(shí)驗(yàn)開了7個(gè).生物演示實(shí)驗(yàn)開了5個(gè).4、存在的問題及設(shè)想

在本學(xué)期前一階段的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，雖然取得了一定的成績，但也存在著不少問題，主要表現(xiàn)在儀器借用還不充分，還有待加強(qiáng);儀器維修作為實(shí)驗(yàn)室管理人員來說還需要加強(qiáng)學(xué)習(xí).總之，實(shí)驗(yàn)室工作還有不盡人意的地方，在今后的工作中，要注意查缺補(bǔ)漏、規(guī)范管理、積極宣傳、提高自身的服務(wù)意識，讓我校的實(shí)驗(yàn)教學(xué)再上一個(gè)新臺階。

第四篇：實(shí)驗(yàn)室實(shí)習(xí)小結(jié)

本人有幸到南京大學(xué)田大成教授的GATTACA實(shí)驗(yàn)室做畢業(yè)設(shè)計(jì)，在此期間，感受到了實(shí)驗(yàn)室全體成員的熱心幫助和關(guān)懷，也感受到了他們一絲不茍的精神和樂于助人的品質(zhì)，這些給我的啟發(fā)頗深。

到實(shí)驗(yàn)室后，我是做抗病基因RPP8方面的研究的，在導(dǎo)師、師姐和師兄的指導(dǎo)下，我做了一些筆記，并學(xué)會了如何操作PCR儀及電泳的整個(gè)流程。在丁靜師姐的指導(dǎo)下，我學(xué)會了如何設(shè)計(jì)引物，MEGA的使用以及如何更方便的查閱文獻(xiàn)等等。

在試驗(yàn)過程中，我深深明白了認(rèn)真仔細(xì)的重要性，在跑電泳過程中，我竟然有兩次都忘了加MARKER，致使試驗(yàn)的進(jìn)程受到了一定的影響，后悔頗深。其次我也認(rèn)識到做實(shí)驗(yàn)要有耐心，實(shí)驗(yàn)室中的一個(gè)女孩姚永芳在做擬南芥的染色試驗(yàn)，她每天要種數(shù)萬顆擬南芥種子，工作量很大，很艱難，在實(shí)驗(yàn)室人手緊張情況下，她每天仍能在無菌室堅(jiān)持一絲不茍工作，這份耐心，這份精神，這份責(zé)任實(shí)在令人欽佩，給我生動的上了一課。

作為一名畢業(yè)在即的大學(xué)生，敢于接受挑戰(zhàn)應(yīng)作為一種基本的素質(zhì)。通過實(shí)習(xí)，我找出了自己更多的不足和差距所在。回想這次實(shí)驗(yàn)室的實(shí)習(xí)，感慨頗多，深知“理論是灰色的，生活之樹常青”，只有將理論付諸于實(shí)踐才能實(shí)現(xiàn)理論自身的價(jià)值，也只有將理論付諸于實(shí)踐才能使理論得以檢驗(yàn)。

我發(fā)現(xiàn)，無論處于怎樣的環(huán)境，第一，手腳要勤快，在工作中勤于動手慢慢琢磨，不斷學(xué)習(xí)不斷積累，第二，要懂得熱心幫助他人。初來匝道，不管是不是自己的份內(nèi)之事，都應(yīng)該用心去完成，也許自己累點(diǎn)，但你會收獲很多，無論是知識與經(jīng)驗(yàn)還是別人的稱贊與認(rèn)可。第三，要懂得多學(xué)多問，學(xué)問學(xué)問，無問不成學(xué)。知識和經(jīng)驗(yàn)的收獲可以說與勤學(xué)好問是成正比的，要記住知識總是垂青那些善于提問的人。第四，善于思考，真正消化知識。有知到識，永遠(yuǎn)不是那么簡單的事，當(dāng)你真正學(xué)會去思考時(shí)，他人的知識才能變成你自己的東西。第五，前人鋪路，后人修路。墨守陳規(guī)永遠(yuǎn)不會有新的建樹，前人的道路固然重要，但是學(xué)會另辟蹊徑更為重要。第六，要學(xué)會獨(dú)立而不孤立。學(xué)會獨(dú)立思考，但在這同時(shí)要記住與他人的交流也是非常重要的。第七，認(rèn)真仔細(xì)地做好筆記，不要當(dāng)你真正用到它時(shí)才知它的重要所在。

在以后，不管面對什么困難，都要有自信。社會經(jīng)驗(yàn)缺乏，學(xué)歷不足等種種

原因會使自己缺乏自信。但自信不是麻木的自夸，我們要相信自己，動力才會源源不斷。其實(shí)有誰一生下來就什么都會的，只有自信，才能克服心理障礙，那一切就變得容易解決了。

總之，這幾個(gè)月的實(shí)驗(yàn)室實(shí)習(xí)讓我有了深刻感觸，其中的經(jīng)驗(yàn)收獲與不足都是我日后學(xué)習(xí)工作的借鑒，這不僅是一次實(shí)踐，還是一次人生經(jīng)歷，是一生寶貴的財(cái)富。在今后我將繼續(xù)揚(yáng)長補(bǔ)短，磨練自己的同時(shí)不斷提高自己，為塑造全面發(fā)展的自我而努力，使未來的道路能夠越走越寬!

在中藥資源工程學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)習(xí)的這段時(shí)間，我負(fù)責(zé)的主要是研究各種藥物在體內(nèi)外腫瘤細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)。在導(dǎo)師、師姐和師兄的指導(dǎo)下，我做了一些筆記，學(xué)到了許多課外知識和基本的技術(shù)操作，令我受益匪淺。

在體外實(shí)驗(yàn)過程中，我發(fā)現(xiàn)要做好實(shí)驗(yàn)，首先要細(xì)心。對于剛來實(shí)驗(yàn)室的我，就要學(xué)會多問，多記，多背。細(xì)胞是很容易被染菌的，它需要一個(gè)獨(dú)立的細(xì)胞培養(yǎng)室。細(xì)胞在培養(yǎng)過程中，要放到37℃的CO2培養(yǎng)箱中，在對細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇、傳代、換液、種板給藥及凍存時(shí)

要放到已紫外照射，通風(fēng)過的超凈工作臺上操作，在細(xì)胞需要離心時(shí)還要密封蓋子。另外，每次在打開放有細(xì)胞的瓶管蓋子時(shí)，注意還要在酒精燈上烘烤。作為實(shí)驗(yàn)人員，還要準(zhǔn)備消毒的手套及白大褂。

其次，做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)還要有耐心。在超凈工作臺上操作之前，我們還要認(rèn)真準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)儀器和培養(yǎng)用液。實(shí)驗(yàn)儀器包括塑料器皿和玻璃器皿，使用過的塑料器皿如96孔板，離心管要先進(jìn)行清水沖洗，再放入洗潔液中浸泡過夜后拿出沖洗15遍，烘干，隨后放于三蒸水中浸潤再烘干，最后放于高壓蒸氣鍋中滅菌烘干備用。而玻璃器皿如培養(yǎng)瓶還需要在洗潔液中浸泡清洗烘干后，在酸酐溶液中浸泡清洗。配制培養(yǎng)用液時(shí)也一樣要小心謹(jǐn)慎，配制過程中的儀器也要進(jìn)行清洗消毒滅菌，如胰酶液還要放在超凈工作臺上操作。另外，在做實(shí)驗(yàn)時(shí)還要注意，其中的培養(yǎng)液因細(xì)胞而異，如C6細(xì)胞用DMEM培養(yǎng)液，而SGC細(xì)胞用的則是Rpml1640培養(yǎng)液。其中在配制和滅菌消毒過程中的三蒸水，是通過蒸餾水凈化過來的，使用時(shí)最好用新鮮配制的。

實(shí)習(xí)這段期間，在實(shí)驗(yàn)室，我是由體外的細(xì)胞開始操作的。研究

藥物抑瘤作用的大小是通過將細(xì)胞在96孔板上種板、給藥、觀察，接著用酶標(biāo)儀觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，處理了數(shù)據(jù)而來得。做過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)才知道，對于細(xì)胞，每一步都是至關(guān)重要的。一開始因?yàn)樽约旱牟皇炀氂謸?dān)心細(xì)胞染菌、加錯(cuò)藥，總是步驟出錯(cuò)或因槍頭使量控制不好，結(jié)果總是以失敗告終。后來才發(fā)現(xiàn)，其實(shí)操作規(guī)范的話是不大可能染菌的，操作的時(shí)候動作越快，效果越好。比如消化完的細(xì)胞，就是要靠快速的吹打、吸取，才能保證轉(zhuǎn)移的量盡量多。一般而言，桌上一共也就幾管子的溶液，不大可能加錯(cuò)藥的。再后來數(shù)據(jù)終于能穩(wěn)定，但是因?yàn)椴煌乃幬镝槍Φ哪[瘤細(xì)胞不同，使得結(jié)果一直不理想。正所謂熟能生巧，我相信堅(jiān)持總能看到勝利的果實(shí)。在這些天里，也讓我明白了做實(shí)驗(yàn)只有認(rèn)真鉆研及學(xué)習(xí)，才能不斷開拓視野，增強(qiáng)自己的實(shí)踐操作技能，才能為以后的工作存儲更多的能力。

在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)對象是小鼠，對此，不僅要細(xì)心、膽子大，還要不怕臟。對于小鼠的培養(yǎng)，對其需要每天進(jìn)行喂食、換水，一周內(nèi)還要換兩次墊料，盡量使它們處于最好的生活狀態(tài)以便觀察結(jié)果。在對小鼠接種給藥時(shí)，要學(xué)會如何有技巧地抓小鼠，以防被抓傷及在對小老鼠注射及灌胃時(shí)能正確、迅速。

經(jīng)過這次的實(shí)習(xí)，還讓我對二甲基亞砜即DMSO有了更深一步的認(rèn)識，通過導(dǎo)師和師姐們，知道它不僅是一種萬能溶劑，也是一種滲透性保護(hù)劑，能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，減輕自由基對細(xì)胞損害，改變生物膜對電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。二甲基亞砜還具有一定的毒性，所以我們都要小心使用。

作為一名畢業(yè)在即的大學(xué)生，敢于接受挑戰(zhàn)應(yīng)作為一種基本的素質(zhì)。通過實(shí)習(xí)，我找出了自己更多的不足和差距所在。回想這次實(shí)驗(yàn)室的實(shí)習(xí)，感慨頗多，深知“理論是灰色的，生活之樹常青”，只有將理論付諸于實(shí)踐才能實(shí)現(xiàn)理論自身的價(jià)值，也只有將理論付諸于實(shí)踐才能使理論得以檢驗(yàn)。

我發(fā)現(xiàn)，無論處于怎樣的環(huán)境，第一，手腳要勤快，在工作中勤于動手慢慢琢磨，不斷學(xué)習(xí)不斷積累，第二，要懂得熱心幫助他人。初來匝道，不管是不是自己的份內(nèi)之事，都應(yīng)該用心去完成，也許自己累點(diǎn)，但你會收獲很多，無論是知識與經(jīng)驗(yàn)還是別人的稱贊與認(rèn)可。

第三，要懂得多學(xué)多問，學(xué)問學(xué)問，無問不成學(xué)。知識和經(jīng)驗(yàn)的收獲可以說與勤學(xué)好問是成正比的，要記住知識總是垂青那些善于提問的人。第四，善于思考，真正消化知識。有知到識，永遠(yuǎn)不是那么簡單的事，當(dāng)你真正學(xué)會去思考時(shí)，他人的知識才能變成你自己的東西。第五，前人鋪路，后人修路。墨守陳規(guī)永遠(yuǎn)不會有新的建樹，前人的道路固然重要，但是學(xué)會另辟蹊徑更為重要。第六，要學(xué)會獨(dú)立而不孤立。學(xué)會獨(dú)立思考，但在這同時(shí)要記住與他人的交流也是非常重要的。第七，認(rèn)真仔細(xì)地做好筆記，不要當(dāng)你真正用到它時(shí)才知它的重要所在。

在以后，不管面對什么困難，都要有自信。社會經(jīng)驗(yàn)缺乏，學(xué)歷不足等種種原因會使自己缺乏自信。但自信不是麻木的自夸，我們要相信自己，動力才會源源不斷。其實(shí)有誰一生下來就什么都會的，只有自信，才能克服心理障礙，那一切就變得容易解決了。

總之，這幾個(gè)月的實(shí)驗(yàn)室實(shí)習(xí)讓我有了深刻感觸，其中的經(jīng)驗(yàn)收獲與不足都是我日后學(xué)習(xí)工作的借鑒，這不僅是一次實(shí)踐，還是一次人生經(jīng)歷，是一生寶貴的財(cái)富。在今后我將繼續(xù)揚(yáng)長補(bǔ)短，磨練自己的同時(shí)不斷提高自己，為塑造全面發(fā)展的自我而努力，使未來的道路能夠越走越寬!

第五篇：生物實(shí)驗(yàn)室 工作小結(jié)

2008年生物實(shí)驗(yàn)室工作小結(jié)

在這學(xué)期中，我們生物實(shí)驗(yàn)室在揚(yáng)校長領(lǐng)導(dǎo)下，在各位生物老師的配合下，實(shí)驗(yàn)室工作開展的井然有序。

在實(shí)驗(yàn)管理工作中，我首先 熟練教材，了解教材常規(guī)的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，掌握分組實(shí)驗(yàn)和演示實(shí)驗(yàn)與教師任課的大致進(jìn)度和時(shí)間，做好實(shí)驗(yàn)的一切準(zhǔn)備工作，在實(shí)驗(yàn)中藥液的配制、選材的適中都將預(yù)先演練，取其最佳的實(shí)驗(yàn)效果，達(dá)到實(shí)驗(yàn)的目的。但是在本學(xué)期中也主要存在以下問題：

一、實(shí)驗(yàn)開展次數(shù)較少 ；二、實(shí)驗(yàn)室被借用的比較多，如每次統(tǒng)練、月考、期中、期末、會考、模考、學(xué)生輔導(dǎo)等，這會造成實(shí)驗(yàn)室財(cái)物的損壞，衛(wèi)生工作難度加大，影響正常的實(shí)驗(yàn)開展。現(xiàn)在我深深的知道實(shí)驗(yàn)室工作的重要性，我要不斷的鉆研知識，拓寬自己的知識面，用科學(xué)的方法去管理實(shí)驗(yàn)室。我保證以后做到以按教材要求開足實(shí)驗(yàn)。

今后還望學(xué)校領(lǐng)導(dǎo)和老師一如既往地支持配合我的工作，使我的工作更加完善，更加有效！

生物實(shí)驗(yàn)員 董均芳

2010/01/18