第一篇：3.霉菌、放線菌的形態觀察 4學時

實驗三

一、實驗目的

霉菌、放線菌的形態觀察

1.學習并掌握觀察放線菌、霉菌形態的基本方法。2.初步了解放線菌和四類常見霉菌的基本形態特征。

二、實驗原理

1.霉菌（真核微生物）：

霉菌是一類可產生菌絲體的真核微生物的統稱。霉菌的菌落形態較大，質地疏松，外觀干燥，不透明，菌落與培養基間連接緊密，不易挑取，菌落正反面，邊緣與中心的顏色、構造通常不一致，有霉味。霉菌的菌絲體分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體（尤其是繁殖菌絲）及包子的形態特征是識別不同種類霉菌的重要依據。

菌絲的孢子較大，在低倍鏡下即可清晰觀察到有隔或無隔菌絲和孢子及巨大的孢子囊。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比放線菌粗的多，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍。霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，而且孢子很容易飛散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片特點是：（a）細胞不變形；(b)具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間；（c）溶液本身呈藍色，有一定染色效果。霉菌的菌絲、分生孢子梗和分生孢子的形態常作為分類的重要依據。

曲霉形態特征：表面灰綠色，菌體有許多復雜的分枝菌絲構成。營養菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端產生燒瓶形或近球形頂囊，表面產生許多小梗，小梗上著生成串的表面粗糙的球形分生孢子。

根霉形態特征：匍匐菌絲弧形，無色，向四周蔓延。

放線菌形態特征：呈菌絲狀生長，以孢子繁殖。顯微鏡下呈紫紅色。青霉形態特征：菌絲初期白色，顏色逐漸由白轉變為綠或藍，菌絲有隔膜。氣生菌絲特化成子實體，子實體類型為分生孢子頭。

霉菌的培養和觀察方法：

（1）載玻片培養觀察法：無菌操作將培養基薄層置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間有限的空間內沿蓋玻片橫向生長。培養一定時間后，將載玻片上的培養物置于顯微鏡下觀察，這種方法既可以保持霉菌自然生長狀態，還便于觀察不同發育期的培養物。

（2）玻璃紙培養觀察法：與放線菌的玻璃紙培養觀察方法相似，這種方法用于觀察不同生長階段霉菌的形態，也可獲得良好的效果。

（3）直接制片觀察法：用解剖針挑取少量培養物置于預先滴加乳酸石炭酸棉藍染色液中，制成霉菌制片鏡檢。2.放線菌（原核微生物）

放線菌是由不同長短、纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養基中的營養菌絲（或稱基內菌絲，簡稱基絲）和生長在培養基以上的氣生菌絲（簡稱氣絲）。有些氣生菌絲分化成孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等，孢子常呈圓形、橢圓形或桿狀。能否產生氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為放線菌分類鑒定的重要依據。

放線菌的菌落形態特征為：形成干燥、不透明、表面呈致密絲絨狀，上有一層彩色“干粉”的菌落。菌落與培養基連接緊密，難以挑取，菌落正反面顏色不一致，在菌落邊緣的瓊脂平板上有變形的現象，有泥腥味。

放線菌只產生基絲而無氣絲。放線菌的培養和觀察方法：

放線菌在顯微鏡下一般氣絲在上，基絲在下，氣絲色暗，基絲較透明。有的（1）扦片法：在放線菌平板上扦上蓋玻片后培養，使放線菌菌絲沿著培養基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。觀察時用鑷子拔出蓋玻片，擦去背面培養物，將有菌的一面朝上置于載玻片上，直接鏡檢。

宜用略暗光線觀察，低倍鏡—高倍鏡；染色后觀察效果更好。

（2）玻璃紙法：玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在平板表面，接種放線菌，經培養，放線菌在玻璃紙上形成菌苔。觀察時先在載玻片上滴一小滴水，取下玻璃紙，使菌面朝上，使玻璃紙平貼于載玻片上。

優點：可觀察到放線菌自然生長狀態下的特征和不同生長期的形態。注意：整過程勿觸動菌面培養物。

（3）印片法：將要觀察的放線菌的菌落或菌苔直接印在載玻片上，經染色后觀察。該方法主要用于觀察孢子絲的形態，孢子的排列及其形狀等，但形態特征可能有所改變。

用接種鏟或解剖刀將平板上的菌苔連同培養基一起切下，菌面朝上。另取一載玻片，微熱后，輕輕按壓菌苔，固定，染色后鏡檢。

三、實驗器材

1.菌種

放線菌劃線平板28℃，3~5天后培養物；曲霉（Aspergillus sp.）、根霉(Rhizopus sp.)和青霉(Penicillium sp.)劃線平板28℃，2~3天后培養物。

2.儀器

顯微鏡、培養皿、載玻片、牙簽、擦鏡紙、吸水紙、染色缸等。3.試劑

乳酸石炭酸棉藍染色液，石炭酸復紅染液，生理鹽水。

四、實驗步驟(一)霉菌觀察：

1.霉菌自然生長狀態下的觀察：將培養3—4天的霉菌培養皿打開，放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀察菌絲，分生孢子梗和分生孢子。

2.直接制片染色觀察：于潔凈載玻片上，加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液，用牙簽從霉菌菌落的邊緣外（培養基平面下方一點兒）取少量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。

注：挑菌和制片時要細心，盡可能保持霉菌自然生長狀態；加蓋玻片時勿壓入氣泡，以免影響觀察。

可先將挑取的菌絲置于50%乙醇中浸一下以洗去脫落的孢子，然后置于染液中。(二)放線菌觀察：

1.放線菌自然生長狀態下的觀察

將培養3—4天的放線菌培養皿打開，放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀察菌絲，孢子絲和孢子。

2.印片法染色觀察

（1）用接種鏟或解剖刀（或牙簽）將平板上的菌苔連同培養基切下一小塊，菌面朝上放在載玻片中央。

（2）用另一潔凈載玻片置火焰上微熱后，蓋在菌苔上，輕輕垂直按壓，將其壓碎，使培養物（氣絲、孢絲或孢子）粘附在后一塊載玻片中央，棄去培養基，制成涂片，將有印跡的一面朝上，通過火焰2～3次固定。

注：不能壓碎培養基，也不能將孢子或菌絲壓入培養基。

（3）用石炭酸復紅染液或呂氏堿性美藍染液覆蓋印跡，染色0.5~1分鐘后水洗。

（4）干燥后，用油鏡觀察營養菌絲,孢子絲及孢子的形態。

五、實驗結果

繪圖說明所觀察到的青霉和放線菌主要形態特征。六 思考題

1.鏡檢時，如何區分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲？

2.顯微鏡下，細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的主要區別是什么？ 補充材料：

1.霉菌對人類生活和生產能產生哪些積極作用和消極作用？

答：霉菌分布極其廣泛，只要存在有機物就有它們的蹤跡。它們在自然界扮演者最重要的有機物分解者的角色，從而把其他生物難分解利用的數量巨大的復雜有機物如纖維素和木質素徹底分解轉化，稱為綠色植物可以重新利用的養料，促進了整個地球上生物圈的繁榮發展。

積極作用：（1）工業上的檸檬酸、葡萄糖酸、淀粉酶、蛋白酶等酶制劑，青霉素、頭孢霉素等抗生素，核黃素等維生素，麥角堿等生物堿，真菌多糖、赤霉素等產物的發酵生產；利用Absidia(犁頭霉)等對茲體化合物的生物轉化以生產茲體激素類藥物；以及利用霉菌在生物防治、污水處理和生物測定等方面的應用；（2）在食品制造方面，如醬油的釀造和干酪的制造等（3）在基礎理論研究方面，霉菌是良好的實驗材料

消極作用：（1）大量真菌可引起工農業產品霉變（2）是植物最主要的病原菌，引起各種植物的傳染性病害，如馬鈴薯晚疫病，稻瘟病和小麥銹病等（3）引起動物和人體傳染病，如皮膚廯病癥等；另有少部分霉菌可產生毒性很強的真菌毒素，如黃曲霉毒素。

2.在自然界和實際應用中放線菌有什么作用？

答：實際應用：（1）產生抗生素；

（2）近年來篩選到的許多新的生化藥物多數是放線菌的次生代謝產物，包括抗癌劑、酶抑制劑、抗寄生蟲劑和農藥殺蟲劑等；

（3）放線菌還是許多酶、維生素的產生菌；

自然界：放線菌在茲體轉化、石油脫蠟和污水處理中也有重要作用。由于很多放線菌有極強的分解纖維素、石蠟、角蛋白、瓊脂和橡膠等的能力，故它們在環境保護、提高土壤活力和自然界物質循環中起著重大作用。

第二篇：放線菌霉菌的制片觀察

實驗三 放線菌霉菌的制片觀察

實驗目的：

1.學會用印片法制作臨時裝片

2.掌握用顯微鏡觀察放線菌個體形態特征的方法 3.掌握霉菌的觀察方法和觀察霉菌的形態特征 實驗原理：

1.放線菌是產生抗生素的重要微生物種類之一，其形態特征含有3個部分，基內菌絲、氣生菌絲和孢子絲。基內菌絲：升展于培養基的表面和內部，菌絲色淡、較細。氣生菌絲：在基內菌絲上，升展于空間，顏色較深，菌絲較粗。孢子絲：菌絲成熟時，大部分氣生菌絲分化成孢子絲，孢子絲形態多樣，由成串分生孢子組成。

2.霉菌是真核生物主要有基內菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲。基內菌絲：升展于培養基的表面和內部。氣生菌絲：在基內菌絲上，升展于空間。繁殖菌絲：產生孢子。材料和儀器：

1． 菌種：細菌鏈霉菌、霉菌 2． 培養基：高氏一號瓊脂培養基

3． 器皿：培養皿、蓋玻片、載玻片、鑷子、顯微鏡等 4． 染液：呂氏美蘭染液、乳酸石碳酸棉蘭染液 實驗步驟：

1.配制培養基滅菌后倒平板，待起冷卻后劃線接種，在培養箱內培養5-7天

2.取蓋玻片印于放線菌菌體處，輕輕敲打后取出置于有呂氏美蘭染液的載玻片上，無菌操作

3.用鑷子夾取少量霉菌菌體于有乳酸石碳酸棉蘭染液的載玻片上，用大頭針打散菌體，蓋上蓋玻片吸取多余的染液，無菌操作

4.取制作好的臨時裝片于顯微鏡下，鏡檢，觀察放線菌和霉菌的形態特征 實驗結果：

1.放線菌所獲臨時裝片材料較少，只有幾個視野可以觀察的到菌體，菌體疏松。因為放線菌長勢不好，只有少數生長于培養基上，故取材時只取到少部分，但不影響觀察，可以清晰的看到菌絲體和孢子絲，說明放線菌有菌絲體和孢子絲組成，孢子絲呈串珠狀。2.霉菌制作了兩塊臨時裝片，第一個觀察到的都是圓形小顆粒的孢子，說明取材時，僅僅只取了培養基表面的一層菌體，沒有深入培養基中取菌體，操作有誤。第二塊可以清晰的看見霉菌菌體，其中有分生孢子梗、頂囊、小梗、分生孢子，說明霉菌由這幾部分組成，孢子著生于小梗上，呈串珠狀。霉菌菌體比放線菌菌體大很多。

第三篇：實驗三 放線菌形態及菌落特征的觀察

實驗三 放線菌形態及菌落特征的觀察

一、目的要求

掌握觀察放線菌形態的基本方法，并觀察放線菌的形態特征。

二、基本原理

和細菌的單染色一樣，放線菌也可用石炭酸復紅或堿性美藍等染料著色后，在顯微鏡下觀察其形態。放線菌的孢子絲形狀和孢子排列情況是放線菌分類的重要依據，為了不打亂孢子的排列情況，常用印片染色法和膠帶紙粘菌染色法進行制片觀察。

放線菌是由不同長短的纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養基中的營養菌絲（或稱基內菌絲）和生長在培養基表面的氣生菌絲。有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。孢子常呈圓形、橢圓形或桿形。氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類的重要依據。

三、器材

1.活材料：放線菌培養物，酵母菌斜面培養物；

2.染色液：復紅染色液（或結晶紫，美蘭）；

3.器材：載玻片，膠帶紙，小刀，接種環，吸水紙，擦鏡紙，酒精燈，香柏油，乙醚-乙醇混合液，顯微鏡。

四、操作步驟

1．印片法：放線菌自然生長狀態的觀察

印片：取干凈載玻片一塊，用小刀切取放線菌培養體一塊，放在載玻片上，用另一塊載玻片對準菌塊的氣生菌絲輕輕按壓，然后將載玻片垂直拿起。注意不要使培養體在玻片上滑動，否則會打亂孢子絲的自然形態；

微熱固定：將印有放線菌的涂面朝上，通過酒精燈火焰2-3次加熱固定； 染色:石炭酸復紅染色1min； 水洗：水洗后晾干；

鏡檢：先用低倍鏡后用高倍鏡，最后用油鏡觀察孢子絲、孢子的形態及孢子排列情況。

2．膠帶紙法

粘菌：用膠帶紙在放線菌培養體上粘取菌體，注意，壓取時從菌落邊順著菌體生長方向，避免從菌落上面壓取，以免取得的全是孢子。

染色：將粘有菌體的膠帶紙壓在事先準備好的滴油染液的載玻片上。將多余染色液用濾紙吸掉。

鏡檢：同上。

五、實驗報告

繪圖說明你所觀察到的放線菌的形態特征。

第四篇：觀察酵母菌與霉菌實驗教案

《觀察酵母菌與霉菌》實驗教案

一.實驗目的

1.觀察酵母菌的形態與結構并掌握其特征。

2.觀察霉菌的菌落特征，學會霉菌的一般制作方法。3.觀察并掌握各種霉菌的個體形態及生長繁殖方式。4.進一步熟悉顯微鏡的使用。二.實驗原理

酵母菌是一類單細胞真菌，一般呈圓形、橢圓形，無性繁殖以芽孢為主，也有少數是裂殖，有些酵母菌能產生囊孢子，有的能形成假菌絲。酵母菌的菌落似細菌菌落，但較大且厚，多呈白色，少數為紅色。酵母菌在液體中生長可形成菌膜、菌環、沉淀和渾濁。酵母菌的細菌結構較完善，即有壁、膜、質、核等結構。酵母菌的細胞形態、繁殖方式和培養特征均為菌種鑒定的依據。

酵母活細胞新陳代謝旺盛，活力強，還原力也強，若無毒的染料進入細胞，既被還原脫色，但死細胞及代謝作用緩慢的老弱細胞無此還原力。美蘭是無毒染料，且能被活細胞還原成無色，故可用來區別細胞的死活。

霉菌是一些小型絲狀真菌、單細胞（根霉、毛霉）或多細胞（曲霉、青霉），其細胞結構與酵母類似，同屬真核細胞。

霉菌形態較復雜，個體較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。其菌絲分為氣生菌絲與營養菌絲（菌絲比放線菌粗得多）觀察時請注意菌絲是否具有橫膈膜、有無假根、無性繁殖時形成何種孢子，孢子著生方式以及孢子頭的構造等，以區別各種不同霉菌的形態。

霉菌菌落由分枝狀菌絲組成，較疏松，呈毛狀、棉絮狀、絨毛狀或氈狀。由于不同霉菌形成的孢子均有不同顏色、構造、性狀，故菌落表面呈現出不同的結構和色澤特征。菌絲一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌絲較老，先產生孢子，故常形成同心圓。三.實驗器材

1.菌種：面包酵母、根霉、曲霉、青霉。2.儀器：顯微鏡。

3.其它：生理鹽水、乳酸酚棉蘭染液、載玻片、蓋玻片、接種環、酒精燈、美蘭、鑷子、大頭針。四.步驟與方法

1.酵母菌細胞形態觀察

（1）制片：用接種環挑取一環面包酵母菌種于載玻片上的一滴美蘭染液中混勻，蓋上蓋玻片靜置4~5分鐘。蓋時先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然后慢慢放下，避免產生氣泡。

（2）鏡檢：用高倍鏡觀察，光線弱些，繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況，并觀察死活酵母情況。2.霉菌的形態觀察（1）制片方法：在潔凈的載玻片加一滴乳酸酚棉蘭染液，用大頭針或鑷子從菌落的不同部位菌絲體少許（連同培養基），放入載玻片上的乳酸酚棉蘭染液中，使菌絲在染液中展開，加上蓋玻片。（2）載片培養法制作霉菌標本片。（3）鏡檢。

（4）觀察毛霉、根霉、曲霉、青霉的菌落。五.結果記錄

1.酵母菌的形態觀察

繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況。2.霉菌的形態觀察

繪制鏡檢圖并描繪霉菌菌落特征。六.思考題

1.試比較酵母和細菌的形態。

2.為什么在觀察霉菌個體形態時要連同培養基一起挑起？

第五篇：實驗五 細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的制片和簡單染色

實驗五

細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的制片和簡單染色

一．實驗器材 1.菌種

枯草芽孢桿菌12—18h。金黃色葡萄球菌24h牛肉膏蛋白胨瓊脂泄密安培養物等。1.溶液和試劑

草酸銨結晶紫染液，齊氏碳酸復紅染液，呂氏堿性美藍染液，革蘭氏染色用典液，乳酸碳酸棉藍染液。

2.儀器和其他用品

酒精燈，載玻片，蓋玻片，顯微鏡，雙層瓶，擦鏡紙，接種環，接種鏟，接種針，鑷子，載玻片夾子，載玻片支架，玻璃紙，平皿v型玻璃棒，滴管，解剖針，解剖刀，生理鹽水，50%乙醇，20%甘油，高氏1號培養基平板。二．目的要求

1.學習并掌握微生物的制片及簡單染色的基本技術 2.初步了解細菌，放線菌，酵母菌及霉菌的形態特征 3.鞏固顯微鏡操作技術及無菌操作技術 三．基本原理

放線菌菌體由基內菌絲，氣生菌絲和孢子絲組成，制片時不采用涂片法以免破壞細胞及菌絲體形態。通常采用插片法或玻璃紙法并結合菌絲體簡單染色進行觀察，在插片中首先將滅菌蓋玻片插入接種有放線菌的平板，使放線菌沿蓋玻片和培養基接觸生長而附著在蓋玻片上，取除蓋玻片上，取出蓋玻片可直接在顯微鏡下觀察放線菌在自然生長狀態下的形態特征，而且有利于對不同生長時期的放線菌形態進行觀察。利用單一染料對菌體進行染色的方法稱為簡單染色。用于染色的染料是一類苯環上帶有發色基因的有機化合物。常采用堿性染料進行簡單染色，原因在于微生物細胞在堿性、中性及弱酸性溶液中通常帶負電荷，而染料電離后染料部分帶正電荷，很容易與細胞結合使其著色；當細胞處于酸性條件下，所帶正電荷增加時，可采用酸性染料染色。

四、操作步驟

（一）細菌制片及簡單染色。

1、涂片。

2、干燥。

3、固定。

4、染色。

5、水洗。

6、干燥。

7、鏡檢。

（二）酵母菌制片及簡單染色。

水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍后，滴加一滴于載破片中央，無菌操作取少許菌體置于染色中混勻，蓋上破片后鏡劍。

五、思考題。