第一篇：ABO血型鑒定假陽性的原因淺析（精選）

ABO血型鑒定正反定型不一致的原因淺析

【摘 要】目的：探討ABO血型正反定型不一樣的原因。方法：ABO血型玻片法正定型和試管法反定型。

結果：血型鑒定的過程中會有某些干擾因素引起一些假象，造成血型鑒定假陰性或假陽性反應。結論：臨床應采用正反定型對照的方法來確認血型，以免受各界因素影響而誤導對試驗結果的判斷。

血型是以血液抗原形式表現出來的一種遺傳性狀，一般是不會發生改變的。我們平常所稱的血型泛指ABO血型系統和RH血型系統。這兩種血型系統不合極易造成輸血反應，所以ABO血型鑒定的準確性是十分重要的。而血型鑒定的過程中會有某些干擾因素造成一些假象，如血液中含有較高的冷凝集素或自身免疫性抗體，使受檢者紅細胞上的抗原減弱等因素，造成血型鑒定假陰性或假陽性反應，病人血清或血漿中的白細胞過多，堵塞了凝膠間隙，從而影響了紅細胞的沉降，造成假陽性等。從而出現正反定型不一致的情況，在這里我們淺析一下影響因素。

（1）新生兒:6個月以內的嬰兒抗體多來自母親，自身血型抗體效價又低，反定型時可能不凝集或凝集很弱，所以不宜做反向定型。

（2）老年人:隨年齡增長老年人抗體水平呈逐漸下降趨勢，造成鑒定困難。

（3）白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制藥患者、先天性丙種球蛋白缺乏癥等。

（4）被檢紅細胞凝集力減弱，如A 2、A 2 B等亞型紅細胞抗原性弱或由于惡病質病人，如白血病、某些惡性腫瘤使A或B抗原變弱，新生兒紅細胞血型抗原形成不足等。

（5）全凝集與多凝集紅細胞:紅細胞被細菌污染，細菌酶消化了紅細胞表面的唾液酸，暴露出T抗原而被激活，正常人紅細胞上有T抗原，血清中有抗T，但因紅細胞表面存在的唾液酶T抗原無活性，當紅細胞被細菌污染后，使紅細胞與多數人血清凝集稱為多凝集，如與所有人血清都凝集稱為全凝集。對這兩種疑為全凝集或多凝集紅細胞時，用多份AB型血清加以證實，因此種現象與AB型血清也發生凝集，應重新抽血，用標準的定型方法來測定患者準確血型。

（6）獲得性B表現，某些腸道桿菌感染的患者，由于細菌等引起的獲得性類B抗原，易產生假陽性結果，A型患者出現類B可判為AB型，O型錯判為B型，此種現象當病情好轉類B即消失。

（7）某些疾病如肝病、腎炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相對或絕對性增高，多發性骨髓瘤因患者血清中病理性球蛋白增加易形成錢串狀排列，而外觀類似凝集，臨床應用血漿擴容劑如低分子右旋糖酐均可使紅細胞成錢串狀假凝集。真與假的區別是在鏡下觀察時，假凝集紅細胞呈錢串狀排列，形狀基本完整，加一滴等滲鹽水于玻片上并混勻后錢串排列消失，而真凝集加等滲鹽水凝集不消失，紅細胞不會散開。

（8）反應溫度不合適亦會造成假性結果。ABO血型鑒定主要測定體內的完全抗體，完全抗體最適溫度多在22℃至4℃左右，屬于IgM抗體，為冷性抗體，許多IgM類型的抗體在4℃時的反應強度遠高于37℃。另外血型鑒定方法也會影響結果。如玻片法定型簡單，不需要離心設備，僅靠抗體的力量，凝集紅細胞而無離心的加速反應，所以反應的時間較長，不適合急診，另亞型紅細胞抗原與抗體的凝集反應慢，凝集強度弱，有時容易被忽略而導致定型錯誤，不適合用于反定型和交叉配血，只適于大規模血型普查。而試管法定型反應快，需時短，特別是緊急輸血時可在抗原抗體反應 1min后離心觀察結果。通過離心增強凝集，可發現亞型和較弱的抗原抗體反應，結果準確可靠，為臨床常規應用的方法。

為臨床輸血安全在鑒定血型時采用正反定型，正定型是用標準血型抗體，對紅細胞膜上ABO系統血型抗原的鑒定。反定型是用標準紅細胞抗原對血清中ABO系統血型抗體的鑒定，其目的在于復檢正定型結果的準確性糾正漏檢誤報，特別是一些具有弱抗原的亞型，正定型易被忽略，此外反定型還可以糾正某些腫瘤病人因紅細胞抗原性減弱造成的正定型錯誤以及克服排除獲得性類B抗原和全凝集現象對紅細胞定型的干擾，可發現血清中存在的一些不規則抗體等。

總而言之，血型鑒定是一項重要而嚴肅的工作，關系到患者的生命安全。檢驗人員必須認真負責，嚴格按照操作規程操作，熟練掌握操作步驟，能察覺出檢驗結果的異樣，并認真復查。盡可能的規避干擾因素，保證結果的準確性和可靠性。

【參考文獻】

馮春顏，吳文權，彭友堂等。ABO血型鑒定結果的質量控制方法。現代簡檢驗醫學雜志，2007.22:113-114 王晨，錢寶華，韋燕萍等。7例ABO血型抗體減弱或缺乏的臨床分析。臨床輸血與檢驗雜志，2008.10:243-245.

第二篇：abo血型鑒定

生理鹽水凝集法

①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。

②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。

在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：

①呈一片或幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞為（++++）。

②呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞為（+++）。

③數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。

④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。

⑤可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。

⑥可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。

⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。凝膠微柱法

是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。

抗A、抗B和抗AB標準血清標準

準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。[3] 編輯本段注意事項

1、所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。

2、加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。

3、雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，醫學教育網收集整理但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。

4、幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

5、玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。

6、正、反定型結果一致才可發報告。

7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[4]

ABO血型系統

英文：ABO blood group system 根據紅細胞表面有無特異性抗原（凝集原）A和B來劃分的血液類型系統。ABO血型系統是1900年奧地利蘭茨泰納發現和確定的人類第一個血型系統。根據凝集原A、B的分布把血液分為A、B、AB、0四型。紅細胞上只有凝集原A的為A型血，其血清中有抗B凝集素；紅細胞上只有凝集原B的為B型血，其血清中有抗A的凝集素；紅細胞上A、B兩種凝集原都有的為AB型血，其血清中無抗A、抗B凝集素；紅細胞上A、B兩種凝集原皆無者為O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的紅細胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的紅細胞發生凝集。輸血時若血型不合會使輸入的紅細胞發生凝集，引起血管阻塞和血管內大量溶血，造成嚴重后果。所以在輸血前必須作血型鑒定。正常情況下只有ABO血型相同者可以相互輸血。在缺乏同型血源的緊急情況下，因O型紅細胞無凝集原，不會被凝集，可輸給任何其他血型的人。AB型的人，血清中無凝集素，可接受任何型的紅細胞。但是異型輸血輸入量大時，輸入血中的凝集素未能被高度稀釋，有可能使受血者的紅細胞凝集。所以大量輸血時仍應采用同型血。臨床上在輸血前除鑒定ABO血型外，還根據凝集反應原理，將供血者和受血者的血液作交叉配血實驗，在體外確證兩者血液相混不發生凝集，方可進行輸血以確保安全。近年來發現存在于紅細胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血細胞和一般組織細胞。所有細胞表面血型抗原的特異性可作為機體免疫系統鑒別自身和異物的標志。因此，在臨床實踐中血型鑒定也是組織器官移植成敗的關鍵。人類血型有遺傳特性，決定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分別受ABO三個等位基因控制。A、B基因為顯性基因，O（H）基因為隱性基因。它們的遺傳規律所顯示的父、母血型與子代血型間的關系，在法醫學上可作為否定親子關系的依據，若再配合其他血型系統的測定，則可判斷親子關系。

血型不僅在輸血上有重要意義，而且在人種學、遺傳學、法醫學、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有應用價值，在輸血前，一定要檢查病人(受血者)和輸血人（供血者）的血型，并且要進行交叉配血試驗。在臨床醫學中，除輸血、移植免疫外，對新生兒溶血病、自身免疫性溶血性貧血特異性抗體的檢查，也都需要血型知識和有關技術。ABO血型抗原具有種族差異。例如，中歐地區的人群中，約40％以上的人為A型，近40％的人為O型，10％的人為B型，6％的人為AB型；而90％的美洲土著人為O型。[5] 編輯本段舉例分析

通常只用兩種抗血清即抗A及抗B血清，就可將群體分為四種血型。

根據血型的遺傳規律，和臨床工作方例起見，配偶間所生子女的血型如下：

各種ABO配偶所生子女的血型:

婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

A×A A、O B、AB

A×B A、B、O、AB 無

A×AB A、B、AB O

A×O A、O B、AB

B×B B、O A、AB

B×AB A、B、AB O

B×O B、O A、AB

AB×AB A、B、AB O

AB×O A、B AB、O

O×O O A、B、AB

婚配式 A型血的可能 B型血的可能

A*A 75% 0% 25% 0%

A*B 25% 25% 25% 25%

A*O 50% 0% 50% 0%

A*AB 50% 25% 0% 25%

B*B 0% 75% 25% 0%

B*O 0% 75% 25% 0%

O型血的可能AB型血的可能

B*AB 25% 50% 0% 25%

O*O 0% 0% 100% 0%

O*AB 50% 50% 0% 0%

AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鑒定總結

AB0血型鑒定原理

常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據抗原抗體存在的情況判定血型。常規的方法有：①正向定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結果判定：凡紅細胞出現凝集者為陽性，呈散在游離狀態為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

鑒定方法

（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞為（++++）。②呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞為（+++）。③數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。⑤可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。⑥可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。

（2）凝膠微柱法：是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。

抗A、抗B和抗AB標準血清標準

準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。血型鑒定操作時注意事項

一般注意事項：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，醫學教育網收集整理但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。④幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。⑥正、反定型結果一致才可發報告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[6]

第三篇：ABO血型正反鑒定結果不符的原因分析

大連醫科大學2012屆本科畢業論文

ABO血型系統是人類發現的第一個血型系統，也是最重要的血型系統，對臨床輸血意義重大。ABO血型系統上有A、B、O、AB四種表型，也存在A亞型、B亞型、AB亞型。ABO系統抗原則有A、B、AB、A1抗原，在胎兒的第9周就可以檢測出來，這些抗原隨著個體基因變異或疾病的影響而改變。ABO血型系統有兩個特點：

一、人紅細胞上缺少某個抗原，血清中就存在針對該抗原的抗體，而且是高效價的；

二、不僅紅細胞上有ABO抗原，分泌型者得分泌液中也存在某抗原[1]。根據這一特性來判斷ABO血型。

臨床上，當輸入ABO血型不相合的血液時，會引起溶血性輸血反應[2]，嚴重時會危及生命。為了保障臨床輸血的安全，對ABO血型定型規定做正反定型。當正反定型一致時，方可準確確定ABO血型。但實驗中，往往會出現ABO正反定型不一致的情況。導致ABO正反定型不符的原因有很多，有試劑、方法、技術等因素的影響，更重要的是血液免疫因素的影響。本文就血液免疫因素方面對ABO正反定型的影響進行研究。現將武漢血液中心2011年1~4月份健康獻血者ABO正反定型不一致及1~4月份醫院送檢的正反定型不符的患者標本進行研究，報告如下。

一． 材料與方法

1.1標本來源

武漢血液中心1~4月份健康獻血者ABO正反定型不符標本及1~4月份各醫院送檢的正反定型不符而進行疑難血型鑒定的標本。其中健康獻血者80例，患者標本35例。

1.2主要試劑與器材

試劑：抗-A、抗-B標準血清、抗-A1、抗-AB、譜細胞、O型試劑紅細胞均為上海血液生物醫藥有限責任公司，人源性抗-A、抗-B，A、B型試劑紅細胞為本輸血研究室自制。

器材：離心機（日本久保田KA2200）；恒溫水浴箱（HH60）；顯微鏡（CKTV-2）。

1.3實驗方法 1.3.1 ABO正定型實驗

取兩支試管，分別加入兩滴抗-A、抗-B試劑，在各加一滴3-5％受檢者紅細胞懸液，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結果。懷疑為亞型時，再加做抗-AB、抗-H試驗。

1.3.2 ABO反定型實驗

取四支試管，先各加入兩滴受檢者血清，再分別加入一滴A、B、O型試劑紅細胞和受檢者紅細胞懸液，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結果。

1.3.3 吸收放散及唾液血型物質檢測

吸收放散：用生理鹽水將3ml受檢者壓積紅細胞洗滌三次，取洗后的壓積紅細胞2ml，加入對應的人源性抗血清，4℃下吸收1小時，吸收后用4℃生理鹽水洗滌5次，再放于56℃放散10min，數次振蕩，3500r/min離心1min，取2滴放散液，加入對應的1滴A、B、O試劑紅細胞，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結果。

唾液血型物質檢測：受檢者唾液離心去雜質后，煮沸10min，3500r/min離心5min，以2+凝集強度為標準將抗-A、抗-B標準血清和抗-H標化，取1滴上清液與標化后的1滴抗-A、抗-B標準血清和抗-H中和，然后加入1滴對應的A、B、O試劑紅細胞，混勻，大連醫科大學2012屆本科畢業論文

AB O AB 1 抗-JKb B AB AB 1 AmB亞型：A3B AB B AB 1 A2B有抗-A1 O A A 1 A亞型：Ael O B B 1 B亞型：Bel AB A AB 2 緡錢狀凝集 A AB AB 3 緡錢狀凝集 A O A 1 緡錢狀凝集 B O B 2 緡錢狀凝集 O A O 1 緡錢狀凝集 A O A 2 ABO以外抗體

陽性，譜細胞無法確定其特異性

B O B 1 同上 AB O AB 2 同上 AB A AB 3 同上 A AB A 1 同上 AB B AB 1 同上

O B O 1 同上

表-2健康獻血者ABO正反定型不符原因在血型分布情況

血型 例數 冷抗體 抗原減弱或缺乏 抗體減弱或缺乏 不規則抗體 緡錢狀凝集

A 26 12 1 1 11 1 B 23 7 1 0 13 2 O 8 2 0 0 5 1 AB 23 5 2 0 11 5

表-1表-2中，獻血者標本中引起正反定型不符的原因：冷抗體占32.5％（26/80），抗原減弱或缺乏占5％（4/80），抗體減弱或缺乏占1.25％（1/80），不規則抗體占50％（40/80），緡錢狀凝集占11.25％（9/80）。

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三、討 論

本文研究排除技術因素及試劑因素對ABO正反定型不符的影響。筆者對80例ABO正反定型不符的健康獻血者及35例定型不符的疾病患者進行ABO定型、吸收放散、抗體鑒定等實驗，對結果分析如下：

從表-1中可以看出，在健康獻血者中，引起ABO正反定型不符的主要原因是冷抗體32.5％（26/80）及不規則抗體50％（40/80）的產生。對于冷抗體，實驗中將反應試管分別放在37℃水浴箱及4℃冰箱，改變反應溫度來確認冷抗體[3]，當冷抗體存在時，可以將試管放于37℃下孵育，去除冷抗體后再準確定型。在不規則抗體引起的正反定型不符中，最多的是由于抗-M引起不符，占16.25％（13/80），其次是抗-Leb占12.5％（10/80）,b這些獻血者無輸血史及妊娠史，這些抗體屬于天然抗體。抗-M及抗-Le都是不規則抗體，都會引起配血的不合，這類抗體如果在37℃鹽水介質和抗人球蛋白反應是陽性，輸血時則會產生輸血反應[4]。對于此類獻血者建議今后不宜獻血，已獻的血液適合做洗滌紅細胞。表-1中還有一例是由于A2B產生抗-A1抗體而引起正反定型不符。A型抗原有兩種，A、A1，A1型人紅細胞上兩種抗原都有，A2型人紅細胞上只有A抗原[5]，在通常輸血前檢測試驗中，患者與獻血者的A1、A2型不必加以區分，除非當A2型或A2B型人血清中有抗-A1抗體存在時[6]。22％--26％的A2B個體血清中可以檢出抗-Al[7]，抗-A1抗體在臨床上意義不大，多數在25℃以上無活性，也有幾例是由于抗-A1引起的溶血性輸血反應[8]。對于A2B患者血清中存在抗-A1抗體的輸血，應選擇A2B亞型血，若無可以選擇O型洗滌紅細胞。本文還有11例正反定型標本，ABO以外抗體陽性，但上海譜細胞無法確定其特異性，此種情況可以增加譜細胞數，若仍不能確定特異性，可以采用分子生物學的方法來確定抗體的特異性。此外還有9例是由于緡錢狀凝集導致正反定型不符，可能與標本使用的抗凝劑有關，EDTA抗凝劑能阻止補體的活化，補體存在時使反定型出現凝集[9]，導致正反定型的不符。4例亞型導致正反定型不符，減弱的抗原可以用吸收放散實驗檢測出來，它可以將抗原濃縮和粗純化，靈活運用吸收放散實驗可以準確定型[10]。出現亞型時，正定型加做抗-H、抗-AB,亞型紅細胞與抗-AB反應是增強的[11]，檢測H抗原的量對亞型鑒定是有幫助的。

從表-2可以看出，本文研究的80例健康獻血者中，A型中出現ABO定型不符的例數最多，占32.5％（26/80），其次是B型、AB型，出現定型不符最少的血型是O型。可能是由于O血型的人體內無A、B抗原，在抗原方面出現的變異情況少[12]。

在35例患者標本中，從表-

3、4得出，抗原因素引起ABO正反定型不符的主要是白血病導致的抗原減弱。是因為白血病患者體內N-乙酰半乳糖轉移酶受抑制，引起抗原的減弱[13]。而在抗體因素中，較多是由于患者體內產生較多的不規則抗體導致定型不符，最多的是抗-M，這些患者多數都有輸血史及妊娠史，體內發生同種免疫反應產生的同種抗體，多為IgG類。還有1例腫瘤患者，免疫功能下降導致抗體合成受抑制，抗體缺乏導致定型不符。而自身免疫性溶血性貧血患者，自身抗體與紅細胞結合，在高蛋白質溶液中可自發凝集，包被嚴重的在低蛋白ABO定型試劑中也可以凝集，使定型不符，可以用45℃生理鹽水洗去自身抗體后就能準確定型。

綜上，排除試劑和技術因素的影響，導致ABO正反定型不符的原因有：（1）抗原減弱 此原因引起的定型不符，對健康獻血者是由于亞型，而患者則是疾病引起抗原減弱，最多的是白血病引起的減弱。（2）抗體減弱或缺乏 抗體水平與年齡有關。新生兒在出生后才產生IgM的ABO抗體，到3個月時才能檢測出來，5~10歲時抗體數目最多，隨后就漸漸下降，老年人在65~70歲以后，抗體水平最低。白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人，由于血漿蛋白質中的丙種球蛋白減少從而導致抗體減

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參考文獻 1、5.安萬新，于衛建.輸血技術學.第2版.北京:科學技術文獻出版社，2010：45.2.Sazama K Reports of 355 transfusion-associated deaths,1976 through 1985.Transfusion 1990,30(7):583-590.3.張永海，李曉陽.ABO正反定型不符的原因及克服辦法.衛生職業教育,2006,16（24）：126-127.4．李雪英，王文莉，李志平,IgM+IgG抗-M引起ABO血型正反定不符1例.當代醫學，2010，16（19）:120-120.6.朱自嚴，郭忠慧，張雄民,ABO血型系統.免疫血液學,上海：上海科學技術出版社，2002:33-50.7.杰夫·丹尼爾．人類血型．朱自嚴．譯．北京：科學出版社．2007:27—28.8.江建峰，林正明,A2B亞型伴有抗A11例.中國輸血雜志,2008,21（1）：47-47.9.王曉穎，張坤蓮.抗凝劑影響補體活化致ABO血型正反定型不符1例.中國誤診學雜志，2009,9（4）：981-982.10.Engelfriet CP What is the best techniques for the detection of red cell alloantibodies.Vox.Sang.1995,69(3):292-300.11.舒群峰，田方，曾付芳,Ax亞型及家系調查1例.中國輸血雜志,2007,20（3）：237-238.12.楊珊,健康獻血者與疾病患者ABO正反定型不符比較研究.臨床血液學雜志,2009,22（5）:550-552.13.Akria Y,Takashik,Vibha D et al.Suppressed expression of blood group B antigen andblood group galactosyltransferase in a preleukemic subject.Blood.1985,66(4):990-992.14.王明元，周曉華，狄文英,等.ABO疑難血型基因分型研究.醫學理論與實踐,2009,22（4）:393-394.15.趙桐茂,人類血型分型的新紀元.中國輸血雜志,2007,20(1):1221.16.郭如華，邢培清，張伯偉,PCR-SSP方法用于ABO疑難血型檢定.中國輸血雜志,2003,16（3）：187-188.大連醫科大學2012屆本科畢業論文

4、血液免疫因素

4.1、抗原減弱或封閉導致ABO正反定型不符。遺傳基因可以決定紅細胞表面抗原減弱或缺乏，這些減弱或缺乏的抗原也可以是獲得性的。對于健康獻血者來說，亞型最可能導致抗原的減弱，而患者則是由于所患疾病。最多的是白血病患者引起的抗原減弱或消失。白血病患者在疾病活動期抗原減弱，通常情況下抗原減弱是暫時的，但是患者在疾病緩解期又會恢復回原來的血型[5]。為了將抗原減弱與亞型區別，可以通過延長反應時間，在4℃放置后再試驗，同時加做吸收放散，有條件的可以進行過唾液血型物質檢測。懷疑亞型時，因為亞型紅細胞上H抗原數目是增多的，正定型可以加做紅細胞與抗-H、抗-AB抗體反應，多數反應比正常同型要強[6]，反定型加做血清與A1c、A2c細胞反應，用吸收放散試驗來檢測紅細胞上是否有弱血型抗原及確定其亞型型別，檢測唾液血型物質有助于ABO血型的準確定型。此外，卵巢囊腫、胃癌或腸道阻塞的患者，本身血清中會有大量血型特異性的可溶物質產生，能與抗-A抗-B試劑中和，使抗原被封閉，導致定型困難。這時可以將待檢測紅細胞用生理鹽水洗滌三次后重新試驗。自免貧、輸血反應、新生兒溶血病及服用抗高血壓藥物的患者，紅細胞由于被抗體致敏，使抗原被封閉，造成ABO正定型的困難，這時用吸收放散法去除致敏的抗體，然后再重復試驗來準確定型。

4.2、未知的抗原反應導致正反定型不符

（1）獲得性A或B抗原 患者紅細胞與抗-A試劑反應，在顯微鏡下觀察到混合視野凝集，Tn抗原活化的紅細胞，證明有獲得性A抗原。獲得性B抗原的紅細胞反應像AB型，血清內有抗B抗體，多為患腸道阻塞和消化道疾病的患者，病情好轉時，獲得性B抗原也隨即消失。獻血者的獲得性B抗原，可能是原患疾病產生的，提倡對獻血者進行健康調查時注意胃腸道患病史，避免此類獻血者[7]。

（2）改變的抗原 多凝集細胞是指紅細胞能被多數正常人血清所凝集，這種凝集反應叫多凝集反應，產生的原因有：T抗原活化（一般是紅細胞受到細菌等污染）、Tn抗原活化（與血液學方面異常有關如溶血性貧血）、Cad多凝集。相對應的解決辦法是:對于是由于Tn活化導致的多凝集反應，可用1％無花果酶或木瓜酶處理紅細胞，而T活化的多凝集反應，由于其再室溫下反應較強，在37℃下反應則較弱，故實驗需在37℃下進行。

（3）低頻率的抗原抗體反應 抗血清試劑抗-A、抗-B中可能存在低頻率抗體，通常情況下，獻血者或患者紅細胞很少與抗血清試劑內的低頻率抗體反應，但在有料想不到的極弱抗原存在時應該考慮低頻率的抗原抗體反應。

4.3、抗體減弱或缺乏導致ABO正反定型不符

抗體的降低或缺乏，可以引起同族凝集素的減弱或缺乏。見于以下幾種情況：（1）嵌合現象 此原因導致的抗體缺乏不是很常見。非同卵雙胎的個體，雙受精引起體內都認為是自己的兩種種群的紅細胞終生存在，這些人不會產生抗-A或抗-B抗體，從而導致正反定型不符。如骨髓移植后或換血治療的患者。（2）丙種球蛋白過低血癥、丙種球蛋白缺乏血癥 白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人，由于血漿蛋白質中的丙種球蛋白減少從而導致抗體減少，使正反定型不符。通過在反定型時，增加反應時間，加大血清量，在4℃溫度下放置5~10min后再進行試驗來準確定型。（3）年齡 正反定型不符情況在新生兒中出現最多。新生兒在出生后才產生IgM的ABO抗體，到3個月時才能檢測出來，5~10歲時抗體數目最多，隨后就漸漸下降，老年人在65~70歲以后，抗體水平最低。所以一般新生兒不做反定型，如果做反定型，可以加大血清量或實驗中使用低離子強度溶液。（4）從正在輸液患者一側靜脈采集血液標本，采集血液的部位不規范，導致血液被稀釋而抗體反應假性減弱[8]。當非AB型病人大量輸

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ABO定型，可以用基因分型來避免假陰性結果。筆者建議研究中國人的ABO基因特點及分子遺傳背景，研制出適合我國人群的ABO血型鑒定試劑盒，提高血型鑒定的準確性。

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致 謝

感謝我的指導老師沈鋼和石小玲老師。在整個實驗中，從選題、查資料、寫綜述，到試驗，以及最后統計、分析、攥寫論文，他們都傾注了很多心血，給予了我很大的指導和幫助。他們不僅教給了我科研工作的基本的流程和方法，更重要的是，他們教給我科研工作者必須具備的嚴謹求實的科學態度。

感謝輸血研究室的各位老師對我的關懷，感謝武漢市紅十字血液中心的領導對我的關愛。

第四篇：ABO血型操作

長春博迅ABO、RhD血型定型檢測卡操作流程 【檢驗原理】

本試驗采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質中，紅細胞抗原與相應抗體結合，形成紅細胞免疫復合物，在一定離心力下，該復合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或懸于膠中；如無相應抗體結合，則不能形成紅細胞免疫復合物，在一定的離心力下，分散的紅細胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部。【樣本要求】

標本采集：采集被檢對象靜脈血，將該同一人血液分別制備成紅細胞標本和血清標本。

紅細胞標本的制備：配制成0.5％-0.8％紅細胞懸液。

血清標本的制備：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，2000rpm,10分鐘，取上清；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝試管中，4℃放置12小時，或37℃放置2小時后離心，2000rpm,10分鐘，取上清。該上清不得有絮狀物或沉淀。標本必須充分去纖維蛋白，否則血清標本中析出的或紅細胞懸液中殘余的纖維蛋白可阻礙紅細胞沉降，使非凝集細胞離心后在膠表面形成一條紅線，呈假陽性反應。【操作步驟】

1.將微柱凝膠試劑卡的六支凝膠微管標號。

2.將待檢者0.5％-0.8％紅細胞懸液分別加入第一至第四支微管中，每管50微升。3.將待檢者血清分別加入第五支和第六支

第五篇：試管法ABO血型鑒定

試管法ABO血型鑒定

1.檢驗目的

鑒定供受血者ABO血型，保證臨床輸血安全。2．檢驗方法 試管法 2.1.試管法 2.1.1.實驗原理

ABO血型鑒定，是根據IgM類特異性血型抗體與紅細胞膜上特異性抗原結合能出現凝集反應的原理，用已知IgM類特異性標準抗A和抗B血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或（和）B抗原，同時用已知標準A型紅細胞和B型紅細胞來測定血清中有無相應的天然IgM類抗A或（和）抗B。2.1.2.標本要求

靜脈EDTA抗凝血2.0～3.0ml，以3000r/min離心3分鐘，分離上清液。2.1.3.試劑

單克隆或多克隆抗A、抗B試劑，3-5% A、B及O型試劑標準紅細胞懸液。2.1.4.器材

離心機，4℃冰箱、顯微鏡，12×70mm試管(以下稱“小試管”),滴管，10mm×60mm透明的玻璃試管或塑料試管。2.1.5.操作步驟

2.1.5．1．正定型（查抗原）：取試管2支，分別標明抗A、抗B，加入抗A和抗B分型血清各2滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細胞鹽水懸液1滴，混勻。

2.1.5．2.反定型（查抗體）：取試管3支，分別標明A型、B型和O型細胞。用滴管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B、O型5%試劑紅細胞懸液1滴，混勻。

2.1.5．3.立即以3000r/min離心10秒。（離心時間為離心機校準時間）。2.1.5．4.輕輕搖動試管，使沉于管底的紅細胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現象,如肉眼觀察不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡下觀察有無凝集。2.1.5．5.凝集強度判斷標準

＋＋＋＋：紅細胞凝集成一大片或幾片，僅有少數單個游離紅細胞，血清清晰透明。

＋＋＋：紅細胞凝集成數個大顆粒凝塊，有少數單個游離紅細胞，血清透明。

＋＋：紅細胞凝成數個小顆粒凝塊，游離紅細胞＜1/2。＋：紅細胞凝成數個小顆粒凝塊，游離紅細胞＞1/2。±：紅細胞凝成數個微小顆粒凝塊，周圍有很多游離紅細胞。MF：混合凝集外觀（mixed field，MF），鏡下可見少數紅細胞凝集，而絕大多數紅細胞呈分散分布。

－：陰性，鏡下未見紅細胞凝集，紅細胞均勻分布。HP：部分溶血（part hemolysis，HP），有些殘留紅細胞。H：完全溶血（hemolysis，H），無殘留紅細胞。2.1.5.6.報告受檢者紅細胞ABO血型（表1001-1）。

表1001-1 ABO血型鑒定結果判斷

分型血清＋受檢者紅細胞

抗A ＋ － － ＋ 抗B － ＋ － ＋

A B O AB 受檢者血型

A細胞 － ＋ ＋ －

B細胞 ＋ － ＋ －

O細胞 － － － －

受檢者血清＋試劑紅細胞

注：＋為凝集；－為不凝集