第一篇： ABO、RhD血型定型檢測卡原理

ABO、RhD血型定型檢測卡原理

【產品名稱】

通用名稱：ABO、RhD血型定型檢測卡

英文名稱：Microcolumn Gel Cards for Forward and Reverse ABO/RhD Blood Group Typing 【包裝規格】

6孔/卡，抗A、抗B和抗D各1孔，空白凝膠管3孔。12卡/盒?！绢A期用途】

人紅細胞 ABO血型正、反定型及RhD血型定型，僅供臨床使用，不用于血源篩查。【檢驗原理】

采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，利用凝膠間縫隙只允許游離紅細胞通過的特性，將生物化學的凝膠過濾技術、離心技術和血型血清學的抗原抗體特異性反應結合在一起，專供血型血清學試驗使用。ABO、RhD血型定型檢測卡的前3支塑料微管中分別灌注有與抗A、抗B和抗D抗體按照一定的比例混合的葡聚糖凝膠，用于紅細胞 ABO血型正定型及RhD血型定型。后三支塑料微管中只灌裝凝膠，不含任何抗體。第四支微管作為陰性對照管，第五支和第六支微 管用于紅細胞 ABO血型反定型。使用時將樣本紅細胞懸液或血清加在凝膠上部反應，離心后觀察。凝集的紅細胞，被阻擋在凝膠的上部或中央，判斷凝集反應陽性；游離的紅細胞，可通過凝膠間隙而沉積在凝膠的底部，判斷凝集反應陰性。

第二篇：ABO血型定型檢測作業指導書

ABO血型定型檢測作業指導書

1.目的：ABO血型定型檢測 2.適用范圍：

新鮮、無污染、無溶血的人全血，避免反復凍融，不可用NaN3 防腐。3.職責：

站（院）長批準，專業負責人考核合格的優生篩查實驗室檢驗人員履行此項工作。4.試劑：

4.1本法所用試劑為長春博德生物技術有限責任公司生產的抗A抗B血型定型試劑盒。

4.2本法所用試劑應在有效期內使用。5.設備儀器： 5.1醫用冰箱 5.2雙目顯微鏡

5.3微量可調移液器 6.原理：

本品系由經配制的抗A血型或B血型單克隆抗體的雜交瘤細胞培養上清液（或在上清液中加少量同型腹水）組成，專供鑒定人ABO血型用。7.程序：

7.1平衡：將在有效期內試劑盒、待測適用樣品從冷藏環境中取出，平衡至室溫（18-25℃）。

7.2平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或紅細胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，按照有無凝集判定結果。

7.3試管法：本品與受檢者5%紅細胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，搖勻，1000r/min離心1分鐘或室溫靜置1小時，按照有無凝集判定結果。7.4結果判定

血型 A B AB O 7.5檢驗結果登記 8.相關程序

8.1設備管理程序

8.2設備校準工作程序 8.3方法管理程序

8.4實驗標本管理程序 8.5記錄控制程序

8.6優生篩查服務管理程序 8.7實驗室管理制度

抗A試劑

++ 8.8員工守則

8.9保密和保護專有權管理程序 8.10檔案管理規定 9.相關記錄

9.1《環境條件記錄》 9.2《冰箱溫度記錄》 9.3《實驗標本流轉單》

9.4《儀器設備使用維護記錄》

9.5《優生篩查檢測結果登記表二》 9.6《實驗標本處理表》 9.7《醫用垃圾處理記錄》

第三篇：《ABO、RhD血型抗原檢測卡(柱凝集法)注冊技術審查指導原則》(征求意見稿)

ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）

注冊技術審查指導原則（征求意見稿）

本指導原則旨在指導注冊申請人對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內容，可自行補充。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、范圍

ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）是指使用凝膠、玻璃微珠等材料進行填充微柱，以免疫血液學、顆粒過篩和離心技術結合原理，進行人ABO血型的正定型鑒定及RhD抗原的檢測。

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本指導原則適用于ABO、RhD血型抗原檢測卡(柱凝集法)以及包含ABO、RhD血型抗原檢測用途的柱凝集法的血型檢測卡，但不適用于血源篩查用血型正定型試劑。

本指導原則僅包括對ABO、RhD血型抗原檢測卡(柱凝集法)注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產品注冊和相關許可事項變更的產品。其他未盡事宜，應當符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關法規要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（總局2014年第44號公告）（以下簡稱“44號公告”）的相關要求。內容主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的說明、有關產品主要研究結果的總結和評價以及同類產品在國內外批準上市的情況介紹等內容，其中同類產品上市情況介紹部分應著重從抗體生物學來源、抗體效價、特異性、靈敏度、有效期等方面寫明擬申報產品與目前市場上已獲批準的同類產品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠或其他填充物、緩沖液等）的選擇、制備及其質量標準的研究資料。

1.抗體的選擇及質量標準。應明確寫明抗體的供應來源、生物學來源或克隆號，抗D抗體應明確抗體屬性，是IgM型或IgG型或兩者均含有。

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1.1提供抗體純度。1.2抗體效價：

將抗A、抗B抗體進行倍比稀釋，應用試管法分別與A1型、A2型紅細胞試劑和B型紅細胞試劑反應，與國家標準品比對，抗體效價不得低于國家標準品。

將抗D抗體進行倍比稀釋，應用試管法與RhD陽性紅細胞試劑反應，考察抗體效價。

1.3特異性

抗A抗體應與A1型、A2型、A1B、A2B型試劑紅細胞發生陽性反應，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗B抗體應與B型、A1B、A2B型試劑紅細胞發生陽性反應，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗D抗體應與RhD陽性試劑紅細胞發生陽性反應，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反應。

所有陽性反應不應有雙群現象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現象。

1.4應提供不同批次抗體的驗證資料。

1.5如為兩株抗體混合，應提交驗證資料說明混合比例。2.填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質量控制要求。應提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。

3.填充緩沖液：應說明組成成分,并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功能性進行研究驗證。

（三）主要生產工藝及反應體系的研究資料

1.主要生產工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產工藝的確定依據。

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2.產品基本反應原理介紹。

3.主要生產工藝過程的研究資料、每一步生產工藝的確認資料及試驗數據。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件（如介質、時間、溫度等）的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應確保均勻無氣泡，以及質量控制的要求。

4.主要反應體系的研究資料、每一步反應體系的確認資料及試驗數據。

反應體系的設臵應符合《全國臨床檢驗操作規程》等公認標準操作規范、指南或標準的要求。如紅細胞懸液制備要求及紅細胞濃度的確定、用量的要求、溫度、時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉數和時間的方式設臵離心條件。

（四）分析性能評估資料

申請人應提交生產者在產品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體研究目的、實驗設計、研究方法、可接受標準、實驗數據、統計方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內或國際有關體外診斷產品性能評估的指導原則進行。

產品性能研究所采用的儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內或境外已批準上市的產品，如紅細胞試劑、抗人球蛋白試劑、離心機等。

分析性能評估試驗中應明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的試驗方法。所有試驗方法應符合 4 / 13

產品說明書的具體操作要求。

分析性能研究應采用至少三批產品進行。如檢測卡同時適用于手工法及全自動血型分析儀，應分別進行性能驗證并對兩者性能進行比較。

建議著重對以下分析性能進行研究。

1.外觀：檢測卡應標識清晰，不同抗體對應不同顏色，封口應嚴密且能夠整條撕脫，檢測卡內填充物均勻，無干枯現象，液面高度一致，無明顯傾斜，離心后應無氣泡。

2.特異性：

抗A柱應與A1型、A2型、A1B、A2B型試劑紅細胞發生陽性反應，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗B柱應與B型、A1B、A2B型試劑紅細胞發生陽性反應，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗D柱應與RhD陽性試劑紅細胞發生陽性反應，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反應。

Ctl柱（如有）均呈陰性反應。

所有陽性反應不應有雙群現象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現象。

3.靈敏度 3.1凝集強度要求

抗A柱與A1型試劑紅細胞發生凝集反應時，反應強度應不小于4+，與A2 型及A2B試劑紅細胞發生凝集反應時，反應強度應不小于2+；與A1B試劑紅細胞發生凝集反應時，反應強度應不小于3+；

抗B柱與B型試劑紅細胞發生凝集反應時，反應強度應不小于4+，與AB型（A1B或A2B）試劑紅細胞發生凝集反應

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時，反應強度應不小于3+；

抗D柱與RhD陽性試劑紅細胞發生凝集反應時，反應強度應不小于4+。

3.2與試管法的比對試驗

采用同樣的A1型、A2型、AB型、B型、RhD陽性試劑紅細胞，將試劑卡檢測結果與試劑卡使用的抗體采用試管法的檢測結果進行比較，依據各自的結果判定方法進行凝集強度的判讀，試劑卡凝集強度不得低于試管法。

所有陽性反應不應有雙群現象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現象。

4.重復性

采用A1型、A2型、B型、AB型、O型試劑紅細胞分別對抗A柱和抗B柱進行重復性試驗，采用RhD陽性和陰性試劑紅細胞對抗D柱進行重復性試驗，使用上述所有試劑紅細胞對Ctl柱（如有）進行重復性試驗。

批內重復性采用同一批次檢測卡重復檢測上述試劑紅細胞，重復次數不少于10次，比較同一批次檢測卡不同次檢測之間的檢測結果；

日間重復性采用同一批次檢測卡每日重復檢測上述試劑紅細胞，重復天數不少于10天，比較同一批次檢測卡不同天檢測之間的檢測結果；

批間重復性采用至少三批檢測卡對上述試劑紅細胞進行重復檢測，比較不同批次間的檢測結果。

批內、日間、批間重復性檢測結果應分別對應一致，對同一試劑紅細胞的檢測結果凝集強度差異不超過1+。陰性結果不應有凝集、溶血等不易分辨現象。

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5.臨床樣本驗證

收集各ABO血型臨床樣本，包括RhD陰性樣本，采用試劑卡進行檢測，將血型鑒定和凝集強度結果與已上市試劑結果進行比較。臨床樣本的收集應考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源。

6.收集臨床弱凝集紅細胞樣本，驗證A、B、O、AB、RhD陽性小于3+及各種凝集強度的情況，并提供各種凝集強度的圖片。

7.收集各種血型的直接抗人球蛋白試驗陽性紅細胞進行檢測驗證。并提供直接抗人球蛋白試驗試劑及檢測結果信息。

8.收集弱D、部分D紅細胞，考察驗證抗D柱能否檢出，并明確上述RhD血型的具體確定方法。

9.溶血、脂血、黃疸等樣本的干擾評價。10.抗凝劑的適用性研究驗證。

（五）陽性判斷值

提供充分的驗證試驗，體現不同凝集強度的結果，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強度的圖例或相片。

（六）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報檢測卡的穩定性和適用樣本的穩定性研究。前者主要包括實時穩定性（有效期）研究，申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案，實驗項目應至少包括靈敏度、特異性、重復性。

穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實

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施方案、詳細的研究數據以及結論。對于實時穩定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應對樣本穩定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩定性。

試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究結果應分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗

臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內容應符合《體外診斷試劑臨床試驗指導原則》、《辦法》、“44號公告”的規定，以下僅結合ABO、RhD血型抗原檢測卡的具體特點對其臨床試驗中應重點關注的內容進行闡述。

1.研究方法

按照法規要求應選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明考核試劑與已上市產品或試管法等效。

2.臨床試驗單位的選擇

應選擇符合法規要求資質的臨床試驗機構進行臨床試驗，不得選擇血站進行臨床試驗。

3.病例選擇

臨床總病例數應不少于3000例。應采用臨床患者進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應包括血型

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鑒定易產生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。血型分布盡量均衡，ABO血型每種均應有統計學意義，RhD陰性樣本建議不少于50例。

4.實驗過程

分別采用考核試劑與對比試劑依據各自的說明書對入組臨床樣本進行血型檢測，記錄結果應具體到凝集強度。

5.統計學分析

應分別進行考核試劑與對比試劑對不同ABO血型、RhD血型的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，對定性結果進行Kappa檢驗以驗證檢測結果的一致性。

6.結果差異樣本的驗證

對于兩種試劑檢測結果不一致（包括考核試劑與對比試劑定型結果不一致、考核試劑與對比試劑凝集強度差異較大,如≥2+）的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認試驗，同時應結合樣本的復測結果進行綜合分析，最終應采用適合的方法進行樣本血型的最終確認。

如臨床樣本中包含凝集強度小于3+的樣本，應進行進一步確認，明確出現弱凝集的原因。

7.臨床試驗數據記錄表應作為臨床試驗報告附件提交。臨床試驗數據記錄表應列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強度和血型定型結果，如有不符樣本應列明第三方確認的結果。

8.臨床試驗中應注意考核試劑與對比試劑應嚴格遵守說明書操作要求，如紅細胞懸液濃度、離心條件等，應與說明

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書一致。

（八）產品風險分析資料

產品風險分析資料應符合“44號公告”的基本要求，并參照相應的行業標準進行風險分析。風險分析中應充分考慮到各種可能影響檢測結果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行血型定型檢測時可能存在一定的干擾、抗體效價隨放臵時間延長的減弱對結果的影響等，申請人應根據這些不確定的因素分析產品應用可能存在的風險。

（九）產品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產工藝穩定的前提下，根據產品研制、性能評估等結果，依據國家標準、行業標準及有關文獻，按照《醫療器械產品技術要求編寫指導原則》（總局2014年第9號通告）的有關要求，編寫產品技術要求。產品技術要求應符合《辦法》和“44號公告”的相關規定。

如果擬申報試劑已有相應的國家/行業標準發布，則企業標準的要求不得低于上述標準要求。

產品技術要求的性能指標應至少包括外觀、靈敏度、特異性、重復性、穩定性。

產品技術要求的附錄應包括主要原材料、生產工藝及半成品檢定要求。主要原材料應明確抗體來源、克隆號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應明確填充物來源及主要特征、質量控制要求，緩沖液應明確組成、pH值等特性及質控要求；主要生產工藝應以流程圖形式描述主要生產工藝過程，并明確主要生產工藝的具體條件和質量控制點；半成品檢定應明確半成品的檢驗要求及方法。

（十）產品注冊檢驗報告

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根據《辦法》要求，申請注冊的第三類體外診斷試劑應在國家食品藥品監督管理局認可的、具有相應承檢范圍的醫療器械檢驗機構進行連續三個生產批次樣品的注冊檢驗。

（十一）產品說明書

說明書承載了產品預期用途、試驗原理、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學解釋的重要依據，因此，產品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（總局2014年第17號通告）的要求，境外產品的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規范格式對此內容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。

以下內容僅對ABO、RhD血型抗原檢測卡說明書的重點內容進行詳細說明，說明書其他內容應根據《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》要求進行編寫。

1.【預期用途】

1.1寫明本試劑用于人ABO血型的正定型檢測及RhD血型抗原的檢測，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。

1.2說明與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法。

2.【儲存條件及有效期】 說明試劑的儲存條件及有效期。

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3.【樣本要求】

明確紅細胞制備和濃度要求，明確配套紅細胞稀釋液，應使用生理鹽水，說明溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據穩定性研究結果寫明樣本穩定性要求，明確抗凝劑要求。

4.【陽性判斷值】

明確結果判斷方法及標準，并通過不同凝集強度的圖例或照片進行詳細解釋。

5.【檢驗方法】

寫明具體方法及操作步驟。

明確質控要求：應根據相關規定進行每日質控試驗。6.【檢驗方法的局限性】

6.1未完全去除纖維蛋白原的標本，可能因纖維蛋白阻礙紅細胞沉降而影響檢測結果，造成假陽性，建議洗滌后重新檢測。

6.2被檢標本染菌可能造成假陽性結果。

6.3實驗室溫度低可能導致凝膠顆粒活動性減少，單個紅細胞穿過困難，從而導致假陽性結果。

6.4使用陳舊樣本可能因細胞破碎，細胞膜浮于膠中或膠面呈弱陽性反應。

6.5對弱D等檢測情況進行說明。

6.6對檢測結果凝集強度小于3+的情況應如何進行后續處理進行詳細說明。

7.【注意事項】

7.1檢測卡在使用前應離心，并小心解開封口膜，避免迸濺。

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7.2強調紅細胞懸液濃度范圍，不得過高或過低。7.3微柱中出現溶血情況的處理。

7.4樣本離心時間和離心力應嚴格按照說明書要求操作。7.5其他。

三、起草單位

國家食品藥品監督管理總局醫療器械技術審評中心

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第四篇：abo血型鑒定

生理鹽水凝集法

①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。

②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。

在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：

①呈一片或幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞為（++++）。

②呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞為（+++）。

③數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。

④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。

⑤可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。

⑥可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。

⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。凝膠微柱法

是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。

抗A、抗B和抗AB標準血清標準

準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。[3] 編輯本段注意事項

1、所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。

2、加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。

3、雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，醫學教育網收集整理但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。

4、幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

5、玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。

6、正、反定型結果一致才可發報告。

7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[4]

ABO血型系統

英文：ABO blood group system 根據紅細胞表面有無特異性抗原（凝集原）A和B來劃分的血液類型系統。ABO血型系統是1900年奧地利蘭茨泰納發現和確定的人類第一個血型系統。根據凝集原A、B的分布把血液分為A、B、AB、0四型。紅細胞上只有凝集原A的為A型血，其血清中有抗B凝集素；紅細胞上只有凝集原B的為B型血，其血清中有抗A的凝集素；紅細胞上A、B兩種凝集原都有的為AB型血，其血清中無抗A、抗B凝集素；紅細胞上A、B兩種凝集原皆無者為O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的紅細胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的紅細胞發生凝集。輸血時若血型不合會使輸入的紅細胞發生凝集，引起血管阻塞和血管內大量溶血，造成嚴重后果。所以在輸血前必須作血型鑒定。正常情況下只有ABO血型相同者可以相互輸血。在缺乏同型血源的緊急情況下，因O型紅細胞無凝集原，不會被凝集，可輸給任何其他血型的人。AB型的人，血清中無凝集素，可接受任何型的紅細胞。但是異型輸血輸入量大時，輸入血中的凝集素未能被高度稀釋，有可能使受血者的紅細胞凝集。所以大量輸血時仍應采用同型血。臨床上在輸血前除鑒定ABO血型外，還根據凝集反應原理，將供血者和受血者的血液作交叉配血實驗，在體外確證兩者血液相混不發生凝集，方可進行輸血以確保安全。近年來發現存在于紅細胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血細胞和一般組織細胞。所有細胞表面血型抗原的特異性可作為機體免疫系統鑒別自身和異物的標志。因此，在臨床實踐中血型鑒定也是組織器官移植成敗的關鍵。人類血型有遺傳特性，決定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分別受ABO三個等位基因控制。A、B基因為顯性基因，O（H）基因為隱性基因。它們的遺傳規律所顯示的父、母血型與子代血型間的關系，在法醫學上可作為否定親子關系的依據，若再配合其他血型系統的測定，則可判斷親子關系。

血型不僅在輸血上有重要意義，而且在人種學、遺傳學、法醫學、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有應用價值，在輸血前，一定要檢查病人(受血者)和輸血人（供血者）的血型，并且要進行交叉配血試驗。在臨床醫學中，除輸血、移植免疫外，對新生兒溶血病、自身免疫性溶血性貧血特異性抗體的檢查，也都需要血型知識和有關技術。ABO血型抗原具有種族差異。例如，中歐地區的人群中，約40％以上的人為A型，近40％的人為O型，10％的人為B型，6％的人為AB型；而90％的美洲土著人為O型。[5] 編輯本段舉例分析

通常只用兩種抗血清即抗A及抗B血清，就可將群體分為四種血型。

根據血型的遺傳規律，和臨床工作方例起見，配偶間所生子女的血型如下：

各種ABO配偶所生子女的血型:

婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

A×A A、O B、AB

A×B A、B、O、AB 無

A×AB A、B、AB O

A×O A、O B、AB

B×B B、O A、AB

B×AB A、B、AB O

B×O B、O A、AB

AB×AB A、B、AB O

AB×O A、B AB、O

O×O O A、B、AB

婚配式 A型血的可能 B型血的可能

A*A 75% 0% 25% 0%

A*B 25% 25% 25% 25%

A*O 50% 0% 50% 0%

A*AB 50% 25% 0% 25%

B*B 0% 75% 25% 0%

B*O 0% 75% 25% 0%

O型血的可能AB型血的可能

B*AB 25% 50% 0% 25%

O*O 0% 0% 100% 0%

O*AB 50% 50% 0% 0%

AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鑒定總結

AB0血型鑒定原理

常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據抗原抗體存在的情況判定血型。常規的方法有：①正向定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結果判定：凡紅細胞出現凝集者為陽性，呈散在游離狀態為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

鑒定方法

（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞為（++++）。②呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞為（+++）。③數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。⑤可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。⑥可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。

（2）凝膠微柱法：是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。

抗A、抗B和抗AB標準血清標準

準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。血型鑒定操作時注意事項

一般注意事項：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，醫學教育網收集整理但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。④幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。⑥正、反定型結果一致才可發報告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[6]

第五篇：ABO血型操作

長春博迅ABO、RhD血型定型檢測卡操作流程 【檢驗原理】

本試驗采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質中，紅細胞抗原與相應抗體結合，形成紅細胞免疫復合物，在一定離心力下，該復合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或懸于膠中；如無相應抗體結合，則不能形成紅細胞免疫復合物，在一定的離心力下，分散的紅細胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部?！緲颖疽蟆?/p>

標本采集：采集被檢對象靜脈血，將該同一人血液分別制備成紅細胞標本和血清標本。

紅細胞標本的制備：配制成0.5％-0.8％紅細胞懸液。

血清標本的制備：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，2000rpm,10分鐘，取上清；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝試管中，4℃放置12小時，或37℃放置2小時后離心，2000rpm,10分鐘，取上清。該上清不得有絮狀物或沉淀。標本必須充分去纖維蛋白，否則血清標本中析出的或紅細胞懸液中殘余的纖維蛋白可阻礙紅細胞沉降，使非凝集細胞離心后在膠表面形成一條紅線，呈假陽性反應?！静僮鞑襟E】

1.將微柱凝膠試劑卡的六支凝膠微管標號。

2.將待檢者0.5％-0.8％紅細胞懸液分別加入第一至第四支微管中，每管50微升。3.將待檢者血清分別加入第五支和第六支