第一篇：血涂片制作和白細(xì)胞分類／ABO血型鑒定

姓名：

學(xué)號(hào)：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告

說明：

1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告務(wù)必獨(dú)完成，對(duì)抄襲者將按不及格處理；

2、實(shí)驗(yàn)報(bào)告的格式請(qǐng)按下面的各項(xiàng)要求來填寫，不要改動(dòng)；

3、正文字體統(tǒng)一用“仿宋-GB2312”、，小四號(hào)，單倍行距，小標(biāo)題加黑；

4、下面的“替換這里”字體底紋在完成后去除；

5、實(shí)驗(yàn)報(bào)告按時(shí)上傳，上傳時(shí)文件名統(tǒng)一按照網(wǎng)上說明來命名； 實(shí)驗(yàn)名稱：血涂片制作和白細(xì)胞分類／ABO血型鑒定

同組姓名： 實(shí)驗(yàn)日期：4.13 室 溫： 氣 壓： 成 績： 教 師：

一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（一）觀察到的紅細(xì)胞、白細(xì)胞

（1）單核細(xì)胞

（2）淋巴細(xì)胞

（3）嗜中性細(xì)胞

（4）嗜酸性細(xì)胞

（二）ABO血型鑒定結(jié)果

將本人血液加入到抗A凝集素和抗B凝集素中后均不發(fā)生凝集反應(yīng)，加入到抗B凝集素中后顏色為血液原來的鮮紅顏色；加到抗A凝集素后顏色變深但無凝血反應(yīng)。

二、分析與討論

（1）紅細(xì)胞、白細(xì)胞的觀察

血液由血漿和血細(xì)胞組成，而血細(xì)胞主要包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。其中紅細(xì)胞數(shù)量最多，約占全血體積的45%，成熟紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核，呈中央凹的圓盤狀。在油鏡下觀察紅細(xì)胞，首先在數(shù)量上它占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，分布均勻，其次呈紅色的圓形或橢球形。圖片中數(shù)量最多的紅色圓球形細(xì)胞便是紅細(xì)胞。而白細(xì)胞和血小板所占體積不足1%。對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行瑞氏染色后根據(jù)細(xì)胞的染色特征，可將其分為兩大類：1.顆粒白細(xì)胞：嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞；2.無顆粒細(xì)胞：淋巴細(xì)胞核單核細(xì)胞。其中嗜中性粒細(xì)胞細(xì)胞大小約10-12μm，核多分葉2-5葉或不分葉為桿狀，顆粒細(xì)小,紫紅色，約占白細(xì)胞的50%-70%；嗜酸性粒細(xì)胞細(xì)胞大小約10-15μm，核常分為2葉，顆粒粗大,分布均勻,桔紅色，約占白細(xì)胞的0.5%-3%；嗜堿性粒細(xì)胞10-12μm核常呈S形（十分肥大）或不規(guī)則顆粒大小不等,分布不勻, 紫藍(lán)色，約占白細(xì)胞的 0%-1%，數(shù)量極少，因此找到它需要運(yùn)氣、知識(shí)和眼力；淋巴細(xì)胞分大中小6-12μm以6-8μm居多，核圓或隨圓形，很少,天藍(lán)色，約占白細(xì)胞的20%-30%；單核細(xì)胞染色質(zhì)致密,深紫色，大小約14-20μm，腎形或馬蹄形，胞質(zhì)多常染成淺灰藍(lán)色，染色質(zhì)疏松,著色較淺約占白細(xì)胞的3%-8%。白細(xì)胞的數(shù)量隨不同的生理狀態(tài)會(huì)有較大的波動(dòng)，在實(shí)驗(yàn)觀察中，以嗜中性粒細(xì)胞數(shù)最多，其次為淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞均只發(fā)現(xiàn)一個(gè)而嗜堿性細(xì)胞沒發(fā)現(xiàn)。在觀察白細(xì)胞類型時(shí)，首先觀察是否存在顆粒，若無顆粒主要根據(jù)核質(zhì)比，大的為淋巴細(xì)胞和核的形狀馬蹄型為單核細(xì)胞；若有顆粒則根據(jù)核的分葉數(shù)、形狀；顆粒大小、顏色、以及顏色深淺綜合來判斷嗜中性粒細(xì)胞（核分多葉、細(xì)小的紫色顆粒、顏色深）、嗜酸性粒細(xì)胞（核分兩葉、顆粒明顯較嗜中性粒細(xì)胞粗大且顆粒呈桔紅色，顯微鏡下看上去亮晶晶的）和嗜堿性粒細(xì)胞（沒觀察到）。

（2）ABO血型鑒定

人類紅細(xì)胞膜上存在不同的特異糖蛋白抗原—凝集原，也存在于其它血細(xì)胞和一般組織細(xì)胞上，而血漿中存在著不與自身凝集原發(fā)生反應(yīng)的凝集素，凝集原會(huì)與相應(yīng)的凝集素發(fā)生凝集反應(yīng)，使紅細(xì)胞凝集成團(tuán)，不能分開，紅細(xì)胞破裂產(chǎn)生溶血。因此可用標(biāo)準(zhǔn)血清鑒定未知血型。在白瓷板上滴加抗A和抗B凝集素，然后加入本人血液，若與抗A凝集素反應(yīng)產(chǎn)生沉淀而與抗B凝集素不反應(yīng)則血型為A型；若與抗B凝集素反應(yīng)產(chǎn)生沉淀而與抗A凝集素不反應(yīng)則血型為B型；若均與抗A、抗B凝集素發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀則血型為AB型；若均不與抗A、抗B凝集素反應(yīng)則血型為O型。實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，在加入本人血液后，血液與抗A、抗B凝集素反應(yīng)均無沉淀，但加入到抗A凝集素中后呈深色，而加到抗B凝集素中呈鮮紅色。理論上不發(fā)生反應(yīng)應(yīng)呈鮮紅色，顏色變深可能與pH值有關(guān)。

三、結(jié)論

（1）本人找到了紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。

（2）本人的血型為o型，是萬能供血者，可以幫助更多的人。

第二篇：abo血型鑒定

生理鹽水凝集法

①玻片法：操作簡單，適于大量標(biāo)本檢查，但反應(yīng)時(shí)間長；被檢查者如血清抗體效價(jià)低，則不易引起紅細(xì)胞凝集，因此，不適于反向定型。

②試管法：由于離心作用可加速凝集反應(yīng)，故反應(yīng)時(shí)間短，而且，借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)凝集作用，適于急診檢查。

紅細(xì)胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)低時(shí)，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯(cuò)誤。

玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細(xì)胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細(xì)胞分散。

在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn)：

①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞為（++++）。

②呈數(shù)個(gè)大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞為（+++）。

③數(shù)個(gè)小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒，游離紅細(xì)胞約占1／2為（++）。

④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團(tuán)中有5～8個(gè)以上紅細(xì)胞凝集為（+）。

⑤可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細(xì)胞（±）。

⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。

⑦鏡下未見細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布為（-）。凝膠微柱法

是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標(biāo)本，用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化，定量加樣，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

準(zhǔn)血清均采自健康人，并應(yīng)符合下述條件：①特異性：只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。②效價(jià)：我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價(jià)均在1：128以上。③親和力：我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對(duì)A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間分別是15s、30s和45s；抗B對(duì)B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時(shí)，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價(jià)：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。[3] 編輯本段注意事項(xiàng)

1、所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。

2、加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。

3、雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。

4、幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

5、玻片法反應(yīng)時(shí)間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。

6、正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報(bào)告。

7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應(yīng)用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價(jià)增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價(jià)又低，因而出生6個(gè)月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯(cuò)誤。[4]

ABO血型系統(tǒng)

英文：ABO blood group system 根據(jù)紅細(xì)胞表面有無特異性抗原（凝集原）A和B來劃分的血液類型系統(tǒng)。ABO血型系統(tǒng)是1900年奧地利蘭茨泰納發(fā)現(xiàn)和確定的人類第一個(gè)血型系統(tǒng)。根據(jù)凝集原A、B的分布把血液分為A、B、AB、0四型。紅細(xì)胞上只有凝集原A的為A型血，其血清中有抗B凝集素；紅細(xì)胞上只有凝集原B的為B型血，其血清中有抗A的凝集素；紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原都有的為AB型血，其血清中無抗A、抗B凝集素；紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原皆無者為O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的紅細(xì)胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。輸血時(shí)若血型不合會(huì)使輸入的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，引起血管阻塞和血管內(nèi)大量溶血，造成嚴(yán)重后果。所以在輸血前必須作血型鑒定。正常情況下只有ABO血型相同者可以相互輸血。在缺乏同型血源的緊急情況下，因O型紅細(xì)胞無凝集原，不會(huì)被凝集，可輸給任何其他血型的人。AB型的人，血清中無凝集素，可接受任何型的紅細(xì)胞。但是異型輸血輸入量大時(shí)，輸入血中的凝集素未能被高度稀釋，有可能使受血者的紅細(xì)胞凝集。所以大量輸血時(shí)仍應(yīng)采用同型血。臨床上在輸血前除鑒定ABO血型外，還根據(jù)凝集反應(yīng)原理，將供血者和受血者的血液作交叉配血實(shí)驗(yàn)，在體外確證兩者血液相混不發(fā)生凝集，方可進(jìn)行輸血以確保安全。近年來發(fā)現(xiàn)存在于紅細(xì)胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血細(xì)胞和一般組織細(xì)胞。所有細(xì)胞表面血型抗原的特異性可作為機(jī)體免疫系統(tǒng)鑒別自身和異物的標(biāo)志。因此，在臨床實(shí)踐中血型鑒定也是組織器官移植成敗的關(guān)鍵。人類血型有遺傳特性，決定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分別受ABO三個(gè)等位基因控制。A、B基因?yàn)轱@性基因，O（H）基因?yàn)殡[性基因。它們的遺傳規(guī)律所顯示的父、母血型與子代血型間的關(guān)系，在法醫(yī)學(xué)上可作為否定親子關(guān)系的依據(jù)，若再配合其他血型系統(tǒng)的測(cè)定，則可判斷親子關(guān)系。

血型不僅在輸血上有重要意義，而且在人種學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有應(yīng)用價(jià)值，在輸血前，一定要檢查病人(受血者)和輸血人（供血者）的血型，并且要進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)。在臨床醫(yī)學(xué)中，除輸血、移植免疫外，對(duì)新生兒溶血病、自身免疫性溶血性貧血特異性抗體的檢查，也都需要血型知識(shí)和有關(guān)技術(shù)。ABO血型抗原具有種族差異。例如，中歐地區(qū)的人群中，約40％以上的人為A型，近40％的人為O型，10％的人為B型，6％的人為AB型；而90％的美洲土著人為O型。[5] 編輯本段舉例分析

通常只用兩種抗血清即抗A及抗B血清，就可將群體分為四種血型。

根據(jù)血型的遺傳規(guī)律，和臨床工作方例起見，配偶間所生子女的血型如下：

各種ABO配偶所生子女的血型:

婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

A×A A、O B、AB

A×B A、B、O、AB 無

A×AB A、B、AB O

A×O A、O B、AB

B×B B、O A、AB

B×AB A、B、AB O

B×O B、O A、AB

AB×AB A、B、AB O

AB×O A、B AB、O

O×O O A、B、AB

婚配式 A型血的可能 B型血的可能

A*A 75% 0% 25% 0%

A*B 25% 25% 25% 25%

A*O 50% 0% 50% 0%

A*AB 50% 25% 0% 25%

B*B 0% 75% 25% 0%

B*O 0% 75% 25% 0%

O型血的可能AB型血的可能

B*AB 25% 50% 0% 25%

O*O 0% 0% 100% 0%

O*AB 50% 50% 0% 0%

AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鑒定總結(jié)

AB0血型鑒定原理

常用鹽水凝集法檢測(cè)紅細(xì)胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有：①正向定型：用已知抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定：凡紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集者為陽性，呈散在游離狀態(tài)為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

鑒定方法

（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標(biāo)本檢查，但反應(yīng)時(shí)間長；被檢查者如血清抗體效價(jià)低，則不易引起紅細(xì)胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應(yīng)，故反應(yīng)時(shí)間短，而且，借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)凝集作用，適于急診檢查。

紅細(xì)胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)低時(shí)，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯(cuò)誤。

玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細(xì)胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細(xì)胞分散。在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn)：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞為（++++）。②呈數(shù)個(gè)大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞為（+++）。③數(shù)個(gè)小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒，游離紅細(xì)胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團(tuán)中有5～8個(gè)以上紅細(xì)胞凝集為（+）。⑤可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細(xì)胞（±）。⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布為（-）。

（2）凝膠微柱法：是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標(biāo)本，用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化，定量加樣，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

準(zhǔn)血清均采自健康人，并應(yīng)符合下述條件：①特異性：只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。②效價(jià)：我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價(jià)均在1：128以上。③親和力：我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對(duì)A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間分別是15s、30s和45s；抗B對(duì)B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時(shí)，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價(jià)：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。血型鑒定操作時(shí)注意事項(xiàng)

一般注意事項(xiàng)：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。④幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應(yīng)時(shí)間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。⑥正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報(bào)告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應(yīng)用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價(jià)增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價(jià)又低，因而出生6個(gè)月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯(cuò)誤。[6]

第三篇：實(shí)驗(yàn)六ABO血型鑒定、血涂片的制作與血細(xì)胞顯微觀察(精)

實(shí)驗(yàn)六：ABO血型鑒定、血涂片的制作與血細(xì)胞顯微觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解 ABO 和 Rh 血型分類系統(tǒng)的背景知識(shí)和遺傳學(xué)原理 2.掌握微量采血及血涂片的制作方法

3.學(xué)習(xí)使用光學(xué)顯微鏡觀察和區(qū)分紅細(xì)胞與各種白細(xì)胞

二、實(shí)驗(yàn)材料

1.實(shí)驗(yàn)材料 ：醫(yī)用采血針、酒精棉球、載玻片、血推片、消毒牙簽 2.實(shí)驗(yàn)試劑： 瑞氏染液、抗 B 血清、抗 A 血清、生理鹽水、蒸餾水 3.儀器設(shè)備： Motic 光學(xué)顯微鏡

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法 ABO 血型鑒定

1.1 取一塊清潔玻片，用記號(hào)筆標(biāo)上記號(hào)。

1.2 用小滴管吸 A 型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗 B）一滴加入左側(cè)，用另一小滴管吸 B 型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗 A）一滴加入右側(cè)

1.3 以穿刺法自左手無名指指尖取血，在玻片的每側(cè)各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側(cè)抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。

1.4 靜置室溫下 10—15min 后，觀察有無凝集現(xiàn)象，并據(jù)此判斷血型。2 血涂片的制作及血細(xì)胞觀察

2.1 取末捎血一滴置于玻片的一端 , 左手持載玻片 , 右手以邊緣平滑的推片的一端從血滴前方后移接觸血滴，血滴即沿推片散開。然后便推片與載片夾角保持 30-45 度平穩(wěn)地向前移動(dòng) , 載片上保留下一薄層血膜

2.2 血涂片制成后可手持玻片在空氣中揮動(dòng) , 使血膜迅速干燥 , 以免血細(xì)胞皺縮.2.3 用蠟筆在血膜兩側(cè)劃線 , 以防染液溢出 , 然后將血膜平放在染色架上.加瑞氏

染液 2-3 滴 , 使覆蓋整個(gè)血膜 , 固定 0.5-1.0 分鐘.滴加等量或稍多的新鮮蒸餾水 , 與染料混勻染色 5-10 分鐘.2.4 用清水沖去染液 , 待自然干燥后或用吸水紙吸干 , 即可置血涂片于顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。

2.5 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù): 選擇涂片的體尾交界處染色良好的區(qū)域 , 在油鏡下計(jì)數(shù) 100 個(gè)紅細(xì)胞 , 按其形態(tài)特征進(jìn)行分類計(jì)數(shù) , 求出各類細(xì)胞所占比值。

注：

1.瑞氏染液 : 瑞氏染料 1g 加甲醇(AR)600ML。將瑞氏染料放在清潔干燥乳缽中 , 加少量甲醇 , 充分研磨使染料溶解.將已完全溶解的部分倒入棕色試劑瓶中 , 未溶解部分再加少量甲醇研磨 , 直至染料完全溶解于甲醇為止.新配制的染料偏堿 , 須在室溫和 37℃ 下一定時(shí)間待染料成熟 , 主要美藍(lán)逐漸增多為天青 B 后才能使用.貯存時(shí)間越久染色效果越好 , 因此 ,Deamgilliland 等采用吸光度比值(rA)作為瑞氏染料的質(zhì)量規(guī)格.rA 測(cè)定方法如下 : 取瑞氏染液 15-25ul(視染液濃度而定)加甲醇 10ml 稀釋 , 混勻后以甲醇為空白管分別以波長 650nm,525nm 比色 ,rA=A650/A525。因?yàn)槊浪{(lán)吸收峰為波長 650nm, 伊紅吸收峰波長為 525nm, 天青 B 吸收峰也為 650nm, 但吸光度 A 約為美藍(lán)的一半.所以新配制染料的 RA 接近2, 隨著美藍(lán)逐漸氧化為天青 B,RA 也相應(yīng)下降 ,RA 下降達(dá) 1.3±0.1 即可使用.瑞氏染料在貯存過程中必須塞嚴(yán) , 以防甲醇揮發(fā)和氧化為甲酸.有人主張配方中加入 30ml 甘油 , 防止甲酸揮發(fā) , 并可使細(xì)胞染色清晰.甲醇必須純凈 , 如甲醇中丙酮含量過多 , 染色偏酸 , 使細(xì)胞著色不良.2.磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)：磷酸二氫鉀 0.3g 加磷酸氫二鈉 0.2g 再加蒸餾水至 1000ml, 配制成磷酸鹽緩沖液調(diào)整 PH, 如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替.3.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)正常參考值 細(xì)胞類別 成人

桿狀核 0.01-0.05 分葉核 0.50-0.70

嗜酸性粒細(xì)胞 0.005-0.05 嗜堿性粒細(xì)胞 0-0.01 淋巴細(xì)胞 0.20-0.40 單核細(xì)胞 0.03-0.08

四、注意事項(xiàng)

1)玻片的清洗：新玻片常有游離堿質(zhì) , 因此應(yīng)用清洗液或 10% 鹽酸浸泡 24 小時(shí) , 然后再徹底清洗。用過的玻片可放入適量肥皂水或合成洗滌劑的清水中煮沸 20 分鐘 , 再用熱水將肥皂和血膜洗去 , 用自來水反復(fù)沖洗 , 必要時(shí)再置 95% 乙醇中浸泡 1 小時(shí) , 然后擦干或烤干備用。使用玻片時(shí)只能手持玻片邊緣 , 切勿觸及玻片表面;, 以保持玻片清潔 , 干燥 , 中性、無油膩。

2)細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感 , 在染色過程中玻片必須化學(xué)清潔 , 配制瑞氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇 , 稀釋染液必須用緩沖液 , 沖洗用水應(yīng)近中性 , 否則各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常 , 致使細(xì)胞的識(shí)別困難 , 甚至造成錯(cuò)誤。

3)一張良好的血片 , 要求厚薄適宜 , 頭體尾分明 , 分布均勻 , 邊緣整齊 , 兩側(cè)留有空隙。血片制好后最好立即固定染色 , 以免細(xì)胞溶解和發(fā)生退行性變。

4)血膜未干透 , 細(xì)胞尚未牢固附在玻片上 , 在染色過程中容易脫落 , 因此血膜必需充分干燥.5)染色時(shí)間與染液濃度 , 室溫高低 , 細(xì)胞多少有關(guān).染液越淡 , 室溫越低 , 細(xì)胞越多 , 所需染色時(shí)間越長或應(yīng)適當(dāng)增加染液量 , 因此染色時(shí)間應(yīng)視具體情況而定.特別是更換新染料時(shí)必須經(jīng)試染 , 摸索最佳染色條件.6)染液不可過少 , 以防蒸發(fā)干燥染料沉著于血片上難沖洗干凈.7)沖洗時(shí)應(yīng)用流水將染液沖去.不能先倒掉染液 , 以免染料沉著于血片上.8)染色過深可用甲醇或酒精適當(dāng)脫色 , 最好不復(fù)染 , 必須復(fù)染時(shí) , 可將染液先稀釋好再復(fù)染.9)染色時(shí)應(yīng)注意保護(hù)血膜尾部細(xì)胞 , 不能劃掉.因?yàn)轶w積較大細(xì)胞常在此處出現(xiàn).染色結(jié)果 : 在正常情況下血膜外觀為粉紅色 , 在顯微鏡下紅細(xì)胞呈肉紅色；白細(xì)胞胞漿能顯示各種細(xì)胞的特有色彩 , 細(xì)胞核染紫紅色 , 染色質(zhì)清楚 , 粗細(xì)松緊可辨。染色結(jié)果偏酸 , 則紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞顆粒偏紅 , 白細(xì)胞核呈淺藍(lán)色或不著色；染色結(jié)果偏堿 , 則所有細(xì)胞染成灰藍(lán)色 , 顆粒深暗，嗜酸性顆?？扇境砂岛稚?, 甚至紫黑色或藍(lán)色。嗜中性顆粒偏粗 , 偏堿(紫黑色).血片原處呈綠色.五、思考題

(1)如何區(qū)別血液的凝集和凝固？其機(jī)理有何差別？

(2)根據(jù)你的血型，判斷你能接受何種血型并且能夠給何種血型供血？

(3)O 型血人又被稱為“萬能供血者”，試根據(jù) ABO 血型分型作出你對(duì)這一說法的理解(4)試根據(jù)父母的血型，寫出后代的可能血型：

第四篇：試管法ABO血型鑒定

試管法ABO血型鑒定

1.檢驗(yàn)?zāi)康?/p>

鑒定供受血者ABO血型，保證臨床輸血安全。2．檢驗(yàn)方法 試管法 2.1.試管法 2.1.1.實(shí)驗(yàn)原理

ABO血型鑒定，是根據(jù)IgM類特異性血型抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原結(jié)合能出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理，用已知IgM類特異性標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清來測(cè)定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或（和）B抗原，同時(shí)用已知標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞和B型紅細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的天然IgM類抗A或（和）抗B。2.1.2.標(biāo)本要求

靜脈EDTA抗凝血2.0～3.0ml，以3000r/min離心3分鐘，分離上清液。2.1.3.試劑

單克隆或多克隆抗A、抗B試劑，3-5% A、B及O型試劑標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液。2.1.4.器材

離心機(jī)，4℃冰箱、顯微鏡，12×70mm試管(以下稱“小試管”),滴管，10mm×60mm透明的玻璃試管或塑料試管。2.1.5.操作步驟

2.1.5．1．正定型（查抗原）：取試管2支，分別標(biāo)明抗A、抗B，加入抗A和抗B分型血清各2滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻。

2.1.5．2.反定型（查抗體）：取試管3支，分別標(biāo)明A型、B型和O型細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B、O型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。

2.1.5．3.立即以3000r/min離心10秒。（離心時(shí)間為離心機(jī)校準(zhǔn)時(shí)間）。2.1.5．4.輕輕搖動(dòng)試管，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象,如肉眼觀察不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡下觀察有無凝集。2.1.5．5.凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)

＋＋＋＋：紅細(xì)胞凝集成一大片或幾片，僅有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞，血清清晰透明。

＋＋＋：紅細(xì)胞凝集成數(shù)個(gè)大顆粒凝塊，有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞，血清透明。

＋＋：紅細(xì)胞凝成數(shù)個(gè)小顆粒凝塊，游離紅細(xì)胞＜1/2。＋：紅細(xì)胞凝成數(shù)個(gè)小顆粒凝塊，游離紅細(xì)胞＞1/2?！溃杭t細(xì)胞凝成數(shù)個(gè)微小顆粒凝塊，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF：混合凝集外觀（mixed field，MF），鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞呈分散分布。

－：陰性，鏡下未見紅細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布。HP：部分溶血（part hemolysis，HP），有些殘留紅細(xì)胞。H：完全溶血（hemolysis，H），無殘留紅細(xì)胞。2.1.5.6.報(bào)告受檢者紅細(xì)胞ABO血型（表1001-1）。

表1001-1 ABO血型鑒定結(jié)果判斷

分型血清＋受檢者紅細(xì)胞

抗A ＋ － － ＋ 抗B － ＋ － ＋

A B O AB 受檢者血型

A細(xì)胞 － ＋ ＋ －

B細(xì)胞 ＋ － ＋ －

O細(xì)胞 － － － －

受檢者血清＋試劑紅細(xì)胞

注：＋為凝集；－為不凝集

第五篇：ABO血型鑒定假陽性的原因淺析（精選）

ABO血型鑒定正反定型不一致的原因淺析

【摘 要】目的：探討ABO血型正反定型不一樣的原因。方法：ABO血型玻片法正定型和試管法反定型。

結(jié)果：血型鑒定的過程中會(huì)有某些干擾因素引起一些假象，造成血型鑒定假陰性或假陽性反應(yīng)。結(jié)論：臨床應(yīng)采用正反定型對(duì)照的方法來確認(rèn)血型，以免受各界因素影響而誤導(dǎo)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的判斷。

血型是以血液抗原形式表現(xiàn)出來的一種遺傳性狀，一般是不會(huì)發(fā)生改變的。我們平常所稱的血型泛指ABO血型系統(tǒng)和RH血型系統(tǒng)。這兩種血型系統(tǒng)不合極易造成輸血反應(yīng)，所以ABO血型鑒定的準(zhǔn)確性是十分重要的。而血型鑒定的過程中會(huì)有某些干擾因素造成一些假象，如血液中含有較高的冷凝集素或自身免疫性抗體，使受檢者紅細(xì)胞上的抗原減弱等因素，造成血型鑒定假陰性或假陽性反應(yīng)，病人血清或血漿中的白細(xì)胞過多，堵塞了凝膠間隙，從而影響了紅細(xì)胞的沉降，造成假陽性等。從而出現(xiàn)正反定型不一致的情況，在這里我們淺析一下影響因素。

（1）新生兒:6個(gè)月以內(nèi)的嬰兒抗體多來自母親，自身血型抗體效價(jià)又低，反定型時(shí)可能不凝集或凝集很弱，所以不宜做反向定型。

（2）老年人:隨年齡增長老年人抗體水平呈逐漸下降趨勢(shì)，造成鑒定困難。

（3）白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制藥患者、先天性丙種球蛋白缺乏癥等。

（4）被檢紅細(xì)胞凝集力減弱，如A 2、A 2 B等亞型紅細(xì)胞抗原性弱或由于惡病質(zhì)病人，如白血病、某些惡性腫瘤使A或B抗原變?nèi)酰律鷥杭t細(xì)胞血型抗原形成不足等。

（5）全凝集與多凝集紅細(xì)胞:紅細(xì)胞被細(xì)菌污染，細(xì)菌酶消化了紅細(xì)胞表面的唾液酸，暴露出T抗原而被激活，正常人紅細(xì)胞上有T抗原，血清中有抗T，但因紅細(xì)胞表面存在的唾液酶T抗原無活性，當(dāng)紅細(xì)胞被細(xì)菌污染后，使紅細(xì)胞與多數(shù)人血清凝集稱為多凝集，如與所有人血清都凝集稱為全凝集。對(duì)這兩種疑為全凝集或多凝集紅細(xì)胞時(shí)，用多份AB型血清加以證實(shí)，因此種現(xiàn)象與AB型血清也發(fā)生凝集，應(yīng)重新抽血，用標(biāo)準(zhǔn)的定型方法來測(cè)定患者準(zhǔn)確血型。

（6）獲得性B表現(xiàn)，某些腸道桿菌感染的患者，由于細(xì)菌等引起的獲得性類B抗原，易產(chǎn)生假陽性結(jié)果，A型患者出現(xiàn)類B可判為AB型，O型錯(cuò)判為B型，此種現(xiàn)象當(dāng)病情好轉(zhuǎn)類B即消失。

（7）某些疾病如肝病、腎炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相對(duì)或絕對(duì)性增高，多發(fā)性骨髓瘤因患者血清中病理性球蛋白增加易形成錢串狀排列，而外觀類似凝集，臨床應(yīng)用血漿擴(kuò)容劑如低分子右旋糖酐均可使紅細(xì)胞成錢串狀假凝集。真與假的區(qū)別是在鏡下觀察時(shí)，假凝集紅細(xì)胞呈錢串狀排列，形狀基本完整，加一滴等滲鹽水于玻片上并混勻后錢串排列消失，而真凝集加等滲鹽水凝集不消失，紅細(xì)胞不會(huì)散開。

（8）反應(yīng)溫度不合適亦會(huì)造成假性結(jié)果。ABO血型鑒定主要測(cè)定體內(nèi)的完全抗體，完全抗體最適溫度多在22℃至4℃左右，屬于IgM抗體，為冷性抗體，許多IgM類型的抗體在4℃時(shí)的反應(yīng)強(qiáng)度遠(yuǎn)高于37℃。另外血型鑒定方法也會(huì)影響結(jié)果。如玻片法定型簡單，不需要離心設(shè)備，僅靠抗體的力量，凝集紅細(xì)胞而無離心的加速反應(yīng)，所以反應(yīng)的時(shí)間較長，不適合急診，另亞型紅細(xì)胞抗原與抗體的凝集反應(yīng)慢，凝集強(qiáng)度弱，有時(shí)容易被忽略而導(dǎo)致定型錯(cuò)誤，不適合用于反定型和交叉配血，只適于大規(guī)模血型普查。而試管法定型反應(yīng)快，需時(shí)短，特別是緊急輸血時(shí)可在抗原抗體反應(yīng) 1min后離心觀察結(jié)果。通過離心增強(qiáng)凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的抗原抗體反應(yīng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為臨床常規(guī)應(yīng)用的方法。

為臨床輸血安全在鑒定血型時(shí)采用正反定型，正定型是用標(biāo)準(zhǔn)血型抗體，對(duì)紅細(xì)胞膜上ABO系統(tǒng)血型抗原的鑒定。反定型是用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞抗原對(duì)血清中ABO系統(tǒng)血型抗體的鑒定，其目的在于復(fù)檢正定型結(jié)果的準(zhǔn)確性糾正漏檢誤報(bào)，特別是一些具有弱抗原的亞型，正定型易被忽略，此外反定型還可以糾正某些腫瘤病人因紅細(xì)胞抗原性減弱造成的正定型錯(cuò)誤以及克服排除獲得性類B抗原和全凝集現(xiàn)象對(duì)紅細(xì)胞定型的干擾，可發(fā)現(xiàn)血清中存在的一些不規(guī)則抗體等。

總而言之，血型鑒定是一項(xiàng)重要而嚴(yán)肅的工作，關(guān)系到患者的生命安全。檢驗(yàn)人員必須認(rèn)真負(fù)責(zé)，嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，熟練掌握操作步驟，能察覺出檢驗(yàn)結(jié)果的異樣，并認(rèn)真復(fù)查。盡可能的規(guī)避干擾因素，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

【參考文獻(xiàn)】

馮春顏，吳文權(quán)，彭友堂等。ABO血型鑒定結(jié)果的質(zhì)量控制方法。現(xiàn)代簡檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007.22:113-114 王晨，錢寶華，韋燕萍等。7例ABO血型抗體減弱或缺乏的臨床分析。臨床輸血與檢驗(yàn)雜志，2008.10:243-245.