第一篇：試管法ABO血型鑒定

試管法ABO血型鑒定

1.檢驗?zāi)康?/p>

鑒定供受血者ABO血型，保證臨床輸血安全。2．檢驗方法 試管法 2.1.試管法 2.1.1.實(shí)驗原理

ABO血型鑒定，是根據(jù)IgM類特異性血型抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原結(jié)合能出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理，用已知IgM類特異性標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或（和）B抗原，同時用已知標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞和B型紅細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的天然IgM類抗A或（和）抗B。2.1.2.標(biāo)本要求

靜脈EDTA抗凝血2.0～3.0ml，以3000r/min離心3分鐘，分離上清液。2.1.3.試劑

單克隆或多克隆抗A、抗B試劑，3-5% A、B及O型試劑標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液。2.1.4.器材

離心機(jī)，4℃冰箱、顯微鏡，12×70mm試管(以下稱“小試管”),滴管，10mm×60mm透明的玻璃試管或塑料試管。2.1.5.操作步驟

2.1.5．1．正定型（查抗原）：取試管2支，分別標(biāo)明抗A、抗B，加入抗A和抗B分型血清各2滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻。

2.1.5．2.反定型（查抗體）：取試管3支，分別標(biāo)明A型、B型和O型細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B、O型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。

2.1.5．3.立即以3000r/min離心10秒。（離心時間為離心機(jī)校準(zhǔn)時間）。2.1.5．4.輕輕搖動試管，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象,如肉眼觀察不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡下觀察有無凝集。2.1.5．5.凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)

＋＋＋＋：紅細(xì)胞凝集成一大片或幾片，僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞，血清清晰透明。

＋＋＋：紅細(xì)胞凝集成數(shù)個大顆粒凝塊，有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞，血清透明。

＋＋：紅細(xì)胞凝成數(shù)個小顆粒凝塊，游離紅細(xì)胞＜1/2。＋：紅細(xì)胞凝成數(shù)個小顆粒凝塊，游離紅細(xì)胞＞1/2。±：紅細(xì)胞凝成數(shù)個微小顆粒凝塊，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF：混合凝集外觀（mixed field，MF），鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞呈分散分布。

－：陰性，鏡下未見紅細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布。HP：部分溶血（part hemolysis，HP），有些殘留紅細(xì)胞。H：完全溶血（hemolysis，H），無殘留紅細(xì)胞。2.1.5.6.報告受檢者紅細(xì)胞ABO血型（表1001-1）。

表1001-1 ABO血型鑒定結(jié)果判斷

分型血清＋受檢者紅細(xì)胞

抗A ＋ － － ＋ 抗B － ＋ － ＋

A B O AB 受檢者血型

A細(xì)胞 － ＋ ＋ －

B細(xì)胞 ＋ － ＋ －

O細(xì)胞 － － － －

受檢者血清＋試劑紅細(xì)胞

注：＋為凝集；－為不凝集

第二篇：abo血型鑒定

生理鹽水凝集法

①玻片法：操作簡單，適于大量標(biāo)本檢查，但反應(yīng)時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細(xì)胞凝集，因此，不適于反向定型。

②試管法：由于離心作用可加速凝集反應(yīng)，故反應(yīng)時間短，而且，借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)凝集作用，適于急診檢查。

紅細(xì)胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細(xì)胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細(xì)胞分散。

在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn)：

①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（++++）。

②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（+++）。

③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒，游離紅細(xì)胞約占1／2為（++）。

④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團(tuán)中有5～8個以上紅細(xì)胞凝集為（+）。

⑤可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細(xì)胞（±）。

⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。

⑦鏡下未見細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布為（-）。凝膠微柱法

是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標(biāo)本，用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化，定量加樣，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

準(zhǔn)血清均采自健康人，并應(yīng)符合下述條件：①特異性：只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。[3] 編輯本段注意事項

1、所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。

2、加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。

3、雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。

4、幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

5、玻片法反應(yīng)時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。

6、正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。

7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應(yīng)用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[4]

ABO血型系統(tǒng)

英文：ABO blood group system 根據(jù)紅細(xì)胞表面有無特異性抗原（凝集原）A和B來劃分的血液類型系統(tǒng)。ABO血型系統(tǒng)是1900年奧地利蘭茨泰納發(fā)現(xiàn)和確定的人類第一個血型系統(tǒng)。根據(jù)凝集原A、B的分布把血液分為A、B、AB、0四型。紅細(xì)胞上只有凝集原A的為A型血，其血清中有抗B凝集素；紅細(xì)胞上只有凝集原B的為B型血，其血清中有抗A的凝集素；紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原都有的為AB型血，其血清中無抗A、抗B凝集素；紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原皆無者為O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的紅細(xì)胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。輸血時若血型不合會使輸入的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，引起血管阻塞和血管內(nèi)大量溶血，造成嚴(yán)重后果。所以在輸血前必須作血型鑒定。正常情況下只有ABO血型相同者可以相互輸血。在缺乏同型血源的緊急情況下，因O型紅細(xì)胞無凝集原，不會被凝集，可輸給任何其他血型的人。AB型的人，血清中無凝集素，可接受任何型的紅細(xì)胞。但是異型輸血輸入量大時，輸入血中的凝集素未能被高度稀釋，有可能使受血者的紅細(xì)胞凝集。所以大量輸血時仍應(yīng)采用同型血。臨床上在輸血前除鑒定ABO血型外，還根據(jù)凝集反應(yīng)原理，將供血者和受血者的血液作交叉配血實(shí)驗，在體外確證兩者血液相混不發(fā)生凝集，方可進(jìn)行輸血以確保安全。近年來發(fā)現(xiàn)存在于紅細(xì)胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血細(xì)胞和一般組織細(xì)胞。所有細(xì)胞表面血型抗原的特異性可作為機(jī)體免疫系統(tǒng)鑒別自身和異物的標(biāo)志。因此，在臨床實(shí)踐中血型鑒定也是組織器官移植成敗的關(guān)鍵。人類血型有遺傳特性，決定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分別受ABO三個等位基因控制。A、B基因為顯性基因，O（H）基因為隱性基因。它們的遺傳規(guī)律所顯示的父、母血型與子代血型間的關(guān)系，在法醫(yī)學(xué)上可作為否定親子關(guān)系的依據(jù)，若再配合其他血型系統(tǒng)的測定，則可判斷親子關(guān)系。

血型不僅在輸血上有重要意義，而且在人種學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有應(yīng)用價值，在輸血前，一定要檢查病人(受血者)和輸血人（供血者）的血型，并且要進(jìn)行交叉配血試驗。在臨床醫(yī)學(xué)中，除輸血、移植免疫外，對新生兒溶血病、自身免疫性溶血性貧血特異性抗體的檢查，也都需要血型知識和有關(guān)技術(shù)。ABO血型抗原具有種族差異。例如，中歐地區(qū)的人群中，約40％以上的人為A型，近40％的人為O型，10％的人為B型，6％的人為AB型；而90％的美洲土著人為O型。[5] 編輯本段舉例分析

通常只用兩種抗血清即抗A及抗B血清，就可將群體分為四種血型。

根據(jù)血型的遺傳規(guī)律，和臨床工作方例起見，配偶間所生子女的血型如下：

各種ABO配偶所生子女的血型:

婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

A×A A、O B、AB

A×B A、B、O、AB 無

A×AB A、B、AB O

A×O A、O B、AB

B×B B、O A、AB

B×AB A、B、AB O

B×O B、O A、AB

AB×AB A、B、AB O

AB×O A、B AB、O

O×O O A、B、AB

婚配式 A型血的可能 B型血的可能

A*A 75% 0% 25% 0%

A*B 25% 25% 25% 25%

A*O 50% 0% 50% 0%

A*AB 50% 25% 0% 25%

B*B 0% 75% 25% 0%

B*O 0% 75% 25% 0%

O型血的可能AB型血的可能

B*AB 25% 50% 0% 25%

O*O 0% 0% 100% 0%

O*AB 50% 50% 0% 0%

AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鑒定總結(jié)

AB0血型鑒定原理

常用鹽水凝集法檢測紅細(xì)胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有：①正向定型：用已知抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定：凡紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集者為陽性，呈散在游離狀態(tài)為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

鑒定方法

（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標(biāo)本檢查，但反應(yīng)時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細(xì)胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應(yīng)，故反應(yīng)時間短，而且，借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)凝集作用，適于急診檢查。

紅細(xì)胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細(xì)胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細(xì)胞分散。在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn)：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（++++）。②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（+++）。③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒，游離紅細(xì)胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團(tuán)中有5～8個以上紅細(xì)胞凝集為（+）。⑤可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細(xì)胞（±）。⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布為（-）。

（2）凝膠微柱法：是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標(biāo)本，用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化，定量加樣，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

準(zhǔn)血清均采自健康人，并應(yīng)符合下述條件：①特異性：只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。血型鑒定操作時注意事項

一般注意事項：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。④幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應(yīng)時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。⑥正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應(yīng)用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[6]

第三篇：ABO血型操作

長春博迅ABO、RhD血型定型檢測卡操作流程 【檢驗原理】

本試驗采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一定離心力下，該復(fù)合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或懸于膠中；如無相應(yīng)抗體結(jié)合，則不能形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一定的離心力下，分散的紅細(xì)胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部。【樣本要求】

標(biāo)本采集：采集被檢對象靜脈血，將該同一人血液分別制備成紅細(xì)胞標(biāo)本和血清標(biāo)本。

紅細(xì)胞標(biāo)本的制備：配制成0.5％-0.8％紅細(xì)胞懸液。

血清標(biāo)本的制備：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，2000rpm,10分鐘，取上清；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝試管中，4℃放置12小時，或37℃放置2小時后離心，2000rpm,10分鐘，取上清。該上清不得有絮狀物或沉淀。標(biāo)本必須充分去纖維蛋白，否則血清標(biāo)本中析出的或紅細(xì)胞懸液中殘余的纖維蛋白可阻礙紅細(xì)胞沉降，使非凝集細(xì)胞離心后在膠表面形成一條紅線，呈假陽性反應(yīng)。【操作步驟】

1.將微柱凝膠試劑卡的六支凝膠微管標(biāo)號。

2.將待檢者0.5％-0.8％紅細(xì)胞懸液分別加入第一至第四支微管中，每管50微升。3.將待檢者血清分別加入第五支和第六支

第四篇：ABO血型定型檢測作業(yè)指導(dǎo)書

ABO血型定型檢測作業(yè)指導(dǎo)書

1.目的：ABO血型定型檢測 2.適用范圍：

新鮮、無污染、無溶血的人全血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3 防腐。3.職責(zé)：

站（院）長批準(zhǔn)，專業(yè)負(fù)責(zé)人考核合格的優(yōu)生篩查實(shí)驗室檢驗人員履行此項工作。4.試劑：

4.1本法所用試劑為長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的抗A抗B血型定型試劑盒。

4.2本法所用試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用。5.設(shè)備儀器： 5.1醫(yī)用冰箱 5.2雙目顯微鏡

5.3微量可調(diào)移液器 6.原理：

本品系由經(jīng)配制的抗A血型或B血型單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液（或在上清液中加少量同型腹水）組成，專供鑒定人ABO血型用。7.程序：

7.1平衡：將在有效期內(nèi)試劑盒、待測適用樣品從冷藏環(huán)境中取出，平衡至室溫（18-25℃）。

7.2平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或紅細(xì)胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，按照有無凝集判定結(jié)果。

7.3試管法：本品與受檢者5%紅細(xì)胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，搖勻，1000r/min離心1分鐘或室溫靜置1小時，按照有無凝集判定結(jié)果。7.4結(jié)果判定

血型 A B AB O 7.5檢驗結(jié)果登記 8.相關(guān)程序

8.1設(shè)備管理程序

8.2設(shè)備校準(zhǔn)工作程序 8.3方法管理程序

8.4實(shí)驗標(biāo)本管理程序 8.5記錄控制程序

8.6優(yōu)生篩查服務(wù)管理程序 8.7實(shí)驗室管理制度

抗A試劑

++ 8.8員工守則

8.9保密和保護(hù)專有權(quán)管理程序 8.10檔案管理規(guī)定 9.相關(guān)記錄

9.1《環(huán)境條件記錄》 9.2《冰箱溫度記錄》 9.3《實(shí)驗標(biāo)本流轉(zhuǎn)單》

9.4《儀器設(shè)備使用維護(hù)記錄》

9.5《優(yōu)生篩查檢測結(jié)果登記表二》 9.6《實(shí)驗標(biāo)本處理表》 9.7《醫(yī)用垃圾處理記錄》

第五篇：ABO血型正反鑒定結(jié)果不符的原因分析

大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

ABO血型系統(tǒng)是人類發(fā)現(xiàn)的第一個血型系統(tǒng)，也是最重要的血型系統(tǒng)，對臨床輸血意義重大。ABO血型系統(tǒng)上有A、B、O、AB四種表型，也存在A亞型、B亞型、AB亞型。ABO系統(tǒng)抗原則有A、B、AB、A1抗原，在胎兒的第9周就可以檢測出來，這些抗原隨著個體基因變異或疾病的影響而改變。ABO血型系統(tǒng)有兩個特點(diǎn)：

一、人紅細(xì)胞上缺少某個抗原，血清中就存在針對該抗原的抗體，而且是高效價的；

二、不僅紅細(xì)胞上有ABO抗原，分泌型者得分泌液中也存在某抗原[1]。根據(jù)這一特性來判斷ABO血型。

臨床上，當(dāng)輸入ABO血型不相合的血液時，會引起溶血性輸血反應(yīng)[2]，嚴(yán)重時會危及生命。為了保障臨床輸血的安全，對ABO血型定型規(guī)定做正反定型。當(dāng)正反定型一致時，方可準(zhǔn)確確定ABO血型。但實(shí)驗中，往往會出現(xiàn)ABO正反定型不一致的情況。導(dǎo)致ABO正反定型不符的原因有很多，有試劑、方法、技術(shù)等因素的影響，更重要的是血液免疫因素的影響。本文就血液免疫因素方面對ABO正反定型的影響進(jìn)行研究。現(xiàn)將武漢血液中心2011年1~4月份健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不一致及1~4月份醫(yī)院送檢的正反定型不符的患者標(biāo)本進(jìn)行研究，報告如下。

一． 材料與方法

1.1標(biāo)本來源

武漢血液中心1~4月份健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符標(biāo)本及1~4月份各醫(yī)院送檢的正反定型不符而進(jìn)行疑難血型鑒定的標(biāo)本。其中健康獻(xiàn)血者80例，患者標(biāo)本35例。

1.2主要試劑與器材

試劑：抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清、抗-A1、抗-AB、譜細(xì)胞、O型試劑紅細(xì)胞均為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，人源性抗-A、抗-B，A、B型試劑紅細(xì)胞為本輸血研究室自制。

器材：離心機(jī)（日本久保田KA2200）；恒溫水浴箱（HH60）；顯微鏡（CKTV-2）。

1.3實(shí)驗方法 1.3.1 ABO正定型實(shí)驗

取兩支試管，分別加入兩滴抗-A、抗-B試劑，在各加一滴3-5％受檢者紅細(xì)胞懸液，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。懷疑為亞型時，再加做抗-AB、抗-H試驗。

1.3.2 ABO反定型實(shí)驗

取四支試管，先各加入兩滴受檢者血清，再分別加入一滴A、B、O型試劑紅細(xì)胞和受檢者紅細(xì)胞懸液，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。

1.3.3 吸收放散及唾液血型物質(zhì)檢測

吸收放散：用生理鹽水將3ml受檢者壓積紅細(xì)胞洗滌三次，取洗后的壓積紅細(xì)胞2ml，加入對應(yīng)的人源性抗血清，4℃下吸收1小時，吸收后用4℃生理鹽水洗滌5次，再放于56℃放散10min，數(shù)次振蕩，3500r/min離心1min，取2滴放散液，加入對應(yīng)的1滴A、B、O試劑紅細(xì)胞，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。

唾液血型物質(zhì)檢測：受檢者唾液離心去雜質(zhì)后，煮沸10min，3500r/min離心5min，以2+凝集強(qiáng)度為標(biāo)準(zhǔn)將抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清和抗-H標(biāo)化，取1滴上清液與標(biāo)化后的1滴抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清和抗-H中和，然后加入1滴對應(yīng)的A、B、O試劑紅細(xì)胞，混勻，大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

AB O AB 1 抗-JKb B AB AB 1 AmB亞型：A3B AB B AB 1 A2B有抗-A1 O A A 1 A亞型：Ael O B B 1 B亞型：Bel AB A AB 2 緡錢狀凝集 A AB AB 3 緡錢狀凝集 A O A 1 緡錢狀凝集 B O B 2 緡錢狀凝集 O A O 1 緡錢狀凝集 A O A 2 ABO以外抗體

陽性，譜細(xì)胞無法確定其特異性

B O B 1 同上 AB O AB 2 同上 AB A AB 3 同上 A AB A 1 同上 AB B AB 1 同上

O B O 1 同上

表-2健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符原因在血型分布情況

血型 例數(shù) 冷抗體 抗原減弱或缺乏 抗體減弱或缺乏 不規(guī)則抗體 緡錢狀凝集

A 26 12 1 1 11 1 B 23 7 1 0 13 2 O 8 2 0 0 5 1 AB 23 5 2 0 11 5

表-1表-2中，獻(xiàn)血者標(biāo)本中引起正反定型不符的原因：冷抗體占32.5％（26/80），抗原減弱或缺乏占5％（4/80），抗體減弱或缺乏占1.25％（1/80），不規(guī)則抗體占50％（40/80），緡錢狀凝集占11.25％（9/80）。

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三、討 論

本文研究排除技術(shù)因素及試劑因素對ABO正反定型不符的影響。筆者對80例ABO正反定型不符的健康獻(xiàn)血者及35例定型不符的疾病患者進(jìn)行ABO定型、吸收放散、抗體鑒定等實(shí)驗，對結(jié)果分析如下：

從表-1中可以看出，在健康獻(xiàn)血者中，引起ABO正反定型不符的主要原因是冷抗體32.5％（26/80）及不規(guī)則抗體50％（40/80）的產(chǎn)生。對于冷抗體，實(shí)驗中將反應(yīng)試管分別放在37℃水浴箱及4℃冰箱，改變反應(yīng)溫度來確認(rèn)冷抗體[3]，當(dāng)冷抗體存在時，可以將試管放于37℃下孵育，去除冷抗體后再準(zhǔn)確定型。在不規(guī)則抗體引起的正反定型不符中，最多的是由于抗-M引起不符，占16.25％（13/80），其次是抗-Leb占12.5％（10/80）,b這些獻(xiàn)血者無輸血史及妊娠史，這些抗體屬于天然抗體。抗-M及抗-Le都是不規(guī)則抗體，都會引起配血的不合，這類抗體如果在37℃鹽水介質(zhì)和抗人球蛋白反應(yīng)是陽性，輸血時則會產(chǎn)生輸血反應(yīng)[4]。對于此類獻(xiàn)血者建議今后不宜獻(xiàn)血，已獻(xiàn)的血液適合做洗滌紅細(xì)胞。表-1中還有一例是由于A2B產(chǎn)生抗-A1抗體而引起正反定型不符。A型抗原有兩種，A、A1，A1型人紅細(xì)胞上兩種抗原都有，A2型人紅細(xì)胞上只有A抗原[5]，在通常輸血前檢測試驗中，患者與獻(xiàn)血者的A1、A2型不必加以區(qū)分，除非當(dāng)A2型或A2B型人血清中有抗-A1抗體存在時[6]。22％--26％的A2B個體血清中可以檢出抗-Al[7]，抗-A1抗體在臨床上意義不大，多數(shù)在25℃以上無活性，也有幾例是由于抗-A1引起的溶血性輸血反應(yīng)[8]。對于A2B患者血清中存在抗-A1抗體的輸血，應(yīng)選擇A2B亞型血，若無可以選擇O型洗滌紅細(xì)胞。本文還有11例正反定型標(biāo)本，ABO以外抗體陽性，但上海譜細(xì)胞無法確定其特異性，此種情況可以增加譜細(xì)胞數(shù)，若仍不能確定特異性，可以采用分子生物學(xué)的方法來確定抗體的特異性。此外還有9例是由于緡錢狀凝集導(dǎo)致正反定型不符，可能與標(biāo)本使用的抗凝劑有關(guān)，EDTA抗凝劑能阻止補(bǔ)體的活化，補(bǔ)體存在時使反定型出現(xiàn)凝集[9]，導(dǎo)致正反定型的不符。4例亞型導(dǎo)致正反定型不符，減弱的抗原可以用吸收放散實(shí)驗檢測出來，它可以將抗原濃縮和粗純化，靈活運(yùn)用吸收放散實(shí)驗可以準(zhǔn)確定型[10]。出現(xiàn)亞型時，正定型加做抗-H、抗-AB,亞型紅細(xì)胞與抗-AB反應(yīng)是增強(qiáng)的[11]，檢測H抗原的量對亞型鑒定是有幫助的。

從表-2可以看出，本文研究的80例健康獻(xiàn)血者中，A型中出現(xiàn)ABO定型不符的例數(shù)最多，占32.5％（26/80），其次是B型、AB型，出現(xiàn)定型不符最少的血型是O型。可能是由于O血型的人體內(nèi)無A、B抗原，在抗原方面出現(xiàn)的變異情況少[12]。

在35例患者標(biāo)本中，從表-

3、4得出，抗原因素引起ABO正反定型不符的主要是白血病導(dǎo)致的抗原減弱。是因為白血病患者體內(nèi)N-乙酰半乳糖轉(zhuǎn)移酶受抑制，引起抗原的減弱[13]。而在抗體因素中，較多是由于患者體內(nèi)產(chǎn)生較多的不規(guī)則抗體導(dǎo)致定型不符，最多的是抗-M，這些患者多數(shù)都有輸血史及妊娠史，體內(nèi)發(fā)生同種免疫反應(yīng)產(chǎn)生的同種抗體，多為IgG類。還有1例腫瘤患者，免疫功能下降導(dǎo)致抗體合成受抑制，抗體缺乏導(dǎo)致定型不符。而自身免疫性溶血性貧血患者，自身抗體與紅細(xì)胞結(jié)合，在高蛋白質(zhì)溶液中可自發(fā)凝集，包被嚴(yán)重的在低蛋白ABO定型試劑中也可以凝集，使定型不符，可以用45℃生理鹽水洗去自身抗體后就能準(zhǔn)確定型。

綜上，排除試劑和技術(shù)因素的影響，導(dǎo)致ABO正反定型不符的原因有：（1）抗原減弱 此原因引起的定型不符，對健康獻(xiàn)血者是由于亞型，而患者則是疾病引起抗原減弱，最多的是白血病引起的減弱。（2）抗體減弱或缺乏 抗體水平與年齡有關(guān)。新生兒在出生后才產(chǎn)生IgM的ABO抗體，到3個月時才能檢測出來，5~10歲時抗體數(shù)目最多，隨后就漸漸下降，老年人在65~70歲以后，抗體水平最低。白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人，由于血漿蛋白質(zhì)中的丙種球蛋白減少從而導(dǎo)致抗體減

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4、血液免疫因素

4.1、抗原減弱或封閉導(dǎo)致ABO正反定型不符。遺傳基因可以決定紅細(xì)胞表面抗原減弱或缺乏，這些減弱或缺乏的抗原也可以是獲得性的。對于健康獻(xiàn)血者來說，亞型最可能導(dǎo)致抗原的減弱，而患者則是由于所患疾病。最多的是白血病患者引起的抗原減弱或消失。白血病患者在疾病活動期抗原減弱，通常情況下抗原減弱是暫時的，但是患者在疾病緩解期又會恢復(fù)回原來的血型[5]。為了將抗原減弱與亞型區(qū)別，可以通過延長反應(yīng)時間，在4℃放置后再試驗，同時加做吸收放散，有條件的可以進(jìn)行過唾液血型物質(zhì)檢測。懷疑亞型時，因為亞型紅細(xì)胞上H抗原數(shù)目是增多的，正定型可以加做紅細(xì)胞與抗-H、抗-AB抗體反應(yīng)，多數(shù)反應(yīng)比正常同型要強(qiáng)[6]，反定型加做血清與A1c、A2c細(xì)胞反應(yīng)，用吸收放散試驗來檢測紅細(xì)胞上是否有弱血型抗原及確定其亞型型別，檢測唾液血型物質(zhì)有助于ABO血型的準(zhǔn)確定型。此外，卵巢囊腫、胃癌或腸道阻塞的患者，本身血清中會有大量血型特異性的可溶物質(zhì)產(chǎn)生，能與抗-A抗-B試劑中和，使抗原被封閉，導(dǎo)致定型困難。這時可以將待檢測紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌三次后重新試驗。自免貧、輸血反應(yīng)、新生兒溶血病及服用抗高血壓藥物的患者，紅細(xì)胞由于被抗體致敏，使抗原被封閉，造成ABO正定型的困難，這時用吸收放散法去除致敏的抗體，然后再重復(fù)試驗來準(zhǔn)確定型。

4.2、未知的抗原反應(yīng)導(dǎo)致正反定型不符

（1）獲得性A或B抗原 患者紅細(xì)胞與抗-A試劑反應(yīng)，在顯微鏡下觀察到混合視野凝集，Tn抗原活化的紅細(xì)胞，證明有獲得性A抗原。獲得性B抗原的紅細(xì)胞反應(yīng)像AB型，血清內(nèi)有抗B抗體，多為患腸道阻塞和消化道疾病的患者，病情好轉(zhuǎn)時，獲得性B抗原也隨即消失。獻(xiàn)血者的獲得性B抗原，可能是原患疾病產(chǎn)生的，提倡對獻(xiàn)血者進(jìn)行健康調(diào)查時注意胃腸道患病史，避免此類獻(xiàn)血者[7]。

（2）改變的抗原 多凝集細(xì)胞是指紅細(xì)胞能被多數(shù)正常人血清所凝集，這種凝集反應(yīng)叫多凝集反應(yīng)，產(chǎn)生的原因有：T抗原活化（一般是紅細(xì)胞受到細(xì)菌等污染）、Tn抗原活化（與血液學(xué)方面異常有關(guān)如溶血性貧血）、Cad多凝集。相對應(yīng)的解決辦法是:對于是由于Tn活化導(dǎo)致的多凝集反應(yīng)，可用1％無花果酶或木瓜酶處理紅細(xì)胞，而T活化的多凝集反應(yīng)，由于其再室溫下反應(yīng)較強(qiáng)，在37℃下反應(yīng)則較弱，故實(shí)驗需在37℃下進(jìn)行。

（3）低頻率的抗原抗體反應(yīng) 抗血清試劑抗-A、抗-B中可能存在低頻率抗體，通常情況下，獻(xiàn)血者或患者紅細(xì)胞很少與抗血清試劑內(nèi)的低頻率抗體反應(yīng)，但在有料想不到的極弱抗原存在時應(yīng)該考慮低頻率的抗原抗體反應(yīng)。

4.3、抗體減弱或缺乏導(dǎo)致ABO正反定型不符

抗體的降低或缺乏，可以引起同族凝集素的減弱或缺乏。見于以下幾種情況：（1）嵌合現(xiàn)象 此原因?qū)е碌目贵w缺乏不是很常見。非同卵雙胎的個體，雙受精引起體內(nèi)都認(rèn)為是自己的兩種種群的紅細(xì)胞終生存在，這些人不會產(chǎn)生抗-A或抗-B抗體，從而導(dǎo)致正反定型不符。如骨髓移植后或換血治療的患者。（2）丙種球蛋白過低血癥、丙種球蛋白缺乏血癥 白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人，由于血漿蛋白質(zhì)中的丙種球蛋白減少從而導(dǎo)致抗體減少，使正反定型不符。通過在反定型時，增加反應(yīng)時間，加大血清量，在4℃溫度下放置5~10min后再進(jìn)行試驗來準(zhǔn)確定型。（3）年齡 正反定型不符情況在新生兒中出現(xiàn)最多。新生兒在出生后才產(chǎn)生IgM的ABO抗體，到3個月時才能檢測出來，5~10歲時抗體數(shù)目最多，隨后就漸漸下降，老年人在65~70歲以后，抗體水平最低。所以一般新生兒不做反定型，如果做反定型，可以加大血清量或?qū)嶒炛惺褂玫碗x子強(qiáng)度溶液。（4）從正在輸液患者一側(cè)靜脈采集血液標(biāo)本，采集血液的部位不規(guī)范，導(dǎo)致血液被稀釋而抗體反應(yīng)假性減弱[8]。當(dāng)非AB型病人大量輸

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ABO定型，可以用基因分型來避免假陰性結(jié)果。筆者建議研究中國人的ABO基因特點(diǎn)及分子遺傳背景，研制出適合我國人群的ABO血型鑒定試劑盒，提高血型鑒定的準(zhǔn)確性。

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致 謝

感謝我的指導(dǎo)老師沈鋼和石小玲老師。在整個實(shí)驗中，從選題、查資料、寫綜述，到試驗，以及最后統(tǒng)計、分析、攥寫論文，他們都傾注了很多心血，給予了我很大的指導(dǎo)和幫助。他們不僅教給了我科研工作的基本的流程和方法，更重要的是，他們教給我科研工作者必須具備的嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)態(tài)度。

感謝輸血研究室的各位老師對我的關(guān)懷，感謝武漢市紅十字血液中心的領(lǐng)導(dǎo)對我的關(guān)愛。