第一篇：ABO血型定型檢測作業(yè)指導(dǎo)書

ABO血型定型檢測作業(yè)指導(dǎo)書

1.目的：ABO血型定型檢測 2.適用范圍：

新鮮、無污染、無溶血的人全血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3 防腐。3.職責(zé)：

站（院）長批準(zhǔn)，專業(yè)負(fù)責(zé)人考核合格的優(yōu)生篩查實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員履行此項工作。4.試劑：

4.1本法所用試劑為長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的抗A抗B血型定型試劑盒。

4.2本法所用試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用。5.設(shè)備儀器： 5.1醫(yī)用冰箱 5.2雙目顯微鏡

5.3微量可調(diào)移液器 6.原理：

本品系由經(jīng)配制的抗A血型或B血型單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液（或在上清液中加少量同型腹水）組成，專供鑒定人ABO血型用。7.程序：

7.1平衡：將在有效期內(nèi)試劑盒、待測適用樣品從冷藏環(huán)境中取出，平衡至室溫（18-25℃）。

7.2平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或紅細(xì)胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，按照有無凝集判定結(jié)果。

7.3試管法：本品與受檢者5%紅細(xì)胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，搖勻，1000r/min離心1分鐘或室溫靜置1小時，按照有無凝集判定結(jié)果。7.4結(jié)果判定

血型 A B AB O 7.5檢驗(yàn)結(jié)果登記 8.相關(guān)程序

8.1設(shè)備管理程序

8.2設(shè)備校準(zhǔn)工作程序 8.3方法管理程序

8.4實(shí)驗(yàn)標(biāo)本管理程序 8.5記錄控制程序

8.6優(yōu)生篩查服務(wù)管理程序 8.7實(shí)驗(yàn)室管理制度

抗A試劑

++ 8.8員工守則

8.9保密和保護(hù)專有權(quán)管理程序 8.10檔案管理規(guī)定 9.相關(guān)記錄

9.1《環(huán)境條件記錄》 9.2《冰箱溫度記錄》 9.3《實(shí)驗(yàn)標(biāo)本流轉(zhuǎn)單》

9.4《儀器設(shè)備使用維護(hù)記錄》

9.5《優(yōu)生篩查檢測結(jié)果登記表二》 9.6《實(shí)驗(yàn)標(biāo)本處理表》 9.7《醫(yī)用垃圾處理記錄》

第二篇： ABO、RhD血型定型檢測卡原理

ABO、RhD血型定型檢測卡原理

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：ABO、RhD血型定型檢測卡

英文名稱：Microcolumn Gel Cards for Forward and Reverse ABO/RhD Blood Group Typing 【包裝規(guī)格】

6孔/卡，抗A、抗B和抗D各1孔，空白凝膠管3孔。12卡/盒?！绢A(yù)期用途】

人紅細(xì)胞 ABO血型正、反定型及RhD血型定型，僅供臨床使用，不用于血源篩查?！緳z驗(yàn)原理】

采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，利用凝膠間縫隙只允許游離紅細(xì)胞通過的特性，將生物化學(xué)的凝膠過濾技術(shù)、離心技術(shù)和血型血清學(xué)的抗原抗體特異性反應(yīng)結(jié)合在一起，專供血型血清學(xué)試驗(yàn)使用。ABO、RhD血型定型檢測卡的前3支塑料微管中分別灌注有與抗A、抗B和抗D抗體按照一定的比例混合的葡聚糖凝膠，用于紅細(xì)胞 ABO血型正定型及RhD血型定型。后三支塑料微管中只灌裝凝膠，不含任何抗體。第四支微管作為陰性對照管，第五支和第六支微 管用于紅細(xì)胞 ABO血型反定型。使用時將樣本紅細(xì)胞懸液或血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察。凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在凝膠的上部或中央，判斷凝集反應(yīng)陽性；游離的紅細(xì)胞，可通過凝膠間隙而沉積在凝膠的底部，判斷凝集反應(yīng)陰性。

第三篇：abo血型鑒定

生理鹽水凝集法

①玻片法：操作簡單，適于大量標(biāo)本檢查，但反應(yīng)時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細(xì)胞凝集，因此，不適于反向定型。

②試管法：由于離心作用可加速凝集反應(yīng)，故反應(yīng)時間短，而且，借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)凝集作用，適于急診檢查。

紅細(xì)胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細(xì)胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細(xì)胞分散。

在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn)：

①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（++++）。

②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（+++）。

③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒，游離紅細(xì)胞約占1／2為（++）。

④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團(tuán)中有5～8個以上紅細(xì)胞凝集為（+）。

⑤可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細(xì)胞（±）。

⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。

⑦鏡下未見細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布為（-）。凝膠微柱法

是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標(biāo)本，用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化，定量加樣，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

準(zhǔn)血清均采自健康人，并應(yīng)符合下述條件：①特異性：只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。[3] 編輯本段注意事項

1、所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。

2、加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。

3、雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。

4、幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

5、玻片法反應(yīng)時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。

6、正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。

7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應(yīng)用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[4]

ABO血型系統(tǒng)

英文：ABO blood group system 根據(jù)紅細(xì)胞表面有無特異性抗原（凝集原）A和B來劃分的血液類型系統(tǒng)。ABO血型系統(tǒng)是1900年奧地利蘭茨泰納發(fā)現(xiàn)和確定的人類第一個血型系統(tǒng)。根據(jù)凝集原A、B的分布把血液分為A、B、AB、0四型。紅細(xì)胞上只有凝集原A的為A型血，其血清中有抗B凝集素；紅細(xì)胞上只有凝集原B的為B型血，其血清中有抗A的凝集素；紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原都有的為AB型血，其血清中無抗A、抗B凝集素；紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原皆無者為O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的紅細(xì)胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。輸血時若血型不合會使輸入的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，引起血管阻塞和血管內(nèi)大量溶血，造成嚴(yán)重后果。所以在輸血前必須作血型鑒定。正常情況下只有ABO血型相同者可以相互輸血。在缺乏同型血源的緊急情況下，因O型紅細(xì)胞無凝集原，不會被凝集，可輸給任何其他血型的人。AB型的人，血清中無凝集素，可接受任何型的紅細(xì)胞。但是異型輸血輸入量大時，輸入血中的凝集素未能被高度稀釋，有可能使受血者的紅細(xì)胞凝集。所以大量輸血時仍應(yīng)采用同型血。臨床上在輸血前除鑒定ABO血型外，還根據(jù)凝集反應(yīng)原理，將供血者和受血者的血液作交叉配血實(shí)驗(yàn)，在體外確證兩者血液相混不發(fā)生凝集，方可進(jìn)行輸血以確保安全。近年來發(fā)現(xiàn)存在于紅細(xì)胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血細(xì)胞和一般組織細(xì)胞。所有細(xì)胞表面血型抗原的特異性可作為機(jī)體免疫系統(tǒng)鑒別自身和異物的標(biāo)志。因此，在臨床實(shí)踐中血型鑒定也是組織器官移植成敗的關(guān)鍵。人類血型有遺傳特性，決定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分別受ABO三個等位基因控制。A、B基因?yàn)轱@性基因，O（H）基因?yàn)殡[性基因。它們的遺傳規(guī)律所顯示的父、母血型與子代血型間的關(guān)系，在法醫(yī)學(xué)上可作為否定親子關(guān)系的依據(jù)，若再配合其他血型系統(tǒng)的測定，則可判斷親子關(guān)系。

血型不僅在輸血上有重要意義，而且在人種學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有應(yīng)用價值，在輸血前，一定要檢查病人(受血者)和輸血人（供血者）的血型，并且要進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)。在臨床醫(yī)學(xué)中，除輸血、移植免疫外，對新生兒溶血病、自身免疫性溶血性貧血特異性抗體的檢查，也都需要血型知識和有關(guān)技術(shù)。ABO血型抗原具有種族差異。例如，中歐地區(qū)的人群中，約40％以上的人為A型，近40％的人為O型，10％的人為B型，6％的人為AB型；而90％的美洲土著人為O型。[5] 編輯本段舉例分析

通常只用兩種抗血清即抗A及抗B血清，就可將群體分為四種血型。

根據(jù)血型的遺傳規(guī)律，和臨床工作方例起見，配偶間所生子女的血型如下：

各種ABO配偶所生子女的血型:

婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

A×A A、O B、AB

A×B A、B、O、AB 無

A×AB A、B、AB O

A×O A、O B、AB

B×B B、O A、AB

B×AB A、B、AB O

B×O B、O A、AB

AB×AB A、B、AB O

AB×O A、B AB、O

O×O O A、B、AB

婚配式 A型血的可能 B型血的可能

A*A 75% 0% 25% 0%

A*B 25% 25% 25% 25%

A*O 50% 0% 50% 0%

A*AB 50% 25% 0% 25%

B*B 0% 75% 25% 0%

B*O 0% 75% 25% 0%

O型血的可能AB型血的可能

B*AB 25% 50% 0% 25%

O*O 0% 0% 100% 0%

O*AB 50% 50% 0% 0%

AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鑒定總結(jié)

AB0血型鑒定原理

常用鹽水凝集法檢測紅細(xì)胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有：①正向定型：用已知抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定：凡紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集者為陽性，呈散在游離狀態(tài)為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

鑒定方法

（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標(biāo)本檢查，但反應(yīng)時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細(xì)胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應(yīng)，故反應(yīng)時間短，而且，借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)凝集作用，適于急診檢查。

紅細(xì)胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細(xì)胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細(xì)胞分散。在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn)：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（++++）。②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為（+++）。③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒，游離紅細(xì)胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團(tuán)中有5～8個以上紅細(xì)胞凝集為（+）。⑤可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細(xì)胞（±）。⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布為（-）。

（2）凝膠微柱法：是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標(biāo)本，用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化，定量加樣，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

準(zhǔn)血清均采自健康人，并應(yīng)符合下述條件：①特異性：只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。血型鑒定操作時注意事項

一般注意事項：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。④幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應(yīng)時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。⑥正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應(yīng)用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[6]

第四篇：ABO血型操作

長春博迅ABO、RhD血型定型檢測卡操作流程 【檢驗(yàn)原理】

本試驗(yàn)采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一定離心力下，該復(fù)合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或懸于膠中；如無相應(yīng)抗體結(jié)合，則不能形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一定的離心力下，分散的紅細(xì)胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部。【樣本要求】

標(biāo)本采集：采集被檢對象靜脈血，將該同一人血液分別制備成紅細(xì)胞標(biāo)本和血清標(biāo)本。

紅細(xì)胞標(biāo)本的制備：配制成0.5％-0.8％紅細(xì)胞懸液。

血清標(biāo)本的制備：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，2000rpm,10分鐘，取上清；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝試管中，4℃放置12小時，或37℃放置2小時后離心，2000rpm,10分鐘，取上清。該上清不得有絮狀物或沉淀。標(biāo)本必須充分去纖維蛋白，否則血清標(biāo)本中析出的或紅細(xì)胞懸液中殘余的纖維蛋白可阻礙紅細(xì)胞沉降，使非凝集細(xì)胞離心后在膠表面形成一條紅線，呈假陽性反應(yīng)。【操作步驟】

1.將微柱凝膠試劑卡的六支凝膠微管標(biāo)號。

2.將待檢者0.5％-0.8％紅細(xì)胞懸液分別加入第一至第四支微管中，每管50微升。3.將待檢者血清分別加入第五支和第六支

第五篇：ABO-Rh正反定型血型定型操作規(guī)程

ABO-Rh正反定型血型定型操作規(guī)程

一、項目名稱、檢驗(yàn)方法名稱

1．項目名稱：ABO-Rh正反定型血型定型 2．檢驗(yàn)方法名稱：柱凝集

二、方法學(xué)原理

該試劑卡是基于柱凝集的原理而設(shè)計。正常具有抗原的人紅細(xì)胞將與相應(yīng)的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，BioVue血型診斷試劑卡的微柱中含有玻璃珠介質(zhì)和試劑。加入紅細(xì)胞并將試劑卡離心后，發(fā)生凝集的紅細(xì)胞會被阻擋在玻璃珠的上面，而未凝集的游離紅細(xì)胞則會在離心力的作用下通過玻璃珠之間的間隙到達(dá)微柱的底部。

三、試劑卡品牌、代號、包裝規(guī)格、內(nèi)含物

1．試劑卡品牌：美國強(qiáng)生奧索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代號：BioVue-ABO/Rh-Reverse 3．包裝規(guī)格：

400卡/箱 試劑卡（707100）；100卡/箱 試劑卡（707155）4．試劑成分：

BioVue ABO-Rh正反定型血型診斷試劑卡有6根微柱組成，每一柱中含有緩沖液，其成分為牛血清蛋白，大分子增強(qiáng)劑以及0.1％疊氮鈉，0.01M的EDTA.成分描述 第一柱：抗－A試劑 抗－A鼠單克隆(lgM)抗體混和；藍(lán)色染料 第二柱：抗－B試劑 抗－B鼠單克隆(lgM)抗體混和；黃色染料 第三柱：抗－D試劑（抗RH）抗－D人單克隆(lgM)抗體 第四柱：質(zhì)控 優(yōu)化增強(qiáng)劑，用于血型檢測的質(zhì)控對照 第五，第六柱：反定型稀釋液 優(yōu)化增強(qiáng)劑，用于反定型血型檢測 5．試劑的儲存與效期：

儲存條件： 2～25℃環(huán)境中保存。請勿將試劑存放在自動除霜的冰箱中，也不要冷凍保存。并且不要放在離熱源（如孵育箱、輻射器、大型設(shè)備、冰箱、冰柜等）很近或陽光直射的地方。

效 期： 試劑盒上有記載

四、儀器品牌、型號

BioVue專用離心機(jī) ；BioVue專用孵育器

五、樣本的采集與準(zhǔn)備：

在采集標(biāo)本前對病人/獻(xiàn)血者無特殊要求，血液采集應(yīng)符合相關(guān)的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)及管理規(guī)范。含有或不含有抗凝劑的標(biāo)本均可使用。

標(biāo)本采集后應(yīng)盡快進(jìn)行檢測。如果實(shí)驗(yàn)不能立即進(jìn)行，應(yīng)將標(biāo)本置于2－8℃保存。已凝集的標(biāo)本以及用EDTA、肝素或檸檬酸鹽抗凝的標(biāo)本應(yīng)在7天內(nèi)檢測。獻(xiàn)血員標(biāo)本應(yīng)在其效期內(nèi)檢測。

采集自臍帶血的紅細(xì)胞應(yīng)確保沒有污染。如懷疑樣品污染需用生理鹽水洗滌?？鼓獦?biāo)本以900－1000g離心5分鐘，即可得到濃度約為80％的濃縮紅細(xì)胞。1ml生理鹽水＋40ul濃縮紅細(xì)胞 即配制成3％的紅細(xì)胞懸液。

或 1ml生理鹽水＋10ul濃縮紅細(xì)胞 即配制成0.8％的紅細(xì)胞懸液。

六、試劑準(zhǔn)備：

BioVue ABO-Rh正反定型血型診斷試劑卡應(yīng)在鋁箔開啟后一小時內(nèi)使用。請勿使用液面在玻璃珠以下的試劑卡。需準(zhǔn)備3％或0.8%濃度的用于反定型的紅細(xì)胞試劑。

七、具體操作步驟

? 按照“樣本的采集與準(zhǔn)備”部分配置紅細(xì)胞懸液。

? 取出試劑卡，確保平衡至室溫；使用前離心，確保無氣泡、無斷層。? 在有條形碼的一面作標(biāo)本標(biāo)記。

? 使用打孔器，將試劑卡倒置下壓，插入打孔器中，然后取下密封條。

? 反定型：在相應(yīng)試劑卡的反應(yīng)腔（第5和6號微柱）中加入40ul血清/血漿，然后加入10ul的3％反定型的紅細(xì)胞試劑（或50ul的0.8％紅細(xì)胞試劑）。

? 質(zhì)控微柱：在4號柱加入40ul血清/血漿，然后加入10ul的3％標(biāo)準(zhǔn)O細(xì)胞懸液（或50ul的0.8％標(biāo)準(zhǔn)O細(xì)胞懸液）。

? 正定型：在相應(yīng)試劑卡的反應(yīng)腔中（第1，2，3號微柱）加入10ul的3％紅細(xì)胞懸液（或50ul的0.8％紅細(xì)胞懸液）。? 使用BioVue離心機(jī)離心。（離心必須在加樣完成后30分鐘內(nèi)進(jìn)行）? 從微柱的正反兩面判讀凝集和/或溶血結(jié)果。

? 在有較強(qiáng)陽性反應(yīng)的試劑卡一側(cè)讀取并記錄反應(yīng)強(qiáng)度。? BioVue結(jié)果判讀：

? 陽性結(jié)果（＋）：紅細(xì)胞凝集為陽性結(jié)果，表明紅細(xì)胞表面存在相應(yīng)的抗原。反定型測試中，無論是否發(fā)生凝集，溶血的存在視為陽性結(jié)果 ? 陰性結(jié)果（－）：無溶血及紅細(xì)胞未凝集是陰性結(jié)果，表明紅細(xì)胞表面不存在相應(yīng)抗原

? 溶血會導(dǎo)致玻璃珠上方呈淺粉色或紅色。部分溶血時，有可能不出現(xiàn)凝集 ? 4＋反應(yīng)：紅細(xì)胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一個環(huán)形帶 ? 3＋反應(yīng)：發(fā)生凝集的大部分紅細(xì)胞停留在柱的上半部分

? 2＋反應(yīng)：發(fā)生凝集的紅細(xì)胞分布于整個柱體，柱的底部可見少量的細(xì)胞 ? 1＋反應(yīng)：大部分凝集的紅細(xì)胞停留在柱的下半部分，柱的底部有少量紅細(xì)胞 ? 0.5＋反應(yīng)：大部分凝集的紅細(xì)胞穿過玻璃珠，在柱的底部形成一個粗糙的（不平整的）紅細(xì)胞聚集帶，聚集帶上方可見少量紅細(xì)胞

? 0陰性：所有紅細(xì)胞均穿過玻璃珠，在柱的底部形成一個平整的紅細(xì)胞聚集帶

八、操作注意事項

1.所有血液標(biāo)本以及與血液有接觸的材料都視同傳染性物質(zhì)，依照實(shí)驗(yàn)室管理操作規(guī)范處置。

2.不適宜的存儲條件可能會影響產(chǎn)品質(zhì)量。注意：每個試劑盒卡的架子外面都貼有一個圓形的溫控指示點(diǎn)，如指示點(diǎn)圓圈內(nèi)為藍(lán)色，說明試劑卡曾被暴露在可能影響產(chǎn)品質(zhì)量的溫度環(huán)境中。使用這些試劑卡時可能出現(xiàn)假陰性的檢測結(jié)果。請勿使用這樣的試劑卡。3.請勿使用超過效期的試劑卡。

4.卡中液體試劑的冷凍或蒸發(fā)都有可能影響未凝集紅細(xì)胞通過玻璃珠而到達(dá)微柱的底部。5.請勿使用表面破損的試劑卡或微柱內(nèi)試劑液面低于玻璃珠介質(zhì)或褪色的試劑卡。6.不恰當(dāng)?shù)氖褂脝⒎庋b置或?qū)⒉逵袉⒎庋b置的試劑卡墜落會在加樣時引起交叉污染。7.不恰當(dāng)?shù)募夹g(shù)操作會導(dǎo)致錯誤結(jié)果，具體可能的原因如下：

? 未使用本規(guī)程中推薦的紅細(xì)胞濃度。? 實(shí)驗(yàn)過程中的輔助材料發(fā)生微生物污染。

? 使用了含有某種特殊成份的標(biāo)本（阻礙了紅細(xì)胞自由穿過微柱中的介質(zhì)）。? 采用了嚴(yán)重溶血的標(biāo)本（可能影響結(jié)果判讀）。