第一篇：標本檢測程序

標本檢測程序

1.目的

規范臨檢標本的檢測程序，減少分析過程中各種因素對檢驗結果的影響，確保檢驗質量。2.范圍

適用于所有臨床臨檢標本的檢測。臨床臨檢標本包括血液、尿液等各種體液。3.職責

臨檢組所有檢驗人員按臨檢組崗位職責，負責標本的預處理、測定、檢驗結果的報告等。4.程序

4.1檢測過程流程：接收樣品一統一編號一離心或按檢驗項目要求處理一輸入診療卡號或標本號一開始加樣檢驗一審核結果一記錄結果一簽發報告。4.2樣品接收和編號：按臨檢標本管理程序進行。

4.3離心或按檢驗項目要求處理：將編好號的樣本以2000一3700r／分離心1O分鐘，然后開始加樣檢驗。

4.4上機測定：按臨檢分析儀或相應儀器設備的操作規程進行，但應注意標本測定前應按室內質控程序先作質控，只有質控結果在控時，才開始測定標本。若有條件，在測定過程中或測定結束后再分別測定不同濃度的質控品，對檢測的全過程實施質量控制，確保檢驗質量。4.5結果報告

4.5.1樣品檢驗完畢后，由操作人員逐一核對檢驗項目有無遺漏，確保與驗單上的申請項目準確無誤后打印結果，由授權簽字人再次進行核對，確保檢驗結果間不相互矛盾，并與臨床診斷相符時簽發報告。4.5.2當發現檢驗報告中有缺陷而對其準確性及有效性產生懷疑時，應由相關人員處理追回已發出有缺陷的報告單，并報告科室負責人。并根據整改后做出的檢驗結果再發出。4.5.3檢驗工作人員不得向無關人員透露檢驗結果及相關信息。

4.5.4檢驗報告使用者因特殊原因造成報告損壞或遺失時，只有從網絡計算機能夠調出者或登記本上有記錄者，才可補發。

4.6申訴及處理：檢驗報告申請人或被檢者對檢驗報告的內容有異議時，可向本室負責人或上級單位提出申訴，按投訴處理程序執行。

第二篇：常規標本制作程序

常規標本制作程序

第一節

組織標本收集取材固定 一，標本收集和查驗程序。

對于所有送檢的標本，必須認真執行查驗程序，方能進入下一程序，其主要程序是：

1，收集標本時：要仔細查對申請單上的姓名與標本上的姓名，序號是否一致；標本的件數與申請單是否相符；標本是否用固定液固定過。

2，標本經上述驗收后，進行編號登記，以防錯亂。編號按年份和流水號兩種方法，如果為了今后的查找較為方便，按年份編號為較好。

二，活檢組織取材：在外科送檢的諸多材料中，對于每一例病例的材料，大小都不一樣，但對于較大的標本，不可能都對其進行制作切片，因此，選擇適合于病理技術制作，適合于病理診斷且有利于回顧性研究等各方面的材料，是病理活檢的關鍵，通常把這過程稱為取材。

（一）取材時必須注意以下問題：

①

取出所有送檢的標本，量其大小，稱其重量，描寫其色澤，質地，形狀和肉眼所見表面情況。當標本切開后，應詳細描寫其切面的顏色，硬度，病變部位等，必要時繪圖說明。

②

對于細小標本如肺支氣管穿刺物標本胃腸鏡活檢標本

[1]等，應將其染上伊紅顏色后，用擦鏡紙或特別脫水袋將其包上或裝上，以防漏出脫水盒的小孔。

③

對于有傳染性的標本，讓標本徹底固定后再取材。如結核瘤標本等。

④

對于罕見特殊的標本，應小心保存好，在不影響診斷的情況下，盡量保存好大體標本。以利于教學標本，陳列標本的收集。

⑤

邊取材邊固定，組織標本較多的單位，取材經常要花上幾個小時，如果從下午2：30開始取材，至5：30完成，那么先取的材料就可以多固定幾個小時，如此可以防止固定時間不足，同時也可防止組織發生自溶。

⑥

對于骨髓穿刺的組織，可先用10%硝酸浸泡30分鐘左右，然后再與其它組織進行處理。

⑦

骨組織和鈣化組織，應徹底脫鈣后，方能進行制作。具體用大頭針能順利扎入骨組織則可。

⑧

活檢組織取材，不能太厚，以不超過2mm為宜。以防脫水不徹底，不利于制片。

⑨

每取完一例標本后，所有的工具如刀，剪，盤鑷，切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染，混淆于其它病例。⑩

組織取完即刻放入打印好號碼的盒內，放入固定液中固定。

（二）各種器官及其腫瘤取材的方法

1、乳腺：

纖維腺瘤：肉眼觀察其形狀、體積、包膜是否完整，切面是否均勻，有無壞死，取材：腫瘤連包膜1-3塊（即周邊組織1塊，包膜與周邊組織1塊，如果腫瘤不大，上述幾種即周邊包膜和腫瘤可取1塊）。

乳腺癌：體積，皮膚顏色，有無水腫或變硬，腫大淋巴結，數量，組別，硬度，及切面情況。沿乳腺的最長徑經過乳頭切開，觀察腫瘤的面積，顏色，硬度及浸潤情況等。取材：乳頭及其下組織，腫瘤及腫瘤交界處，腫瘤下胸肌，全部淋巴結（注明組別），根據各種病變的情況，確定取材的塊數，如切緣、包膜、腫瘤等均應取到各組淋巴結分別全部切材。

2、食管癌：

切除的食管長度及周徑，管壁有無水腫或粘連，腫大淋巴結的位置，大小，硬度及數目。沿腫瘤對側縱形切開，腫瘤大小及形狀。取材：腫瘤上下交界處各取一塊?；蜓亻L軸通過腫瘤全徑取出大切片或分成數段，全部淋巴結，分別切塊包埋

3、胃潰瘍及胃癌：

全胃或部分切除，大彎及小彎長度，腫大淋巴結的部位、大小，硬度及數目，病變處相應漿膜面有何變化。一般沿大彎剪開，觀察病變大小，深度，邊緣及周圍變化，如為癌瘤，屬何種類型，與大小切端的距離。取材：病變及與其交界處胃壁全層的胃組織（盡量側重于小彎，并注意沿長軸切取組織塊），上下切端組織，腫大的淋巴結（注明組別）

4、闌尾：一般于近、中、遠三段各取一組織塊，遠端一塊盡量靠近尖端，以免遺漏尖癌。已被剖開者，沿縱軸取組織塊，如檢查時不能發現病變所在，需多做斷面，以尋覓病變部位和取組織塊。

5、腸癌：切除腸管的長度，腫瘤 生長部位、大小、局部漿膜等情況。如為十二指腸癌，則應注意與特氏壺腹的關系。取材：腫瘤 及交界處腸壁全層組織，上下切端，腫大的淋巴結。

6、腸梗阻：梗阻部位、長度、直徑及表面變化（顏色、水腫、充血、出血）；檢查腸系膜 的變化，沿病變血管解剖，作多數橫斷面，觀察血管壁是否變厚，尋找栓塞的起止部位；腸粘膜有無潰瘍。取材：病變最顯著處及腸的兩端各切一塊，病變血管（帶些系膜）各切一塊。

7、腸套疊：注意套疊部位及套疊 關系，尋找闌尾，腸壁是否增厚及變硬，以手指放入小腸為引導，沿腸系膜 剪開，尋找有無原發病變（在套入部位的最前端尋找有無腫瘤、潰瘍等到變化）。切面觀察各層腸壁的厚度、水腫、充血、出血、壞死及硬變等到情況。取材：原發病變（如腫塊，潰瘍等）。有變化的腸壁厚度，闌尾，腫大淋巴結。

8、腸結核：外部有無粘連，白色斑塊、結節、狹窄，病變上下的腸段有何改變，有無淋巴結腫大。沿病變對側切開，觀察病變情況（潰瘍、突起、體積、有無息肉樣改變，腸道是否變為狹窄或增厚）。取材：病變部，上下切緣，腫大的淋巴結。

9、肝活體組織：大小、形狀、顏色、表面及切面有無結節狀或纖

維組織增生，有無灰白色結節等。取材：包含各病變的組織，如標本較小，全部切取。

10、陰莖癌：腫瘤生長的部位，大小，潰爛及向陰莖浸潤情況，切端與腫瘤明顯浸潤處的距離?？v切（通過尿管）觀察切面情況。取材：腫瘤切面一塊，陰莖截除端一塊。

11、腎結核：注入福爾馬林固定一周再切，體積，表面是否光滑，有無粘連、灰白色小結節，輸尿管長度，直徑，及硬度。沿輸尿管及腎盂切開，腎盂是否擴張，切面破壞情況，粘膜變化，主質變化，乳頭情況，（注明哪一個）；輸尿管厚度，有否梗塞，粘膜情況。取材：腎主質包括病變及交界處，輸尿管及切端。

12、腎盂積水：先抽去積液，再注入固定液后再檢查。腎體積、表面性狀（色澤、平滑否、結節、粘連）。沿腎、腎盂及輸尿管切開，注意阻塞部位及原因。觀察腎盞、腎盂及輸尿管擴張情況，腎實質厚度。取材：腎實質厚處及薄處各取一塊，輸尿管各取一塊。

13、腎癌：腎及腫瘤之體積及重量，腫瘤部位及與腎的關系，表面有無水腫或粘連，有無腫大淋巴結。切面：腫瘤位置、形狀、大小、顏色、包膜、壞死、出血、囊性變，腎盂與輸尿管中有無蔓延。取材：腫瘤包括其旁的正常組織，腫瘤 以外的腎組織、輸尿管。

14、膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前側，一般沿前側切開，腫瘤位置，與輸尿管中及膀胱的關系、體積、生長

情況及浸潤情況，有無淋巴結（大小，硬度，切面變化）。取材：沿縱軸方向取材。腫瘤及膀胱壁全層組織；乳頭狀瘤應包括蒂部組織，三角區組織。

15、前列腺：形態，體積，顏色，硬度，包膜情況。切面：顏色，質均勻否，有無壞死，出血，囊性變。作多個與尿道垂直的平行切面觀察。取材：顏色均勻處取一塊，不均勻時在發黃處盡量多切，包含尿道。

16、肺葉或肺段：先自支氣管注入福爾馬林固定。檢察前應觀察X線片。病變與支氣管有關者，沿支氣管切開；病變不沿支氣管者，可作書頁狀切開：

① 肺癌：位置在支氣管哪一支，距切端多遠，大小，形狀，質地是否均勻，有無壞死、空洞、邊緣有無纖維組織圍繞或不規則浸潤，是否壓迫支氣管干，肺門淋巴結情況。取材：癌組織，癌與正常組織的交界處，支氣管斷端，肺門或局部淋巴結。

② 支氣管擴張：新鮮時剪開，系囊形或圓柱形（管形）擴張，屬哪級支氣管，擴張的支氣管之直徑，或寬度，管壁厚度，顏色周圍組織有何變化，粘膜光滑或呈皺紋，管腔有無膿液，是否穿破形成肺膿腫。取材：擴張的支氣管，支氣管周圍發炎組織，膿腫壁。

③ 肺膿腫：部位、直徑、單腔或多腔，其中膿液性質及氣味，有無懸梁狀血管，腔壁光滑度，厚度，是否與支氣管相通，有無散布的小膿腫，有無支氣管擴張，支氣管中有無異物，膿腫內有無硫磺樣顆粒。取材：膿腫壁，與膿腫有關的支氣管，肺組織。

④ 肺結核空洞：部位，直徑，單腔或多腔，腔中有無膿液、干革命酷樣壞死、懸梁狀血管，空洞壁厚度，及硬度，腔內為肉芽或纖維組織，尋找與支氣管連通的瘺管及所散播的病變，肺門淋巴結情況。取材：空洞壁，散播的病變，肺門淋巴結。

⑤ 肺囊腫：數目，部位，直徑，囊腫壁光滑度及厚度，與支氣管的關系，收集囊內液體檢查其性狀。取材：囊腫壁及其旁肺組織，如為包蟲病，則應在包蟲囊的液體中尋找子囊及幼蟲頭節（離心后）。

17、脾臟：重量，大小、顏色，表面有否粘連，然后沿脾長軸作多個平行切開，在切面上看包膜及脾髓情況。

① 淤血性脾腫大或脾功能亢進，注意靜脈內有無血栓，靜脈壁有無變化，有無梗死，切面上有無含鐵小結節。② 脾破裂：注意踴裂部位，長度，有無血凝塊充填破裂口。取材：帶有包膜的脾組織，脾中心組織，脾門附近包括較大的血管，如有副脾，淋巴結各一塊，脾破裂應包括裂呂充物。

18、淋巴結：大小，形狀，包膜情況，成群者注意相互間粘連情況，切面的顏色，均勻度，質地，包膜，等情況。取材：整個短軸切面，互相粘連者包括粘連部位。

19、骨腫瘤：檢查前先看其X片。有皮膚軟組織者將與腫瘤無關部剔除，然后鋸開，有條件者，可與鋸開前攝X線片以作比較。

檢查腫瘤體積及形狀，切面顏色，硬度，出血，壞死，囊變，何處為原發，與骨膜，骨皮質及骨髓之間關系，有無破壞情況，有無包膜，其厚度及硬度，無包膜者注意其對軟組織浸潤情況。取材：腫瘤及與組織交界處，骨破壞處，軟組織浸潤處。20、甲狀腺：重量，大小，形狀，有無結節，尋找背面有無甲狀旁腺，切面質地是否均勻，含膠質狀況，有無結節，出血，壞死，鈣化，囊變等，有無細小灰白色疤痕樣病變。甲狀腺腺瘤與腺癌：腫瘤部位，大小，包膜完整否，切面質地，有無出血，壞死，鈣化，囊性變及其內容物，有無乳頭或絨毛狀改變，腫瘤以外組織有無灰白色小節。

取材：最大面積，切成數塊全作切片，如為根治術，要取全部淋巴結。

21、刮宮或陰道排出物標志：疑有妊娠者，須仔細尋找有無胎盤絨毛，眼觀不能判斷時，須取組織塊，尤應注意檢查血凝塊。

22、子宮標本：除按要求檢查病變外，如須研究宮頸癌，可與子宮頸12點，3點，6點，9點處取宮頸及宮頸內膜交界處組織，必要時取其他各點組織。

23、卵巢腫瘤：形狀大小，較大者應稱其重量，表面色澤，光滑度，與輸卵管的關系，有無粘連，囊性者自膨大部遠端剪開，查囊與輸卵管腔是否相通，單房或多房，內壁光滑度，有無質或乳頭狀生長區，乳頭脆性，囊內容物性質。實性腫瘤切面色澤、硬度，有無出血，壞死，變性等。

取材：囊性瘤取囊壁較厚處，實質，突起處，囊與輸卵管相連處及輸卵管。實性瘤取邊緣及中央不同結構組織及輸卵管。

24、胎盤：形狀，大小，重量，母體面絨毛有無缺損、出血、鈣化、變性壞死，及其范圍大小，羊膜和血管情況，臍帶長度，直徑，有無扭轉打結、血管栓塞等。取材：母體面、子體面臍帶各一塊。

25、瘺管或竇道組織：應作多數橫斷面檢查，適當取材。

26、眼球標本：標本固定后，先經緩慢脫水至今95%酒精，然后切開，除病變部位特殊取材外，一般取水平切面，通過視神經和瞳孔。要求保存眼球隊的完整性，如結膜、視神經、黃斑及晶狀體等，都應完整無缺，切時刀刃銳利，以免人為地損壞眼球結構。若須行火棉膠切片，而本單位無條件時，可送到有關單位檢查。

27、軟組織腫瘤標本：部位、大小、形狀、色澤、表面有無包膜，完整否，硬度，切面有無出血、壞死、囊性變等，與周圍組織的關系，切面暴露最大面，必要時多作幾個平行切面。取材：腫瘤，周圍組織，切端組織。

28、其它標本：依上述原則檢查及取材，如標本有特殊情況，則依其特點處理。[2] 第三節

常規病理標本的制作程序

常規組織固定

在組織病理學中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的保存，都必須進行及時的適當的和有效的固定。組織只有經過固定，才能完成隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。每個醫務工作人員都能容易地把組織固定起來，但是，要清楚了解固定的過程及其定義是一件十分不易的事，下面我們將逐一解答如下。

（一）、固定的作用

組織經一系列的處理后，就必須進行固定，當然有的組織是先固定，再進行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是，保持細胞、組織的固有形態和結構，使之盡量保持細胞、組織的固有形態和結構，而從免疫組化技術的角度，固定的作用不僅是使細胞內蛋白質凝固，盡量減少或終止外源性酶和內源性酶的反應；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質；以保持組織的固有形態和結構；更重要的是保持組織或細胞的抗原性，不但要使抗原不導致失活，而且不使抗原發生彌散的現象，才能在免疫組化染色時，不產生過深的背景，影響對陽性物的判斷。

（二）固定的目的

1、能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。細菌無處不存在，它們隨時都可污染腐蝕未經處理的組織。固定液可以固定任何蛋白質，凡有生命的東西，都 由蛋白質組成，蛋白質被固定，生命就停止，細菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人們?？膳龅竭@樣的問題，一塊肉不經處理放了幾天后就會變質，這是為什么呢？除了細菌參與外，其本身也是很重要的。因為組織離體后，供應這此組織的血液隨之消失，細胞缺氧，細胞內溶酶體膜的結構受到破壞，破壞后釋放出溶酶體酶，日常生活中常碰到的肉變質，就是細菌污染加組織自溶的結果。

2、保存細胞固有的物質，能凝固或沉淀細胞內或組織液，糖元等，使細胞或組織基本上保持與生活時的物質一樣。細胞的固有物質，即細胞核、內質網、線粒體、高爾基器、溶酶體、過氧體，細胞骨架，組織液，抗原、糖元等。這些物質，如果不將其及時固定，是很容易喪失的，尤其是溶酶體，很容易受到破壞，因此應特別小心。

3、使組織硬化，便于切塊。剛離體的組織，除了胃組織以外，都是柔軟的組織，尤其是胃腸道的組織，如果在沒有固定時就取材，效果就很差，不是取材不規整，就是厚薄不均，粘膜和肌層很容易分開，因此，要取得規整標致的材料，就必須將組織徹底固定，再行取材。

4、對某些具有傳染性的標本，能防止疾病的擴散。病理標本、種類繁多，成份復雜，各種病例都有，具有傳染性的病種也不少，如結核、肝炎、麻風、性病等等。對于此類標本，應進行徹底的固定后，再行取材，如結核球，固定時間應在3-5天。

5、保存好大體標本。對于有教學任務的醫院病理科，除搞好疾病的診斷外，還有收集有價值的大體標本，有些大體標本，是很難得到的。因此要求在平時就要留心觀察，小心處理。遇到有教學價值的罕見的典型的標本，就必須及時固定，認真給予對待。

6、可增強染色的作用。組織經過及時的固定，最終可見到切片有鮮艷的染色，而些時如果有一批未經及時固定的組織，將看到最終的結果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結論，固定可以增強染色的作用。

（三）固定的注意事項

1、組織固定越新鮮越好。組織一經離體，就能及時地固定，這是最好的。根據實驗，如果要獲得某些酶的染色，固定最好在組織離體后30秒至1分鐘。對于其它達不到些要求是越快越好。

2、組織固定，組織塊不宜過大。凡是需要固定的組織，都不應該太大太厚，這是因為所有的固定液穿透力不夠強，浸透度不夠快的緣故。如果較大厚的組織，不經處理就進行固定，那么待固定液進入至中間對可能這些組織早就發生自溶了。因此，對于較大的組織，必須先進行處理，切成制片材料再行固定，這是最佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應將其剪開，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘膜和肌層容易分開，沒固定時，難以取得最佳制片材料，對于產酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現自溶現象。

3、對不同類型的組織應適當合理地選擇固定液。有的固定液對于組織有膨脹作用。固定劑是一種化學試劑，有液體和固體之分，一

般使用較多的是液體，而固體固定劑如多聚甲醛，則多用于實驗研究的組織固定。固定劑的種類繁多，成份復雜，對組織的作用不盡相同，英國著名的組織化學專家Pearse指出：對于每個既定的組織化學方法來說，選擇最合適的方法是極為重要：在組織化學研究準備階段不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對于各種組織成分的反應基團的效用。Jones（1973），指出理想的固定劑必須具備的條件是，防止滲透損傷和妝縮，以達到在各級可見度的水平皆無形態變化；要求組織所有的成分能保留于原位。他認為有三種試劑即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近于達到上述要求。[4] 為了更好地把組織中各種成分盡量保存好，盡量好給予顯示出來，就決不能千篇一律地使用一種固定液，而必須認真地深入研究各種固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，它對組織有明顯的皺縮，硬化作用，平常它是決不會被用來作固定液的，用它不但太浪費，造價太高，而且也使切片較為困難，但是，對于某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細胞的培養等。最好的固定液還是丙酮。因為如果使用福爾馬林固定液、石蠟切片顯示酸堿磷酸酶就顯示不好，狂犬病病毒的包函體就會消失掉，又如醋酸，它對膠原纖維等有膨脹的作用。由于各種固定液對不同的組織有不同的作用，因此許多專家將根據各種固定液的優缺點，配制出許多混合液的方法來，給組織的良好固定起到了非常積極的作用。但是，值得指出的是并非所有的固定液都不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對組織固定很好，組織中各物質的染色也十分清晰，但對固定脫水盒為銅質的組織時，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發生反應，產生醋酸銅，沉淀于組織中，可造成對抗原的損害，對于免疫組織化學的顯示，經實驗證明：可呈弱陽性乃至陰性。由此可見，固定液的選擇正確與否決定著對某些病例的免疫組化標記的成敗關鍵。在我們的日常工作科研中，對于組織的固定，應有針對性的選擇，方能獲得滿意的效果。

4、組織固定，時間不宜太短，也不宜太長。時間太短，就不能很多的固定組織，因為不管組織大小，固定液浸入組織之中，都需要有一定的時間，時間太短，就會影響組織固定的效果，對以后一系列關系的處理都有影響，切片質量難以保證，固定時間太長，也不好。組織長時間的固定，福爾馬林會產生一種酸，影響核的染色。對于固定很長時間的陳列性標本制片后切片染色不鮮艷，顯得非常陳舊。另外，長時間的固定往往會出現福爾馬林色素，尤其是造血器官的標本，更應注意。固定時間過長，可降低抗原的活性。

5、固定液的量要充分。固定液量的足夠與否決定著組織固定的成敗，有的人認為，固定液的量與組織的比應是20：1，這個要求對于小組織來說是完全可以達到的，但對于大標本來說，則是一件非常困難的事情。因為對于大醫院來說，每天都有幾十上百例的標本，小如大頭針大小，大的達幾十斤的腫瘤，對于這樣大的標本，按20：1的比例來做，顯然是不可能的事，既要做到組織

能固定好，又不使組織吹干就必須具體情況具體處理。對于大的標本，原則上是不讓其暴露部分被吹干，這是因為在現實111當中，大的標本往往露出容器一大半，因此對于這種情況，應取些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋于組織表面，以免使組織被風干，影響制片效果。

6、特殊病例或特殊物質應選擇特殊的固定液。一般的病例標本，如沒特殊的要求，都可以應用甲醛配成的各種固定液來固定。但是，如果要顯示狂犬病毒的包含體時，應用上述的的固定液就不行了，必須采用丙酮來固定，顯示糖元，可選擇無水酒精或丙酮來固定組織。固定劑是一種化學語試劑，有液體和固體及之分，平常使用的多為液體，Pearse指出，對每個既定的組織化學方法來說，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學研究中的準備階段，不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對于各種組織成分反應基團的效用。

7、組織的第二次固定或后固定。在一般的常規病理活檢組織中，往往用一種固定液，就能夠達到目的，獲得滿意的結果。但是，對于某些特殊病例光用一種固定液是不夠的，必須根據不同的情況，使用特殊的固定液再次將組織固定，或者在切片后染色前再行固定。這種方法稱為二次固定或后固定。例如：胚胎性橫紋肌肉瘤，由于腫瘤細胞發育較幼稚，完全不象成熟的橫紋肌組織所固有的橫紋，在進行特殊染色前，就必須用Zenker氏固定液進行第二次固定，方能較好地顯示出橫紋肌纖維來。否則，效果不佳。

另外，電鏡固定的標本，通常都需要后固定。其使用方法是先用戊二醛固定，再用奧酸固定。

（四）固定液的使用

當前，應用于固定試劑的種類較多，它們對于固定不同的組織成分起著不同的作用，因此我們在使用時應該了解不同固定劑的效能，才能合理的固定組織。根據Bencroft的分類法，將不同的固定劑分為四種類型：

Ⅰ類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。

Ⅱ類：氧化劑類，四氧化鋨（奧酸），高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。Ⅲ類：蛋白變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。Ⅳ類：其他，氯化汞，苦味酸等。[5]

上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技術方面中用到。下面根據使用的需要，將著重介紹幾種常用的固定劑。

（十）甲醛

甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛氣體飽和于水而成，比重為1.12。它也可以穩定的固體形式存在，它的成分為高分子量的聚合體，稱為多聚甲醛。

甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質如甲醇，這種在組織化學方法當中，能使酶鈍化，影響其反應。甲酸，它可使固定液變酸，在陳列標本或長時間固定的組織，由于酸的作用，往往細胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要點是，在蛋白質末端基團之間形成交聯鏈。參與甲醛固定蛋白質的基團，主要為氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環。甲醛與組織蛋白類的反應是多樣和復雜的，因為它能和多種不同的功能基團結合，在多數情況下在其間形成橋鍵。甲醛有這種交聯的功能，也是它的缺點，在用甲醛固定過的組織中，需要做免疫組化的，往往提倡用酶消化或熱抗原修復法來使蛋白與甲醛交聯的醛鍵斷裂開，以利于后來的染色。

甲醛可配成簡單的或混合的固定液，最簡單和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，這就是10%的福爾馬林.當然,現在使用的固定液要求較為嚴格些,最好是使用緩沖福爾馬林固定液,這將有利于后來的免疫組化染色的需要.從組織學的觀點來說,甲醛是一種良好的固定劑,它有很多的優點: 1.組織收縮較少,損傷少,保存固有物質好.2.固定均勻,穿透力強.3.能使組織硬化,增進組織彈性,有利于切片.4.能保存脂肪及脂類物質.5.成本較低.雖然甲醛有上述的優點,但這都是相對而言,任何物質都不可能十全十美的,它也有許多缺點: 1.雜質含量較多,如甲醇,可鈍化酶類,影響反應.2.含有微量甲酸,導致固定液酸變,影響染色.3.可產生福爾馬林色素,影響觀察.4.不能固定尿酸和糖類物質.5.容易揮發,污染環境,可導致標本干涸.6.可長期存在于固定過的組織上.有人做過實驗,組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時后,仍留有相當多的甲醛與蛋白質相結合,但需要經過長時間的流水沖洗(24天的沖洗)方能除去.可見存在于組織上的甲醛是不可能除去的.因為臨床活檢不可能有這么長的時間來沖洗組織.因此要特別指出的是,在其后的各種技術操作中,要特別注意到甲醛的存在,必須要想辦法除去它,否則將會給各種染色造成影響,甚至導致失敗.應用甲醛,可以配成許多種固定液: 1.10%緩沖福爾馬林固定液 甲醛

100ml 蒸餾水

900ml NaH2PO4·H2O

4g Na2HPO4(無水)

6.5g 該固定液是當今流行的固定液,因它對組織固定較好,損傷較少,因對其后的各方面的研究都較好,尤其是對免疫組化的染色.2、10%福爾馬林固定液 甲醛100 ml

自來水900ml 這是一種最簡單的固定液，適合于邊遠地區攜帶的固定液，但由于它的單一性，因此，只要有條件的單位都不要求使用這種固定液。3、10%福爾馬林鹽固定液 甲醛100 ml 自來水900ml Nacl9克

先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種較為簡單的固定液，但由于加入Nacl，它是一種重金屬鹽物質，加入了它可促進和改善染色，增加染色的強度。

4、Bouin氏固定液 苦味酸飽和水溶液75 ml 甲醛2 ml 冰醋酸5 ml 該固定液中的冰醋酸，對膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲醛對組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使組織固定達到優良的固定水平。5．醛糖鈣固定液 甲醛100ml 蔗糖300ml 乙酸鈣20g

蒸鎦水90ml 先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。該固定液對于做酶的組織化學的研究效果較好，組織固定后，做冰凍切片，再給予顯示。

當前國內外基本上都還是要用甲醛來固定組織。從免疫組織化學的角度來說，甲醛固定的組織大部分都可以用免疫組化的手段來檢測，據多人認為，它對lgA，lgM，J鏈，K鏈和λ鏈的標記效果較好，且背景清晰。但美中不足的是：經它固定的組織，可與蛋白形成醛交聯蛋白，這種醛鍵可封閉抗原。固此，在免疫組化實際檢測中，應根據不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修復如微波、高壓等的方法，以便破壞醛鍵重新暴露抗原。

（2）酒精：又稱乙醇，為無色透明的液體，沸點是78度，工業酒精是95%。酒精它有許多優點：

1、可保存尿酸結晶和糖原等物質。高濃度的酒精如95%，無水酒精可保存上述兩種物質，因它們易溶于水，因此，要證明上述兩種物質的存在，就不能用含水的固定液來固定組織。

2、能在任何比例的情況下與水混合，在病理技術中，酒精是一種十分重要的試劑，它起著關鍵的作用。如果沒有酒精，將會無法完成必要的工作。如組織的脫水，切片染色前后都離不開酒精，在常規的工作中，通常都用95%的工業酒精來配成60%、70%、80%、90%等不同的濃度來使用。

3、可溶解苯類物質為染色步驟中的橋梁試劑。常規活檢等切片上的石蠟必須除去，才能進行染色，能除去石蠟的物質有苯及汽油等，常用的有苯類試劑，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在這里充擔著除去苯和連接水的作用，為切片入水架起了橋梁，因此稱它為橋梁試劑。

4、能除去切片上的水份，使切片無水化。切片經染色后，由于所用的試劑都為水溶液，因此在切片上含有大量的水份，這些水份經系列梯度酒精的置換吸附后，到無水酒精中已完全無水，這樣處理對于切片的保存是有好處的，否則，切片將會褪色。

5、可用來保存標本。大體標本經福爾馬林固定后，如為了陳列保存，必須取出沖冼。然后移入75%的酒精中。如果用福爾馬林作陳列標本的固定液，則因為福爾馬林含有雜質較多，液體容易酸化，時間一長，會逐漸變為微黃色或淡黃色，影響美觀，影響陳列的效果。

6、可與其它試劑配成多種的混合固定液，有時為了加快固定，常采用酒精和其它試劑來配成混合固定液，這種固定液在固定的同時，兼有對組織脫水的作用。應

用酒精配成的混合固定液有： ①

Carnoy氏固定液

氯仿

300ml 冰醋酸

ml 95%酒精

600 ml 該固定液固定組織快速，在固定的同時兼有脫水的作用。溶液中的氯仿和酒精，對組織的收縮較厲害，但應用了冰醋酸，這種現象便被中和去。②

AF固定液

甲醛

ml

冰醋酸

ml 95%酒精

850 ml 這種固定液的作用與上液有相似之處，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脫水用具不能使用銅制的脫水盒，因冰醋酸跟銅離子起反應，生成醋酸銅，這種物質可沉淀于組織間，可破壞組織中的抗原，造成免疫組化檢測的失敗。應用時應多加注意。酒精也有許多不足之處，它的缺點是：

1、可溶解脂類物質，凡要證明組織是否含有脂類和類脂物時，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片，因為酒精可將它們溶解去，而石蠟切片組織中含有的脂類物質，則在組織脫水時被溶解去，只留下脂類或類脂物所占有的空間。

2、對組織收縮較大，不宜作單純固定液。高濃度的酒精，對組織有顯著的收縮作用，造成組織發硬易脆，難以切片等現象。因此，它不作為單純的固定液。

3、滲透力不強。當用酒精固定組織時，組織表面很快就被固定，并形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成了中間組織固定不佳的現象。

4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經酒精固定的組織，核的染色都不好。

5、可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經染色后，一是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時，必須仔細地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的酒精脫色力強，稍不注意，便可脫去切片上大部分的顏色。切片脫水時，要較快地通過低濃度的酒精，以免使已著染的顏色被脫去。

6、價格較貴。從經濟學的角度，應用酒精固定組織劃不來，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例標本需要100ml計，可固定50例標本，而一瓶 500ml的酒精，即使配成80% 酒精，也只能固定6例標本，因此，若用酒精固定組織，其價格比用甲醛固定組織的要高8倍。

（1）冰醋酸。冰醋酸為無色透明的液體，易揮發，氣味大，一打開瓶蓋，整個文章都可聞其味道，純醋酸在17℃時常為結晶狀，因稱為冰醋酸，在冬天使用時，可用微波爐進行解凍，再行使用，它的優點有：

1、能迅速固定染色質，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均勻，對于染色質的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明礬蘇木素和伊紅時，常常需加入一定量的醋酸，以促進染色。

2、能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。

各種固定液對組織都有收縮的作用，尤其是對富含纖維的組織。而它不但不會使組織收縮，而且還會令許多組織發生膨脹的作用。根據這個特點，用它配成許多種不同的混合固定液，以達到固定好，收縮少，易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：（1）Zenker氏固定液：[6] 重鉻酸鉀

25G 升汞

50G 蒸餾水

1000ml 冰醋酸

50ml 先將重鉻酸鉀和升汞溶于水中，尢其是重鉻酸鉀，應用熱水或加溫的方法將其溶解，然后過濾貯存于帶蓋的玻璃瓶中，如暴露于空氣中，該溶液將會被慢慢氧化而便顏色加深，導致失效。臨用時，取貯存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。

應用該固定液固定的組織，一般不要超過24h，取出組織，流水沖冼12小時以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必須用碘除去汞鹽的沉著。應用該固定液的組織，細胞核及細胞漿染色十分清晰，特別是要顯示骨骼肌的橫紋時，應用本液可獲得滿意的結果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存細胞顆粒，紅細胞及含鐵血黃素。

（2）Flemming氏液 2%酸水溶液

200ml 1%鉻酸水溶液

700ml 冰醋酸

100ml 該液中的奧酸對脂肪組織既有固定作用，又有染色作用，對有髓神經纖維也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，該液不適合。應用該液固定的組織，切片不能太大過厚，一般1-2毫米厚固定時間1-3天，后經水洗，保存于80%酒精中，除上述兩液體外，還有Bouin氏液和Carnoy氏液等。冰醋酸也有許多不足之處：

1、不能作為單一的固定劑。冰醋酸在實際應用中，常被作為添加劑來使用，如許多種固定液，都加入了冰醋酸。另外，在蘇木素和伊紅染液中，也常加入了冰醋酸。

2、不能凝固蛋白質，不能保存白細胞顆粒，紅細胞及含血鐵黃素等。

3、價格較貴。

(4)

重鉻酸鉀是一種固體，粉末狀，桔紅色，具有毒 性，較難溶解于涼水，因此在配制時用較高溫度的水來溶解，也較易發生沉淀。它的優點是：

1、能固定脂肪及類脂物。

2、為髓鞘及嗜鉻細胞優良的媒染劑。

3、可配成多種的混合固定液（1）Helly氏液[7] 重鉻酸鉀

25g 升汞

50g 蒸餾水

1000ml 甲醛

50ml 臨用時加入甲醛，因其加入后于24小時后可發生沉淀而失效，因用時應特別注意。

該液是白細胞顆粒的優良固定劑，因此凡為白細胞或造血器官如骨髓，脾臟及患先天性梅毒之肝臟等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉，但據我們經驗認為，硫酸鈉在液中對組織無任何作用，故省去。（2）Orth氏液 重鉻酸鉀

20g 蒸餾水

1000ml 甲醛

100ml

該液固定組織較緩慢，不適合于作臨床的活檢固定液，4毫米厚的組織固定時間需36-72小時，該液對于染色質的固定好，顯示清晰，但可溶解部分紅細胞和含鐵血黃素。重鉻酸鉀的不足之處有：

1、不能沉淀蛋白質，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發揮作用，產生鉻酸，沉淀蛋白質。

2、具有毒性及產生高溫。在配制液體時，如清洗劑，當加入硫酸時，可產生很高的溫度，并揮發出刺鼻的氣體，應特別注意。

3、它不能長期固定組織，經它固定的組織應充分水洗后保存于80%酒精中。

（六）氯化汞又稱升汞，具有毒性。單獨用于固定組織，對組織有較大的收縮力，故很少單獨使用。它可使組織蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，這是由于它穿透力極弱所致，因此它不適合固定較厚的組織。它常與其它的試劑配成混合固定液，彼此抵消各自存在的不足，使固定組織的效果非常好。應用升汞配成的固定液的優點有：

1、細胞核及細胞漿染色清晰。

2、對白細胞顆粒，造血器官如骨髓和脾臟等是優良的固定劑。

3、可配成許多混合固定液如：Zenker氏、Helly氏和Stieve氏等。

它的不足之處是：

1、容易產生汞鹽沉淀。經升汞配成的混合固定液固定的組織，一是不能固定太長時間，經24h后沖水，然后保存于70%或80%的酒精中，二是在洗色前，都必須用碘除去汞鹽的沉淀，以免由于汞鹽沉淀在切片上而影響對切片的觀察。

2、對組織有較大的收縮力且穿透力弱，用它不能固定過厚的組織，因穿透力弱，組織中間部分固定不好。

3、具有毒性。

（五）、微波輻射固定組織。[8]－[9]

組織固定的結果是組織中的蛋白質凝固，以保存組織中原有的微細結構。常規固定用的是甲醛或酒精等。但是這些固定劑從某些方面來說其穿透力不很強，因而需要較長時間的固定，另者，臨床上的冰凍切片，有的應用快速加熱法預先固定組織，造成福爾馬林的極度揮發，污染環境，影響人們的身體健康，因此尋找其它固定組織的方法就成為研究的重點。微波輻射固定組織，就是在這種情況下產生的。

微波是一種具有能量的電磁波，在其運動期間可產生瞬間熱。由于微波的快速運動，也導致了物體內部極性分子的快速運動，產生了熱量，致使組織蛋白凝固，因此，舊的叫法稱微輻射固定組織。按實際的應稱為微波輻射凝固蛋白。

1、組織固定溫度和時間的選擇。

究竟微波產生的熱量需要多高，才級使蛋白凝固的呢：Masson氏等人的研究表明，700-90℃，對沒有固定的蛋白可發生變性。

Bernard經過一系列的研究后認為，肝、腎、肺的最佳固定溫度是70℃，和77℃，因為各種組織的結構不同，成分不一，電子密度不一樣，因而固定所需要的溫度也不樣。我們的實驗認為，65℃左右的溫度可適合于各種組織，條件是固定取小塊材料，時間在截取3-4min。

2、微波爐檔次的選擇

目前市售微波爐品種繁多，要選用合適的微波爐，必須根據各人的使用習慣和愛好。微波爐一般分為高火、中火及低火。使用時要進行系列實驗。例如多少ml的固定液需要多少時間達到多少溫度，用的是哪一檔次的火等。

3、微波輻射需固定液的選擇

張素娟等應用臨床活檢新鮮組織如：甲狀腺、乳腺和淋巴結，實驗小鼠的腫瘤、肝臟、腎臟、心和肺等組織，分別用10%的福爾馬林和生理鹽水經微波輻射后，通過HE、網染、AB-PAS以及幾種抗體如CEA、EMA和L26等的檢測后發現，生理鹽水的結果最好。

一提固定，以往總與福爾馬林分不開，而經微波輻射后的固定效果，竟然比前者好，這就解決了一大難題，即快速石蠟切片及冰凍切片的組織固定，以往用加熱固定的方法，其結果導致福爾馬林蒸發，使整個房間都充滿福爾馬林氣味，既污染了環境，也影響了身體的健康。雖然生理鹽水用微波輻射后對組織有良好的固定效果，但是它只能適合于少量的快速制片和某些

研究，絕不可能適合于大批量的活檢。因為活檢取材，現目前組織的制作，都基本上用機器來進行，而所用的脫水盒，有銅和不銹剛的金屬物所制成，組織取材后，一個一個的盒子裝著組織，如果除去金屬來用微波固定，這是不現實的事情。另外，微波輻射，它的穿透力較弱，大量的組織塊，其中間是達不到要求的。

第四節

病理制片程序

一常規石蠟切片制片法

組織經系列酒精的脫水，經透明劑的作用，經熔化的石蠟的浸漬，包埋后所切成的切片稱為石蠟切片。它適合于尸體解剖，臨床活檢和某些科研的切片。

（一）組織脫水

把含于組織內或細胞內的水份用脫水劑把其置換出來的過程稱組織脫水。不管是正常的組織，還是有病變的組織，都含有不同程度量的水分。據測定，人體的物質組成約含水55~67%，蛋白質15~18%，脂類10~15%，無機鹽3~4%及糖類1~2%[14]。如果不把這些水分脫去，石蠟切片將無法進行，因為石蠟和水不能混合在一起，所以除去組織中的水分成為制片中的關鍵，用什么物質才能擔當起這個重任呢，至今為止，國內所用的都是酒精。因它不管在什么樣比例的情況下都能和水混合，所以它可以慢慢地將水從組織中置換出來。酒精脫水力強，對組織又有硬化和易脆的不良影響。在使用時，通常是從低濃度至高濃

度，濃度系列通常是70%、80%、90%、95%和100%，組織經過這一系列處理后，基本可達到脫水的目的。臨床上如使用含酒精的固定液固定組織時，(Carnoy氏、AAF液)組織不需要經過低濃度的酒精，可直接進入95%酒精脫水。組織脫水，目前常用的有兩種方法

1、人工組織脫水法

該法經濟實惠，靈活度高，可根據不同的組織及其大小來確定脫水時間，也可根據不同組織及大小分批進行脫水，其優點是：

1、可根據不同的組織及大小，任意增減脫水時間，達到脫水目的。

2、可隨時觀察組織的變化，隨時中斷組織的脫水，不使組織過度硬脆。

3、可以多層次地進行脫水。缺點

1、需耗費人力，每個步驟的遞增都需要人工完成。

2、不能大批量的進行脫水。

3、必須在班上完成脫水或者定點于某一濃度的酒精中過夜，晚上無法進行梯度遞增。（2）、自動組織脫水機脫水法

自動組織脫水機的機型品種繁多，大小不一，國內生產的軌道式和圓盤式兩種，國外生產的有圓盤式和柜式兩種，上述國內外四種型號的機子，我們都使用過，根據使用的效果做一簡單

介紹。

1、軌道式自動組織脫水機。這種機子容量小，脫水用的試劑不足一升毫升，組織塊脫水用的提籃小，每次只能容納40塊組織左右，它適合于較小的單位，但不適合于大單位。另外，該機在運轉時，裝試劑的蓋子打開，試劑容易揮發，污染環境，對人身體健康不利。

2、圓盤式自動組織脫水機。國內生產的這種機器容量也不夠大，每天處理組織塊，40塊左右，如果大的病理科每天需要處理150塊左右組織塊時，需要這種機器4臺左右。這種機器脫水時也屬于揭蓋式的，因此，試劑容易揮發，特別在夏天，必須經常添加試劑，以補充被揮發去的試劑。這種機器，對環境同上述機器一樣。國外生產的也有同類產品。

3、全密閉柜式電腦控制自動組織脫水機。

這種脫水機由電腦、反應缸和試劑貯存缸三個部分組成，這三部分可以分開使用，也可以結合在一起，形成一個柜式，一臺電腦可控制5臺脫水機。電腦功能包括時間、溫度和真空負壓等，可在小熒屏上顯示出來，同時可顯示正在進行的脫水程序。根據需要，該機可編九套程序輸入電腦，我們的編程如下：第一套為正常室溫下脫水程序，該程序在換新試劑的幾天內使用。第二套程序組織塊脫水不充分時啟動使用，當第三套程序的組織塊脫水不好時，則應更換新液；第四套為周末程序，該套程序根據兩天的休假時間，安排好組織塊的脫水時間。第五套為

“八一”程序，第六套為“十一”程序，第七套為元旦程序，第八套為春節程序，這后面幾套為節假日程序，根據節假日的放假時間不同，編排不同的程序。反應缸內在15秒左右的時間里抽入反應所需的試劑，當按程序表的時間反應完畢后，在15秒左右的時間，將其送回貯存缸，然后則另換其它試劑，如此反復，直至整個程序完畢。試劑貯存箱內由12個缸組成，每個缸的容量為2.25升。其中用于裝固定液的缸1個，裝酒精脫水劑的缸7個，裝透明劑的缸為2個，另有2個缸，一個裝二甲苯，當石蠟在反應缸中完成或浸蠟后，被送回蠟缸（在反應缸的右邊）后，用以清除遺存的石蠟，還有一個缸裝無水酒精，用以清除遺存的石蠟，還有一個缸裝有無水酒精，用以清除二甲苯的殘存液。

根據我們對各種不同的脫水機的應用比較，認為這種脫水機有以下特點：

1、該機容量大，每次可處理組織塊250-300塊，這對于大、中等醫院的病理科較合適。

2、全部密閉，所有的試劑都由管道輸送。這樣一是保證了試劑不揮發，尤其是夏天，室溫較高，試劑揮發快，如為揭蓋式的脫水機，試劑揮發的程度無法形容，幾乎每天都必須添加，這樣試劑用量大，二是對環境污染不明顯，保證了舒適的工作環境。

3、帶有定期的攪動裝置，如此可使組織固定均勻，脫水徹底。

4、整個過程過置于真空負壓的條件下來進行，尤其是浸蠟，可節省1/3以上的時間，浸蠟充分徹底，尤其是對多孔的組織如肺組織，效果更明顯。脫水機脫水的優點有：

1、組織脫水均勻；

2、能在無人在的情況下完成組織的梯度遞增，完成脫水，透明和浸蠟程序，如此可節省人力物力。

3、能大批量地處理標本。脫水機脫水存在的不足：

1、由于機子的的原因，在脫水時，大小組織一窩煮，造成小組織過度處理而產生硬脆的現象，使之難以切成佳片。

2、如為揭蓋式的脫水機，液體容易揮發，污染環境，影響工作條件。

（二）組織的透明

組織經過一系列酒精的處理后，雖然組織里所含有的水分已基本上被脫去，但是組織脫水時機里可殘留著許多酒精，如果不將其去除掉，必然影響組織的進一步處理，酒精不能溶解石蠟，必須尋找一種既能與酒精混合，又能溶解石蠟的試劑，方能使石蠟浸入到組織中去，這類物質被稱為透明劑。它們是二甲苯、苯、三氯甲烷（氯仿）、香柏油、苯酚、松節油和汽油等。雖然透明劑種類多，但根據性能及效果看，還是二甲苯為最好。二甲苯是一種透明無色的液體，揮發性強，打開后即可聞其味

道，能溶解石蠟，能溶于酒精及丙酮等，但不能溶于水，它是一種良好的透明劑，組織經充分脫水后放入該試劑，視組織的大小、種類的不同，確定不同的時間，便能達到透明目的。在一般的情況下，胃、腸粘膜透明時間5-10分鐘，鼻咽部及排出物為15-20分鐘左右，子宮肌瘤、平滑肌組織為60-120 分鐘。總之組織的透明，應視組織的大小而定，不能千篇一律，要經常觀察組織的透明情況，組織一經透明，就必須從二甲苯中取出。因為二甲苯對組織的硬化程度特強，如果在其放置過長，就會引起組織的硬脆，難切片。如果組織在二甲苯放置到一定時間后，仍沒有達到透明，組織塊中間可出現粉白色的現象，這說明組織沒有完全脫水，處理這種情況有兩種方法，一是將其重新放入酒精脫水，然后再透明，這種方法處理的組織很硬，切片較難。另一種方法就是重取材。如果將沒脫水好的組織繼續做下去，切片將不完整。或者無法切片。

二甲苯及苯類物質被認為是一種致癌性的物質，許多單位和個人都不敢用或盡量少用，或者在切片染色至酒精后，將切吹干就進行封片，這種做法是非常糟糕的，以往切片的整個制作程序都強調不要使切片干涸，上述做法將會影響切片顏色的保存。其它的透明，由于作用較為緩慢，不適應于臨床活檢，但為了某些研究，也可以使用一些緩慢性的透明劑，如此可使切片較為舒適，效果較好。

（三）、組織浸蠟

組織經過透明劑的完全透明后，被移放于65?c左右熔化的石蠟中，于65?c的電熱恒溫箱中浸漬的過程稱為浸蠟。

組織在脫水時，組織中的脂類和類脂等物質在脫水劑的作用下被溶解掉，留下了許多腔隙，許多管腔組織和血管，也有許多腔隙，這些都嚴重地影響了切片。組織浸蠟時，由于誘導劑（二甲苯）的作用，石蠟進入到組織的各個角落，并在各個角落中保存下來。當石蠟包埋后冷卻時，這浸入到里面的石蠟便可起到支撐的作用，而且使組織不致于變形，塌陷等現象，使切片能完整的切出，便于鏡下觀察。

組織浸蠟據多次文獻報到必須換幾次不同熔點的石蠟。石蠟有軟蠟和硬蠟之分，軟蠟的熔點有45?C、52~54?C。硬蠟的熔有56~58?C，58~60?C、60~62?C。浸蠟的順序 是先軟蠟，后硬蠟，浸蠟的時間根據組織不同而確定不同的時間。有的人指出組織浸蠟先放入二甲苯與石蠟等份混合的液體中浸漬然后再放入軟蠟、硬蠟。根據使用經驗我認為不必要這樣做。因為組織經二甲苯或其它透明劑透明后，在組織進入石蠟時，自己還帶著殘存的透明液，如為手工操作，可將組織塊控干，盡量減少殘存液的存在，而自動脫水機則不然，組織可存留一定量的透明劑，經使用次數多次后，殘存的透明劑可把石蠟稀釋。因此機器程序處理的次數較多時，應注意換石蠟，以防組織浸蠟效果不好。

（1）石蠟的性質

石蠟是一種碳氫化合物，由礦物油的分裂產生，它的性質是相當的不同，其熔點在45~62?C之間。熔點高的為硬蠟，硬度較

高，適合于夏天切片的用蠟，熔點低的為軟蠟，54?C以下的稱為軟蠟，這種適合于組織化學的切片用蠟。根據石蠟的特點，根據季節的不同，合理地使用不同熔點 的石蠟，這是能否切好片，使切片產生帶狀的關鍵。（2）石蠟性質的改善

為了獲得較好的連續切片，人們想出了許多種方法，對石蠟進行改造，使石蠟的硬度和柔軟性更適合于佳片的切出，提出了許多種方法：

1.石蠟加熱冷卻法

剛購入的石蠟,不管是動植物切片石蠟也好,還是工業用蠟也好,都必須進行處理,方法是:將石蠟放于容器里,于電爐上加熱,此時石蠟遇熱熔解并發出嗶嗶吧吧的聲音,這是石蠟中含有的雜質,遇熱后分解所發出的聲音,隨著時間的延長,溫度的升高,這種聲音將逐漸減少,直至消失。此時可將盛裝石蠟的容器浸入冷水中，石蠟凝結后，再繼續加熱，如此反復幾次即熔化—冷卻—熔化—冷卻。這種處理方法，可增加石蠟的密度和可塑性，除去雜質。為達高質量的切片，這是必經之法。

2、增加和改善石蠟的韌性和粘度

這種方法則需要加入一些東西才能獲得，如蜂蠟和硬脂肪，蜂蠟最高熔點可達70余度，增加它可增加石蠟的硬度。石蠟切片切4—5um，60?C左右的石蠟可支撐得起，如要切1~3um，其硬度則不夠，因此，要制出較薄的切片，石蠟硬度一定要過關。

另外，增加石蠟的硬度還可以加入脂蠟酸、柏油、楊梅蠟等，雖然如此，石蠟經處理后，用時的顏色如肥皂一樣為最好。

在了解了石蠟的性質及如何改造它后，下面再了解組織浸蠟。

（3）傳統浸蠟法

這是手工操作和不帶真空負壓的浸蠟方法。根據石蠟的熔點，確定浸蠟箱的溫度。如硬蠟的熔點為62?C,浸蠟箱的溫度應比石蠟熔點高出2~3?C，即浸蠟箱調在65?C，當確定好后，將組織放入軟蠟，后轉入硬蠟，根據不同的組織，組織的大小來確定浸蠟時間，小組織20~30分鐘，大組織幾個小時不等。（4）真空負壓浸蠟法

真空負壓浸蠟法應用一真空泵，將箱內的空氣抽出來，形成真空負壓，在這種條件下，由于失重，各種分子活動加快，促使浸蠟過程迅速完成。為了浸蠟完全徹底，全密閉自動脫水機配有這一功能。

鼻咽部、宮內膜

甲狀腺、肝、脾

子宮肌、平滑肌

所需

穿剌物、排出物

腎、淋巴結

胃、腸、橫紋肌等

溫度

傳統浸蠟法

40—90 min

90—150 min

180 min以上

65度

真空負壓浸蠟法：15 min

25—30 min

60—120min

70度

真空負壓所需壓力表：40KP

40—53KP 66、7KP 真空負壓浸蠟法使用時的注意事項：

1、真空恒溫干燥箱的溫度應略高于傳統浸蠟法，因為在抽氣形成真空時，箱中的熱氣會被抽出，致使箱中溫度下降，使熔化的石蠟凝結成塊，所以溫度調至70度左右為宜。

2、計時應從浸蠟完全熔化時計起。抽氣時，箱中的溫度下降，此時浸組織塊的蠟如果處于凝固時，應待其熔化后，方可計時。附：幾種組織處理程序。（1）常規組織處理程序1、2、3、4、5、6、7、8、9、組織塊沖水24小時。70%酒精24小時。80%酒精12小時。90%酒精12小時。95%酒精（1）2小時。95%酒精（2）2小時。100%酒精（1）1小時。100%酒精（2）1小時。二甲苯（1）30—60分鐘。

10、二甲苯（2）30—60分鐘。

11、軟蠟1小時。

12、硬蠟2—3小時。

（2）胃腸粘膜處理程序1、2、3、4、5、6、7、70%酒精10min。80%酒精10min。90%酒精10 min。95%酒精10min。100 %酒精10min。二甲苯5—10 min。浸蠟15 min。

（3）臨床手工脫水法。1、2、3、4、5、6、7、80%酒精過度。95%酒精過夜。100%酒精（1）1小時。100%酒精（2）1小時。二甲苯（1）30—60 min。二甲（2）30—60 min。浸蠟（真空負壓）90—120 min。

（4）全密閉柜式自動脫水機脫水法（室溫）。1、2、3、4、5、10%緩沖福爾馬林2小時。90%酒精2小時。95%酒精2小時。95%酒精1、5小時。95%酒精1小時。6、7、8、9、100%（1）酒精1小時。100%（2）酒精1小時。100%（3）酒精1小時。二甲苯40 min。

10、二甲苯40 min。

11、石蠟（1）1小時。

12、石蠟（2）1小時。（共14小時50 min。）（5）全密閉柜式自動脫水機脫水法（加溫至40度）。（6）全密閉柜式自動脫水機脫水法（真空負壓）。注：（5）、（6）法詳細步驟同（4）法。（7）全密閉柜式自動脫水機周末脫水法。1、2、3、4、5、6、7、8、9、10%緩沖福爾馬林20小時 90%酒精20小時。95%酒精5小時。95%酒精5小時。95%酒精3小時。100%酒精3小時。100%酒精1小時。100%酒精1小時。二甲苯40min。

10、二甲苯40 min。

11、石蠟（1）1小時。

12、石蠟（2）1小時。（共61小時20分鐘）

注：上述的臨床程序都是以當天17：00鐘取材完畢后所設定的時間，17：00—第二天的8：00，剛好是15個小時，要想在8：00上班時包埋組織塊，就必需設定準確的時間，否則將會延誤其它的時間，還有其它的如“五一”程序、“十一”程序和“春節”程序等，這些要根據休假的具體日期來確定每個步驟的時間。

（四）組織塊包埋

隨著科技的發展，組織塊的包埋由簡單的人工包埋轉向用機器的半自動包埋。

（1）石蠟包埋機包埋法：1、2、3、4、打開電源總開關，讓包埋機處于工作狀態。調高溫度，讓包埋蠟溫至65度左右。打開冷凍臺。

取出包埋模型，由腳踩踏或手控出蠟制，注入少量的石蠟后，挾入組織塊，小的多塊組織應放在一起，大塊組織應壓平，管狀和皮膚組織應豎起來包埋，然后再壓上包埋盒，包埋盒上再注入少量石蠟，包埋完后，將其置于冷凍臺上，旁邊備有一盒冷水，當冷凍臺上的包埋塊表面出現凝結時，迅速將它放入水中，然后取出蠟塊，修削去周邊的余蠟，按順序排列好于4?C冰箱或冰格中凍起來備用。

（2）傳統包埋法

1、將包埋框合成模型槽，注入石蠟。

2、打開組織塊脫水盒，取出組織塊，把平整的一面朝下，用鑷子輕壓，保持在一平面上。

3、每包埋完一塊組織塊，即將標簽附上，以防出錯或張冠李戴。（3）組織包埋時的注意事項

1、傳統包埋使用的鑷子、包埋框，都必須放于40?C的恒溫箱內，否則在沒有暖氣設備的冬天，熔化的石蠟遇到冰冷的器械回馬上凝固，影響包埋。

2、傳統包埋法使用的包埋框有多種，如銅和鋁制品，但以銅的為優，因銅的散熱較快。

3、包埋的石蠟溫度不宜過高，否則注入模型時，會四處溢流。

4、組織塊本身的蠟不能凝固，如果凝固了，應放回重新加溫，使其熔化，否則會影響切片，或整塊崩出，破壞組織塊。

5、包埋完后，應待蠟塊完全凝固，方可放入水中，否則未凝固石蠟會被水擠走，漂浮于水面，造成包埋塊蠟塊的缺損。

6、小的多塊的組織應包埋在一起在一水平面上，否則切片美觀度不好，深淺不一的包埋會使有的切上，有的切不上或被修削去。

（五）蠟塊的修切

不管是組織包埋機包埋的蠟塊也好，還是傳統法包埋的蠟塊，切片前都需要很好的修切，才能更適合于切片。前者包埋的蠟塊，包埋盒周邊的石蠟，一定要去除掉，否則切片時，切片機上的持蠟器，將無法將其夾上，影響切片中間的部分，視組織的大小而確定是否需要修切，比如組織小米粒大小，這時應將周邊多余的石蠟削去，按要求組織塊周邊的余蠟留有0.5CM即可，削去余蠟后，對于細小的組織，一張玻片可以多裱上幾個組織塊，對于疾病的觀察大有好處。削去余蠟的另一個好處是延長切片刀的使用壽命，保證一把刀（一次性刀片）多切一些蠟塊，因為余蠟的存在，在切片時，增加了刀口的磨擦，使刀口容易鈍化。傳統包埋法的蠟塊，如為原始的包埋框所包埋的蠟塊，在分切蠟塊時，應特別小心，以防損壞分切的蠟塊，造成切片的困難或難以形成連續切片（組織周邊余蠟存留太小或沒有）。目前大多數使用的是包埋盒，但包埋盒邊上多余的石蠟也要修切去，否則妨礙蠟塊上機切片。

（六）石蠟切片。

組織塊經過一系列的處理后，便準備切片，切片是檢查驗證前面系列處理程序是否合適，如果不合適，便可在切片時顯示出來，比如組織脫水不好，組織表面將出現白色狀，切片肯定不好；如果浸蠟不徹底，切片也不能切出來；如果組織脫水或浸蠟過度，切片時呈粉沫狀或者呈波浪狀。總之切片是個關卡，任何虛假或馬虎都行不通。切片時必須具備的工具有：

（1）石蠟切片機，目前，國內外常規使用的切片機有兩種型號，它們是：

1、輪轉式石蠟切片機，根據不同的情況，根據使用的習慣性來確定使用的機型，但據我所知，目前國內使用的機型，絕大部分是這種型號，這種機型，購買時只要選購好機子，使用起來就能得心應手，操作便利，換切蠟塊快速，可制作連續切片。尤其是教學片，有更大的好處。

2、平推式切片機（軌道式）這種機子雖然也有它的優點，但從目前國內使用的單位統計，是占很少一部分，這種機型，單一切片，比較費力。

（2）切片烘烤箱，這種箱子可以自做，也有市售。

1、市售切片烘烤箱，該箱配有裱片用的溫水控制部分，另一半為切片的烘烤部分，溫度可進行調節，范圍在0—100度間，邊切片邊烤片，這是最為理想的手段，其好處是，如果裱片時，有個別小部沒裱好，發生皺折，及時的烘烤可將其烤平。另者，當切完最后一張時，前面的已烘烤差不多了，不用再費多少時間就能烤好切片。

2、自做烘烤箱，這根據各單位的情況進行制作，可以制作一個木箱，上面用鋁板制成，在前部挖一個口子，剛好放進一個鋁制飯盒，這個可作為裱片用，內將四個40—60W燈泡，外裝開關控制，這便是一個烘烤箱。

（3）小鑷子，小駝毛筆，切片刀或一次性刀片，玻片等。小鑷子最好選用眼科用的彎小鑷子，這對于挾取微薄的切片較有用，如果用大鑷子很容易弄破切片，選用的毛筆以駝毛筆為好，因為這種筆柔軟，不易弄破切片。切片刀最好選用一次性刀片，這種刀片好處有不用磨，節省人力和物力；如果刀片出現缺口，可另更換刀口，直至丟棄，而大的切片刀就不可能這樣使用，如果刀有切口，就要將刀口磨去，磨去刀口是很費時的。

（4）切片。裝上切片刀，裝上蠟塊，修平切面，如果沒有特定標志，原則上是暴露組織的最大切面，定好切片的厚度，一般切片在4-5um。腎穿切片一般厚度在3um以下，切片時，注意力要集中，認真挑選佳片，切片完畢，應注意保養切片機，使之處于良好狀態。保養時，滑動面要滴上油，以利滑動及旋轉自如，還有防銹作用。切片完后，除去殘留蠟，除去切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機，以防灰塵臟物落于切片機上，影響機器的滑動靈活性。除了切片機要保養外，如為切片刀，必須保養，切片刀要經常磨，保持鋒利的刀口，如果發現切片刀有刀口，要想辦法除去，每次用完刀后，用布擦干凈，再用油布擦，以防刀口生銹，影響切片。

（七）裱片

將漂浮于水面上的已展開沒有皺折的切片撈于載玻片上的過程稱為裱片或撈片?，F在市售的烘烤箱都與裱片器連在一起，裱片器上的水溫在界定溫度后，它可自動調節。裱片時水溫很為關鍵，一般在45-55℃，如果水溫過高，超過石蠟的熔點，切片將會被熔化掉，如果水溫過低，在30度以下，切片則裱不好，皺皺巴巴，不能完成展片任務。

切片放入水后，在合適的水溫中它會自然展開，有個別沒有展開的，用小鑷子慢慢將其展開，鑷子的用力要恰到好處，如果用力過大，切片會被攪破，如果用力不對，切片無法展開。應特別注意。當切片展開后，用載玻片（有人喜歡用蛋白甘油涂于載片上，但據我們二十幾年對二十幾萬張活檢切片的經驗，沒有蛋白甘油涂片也能行）插入

水中，靠近展開的切片撈于載玻片上，撈片時應盡量保持裱片器中的水不晃動。一張載玻片可以撈一張切片，也可以撈數張乃至十幾張，這要看組織的大小和病理的需要，一般說大的組織撈一張切片就已足夠，小的組織最好就要求多撈一些。

（八）烘烤切片

切片的烘烤看似簡單，只在烘烤箱或干燥箱一放，讓其烘烤就行了，但從某種意義上講，它也是一個關鍵，如果切片烘烤不好，到染色的時候，便會使切片脫離載玻片（掉片），使整個過程毀于一旦，因此，認真烤好切片是制好切片的前提。怎樣才能使切片烘烤得好呢？我們的做法如下：當切片裱于載玻片后，于烘烤箱邊豎立起來，控干水份，然后平放于烘烤箱的烤板上烘烤，溫度可調至70℃。當最后一個蠟塊切完后，前面的切片也烤得差不多了。

關于切片的烘烤，尤其是需做免疫組化切片的烘烤，要特別的注意對抗原的保存，使它們能在合適的烘烤切片時間內既不受到破壞，又能盡量地顯示出現，經多組多次的實驗認為，溫度和時間是極為重要的。溫度過高能使蛋白變性，抗原失活至喪失，時間過長，也會致使其失活和喪失。最初有人主張切片在60℃以下烘烤30-60min，然后進行染色，依此法進行實驗，結果切片脫片率高，切片松動的占100%，由于切片附貼不牢，染色時不敢用PBS充分沖洗，造成背影染色加深，鑒別特別困難。又由于脫片嚴重，重染次數增多，延誤了診斷，也造成人力物力的浪費。究竟什么樣的溫度及時間才能做到既使切片附貼牢固，又不會對抗原造成影響的呢？經實驗證明：切片在60℃恒溫箱中連續烘烤3-5小時最為合適。這種時間和溫度烘烤出來的切片，可以用于抗原修復，PBS的沖洗，可滿足做免疫組化的一切需要。切片在上述的烘烤時間和溫度是否對抗原有影響呢？筆者認為，不必為此而擔心。因為活檢組織塊浸蠟時，浸蠟箱的溫度都調在65℃左右，組織塊在這樣的溫度中起碼要浸泡2小時以上，才能達到浸蠟較為徹底的要求。組織中的抗原，經過65℃的考驗，保留下來的，基本上都已具有耐熱性，因此，幾小時的烘烤，不會對抗原有影響，實驗證明，上述的理論完全正確。

（九）切片的普通染色

普通染色又稱常規染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。它是病理技術中最常用的一種方法，通過它可以做出病理診斷和發現尋求別的輔助方法，以達到準確，完整的病理診斷。（1）染色目的

病理學的所有切片，都必須通過一種以上的染料，通過各種不同的方法，將切片中各種不同的物質，在不同染液的作用下，將其顯示出來，使之在光學顯微鏡下，能夠完全的觀看各種結構。例如，HE染色，好質量的切片可以清晰地顯示出許多不同的結構，細胞核著藍黑色，細胞漿著粉紅色，軟骨著藍色等。清晰的結構為診斷提供可靠的依據，因此，染色技術也是病理技術中的重要組成部分，必須不斷地總結，方能提高。如果染色不好，切片染色一團糟，紅藍不分，結構不清，層次不明，影響了鏡下的觀察，直接影響了臨床診斷，染色結果的好壞直接關系到診斷的準確性。

（2）染色的作用

1．化學作用：所有的染色液中，可把它們分為兩種類型，一種為酸性，另一種為堿性。酸性染料中有染色作用的為陰離子；堿性染料中有染色作用的為陽離子，每個細胞也存在著兩種物質，細胞核含的是酸性物質，細胞漿含的是堿性物質。在染色時，細胞核中的酸性物質與蘇木素染液中的陽離子發生作用，細胞漿中的堿性物質與伊紅染液中的陰離子發生作用，由于反應的部位不同，結果著色有異。2．物理作用：在染色過程中，染液中的色素微粒子浸入到被染組織的粒子間隙內，此時，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而著色。由于各種組織有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可顯出來不同的顏色來。

一般來說，染色的學說還有許多，但說服力強的僅有上述兩種。但不管怎么樣解釋，實際上完成的每一種染色，都與上述兩種學說分不開，它們的作用是相輔相成，同時存在的。（3）染色方法及步驟

1．人工蘇木素，伊紅染色法（HE法）?切片浸入二甲苯中5-10min； ?切片浸入二甲苯中5-10min； ?100%酒精1min。?100%酒精1min。?95%酒精1min。?95%酒精1min。

?90%酒精1min。?80%酒精1min。?自來水洗1min。

?浸入蘇木素染液浸染10-15min。⑴自來水洗30second-1min。⑵1%鹽酸酒精分化30second。⑶流水沖洗15min以上。⑷1%伊紅酒精染3-5min。⑸90%或95%酒精分化30sec。⑹95%酒精30sec-1min。⑺95%酒精30sec-1min。⑻95%酒精30sec-1min。⑼100%酒精1min。⑽100%酒精1-2min。(21)碳酸二甲苯1min。(22)二甲苯1-2min。(23)二甲苯1-2min(24)二甲苯1-2min。中性樹膠封固。

結果：細胞核被染成深藍黑色；細胞漿被染成粉紅色；軟骨及鈣鹽被染成藍色；膠原纖維染成淡粉紅色，嗜酸性細胞及嗜酸性顆粒呈鮮紅色；彈力纖維呈淡粉紅色；某些蛋白性物呈粉紅色等。

第三篇：血液標本采集程序

血液標本采集程序

1.目的

規范生化檢驗標本的采集方法，減少分析前因素對檢驗結果的影響，保證檢驗質量。2.范圍

適用于各種臨床生化標本來集。臨床標本包括血液，尿液、胸腹水等各種體液等。3.職責

3．1 門診和臨床各科護士、門診檢驗人員負責標本的采集。3．2 護工或其他經過相應培訓人員負責標本的轉運。

3．3 檢驗科負責標本的接收和處理，負責指導臨床各科和病人如何正確采集標本。4.程序

4.1 血液標本采集

正確采集血液標本是獲得準確、可靠檢驗結果的關鍵。在自動化檢驗儀器應用普遍的現代臨床實驗室中，基礎性的血液標本的采集和處理是檢測前質量保證的主要環節。4.2 血液標本類型

4.3 血液標本采集方法

血液標本的采集方法按采集部位可分為皮膚采血法、靜脈采血法和動脈采血法。

4.3.1 皮膚采血法

主要用于需要微量血液的檢驗項目和嬰幼兒血常規檢驗。皮膚采血法所獲得的血液標本是微動脈血、微靜脈血和毛細血管血混合的末梢全血。4.3.1.1采血針皮膚采血法（1）器材準備

（2）部位選擇：采血針皮膚采血法的部位與評價見表1-1。

（3）采血方法 ：見表1-1-1

（4）注意事項：見表1-1-0。4.3.2 靜脈采血法

靜脈采血法是臨床廣泛應用的采血方法，所采集的靜脈血能準確反映全身血液的真實情況，因其不易受氣溫和末梢循環變化的影響，而更具有代表性。靜脈采血法根據采血方式可分為普通采血法和負壓采血法。4.3.2.1 普通采血法 普通采血法，即傳統的靜脈采血方法。

4.3.2.2 負壓采血法 負壓采血法又稱為真空采血法，具有計量準確、傳送方便、封閉無塵、標識醒目、刻度清晰、容易保存、一次進針多管采血等優點。

（1）主要器材：負壓采血系統由雙向采血針、采血管構成（圖1-1）。負壓采血管的種類和用途見表1-2。

（2）靜脈選擇和消毒：與普通靜脈采血法相同。

圖1-2 多管血液標本采集順序

4.3.3.3 動脈采血法

動脈采血法的步驟與方法、注意事項見表1-2-

4、表1-2-5

4.4 血液標本的處理、運送與保存

4.4.1 血液標本檢測前預處理

1．分離血清或血漿

2．分離細胞

3．添加劑的選擇

為了快速獲得血清有時還要使用促凝劑和分離膠等。常用添加劑的用途和特點見表1-3。

4.4.2 血液標本運送

血液標本的運送可采用人工運送、軌道傳送或氣壓管道運送等，無論采用哪種運送方式，都應該注意以下3個原則。

4.4.3 實驗室要制定標本接收的標準文件。因不同的檢驗項目對標本的要求不同，還要制定拒收標準。因“讓步”而接收的不合格標本，其檢驗報告單上應注明標本存在的問題，在解釋結果時必須特別說明。

需要注意的是，標本拒收不但造成檢驗費用增高和時間浪費，還可能延誤診治甚至危害患者。因此，涉及血液標本采集的所有工作人員，都必須在標本采集、轉運和處理各個環節進行全面而規范的培訓。4.4.4 血液標本保存

血液標本保存應當在規定的時間內、確保標本特性穩定的條件下，按要求分為室溫保存、冷藏保存、冷凍保存（表1-3-3）。

4.4.4 檢測后血液標本的處理

根據《實驗室生物安全通用要求》要求：

①將操作、收集、運輸及處理廢棄物的危險減至最小。②將其對環境的有害作用減至最小。

血液標本采集的質量保證

1.目的

規范生化檢驗標本的接收、處理、保存等過程，減少分析前因素對檢驗結果的影響，避免標本交接和處理過程中發生差錯。保證檢驗質量。2.范圍

門診和各臨床科室送檢的生化標本。3.職責

3．1 各臨床科室醫生負責檢驗申請單的填寫。

3．2 臨床各科護士、門診檢驗人員負責標本的采集；護土、護工或其他指定人員負責標本的送檢。

3．3 檢驗科生化組負責標本的接收和處理。4.程序

4.1 血液標本采集環境要求與生物安全

4.1.1環境要求---應該人性化設置，空間寬敞，光線明亮，通風良好，血 標本采集的臺面高低和寬度適宜，座位舒適。4.12生物安全---(1)防止交叉感染

(2)環境消毒

4.2 血液標本采集的過程要求 4.2.1檢驗申請單

檢驗申請單或電子申請表中應包括患者最基本的信息，以識別患者和經授權的申請者，同時應提供相關的臨床信息。相關的臨床信息至少包括姓名、性別、年齡，以用于解讀檢驗結果。4.2.2標本采集和處理的具體要求

實驗室應向負責采集標本的人員提供標本采集和處理的具體要求（表1-4）。

4.2.3標本信息完整性與接收

血液標本可通過檢驗申請單溯源到特定的個體，實驗室不應接收或處理缺少標識的檢驗申請單和標本（表1-4-1）。

4.3 血液標本采集及檢測結果的影響因素 4.3.1飲食和生理狀態

患者飲食和生理狀態對檢驗結果的影響見表1-5。

4.3.2藥物

藥物干擾檢驗結果主要有4條途徑： ①影響待測成分的物理性質。②參與檢驗過程的化學反應。

③影響機體組織器官生理功能和（或）細胞活動中的物質代謝。④對機體器官的藥理活性和毒性作用。4.4 采血操作

（1）采血時間

（2）采血部位

（3）采血時體位（4）壓脈帶的使用 4.5 其他

（1）輸液。（2）溶血（表1-6）（3）某些抗凝劑對標本的影響（4）低溫保存對標本的影響

假設HCT為0.50

生化實驗室標本檢測

1.目的

規范生化標本的檢測程序，減少分析過程中各種因素對檢驗結果的影響，確保檢驗質量。2.范圍

適用于所有臨床生化標本的檢測。臨床生化標本包括血液、尿液、胸腹水等各種體液。3.職責

生化組所有檢驗人員按生化組崗位職責，負責標本的預處理、測定、檢驗結果的報告等。4.程序

4．1 檢測過程流程：接收樣品一統一編號一離心或按檢驗項目要求處理一輸入診療卡號或標本號一選擇項目一確定一退出項目錄入，進入主菜單一選擇起始樣品架號一確定，開始測定一審單打印一簽發報告。4．2 樣品接收和編號：按生化標本管理程序進行。

4．3 離心或按檢驗項目要求處理：將編好號的樣本以2500 一3000 r／分離心l O分鐘，直接上機測定。為了避免樣品針堵塞和／或血清(或血漿)與血凝塊(或血細胞)接觸時間過長對檢驗結果的影響，可將血清或血漿移入另一樣品杯，再上機檢測。

4．4 上機測定：按生化分析儀或相應儀器設備的操作規程進行，但應注意標本測定前應按室內質控程序先作質控，只有質控結果在控時，才開始測定標本。若有條件，在測定過程中或測定結束后再分別測定不同濃度的質控品，對檢測的全過程實施質量控制，確保檢驗質量。4．5 結果報告

4．5．1 樣品檢驗完畢后，由操作人員逐一核對檢驗項目有無遺漏，確保與驗單上的申請項目準確無誤后打印結果，由授權簽字人再次進行核對，確保檢驗結果間不相互矛盾，并與臨床診斷相符時簽發報告。

4．5．2 當發現檢驗報告中有缺陷而對其準確性及有效性產生懷疑時，應由相關人員處理追回已發出有缺陷的報告單，并報告科室負責人。對其作必要的修改后再發出。

4．5．3 檢驗工作人員不得向無關人員透露檢驗結果及相關信息。4．5．4 檢驗報告使用者因特殊原因造成報告損壞或遺失時，只有從網絡計算機能夠調出者或登記本上有記錄者，才可補發。

4．6 申訴及處理：檢驗報告申請人或被檢者對檢驗報告的內容有異議時，可向本室負責人或上級單位提出申訴，按投訴處理程序執行。5.支持性文件

《邁瑞480 生化分析儀操作規程》 《生化樣本管理程序》。

第四篇：不合格標本處理程序

不合格標本處理程序.doc

文件編號：WZYY-JYK-ZLHNL-GLYQ-ZLGLTX-發行機構：吳忠市人民醫院檢驗科 批準吳忠市人民醫院檢

人：袁明利

科

不合格標本處理程序 版 本：201301 生效日期：2013年

12月1日

質量管理體系

編 寫 人：吳 君 審核人：鄭寶琴 頁 碼：共1頁 第 1 頁

1.目的：規范檢驗科不合格標本的處理程序。2.范圍：適用于檢驗科所有標本

3.職責：檢驗科所有工作人員應遵守本程序。4.工作程序：

4.1 當標本簽收人員無法對標本進行簽收時，需當面告知標本運送人員不合格原因并退回。

4.2 已簽收標本送至各實驗室后，工作人員應根據各類標本的送檢要求評估標本的合格性。

4.3 對于不滿足送檢要求的標本，各實驗室工作人員需在《不合格標本登記本》上登記日期、病人姓名、年齡、性別、住院號、所屬科室和退還原因。

4.4及時告知臨床科室，將臨床科室對不合格標本的反饋意見、告知人姓名、告知時間和報告人姓名登記到《不合格標本登記本》上。4.5在LIS系統中刪除病人基本信息，在簽收后標本退還窗口下掃描不合格標本條碼或手工輸入條碼。

4.6掃描不合格標本條碼或手工輸入條碼后，簽收后標本退還窗口會出現病人的相關信息和不合格標本原因，在不合格原因一欄中輸入退還原因。

4.7將不合格血液標本退還后保存在專用不合格標本儲存位置，儲存1周。其它類型的標本不用儲存，及時清除。

第五篇：標本采集接收處理程序

標本采集、接收和處理程序

1． 目的 規范標本采集、接收和處理工作，確保標本質量，保證結果的準確可靠，確保輸血安全。

2． 范圍 適用于標本采集、接收和處理。3． 職責

科主任：負責標本采集、接收和處理的管理工作。

工作人員：負責標本采集、接收和處理的日常工作。

質量監督員：負責標本采集、接收和處理日常監督工作。4． 程序

1．標本采集：①標本采集前作好充分準備，各種物料、器材準備充分；②采集標本時須讓受檢者知情同意；③認真核對患者姓名、性別、年齡、病案號、病室或門急診、床號、血型和診斷等，準確無誤后方可采集標本；④采集標本時嚴格消毒，無菌操作；⑤采集的標本準確放入有唯一性標記的容器內，一一對應；⑥對標本采集過程中使用的材料進行安全處置。

2．標本接收：①認真核對標本管與《臨床輸血申請單》內容是否一致；②檢查標本質量是否符合要求，標簽粘貼是否牢固；③檢查《臨床輸血申請單》是否填寫完整、是否有執業醫師簽名；④接收標本時，雙方核對無誤后，記錄標本的接收時間、數量，簽字認可，標本放入冰箱按規定保存；⑤拒收標本應說明拒收理由。

3．標本處理：①檢測前根據不同的檢測目的嚴格按照標準操作規程對標本進行離心、分離、加樣等處理，做好樹立記錄；②檢測中嚴格按照各項目的檢測方法加樣、加試劑、孵育、反應、讀結果等，并做好記錄；③檢測后交叉配血后標本2-8℃保存7d,7d后按規定進行銷毀，并做好銷毀記錄。

4．監督管理：①科主任不定期對標本采集、接收和處理進行監督檢查，發現問題，發《限期整改通知書》，限期整改；②質量監督員對標本采集、接收和處理進行日常監督，發現問題，及時上報科主任。