第一篇：菌種生化反應(yīng)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

菌種生化反應(yīng)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

依據(jù)：《中華人民共和國藥典》2005年版第三部。

范圍：適用于大腸桿菌表達(dá)的重組人基因工程產(chǎn)品。

目的：通過生化試驗鑒定所用的菌種是否為標(biāo)準(zhǔn)的大腸桿菌。

原理：枸椽酸鹽利用試驗原理：枸椽酸鹽培養(yǎng)基中僅含一種氮源（銨鹽）和唯一碳源（枸椽酸鈉）一般細(xì)菌能利用磷酸二氫銨作為氮源，但不一定能分解枸椽酸鹽而取得碳源，因此可否利用該鹽，能將不同細(xì)菌鑒別。

吲哚試驗原理：有些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，吲哚本身沒有顏色，不能直接觀察，所以加入二甲基氨基苯甲醛試劑，使之與吲哚作用形成紅色的玫瑰吲哚。

甲基紅試驗原理：大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌在糖代謝中都能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸。產(chǎn)氣桿菌能將兩個分子丙酮酸脫羧生成一個分子中性乙酰甲基甲醇，故培養(yǎng)物中形成酸類較少，使酸堿度PH可在5.4以上，因此加入甲基紅指示劑后呈桔黃色，是為甲基紅試驗陰性，而大腸桿菌能進(jìn)一步分解丙酮酸，產(chǎn)生酸類較多，使培養(yǎng)物的酸堿度在PH4.5或更低，故甲基紅指示劑呈紅色，是為甲基紅試驗陽性。

V-P試驗原理：測定細(xì)菌分解葡萄糖后能否產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，產(chǎn)氣桿菌可使丙酮酸脫羧變?yōu)橹行缘囊阴＜谆状迹趬A性條件下被空氣中的氧氣氧化成二乙酰，后者又與培養(yǎng)基蛋白胨中精氨酸所含胍基起作用，生成紅色化合物，稱為U-P試驗陽性。

內(nèi)容：

1材料、設(shè)備

1．1 材料：

1．1．1 菌種：PBV888/DH5α，來源于主種子批或工作種子批。

1．1．2注射用水：符合《中華人民共和國藥典》2005年版要求。

1．1．3 試劑

蛋白胨

氯化鈉NaCl分析純

葡萄糖C6H12O6分析純

溴麝香草酚蘭C27H28Br2O5S分析純

對二甲基氨基苯甲醛C9H11NO分析純

戊醇C5H15O分析純

濃鹽酸HCl分析純

甲基紅C15H15N3O2分析純

無水乙醇CH3CH2OH分析純

氫氧化鈉NaOH分析純

氫氧化鉀KOH分析純

α-萘酚C10H7OH分析純

硫酸鎂MgSO4?7H2O分析純

磷酸氫二鉀K2HPO4分析純

磷酸二氫銨NH4H2PO4分析純

枸椽酸鈉C6H5Na3O7·2H2O分析純

瓊脂粉分析純

1．2 器皿

鹽水瓶、中試管、膠頭滴管、燒杯、量筒（100ml、500ml、1000ml）、吸管（10ml）、試劑瓶（250ml、500ml）。

1．3 儀器、設(shè)備

PH計PHC-3C型上海大中分析儀器廠

電子秤ES-200A型沈陽騰龍電子儀器公司

電子天平ACS太原

恒溫培養(yǎng)箱HG303-5B型湖北省黃石市醫(yī)療器械廠

水浴箱6 LiterLKB

生物安全臺Ⅱ級A型安徽蚌埠凈化設(shè)備廠

1．4 其它材料

硫酸紙、牛皮紙、片帶、橡皮膏、吸球（1ml及10ml）玻棒、接種環(huán)、透氣栓。2方法

2．1 準(zhǔn)備工作

2．1．1 工作環(huán)境：在十萬級潔凈室內(nèi)進(jìn)行，確認(rèn)場地清場合格，摘下“清場合格”標(biāo)志牌，掛上“使用中”標(biāo)志牌。

2．1．2 器皿清潔要求

經(jīng)本室洗刷間處理烤干后用二層硫酸紙、一層牛皮紙包好，用線繩系緊，經(jīng)121.3℃，60分鐘高壓蒸汽滅菌備用。

2．1．3調(diào)試儀器設(shè)備

2．1．3．1 確認(rèn)PH計運(yùn)行狀態(tài)良好，已掛有“備用”標(biāo)志牌。

2．1．3．2 確認(rèn)電子秤運(yùn)行狀態(tài)良好，已掛有“備用”標(biāo)志牌。

2．1．3．3 確認(rèn)電子天平運(yùn)行狀態(tài)良好，已掛有“備用”標(biāo)志牌。

2．1．3．4 確認(rèn)培養(yǎng)箱運(yùn)行狀態(tài)良好，已掛有“運(yùn)行”標(biāo)志牌。

2．1．3．4 確認(rèn)水浴箱運(yùn)行狀態(tài)良好。已掛有“備用”標(biāo)志牌。

2．1．4溶液及培養(yǎng)基的配制：

2．1．4．11N NaOH 100ml

摘下電子秤“備用”標(biāo)志牌，掛上“運(yùn)行”標(biāo)志牌，接通電源，校零。

用電子秤稱取NaOH 4克，加注射用水80ml溶解，用量筒定容至100ml，置試劑瓶中，標(biāo)明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．21%的溴麝香草酚蘭（BTB）100ml

摘下電子天平“備用”標(biāo)志牌，掛上“運(yùn)行”標(biāo)志牌，接通電源，校零。用電子天瓶稱取1克溴麝香草酚蘭，加1N NaOH 1.6ml，加注射用水定容至100ml。置試劑瓶中，標(biāo)明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．30.4%的溴麝香草酚蘭（BTB）100ml

用電子天平稱取溴麝香草酚蘭0.4克加1N NaOH 0.64ml，加注射用水至100ml裝入試劑瓶中，標(biāo)明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．4 95%乙醇500ml

量取475ml無水乙醇，加注射用水定容500ml，裝入試劑瓶中，標(biāo)明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．5 甲基紅試劑 500ml

用電子天平稱取甲基紅0.1克，溶于95%乙醇300ml，然后加注射用水定容至

500ml，置試劑瓶中，標(biāo)明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．6 枸氏試劑 100ml

摘下水浴箱“備用”標(biāo)志牌，掛上“運(yùn)行”標(biāo)志牌，接通電源，設(shè)定56℃，預(yù)熱。用電子天平稱取對二甲基氨基苯甲醛5克，加入到75ml戊醇內(nèi)，置于56℃水浴中，不斷搖動使其溶解，取出冷卻后徐徐滴入濃鹽酸25ml，滴加時隨滴隨搖，以免驟熱。放置一夜，即成淡褐色透明液體，置250ml試劑瓶中，標(biāo)明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，保存于冷暗處或冰箱內(nèi)。

2．1．4．7 40%氫氧化鉀溶液100ml

用電子秤稱取40克KOH，充分溶于80ml注射用水，補(bǔ)足體積至100ml，搖勻，盛于250ml試劑瓶中，標(biāo)明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期、放室溫待用。

2．1．4．8 6% α-萘酚酒精溶液100ml

用吸管吸取6mlα-萘酚，用無水乙醇定容至100ml，置250ml試劑瓶中，標(biāo)明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．9 75%乙醇的配制

取無水乙醇75ml，用注射用水定容至100ml，混勻，裝入250ml試劑瓶中，貼標(biāo)簽，標(biāo)明液體名稱、濃度、體積、批號、日期。室溫備用。

2．1．4．10 培養(yǎng)基的配制

2．1．4．10．1 蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗用）1000ml：

摘下pH計“備用”標(biāo)志牌，掛上“運(yùn)行”標(biāo)志牌。用電子秤稱取蛋白胨10克，NaCl 5克，加入800ml注射用水，混勻，調(diào)PH值7.4-7.6，定容1000ml，115.6℃，30分鐘高壓滅菌。

2．1．4．10．2 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（甲基紅和U-P試驗用）1000ml

用電子秤分別稱取蛋白胨5克，葡萄糖5克，磷酸氫二鉀5克，加800ml注射用水，混勻，調(diào)PH7.2-7.4，定容1000ml，115.6℃，30分鐘高壓滅菌。

2．1．4．10．3 枸椽酸鹽培養(yǎng)基1000ml

用電子天平分別稱取NaCl5克，MgSO4·7H2O 0.2克，磷酸氫二鉀1克，磷酸二氫銨1克，枸椽酸鈉2克，瓊脂20克，溶于注射用水1000ml，調(diào)PH6.8-7.2，加入1% BTB指示劑10ml，搖勻，115.6℃，30分鐘高壓滅菌。

2．2操作步驟

2．2．1 吲哚試驗

2．2．1．1 摘下生物安全臺“備用”標(biāo)志牌，掛上“運(yùn)行”標(biāo)志牌。用75%酒精棉擦拭臺內(nèi)，接通電源，打開風(fēng)機(jī)，吹30分鐘。在生物安全臺內(nèi)，將蛋白胨水培養(yǎng)基用吸管分裝于滅菌中試管，每管2ml。用接種環(huán)（經(jīng)火焰滅菌，冷卻后）取細(xì)菌接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，蓋上透氣栓。

2．2．1．2 于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時后取出，每管加2-3滴枸氏試劑，輕輕振搖，使戊醇分散于液體中，將培養(yǎng)物靜置，待戊醇升至培養(yǎng)液面后，如有吲哚存在，就可以被提取在戊醇層中，反應(yīng)呈玫瑰紅色者為陽性，以“+”表示，仍呈黃色者為陰性以“-”表示。

2．2．2 甲基紅試驗

2．2．2．1 在生物安全臺中將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基分裝于滅菌中試管中，每管2ml。用接種環(huán)（火焰滅菌，冷卻后）接種細(xì)菌于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，用透氣栓蓋好。

2．2．2．2 37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天后，取出滴加甲基紅試劑2-3滴，可立即觀察，顯現(xiàn)紅色為陽性，用“+”表示，否則為陰性，用“-”表示。

2．2．3 V-P試驗

2．2．3．1 在生物安全臺中將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基用吸管分裝于滅菌中試管中，每管2ml。用接種環(huán)（火焰滅菌，冷卻后）取細(xì)菌，接種于該培養(yǎng)基中，用透氣栓蓋好。

2．2．3．2 37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天取出后，在每管中加入0.4ml 4%的KOH和1ml 6% α-萘酚酒精溶液，混勻，室溫下靜置5-15分鐘，如出現(xiàn)紅色為陽性，以“+”表示，否則為陰性以“-”表示。

2．2．4 枸椽酸鹽利用試驗

2．2．4．1 將滅菌后的枸椽酸鹽培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在生物安全臺中用吸管分裝于試管中，每管5ml，傾斜放置。斜面培養(yǎng)基冷卻后，用接種環(huán)（經(jīng)火焰滅菌，冷卻后）取細(xì)菌，接種于該斜面培養(yǎng)基中，用透氣栓蓋好。

2．2．4．2 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，觀察，有菌生長，培養(yǎng)顏色由綠

變?yōu)樯钐m者為陽性，以“+”表示，否則為陰性以“-”表示。

工作場地摘下“使用中”標(biāo)志牌，掛上“待處理”標(biāo)志牌。結(jié)果判定

3．1判定標(biāo)準(zhǔn)

吲哚、甲基紅、U-P及枸椽酸鹽利用四項試驗，合稱為IMVIC試驗，鑒別大腸桿菌的結(jié)果應(yīng)為“++--”。

3．2判定結(jié)果

判定結(jié)果經(jīng)二人復(fù)核，填寫檢定記錄，注明菌種名稱、批號、判定日期、檢定結(jié)果、工作者及復(fù)核者等。

4清場

4．1配液清場

4．1．1稱取藥品之后將藥品瓶蓋好，放回藥品柜中。

4．1．2將電子秤、電子天平和PH計切斷電源后，清潔干凈，放回原處，填寫使用記錄，摘下“運(yùn)行”標(biāo)志牌，掛“備用”標(biāo)志牌。生物安全臺，用75%酒精棉擦拭臺內(nèi)，繼續(xù)吹10分鐘后，關(guān)閉風(fēng)機(jī)，切斷電源，摘下“運(yùn)行”標(biāo)志牌，掛上“備用”標(biāo)志牌，并填寫使用記錄。

4．1．3清潔操作臺面，用專用抹布擦凈。

4．1．4地面用專用拖布拖凈。

4．2操作清場

4．2．1試驗完畢，含細(xì)菌的中試管121.3℃，60分鐘高壓滅菌。

4．3 清場結(jié)束后，由車間工序負(fù)責(zé)人或質(zhì)量監(jiān)督員檢查合格后，摘下“待處理”標(biāo)志牌，掛上“清場合格”標(biāo)志牌，并填寫清場記錄。注意事項

5．1 各種培養(yǎng)基的標(biāo)識一定要醒目，以免判定時失誤。

5．2 清場時，必須將帶菌的器皿先送高壓滅菌處理后，再送洗刷組處理。

5．3 所有工作均應(yīng)經(jīng)二人復(fù)核，并及時填寫工作記錄。

第二篇：菌種傳代操作規(guī)程

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題

目

菌種傳代操作規(guī)程

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制

定

審

核

批

準(zhǔn)

制訂日期

審核日期

批準(zhǔn)日期

頒發(fā)部門

質(zhì)量部

生效日期

分發(fā)部門

化驗室

一、目的：為使菌種傳代操作規(guī)范化、制度化，故建立此規(guī)程

二、適用范圍：菌種傳代須按本規(guī)程執(zhí)行。

三、責(zé)任者：微生物限度檢查化驗員，質(zhì)量檢測中心主任。

四、正文：

1、培養(yǎng)基的制備

按微生物限度檢查用稀釋劑、培養(yǎng)基配制操作規(guī)程及斜面配制操作規(guī)程配制好相應(yīng)培養(yǎng)基。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、沙門菌、用胰酪大豆胨瓊脂斜面培養(yǎng)基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，制備好的培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)48小時后，確認(rèn)無菌落生長方可使用。

2.菌種傳代

2.1菌種傳代前應(yīng)準(zhǔn)備好適于該菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備，所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護(hù)的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。

2.2點燃酒精燈，在火焰上部操作，將原有的菌種斜面（簡稱菌種管）與待接種的新鮮斜面培養(yǎng)基（簡稱接種管）持在左手拇指、食指及中指之間，菌種管在前，接種管在后，使試管內(nèi)斜面向上，兩支試管口平齊，應(yīng)斜持試管呈45°角，以免管底凝集水浸濕培養(yǎng)基表面。用右手在火焰旁轉(zhuǎn)動兩支試管膠塞，以便接種時易于撥取。再用右手持接種環(huán)的柄端，垂直或稍斜地把接種環(huán)在火焰上灼燒。將接種環(huán)燒紅約30s，隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼，以徹底滅菌。用右手的小指和手掌之間以及無名指與小指之間，在火焰旁分別拔除兩支試管的膠塞，持住。在將試管口在火焰上通過以殺滅管口的細(xì)菌，但勿燒的過熱，將燒灼的接種環(huán)插入菌種管內(nèi)，先接觸無菌苔生長的培養(yǎng)

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菌種傳代操作規(guī)程

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基上，如有溶印則表明接種環(huán)未冷卻，待冷后，再從斜面上挑取少許菌苔。取出時接種環(huán)不能通過火焰，應(yīng)在火焰旁迅速插入接種管，在斜面上由下而上劃

“Z”字型曲線，當(dāng)接種完畢，立即將管口通過火焰滅菌，右手到火焰旁塞上膠塞，不要將管口離開火焰旁去迎接右手的膠塞。最后將接種環(huán)燒灼滅菌放置備用。

3.培養(yǎng)

將以上接種好的各菌管放入相應(yīng)溫度的培養(yǎng)箱內(nèi)，白色念珠菌放入23-28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24-48h，黑曲霉放入23-28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5-7天，其它菌種放入30-35℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-24小時。

4.保存

除銅綠假單胞菌需室溫保存外，將其它傳代培養(yǎng)后的菌種應(yīng)放入4-6℃的冰箱冷藏保存。

依據(jù)：《中國藥典》2015版及中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范

第三篇：生化檢查注意事項

生化檢查注意事項

生化全套檢查為生物及化學(xué)檢驗，需要多種不同的檢驗試劑進(jìn)行檢查，所以生化全套檢查之前需要注意：

（1）、需要空腹：生化全套檢查前保持空腹，最好在頭一天晚上八點后不再進(jìn)食，第二天不吃早飯直接進(jìn)行生化全套檢查。

（2）、不可飲酒：酒精會影響到部分化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致檢查結(jié)果錯誤，一定不可飲酒。

（3）、檢查前不可過量運(yùn)動：大量運(yùn)動會導(dǎo)致機(jī)體的轉(zhuǎn)氨酶等含量變化，導(dǎo)致檢查結(jié)果不準(zhǔn)確。

3.血脂化驗前注意四事項

（1）、藥物干擾

某些冠心病藥物可使膽固醇和甘油三酯降低;維生素A、維生素D可使膽固醇升高;硝酸甘油、甘露醇可使甘油三酯升高。因此，在抽血前2-3天內(nèi)，不要服用這些藥物。

（2）、控制飲食

抽血前12小時內(nèi)不能進(jìn)食，8小時內(nèi)不能飲水，3天內(nèi)不能飲酒，不能吃動物肉，因為動物的內(nèi)臟、腦子、骨髓、脂肪等膽固醇含量都很高，這樣可以避免食物中脂肪和酒精等對血脂暫時性升高的影響。

（3）、適度健身運(yùn)動

驗血脂前2-3天不要做過猛的健身運(yùn)動，如跑步、打球、跳高等。因為運(yùn)動量過大過猛，脂肪中的脂酶活性增加，血脂相應(yīng)降低，這對化驗結(jié)果也會有一

定的影響。尤其是老年人在早晨不要晨練。

（4）、止血帶結(jié)扎時間

醫(yī)生在為患者驗血前，止血帶結(jié)扎時間最好不要超過1分鐘。如結(jié)扎超過了2分鐘，膽固醇就可升高2%-5%;如超過了5分鐘，膽固醇就可升高5%-15%。

第四篇：2-007生化室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程

漕河涇街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗科

2-007 生化室內(nèi)質(zhì)量控制操作規(guī)程

1、名稱：室內(nèi)生化質(zhì)量控制品操作規(guī)程

2、方法：不同項目方法學(xué)不同。參照后面具體的單項目操作規(guī)程。

3、目的：室內(nèi)質(zhì)量控制是實驗室質(zhì)量保證體系中的重要組成部分，其目的是為了保證每個患者樣本測定結(jié)果的可靠性。測定結(jié)果的可靠性包括兩個方面的含義，一是精密度高，即測定的重復(fù)性好；另一個方面是準(zhǔn)確度高，即測定結(jié)果正確，接近真值。

4、試劑：

：華宇億康：ALB、TP、ALT、AST、ALP、GGT、TBIL、DBIL、GLU、TG、CHOL、BUN、CREA、URCA、P、ApoA1、ApoB診斷試劑；：HDL-C、LDL-C、AMY診斷試劑，江蘇奧迪康電解質(zhì)試劑；山東濰坊工程：LDH、CK、CKMB、HBDH

5、儀器：歐寶 XL-600全自動生化分析儀；AC9000電解質(zhì)分析儀;

6、質(zhì)控品名稱：郎道質(zhì)控品

7、質(zhì)控品的存放：干粉置2-8℃保存，溶解、分裝后置-20℃冰箱冷凍保存。

8、質(zhì)控結(jié)果的判定程序：質(zhì)控結(jié)果傳輸?shù)絃IS系統(tǒng)，9、操作： 使用歐寶 XL-600全自動生化分析儀

9.1從冰箱中取出質(zhì)控品，將質(zhì)控品高、低二液分別滴入樣品杯，放入H試管架；開機(jī)時做的位置為H1-H5，LIS系統(tǒng)序列號為1001-1005，機(jī)器運(yùn)行途中做的位置為H6-H10，LIS系統(tǒng)序列號為1005-1010；在單項目TEST小于100時，可只做一次質(zhì)控。9.2質(zhì)控品應(yīng)避光擺放在室溫下10分鐘左右進(jìn)行測試。

9.3若有失控,首先尋找原因，進(jìn)行分析，根據(jù)具體情況決定是否需要重新操作或糾正，重做或糾正結(jié)果需在失控分析報告上注明，同樣當(dāng)天的結(jié)果需根據(jù)失控的原因進(jìn)行分析，若判斷為質(zhì)控品問題，重新用新的質(zhì)控品，檢測結(jié)果良好，則測試病人標(biāo)本；若質(zhì)控品無問題，則需找尋其他原因，必要時應(yīng)該進(jìn)行重新校準(zhǔn)定標(biāo)，再重新測定質(zhì)控。質(zhì)控標(biāo)本結(jié)果在控才能發(fā)出報告,并將失控原因、分析、采取的措施及復(fù)做質(zhì)控的值做書面紀(jì)錄。

使用XD-683電解質(zhì)分析儀

9.4質(zhì)控品從冰箱中取出溶化后放入樣品杯中，將樣品杯放入反應(yīng)盤的1號和2號位，19

漕河涇街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗科

中途測試放入3號和4號位。

9.5若有失控,首先尋找原因，進(jìn)行分析，根據(jù)具體情況決定是否需要重新操作或正，重做或糾正結(jié)果需在失控分析報告上注明，同樣當(dāng)天的結(jié)果需根據(jù)失控的原因進(jìn)行分析，若判斷為質(zhì)控品問題，重新用新的質(zhì)控品，檢測結(jié)果良好，則測試病人標(biāo)本；若質(zhì)控品無問題，則需找尋其他原因。質(zhì)控標(biāo)本結(jié)果在控才能發(fā)出報告,并將失控原因、分析、采取的措施及復(fù)做質(zhì)以及輔佐質(zhì)控的值做書面紀(jì)錄。使用DS5系列糖化血紅蛋白分析儀

9.6質(zhì)控品從冰箱中取出，溶解后放入樣品盤的1號和2號位。

9.7如若有失控,首先尋找原因，進(jìn)行分析，根據(jù)具體情況決定是否需要重新操作或正，重做或糾正結(jié)果需在失控分析報告上注明，同樣當(dāng)天的結(jié)果需根據(jù)失控的原因進(jìn)行分析，若判斷為質(zhì)控品問題，重新用新的質(zhì)控品，檢測結(jié)果良好，則測試病人標(biāo)本；若質(zhì)控品無問題，則需找尋其他原因。質(zhì)控標(biāo)本結(jié)果在控才能發(fā)出報告,并將失控原因、分析、采取的措施及復(fù)做質(zhì)以及輔佐質(zhì)控的值做書面 紀(jì)錄。※ 注意事項：

各檢測項目需嚴(yán)格按操作規(guī)程操作。

10、測試結(jié)果的判定：采用國際通用Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法。包括12S警告規(guī)則和5個失控規(guī)則13S、22S、R4S、41S、10x

11、失控情況處理及原因分析:發(fā)生失控情況應(yīng)立即報告小組、科室及質(zhì)控負(fù)責(zé)人；當(dāng)天的該項目化驗報告不可填發(fā)；并應(yīng)盡快查清原因，采取糾正措施。失控原因的查找過程并無固定模式。一般采用原則是由易到難，由近到遠(yuǎn)地查找。

11.1分析原始數(shù)據(jù)及初步估計失控原因，結(jié)合近期室內(nèi)質(zhì)控圖和平時的經(jīng)驗進(jìn)行分析，往往有助于估計失控原因地大體方向，提示誤差類型和失控原因，使查找工作更有重點。11.2對具體檢測過程進(jìn)行回顧分析：分析有無特殊情況，如電壓波動、儀器不穩(wěn)、試劑過期，質(zhì)控品瓶蓋松動、未充分溶解混勻等，同時復(fù)查計算結(jié)果。

11.3通過選擇性復(fù)查進(jìn)一步分析判斷失控原因和處理方法：為了驗證上述地初步分析，并進(jìn)一步查清失控原因，一般應(yīng)進(jìn)行復(fù)測。復(fù)測時包括，失控時使用的質(zhì)控品、重新打開一瓶相同批號地質(zhì)控品等。

失控發(fā)生后，應(yīng)詳細(xì)記錄具體情況、查找原因地步驟、分析推理過程及最后處理辦法等，及時在全體人員中召開會議，進(jìn)行分析、討論。

12、室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)地管理：

漕河涇街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗科

12.1每月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理：每個月末，應(yīng)當(dāng)對當(dāng)月的所有質(zhì)控數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總和統(tǒng)計處理，利用上海市臨檢中心的在線質(zhì)控軟件系統(tǒng)能仔細(xì)閱讀各種質(zhì)控數(shù)據(jù)。12.2每月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的保存：每個月末，應(yīng)當(dāng)將當(dāng)月的所有質(zhì)控數(shù)據(jù)匯總整理后存檔保存，利用上海市臨檢中心的在線質(zhì)控軟件系統(tǒng)能方便的進(jìn)行此類操作，最后，當(dāng)月的失控報告單要單獨保存（包括違背哪一項失控規(guī)則，失控原因，采取的糾正措施）。12.3每月上報的質(zhì)控數(shù)據(jù)圖表：每個月末到下個月的前3天，是在線上傳室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的時間，上海市臨檢中心經(jīng)過匯總整理后，會將當(dāng)月的結(jié)果反饋給科室。室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的周期性評價：對于臨檢中心反饋的質(zhì)控數(shù)據(jù)分析圖表，應(yīng)當(dāng)要仔細(xì)查看，認(rèn)真總結(jié)，對于當(dāng)月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)及累計均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)進(jìn)行評價，查看與市內(nèi)同組儀器或同類型數(shù)據(jù)之間的均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)之間是否有明顯不同，如果發(fā)現(xiàn)有顯著性差異，也需要分析原因，對質(zhì)控圖的均值、標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行修改，并要對質(zhì)控方法進(jìn)行重新設(shè)計。

13、意義:質(zhì)量控制品的運(yùn)用及質(zhì)控規(guī)則的判定，其重要性在于保證所提供的檢驗信息對臨床醫(yī)師用于患者診斷、治療時的有效性、可靠性。開展合理的質(zhì)控工作能保證檢驗結(jié)果能真實、客觀地反映患者當(dāng)前病情或健康狀態(tài)所應(yīng)采取的必要保證措施，也是建立和保證檢驗結(jié)果的溯源性。

14、參考文獻(xiàn)：

《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版），葉應(yīng)嫵、王毓

三、申子瑜主編，P82-98,東南大學(xué)出版社出版

編寫日期：2011年

修訂日期：2012 編寫者：毛華宇

科主任認(rèn)可：

第五篇：微生物鑒定的生理生化反應(yīng)匯總

微生物鑒定的生理生化反應(yīng)

各種細(xì)菌具有各自獨特的酶系統(tǒng)，因而對底物的分解能力不同，其代謝產(chǎn)物也不同。用生物化學(xué)方法測定這些代謝產(chǎn)物，可用來區(qū)別和鑒定細(xì)菌的種類。利用生物化學(xué)方法來鑒別不同細(xì)菌，稱為細(xì)菌的生物化學(xué)試驗或稱生化反應(yīng)。生物化學(xué)試驗的方法很多，主要有以下幾類。

一、碳水化合物的代謝試驗 1．糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗

（1）原理：不同種類細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖（醇、苷）類的酶，因而對各種糖（醇、苷）類的代謝能力也有所不同，即使能分解某種糖（醇、苷）類，其代謝產(chǎn)物可因菌種而異。檢查細(xì)菌對培養(yǎng)基中所含糖（醇、苷）降解后產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的能力，可用以鑒定細(xì)菌種類。

(2)方法：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（如酚紅肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）類。所使用的糖（醇、苷）類有很多種，根據(jù)不同需要可選擇單糖、多糖或低聚糖、多元醇和環(huán)醇等，見表6-4-1。將待鑒定的純培養(yǎng)細(xì)菌接種入試驗培養(yǎng)基中，置35℃孵育箱內(nèi)孵育數(shù)小時到兩周（視方法及菌種而定）后，觀察結(jié)果。若用微量發(fā)酵管，或要求培養(yǎng)時間較長時，應(yīng)注意保持其周圍的濕度，以免培養(yǎng)基干燥。

(3)結(jié)果：能分解糖（醇、苷）產(chǎn)酸的細(xì)菌，培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應(yīng)（如酚紅變?yōu)辄S色），產(chǎn)氣的細(xì)菌可在小倒管（Durham小管）中產(chǎn)生氣泡，固體培養(yǎng)基則產(chǎn)生裂隙。不分解糖則無變化。

(4)應(yīng)用：糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗，是鑒定細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗中最主要的試驗，不同細(xì)菌可發(fā)酵 不同的糖（醇、苷）類，如沙門菌可發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵乳糖，大腸埃希菌則可發(fā)酵葡萄糖和乳糖。即便是兩種細(xì)菌均可發(fā)酵同一種糖類，其發(fā)酵結(jié)果也不盡相同，如志賀菌和大腸埃希菌均可發(fā)酵葡萄糖，但前者僅產(chǎn)酸，而后者則產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，故可利用此試驗鑒別細(xì)菌。

表6-4-1 常用于細(xì)菌糖發(fā)酵試驗的糖、醇類

單糖 四碳糖：赤蘚糖 , 五碳糖：核糖 核酮糖 木糖

阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖 果糖 半乳糖 甘露糖

雙糖 蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麥芽糖（兩分子葡萄糖）三糖 棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖 菊糖（多分子果糖）淀粉

醇類 側(cè)金盞花醇 衛(wèi)茅醇 甘露醇 山梨醇 非糖類 肌醇

2．葡萄糖代謝類型鑒別試驗

(1)原理：細(xì)菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型；能進(jìn)行無氧降解的為發(fā)酵型；不分解葡萄糖的細(xì)菌為產(chǎn)堿型。發(fā)酵型細(xì)菌無論在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖，而氧化型細(xì)菌在無氧環(huán)境中則不能分解葡萄糖。本試驗又稱氧化發(fā)酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）試驗，可用于區(qū)別細(xì)菌的代謝類型。

(2)方法：挑取少許純培養(yǎng)物（不要從選擇性平板中挑取）接種2支HL培養(yǎng)管中，在其中一管加入高度至少為0.5cm的無菌液體石蠟以隔絕空氣（作為密封管），另一管不加（作為開放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。

(3)結(jié)果： 兩管培養(yǎng)基均不產(chǎn)酸（顏色不變）為陰性；兩管都產(chǎn)酸（變黃）為發(fā)酵型；加液體石蠟管不產(chǎn)酸，不加液體石蠟管產(chǎn)酸為氧化型。(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科與其它非發(fā)酵菌的鑒別。腸桿菌科、弧菌科細(xì)菌為發(fā)酵型，非發(fā)酵菌為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于鑒別葡萄球菌（發(fā)酵型）與微球菌（氧化型）。3．甲基紅（MR）試驗

(1)原理：某些細(xì)菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步被分解為甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下時，加入甲基紅指示劑呈紅色。如細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)（如醇、醛、酮、氣體和水），培養(yǎng)基pH在 5.4以上，加入甲基紅指示劑呈桔黃色。

(2)方法：將待試菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培養(yǎng)基中滴加5~6滴甲基紅指示劑，立即觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果判定：呈現(xiàn)紅色者為陽性，桔黃色為陰性，桔紅色為弱陽性。

(4)應(yīng)用：常用于腸桿菌科內(nèi)某些種屬的鑒別，如大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬為陰性，而沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬等為陽性。

4．β－半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）

(1)原理：乳糖發(fā)酵過程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些細(xì)菌只有半乳糖苷酶，因而只能遲緩發(fā)酵乳糖，所有乳糖快速發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的細(xì)菌均可快速水解鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黃色的鄰硝基酚。用于枸櫞酸菌屬、亞利桑那菌屬與沙門菌屬的鑒別。

(2)方法：將待試菌接種于ONPG肉湯中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：呈現(xiàn)亮黃色為陽性，無色為陰性。

(4)應(yīng)用：可用于遲緩發(fā)酵乳糖細(xì)菌的快速鑒定，本法對于迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌均可短時間內(nèi)呈現(xiàn)陽性。埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷菌屬和腸桿菌屬等均為試驗陽性，而沙門菌屬、變形桿菌屬和普羅威登斯菌屬等為陰性。

5．VP試驗

(1)原理：測定細(xì)菌產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。某些細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進(jìn)而與培養(yǎng)基中的精氨酸等含胍基的物質(zhì)結(jié)合形成紅色化合物。即V-P試驗陽性。(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙醇溶液）0.6ml，輕輕振搖試管，然后加0.2ml 400g/L KOH，輕輕振搖試管30s至1min，然后靜置觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：紅色者為陽性，黃色或類似銅色為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別。本試驗常與MR試驗一起使用，一般情況下，前者為陽性的細(xì)菌，后者常為陰性，反之亦然。但腸桿菌科細(xì)菌不一定都這樣規(guī)律，如蜂房哈夫尼亞菌和奇異變形桿菌的VP試驗和MR試驗常同為陽性。6．膽汁七葉苷水解試驗

（1）原理：在10%~40％膽汁存在下，測定細(xì)菌水解七葉苷的能力。七葉苷被細(xì)菌分解生成的七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的枸櫞酸鐵的二價鐵離子發(fā)生反應(yīng)形成黑色化合物。

(2)方法：將被檢菌接種于膽汁七葉苷培養(yǎng)基中，35℃孵育18~24h后，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：培養(yǎng)基完全變黑為陽性，不變黑為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于鑒別D群鏈球菌與其它鏈球菌的區(qū)別，以及腸桿菌科的某些種、某些厭氧菌（如脆弱擬桿菌等）的初步鑒別。D群鏈球菌本試驗為陽性。7．淀粉水解試驗

(1)原理：產(chǎn)生淀粉酶的細(xì)菌能將淀粉水解為糖類，在培養(yǎng)基上滴加碘液時，可在菌落周圍出現(xiàn)透明區(qū)。

(2)方法：將被檢菌劃線接種于淀粉瓊脂平板或試管中，35℃孵育18~24h，加入革蘭碘液數(shù)滴，立即觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：陽性反應(yīng)，菌落周圍有無色透明區(qū)，其它地方藍(lán)色；陰性反應(yīng)，培養(yǎng)基全部為藍(lán)色。

(4)應(yīng)用：用于白喉棒狀桿菌生物型的分型，重型淀粉水解試驗陽性，輕、中型陰性；芽胞桿菌屬菌種和厭氧菌某些種的鑒定。8．甘油復(fù)紅試驗

(1)原理：甘油可被細(xì)菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脫去羧基為乙醛，乙醛與無色的復(fù)紅生成醌式化合物，呈深紫紅色。

(2)方法：取被檢菌接種于甘油復(fù)紅肉湯培養(yǎng)基中，于35℃孵育，觀察2~8d。應(yīng)同時做陰性對照。

(3)結(jié)果：紫紅色為陽性，與對照管顏色相同為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于沙門菌屬內(nèi)各菌種間的鑒別。傷寒沙門菌、甲（丙）型副傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、孔道夫沙門菌和仙臺沙門菌本試驗為陰性，乙型副傷寒沙門菌結(jié)果不定，其它不常見沙門菌多數(shù)為陽性。9．葡萄糖酸氧化試驗

(1)原理：某些細(xì)菌可氧化葡萄糖酸鉀，生成α-酮基葡萄糖酸。α-酮基葡萄糖酸是一種還原性物質(zhì)，可與班氏試劑起反應(yīng)，出現(xiàn)棕色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖酸鹽培養(yǎng)基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏試劑1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷卻，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：出現(xiàn)黃到磚紅色沉淀為陽性。不變或仍為藍(lán)色為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于假單胞菌的鑒定和腸桿菌科菌分群。

二、氨基酸和蛋白質(zhì)的代謝試驗 1．硫化氫試驗

(1)原理：某些細(xì)菌能分解含硫氨基酸生成硫化氫，與亞鐵離子或鉛離子結(jié)合形成黑色沉淀物。

(2)方法：將待檢菌接種于含硫化物及亞鐵離子的培養(yǎng)基或克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）中，35℃孵育18~24h，觀察有無黑色沉淀出現(xiàn)。或用醋酸鉛紙條，懸掛于KIA管中（白色濾紙，根據(jù)試管大小裁剪適當(dāng)，在熱的50g/L醋酸鉛飽和水溶液中浸泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高壓滅菌備用）。醋酸鉛是最敏感的方法。(3)結(jié)果：有黑色沉淀物為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于鑒別腸桿菌科細(xì)菌，如沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、愛德華菌屬等為陽性，其它菌屬大多為陰性。但沙門菌屬中亦有部分硫化氫陰性菌株，如甲型副傷寒、仙臺、豬霍亂沙門菌等。2．明膠液化試驗

(1)原理：細(xì)菌分泌的胞外蛋白水解酶（明膠酶）能分解明膠，使明膠失去凝固能力而液化。(2)方法：將待檢菌接種于明膠培養(yǎng)基中，35℃孵育24h到7d或更長時間，每24h取出放入4℃冰箱約2h后，觀察有無凝固。

(3)結(jié)果：如無凝固，則表示明膠已被水解，液化試驗陽性。如凝固，則繼續(xù)培養(yǎng)。

(3)應(yīng)用：奇異變形桿菌、普通變形桿菌、沙雷菌屬和陰溝腸桿菌等到能液化明膠，腸桿菌科中的其它細(xì)菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外，許多假單胞菌也能產(chǎn)生明膠酶而使明膠液化。3．吲哚試驗（靛基質(zhì)試驗）(1)原理：某些細(xì)菌有色氨酸酶，能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，吲哚與對二甲氨基苯甲醛形成紅色的玫瑰吲哚。

(2)方法：將待檢菌接種于富含色氨酸的蛋白胨水培養(yǎng)基中，35℃孵育24~48h，加入靛基質(zhì)試劑，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：紅色為陽性，無色為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定，如大腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌，肺炎克雷伯菌和產(chǎn)酸克雷伯菌等的鑒別。4．苯丙氨酸脫氨酶試驗

(1)原理：測定細(xì)菌是否產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶。細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨后生成苯丙酮酸，加入三氯化鐵試劑后產(chǎn)生綠色反應(yīng)。若延長時間，會引起退色。

(2)方法：將待檢菌大量接種入苯丙氨酸培養(yǎng)基中，35℃孵育18~24h，滴加100g/L三氯化鐵試劑4~5滴，立即觀察菌落生長處有無綠色出現(xiàn)。(3)結(jié)果：有綠色出現(xiàn)為陽性。

(4)應(yīng)用：變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬均為陽性，腸桿菌科其它細(xì)菌均為陰性。5．氨基酸脫羧酶試驗

(1)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，可用指示劑指示出來。

(2)方法：將待檢菌分別接種于1支氨基酸（賴氨酸，鳥氨酸或精氨酸）脫羧酶試驗管和1支氨基酸脫羧酶對照管（無氨基酸），各覆蓋至少0.5cm高度的無菌石蠟油，35℃孵育1~4d，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：若為溴甲酚紫指示劑，則試驗管紫色為陽性，黃色為陰性，對照管應(yīng)為黃色。(4)應(yīng)用：主要用于某些細(xì)菌種間的鑒別，如賴氨酸用于產(chǎn)氣腸桿菌（陽性）與陰溝腸桿菌（陰性）；鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和產(chǎn)氣腸桿菌（陰性）等。6．精氨酸雙水解酶試驗

(1)原理：精氨酸經(jīng)兩次水解后,生成鳥氨酸、氨及二氧化碳。鳥氨酸又在脫羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均為堿性物質(zhì)，故可使培養(yǎng)基變堿，用指示劑指示出來。(1)方法：將待檢菌接種于試驗培養(yǎng)上，置35℃孵箱孵育1~4d，觀察結(jié)果。

(2)結(jié)果：溴甲酚紫指示劑呈紫色為陽性，酚紅指示劑呈紅色為陽性。黃色為陰性。(3)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。7．尿素酶試驗

(1)原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿。(2)方法：將待檢菌接種于含有尿素的培養(yǎng)基中，35℃孵育18~24h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：紅色為陽性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科變形桿菌屬、普羅威登菌屬、克雷伯菌屬及假單胞菌屬的鑒定。

8．霍亂紅試驗

(1)原理：霍亂弧菌分解色氨酸生成吲哚，并能使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，當(dāng)加入硫酸后生成亞硝酸吲哚，呈紅色反應(yīng)。

(2)方法：將待檢菌接種于蛋白胨水中，置35℃孵育24h，加入濃硫酸數(shù)滴，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：呈紅色者為陽性。

(4)應(yīng)用：霍亂弧菌呈陽性反應(yīng)，但本試驗并非霍亂弧菌所特有。凡能產(chǎn)生吲哚并還原硝酸鹽為亞硝酸鹽的細(xì)菌，均可呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。

三、碳源和氮源利用試驗 1．枸櫞酸鹽利用試驗

(1)原理：某些細(xì)菌能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源，而在此培養(yǎng)基上生長，并分解枸櫞酸鹽生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性。

(2)方法：將待檢菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上，置35℃孵育1~4d，逐日觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：若用溴麝香草酚蘭指示劑，斜面出現(xiàn)菌落或菌苔，培養(yǎng)基變藍(lán)色為陽性；無菌落生長，培養(yǎng)基綠色為陰性。

(4)應(yīng)用：可用此試驗作細(xì)菌種屬間鑒定。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性，沙門菌屬、克雷伯菌屬通常陽性，粘質(zhì)和液化沙雷菌和某些變形桿菌及枸櫞酸桿菌陽性。此外，銅綠假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌和嗜水氣單胞菌也能利用枸櫞酸鹽。

2．丙二酸鹽利用試驗

(1)原理：某些細(xì)菌能利用丙二酸鹽作為唯一碳源，丙二酸鹽被分解生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿。

(2)方法：將待檢菌接種于丙二酸鹽培養(yǎng)基中，置35℃孵育24~48h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色為陽性。顏色無變化為陰性。

(4)應(yīng)用：腸桿菌科中亞利桑那菌和克雷伯菌屬為陽性，枸櫞酸桿菌屬、腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬有不同生物型反應(yīng)，其它各菌屬均為陰性。

3．醋酸鈉利用試驗

(1)原理：細(xì)菌利用銨鹽作為唯一氮源，同時，利用醋酸鹽作為唯一碳源時，可在醋酸鹽培養(yǎng)上生長，分解醋酸鹽生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。

(2)方法：將被檢菌接種于醋酸鹽培養(yǎng)基中，置35℃孵育2~7d，逐日觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：培養(yǎng)基上有細(xì)菌生長，并變?yōu)樗{(lán)色為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于大腸埃希菌和志賀菌屬的鑒別，前者為陽性，而后者為陰性。4．馬尿酸鈉水解試驗

(1)原理：某些細(xì)菌可具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸與三氯化鐵試劑結(jié)合，形成苯甲酸鐵沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基中，置35℃孵育48h，離心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化鐵試劑0.2ml，立即混勻，經(jīng)10~15min觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：出現(xiàn)恒定之沉淀物為陽性。(5)應(yīng)用：主要用于B群鏈球菌的鑒定。

5、乙酰胺利用試驗

(1)原理：許多非發(fā)酵菌產(chǎn)生一種脫酰胺酶，可使乙酰胺經(jīng)脫酰胺作用釋放氨，使培養(yǎng)基變堿。

(2)方法：將被檢菌接種于乙酰胺培養(yǎng)基中，置35℃孵育24~48h，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色為陽性。如不生長，或稍有生長，但培養(yǎng)基顏色不變?yōu)殛幮浴?/p>

(4)應(yīng)用：主要用于非發(fā)酵菌的鑒定。銅綠假單胞菌、去硝化產(chǎn)堿桿菌、食酸假單胞菌為陽性，其它非發(fā)酵菌大多數(shù)為陰性。

四、酶類試驗 1.氧化酶試驗

(1)原理：氧化酶又稱細(xì)胞色素氧化酶，是細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)中的最終呼吸酶。此酶并不直接與氧化酶試劑起反應(yīng)，而是先使細(xì)胞色素C氧化，然后此氧化型細(xì)胞色素C再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。因此，本試驗結(jié)果與細(xì)胞色素C的存在有關(guān)。

(2)方法：取潔凈濾紙條，沾取菌落少許，加氧化酶試劑（10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液或10g/L鹽酸二甲基對苯二胺水溶液）1滴，1min內(nèi)觀察結(jié)果。也可將試劑滴加到菌落上進(jìn)行試驗。

(3)結(jié)果：陽性者立即變粉紅色，5~10s內(nèi)呈深紫色。無色為陰性。

(4)應(yīng)用：用于奈瑟菌屬的菌種鑒定，該屬細(xì)菌均陽性。此外，也用于假單胞菌屬與腸桿菌科細(xì)菌的區(qū)別，前者陽性，而后者陰性。莫拉菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等均為陽性。

注意事項： ①試驗時應(yīng)避免接觸含鐵物質(zhì)，以免出現(xiàn)假陽性。②10g/L鹽酸四甲基對苯二胺或10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液為無色溶液，在空氣中易被氧化而失效，故應(yīng)經(jīng)常更換新試劑，并盛于棕色瓶中，若試劑已變成深藍(lán)色，應(yīng)棄去不用。

2．觸酶試驗

(1)原理：觸酶又稱過氧化氫酶，具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫成為水和原子態(tài)氧，繼而形成氧分子，出現(xiàn)氣泡。

(2)方法：取潔凈玻片1張，用接種環(huán)挑取細(xì)菌，加3％H2O2 1滴，立即觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：若立即出現(xiàn)大量氣泡為陽性。無氣泡為陰性。

(4)應(yīng)用：大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過氧化氫酶，但鏈球菌科陰性，故常用此試驗來鑒定。此外，金氏桿菌屬的細(xì)菌也為陰性。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗，結(jié)核分枝桿菌為陰性，戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。

注意事項：①3％H2O2溶液要新鮮配制。②不宜用血瓊脂平板上生長的菌落，因紅細(xì)胞含有觸酶，可致假陽性反應(yīng)，③取對數(shù)生長期的細(xì)菌。3．凝固酶試驗

(1)原理：凝固酶試驗是鑒定葡萄球菌致病性的重要試驗。致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶，一種是與細(xì)胞壁結(jié)合的凝聚因子，稱結(jié)合凝固酶，它直接作用于血漿中纖維蛋白原，使發(fā)生沉淀，包圍于細(xì)菌外面而凝聚成塊，玻片法陽性結(jié)果是由此凝聚因子所致；另一種凝固酶是分泌至菌體外，稱為游離凝固酶，它能使凝血酶原變成凝血酶類產(chǎn)物，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。試管法可同時測定結(jié)合型和游離型凝固酶。(2)方法: ①玻片法：在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環(huán)取待檢培養(yǎng)物與其混合（設(shè)陽性和陰性對照）制成菌懸液，若經(jīng)10~20s內(nèi)無自凝現(xiàn)象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿1環(huán)，與菌懸液混合，觀察結(jié)果。②試管法：于試管內(nèi)加1﹕4稀釋的兔或人血漿0.5ml，再加1~2個待試菌菌落，置37℃水浴，每30min觀察1次結(jié)果。

(3)結(jié)果：①玻片法：5~10s內(nèi)出現(xiàn)凝集者為陽性。②試管法：如有凝塊或整管凝集出現(xiàn)為陽性。2h后無上述現(xiàn)象出現(xiàn)，則放置過夜后再觀察。

(4)應(yīng)用：本試驗僅用于致病性葡萄球的鑒定。

注意事項：①玻片法為篩選試驗，陽性、陰性均需進(jìn)行試管法測定。②血漿必須新鮮。③應(yīng)使用肝素而非枸櫞酸鹽作抗凝劑抗凝的血漿。④本試驗也可用市購的膠乳凝集試驗試劑盒測定。

4．DNA酶試驗

(1)原理： 某些細(xì)菌能產(chǎn)生DNA酶，水解外源性DNA使之成為寡核苷酸。DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸則不會。故在DNA瓊脂平板上加鹽酸后，可在菌落周圍形成透明區(qū)。

(2)方法：在DNA瓊脂平板上點種待檢菌，35℃孵育18~24h，用1 mol/L鹽酸傾注平板，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：如菌落周圍有透明區(qū)者為陽性，無透明區(qū)為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科及葡萄球菌屬某些菌種的鑒定。沙雷菌、變形桿菌和金黃色葡萄球菌DNA酶均陽性。

5．膽汁溶菌試驗

(1)原理：膽汁或去氧膽酸鈉能導(dǎo)致某些細(xì)菌溶解，一方面是由于膽汁或去氧膽酸鈉降低了細(xì)菌細(xì)胞膜上的表面張力，使細(xì)菌的細(xì)胞膜破損或使菌體裂解。另一方面可能與激活細(xì)菌體內(nèi)的自溶酶有關(guān)。

(2)方法：①試管法：用純培養(yǎng)物制備1ml生理鹽水濃菌懸液，pH調(diào)至7.0，分裝兩支試管，各0.5ml。其中一管加0.5ml 100g/L去氧膽酸鈉為試驗管，另一管加0.5ml生理鹽水作對照。35℃孵育每小時觀察1次結(jié)果。②平板法：在血平板上選取單個可疑菌落，作好標(biāo)記，直接在菌落上加1接種環(huán)20g/L去氧膽酸鈉（pH7.0），置35℃孵育30min（平板不要翻轉(zhuǎn)）觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：①試管法：在3h內(nèi)液體透明為陽性。②平板法：如菌落消失，僅留下溶血區(qū)為陽性，菌落不消失為陰性。

(4)應(yīng)用：用于肺炎鏈球菌的鑒定。6．硝酸鹽還原試驗

(1)原理：硝酸鹽還原反應(yīng)包括兩個過程，其一是在合成代謝過程中，硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)胞內(nèi)其它含氮化合物；另一是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。硝酸鹽還原過程可因細(xì)菌不同而異。有的細(xì)菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌等；有的細(xì)菌可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨；有的細(xì)菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如沙雷菌屬；有的細(xì)菌還可以將其還原產(chǎn)物在合成性代謝中完全利用。硝酸鹽或亞硝酸鹽如果還原生成氣體的終末產(chǎn)物如氮或氧化氮，則稱為脫硝化或脫氮化作用。某些細(xì)菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸作用，生成亞硝酸，亞硝酸與試劑中的對氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者與α-萘胺結(jié)合生成N-α萘胺偶苯磺酸。

(2)方法：將待檢菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基（內(nèi)含小倒管）中，35℃孵育1~4d。將甲、乙等量混合液（用時混合）0.1ml加于試管內(nèi)，立即或10min內(nèi)觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性反應(yīng)。如欲觀察有無氮氣產(chǎn)生，可于培養(yǎng)基管內(nèi)加1只小倒管，有氣泡產(chǎn)生，則表示有氮氣生成。如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否被分解，可取鋅粉少許加入培養(yǎng)基內(nèi)，如出現(xiàn)紅色表明硝酸鹽仍存在；若不出現(xiàn)紅色，表示硝酸鹽已被分解。

(4)應(yīng)用：本試驗廣泛用于細(xì)菌鑒定。腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；假單胞菌屬中有的細(xì)菌能產(chǎn)生氮氣，如銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、斯氏假單胞菌，有的則能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，如鼻疽假單胞菌等；厭氧菌如韋榮菌也能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。7．卵磷脂酶試驗

(1)原理：細(xì)菌產(chǎn)生的卵磷脂酶，經(jīng)鈣離子作用，能迅速分解卵黃或血清中的卵磷脂形成混濁沉淀狀的甘油酯和水溶性磷酸膽堿。

(2)方法：取待檢菌劃線接種或點種在卵黃瓊脂平板上，置35℃孵育3~6h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：3h后在菌落周圍形成乳白色混濁，即為卵磷脂酶試驗陽性，6h后該混濁圈可擴(kuò)大到直徑5~6mm。(4)應(yīng)用：該試驗主要用于厭氧的鑒定。產(chǎn)氣莢膜梭菌和諾維梭菌為陽性，其他梭菌為陰性。蠟樣芽孢桿菌亦為陽性。8．磷酸酶試驗

(1)原理：磷酸酶是磷酸脂的水解酶，可使單磷脂水解，其反應(yīng)可根據(jù)反應(yīng)基質(zhì)不同而異，如用磷酸酚酞為基質(zhì)，經(jīng)磷酸酶水解后可釋放酚酞，在堿性環(huán)境中呈紅色。

(2)方法：取待檢菌接種于磷酸酚酞瓊脂平板上，置35℃孵育18~24h，于平皿蓋內(nèi)加1滴濃氨水，熏蒸片刻，觀察結(jié)果。亦可用液體培養(yǎng)基，經(jīng)孵育后，向管內(nèi)加400g/L氫氧化鈉溶液1滴，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：菌落變?yōu)榧t色者為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌的鑒別，前者為陽性，后者為陰性。

9．脂酶試驗

(1)原理：細(xì)菌產(chǎn)生的脂酶可分解脂肪為游離脂肪酸。在培養(yǎng)基中加入維多利亞藍(lán)可與脂肪結(jié)合成為無色化合物，如果脂肪被分解，則維多利亞藍(lán)釋出，呈藍(lán)色。

(2)方法：將待檢菌接種于含維多利亞藍(lán)的脂酶培養(yǎng)基中，置35℃孵育24h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{(lán)色者為陽性，否則可呈無色或粉紅色。

(4)應(yīng)用：主要用于厭氧菌鑒定。在擬桿菌中產(chǎn)黑色素擬桿菌中間亞種產(chǎn)生脂酶，其它擬桿菌陰性；在梭菌屬中諾維梭菌和產(chǎn)芽胞梭菌也產(chǎn)生此酶，其它梭菌為陰性。10．CAMP試驗

(1)原理：B群鏈球菌（無乳鏈球菌）產(chǎn)生一種“CAMP”因子，此種物質(zhì)能促進(jìn)葡萄球菌的β-溶血素的活性。因此，可在兩種細(xì)菌的交界處溶血力增強(qiáng)，出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)。

(2)方法：在羊血或馬血瓊脂平板上，先以β-溶血的金黃色葡萄球菌劃一橫線接種。再將待檢菌與前一劃線作垂直接種，兩者應(yīng)相距1cm，于35℃孵育18~24h，觀察結(jié)果。每次試驗應(yīng)做陰陽性對照。

(3)結(jié)果：兩種細(xì)菌劃線交接處出現(xiàn)箭頭型溶血區(qū)為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于B群鏈球菌（陽性）的鑒定，其他鏈球菌均為陰性。11．石蕊牛乳試驗

(1)原理：由于牛乳內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)和糖類，各種細(xì)菌對這些物質(zhì)的分解能力不同，故可有數(shù)種不同反應(yīng)，用以鑒別細(xì)菌。(2)將待檢菌接種于石蕊牛乳培養(yǎng)基中，若為芽胞梭菌，要在培養(yǎng)基中加入無菌鐵末，置35℃孵育18~24h，必要時可延長至14d。觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：①產(chǎn)酸：發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使指示劑變?yōu)榉奂t色。②產(chǎn)氣：發(fā)酵乳糖而同時產(chǎn)氣，可沖開上面的凡士林。③凝固：因產(chǎn)酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固。④胨化：將凝固的酪蛋白繼續(xù)水解為胨，培養(yǎng)基上層液體變清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白。⑤產(chǎn)堿：乳糖未發(fā)酵，因分解含氮物質(zhì)，生成胺及氨，培養(yǎng)基變堿，指示劑變?yōu)樗{(lán)色。(4)應(yīng)用：主要用于梭菌、鏈球菌和丙酸桿菌的鑒定。

五、抑菌試驗

1．Optochin敏感試驗

(1)原理：Optochin(奧普托欣)是鹽酸乙基氫化羥基奎寧的商品名。對肺炎鏈球菌有特異抑制作用，其作用機(jī)制可能是干擾葉酸生物合成作用，而對其它鏈球菌則無此作用。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻涂布于血瓊脂平板上，貼上一張含5μg奧普托欣紙片，置燭缸或二氧化碳孵箱，35℃ 孵育18~24h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：抑菌圈直徑大于14mm為敏感，小于或等于 14mm為陰性。(4)應(yīng)用：主要用于肺炎鏈球菌（敏感）與其它鏈球菌（耐藥）的鑒別。2．桿菌肽敏感試驗

(1)原理：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎是100%敏感，而其它群鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。故此試驗可對鏈球菌進(jìn)行鑒別。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻涂布于血瓊脂平板上，稍干后貼一張含0.04U的桿菌肽紙片，置35℃ 孵育18~24h，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：抑菌圈直徑大于10mm為敏感，小于10mm為耐藥。(4)應(yīng)用：主要用于A群與非A群鏈球菌的鑒別。從臨床分離的菌株中有5%~15%非 A群鏈球菌也對桿菌肽敏感，如6%的B群鏈球菌、7.5%的C群鏈球菌和G群鏈球菌等。3．新生霉素敏感試驗

(1)原理：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低濃度新生霉素所抑制，表現(xiàn)為敏感，而腐生葡萄球菌則表現(xiàn)為耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于M-H瓊脂平板或血平板上，在平板中央貼含5μg/片新生霉素診斷紙片一張，置35℃孵育16~18h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：抑菌圈直徑大于16mm為敏感，小于或等于16mm為耐藥。(4)應(yīng)用：主要用于葡萄球菌某些種的鑒定。4．O/129試驗

(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二異丙基喋啶）能抑制弧菌屬、發(fā)光桿菌屬和鄰單胞菌屬細(xì)菌生長，而氣單胞菌屬和假單胞菌屬細(xì)菌則耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于堿性瓊脂平板上，將10μg/片及150μg/片的O/129診斷紙片貼于平板上，置35℃孵育18~24h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：出現(xiàn)抑菌圈者表示敏感，無抑菌圈者為耐藥。

(4)應(yīng)用：主要用于弧菌屬、鄰單胞菌屬與氣單胞菌屬的鑒別，弧菌屬和鄰單胞菌屬菌為敏感，氣單胞菌屬菌為耐藥。其它菌屬有發(fā)光桿菌屬為敏感，假單胞菌屬為耐藥。5．氰化鉀試驗

(1)原理：氰化鉀可抑制某些細(xì)菌的呼吸酶系統(tǒng)。細(xì)胞色素、細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶均以鐵卟啉作為輔基，氰化鉀與鐵卟啉結(jié)合，使這些酶失去活性，使細(xì)菌生長受到抑制。(2)方法：將待檢菌接種于氰化鉀培養(yǎng)基中，同時接種一支不含氰化鉀的對照培養(yǎng)基，置35℃孵育24~48h，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：細(xì)菌在氰化鉀培養(yǎng)基中生長的（不受抑制）為陽性，不生長（抑制）為陰性。(4)應(yīng)用：腸桿菌科中的沙門菌屬、志賀菌屬和埃希菌屬細(xì)菌的生長受到抑制，而其它各菌屬的細(xì)菌均可生長。

六、其它試驗

1．克氏雙糖鐵或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗

(1)原理：克氏雙糖鐵(KIA)或三糖鐵瓊脂(TSI)培養(yǎng)基制成高層和短的斜面，其中葡萄糖含量僅為乳糖或蔗糖的十分之一，若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，分解葡萄糖產(chǎn)酸使pH降低，因此斜面和底層均先呈黃色，但因葡萄糖量較少，所生成的少量酸可因接觸空氣而氧化，并因細(xì)菌生長繁殖利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，使斜面部分又變成紅色；底層由于處于缺氧狀態(tài)，細(xì)菌分解葡萄糖所生成的酸類一時不被氧化而仍保持黃色。細(xì)菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中的硫酸亞鐵作用，形成黑色的硫化鐵。

(2)方法：用接種針挑取待檢菌的菌落，先穿刺接種到KIA或TSI深層，距管底3~5mm為止，再從原路退回，在斜面上自下而上劃線，置35℃孵 育18~24h，觀察結(jié)果。(3)結(jié)果：常見的KIA反應(yīng)有如下幾種： ①斜面堿性/底層堿性：不發(fā)酵碳水化合物，系不發(fā)酵菌的特征。如銅綠假單胞菌。②斜面堿性/底層酸性：葡萄糖發(fā)酵、乳糖（和TSI中的蔗糖）不發(fā)酵，是不發(fā)酵乳糖菌的特征，如志賀菌。③斜面堿性/底層酸性（黑色）：葡萄糖發(fā)酵、乳糖不發(fā)酵并產(chǎn)生硫化氫，是產(chǎn)生硫化氫不發(fā)酵乳糖菌的特征。如沙門菌、亞利桑那菌、枸櫞酸桿菌和變形桿菌等。④斜面酸性/底層酸性：葡萄糖和乳糖（和TSI中的蔗糖）發(fā)酵，是發(fā)酵乳糖的大腸菌群的特征，如大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。

(4)應(yīng)用：鑒別腸道桿菌用。KIA或TSI對初分離出的、可疑為革蘭陰性桿菌鑒定特別有用。其反應(yīng)模式是許多桿菌鑒定表的組成部分，也可作為觀察其他培養(yǎng)基反應(yīng)的有價值的質(zhì)控依據(jù)。

2．氫氧化鉀拉絲試驗

(1)原理：革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁在稀堿溶液中易于破裂，釋放出未斷裂的DNA螺旋，使氫氧化鉀菌懸液呈現(xiàn)粘性，可用接種環(huán)攪拌后拉出粘絲來，而革蘭陽性細(xì)菌在稀堿溶液中沒有上述變化。

(2)方法：取1滴40g/L氫氧化鉀水溶液（應(yīng)新鮮配制）于潔凈玻片上，取新鮮菌落少許，與氫氧化鉀水溶液攪拌混勻，并每隔幾秒鐘上提接種環(huán)，觀察能否拉出粘絲。(3)結(jié)果：用接種環(huán)拉出粘絲者為陽性，仍為混懸液者為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于革蘭陰性菌與易脫色的革蘭陽性菌的鑒別。大多數(shù)革蘭陰性菌于5~10s內(nèi)出現(xiàn)陽性反應(yīng)，有的則需30~45s，假單胞菌、無色桿菌、黃桿菌、產(chǎn)堿桿菌、莫拉菌等大多數(shù)在10s內(nèi)呈陽性，不動桿菌、莫拉菌反應(yīng)較慢，大多數(shù)菌株在60s內(nèi)出現(xiàn)陽性，而革蘭陽性菌在60s以后仍為陰性。