第一篇：微生物的鑒定方法總結(jié)-2015.6.26

目錄 微生物鑒定技術(shù)—傳統(tǒng)方法..........................................1 1.1 細(xì)菌微菌落技術(shù)..............................................1 1.2 生理生化反應(yīng)特征............................................1 1.3 生態(tài)學(xué)特征..................................................2 1.4 血清學(xué)反應(yīng)..................................................2 1.5 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法........................................3 1.6 微量多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)鑒定系統(tǒng)........................................3 2 微生物鑒別方法—新技術(shù)新方法......................................3 2.1 細(xì)胞壁組分分析..............................................3 2.2 紅外光譜IR..................................................3 2.3 氣相色譜GC..................................................4 2.4 高效液相色譜HPLC............................................4 2.5 質(zhì)譜分析MS..................................................4 3 微生物鑒別方法—分子生物學(xué)方法....................................4 3.1分子生物學(xué)技術(shù)...............................................4 3.2 PCR技術(shù).....................................................4 3.3 基因探針技術(shù)................................................4 3.4 16SrDNA基因同源性分析.......................................5

蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

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微生物的鑒定方法 微生物鑒定技術(shù)—傳統(tǒng)方法

在傳統(tǒng)的分類(lèi)鑒定中，微生物分類(lèi)鑒定的主要依據(jù)是形態(tài)學(xué)特征、生理生化反應(yīng)特征、生態(tài)學(xué)特征以及血清學(xué)反應(yīng)、對(duì)噬菌體的敏感性等。在鑒定時(shí)，我們把這些依據(jù)作為鑒定項(xiàng)目，進(jìn)行一系列的觀察和鑒定工作。1.1 細(xì)菌微菌落技術(shù)

細(xì)菌的形態(tài)、大小、顏色及其它特征與細(xì)菌的基本生物學(xué)特性如代謝類(lèi)型、分裂方式、繁殖速度等有密切關(guān)系。肉眼所見(jiàn)菌落，即大菌落是由大量的菌體緊密堆積而成，有不少生物學(xué)特性不能辨別；微菌落則是指細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖早期在固相載體上形成的只能借助顯微鏡進(jìn)行觀察的細(xì)菌集落。與大菌落相比，微菌落邊緣及中央有明顯不同的表形特征。可據(jù)此對(duì)微生物的種類(lèi)進(jìn)行鑒定。缺點(diǎn)：受操作人員主觀性影響大。（1）細(xì)胞形態(tài)

在顯微鏡下觀察細(xì)胞外形大小、形狀、排列等，細(xì)胞構(gòu)造，革蘭氏染色反應(yīng)，能否運(yùn)動(dòng)、鞭毛著生部位和數(shù)目，有無(wú)芽孢和莢膜、芽孢的大小和位置，放線菌和真菌的繁殖器官的形狀、構(gòu)造，孢子的數(shù)目、形狀、大小、顏色和表面特征等。（2）群體形態(tài)

群體形態(tài)通常是指以下情況的特征：在一定的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落特征，包括外形、大小、光澤、黏稠度、透明度、邊緣、隆起情況、正反面顏色、質(zhì)地、氣味、是否分泌水溶性色素等；在一定的斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌苔特征，包括生長(zhǎng)程度、形狀、邊緣、隆起、顏色等；在半固體培養(yǎng)基上經(jīng)穿刺接種后的生長(zhǎng)情況；在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況，包括是否產(chǎn)生菌膜，均勻渾濁還是發(fā)生沉淀，有無(wú)氣泡，培養(yǎng)基的顏色等。如是酵母菌，還要注意是成醭狀、環(huán)狀還是島狀。

1.2 生理生化反應(yīng)特征（1）利用物質(zhì)的能力 蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

包括對(duì)各種碳源利用的能力（能否以CO2為唯一碳源、各種糖類(lèi)的利用情況等）、對(duì)各種氮源的利用能力（能否固氮、硝酸鹽和銨鹽利用情況等）、能源的要求（光能還是化能、氧化無(wú)機(jī)物還是氧化有機(jī)物等）、對(duì)生長(zhǎng)因子的要求（是否需要生長(zhǎng)因子以及需要什么生長(zhǎng)因子等）。（2）代謝產(chǎn)物的特殊性

這方面的鑒定項(xiàng)目非常多，如是否產(chǎn)生H2S、吲哚、CO2、醇、有機(jī)酸，能否還原硝酸鹽，能否使牛奶凝固、凍化等。（3）與溫度和氧氣的關(guān)系

測(cè)出適合某種微生物生長(zhǎng)的溫度范圍以及它的最適生長(zhǎng)溫度、最低生長(zhǎng)溫度和最高生長(zhǎng)溫度。對(duì)氧氣的關(guān)系，看它是好氧、微量好氧、兼性好氧、耐氧還是專(zhuān)性厭氧。1.3 生態(tài)學(xué)特征

生態(tài)學(xué)特征主要包括它與其他生物之間的關(guān)系（是寄生還是共生，寄主范圍以及致病的情況）。在自然界的分布情況（pH情況、水分程度等）、滲透壓情況（是否耐高滲、是否有嗜鹽性等）。1.4 血清學(xué)反應(yīng)

很多細(xì)菌有十分相似的外表結(jié)構(gòu)（如鞭毛）或有作用相同的酶（如乳酸桿菌屬內(nèi)各種細(xì)菌都有乳酸脫氫酶）。雖然它們的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)各異，但在普通技術(shù)下（如電子顯微鏡或生化反應(yīng)），仍無(wú)法分辨它們。然而利用抗原與抗體的高度敏感特異性反應(yīng)，就可用來(lái)鑒別相似的菌種，或?qū)νN微生物分型。用已知菌種、型或菌株制成的抗血清，與待鑒定的對(duì)象是否發(fā)生特異性的血清學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒定未知菌種、型或菌株。

該法常用于腸道菌、噬菌體和病毒的分類(lèi)鑒定。利用此法，已將傷寒桿菌、肺炎鏈球菌等菌分成數(shù)十種菌型。蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

1.5 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法

在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等，可使目標(biāo)培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養(yǎng)基，可在24h內(nèi)鑒定金黃色葡萄球菌。1.6 微量多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)鑒定系統(tǒng)

該系統(tǒng)的原理是根據(jù)微生物生理生化特征鑒定的結(jié)果，所進(jìn)行的數(shù)碼分類(lèi)鑒 定。它是針對(duì)微生物的生理生化特性，配制各種底物、培養(yǎng)基、試劑等，分別微量加入各個(gè)分隔室中，冷凍干燥脫水或不干燥脫水，各分室在同一塑料條或板上構(gòu)成檢測(cè)卡。在未知菌加入其中檢測(cè)后，通過(guò)查檢索表或直接輸入計(jì)算機(jī)得到鑒定結(jié)果。最短甚至能在2-4h出結(jié)果。

微生物多項(xiàng)鑒定技術(shù)優(yōu)點(diǎn)突出，能快速、敏感、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的鑒定微生物，缺點(diǎn)是各系統(tǒng)差異較大，有的價(jià)格昂貴，有的個(gè)別反應(yīng)不準(zhǔn)。但毫無(wú)疑問(wèn)，它是微生物鑒定技術(shù)向快速、簡(jiǎn)易和自動(dòng)化發(fā)展的重要方向之一。微生物鑒別方法—新技術(shù)新方法

2.1 細(xì)胞壁組分分析

細(xì)胞壁組分分析首先應(yīng)用于放線菌分類(lèi)中，把它作為區(qū)分“屬”的依據(jù)之一。它比單純用形態(tài)進(jìn)行分類(lèi)更全面。近年來(lái)，有人對(duì)18個(gè)屬的放線菌的細(xì)胞壁進(jìn)行了分析，根據(jù)細(xì)胞壁的氨基酸組成，將其分為6個(gè)細(xì)胞壁類(lèi)型，又根據(jù)細(xì)胞壁的糖的組成分成4個(gè)糖類(lèi)型，在此基礎(chǔ)上，結(jié)合形態(tài)特征提出了相應(yīng)的科屬檢索表。

2.2 紅外光譜IR 一般認(rèn)為，每種物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)都有特定的紅外光譜。若兩個(gè)樣品的吸收光譜完全相同，可以初步認(rèn)為它們是同一種物質(zhì)。因此，紅外光譜技術(shù)被應(yīng)用到微生物的分類(lèi)中。它先后對(duì)芽孢桿菌、乳酸菌、大腸桿菌、酵母菌進(jìn)行分類(lèi)，近年來(lái)又應(yīng)用于放線菌分類(lèi)中。

根據(jù)有關(guān)學(xué)者的試驗(yàn)表明，這種方法簡(jiǎn)便快速，樣品少，結(jié)果較好，不僅可 蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

以初步了解各屬菌的細(xì)胞成分的化學(xué)性質(zhì)，同時(shí)也有助于微生物間系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的探索。但是它也有不足之處，借助于紅外線光譜區(qū)分屬內(nèi)的種和菌株是困難的，但可以作為“屬”的分類(lèi)特征。2.3 氣相色譜GC 2.4 高效液相色譜HPLC 2.5 質(zhì)譜分析MS 3 微生物鑒別方法—分子生物學(xué)方法

3.1分子生物學(xué)技術(shù)

以上幾種都是應(yīng)用細(xì)菌的表現(xiàn)特性(包括形態(tài)、生理、生化、血清等)進(jìn)行鑒定。雖然這種方法很成功，但對(duì)十分相似的細(xì)菌卻難以區(qū)別。進(jìn)二十年來(lái)，核酸技術(shù)應(yīng)用于分類(lèi)鑒定已成為發(fā)展趨勢(shì)。3.2 PCR技術(shù)

PCR技術(shù)采用體外酶促反應(yīng)合成特異性DNA片段，再通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物來(lái)識(shí)別細(xì)菌。由于PCR靈敏度高，理論上可以檢出一個(gè)拷貝的基因，因此在細(xì)菌的檢測(cè)中只需短時(shí)間增菌甚至不增菌，即可通過(guò)PCR進(jìn)行篩選，節(jié)約了大量時(shí)問(wèn)，但PCR技術(shù)缺點(diǎn)：增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對(duì)Taq酶具有作用，可能導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果假陰性；微量的外源性DNA進(jìn)入PCR后可以引起無(wú)限大產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果；擴(kuò)增過(guò)程中有一定的裝配誤差會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。3.3 基因探針技術(shù)

基因探針技術(shù)利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補(bǔ)形成穩(wěn)定的DNA RNA或DNA DNA鏈的原理，采用高度特異性基因片段制備基因探針來(lái)識(shí)別細(xì)菌。基因探針的優(yōu)點(diǎn)是減少了基因片段長(zhǎng)度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。如法國(guó)生物一梅里埃公司的基因探針檢測(cè)系統(tǒng)，30min完成微生物的確證試驗(yàn)，基因探針的缺點(diǎn)是不能鑒定目標(biāo)菌以外的其他菌。蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

3.4 16SrDNA基因同源性分析

16S rDNA基因同源性分析是一種常用的細(xì)菌分子鑒定方法，16SrDNA基因的擴(kuò)增需要細(xì)菌染色體DNA作為模板。目前建立了1種新的快速高效的細(xì)菌染色體DNA提取方法，整個(gè)提取過(guò)程僅耗時(shí)2min，從而使得細(xì)菌的快速鑒定成為可能。

當(dāng)前制藥企業(yè)中應(yīng)有較多的是表型鑒定的一些系統(tǒng)，但隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，微生物鑒定正經(jīng)歷由表現(xiàn)型向基因型鑒定轉(zhuǎn)變的過(guò)程。近年來(lái)興起的基因探針技術(shù)及全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測(cè)方法，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳艷.微生物鑒定方法的比較[J]-中國(guó)水產(chǎn).2005(1).[2]夏菠,周傳云,張慶芬等.開(kāi)菲爾中菌種分離與鑒定方法初探[C].2005.[3]蘇德模,馬緒榮.藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù).2007.01(1).[4]吳清平,周艷紅,蔡芷荷.衛(wèi)生微生物特異性顯色培養(yǎng)基的研究與應(yīng)用[J].中 國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2005,15(1).

第二篇：表面微生物檢測(cè)方法

空氣、食品接觸面微生物檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) 目的：

檢測(cè)生產(chǎn)車(chē)間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo)，生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控，達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，以控制食品成品的質(zhì)量。參照標(biāo)準(zhǔn)：

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB15979－1995、《HACCP原理與實(shí)施》、中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《公共場(chǎng)所空氣微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定》GB/T 18204.1－2000、中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境檢驗(yàn)檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)教材》中《出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗(yàn)方法》、日本東京冷凍食品檢驗(yàn)方法。采樣與檢測(cè)方法：

3.1空氣的采樣與測(cè)試方法 3.1.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車(chē)間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行采樣，以便了解車(chē)間衛(wèi)生清掃消毒情況。b)全廠統(tǒng)一放長(zhǎng)假后，車(chē)間生產(chǎn)前，進(jìn)行采樣。

c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)車(chē)間進(jìn)行采樣，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行采樣檢驗(yàn)。

d)實(shí)驗(yàn)性新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗(yàn)。e)正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣，每周一次。（2）采樣方法

在動(dòng)態(tài)下進(jìn)行，室內(nèi)面積不超過(guò)30 m2，在對(duì)角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1 m；室內(nèi)面積超過(guò)30 m2，設(shè)東、西、南、北、中五點(diǎn)，周?chē)?點(diǎn)距墻1 m。采樣時(shí)，將含平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9 cm)置采樣點(diǎn)(約桌面高度)，并避開(kāi)空調(diào)、門(mén)窗等空氣流通處，打開(kāi)平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過(guò)6h，若樣品保存于0～4℃條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過(guò)24h。3.1.2菌落培養(yǎng)：

（1）在采樣前將準(zhǔn)備好的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37℃±1℃培養(yǎng)24 h，取出檢查有無(wú)污染，將污染培養(yǎng)基剔除。（2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在6 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，細(xì)菌總數(shù)于37℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果，計(jì)數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù)。（3）菌落計(jì)算：

a)記錄平均菌落數(shù)，用“個(gè)/皿”來(lái)報(bào)告結(jié)果。用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查，不可遺漏。

b)若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2 個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。3.2工作臺(tái)（機(jī)械器具）表面與工人手表面采樣與測(cè)試方法： 3.2.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車(chē)間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)，以便了解車(chē)間衛(wèi)生清掃消毒情況。

b)全廠統(tǒng)一放長(zhǎng)假后，車(chē)間生產(chǎn)前，進(jìn)行全面擦拭檢驗(yàn)。

c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)車(chē)間可疑處進(jìn)行擦拭，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。

d)實(shí)驗(yàn)新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗(yàn)。e)對(duì)工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時(shí)，進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。f)正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭，每周一次。（2）采樣方法：

a)工作臺(tái)（機(jī)械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內(nèi)涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。

b)工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來(lái)回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。（3）采樣注意事項(xiàng)： 擦拭時(shí)棉簽要隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)，保證擦拭的準(zhǔn)確性。對(duì)每個(gè)擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場(chǎng)的具體位置、擦拭時(shí)間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時(shí)間 3.2.2 細(xì)菌·大腸菌群的檢測(cè)培養(yǎng): 樣液稀釋?zhuān)簩⒎庞忻薨舻脑嚬艹浞终駬u。此液為1：10稀釋液。如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋?zhuān)?ml 1：10樣液加9ml無(wú)菌生理鹽水中，混勻，此液為1：100稀釋液。3.2.2.1 細(xì)菌總數(shù)：

（1）以無(wú)菌操作，選擇1～2個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。

（2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36℃±1℃培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。（3）結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù) 3.2.2.2大腸菌群：（1）平板法: a)以無(wú)菌操作，選擇1～2個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基，約3-5 ml。

b)待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36℃±1℃培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。c)結(jié)果計(jì)算：以平板上出現(xiàn)紫紅色菌落的個(gè)數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。d)結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)（2）試管法: a)以無(wú)菌操作，選擇3個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種三管。

b)置BGLB肉湯管于36℃±1℃培養(yǎng)48±2h。記錄所有BGLB肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。

c)結(jié)果報(bào)告：按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。

3.2.3 金黃色葡萄球菌檢測(cè)（1）定性檢測(cè)

a)取1ml 稀釋液注入滅菌的平皿內(nèi)，傾注15-20ml的B-P培養(yǎng)基，（或是吸取0.1稀釋液，用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進(jìn)36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時(shí)。b)從每個(gè)平板上至少挑取1個(gè)可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。

c)結(jié)果報(bào)告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性，即報(bào)告手（工器具）上有金黃色葡萄球菌存在。（2）定量檢測(cè) a)以無(wú)菌操作，選擇3個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10﹪氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種三管。

b)置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板，置36℃±1℃培養(yǎng)45～48小時(shí)。

c)從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)20～24小時(shí)。

d)取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗(yàn)，記錄試驗(yàn)結(jié)果。

e)報(bào)告結(jié)果：根據(jù)凝固酶試驗(yàn)結(jié)果，查MPN表報(bào)告每25 cm2食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。

3.3工廠環(huán)境中病原體的檢測(cè)計(jì)劃與方法

檢測(cè)計(jì)劃：為了保證食品安全，工廠應(yīng)該對(duì)生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)估，檢測(cè)項(xiàng)目包括李斯特菌，沙門(mén)氏菌等病原體微生物，化驗(yàn)室應(yīng)該按照一定的計(jì)劃對(duì)生產(chǎn)場(chǎng)所環(huán)境中的病原體進(jìn)行檢測(cè)，其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設(shè)備框架、運(yùn)輸?shù)闹Ъ埽洳匮b置、速凍機(jī)、傳送帶、設(shè)備的螺絲、維修工具等部位。當(dāng)某個(gè)點(diǎn)檢測(cè)到病員微生物時(shí)，應(yīng)該對(duì)環(huán)境中的相似點(diǎn)加大檢測(cè)頻率；在把所有的預(yù)定點(diǎn)檢測(cè)完后，應(yīng)該對(duì)環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進(jìn)行全面評(píng)估，在下一次環(huán)境檢測(cè)循環(huán)過(guò)程中加強(qiáng)檢測(cè)容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點(diǎn)，達(dá)到持續(xù)改進(jìn)的目的。

檢測(cè)頻率: 每月兩次,每次每個(gè)區(qū)域至少選取5個(gè)檢測(cè)點(diǎn),分別進(jìn)行檢測(cè)。

3.3.1 環(huán)境李斯特菌的檢測(cè)方法（3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測(cè)試片）3.3.1.1 用涂抹棒，海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。

3.3.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白胨水，將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘，將樣品置于室溫（20-30℃）1小時(shí)，最久不超過(guò)1.5小時(shí)，以修復(fù)損傷的李斯特菌。3.3.1.3 將測(cè)試片放在平坦處，掀起上層膜。

3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產(chǎn)生氣泡。3.3.1.5 輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上，不要壓，扭轉(zhuǎn)或者滑動(dòng)壓板。提起壓板等至少十分鐘，以使膠體凝固。

3.3.1.6 將測(cè)試片透明面朝上，可疊放至十片，在37℃±1℃培養(yǎng)26-30小時(shí)，可以用標(biāo)準(zhǔn)菌落記數(shù)器或者其他光學(xué)放大器判讀，不要記數(shù)圓形輪廓上的菌落，因?yàn)樗麄儾皇苓x擇性培養(yǎng)基的影響。

3.3.1.7 對(duì)于定性檢測(cè)，根據(jù)紫紅色菌落是否存在，結(jié)果記為檢出或者未檢出。3.3.2 環(huán)境中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)方法

3.3.2.1采樣地點(diǎn): 選取采樣點(diǎn)時(shí)因盡量選取微生物容易滋生的地方 冷凍車(chē)間

FD車(chē)間

東區(qū)初加工

傳遞窗口表面、排水溝、排水溝出口、墻壁、地面

卸料間 墻壁、墻角、地面、天花板、物料車(chē)表面

東區(qū)精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動(dòng)機(jī)鏈條、天花板

暫存間

墻壁、地面、天花板、墻角、墻縫

西區(qū)初加工

傳遞窗口表面、地面、墻壁、排水溝、排水溝出口

挑選間

墻壁、地面、天花板、墻角、墊板

西區(qū)精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動(dòng)機(jī)鏈條、天花板

包裝室

墻壁、地面、天花板、金探傳送帶表面、落地料存放處

3.3.2.2 操作步驟

3.3.2.2.1采樣應(yīng)在生產(chǎn)開(kāi)始后進(jìn)行，用已浸潤(rùn)過(guò)的棉拭在選定的被測(cè)表面旋轉(zhuǎn)涂抹約100cm2的面積，然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊。3.3.2.2.2將樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，每5個(gè)點(diǎn)混合成一個(gè)樣品, 登記編號(hào),按照SN0170-92標(biāo)準(zhǔn)及時(shí)檢測(cè)，若有陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)，應(yīng)逐步對(duì)所混合的每個(gè)點(diǎn)分別檢測(cè)。

物體表面涂抹菌落總數(shù)計(jì)算方式：物體表面細(xì)菌總數(shù)（cfu/c㎡）=平皿上菌落的平均數(shù)*采樣液稀釋倍數(shù)/采樣面積（cm2）

根椐GB15979－2002《一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的標(biāo)準(zhǔn),生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生指標(biāo) 1 裝配與包裝車(chē)間空氣中細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤2 500 cfu/m3。2 工作臺(tái)表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20 cfu/cm2。

3.工人手表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤300 cfu/只手，并不得檢出致病菌。人員和環(huán)境衛(wèi)生檢測(cè)方法

一、空氣采樣及檢驗(yàn)方法

1培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，按GB4789.28中3.7條配制 2采樣（空氣沉降法）

2.1布點(diǎn)：面積小于30平方米的車(chē)間，設(shè)一對(duì)角線，在線上取3點(diǎn)，即中心一點(diǎn)，兩端在距墻1米處各取一點(diǎn)；面積大于30平方米的車(chē)間，設(shè)東、西、南、北、中5個(gè)點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻1米。

2.2采樣高度：與地面垂直高度80-150厘米。

2.3采樣方法；用直徑為9厘米的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)上暴露20分鐘蓋上送檢培養(yǎng)。3培養(yǎng)：于37℃培養(yǎng)24小時(shí)。4檢測(cè)頻率：每周 空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

生車(chē)間、熟車(chē)間、成品車(chē)間：低于100個(gè) 半成品庫(kù)、成品庫(kù)：低于10個(gè)

二、設(shè)備的采樣與檢驗(yàn)方法

根據(jù)生產(chǎn)過(guò)程所要求的重點(diǎn)衛(wèi)生部位，實(shí)驗(yàn)室對(duì)其進(jìn)行涂抹采樣，進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)。1采樣方法

1.1涂抹法（適用于表面平坦的設(shè)備和工器具產(chǎn)品接觸面）

取經(jīng)過(guò)滅菌的鋁片框（框內(nèi)面積為50平方厘米）放在需檢查的部位上，用無(wú)菌棉球蘸上無(wú)菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分，擦完后立即將棉球投入盛有10毫升無(wú)菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。

1.2貼紙法（適用于表面不平坦的設(shè)備和工器具接處面）

將無(wú)菌規(guī)格紙（5×5厘米，紙質(zhì)要薄而軟）用無(wú)菌生理鹽水泡濕后，于需測(cè)部分分別貼上兩張，兩張紙面積共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升無(wú)菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。2檢驗(yàn)方法

2.1細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)

將上述樣液充分振搖，根據(jù)衛(wèi)生情況，相應(yīng)地做10倍遞增稀釋?zhuān)x擇其中2-3個(gè)合適的稀釋度作平皿傾注培養(yǎng)，培養(yǎng)基用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，每個(gè)稀釋度作2個(gè)平皿，每個(gè)平皿注入1毫升樣液，于37℃培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)菌落數(shù)。結(jié)果計(jì)算

表面細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均數(shù)×樣液稀釋倍數(shù)/30×2 2.2致病菌的檢驗(yàn)

沙門(mén)氏菌，參照GB4789.4進(jìn)行 金黃色葡球菌，參照GB7918.5進(jìn)行

4.檢驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌總數(shù)10－100個(gè)∕cm2，5.關(guān)鍵點(diǎn)：細(xì)菌總數(shù)≤10個(gè)∕cm2 一般區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)∕cm2

三、人員手表面細(xì)菌污染情況的檢驗(yàn)

1.采樣方法：用一支蘸有無(wú)菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對(duì)象手的全部，反復(fù)兩次，涂擦的時(shí)候棉拭子要相應(yīng)地轉(zhuǎn)動(dòng)，擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有10毫升無(wú)菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢培養(yǎng)。

2.檢驗(yàn)方法：同工器具表面細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法。

3.結(jié)果計(jì)算：每只手表面的細(xì)菌總數(shù)（cfu/只手）=平皿上菌落的平均數(shù)×樣液稀釋倍數(shù)

四、消毒液藥效的微生物學(xué)鑒定法

1采樣對(duì)象：正常使用的消毒液，和已知配制好備用的消毒液 2采樣及檢驗(yàn)方法

在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌吸管吸取1毫升樣液，加入9毫升稀釋液中混勻，對(duì)于醇類(lèi)與酚類(lèi)消毒劑，稀釋液用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯即可；對(duì)于含氯消毒劑、含碘消毒劑，需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉，對(duì)洗必泰、季銨鹽類(lèi)消毒劑，需在肉湯中加入3%（W/V）土溫80和0.3%卵磷脂；對(duì)醛類(lèi)消毒劑，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對(duì)于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入（W/V）土溫80，以中和被檢樣液中的殘效作用，將注入了樣液的稀釋液充分搖勻，取1毫升注入平皿，隨之倒入普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，將平皿于37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)。3結(jié)果分析

平板上有菌生長(zhǎng)，表明被檢樣液中有殘存活菌，若每個(gè)平板菌落數(shù)在10個(gè)以下，仍可用于消毒，若每個(gè)平板菌落數(shù)超過(guò)10個(gè)，說(shuō)明每毫升被檢樣液含菌量已超過(guò)100個(gè)，即不宜在用于消毒。

該公式是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)公式.它的理論模式依據(jù)是:100CM2的面積上10MIN降落的菌落數(shù), 等于1升空氣中所含的細(xì)菌總數(shù).系數(shù)50000基于上述假說(shuō)和單位換算而來(lái).細(xì)菌總數(shù)(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT

5/10T:實(shí)際放置了5MIN;

100/A:A單一培養(yǎng)皿面積;

1000:1M3=1000L啊,換算成m3

1、空氣細(xì)菌落菌數(shù)單位既然是cfu/m3，那采樣時(shí)應(yīng)該還要記錄放置平皿的高度。

2、食品安全管理體系中罐頭行業(yè)有個(gè)標(biāo)準(zhǔn)如下：

落下菌數(shù)

空氣污染程度

評(píng)價(jià)

30以下

清潔

安全

30～50

中等清潔

50～70

低等清潔

應(yīng)加注意

70～100

高度污染

對(duì)空氣要進(jìn)行消毒

100以上

嚴(yán)重污染

禁止加工

3、是否可根據(jù)企業(yè)相應(yīng)的加工產(chǎn)品微生物指標(biāo)進(jìn)行自行制定？

第三篇：微生物總結(jié)

微生物：一類(lèi)分布廣泛、體積微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、肉眼直接看不到，微小生物的總稱(chēng)。

細(xì)菌L型：細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細(xì)胞壁受損的細(xì)菌在高滲環(huán)境下仍可存活，稱(chēng)細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型或L型。

質(zhì)粒：是染色體外的遺傳物質(zhì)，控制某些特定的生物學(xué)性狀，不是細(xì)菌生長(zhǎng)所必需。

莢膜：是細(xì)菌合成分泌的包繞于細(xì)胞壁外的一層粘液性物質(zhì)。界限清晰性質(zhì)穩(wěn)定結(jié)合牢固。培養(yǎng)基：由人工方法經(jīng)滅菌后制成，專(zhuān)供微生物生長(zhǎng)使用的混合營(yíng)養(yǎng)制品。一般pH為7.2-7.6。

兼性厭氧菌：兼有需氧呼吸和無(wú)氧發(fā)酵兩種功能，無(wú)論在有氧或無(wú)氧環(huán)境中都能生長(zhǎng)，但以有氧時(shí)生長(zhǎng)較好，大多數(shù)病原菌屬于此。菌落：在固體培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)十八到24小時(shí)培養(yǎng)后，單個(gè)細(xì)菌分裂繁殖成一堆肉眼可見(jiàn)的細(xì)紅細(xì)胞吸附：流感病毒等感染細(xì)胞后，由于細(xì)胞膜上出現(xiàn)了血凝素（HA），具有吸附脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，這一現(xiàn)象稱(chēng)為紅細(xì)胞吸附。抗毒素：通常是用細(xì)菌類(lèi)毒素給馬多次注射后，取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成抗生素：微生物來(lái)源的抗菌藥物，以及人工化學(xué)修飾或半合成的衍生物

無(wú)菌：就是指沒(méi)有活菌的意思。

1：細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能？答：化學(xué)組成：G+①肽聚糖：聚糖骨架、四肽側(cè)鏈、五肽交聯(lián)橋②磷壁酸：粘附功能，與致病性有關(guān)；抗原性很強(qiáng)③其他成分：如A群鏈球菌的M蛋白G-①肽聚糖：聚糖骨架；四肽側(cè)鏈②外膜：脂蛋白；脂質(zhì)雙層；脂多糖：脂類(lèi)A（毒性成分，無(wú)種屬特異性）；核心多糖；特異多糖。功能：①維持細(xì)菌固有形態(tài)②保護(hù)細(xì)菌抵抗低滲環(huán)境③物質(zhì)交換④決定菌體的抗原性。2：G-菌與G+菌細(xì)胞壁的異同點(diǎn)及其意義？答：兼性厭氧菌、專(zhuān)性厭氧菌。

11：與醫(yī)學(xué)有關(guān)的合成代謝產(chǎn)物？答：① 毒素與侵襲性酶：外毒素和內(nèi)毒素②熱原質(zhì)：G-菌細(xì)胞壁的脂多糖，耐高溫，250℃干烤破壞。③抗生素：某些微生物代謝中產(chǎn)生的一類(lèi)能抑制或殺死其他微生物或腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)。④維生素：如VitK、B族維生素。⑤色素：脂溶性和水溶性色素。⑥細(xì)菌素：無(wú)治療應(yīng)用價(jià)值。13：病毒的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成。答：多數(shù)病毒呈球形或近似球形，少數(shù)呈桿狀（植物病毒）、絲狀（初分離的流感病毒）、彈狀（狂犬病毒）、磚塊狀（如痘類(lèi)病毒）和蝌蚪狀（噬菌體）。病毒的核心和衣殼，二者構(gòu)成核衣殼，病毒包膜和其他輔助結(jié)構(gòu)。化學(xué)組成：核心：主要為核酸，化學(xué)組成為DNA或RNA。衣殼：包繞在核心外面的一層蛋白質(zhì)，由許多蛋白質(zhì)亞單位（殼粒）組成。包膜：化學(xué)組成： 脂質(zhì)蛋白質(zhì)糖類(lèi)。

答：?jiǎn)渭?xì)胞真菌呈圓形或卵圓形。多細(xì)胞真菌

結(jié)構(gòu)：菌絲和孢子，菌絲：分為營(yíng)養(yǎng)菌絲、氣中菌絲、生殖菌絲；孢子：是真菌的繁殖體。結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁外成分；細(xì)胞壁；隔膜；其他結(jié)構(gòu)。

25：真菌培養(yǎng)特性。答：最常用的培養(yǎng):沙保弱培養(yǎng)基。溫度:多數(shù)都在22 ~ 28oC，但深部感染真菌最適溫度為37oC，pH4.0 ~ 6.0病原菌通常生長(zhǎng)緩慢，1~4周。

26：真菌繁殖方式。答：①無(wú)性生殖：①由菌絲斷裂形成新個(gè)體②細(xì)胞直接分裂產(chǎn)生子細(xì)胞③產(chǎn)生芽生孢子④產(chǎn)生孢子囊孢子和分生孢子②有性生殖：指經(jīng)過(guò)兩性細(xì)胞配合產(chǎn)生新個(gè)體的繁殖方式。

27：真菌抵抗力答：①對(duì)干燥、陽(yáng)光、紫外線及常用消毒劑有強(qiáng)抵抗力②不耐熱，菌絲與孢子60℃ 1小時(shí)均可殺死③2﹪石炭酸、10%甲醛、0.1%升汞、2.5%碘酊敏感④抗真菌藥物：菌集團(tuán)。

純培養(yǎng)基：挑取一個(gè)菌落，移種到另一培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)出來(lái)的細(xì)菌均為純種。

毒性噬菌體：在宿主菌細(xì)胞內(nèi)噬菌體增殖產(chǎn)生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細(xì)菌DNA復(fù)制而復(fù)制，并隨細(xì)菌的分裂而傳到子代細(xì)菌的基因組中，變成溶原性細(xì)菌，形成溶原性周期。前噬菌體：整合在細(xì)菌染色體上的噬菌體基因。轉(zhuǎn)座子：細(xì)菌基因組中的一段DNA序列，可以在染色體、質(zhì)粒或噬菌體之間自行移動(dòng)的遺傳成分，伴隨轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)，會(huì)出現(xiàn)插入突變。基因轉(zhuǎn)移：遺傳物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入受體菌的過(guò)程為基因轉(zhuǎn)移。

重組：轉(zhuǎn)移的基因與受體菌DNA整合在一起稱(chēng)為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。轉(zhuǎn)化：細(xì)菌通過(guò)性菌毛相互連接溝通，將質(zhì)粒或染色體等遺傳物質(zhì)從供體菌轉(zhuǎn)移給受體菌的過(guò)程。

接合：是受體菌直接攝取供體菌DNA片段，從而獲得新的遺傳性狀的過(guò)程。

轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為載體將供菌的DNA片段轉(zhuǎn)移到受菌體內(nèi)使受菌獲得供菌的部分遺傳性狀。溶原性轉(zhuǎn)換：某些前噬菌體可導(dǎo)致細(xì)菌基因型和性狀發(fā)生改變，例如白喉棒狀桿菌產(chǎn)生白喉毒素的機(jī)理，溫和噬菌體感染細(xì)菌時(shí)，其基因可整合于宿主菌染色體中，使宿主菌獲得噬菌體基因賦予的新的性狀，稱(chēng)溶原性轉(zhuǎn)換。原生質(zhì)體融合：將兩種不同的細(xì)菌經(jīng)溶菌酶或青霉素等處理，失去細(xì)胞壁成為原生質(zhì)體后進(jìn)行融合的過(guò)程。融合后的染色體之間發(fā)生重組。病毒的自我復(fù)制：以病毒核酸為模板，經(jīng)過(guò)復(fù)雜的生化過(guò)程，復(fù)制子代病毒的核酸并通過(guò)轉(zhuǎn)錄翻譯產(chǎn)生病毒蛋白質(zhì)，裝配成熟后釋放到細(xì)胞外，這種增殖方式稱(chēng)為病毒的自我復(fù)制。頓挫感染：被病毒侵入的細(xì)胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細(xì)胞與容納細(xì)胞

缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點(diǎn)改變，不能正常增殖，不能復(fù)制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒?完成復(fù)制

干擾現(xiàn)象：當(dāng)兩種病毒感染同一宿主細(xì)胞時(shí)，發(fā)生一種病毒的增殖抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象。某些病毒感染細(xì)胞時(shí)不出現(xiàn)CPE或其他易于測(cè)出的變化（如HAd），但能干擾其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者所特有的CPE 芽孢：某些細(xì)菌在一定環(huán)境條件下，胞質(zhì)脫水濃縮，在菌體內(nèi)部形成的一個(gè)圓形或卵圓形小體。

正常菌群：正常人的體表和與外界相通的眼結(jié)膜，口腔、鼻腔、腸道、泌尿生殖道等腔道粘膜中的不同種類(lèi)和數(shù)量及對(duì)人體無(wú)害而有益的微生物。正常微生物群通稱(chēng)為正常菌群

細(xì)菌群體：細(xì)菌附著在有生命或無(wú)生命的材料表面后，由細(xì)菌及其所分泌的胞外多聚物共同組成的呈膜狀的細(xì)菌群體。機(jī)會(huì)性感染：由正常菌群在機(jī)體免疫功能低下、寄居部位改變、菌群失調(diào)等特定條件下引起的感染。

毒力：致病性的強(qiáng)弱程度。

侵襲素：某些細(xì)菌的基因編碼一些具有侵襲功能的蛋白多肽，促進(jìn)該病原菌向鄰近組織擴(kuò)散甚至介導(dǎo)進(jìn)入鄰近黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)。

包涵體：細(xì)胞漿或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)光鏡下可見(jiàn)的斑塊狀結(jié)構(gòu)

G+ 菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側(cè)鏈,五肽交聯(lián)橋,三維立體②磷壁酸:重要表面抗原，與粘附致病有關(guān)，加強(qiáng)穩(wěn)定細(xì)胞壁G－菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側(cè)鏈組成二維結(jié)構(gòu), ②外膜（脂蛋白、脂質(zhì)雙層、脂多糖組成）功能:屏障結(jié)構(gòu)LPS是G－菌的內(nèi)毒素。細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)異同:G+菌/G－菌--強(qiáng)度:較堅(jiān)韌/較疏松--厚度:厚20-80nm/薄10-15nm--肽聚糖層數(shù):多可達(dá)50層/少，1-2層--肽聚糖結(jié)構(gòu):聚糖骨架,四肽側(cè)鏈,五肽交聯(lián)橋,三維立體/聚糖骨架,四肽側(cè)鏈,二維平面--脂類(lèi)含量/少/多--磷壁酸:有/無(wú)--外膜:無(wú)/有,由脂蛋白、脂質(zhì)雙層、脂多糖組成3：細(xì)菌L型，特殊結(jié)構(gòu)種類(lèi)、化學(xué)組成、抗原性及意義？答：定義：細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細(xì)胞壁受損的細(xì)菌在高滲環(huán)境下仍可存活，稱(chēng)細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型或L型。種類(lèi)：G+菌細(xì)胞壁缺失后，僅有胞膜，稱(chēng)原生質(zhì)體，G--菌肽聚糖層受損，尚有外膜，稱(chēng)原生質(zhì)球。抗原性及意義：高度多形性，大小不一；大多染成G－；高滲低瓊脂含血清培養(yǎng)基—油煎蛋樣菌落；去除誘因后，有些可回復(fù)為原菌；某些L型仍有致病性,引起慢性感染。作用于胞壁的抗菌性藥對(duì)L型感染治療無(wú)效

4：細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)？答：①莢膜：多糖或多肽的多聚體。功能a抗吞噬b黏附作用c抗有害物質(zhì)的損傷d有抗原性，用于細(xì)菌的鑒定和分型②鞭毛：蛋白質(zhì)，由基礎(chǔ)小體絲狀體鉤狀體組成，高度抗原性。功能a是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官b某些細(xì)菌的鞭毛與致病性有關(guān)c根據(jù)鞭毛的動(dòng)力和鞭毛的抗原性可用以細(xì)菌的鑒別和分類(lèi)③菌毛：由亞單位菌毛蛋白構(gòu)成。功能a黏附作用b傳遞遺傳物質(zhì)④芽孢：生產(chǎn)芽孢的細(xì)菌都是革陽(yáng)菌。功能：a增強(qiáng)抵抗力b不直接致病c鑒定。

5：細(xì)菌的遺傳物質(zhì)？答：細(xì)菌染色體，質(zhì)粒，噬菌體：

6：基因轉(zhuǎn)移與重組方式的種類(lèi)及定義？答：定義：基因轉(zhuǎn)移：遺傳物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入受體菌的過(guò)程為基因轉(zhuǎn)移。重組：轉(zhuǎn)移的基因與受體菌DNA整合在一起稱(chēng)為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。分類(lèi)：轉(zhuǎn)化,接合,轉(zhuǎn)導(dǎo),融合,轉(zhuǎn)換.【表格】類(lèi)型：基因來(lái)源/轉(zhuǎn)移方式--轉(zhuǎn)化：供菌游離的DNA片段/直接攝入--接合：供菌質(zhì)粒DNA/ 性菌毛--轉(zhuǎn)導(dǎo)：供菌任意DNA或噬菌體與供菌特定DNA/噬菌體--融合：兩菌原生質(zhì)體的DNA/融合--轉(zhuǎn)換：溫和噬菌體/吸附穿入

7：噬菌體及其相關(guān)概念。答：1）毒性噬菌體：在宿主菌細(xì)胞內(nèi)噬菌體增殖產(chǎn)生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。2）溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細(xì)菌DNA復(fù)制而復(fù)制，并隨細(xì)菌的分裂而傳到子代細(xì)菌的基因組中，變成溶原性細(xì)菌，形成溶原性周期。

8：細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件？答:營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)/酸堿度 多數(shù)病原菌最適pH為7.2~7.6/溫度 多數(shù)病原菌生長(zhǎng)最適溫度為37℃/氣體 據(jù)代謝時(shí)對(duì)分子氧的需要與否，專(zhuān)性需氧菌、微需氧菌、兼性厭氧菌、專(zhuān)性厭氧菌/滲透壓。

9：細(xì)菌群體的生長(zhǎng)繁殖？答：生長(zhǎng)曲線：一定數(shù)量的細(xì)菌接種到定量的液體培養(yǎng)基中，連續(xù)定時(shí)取樣測(cè)定活菌數(shù)量，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以活菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)作圖，得到的一條曲線。遲緩期：適應(yīng)階段。對(duì)數(shù)期：對(duì)抗生素敏感，細(xì)菌鑒定選此期。穩(wěn)定期：代謝產(chǎn)物形成（如外毒素、抗生素、芽胞等）。衰亡期：菌體細(xì)胞呈現(xiàn)多種形態(tài)。

10：按細(xì)菌對(duì)氧需要的分類(lèi)？答：據(jù)代謝時(shí)對(duì)分子氧的需要與否，專(zhuān)性需氧菌、微需氧菌、14：雙鏈DNA病毒的復(fù)制周期？答：vDNA（RNA聚合酶）→早期mRNA（翻譯）→早期蛋白（酶）→ vDNA（酶）子代DNA →? mRNA?→結(jié)構(gòu)蛋白.→子代DNA+結(jié)構(gòu)蛋白→子代病毒。簡(jiǎn)要過(guò)程：吸附，穿入，脫殼，生物合成，組裝、成熟與釋放。

15：頓挫病毒，缺陷病毒的概念？答：頓挫病毒：被病毒侵入的細(xì)胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細(xì)胞與容納細(xì)胞。缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點(diǎn)改變，不能正常增殖，不能復(fù)制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒=完成復(fù)制 16：細(xì)菌的感染與致病。答：感染：在一定條件下，微生物與機(jī)體相互作用并導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生不同程度的病理過(guò)程。★

17：細(xì)菌的毒力比較，外毒素與內(nèi)毒素生物學(xué)特性。答：【表格】種類(lèi)：內(nèi)毒素★外毒素。來(lái)源：G-菌★G+菌部分G-菌。編碼基因：染色體基因★質(zhì)粒或前噬菌體或染色體基因。存在部位：細(xì)胞壁成分、細(xì)菌裂解后釋出★活菌分泌或細(xì)菌溶解后散出。化學(xué)成分：脂多糖★蛋白質(zhì)。穩(wěn)定性：好(160℃2~4h才破壞）★差（60~80 ℃30m可破壞）。毒性作用：弱、各種內(nèi)毒素作用大致相同★強(qiáng)、對(duì)機(jī)體組織器官有選擇性。抗原性：弱，甲醛處理后不能形成類(lèi)毒素★強(qiáng)，能刺激機(jī)體形成抗毒素，經(jīng)甲醛脫毒后能形成類(lèi)毒素。

18：細(xì)菌感染的類(lèi)型答：①不感染②隱性感染③潛伏感染④顯性感染：急慢性感染；局部、全身感染⑤帶菌狀態(tài)。

19：病毒感染類(lèi)型。答：①隱性感染②顯性感染：急性病毒感染：潛伏期短，發(fā)病急，數(shù)日或數(shù)周回復(fù)，病原消滅型感染。持續(xù)性病毒感染：慢性病毒感染；潛伏性病毒感染；慢發(fā)病毒感染。

20：細(xì)菌的致病機(jī)制。答：細(xì)菌的致病性強(qiáng)弱取決于毒力，細(xì)菌的毒力因子：①侵襲力：致病菌突破宿主生理屏障，進(jìn)入機(jī)體并在體內(nèi)定植、繁殖和擴(kuò)散的能力包括黏附素、莢膜和微莢膜、侵襲性物質(zhì)②毒素：細(xì)菌產(chǎn)生的損傷宿主引起生理功能紊亂的毒性物質(zhì)，包括內(nèi)毒素和外毒素。

21：正常菌群的生理作用。答：①生物拮抗：競(jìng)爭(zhēng)粘附（占位性保護(hù)）作用；產(chǎn)生有害代謝物質(zhì)；營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)②營(yíng)養(yǎng)作用③免疫作用④抑癌作用⑤抗衰老作用。

22：病毒分離鑒定方法及病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖的指標(biāo)。答：病毒的分離：①動(dòng)物接種②雞胚培養(yǎng)；流感病毒初次分離接種于羊膜腔；流感病毒的再培養(yǎng)接種于尿囊腔③組織培養(yǎng)④細(xì)胞培養(yǎng) — 病毒分離鑒定中最常用的方法單層細(xì)胞培養(yǎng)；原代細(xì)胞培養(yǎng)；二倍體細(xì)胞培養(yǎng)；傳代細(xì)胞培養(yǎng)。指標(biāo)：1）細(xì)胞的變化①細(xì)胞病變效應(yīng)：有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)引起的特有的細(xì)胞病變，如細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落②多核巨細(xì)胞形成：有些病毒如麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒等作用于細(xì)胞膜，使鄰近的細(xì)胞融合，形成多核巨細(xì)胞③胞質(zhì)或核內(nèi)包涵體的形成狂犬病病毒、巨細(xì)胞病毒。2）紅細(xì)胞吸附流感病毒等感染細(xì)胞后，由于細(xì)胞膜上出現(xiàn)了血凝素，具有吸附脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，這一現(xiàn)象稱(chēng)為紅細(xì)胞吸附。常用來(lái)鑒定具有血凝素的黏病毒或副黏病毒的增殖3）.紅細(xì)胞凝集檢測(cè)含血凝素病毒的方法4）干擾現(xiàn)象5）空斑形成試驗(yàn)。

23：病毒成份的檢測(cè)（抗原、核酸檢測(cè)）答：1.病毒抗原的檢測(cè)2.病毒核酸的檢測(cè)

24：真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)（單細(xì)胞和多細(xì)胞真菌）。

灰黃霉素、制霉菌素B、二性霉素B、氟康唑和酮康唑；對(duì)抗生素不敏感。

28：抗菌藥物的種類(lèi)與作用機(jī)制。答：殺菌藥和抑菌藥。機(jī)制：①抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成②抑制細(xì)菌

細(xì)胞膜功③抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成④抑制細(xì)菌核酸合成。29：細(xì)菌耐藥的機(jī)制。答：產(chǎn)生鈍化酶；細(xì)胞通透性的改變；靶位結(jié)構(gòu)的改變；建立代謝旁路；代謝酶分子的改變

30：醫(yī)院感染的定義。答：由醫(yī)院的病原生物或其毒素導(dǎo)致的局部或全身感染性疾病。

31：細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定、生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)？答：細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定：原則上應(yīng)對(duì)所有送檢標(biāo)本做分離培養(yǎng)，以便獲得單個(gè)菌落后進(jìn)行純培養(yǎng)，從而對(duì)細(xì)菌做進(jìn)一步的生物學(xué)、免疫學(xué)、致病性或細(xì)菌的藥物敏感性等方面的檢查，最終獲得確切的報(bào)告。生化試驗(yàn)：得到細(xì)菌的純培養(yǎng)物后，用糖發(fā)酵試驗(yàn)，吲哚試驗(yàn)，硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)等對(duì)細(xì)菌的酶系統(tǒng)和其代謝產(chǎn)物的檢查，是鑒別細(xì)菌的重要方法之一。血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：利用含已知的特異性抗體的免疫血清，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行群和型的鑒別。

微生物種類(lèi)名稱(chēng)★生物學(xué)性狀★致病物質(zhì)、致病機(jī)理及所致疾病

破傷風(fēng)梭菌：菌體細(xì)長(zhǎng)，芽胞正圓比菌體粗，位于菌體頂端菌體鼓槌狀★不發(fā)酵糖類(lèi)，不分解蛋白質(zhì)。條件：局部傷口需形成厭氧微環(huán)境，傷口窄而深，有泥土或異物污染，大面積創(chuàng)傷，壞死組織多，局部組織缺血，同時(shí)有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染的傷口。防治原則：特異性預(yù)防：注射破傷風(fēng)類(lèi)毒素主動(dòng)免疫；迅速對(duì)傷口清創(chuàng)擴(kuò)創(chuàng)，防止形成厭氧微環(huán)境；緊急預(yù)防：TAT（精制破傷風(fēng)抗毒素）；治療： 早期足量使用TAT，抗生素。產(chǎn)氣莢膜梭菌：G+粗大桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，直徑小于菌體形成明顯莢膜★血平板：雙層溶血環(huán)，代謝十分活躍，牛奶培養(yǎng)基：“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象。增加血管通透性，組織壞死，氣性壞疽，食物中毒，壞死性腸炎。

肉毒梭菌：G+粗短桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，菌體呈網(wǎng)球拍狀，嚴(yán)格厭氧，分型多，生化反應(yīng)復(fù)雜★肉毒毒素，抑制乙酰膽堿釋放，引起運(yùn)動(dòng)神經(jīng)末梢失調(diào)→肌肉麻痹；食物中毒，嬰兒肉毒中毒。

支原體：菌落油煎蛋型，高度多形態(tài)型，細(xì)胞膜含高度固醇，無(wú)細(xì)胞壁，對(duì)青霉素有抵抗作用★支原體肺炎，病變?yōu)殚g質(zhì)性肺炎，可合并支氣管肺炎。稱(chēng)為原發(fā)性非典型性肺炎。不規(guī)則發(fā)熱，刺激性咳嗽，頭痛。嬰幼兒病情嚴(yán)重，發(fā)病急，病程長(zhǎng)，以呼吸困難為主。有些合并其他系統(tǒng)病變，如循環(huán)系統(tǒng)等。飛沫傳播。立克次體：是一類(lèi)體積微小，絕大多數(shù)為自身代謝不完善，嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型微生物★流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、恙蟲(chóng)病、Q熱

衣原體：嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，有獨(dú)特發(fā)育周期，能通過(guò)細(xì)菌濾器，原核細(xì)胞型微生物★ 沙眼:感染眼結(jié)膜上皮細(xì)胞→增殖，包涵體→局部炎癥→早期流淚、有粘液膿性分泌物、結(jié)膜充血及濾泡增生→后期結(jié)膜瘢痕、眼瞼內(nèi)翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜損害→影響視力或致盲包涵體結(jié)膜炎、泌尿生殖道感染、沙眼衣原體肺炎、性病淋巴肉芽腫

螺旋體：是一類(lèi)細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲、運(yùn)動(dòng)活潑的原核細(xì)胞型微生物基本結(jié)構(gòu)及生物學(xué)形狀與細(xì)菌相似★梅毒，人是唯一傳染源，致病物質(zhì)為莢膜樣物質(zhì)，透明質(zhì)酸酶；后天通過(guò)性接觸傳播或者先天經(jīng)過(guò)母體傳播。

第四篇：微生物總結(jié)

第一章、緒論

巴斯得的貢獻(xiàn)：

1、徹底否定了“自生說(shuō)”

2、免疫學(xué)—預(yù)防接種

3、證實(shí)發(fā)酵是由微生物引起的3、巴斯德消毒法

柯赫貢獻(xiàn)：

1、證實(shí)炭疽病菌是炭疽病的病原菌

2、發(fā)現(xiàn)了肺結(jié)核病的病原菌

3、提出了證明某種微生物是否為某種疾病病原體的病原菌——柯赫原則

4、固體培養(yǎng)基分離純化微生物的技術(shù)

5、配制培養(yǎng)基

微生物的5大共性：

1、體積小、面積大

2、吸收多、轉(zhuǎn)化快

3生長(zhǎng)旺、繁殖快

4、分布廣、種類(lèi)多

5、適應(yīng)性強(qiáng)、易變異 第二章、微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)

一、涂布平板法作用：用于純種分離、篩選菌落、得到單菌落，對(duì)一些細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù) 五區(qū)劃線發(fā)作用：純化菌種、得到單菌落

搖瓶實(shí)驗(yàn)作用：菌種篩選、發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、種子培養(yǎng)等 穿刺法的作用：保藏厭氧菌種、研究微生物的動(dòng)力 之字劃線法的作用：保藏菌種、單菌落的獲取

二、斜面菌種保藏法：保藏期限3個(gè)月以?xún)?nèi)，沙土管保藏法：保藏期限1~10年主要適用于產(chǎn)孢子的，如芽孢桿菌、放線菌 石蠟油封藏法：保藏期限1~2年

真空冷凍干燥法：保藏期限5~10年，液氮超低溫病結(jié)法：保藏期限5~10年 第三章

一、細(xì)胞壁：根據(jù)細(xì)胞壁將原核生物分為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌兩種。

1、革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁的特點(diǎn)：厚度大（20~80nm）和化學(xué)組分簡(jiǎn)單，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。

革蘭氏陽(yáng)性菌的機(jī)械阻攔與保護(hù)作用有肽聚糖完成。磷壁酸：是結(jié)合在革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁上的一種酸性多糖，主要成分為甘油磷酸或核糖醇磷酸。

磷壁酸為革蘭氏陽(yáng)性菌所特有。對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性菌而言，抗原性由磷壁酸完成。磷壁酸的主要生理功能：1）、其磷酸分子上較多的負(fù)電荷可提高細(xì)胞周?chē)V離子的濃度進(jìn)入細(xì)胞后就可以保證細(xì)胞膜上一些需鎂離子的合成提高活性 2）儲(chǔ)藏磷元素 3）、增強(qiáng)某些致病菌如A族鏈球菌對(duì)宿主細(xì)胞的黏連、避免被白細(xì)胞吞噬以及補(bǔ)抗體的作用 4）賦予革蘭氏陽(yáng)性菌以特異的表面抗原 5）可作為噬菌體的特異性吸附受體

6）調(diào)節(jié)細(xì)胞自溶素的活力，借以防止細(xì)胞自溶而死亡

2、革蘭氏陰性菌：由肽聚糖和外膜組成，外膜中的脂多糖是革蘭氏陰性菌所特有的 外壁層可分為3層：外層為脂多糖層，中層為磷脂層，內(nèi)層為脂蛋白 革蘭氏陰性菌外膜的作用：1）控制細(xì)胞透性

2）提高鎂離子濃度 3）決定細(xì)胞的抗原性

4）類(lèi)脂A是類(lèi)毒素的主要成分

脂多糖：是位于革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁最外層的一層較厚的類(lèi)脂多糖物質(zhì)，由類(lèi)脂A、核心多糖和O-特異側(cè)鏈

脂多糖的功能：1）其中類(lèi)脂A是革蘭氏陰性菌致病物質(zhì)——內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ) 2）因其負(fù)電荷較強(qiáng)，有吸附鎂離子、鈣離子等陽(yáng)離子以提高其在細(xì)胞表面的濃度作用 3)由于LPS結(jié)構(gòu)多變，決定了革蘭氏陰性菌細(xì)胞表面抗原決定族 4）是許多噬菌體在在細(xì)胞表面的吸附受體 5）具有控制某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞的部分選擇性屏障功能

3、革蘭氏染色機(jī)制：通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞膜內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物。革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細(xì)胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次多和交聯(lián)致密，故與乙醇與丙酮作脫色處理時(shí)因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類(lèi)脂，故乙醇處理不會(huì)溶出縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其任呈紫色。反之革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層的類(lèi)脂含量高、肽聚糖層薄和交聯(lián)度差，遇脫色劑后，以類(lèi)脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物的溶出，因此，通過(guò)乙醇脫色后細(xì)胞退成無(wú)色。這時(shí)，再經(jīng)沙黃等紅色染料進(jìn)行復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈現(xiàn)紅色，而革蘭氏陽(yáng)性則保留紫色。

二、芽孢

芽孢：某些細(xì)胞在生長(zhǎng)發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強(qiáng)的休眠體

芽孢的特點(diǎn)：1）芽孢內(nèi)新陳代謝幾乎停止，處于休眠狀態(tài)，但保持潛在萌發(fā)力

2）芽孢不具生殖能力，僅只是一種休眠體 3）抗逆性最強(qiáng)的生命體之一，有抗熱、抗化學(xué)藥物、抗輻射和抗靜水壓能力 4）含水量低，壁厚而致密，通透性差，不易著色，折光性強(qiáng)

5）一個(gè)孢子萌發(fā)只產(chǎn)生一個(gè)營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的細(xì)胞 芽孢的耐熱機(jī)制：芽孢的耐熱性在于芽孢衣對(duì)多價(jià)陽(yáng)離子和水分的透性很差和皮層的離子強(qiáng)度很高，從而是皮層產(chǎn)生極高的滲透壓去奪取芽孢核心中的水分，其結(jié)果造成皮層的充分膨脹，而核心部分的細(xì)胞質(zhì)卻變得高度失水，因此，導(dǎo)致核心具極強(qiáng)的耐熱性。第四章微生物的營(yíng)養(yǎng)要求

一、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：能夠滿足微生物機(jī)體生長(zhǎng)、繁殖和完成各種生理?xiàng)l件所需的物質(zhì) 營(yíng)養(yǎng)：微生物獲得U和利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程

二、1、碳源：是在微生物生長(zhǎng)過(guò)程中為微生物提供碳素來(lái)源的物質(zhì)。為微生物提供碳元素與能量

2、氮源：為微生物提供氮元素來(lái)源，只有少數(shù)自養(yǎng)微生物能利用銨鹽、硝酸鹽同時(shí)作為氮源與能源（是構(gòu)成細(xì)胞中核酸和蛋白質(zhì)的重要元素）氮源的類(lèi)型：無(wú)機(jī)氮、有機(jī)氮、氣體氮

3、無(wú)機(jī)鹽：作用：作為酶活性中心的組成部分、維持生物大分子和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)并維持細(xì)胞的滲透壓、控制細(xì)胞的氧化還原電位和作為某些微生物生長(zhǎng)的能源物質(zhì)。

4、生長(zhǎng)因子：通常是指那些微生物生長(zhǎng)所必需的的且需量很少，但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機(jī)體生長(zhǎng)需要的有機(jī)化合物

5、水：生理功能：1)起到溶劑與運(yùn)輸介質(zhì)的作用

2）參與細(xì)胞內(nèi)一系列的化學(xué)反應(yīng)

3）維持蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子穩(wěn)定的天然構(gòu)象

4）是良好的導(dǎo)熱體，調(diào)節(jié)細(xì)胞溫度 微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型分類(lèi)（P84表格）

三、1、培養(yǎng)基的配制原則：1）目標(biāo)明確

2）營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)

3）物理化學(xué)條件適宜

4）原料來(lái)源的選擇

2、C多有助于次生物質(zhì)分泌，N多有助于個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育

3、PH：細(xì)菌：7.0~8.0

酵母菌：4.0~6.0

放線菌：8.0~9.0

霉菌：4.0~5.8

4、維持培養(yǎng)基PH的方法：1）加緩沖劑一氫和二氫磷酸鹽的混合物

2）備用堿：CaCO3、CaHCO3 3）弱酸鹽：檸檬酸鹽、乳酸鹽

4）液氨或鹽酸

5、原料來(lái)源：1）經(jīng)濟(jì)節(jié)約原則：以粗代精、以廢代好、以簡(jiǎn)代繁

2）原料來(lái)源要廣泛

3）原料藥易處理、處理成本要低

4）原料處理后廢物、廢液、廢氣要少

6、選擇和配制培養(yǎng)基的方法四種：生態(tài)模擬、查閱文獻(xiàn)、精心設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)比較

四、培養(yǎng)基的分類(lèi)

1、按成分不同劃分：天然培養(yǎng)基：優(yōu)點(diǎn)為取材方便，營(yíng)養(yǎng)豐富，種了多樣，配制方便合成培養(yǎng)基：優(yōu)點(diǎn)：組分精確，重復(fù)性好確定：較昂貴，一般用于研究

2、根據(jù)物料狀態(tài)劃分：固體培養(yǎng)基：一般用于進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏半固體培養(yǎng)基：用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類(lèi)鑒定及噬菌體效價(jià)滴定液體培養(yǎng)基：用于大量培養(yǎng)微生物，研究生理代謝

3、按用途劃分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)野生型微生物和原養(yǎng)型微生物 加富培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基）：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)制成的一類(lèi)營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基作用一般為分離某種微生物而專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)或培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)謹(jǐn)?shù)漠悩游⑸?鑒別培養(yǎng)基：在培養(yǎng)可中加入某種特殊化學(xué)物質(zhì) 選擇培養(yǎng)基：根據(jù)不同種類(lèi)微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)需求或?qū)δ撤N化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同，在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需要微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng) 第五章、微生物代謝

微生物發(fā)酵過(guò)程的三個(gè)階段：脫氫（電子）、遞氫（或電子）和受氫（或電子）發(fā)酵：是指微生物細(xì)胞將有機(jī)物氧化釋放的電子直接交給底物本身未完全氧化的某些中間產(chǎn)物，同時(shí)釋放能量并產(chǎn)生各種不同的代謝產(chǎn)物

代謝：生命存在的基本特征，是微生物體內(nèi)所進(jìn)行的全部生化反應(yīng)的總稱(chēng)。主要由分解代謝和合成代謝兩個(gè)過(guò)程組成。分解代謝：是指將大分子物質(zhì)降解成小分子物質(zhì)，并在這個(gè)過(guò)程中產(chǎn)生能量（都是氧化反應(yīng)）合成代謝：是指細(xì)胞利用簡(jiǎn)單的小分子物質(zhì)合成復(fù)雜大分子，在這個(gè)過(guò)程要消耗能量（都是還原反應(yīng)）

代謝途徑都是有一系列連續(xù)的酶促反應(yīng)構(gòu)成的

P102~P105EMP HM ED途徑的特點(diǎn)功能以及途徑路線

根據(jù)氧化還原反應(yīng)電子受體的不同可將發(fā)酵和呼吸分為有氧和無(wú)氧呼吸兩種 P108 TCA途徑圖

TCA循環(huán)特點(diǎn)：1）氧雖然不直接參與其中反應(yīng)，但必需在有氧條件下運(yùn)行

2）每個(gè)丙酮酸產(chǎn)生15個(gè)ATP 3）位于一切分解代謝與合成代謝的樞紐地位，可為生物合成提供各種碳價(jià)原料

TCA的生理意義：1）為細(xì)胞提供能量

2）各種能源物質(zhì)徹底氧化的共同代謝途徑（對(duì)于微生物來(lái)說(shuō)）3）物質(zhì)轉(zhuǎn)化樞紐

無(wú)氧呼吸：電子受體不是氧氣而是外源無(wú)機(jī)物與部分簡(jiǎn)單小分子有機(jī)物

發(fā)酵作用：沒(méi)有外源電子受體，底物具有的能量只釋放一小部分，合成少量ATP 三種磷酸化：底物水平磷酸化，高能磷酸化，氧化磷酸化

光合磷酸化的特點(diǎn)：1）光驅(qū)使下電子自菌綠素上逐出后經(jīng)類(lèi)似呼吸鏈又回到菌綠素

2）產(chǎn)還原力[H]和產(chǎn)ATP分別進(jìn)行，還原力來(lái)自于H2O等無(wú)機(jī)物

3）不產(chǎn)生氧氣 合成代謝：微生物利用能量代謝所產(chǎn)生的能量、中間代謝產(chǎn)物以及從外界吸收的小分子合成復(fù)雜細(xì)胞物質(zhì)的過(guò)程

P118~P119 CO2固定路線圖

藍(lán)細(xì)菌孤單的抗氧化保護(hù)機(jī)制：1）分化出特殊的還原性異形胞

2）非異形胞藍(lán)細(xì)菌固氮酶的保護(hù)將固氮與光合進(jìn)行時(shí)間上分隔

微生物固氮反應(yīng)6要素：1）ATP的供應(yīng)

2)還原力[H]及傳遞氫載體

3）固氮酶

4）還原底物——氮?dú)?/p>

5）鎂離子

6）嚴(yán)格厭氧微環(huán)境

聯(lián)合固氮菌：指必需生活在植物根莖葉，動(dòng)物腸道等處才能進(jìn)行固氮的微生物，不形成類(lèi)似根瘤的共生結(jié)構(gòu) 微生物的代謝調(diào)節(jié)主要有兩種類(lèi)型：一是酶活性的調(diào)節(jié)，即調(diào)節(jié)已經(jīng)存在的酶分子的活性，是酶在化學(xué)水平的變化。另一類(lèi)是酶合成的調(diào)節(jié)，即調(diào)節(jié)酶分子的合成量，是遺傳水平發(fā)生的變化 第六章

一、生長(zhǎng)曲線延滯期

特點(diǎn)：1）生長(zhǎng)速率常數(shù)為零，細(xì)胞數(shù)目不增加或增加很小

2）細(xì)胞形態(tài)變大或 增長(zhǎng)許多桿菌可長(zhǎng)成絲狀

3）合成代謝十分活躍，核糖體、酶類(lèi)和ATP 的合成加速產(chǎn)生各種誘導(dǎo)酶

4）對(duì)外界不良條件如NaCl溶液，溫度和抗 生素等理化因素反應(yīng)敏感

出現(xiàn)原因：1）微生物接種到一個(gè)新的環(huán)境，暫缺乏足夠的能量和必需的生長(zhǎng)因子

2）“種子”老化即處于未對(duì)數(shù)期或種子未活化

3）接種時(shí)損傷

影響其長(zhǎng)短的因素與實(shí)踐意義：1）接種齡：對(duì)數(shù)期種子延滯期短，延滯期或衰亡期的種子延滯期較長(zhǎng)

2）接種量：接種量大，延滯期較短，接種量小，延滯期較長(zhǎng)

3）培養(yǎng)基成分：培養(yǎng)基成分豐富的延滯期較短，培養(yǎng)基成分與種子培養(yǎng)基一致的延滯期較短

二、生長(zhǎng)曲線指數(shù)期

特點(diǎn)：1）生長(zhǎng)速率最快，細(xì)胞呈指數(shù)增長(zhǎng)

2）生長(zhǎng)速率恒定

3）代謝旺盛，細(xì)胞組分平衡發(fā)展

4）群體的生理特性一致

影響指數(shù)期的意義：1）菌種：不同菌種代時(shí)差異極大

2）營(yíng)養(yǎng)成分：營(yíng)養(yǎng)越豐富代時(shí)越短

3）營(yíng)養(yǎng)物濃度：影響微生物的生長(zhǎng)速率和生長(zhǎng)總量

4）培養(yǎng)溫度：影響微生物的生長(zhǎng)速率和生長(zhǎng)總量

指數(shù)期的實(shí)踐意義：1）是代謝、生理研究的良好材料

2)是增殖噬菌體的最適宿主菌齡

4）革蘭氏染色是采用此期微生物

生長(zhǎng)曲線穩(wěn)定期特點(diǎn)：1）活細(xì)胞總數(shù)維持不變即新增殖的細(xì)胞數(shù)與衰亡的細(xì)胞數(shù)相等，菌體總數(shù)達(dá)到最高點(diǎn)

2）細(xì)胞生長(zhǎng)速率為零

3）細(xì)胞生理上處于衰老，代謝活力鈍化，細(xì)胞成分合成緩慢，革蘭氏染色發(fā)生變化

三、生長(zhǎng)曲線衰亡期

特點(diǎn)：細(xì)胞以指數(shù)速率死亡，有時(shí)細(xì)胞速率的降低是由于抗性細(xì)胞的積累，細(xì)胞變形退化，有的發(fā)生自溶，革蘭氏染色發(fā)生變化

影響衰亡期的因素及實(shí)踐意義：1）與菌種的遺傳特性有關(guān)：有些細(xì)菌的培養(yǎng)經(jīng)歷所有的各個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期，幾天以后死亡，有細(xì)菌培養(yǎng)基個(gè)月乃至幾年以后任然有一些貨細(xì)胞

2）與是否產(chǎn)芽孢有關(guān)：產(chǎn)芽孢的細(xì)菌更易幸存下來(lái)

3）與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和有毒物質(zhì)有關(guān)：補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)和能源，以及中和環(huán)境毒性，可以減緩死亡細(xì)胞的死亡速率，延長(zhǎng)細(xì)菌培養(yǎng)物的存貨時(shí)間

四、分批培養(yǎng)：是指將微生物置于一定容積的的培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)培養(yǎng)，最后一次收獲培養(yǎng)方式 連續(xù)培養(yǎng)：在一個(gè)恒定容積的的流動(dòng)系統(tǒng)中培養(yǎng)微生物，一方面以一定速率加入新的培養(yǎng)基，另一方面又以相同的速率流出培養(yǎng)物（菌體和代謝產(chǎn)物）

連續(xù)發(fā)酵的優(yōu)點(diǎn)：1）高效

2）產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定

3）節(jié)約了大量動(dòng)力、人力、水和蒸汽，且使水、汽、電的負(fù)荷均衡合理

連續(xù)發(fā)酵的缺點(diǎn)：1）菌種易退化

2）易污染雜菌 3）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率一般 同步生長(zhǎng)：就是指在培養(yǎng)物中所有微生物細(xì)胞都同一生長(zhǎng)階段，并都能同時(shí)分裂的生長(zhǎng)方式 同步培養(yǎng)法包括誘導(dǎo)法與選擇法

誘導(dǎo)法：是采用物理、化學(xué)一男子使微生物生長(zhǎng)到某一階段而停下來(lái)，使所有細(xì)菌都達(dá)到這個(gè)階段時(shí)再使其生長(zhǎng) 恒濁器：根據(jù)培養(yǎng)器內(nèi)微生物的生長(zhǎng)密度并借光電控制系統(tǒng)來(lái)控制培養(yǎng)液流速，以取得菌體密度高，生長(zhǎng)速度恒定的微生物細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)

恒化器：與恒濁器相反，是一種設(shè)法使培養(yǎng)液流速保持不變 最高生長(zhǎng)速率條件下進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖的一種連續(xù)培養(yǎng)裝置 裝置

控制對(duì)象

培養(yǎng)基

培養(yǎng)基流速

生長(zhǎng)速率

產(chǎn)物

應(yīng)用范圍

恒濁器

菌體密度(內(nèi)控制)

無(wú)限制生長(zhǎng)因子

不恒定

最高速率

大量菌體或與菌體平行的代謝產(chǎn)物

生產(chǎn)為主

恒化器

培養(yǎng)基流速（外控制）

有限制生長(zhǎng)因子

恒定

低于最高速率

不同生長(zhǎng)速率的菌體、并使微生物始終在低于其

實(shí)驗(yàn)室為主

五、防腐：是在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下防止或抑制微生物生長(zhǎng)的一種措施，它能防止食物腐敗或防止其他物質(zhì)霉變 消毒：利用某種殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有微生物的一種措施，它可以起到防止感染或傳播的作用

滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有微生物的一種措施 第七章

1、病毒的特點(diǎn):1)形態(tài)及其微小，一般能通過(guò)細(xì)菌濾器必須自電鏡下才能觀察

2）沒(méi)有細(xì)胞構(gòu)造，主要成分僅為核酸與蛋白質(zhì)

3）每一種病毒致含有一種核酸

DNA和RNA 4）依靠自身的核酸進(jìn)行復(fù)制，一病毒的核酸和蛋白質(zhì)等原件實(shí)現(xiàn)裝配，實(shí)現(xiàn)繁殖

5）嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，缺乏完整的酶和產(chǎn)能系統(tǒng)，只能利用宿主細(xì)胞的現(xiàn)成的代謝系統(tǒng)合成病毒自身的核酸和蛋白質(zhì)

6）在離體條件下，能以無(wú)生命力的大分子狀態(tài)存在，并可長(zhǎng)期保持器侵染力

7）對(duì)一般抗生素不敏感，但對(duì)干擾素敏感

8）有些病毒的基因可以整合到宿主的基因中去

2、病毒與活細(xì)胞的區(qū)別：1）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)

2）幾乎所有的毒粒中只有DNA或RNA一種類(lèi)型的核酸

3）在細(xì)胞外不能增殖

3、得到一步生長(zhǎng)曲線的實(shí)驗(yàn)：二院培養(yǎng)系統(tǒng)：1）低濃度病毒宿主細(xì)胞(給幾分鐘時(shí)間侵染)2）高倍稀釋病毒與細(xì)胞的培養(yǎng)物

3）保濕培養(yǎng)

4）不同時(shí)間取樣，涂布平板，得到效價(jià)

5）以時(shí)間為橫坐標(biāo)，病毒濃度為縱坐標(biāo)繪圖

4、烈性噬菌體：感染宿主后增殖裂解宿主 溶原性噬菌體（溫和性細(xì)菌）：感染后大多數(shù)可整合到宿主基因中少數(shù)以染色體外獨(dú)立存在

5、病毒分為真病毒和亞病毒，亞病毒又分為類(lèi)病毒、衛(wèi)星病毒、衛(wèi)星RNA、朊病毒 類(lèi)病毒：是一種只包含RNA的病毒，只在植物中出現(xiàn)，分質(zhì)量極小，不能編碼蛋白質(zhì) 衛(wèi)星病毒：寄生于與之無(wú)關(guān)的輔助病毒的基因產(chǎn)物的病毒 衛(wèi)星RNA：是指必需依賴(lài)一些輔助病毒進(jìn)行復(fù)制的小分子單鏈RNA，他們被包藏在輔助病毒的殼體中

朊病毒：是一類(lèi)能引起哺乳動(dòng)物亞急性海綿樣腦病的病原因子 第八章

P204頁(yè)Griffith轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)等3個(gè)實(shí)驗(yàn)

基因組：是指位于細(xì)菌或細(xì)胞中的所有基因 大腸桿菌基因組的特點(diǎn)：1）遺傳信息的連續(xù)性

2）功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因組成操縱子結(jié)構(gòu)

3）結(jié)構(gòu)基因的單拷貝及rRNA基因的多拷貝

4）基因組重復(fù)序列少而短

質(zhì)粒：是一種獨(dú)立于染色體外，能進(jìn)行自主復(fù)制的細(xì)胞質(zhì)遺傳因子，主要存在于各種微生物中

轉(zhuǎn)座子：是位于染色體或質(zhì)粒上的一種能改變自身位置的DNA序列，廣泛分布于原核和真核細(xì)胞中

質(zhì)粒的主要類(lèi)型：致育因子、抗性因子、Col質(zhì)粒、毒性質(zhì)粒、代謝質(zhì)粒、隱秘質(zhì)粒

致育因子：又稱(chēng)F質(zhì)粒，其大小約100kb，這是最早發(fā)現(xiàn)的一種與大腸桿菌的有性生殖現(xiàn)象（結(jié)合作用）有關(guān)的質(zhì)粒

抗性因子：是另一類(lèi)普遍而重要的質(zhì)粒，主要包括抗藥性和抗重金屬兩大類(lèi)，簡(jiǎn)稱(chēng)R質(zhì)粒 Col質(zhì)粒：該質(zhì)粒含有編碼大腸菌素的基因，大腸菌素是一種細(xì)菌蛋白，只殺死近緣且不含Col質(zhì)粒的菌株，而宿主不受其產(chǎn)生的細(xì)菌素的影響

毒性質(zhì)粒：致病菌中攜帶的能引起致病性的質(zhì)粒，這些質(zhì)粒具有編碼毒素的基因 代謝質(zhì)粒：攜帶有能降解某些基質(zhì)的酶的基因的質(zhì)粒

隱秘質(zhì)粒：不顯示任何表型效應(yīng)，它們的存在只有通過(guò)物理方法檢測(cè)出來(lái) 原核生物中對(duì)的轉(zhuǎn)座因子有3種類(lèi)型：插入順序（IS）、轉(zhuǎn)座子（Tn）、病毒（Mu）轉(zhuǎn)座的遺傳學(xué)效應(yīng)：插入突變、產(chǎn)生染色體畸變、基因的移動(dòng)和重排

基因突變：一個(gè)基因內(nèi)部遺傳結(jié)構(gòu)或DNA序列的任何改變包括一對(duì)或幾對(duì)堿基的缺失、插入或置換，而導(dǎo)致的遺傳變化

堿基變化對(duì)遺傳信息改變的四種類(lèi)型：同義突變，錯(cuò)義突變，無(wú)義突變，移碼突變 同義突變：是指某個(gè)堿基的變化沒(méi)有改變產(chǎn)物氨基酸序列的密碼子變化

錯(cuò)義突變：是指堿基序列的改變引起了產(chǎn)物氨基酸的改變（可能為致死突變）無(wú)義突變：是指某個(gè)堿基的改變，使代表某種氨基酸的密碼子變?yōu)榈鞍踪|(zhì)的合成的終止密碼子，蛋白質(zhì)的合成提前終止，產(chǎn)生短截的蛋白質(zhì)

移碼突變：由于DNA序列中發(fā)生1~2個(gè)核苷酸的缺失或插入，使翻譯的閱讀框發(fā)生改變，從而導(dǎo)致改變位置以后的氨基酸序列的完全變化（一般為致死突變）

表型變化的突變型：營(yíng)養(yǎng)缺陷型，抗藥性突變型，條件致死突變型，形態(tài)突變型 營(yíng)養(yǎng)缺陷型：缺乏合成其生存所必需的營(yíng)養(yǎng)物的突變型，只有從周?chē)h(huán)境或培養(yǎng)基中獲得這些營(yíng)養(yǎng)或前體物才能生長(zhǎng) 影印平板P218 抗藥性突變型：是由于基因突變使菌株對(duì)某種或某幾種藥物，特別是抗生素產(chǎn)生抗性的一種突變型

條件致死突變型：是指在某一條件下具有致死效應(yīng)，而在另一條件下沒(méi)有致死效應(yīng)的突變型 形態(tài)突變型：是指造成形態(tài)改變的突變型（包括菌落形態(tài)、顏色一件噬菌斑形態(tài)）

自發(fā)突變的緣由：1）NDA復(fù)制過(guò)程產(chǎn)生的錯(cuò)誤

2）堿基互變異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)變

3）轉(zhuǎn)座子的隨機(jī)插入基因

自發(fā)突變的特性：1）非對(duì)應(yīng)性

2）稀有性

3）規(guī)律性

4）獨(dú)立性

5）遺傳和回復(fù)

6）可誘變性

誘發(fā)突變：堿基類(lèi)似物、插入染料、直接與DNA其化學(xué)反應(yīng)的誘變劑、輻射和熱、生物誘變因子

DNA損傷修復(fù)：光復(fù)活作用、切除修復(fù)、重組修復(fù)、SOS修復(fù) 光復(fù)活：由phr基因編碼的光解酶進(jìn)行

切除修復(fù)：又稱(chēng)暗修復(fù)，該修復(fù)系統(tǒng)除了堿基錯(cuò)誤配對(duì)和單核苷酸插入不能修復(fù)外，幾乎其他DNA損傷均可修復(fù)，是細(xì)胞內(nèi)主要修復(fù)系統(tǒng)

重組修復(fù)：是一種越過(guò)損傷而進(jìn)行的修復(fù)，這種修復(fù)不將損傷堿基除去

SOS修復(fù)：是DNA分子受到較大范圍的重大損傷時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種應(yīng)急反應(yīng) P226~227 高頻重組菌等

轉(zhuǎn)導(dǎo)：是由病毒介導(dǎo)的細(xì)胞間進(jìn)行遺傳交換的一種方式

供體DNA進(jìn)入受體的命運(yùn)：1）發(fā)生穩(wěn)定的轉(zhuǎn)導(dǎo)子

2）流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)：即不被降解，又不被整合，也不被復(fù)制

3）外源DNA被降解，轉(zhuǎn)導(dǎo)失敗

遺傳轉(zhuǎn)化：是指同源或異源的游離DNA分子被自然或人工感受態(tài)細(xì)胞攝取，并得到表達(dá)的水平方向的基因轉(zhuǎn)移過(guò)程

4個(gè)影響供體DNA與受體細(xì)胞間的最初相互作用：1）轉(zhuǎn)化片段的大小

2）形態(tài)：雙鏈DNA 3）濃度：在在臨界值出現(xiàn)之前成正比

4）生理狀態(tài)：感受器——?jiǎng)偼Ｖ笵NA合成 微生物育種：誘變育種、代謝育種、體內(nèi)基因組育種 代謝育種：改變代謝途徑、擴(kuò)展代謝途徑、構(gòu)建新的代謝途徑 體內(nèi)基因組育種：原生質(zhì)體融合，雜交育種

融合子的判別：1）親本遺傳標(biāo)記的互補(bǔ)的2）親本滅活后性狀的恢復(fù)

3）具有雙親本的熒光標(biāo)記 第九章

順式作用元件：位于基因的旁側(cè)，可以調(diào)控影響基因表達(dá)的核酸序列。其本身并不編碼蛋白質(zhì)

反式作用因子：通常為蛋白質(zhì)或RNA，其特征是可以合成并擴(kuò)散到目標(biāo)場(chǎng)所發(fā)揮作用 正調(diào)控：控制因子通過(guò)與啟動(dòng)子原件結(jié)合來(lái)激活基因的表達(dá) 負(fù)調(diào)控：抑制物與操縱基因結(jié)合起來(lái)阻止基因表達(dá) P248 操縱子的結(jié)構(gòu)

P249圖

P250 圖

啟動(dòng)子：是RNA聚合酶和CAP的結(jié)合位點(diǎn)，控制著轉(zhuǎn)錄的起始，一個(gè)啟動(dòng)子可以啟動(dòng)多個(gè)基因的表達(dá)

操縱基因：DNA上的一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，阻抑物能與之結(jié)合抑制相鄰啟動(dòng)子的起始轉(zhuǎn)錄，操縱基因不表達(dá)任何東西 終止子：控制轉(zhuǎn)錄結(jié)束

轉(zhuǎn)錄因子：轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程中RNA聚合酶所需要的輔助因子

轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控:1）DNA的結(jié)構(gòu)

2）RNA聚合酶的功能

3）蛋白質(zhì)因子及其他小分子配基的相互作用

第五篇：食品微生物檢驗(yàn)采樣方法

食品微生物檢驗(yàn)采樣方法

按照上述采樣方案,能采取最小包裝的樣品就采取完整包裝,必須拆包裝取樣的應(yīng)按無(wú)菌操作進(jìn)行。

不同類(lèi)型的食品應(yīng)采用不同的工具和方法: 1.液體樣品：充分混勻,以無(wú)菌操作開(kāi)啟包裝,用100mL無(wú)菌注射器抽取,注入無(wú)菌容器。2半固體樣品：以無(wú)菌操作拆開(kāi)包裝,用無(wú)菌勺子從幾個(gè)部位挖取樣品,放入無(wú)菌容器。3.固體食品：大塊整體食品應(yīng)用無(wú)菌刀具和鑷子從不同部位割取,割取時(shí)應(yīng)兼顧表面與深部,注意樣品的代表性;小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品,放入無(wú)菌容器。若為檢驗(yàn)食品的污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)的情況，應(yīng)從深部取樣。4.冷凍食品：大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采取;大塊冷凍食品可以用無(wú)菌刀從不同部位削取樣品或用無(wú)菌小手鋸從凍塊上舉取樣品,也可以用無(wú)菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品,放入容器。固體食品和冷凍食品的取樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康?若需檢驗(yàn)食品污染情況,可取表層樣品;若需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況,應(yīng)取深部樣品。5.生產(chǎn)工序監(jiān)測(cè)

(1)車(chē)間用水。自來(lái)水樣從車(chē)間各水龍頭上采取冷卻水;湯料等從車(chē)間容器不同部位用100mL無(wú)菌注射器抽取。

(2)車(chē)間臺(tái)面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。用5cm2孔無(wú)菌采樣板及5支無(wú)菌棉簽擦拭25cm2面積。若所采表面干燥,則用無(wú)菌稀釋液潤(rùn)濕棉簽后擦拭;若表面有水,則用干棉簽擦拭,擦拭后立即將棉簽頭用無(wú)菌剪刀剪入盛樣容器。

(3)車(chē)間空氣采樣。直接降塵法。將5個(gè)直徑90mm的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板分別置于車(chē)間的四角和中部,打開(kāi)平皿蓋5min,然后蓋蓋送檢。