第一篇：微生物知識點總結

一、名詞解釋：

1.溫和噬菌體(temperate phage)：噬菌體基因與宿主染色體整合，不產生子代噬菌體，但噬

菌體DNA能隨細菌DNA復制，并隨細菌的分裂而傳代。

2.溶原性：溫和噬菌體這種產生成熟噬菌體顆粒（前噬菌體偶爾可自發地或在某些理化和生物因素的誘導下脫離宿主菌基因組而進入溶菌周期，產生成熟噬菌體，導致細菌裂解）和溶解宿主菌的潛在能力，稱為溶原性。

3.溶原性細菌：帶有前噬菌體基因組的細菌稱為溶原性細菌。

4.莢膜：莢膜是一些細菌在其細胞表面分泌的一種黏性物質，把細胞壁完全包圍封住，這層黏性物質就叫莢膜。

5.菌膠團：有些細菌由于其遺傳特性決定，細菌之間按一定的排列方式互相黏集在一起，被一個公共莢膜包圍形成一定形狀的細菌集團，叫做菌膠團。

6.芽孢:某些細菌遇到不良環境時，在其細胞內形成一個內生孢子叫芽孢。

7.酶的活性中心：是指酶的活性部位，是酶蛋白分子直接參與和底物結合，并與酶的催化作用直接有關的部位。

8.生長因子：是一類調節微生物正常生長代謝所必需，但不能用簡單的碳、氮源自行合成的有機物。

9.培養基：根據各種微生物對營養的需要（如水，碳源，能源，氮源，無機鹽及生長因子等），按一定的比例配制而成的，用以培養微生物的基質，稱為培養基。

10.選擇培養基：根據某微生物的特殊營養要求，或對各種化學物質敏感程度的差異而設計、配制的培養基，稱為選擇培養基。

11.鑒別培養基：幾種細菌由于對培養基中某一成分的分解能力不同，其菌落通過指示劑顯示出不同的顏色而被區分開，這種起鑒別和區分不同細菌作用的培養基，叫鑒別培養基。

12.發酵：是指在無外在電子受體時，底物脫氫后所產生的還原力[H]不經呼吸鏈傳遞而直接交給某一內源性中間產物接受，以實現底物水平磷酸化產能的一類生物氧化反應。

13.好氧呼吸：是有外在最終電子受體（O2）存在時，對底物（能源）的氧化過程。

14.無氧呼吸*：無氧呼吸又稱厭氧呼吸，是一類電子傳遞體系末端的受氫體為外源無機氧化物的生物氧化。

15.土壤自凈：土壤對施入一定負荷的有機物或有機污染物具有吸附和生物降解的能力，通過各種物理、化學過程自動分解污染物使土壤恢復到原有水平的凈化過程，稱土壤凈化。

16.水體自凈：天然水體受到污染后，在沒有人為的干預條件下，借助水體自身的能力使之得到凈化，這種現象成為水體自凈，其中包括生物學和生物化學的作用。

17：水體富營養化（環化有）

18.硝化作用：氨基酸脫下的氨，在有氧的條件下，經亞硝酸細菌和硝酸細菌的作用轉化為硝酸的過程。

19.反硝化作用：當發生缺氧或厭氧環境時，兼性厭氧的硝酸鹽還原菌將硝酸鹽還原為氮氣。

20.好氧活性污泥法（了解）：

21.活性污泥絲狀膨脹：由于絲狀細菌極度生長引起的活性污泥膨脹，稱活性污泥絲狀膨脹。

22.消毒：利用理化因素殺死微生物營養體的方法。

23.滅菌：利用理化及生物因素殺死所有微生物的方法。

24.放線菌：菌體為單細胞絲狀體，以產生孢子的方式進行繁殖的原核微生物。（判斷）

25.一步生長曲線（補充）：將適量病毒接種于高濃度敏感細胞培養物建立同步感染，以感

染時間為橫坐標，病毒的效價為縱坐標，繪制出的病毒特征繁殖曲線。

26.生長曲線（補充）：以時間為橫坐標，以單細胞數目的對數為縱坐標，可以繪出一條有規律的曲線，稱為生長曲線。

微生物的特點：

1、個體極小

2、分布廣、種類繁多

3、繁殖快

4、易變異

第一章

病毒的特點：

1、不具備獨立代謝能力

2.營寄生生活

3.易變異

4.具有抗藥性和耐藥性 病毒的形態和大小：動物病毒：球形、橢圓形、磚形

植物病毒：桿狀、絲狀和球狀

噬菌體：蝌蚪狀和絲狀

大小：納米計通常100~300nm

病毒的繁殖過程：吸附、侵入、復制與聚集、釋放

第二章

細菌的形態和大小：球狀、桿狀、螺旋狀、絲狀

大小（長乘寬）：以微米計

0.5~2 細胞壁：革蘭氏陽性菌：肽聚糖、磷壁酸、細胞質膜

革蘭氏陰性菌：外壁層（脂多糖、脂蛋白、類脂）、肽聚糖、細胞質膜

細胞壁生理功能：1.保護原生質體免受滲透壓引起破裂

2.維持細菌的細胞形態

3.阻擋某些分子進入和保留蛋白質在周質

4.為鞭毛提供支點，使鞭毛運動

細胞質膜的生理功能：1.維持滲透壓的梯度和溶質的轉移

2.細胞質膜上有合成細胞壁和形成橫膈膜組分的酶

3.膜內陷形成中間體含有細胞色素，參與呼吸作用

4.在細胞質膜上進行物質代謝和能量代謝

5.為鞭毛提供附著點

莢膜的定義：莢膜是細菌在其細胞表面分泌的一種黏性物質。

功能：1.有助于肺炎鏈球菌侵染人體

2.保護致病菌免受宿主吞噬細胞的吞噬、免受干燥的影響

3.可做碳源和能源，有些莢膜可做氮源

4.有生物吸附作用

芽孢的定義：某些細菌生活史中的某個階段或某些細菌遇到外界不良環境時，在其細胞內形成的一個內生孢子叫芽孢。

芽孢的特點：1.含水率低

2.芽孢壁厚而致密

3.芽孢中的2,6-吡啶二羧酸含量高

4.芽孢含有耐熱性酶

細菌的染色原理：用染色液染菌體，增加菌體與背景的反差。帶負電荷的菌體剛好可以被帶正電荷的堿性染液染色。

革蘭氏染色法（簡單染色法和復合染色法）：涂布

草酸銨結晶紫染色

碘—碘化鉀媒染

中性脫色劑脫色（陽性菌不褪色呈紫色，陰性菌褪色呈無色）

番紅染液復染（陽紫陰紅）

革蘭氏染色的機制：等電點和細胞壁，1.陽帶負電荷多，等電點低與染劑結合牢固不易被乙醇提取。2.陽細胞壁脂質少，不易被乙醇溶解，通透性弱，染劑不易被乙醇提取 放線菌的定義：在固體培養基上呈輻射狀生長而得名、腐生菌、在自然界循環中起積極作用、改良土壤。

形態：由纖細的、長短不一的菌絲組成，菌絲分枝，為單細胞。

原核微生物：立克次氏體：“二分裂”革蘭氏陰性、營寄生生活、傳染病有流行斑疹、傷寒、姜蟲熱及Q熱等

支原體：“二分裂” 革蘭氏陰性

衣原體：革蘭氏陰性：二分裂、能引起人患沙眼、鸚鵡熱、淋巴肉芽腫、粒性結膜炎

第三章

原生動物“有關于水處理”：不同種類對環境變化的敏感程度不同。鞭毛綱中鞭毛蟲喜在多污帶和中污帶生活，所以在污水生物處理中，活性污泥培養初期或在水處理效果差時鞭毛蟲大量出現，可做污水處理效果差時的指示生物。肉足綱變形蟲出現，處理效果一般；纖毛綱鐘蟲、累枝蟲耐污能力強，是水體自凈程度高，污水生物處理效果好的指示生物。真菌：酵母菌：細胞壁結構：與細菌不同、含葡聚糖、甘露聚糖、蛋白質及脂質。啤酒酵母還含幾丁質

繁殖方式：有無性生殖和有性生殖、無性繁殖又有出芽生殖和裂殖。

霉菌的細胞結構：細胞壁、細胞質膜、細胞核、細胞質及內含物，大多數霉菌的細胞質含幾丁質，少數水生霉菌的細胞壁含纖維素。

繁殖方式：借助有性孢子和無性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。

菌落特征：菌落疏松、與培養基結合不緊易挑取、相似：圓形、絨毛狀、絮狀或蜘蛛網狀

不同：較大、生長迅速（相比其他微生物）

不同霉菌的孢子形狀結構和顏色都不同。

第四章

微生物的酶：單成分酶（只含蛋白質）和全酶（酶蛋白和輔助因子）

酶的活性中心定義：是指酶的活性部位，是酶蛋白分子中直接參與和底物結合，并與酶的催化作用直接相關的部位，是酶催化功能的基礎。

組成：兩個功能部位（結合部位和催化部位）

酶的分類（六大類）：氧化酶、轉移酶、水解酶、裂解酶、異構酶、合成（連接）酶 酶的催化特性：1.具有一般催化劑的共性

2.具有高度的專一性

3.催化條件溫和

4.對環境條件的變化極為敏感

5.催化效率極高

影響酶促效應的因素：1.酶濃度

2.底物濃度

3.溫度

4.pH 5.激活劑

6.抑制劑 微生物的營養（六大營養）：水、碳源、能源、氮源、無機鹽、生長因子 碳氮磷比：根瘤菌要求11.5:1

霉菌要求9:1

固氮菌要求27.6:1

混合群體要求25：1 水處理中好氧活性污泥要求碳氮磷比100:5:1 水處理中厭氧活性污泥要求碳氮磷比100:6:1 有機固體廢物堆肥發酵要求碳氮比30:1

碳磷比75~100:1 培養基的定義：根據各種微生物對營養的需要，按一定的比例配制而成的，用來培養微生物的基質。

配制步驟：按順序加入緩沖化合物、無機元素、微量元素、生長因子

培養基的分類：1.選擇培養基

2.鑒別培養基

營養物進入微生物細胞的方式：1.單純擴散

2.促進擴散

3.主動運輸

4.基因轉位 ATP的生成方式：1.基質（底物）水平磷酸化（糖酵解和三羧酸循環）

2.氧化磷酸化（好氧呼吸和無氧呼吸）

3.光合磷酸化（光合作用）

發酵的定義：是指在無外在電子受體時，底物脫氫后所產生的還原力{H}不僅呼吸鏈傳遞而直接交給某一內源性中間產物接受，以實現底物水平磷酸化產能的一類生物氧化反應。

好氧呼吸：是指有氧氣存在時對底物的氧化過程：兩個階段（1）葡萄糖的酵解

（2）三羧酸循環看124頁轉化圖

細菌的生長曲線：1.延緩期（適應期）

2.對數期

3穩定期（.靜止期）4.衰老期 微生物生長量的測定方式種類：1.計數器直接計數（血球計數板）

2.電子計數器計數

3.染色涂片計數（單位面積菌數*面積*稀釋倍數）

4.比濁法測定細菌懸液細胞數（分光光度計測定）

第五章

微生物的生存因子：溫度、pH（較重要）、氧化還原電位、溶解氧、太陽輻射、活動與滲透壓、表面張力

微生物和其他生物間的關系：1.競爭關系（不同微生物種群同一環境）

2.原始合作關系（可單獨生活的兩種生物共存于同一環境中）

3.共生關系（不能單獨生活的兩種生物共同生活與同一環境中）

4.偏害關系(甲對乙有害，乙對甲無影響)5.捕食關系

6.寄生關系

菌種的退化、復壯和保藏：遺傳性使各種微生物的遺傳性狀得以延續：微生物發生變異，使其得到進化，退化是產生了負變，復壯是在性狀沒有退化之前做好純種分離和性能測定。菌種保藏適宜條件：低溫、干燥、缺氧、貧乏培養基和添加保護劑。

方法：定期移植法、干燥法、隔絕空氣法、蒸餾水懸浮法、綜合法

第七章

土壤自凈的定義：土壤對施入一定負荷的有機物或有機污染物具有吸附和生物降解的能力，通過各種物理化學過程自動分解污染物使土壤恢復到原有水平的凈化過程。

水體自凈：河流接納了一定量的有機污染物后，在物理的、化學的和水生物等因素的綜合作用后得到進化，水質恢復到污染前的水平和狀態

第八章

碳氮循環：

硝化作用的定義：氨基酸脫下的氮，在有氧的條件下，經亞硝化細菌恒和硝化細菌的作用轉化為硝酸。

反硝化作用：植物藻類及其他微生物體內通過硝酸還原酶將硝酸還原成氨，由氨合成為氨基酸、蛋白質及其他含氮物質構成它們的機體。

第九章

好氧活性污泥：由多種多樣的好氧微生物和兼性厭氧微生物（兼有少量厭氧）與污（廢）水中有機和無機固體物質混凝交織在一起，形成絮狀體或稱絨粒。

圖9—1：

菌膠團的作用;1.有很強的生物絮凝、吸附能力和氧化分解有機物的能力。

2.對有機物的吸附和分解，為原生動物和微型后生動物提供了良好的生存環境。3.為原生動物、微型后生動物提供附著棲息場所。4.具有指示作用

原生動物和微型后生動物的作用：1.指示作用

2.凈化作用

3.促進絮凝和沉淀作用 活性污泥膨脹：有絲狀細菌極度生長引起的，呈現為污泥結構極度松散，體積增大、上浮，難以沉降分離影響出水水質的現象。

活性污泥膨脹的成因：1.溫度

2.溶解氧

3.可溶性有機物及其種類

4.有機物濃度 活性污泥膨脹的控制對策：1.控制溶解氧

2.控制有機負荷

3.改革工藝

為什么濕熱滅菌比干熱滅菌好？

1.菌體蛋白質吸收熱水分凝固比干熱容易

2.濕熱比干熱傳導快，穿透力強，能迅速提高物體內部溫度

3.蒸汽與物品接觸凝結成水，放出潛能，能迅速提高溫度，加速微生物死亡。

第二篇：高中生物微生物與發酵工程知識點總結

高中生物微生物與發酵工程知識點總結

微生物類群

細菌、放線菌、病毒

細菌分裂方式：二分裂。

多數抗生素由放線菌產生。

病毒的衣殼決定病毒抗原特異性。

一種病毒只含有一種核酸。

微生物營養 營養：

各種成分：碳源、氮源、生長因子、無機鹽和水。

碳源——構成細胞物質和一些代謝產物。

氮源——合成蛋白質、核酸和含氮產物。

生長因子——合成酶和核酸。糖類（葡萄糖）是最常用的碳源。

不同種類微生物對碳源種類、數量有不同要求。

銨鹽、硝酸鹽是最常用的氮源。

生長因子：維生素、氨基酸、堿基等

天然物質（酵母膏、蛋白胨、動植物組織提取液）可作為生長因子。

培養基配置原則：

目的明確、營養協調、PH要適宜

谷氨酸生產：

C：N = 4：1 菌體大量繁殖

C：N = 3：1 谷氨酸大量合成 PH：

細菌——6.5~7.5

放線菌——7.5~8.5

真菌——5~6

谷氨酸棒狀桿菌——7~8

培養基種類：記憶實例

分類 物理

固體：分離、鑒定

半固體：觀察運動、留種 液體：工業生產

化學

合成培養基：分類、鑒定 天然培養基：工業生產

用途

選擇培養基：抑制劑、促進劑 鑒別培養基：指示劑、化學藥品

微生物代謝

代謝產物：初級代謝產物、次級代謝產物

代謝調節：酶合成調節、酶活性調節。

酶分類：組成酶、誘導酶。

代謝人工控制途徑：

誘變處理；改變細胞膜透性。（記憶實例）微生物代謝異常旺盛的原因：

表面積與體積比很大，能夠迅速與外界進行物質交換。

酶合成調節……保證代謝需要，避免胞內物質能量浪費，增強微生物適應能力。

酶活性調節……（改變構象）快速、精細調節方式。微生物生長

（記憶書本細節）

四個時期：調整期、對數期、穩定期、衰亡期。

連續培養：縮短了培養周期，消除不利于微生物生長的某些環境因素，提高設備利用率，便于自動化管理。（穩定期進行）

影響因素：溫度、PH、氧。

測定培養生長情況：將少量某細菌接種到定容的液體培養基中觀察。測定方法：細胞數；測重。

生長曲線反映細菌菌體生長狀況。

調整期——代謝活躍，體積增長快，大量合成酶、ATP等。時間取決于：菌種、培養條件。

對數期——代謝旺盛，形態、特征穩定。留種，科研材料。時間取決于：接種量、培養基。

穩定期——動態平衡，活菌數最大，大量積累次級代謝產物。種內斗爭最激烈，出現芽孢。

衰亡期——死亡率＞繁殖率，有多種形態和畸形。死細胞解體，釋放代謝產物。

發酵工

程 發酵工程概念和內容：

發酵工程的應用：

醫藥工程：代謝產物中的抗生素、激素、疫苗、干擾素、抗體等。

食品工程：傳統發酵產品，食品添加劑，單細胞蛋白。谷氨酸棒狀桿菌生產實例。

菌種的選育：誘變育種、基因工程、細胞工程。

培養基的配制：根據配制三原則。

滅菌、擴大培養和接種。

發酵過程：控制影響微生物生長的環境因素。分離提純：菌體（過濾、沉淀），代謝產物（蒸餾、萃取、離子交換）。

第三篇：微生物總結

微生物：一類分布廣泛、體積微小、結構簡單、肉眼直接看不到，微小生物的總稱。

細菌L型：細菌細胞壁的肽聚糖結構受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細胞壁受損的細菌在高滲環境下仍可存活，稱細菌細胞壁缺陷型或L型。

質粒：是染色體外的遺傳物質，控制某些特定的生物學性狀，不是細菌生長所必需。

莢膜：是細菌合成分泌的包繞于細胞壁外的一層粘液性物質。界限清晰性質穩定結合牢固。培養基：由人工方法經滅菌后制成，專供微生物生長使用的混合營養制品。一般pH為7.2-7.6。

兼性厭氧菌：兼有需氧呼吸和無氧發酵兩種功能，無論在有氧或無氧環境中都能生長，但以有氧時生長較好，大多數病原菌屬于此。菌落：在固體培養基中，經過十八到24小時培養后，單個細菌分裂繁殖成一堆肉眼可見的細紅細胞吸附：流感病毒等感染細胞后，由于細胞膜上出現了血凝素（HA），具有吸附脊椎動物紅細胞的能力，這一現象稱為紅細胞吸附。抗毒素：通常是用細菌類毒素給馬多次注射后，取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成抗生素：微生物來源的抗菌藥物，以及人工化學修飾或半合成的衍生物

無菌：就是指沒有活菌的意思。

1：細胞壁結構、化學組成及功能？答：化學組成：G+①肽聚糖：聚糖骨架、四肽側鏈、五肽交聯橋②磷壁酸：粘附功能，與致病性有關；抗原性很強③其他成分：如A群鏈球菌的M蛋白G-①肽聚糖：聚糖骨架；四肽側鏈②外膜：脂蛋白；脂質雙層；脂多糖：脂類A（毒性成分，無種屬特異性）；核心多糖；特異多糖。功能：①維持細菌固有形態②保護細菌抵抗低滲環境③物質交換④決定菌體的抗原性。2：G-菌與G+菌細胞壁的異同點及其意義？答：兼性厭氧菌、專性厭氧菌。

11：與醫學有關的合成代謝產物？答：① 毒素與侵襲性酶：外毒素和內毒素②熱原質：G-菌細胞壁的脂多糖，耐高溫，250℃干烤破壞。③抗生素：某些微生物代謝中產生的一類能抑制或殺死其他微生物或腫瘤細胞的物質。④維生素：如VitK、B族維生素。⑤色素：脂溶性和水溶性色素。⑥細菌素：無治療應用價值。13：病毒的形態、結構與化學組成。答：多數病毒呈球形或近似球形，少數呈桿狀（植物病毒）、絲狀（初分離的流感病毒）、彈狀（狂犬病毒）、磚塊狀（如痘類病毒）和蝌蚪狀（噬菌體）。病毒的核心和衣殼，二者構成核衣殼，病毒包膜和其他輔助結構。化學組成：核心：主要為核酸，化學組成為DNA或RNA。衣殼：包繞在核心外面的一層蛋白質，由許多蛋白質亞單位（殼粒）組成。包膜：化學組成： 脂質蛋白質糖類。

答：單細胞真菌呈圓形或卵圓形。多細胞真菌

結構：菌絲和孢子，菌絲：分為營養菌絲、氣中菌絲、生殖菌絲；孢子：是真菌的繁殖體。結構：細胞壁外成分；細胞壁；隔膜；其他結構。

25：真菌培養特性。答：最常用的培養:沙保弱培養基。溫度:多數都在22 ~ 28oC，但深部感染真菌最適溫度為37oC，pH4.0 ~ 6.0病原菌通常生長緩慢，1~4周。

26：真菌繁殖方式。答：①無性生殖：①由菌絲斷裂形成新個體②細胞直接分裂產生子細胞③產生芽生孢子④產生孢子囊孢子和分生孢子②有性生殖：指經過兩性細胞配合產生新個體的繁殖方式。

27：真菌抵抗力答：①對干燥、陽光、紫外線及常用消毒劑有強抵抗力②不耐熱，菌絲與孢子60℃ 1小時均可殺死③2﹪石炭酸、10%甲醛、0.1%升汞、2.5%碘酊敏感④抗真菌藥物：菌集團。

純培養基：挑取一個菌落，移種到另一培養基中，生長出來的細菌均為純種。

毒性噬菌體：在宿主菌細胞內噬菌體增殖產生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細菌DNA復制而復制，并隨細菌的分裂而傳到子代細菌的基因組中，變成溶原性細菌，形成溶原性周期。前噬菌體：整合在細菌染色體上的噬菌體基因。轉座子：細菌基因組中的一段DNA序列，可以在染色體、質粒或噬菌體之間自行移動的遺傳成分，伴隨轉座子的移動，會出現插入突變。基因轉移：遺傳物質由供體菌轉入受體菌的過程為基因轉移。

重組：轉移的基因與受體菌DNA整合在一起稱為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。轉化：細菌通過性菌毛相互連接溝通，將質粒或染色體等遺傳物質從供體菌轉移給受體菌的過程。

接合：是受體菌直接攝取供體菌DNA片段，從而獲得新的遺傳性狀的過程。

轉導：以噬菌體為載體將供菌的DNA片段轉移到受菌體內使受菌獲得供菌的部分遺傳性狀。溶原性轉換：某些前噬菌體可導致細菌基因型和性狀發生改變，例如白喉棒狀桿菌產生白喉毒素的機理，溫和噬菌體感染細菌時，其基因可整合于宿主菌染色體中，使宿主菌獲得噬菌體基因賦予的新的性狀，稱溶原性轉換。原生質體融合：將兩種不同的細菌經溶菌酶或青霉素等處理，失去細胞壁成為原生質體后進行融合的過程。融合后的染色體之間發生重組。病毒的自我復制：以病毒核酸為模板，經過復雜的生化過程，復制子代病毒的核酸并通過轉錄翻譯產生病毒蛋白質，裝配成熟后釋放到細胞外，這種增殖方式稱為病毒的自我復制。頓挫感染：被病毒侵入的細胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細胞與容納細胞

缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點改變，不能正常增殖，不能復制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒?完成復制

干擾現象：當兩種病毒感染同一宿主細胞時，發生一種病毒的增殖抑制另一種病毒增殖的現象。某些病毒感染細胞時不出現CPE或其他易于測出的變化（如HAd），但能干擾其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者所特有的CPE 芽孢：某些細菌在一定環境條件下，胞質脫水濃縮，在菌體內部形成的一個圓形或卵圓形小體。

正常菌群：正常人的體表和與外界相通的眼結膜，口腔、鼻腔、腸道、泌尿生殖道等腔道粘膜中的不同種類和數量及對人體無害而有益的微生物。正常微生物群通稱為正常菌群

細菌群體：細菌附著在有生命或無生命的材料表面后，由細菌及其所分泌的胞外多聚物共同組成的呈膜狀的細菌群體。機會性感染：由正常菌群在機體免疫功能低下、寄居部位改變、菌群失調等特定條件下引起的感染。

毒力：致病性的強弱程度。

侵襲素：某些細菌的基因編碼一些具有侵襲功能的蛋白多肽，促進該病原菌向鄰近組織擴散甚至介導進入鄰近黏膜上皮細胞內。

包涵體：細胞漿或細胞核內出現光鏡下可見的斑塊狀結構

G+ 菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側鏈,五肽交聯橋,三維立體②磷壁酸:重要表面抗原，與粘附致病有關，加強穩定細胞壁G－菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側鏈組成二維結構, ②外膜（脂蛋白、脂質雙層、脂多糖組成）功能:屏障結構LPS是G－菌的內毒素。細胞壁結構異同:G+菌/G－菌--強度:較堅韌/較疏松--厚度:厚20-80nm/薄10-15nm--肽聚糖層數:多可達50層/少，1-2層--肽聚糖結構:聚糖骨架,四肽側鏈,五肽交聯橋,三維立體/聚糖骨架,四肽側鏈,二維平面--脂類含量/少/多--磷壁酸:有/無--外膜:無/有,由脂蛋白、脂質雙層、脂多糖組成3：細菌L型，特殊結構種類、化學組成、抗原性及意義？答：定義：細菌細胞壁的肽聚糖結構受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細胞壁受損的細菌在高滲環境下仍可存活，稱細菌細胞壁缺陷型或L型。種類：G+菌細胞壁缺失后，僅有胞膜，稱原生質體，G--菌肽聚糖層受損，尚有外膜，稱原生質球。抗原性及意義：高度多形性，大小不一；大多染成G－；高滲低瓊脂含血清培養基—油煎蛋樣菌落；去除誘因后，有些可回復為原菌；某些L型仍有致病性,引起慢性感染。作用于胞壁的抗菌性藥對L型感染治療無效

4：細菌的特殊結構？答：①莢膜：多糖或多肽的多聚體。功能a抗吞噬b黏附作用c抗有害物質的損傷d有抗原性，用于細菌的鑒定和分型②鞭毛：蛋白質，由基礎小體絲狀體鉤狀體組成，高度抗原性。功能a是細菌的運動器官b某些細菌的鞭毛與致病性有關c根據鞭毛的動力和鞭毛的抗原性可用以細菌的鑒別和分類③菌毛：由亞單位菌毛蛋白構成。功能a黏附作用b傳遞遺傳物質④芽孢：生產芽孢的細菌都是革陽菌。功能：a增強抵抗力b不直接致病c鑒定。

5：細菌的遺傳物質？答：細菌染色體，質粒，噬菌體：

6：基因轉移與重組方式的種類及定義？答：定義：基因轉移：遺傳物質由供體菌轉入受體菌的過程為基因轉移。重組：轉移的基因與受體菌DNA整合在一起稱為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。分類：轉化,接合,轉導,融合,轉換.【表格】類型：基因來源/轉移方式--轉化：供菌游離的DNA片段/直接攝入--接合：供菌質粒DNA/ 性菌毛--轉導：供菌任意DNA或噬菌體與供菌特定DNA/噬菌體--融合：兩菌原生質體的DNA/融合--轉換：溫和噬菌體/吸附穿入

7：噬菌體及其相關概念。答：1）毒性噬菌體：在宿主菌細胞內噬菌體增殖產生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。2）溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細菌DNA復制而復制，并隨細菌的分裂而傳到子代細菌的基因組中，變成溶原性細菌，形成溶原性周期。

8：細菌生長繁殖的條件？答:營養物質/酸堿度 多數病原菌最適pH為7.2~7.6/溫度 多數病原菌生長最適溫度為37℃/氣體 據代謝時對分子氧的需要與否，專性需氧菌、微需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌/滲透壓。

9：細菌群體的生長繁殖？答：生長曲線：一定數量的細菌接種到定量的液體培養基中，連續定時取樣測定活菌數量，以培養時間為橫坐標，以活菌數的對數為縱坐標作圖，得到的一條曲線。遲緩期：適應階段。對數期：對抗生素敏感，細菌鑒定選此期。穩定期：代謝產物形成（如外毒素、抗生素、芽胞等）。衰亡期：菌體細胞呈現多種形態。

10：按細菌對氧需要的分類？答：據代謝時對分子氧的需要與否，專性需氧菌、微需氧菌、14：雙鏈DNA病毒的復制周期？答：vDNA（RNA聚合酶）→早期mRNA（翻譯）→早期蛋白（酶）→ vDNA（酶）子代DNA →? mRNA?→結構蛋白.→子代DNA+結構蛋白→子代病毒。簡要過程：吸附，穿入，脫殼，生物合成，組裝、成熟與釋放。

15：頓挫病毒，缺陷病毒的概念？答：頓挫病毒：被病毒侵入的細胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細胞與容納細胞。缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點改變，不能正常增殖，不能復制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒=完成復制 16：細菌的感染與致病。答：感染：在一定條件下，微生物與機體相互作用并導致機體產生不同程度的病理過程。★

17：細菌的毒力比較，外毒素與內毒素生物學特性。答：【表格】種類：內毒素★外毒素。來源：G-菌★G+菌部分G-菌。編碼基因：染色體基因★質粒或前噬菌體或染色體基因。存在部位：細胞壁成分、細菌裂解后釋出★活菌分泌或細菌溶解后散出。化學成分：脂多糖★蛋白質。穩定性：好(160℃2~4h才破壞）★差（60~80 ℃30m可破壞）。毒性作用：弱、各種內毒素作用大致相同★強、對機體組織器官有選擇性。抗原性：弱，甲醛處理后不能形成類毒素★強，能刺激機體形成抗毒素，經甲醛脫毒后能形成類毒素。

18：細菌感染的類型答：①不感染②隱性感染③潛伏感染④顯性感染：急慢性感染；局部、全身感染⑤帶菌狀態。

19：病毒感染類型。答：①隱性感染②顯性感染：急性病毒感染：潛伏期短，發病急，數日或數周回復，病原消滅型感染。持續性病毒感染：慢性病毒感染；潛伏性病毒感染；慢發病毒感染。

20：細菌的致病機制。答：細菌的致病性強弱取決于毒力，細菌的毒力因子：①侵襲力：致病菌突破宿主生理屏障，進入機體并在體內定植、繁殖和擴散的能力包括黏附素、莢膜和微莢膜、侵襲性物質②毒素：細菌產生的損傷宿主引起生理功能紊亂的毒性物質，包括內毒素和外毒素。

21：正常菌群的生理作用。答：①生物拮抗：競爭粘附（占位性保護）作用；產生有害代謝物質；營養競爭②營養作用③免疫作用④抑癌作用⑤抗衰老作用。

22：病毒分離鑒定方法及病毒在培養細胞中的增殖的指標。答：病毒的分離：①動物接種②雞胚培養；流感病毒初次分離接種于羊膜腔；流感病毒的再培養接種于尿囊腔③組織培養④細胞培養 — 病毒分離鑒定中最常用的方法單層細胞培養；原代細胞培養；二倍體細胞培養；傳代細胞培養。指標：1）細胞的變化①細胞病變效應：有些病毒在細胞內增殖時引起的特有的細胞病變，如細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落②多核巨細胞形成：有些病毒如麻疹病毒、巨細胞病毒等作用于細胞膜，使鄰近的細胞融合，形成多核巨細胞③胞質或核內包涵體的形成狂犬病病毒、巨細胞病毒。2）紅細胞吸附流感病毒等感染細胞后，由于細胞膜上出現了血凝素，具有吸附脊椎動物紅細胞的能力，這一現象稱為紅細胞吸附。常用來鑒定具有血凝素的黏病毒或副黏病毒的增殖3）.紅細胞凝集檢測含血凝素病毒的方法4）干擾現象5）空斑形成試驗。

23：病毒成份的檢測（抗原、核酸檢測）答：1.病毒抗原的檢測2.病毒核酸的檢測

24：真菌的形態結構（單細胞和多細胞真菌）。

灰黃霉素、制霉菌素B、二性霉素B、氟康唑和酮康唑；對抗生素不敏感。

28：抗菌藥物的種類與作用機制。答：殺菌藥和抑菌藥。機制：①抑制細菌細胞壁的合成②抑制細菌

細胞膜功③抑制細菌蛋白質合成④抑制細菌核酸合成。29：細菌耐藥的機制。答：產生鈍化酶；細胞通透性的改變；靶位結構的改變；建立代謝旁路；代謝酶分子的改變

30：醫院感染的定義。答：由醫院的病原生物或其毒素導致的局部或全身感染性疾病。

31：細菌分離培養和鑒定、生化試驗、血清學試驗？答：細菌分離培養和鑒定：原則上應對所有送檢標本做分離培養，以便獲得單個菌落后進行純培養，從而對細菌做進一步的生物學、免疫學、致病性或細菌的藥物敏感性等方面的檢查，最終獲得確切的報告。生化試驗：得到細菌的純培養物后，用糖發酵試驗，吲哚試驗，硝酸鹽還原實驗等對細菌的酶系統和其代謝產物的檢查，是鑒別細菌的重要方法之一。血清學實驗：利用含已知的特異性抗體的免疫血清，對細菌進行群和型的鑒別。

微生物種類名稱★生物學性狀★致病物質、致病機理及所致疾病

破傷風梭菌：菌體細長，芽胞正圓比菌體粗，位于菌體頂端菌體鼓槌狀★不發酵糖類，不分解蛋白質。條件：局部傷口需形成厭氧微環境，傷口窄而深，有泥土或異物污染，大面積創傷，壞死組織多，局部組織缺血，同時有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染的傷口。防治原則：特異性預防：注射破傷風類毒素主動免疫；迅速對傷口清創擴創，防止形成厭氧微環境；緊急預防：TAT（精制破傷風抗毒素）；治療： 早期足量使用TAT，抗生素。產氣莢膜梭菌：G+粗大桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，直徑小于菌體形成明顯莢膜★血平板：雙層溶血環，代謝十分活躍，牛奶培養基：“洶涌發酵”現象。增加血管通透性，組織壞死，氣性壞疽，食物中毒，壞死性腸炎。

肉毒梭菌：G+粗短桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，菌體呈網球拍狀，嚴格厭氧，分型多，生化反應復雜★肉毒毒素，抑制乙酰膽堿釋放，引起運動神經末梢失調→肌肉麻痹；食物中毒，嬰兒肉毒中毒。

支原體：菌落油煎蛋型，高度多形態型，細胞膜含高度固醇，無細胞壁，對青霉素有抵抗作用★支原體肺炎，病變為間質性肺炎，可合并支氣管肺炎。稱為原發性非典型性肺炎。不規則發熱，刺激性咳嗽，頭痛。嬰幼兒病情嚴重，發病急，病程長，以呼吸困難為主。有些合并其他系統病變，如循環系統等。飛沫傳播。立克次體：是一類體積微小，絕大多數為自身代謝不完善，嚴格細胞內寄生的原核細胞型微生物★流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、恙蟲病、Q熱

衣原體：嚴格細胞內寄生，有獨特發育周期，能通過細菌濾器，原核細胞型微生物★ 沙眼:感染眼結膜上皮細胞→增殖，包涵體→局部炎癥→早期流淚、有粘液膿性分泌物、結膜充血及濾泡增生→后期結膜瘢痕、眼瞼內翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜損害→影響視力或致盲包涵體結膜炎、泌尿生殖道感染、沙眼衣原體肺炎、性病淋巴肉芽腫

螺旋體：是一類細長、柔軟、彎曲、運動活潑的原核細胞型微生物基本結構及生物學形狀與細菌相似★梅毒，人是唯一傳染源，致病物質為莢膜樣物質，透明質酸酶；后天通過性接觸傳播或者先天經過母體傳播。

第四篇：微生物總結

第一章、緒論

巴斯得的貢獻：

1、徹底否定了“自生說”

2、免疫學—預防接種

3、證實發酵是由微生物引起的3、巴斯德消毒法

柯赫貢獻：

1、證實炭疽病菌是炭疽病的病原菌

2、發現了肺結核病的病原菌

3、提出了證明某種微生物是否為某種疾病病原體的病原菌——柯赫原則

4、固體培養基分離純化微生物的技術

5、配制培養基

微生物的5大共性：

1、體積小、面積大

2、吸收多、轉化快

3生長旺、繁殖快

4、分布廣、種類多

5、適應性強、易變異 第二章、微生物的純培養和顯微技術

一、涂布平板法作用：用于純種分離、篩選菌落、得到單菌落，對一些細菌進行計數 五區劃線發作用：純化菌種、得到單菌落

搖瓶實驗作用：菌種篩選、發酵實驗、種子培養等 穿刺法的作用：保藏厭氧菌種、研究微生物的動力 之字劃線法的作用：保藏菌種、單菌落的獲取

二、斜面菌種保藏法：保藏期限3個月以內，沙土管保藏法：保藏期限1~10年主要適用于產孢子的，如芽孢桿菌、放線菌 石蠟油封藏法：保藏期限1~2年

真空冷凍干燥法：保藏期限5~10年，液氮超低溫病結法：保藏期限5~10年 第三章

一、細胞壁：根據細胞壁將原核生物分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩種。

1、革蘭氏陽性菌細胞壁的特點：厚度大（20~80nm）和化學組分簡單，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。

革蘭氏陽性菌的機械阻攔與保護作用有肽聚糖完成。磷壁酸：是結合在革蘭氏陽性菌細胞壁上的一種酸性多糖，主要成分為甘油磷酸或核糖醇磷酸。

磷壁酸為革蘭氏陽性菌所特有。對于革蘭氏陽性菌而言，抗原性由磷壁酸完成。磷壁酸的主要生理功能：1）、其磷酸分子上較多的負電荷可提高細胞周圍鎂離子的濃度進入細胞后就可以保證細胞膜上一些需鎂離子的合成提高活性 2）儲藏磷元素 3）、增強某些致病菌如A族鏈球菌對宿主細胞的黏連、避免被白細胞吞噬以及補抗體的作用 4）賦予革蘭氏陽性菌以特異的表面抗原 5）可作為噬菌體的特異性吸附受體

6）調節細胞自溶素的活力，借以防止細胞自溶而死亡

2、革蘭氏陰性菌：由肽聚糖和外膜組成，外膜中的脂多糖是革蘭氏陰性菌所特有的 外壁層可分為3層：外層為脂多糖層，中層為磷脂層，內層為脂蛋白 革蘭氏陰性菌外膜的作用：1）控制細胞透性

2）提高鎂離子濃度 3）決定細胞的抗原性

4）類脂A是類毒素的主要成分

脂多糖：是位于革蘭氏陰性菌細胞壁最外層的一層較厚的類脂多糖物質，由類脂A、核心多糖和O-特異側鏈

脂多糖的功能：1）其中類脂A是革蘭氏陰性菌致病物質——內毒素的物質基礎 2）因其負電荷較強，有吸附鎂離子、鈣離子等陽離子以提高其在細胞表面的濃度作用 3)由于LPS結構多變，決定了革蘭氏陰性菌細胞表面抗原決定族 4）是許多噬菌體在在細胞表面的吸附受體 5）具有控制某些物質進出細胞的部分選擇性屏障功能

3、革蘭氏染色機制：通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞膜內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物。革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚，肽聚糖網層次多和交聯致密，故與乙醇與丙酮作脫色處理時因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會溶出縫隙，因此能把結晶紫與碘的復合物牢牢留在壁內，使其任呈紫色。反之革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層的類脂含量高、肽聚糖層薄和交聯度差，遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘的復合物的溶出，因此，通過乙醇脫色后細胞退成無色。這時，再經沙黃等紅色染料進行復染，就使革蘭氏陰性菌呈現紅色，而革蘭氏陽性則保留紫色。

二、芽孢

芽孢：某些細胞在生長發育后期，在細胞內形成一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強的休眠體

芽孢的特點：1）芽孢內新陳代謝幾乎停止，處于休眠狀態，但保持潛在萌發力

2）芽孢不具生殖能力，僅只是一種休眠體 3）抗逆性最強的生命體之一，有抗熱、抗化學藥物、抗輻射和抗靜水壓能力 4）含水量低，壁厚而致密，通透性差，不易著色，折光性強

5）一個孢子萌發只產生一個營養狀態的細胞 芽孢的耐熱機制：芽孢的耐熱性在于芽孢衣對多價陽離子和水分的透性很差和皮層的離子強度很高，從而是皮層產生極高的滲透壓去奪取芽孢核心中的水分，其結果造成皮層的充分膨脹，而核心部分的細胞質卻變得高度失水，因此，導致核心具極強的耐熱性。第四章微生物的營養要求

一、營養物質：能夠滿足微生物機體生長、繁殖和完成各種生理條件所需的物質 營養：微生物獲得U和利用營養物質的過程

二、1、碳源：是在微生物生長過程中為微生物提供碳素來源的物質。為微生物提供碳元素與能量

2、氮源：為微生物提供氮元素來源，只有少數自養微生物能利用銨鹽、硝酸鹽同時作為氮源與能源（是構成細胞中核酸和蛋白質的重要元素）氮源的類型：無機氮、有機氮、氣體氮

3、無機鹽：作用：作為酶活性中心的組成部分、維持生物大分子和細胞結構的穩定性、調節并維持細胞的滲透壓、控制細胞的氧化還原電位和作為某些微生物生長的能源物質。

4、生長因子：通常是指那些微生物生長所必需的的且需量很少，但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機體生長需要的有機化合物

5、水：生理功能：1)起到溶劑與運輸介質的作用

2）參與細胞內一系列的化學反應

3）維持蛋白質、核酸等生物大分子穩定的天然構象

4）是良好的導熱體，調節細胞溫度 微生物的營養類型分類（P84表格）

三、1、培養基的配制原則：1）目標明確

2）營養協調

3）物理化學條件適宜

4）原料來源的選擇

2、C多有助于次生物質分泌，N多有助于個體生長發育

3、PH：細菌：7.0~8.0

酵母菌：4.0~6.0

放線菌：8.0~9.0

霉菌：4.0~5.8

4、維持培養基PH的方法：1）加緩沖劑一氫和二氫磷酸鹽的混合物

2）備用堿：CaCO3、CaHCO3 3）弱酸鹽：檸檬酸鹽、乳酸鹽

4）液氨或鹽酸

5、原料來源：1）經濟節約原則：以粗代精、以廢代好、以簡代繁

2）原料來源要廣泛

3）原料藥易處理、處理成本要低

4）原料處理后廢物、廢液、廢氣要少

6、選擇和配制培養基的方法四種：生態模擬、查閱文獻、精心設計、實驗比較

四、培養基的分類

1、按成分不同劃分：天然培養基：優點為取材方便，營養豐富，種了多樣，配制方便合成培養基：優點：組分精確，重復性好確定：較昂貴，一般用于研究

2、根據物料狀態劃分：固體培養基：一般用于進行微生物的分離、鑒定、活菌計數及菌種保藏半固體培養基：用于觀察微生物的運動特征、分類鑒定及噬菌體效價滴定液體培養基：用于大量培養微生物，研究生理代謝

3、按用途劃分：基礎培養基：用于培養野生型微生物和原養型微生物 加富培養基（營養培養基）：在基礎培養基中加入某些特殊營養物質制成的一類營養豐富的培養基作用一般為分離某種微生物而專門設計或培養營養要求嚴謹的異樣微生物 鑒別培養基：在培養可中加入某種特殊化學物質 選擇培養基：根據不同種類微生物的特殊營養需求或對某種化學物質的敏感性不同，在培養基中加入相應的特殊營養物質或化學物質，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需要微生物的生長，有利于所需微生物的生長 第五章、微生物代謝

微生物發酵過程的三個階段：脫氫（電子）、遞氫（或電子）和受氫（或電子）發酵：是指微生物細胞將有機物氧化釋放的電子直接交給底物本身未完全氧化的某些中間產物，同時釋放能量并產生各種不同的代謝產物

代謝：生命存在的基本特征，是微生物體內所進行的全部生化反應的總稱。主要由分解代謝和合成代謝兩個過程組成。分解代謝：是指將大分子物質降解成小分子物質，并在這個過程中產生能量（都是氧化反應）合成代謝：是指細胞利用簡單的小分子物質合成復雜大分子，在這個過程要消耗能量（都是還原反應）

代謝途徑都是有一系列連續的酶促反應構成的

P102~P105EMP HM ED途徑的特點功能以及途徑路線

根據氧化還原反應電子受體的不同可將發酵和呼吸分為有氧和無氧呼吸兩種 P108 TCA途徑圖

TCA循環特點：1）氧雖然不直接參與其中反應，但必需在有氧條件下運行

2）每個丙酮酸產生15個ATP 3）位于一切分解代謝與合成代謝的樞紐地位，可為生物合成提供各種碳價原料

TCA的生理意義：1）為細胞提供能量

2）各種能源物質徹底氧化的共同代謝途徑（對于微生物來說）3）物質轉化樞紐

無氧呼吸：電子受體不是氧氣而是外源無機物與部分簡單小分子有機物

發酵作用：沒有外源電子受體，底物具有的能量只釋放一小部分，合成少量ATP 三種磷酸化：底物水平磷酸化，高能磷酸化，氧化磷酸化

光合磷酸化的特點：1）光驅使下電子自菌綠素上逐出后經類似呼吸鏈又回到菌綠素

2）產還原力[H]和產ATP分別進行，還原力來自于H2O等無機物

3）不產生氧氣 合成代謝：微生物利用能量代謝所產生的能量、中間代謝產物以及從外界吸收的小分子合成復雜細胞物質的過程

P118~P119 CO2固定路線圖

藍細菌孤單的抗氧化保護機制：1）分化出特殊的還原性異形胞

2）非異形胞藍細菌固氮酶的保護將固氮與光合進行時間上分隔

微生物固氮反應6要素：1）ATP的供應

2)還原力[H]及傳遞氫載體

3）固氮酶

4）還原底物——氮氣

5）鎂離子

6）嚴格厭氧微環境

聯合固氮菌：指必需生活在植物根莖葉，動物腸道等處才能進行固氮的微生物，不形成類似根瘤的共生結構 微生物的代謝調節主要有兩種類型：一是酶活性的調節，即調節已經存在的酶分子的活性，是酶在化學水平的變化。另一類是酶合成的調節，即調節酶分子的合成量，是遺傳水平發生的變化 第六章

一、生長曲線延滯期

特點：1）生長速率常數為零，細胞數目不增加或增加很小

2）細胞形態變大或 增長許多桿菌可長成絲狀

3）合成代謝十分活躍，核糖體、酶類和ATP 的合成加速產生各種誘導酶

4）對外界不良條件如NaCl溶液，溫度和抗 生素等理化因素反應敏感

出現原因：1）微生物接種到一個新的環境，暫缺乏足夠的能量和必需的生長因子

2）“種子”老化即處于未對數期或種子未活化

3）接種時損傷

影響其長短的因素與實踐意義：1）接種齡：對數期種子延滯期短，延滯期或衰亡期的種子延滯期較長

2）接種量：接種量大，延滯期較短，接種量小，延滯期較長

3）培養基成分：培養基成分豐富的延滯期較短，培養基成分與種子培養基一致的延滯期較短

二、生長曲線指數期

特點：1）生長速率最快，細胞呈指數增長

2）生長速率恒定

3）代謝旺盛，細胞組分平衡發展

4）群體的生理特性一致

影響指數期的意義：1）菌種：不同菌種代時差異極大

2）營養成分：營養越豐富代時越短

3）營養物濃度：影響微生物的生長速率和生長總量

4）培養溫度：影響微生物的生長速率和生長總量

指數期的實踐意義：1）是代謝、生理研究的良好材料

2)是增殖噬菌體的最適宿主菌齡

4）革蘭氏染色是采用此期微生物

生長曲線穩定期特點：1）活細胞總數維持不變即新增殖的細胞數與衰亡的細胞數相等，菌體總數達到最高點

2）細胞生長速率為零

3）細胞生理上處于衰老，代謝活力鈍化，細胞成分合成緩慢，革蘭氏染色發生變化

三、生長曲線衰亡期

特點：細胞以指數速率死亡，有時細胞速率的降低是由于抗性細胞的積累，細胞變形退化，有的發生自溶，革蘭氏染色發生變化

影響衰亡期的因素及實踐意義：1）與菌種的遺傳特性有關：有些細菌的培養經歷所有的各個生長時期，幾天以后死亡，有細菌培養基個月乃至幾年以后任然有一些貨細胞

2）與是否產芽孢有關：產芽孢的細菌更易幸存下來

3）與營養物質和有毒物質有關：補充營養和能源，以及中和環境毒性，可以減緩死亡細胞的死亡速率，延長細菌培養物的存貨時間

四、分批培養：是指將微生物置于一定容積的的培養基中，經過生長培養，最后一次收獲培養方式 連續培養：在一個恒定容積的的流動系統中培養微生物，一方面以一定速率加入新的培養基，另一方面又以相同的速率流出培養物（菌體和代謝產物）

連續發酵的優點：1）高效

2）產品質量較穩定

3）節約了大量動力、人力、水和蒸汽，且使水、汽、電的負荷均衡合理

連續發酵的缺點：1）菌種易退化

2）易污染雜菌 3）營養物質的利用率一般 同步生長：就是指在培養物中所有微生物細胞都同一生長階段，并都能同時分裂的生長方式 同步培養法包括誘導法與選擇法

誘導法：是采用物理、化學一男子使微生物生長到某一階段而停下來，使所有細菌都達到這個階段時再使其生長 恒濁器：根據培養器內微生物的生長密度并借光電控制系統來控制培養液流速，以取得菌體密度高，生長速度恒定的微生物細胞的連續培養

恒化器：與恒濁器相反，是一種設法使培養液流速保持不變 最高生長速率條件下進行生長繁殖的一種連續培養裝置 裝置

控制對象

培養基

培養基流速

生長速率

產物

應用范圍

恒濁器

菌體密度(內控制)

無限制生長因子

不恒定

最高速率

大量菌體或與菌體平行的代謝產物

生產為主

恒化器

培養基流速（外控制）

有限制生長因子

恒定

低于最高速率

不同生長速率的菌體、并使微生物始終在低于其

實驗室為主

五、防腐：是在某些化學物質或物理因子作用下防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物腐敗或防止其他物質霉變 消毒：利用某種殺死或滅活物質或物體中所有微生物的一種措施，它可以起到防止感染或傳播的作用

滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內的所有微生物的一種措施 第七章

1、病毒的特點:1)形態及其微小，一般能通過細菌濾器必須自電鏡下才能觀察

2）沒有細胞構造，主要成分僅為核酸與蛋白質

3）每一種病毒致含有一種核酸

DNA和RNA 4）依靠自身的核酸進行復制，一病毒的核酸和蛋白質等原件實現裝配，實現繁殖

5）嚴格細胞內寄生，缺乏完整的酶和產能系統，只能利用宿主細胞的現成的代謝系統合成病毒自身的核酸和蛋白質

6）在離體條件下，能以無生命力的大分子狀態存在，并可長期保持器侵染力

7）對一般抗生素不敏感，但對干擾素敏感

8）有些病毒的基因可以整合到宿主的基因中去

2、病毒與活細胞的區別：1）結構簡單，沒有細胞結構

2）幾乎所有的毒粒中只有DNA或RNA一種類型的核酸

3）在細胞外不能增殖

3、得到一步生長曲線的實驗：二院培養系統：1）低濃度病毒宿主細胞(給幾分鐘時間侵染)2）高倍稀釋病毒與細胞的培養物

3）保濕培養

4）不同時間取樣，涂布平板，得到效價

5）以時間為橫坐標，病毒濃度為縱坐標繪圖

4、烈性噬菌體：感染宿主后增殖裂解宿主 溶原性噬菌體（溫和性細菌）：感染后大多數可整合到宿主基因中少數以染色體外獨立存在

5、病毒分為真病毒和亞病毒，亞病毒又分為類病毒、衛星病毒、衛星RNA、朊病毒 類病毒：是一種只包含RNA的病毒，只在植物中出現，分質量極小，不能編碼蛋白質 衛星病毒：寄生于與之無關的輔助病毒的基因產物的病毒 衛星RNA：是指必需依賴一些輔助病毒進行復制的小分子單鏈RNA，他們被包藏在輔助病毒的殼體中

朊病毒：是一類能引起哺乳動物亞急性海綿樣腦病的病原因子 第八章

P204頁Griffith轉化實驗等3個實驗

基因組：是指位于細菌或細胞中的所有基因 大腸桿菌基因組的特點：1）遺傳信息的連續性

2）功能相關的結構基因組成操縱子結構

3）結構基因的單拷貝及rRNA基因的多拷貝

4）基因組重復序列少而短

質粒：是一種獨立于染色體外，能進行自主復制的細胞質遺傳因子，主要存在于各種微生物中

轉座子：是位于染色體或質粒上的一種能改變自身位置的DNA序列，廣泛分布于原核和真核細胞中

質粒的主要類型：致育因子、抗性因子、Col質粒、毒性質粒、代謝質粒、隱秘質粒

致育因子：又稱F質粒，其大小約100kb，這是最早發現的一種與大腸桿菌的有性生殖現象（結合作用）有關的質粒

抗性因子：是另一類普遍而重要的質粒，主要包括抗藥性和抗重金屬兩大類，簡稱R質粒 Col質粒：該質粒含有編碼大腸菌素的基因，大腸菌素是一種細菌蛋白，只殺死近緣且不含Col質粒的菌株，而宿主不受其產生的細菌素的影響

毒性質粒：致病菌中攜帶的能引起致病性的質粒，這些質粒具有編碼毒素的基因 代謝質粒：攜帶有能降解某些基質的酶的基因的質粒

隱秘質粒：不顯示任何表型效應，它們的存在只有通過物理方法檢測出來 原核生物中對的轉座因子有3種類型：插入順序（IS）、轉座子（Tn）、病毒（Mu）轉座的遺傳學效應：插入突變、產生染色體畸變、基因的移動和重排

基因突變：一個基因內部遺傳結構或DNA序列的任何改變包括一對或幾對堿基的缺失、插入或置換，而導致的遺傳變化

堿基變化對遺傳信息改變的四種類型：同義突變，錯義突變，無義突變，移碼突變 同義突變：是指某個堿基的變化沒有改變產物氨基酸序列的密碼子變化

錯義突變：是指堿基序列的改變引起了產物氨基酸的改變（可能為致死突變）無義突變：是指某個堿基的改變，使代表某種氨基酸的密碼子變為蛋白質的合成的終止密碼子，蛋白質的合成提前終止，產生短截的蛋白質

移碼突變：由于DNA序列中發生1~2個核苷酸的缺失或插入，使翻譯的閱讀框發生改變，從而導致改變位置以后的氨基酸序列的完全變化（一般為致死突變）

表型變化的突變型：營養缺陷型，抗藥性突變型，條件致死突變型，形態突變型 營養缺陷型：缺乏合成其生存所必需的營養物的突變型，只有從周圍環境或培養基中獲得這些營養或前體物才能生長 影印平板P218 抗藥性突變型：是由于基因突變使菌株對某種或某幾種藥物，特別是抗生素產生抗性的一種突變型

條件致死突變型：是指在某一條件下具有致死效應，而在另一條件下沒有致死效應的突變型 形態突變型：是指造成形態改變的突變型（包括菌落形態、顏色一件噬菌斑形態）

自發突變的緣由：1）NDA復制過程產生的錯誤

2）堿基互變異構體的相互轉變

3）轉座子的隨機插入基因

自發突變的特性：1）非對應性

2）稀有性

3）規律性

4）獨立性

5）遺傳和回復

6）可誘變性

誘發突變：堿基類似物、插入染料、直接與DNA其化學反應的誘變劑、輻射和熱、生物誘變因子

DNA損傷修復：光復活作用、切除修復、重組修復、SOS修復 光復活：由phr基因編碼的光解酶進行

切除修復：又稱暗修復，該修復系統除了堿基錯誤配對和單核苷酸插入不能修復外，幾乎其他DNA損傷均可修復，是細胞內主要修復系統

重組修復：是一種越過損傷而進行的修復，這種修復不將損傷堿基除去

SOS修復：是DNA分子受到較大范圍的重大損傷時誘導產生的一種應急反應 P226~227 高頻重組菌等

轉導：是由病毒介導的細胞間進行遺傳交換的一種方式

供體DNA進入受體的命運：1）發生穩定的轉導子

2）流產轉導：即不被降解，又不被整合，也不被復制

3）外源DNA被降解，轉導失敗

遺傳轉化：是指同源或異源的游離DNA分子被自然或人工感受態細胞攝取，并得到表達的水平方向的基因轉移過程

4個影響供體DNA與受體細胞間的最初相互作用：1）轉化片段的大小

2）形態：雙鏈DNA 3）濃度：在在臨界值出現之前成正比

4）生理狀態：感受器——剛停止DNA合成 微生物育種：誘變育種、代謝育種、體內基因組育種 代謝育種：改變代謝途徑、擴展代謝途徑、構建新的代謝途徑 體內基因組育種：原生質體融合，雜交育種

融合子的判別：1）親本遺傳標記的互補的2）親本滅活后性狀的恢復

3）具有雙親本的熒光標記 第九章

順式作用元件：位于基因的旁側，可以調控影響基因表達的核酸序列。其本身并不編碼蛋白質

反式作用因子：通常為蛋白質或RNA，其特征是可以合成并擴散到目標場所發揮作用 正調控：控制因子通過與啟動子原件結合來激活基因的表達 負調控：抑制物與操縱基因結合起來阻止基因表達 P248 操縱子的結構

P249圖

P250 圖

啟動子：是RNA聚合酶和CAP的結合位點，控制著轉錄的起始，一個啟動子可以啟動多個基因的表達

操縱基因：DNA上的一個結合位點，阻抑物能與之結合抑制相鄰啟動子的起始轉錄，操縱基因不表達任何東西 終止子：控制轉錄結束

轉錄因子：轉錄起始過程中RNA聚合酶所需要的輔助因子

轉錄水平的調控:1）DNA的結構

2）RNA聚合酶的功能

3）蛋白質因子及其他小分子配基的相互作用

第五篇：微生物檢驗實驗室基本要求知識點

病毒是一類體積微小、結構簡單、具有嚴格的寄生于活細胞的微小生物，它們具有下列幾種基本特征：

1、病毒的基本結構是由核酸（基因組）與蛋白質組成，由DNA或RNA組成核心，外有一蛋白外殼（核殼），有些病毒在核殼外面另有一層脂蛋白組成的包膜包圍著。

2、病毒只在活細胞中增殖，因為病毒缺乏完整細胞器等必要裝置，所以必須依賴宿主細胞提供高分子合成裝置和能量。

3、病毒非常微小，無細胞結構，絕大多數不能用光學顯微鏡檢查，而必須用電子顯微鏡才能察見。核酸化學：

DNA是脫氧核糖核酸的英文縮寫。RNA與DNA差別在核糖2'位帶有一個羥基。DNA ①DNA起儲存遺傳信息作用，并以核苷酸排列順序形式儲存遺傳信息。②由4種核苷酸組成DNA分子，由堿基互補維持DNA雙螺旋結構。

③在動植物、細菌、真菌中都含有DNA，但在病毒中（非細胞型微生物）不一定含DNA。④DNA為長絲狀分子互相糾纏，其溶液十分粘稠。

⑤它對紫外線有最強的吸收，通常用260nm波長測DNA溶液濃度，它在近中性環境中帶負電核，DNA變性后OD值會升高。

⑥因DNA 不溶于乙醇，常用二倍量沉淀DNA ⑦在變性溫度時，它的粘性突然降低。

⑧ 淬火是為了保持DNA單鏈狀態。DNA變性后溶液慢慢冷卻，DNA會自動恢復雙螺旋結構。說法錯誤的：

（1）DNA和RNA的化學結構堿基G與C通過2對氫鍵配對構成DNA分子說法錯誤的。（2）與DNA分子相比，RNA分子難水解的看法也不對。（3）許多質粒可在宿主之間進行轉移的說法是不對的。形狀：

（1）TRNA二級結構呈三草形。

（2）在細胞內RNA分子中rRNA占比例最大。（3）DNA二級結構中呈左手雙螺旋的是Z構象。

DNA結構、性質：在真菌中網崎片段一般為100～200核苷酸。噬菌體核酸最常見的是雙鏈線狀DNA。反式作用因子具有的DNA識別或DNA結合域，主要有 螺旋/轉折/螺旋（T/H/T）,鋅指結構，堿性-亮氨酸拉鏈（bZIP），堿性-螺旋/環/螺旋（bH/L/H）。

真核生物中的瑞粒酶是由RNA和蛋白質構成的。一般真核生物染色體上有5種主要的組蛋白，其中親和力最強的兩種是H3 H4。DNA的復制和修復：

（1）細胞每分裂一次，染色體DNA就合成一次，新DNA是按原DNA分子合成。

（2）DNA分子拆（ca）開成兩條鏈，依每一條單鏈合成一條新單鏈，成為半保留復制。（3）在合成DNA時限制性核酸內切酶不是合成DNA的必要條件。

（4）DNA多聚酶只能結合在一長段DNA單鏈的一小段局部雙鏈結構上，才能順利開始DNA合成。（5）在DNA合成中單核苷酸分子必須順序以共價鏈連接在已形成核酸鏈3，末端的羥基上。

（6）在合成發生錯誤時，DNA多聚酶會切除錯誤核苷酸，在那個位置上重新加一個正確核苷酸。（7）在人工合成DNA時，只加一種或兩種三磷酸單核苷酸，那么合成就會停止在缺失的核苷酸位置上。在大腸菌DNA損傷修復時填補缺口最重要的酶是DNA聚合酶Ⅰ。DNA三個終止密碼子分別是UAA、UAG、UGA。

在大腸菌中DNA復制最主要的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅲ。該酶的核心聚合酶中，具有3，3?外切酶活性。DNA修復過程中尿嘧啶 糖基酶系統不包括Sl核酸酶。

在逆轉錄酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具備的。在逆轉錄酶的最終產物雙鏈DNA的長度較正鏈RNA稍長。轉錄：

在生物體內，RNA合成過程稱為轉錄。它（RNA）是按照儲存在DNA上遺傳信息合成。合成RNA時DNA雙鏈也要解旋，解旋部位稱啟動子。

去掉RNA分子5，末端的磷酸，不起合成酶功能的作用。在刺激點突變，改變某些基因功能與DNA向RNA轉移無直接關系（？）

（1）大腸菌的RNA聚合酶由5個亞基，其笱腔釁舳幼饔謾￡（2）利福平作用該酶（聚合酶）庋腔稀￡

（3）RNA聚合酶Ⅰ主要是轉錄rRNA（構成核糖體骨架的是rRNA）。Prt-mRNA內含子的5，-末端一般是GU。

（4）RNA聚合酶Ⅱ主要是轉錄hnRNA。在真核基因啟動子近側序列元件中，對轉錄起點定位起關鍵作用的是TATA盒。

（5）放線菌素D能抑制DNA轉錄。編碼核糖體RNA的基因是一種中度重復序列的DNA序列。翻譯：

在合成各種不同RNA中：

（1）tRNA具有搬運氨基酸功能。構成核糖體骨架的是rRNA。mRNA直接決定蛋白質的結構。

（2）合成蛋白質需4種核苷酸，排列組成遺傳信息，然后轉換成20種氨基酸，組成遺傳信息稱為翻譯。（3）3個核苷酸排列順序代表一種氨基酸密碼，表示蛋白質合成開始的密碼有一種。（4）在細菌里，依靠rRNA和mRNA之間一段互補序列能發現蛋白質合成開始的位置。

（5）在核糖體上，有兩個位置上暴露出mRNA（直接決定蛋白質的結構）分子相鄰的兩個密碼子，當蛋白質合成進行到沒有攜帶任何一種氨基酸tRNA（具有搬運功能）與其對應，這說明合成蛋白質結束，并已開始同一種蛋白質 分子的合成。

（6）合成蛋白質后，決定其空間結構的是蛋白質的氨基酸排列順序確定后，就能自動折疊卷曲成一定的空間形狀。

（7）在原核生物核糖體是由16 SrRNA、23 SrRNA、5 SrRNA 組成，在真核生物核糖體的五種主要的組蛋白中，H1在進化中最不保守。基因表達調空：

（1）氯霉素可與核糖體50S亞基結合并抑制蛋白質合成。

（2）在基因5，上游基因內或其3，下游序列中存在，能提高同一條DNA鏈上靶基因轉錄速率的遺傳控制元件是增強子。

（3）乳糖操縱（zong）子中結構基因是LacA、LacY、LacZ。遺傳重組： 轉座子的功能有

（1）促進染色體重排（2）促進基因重復（3）促進基因擴增（4）造成缺失突變

在大腸遺傳重組中，同源重組需RecA蛋白質。

一、核酸提取、純化、濃縮

1.用煮沸法從表達內切酶A的大腸菌小量制備質粒時不能省略酚-氯仿抽提。2.用煮沸法制備質粒所用溶菌酶液是用TrisCL配制的。3.用乙醇沉淀溶于SDS中RNA時，要避免用乙酸鉀。4.小量制備DNA時不被限制酶切開，應用酚-氯仿抽提。

5.用異丙醇沉淀核酸與用乙醇相比，最明顯優點是可減少溶液體積。

1、質粒DNA提取：在用堿裂解法少量提取質粒DNA時，在緩沖液（Ⅰ液）中不含SDS。多數質粒在自然狀態下是環狀鏈DNA。質粒DNA純化方法有： ①離子交換分析； ②聚乙二醇分級沉淀； ③二凝膠過濾層析；

④氯化銫（se）-溴化乙錠梯度平衡離心。

質粒具備有復制起點、抗生素抗性基因、有多種限制酶的單一切點、有較高的拷貝數。

2、NA凝膠電泳：要使大于2Kb的DNA片段在凝膠電泳中分辨率達最大，其電壓不應超過5V/cm。在電泳中不同構象DNA泳動率通常是：超螺旋＞線性＞切口環狀。

二、PCR擴增技術：

PCR反應中變性、延伸溫度通常是：95℃、72℃。引物的Tm值估算每個A或T加2℃。

在PCR反應中每一種dNTP的濃度通常是200umol/L，在PCR反應中經n次循環后理論上，DNA鏈的擴增數目是2n倍。

在PCR反應中引物只與靶序列的相應部分結合的說法是錯誤的。

再此（PCR擴增技術）反應中礦物油不是必需的，用于擴增未知序列的PCR是反向PCR。不對稱PCR法專用于制備單鏈DNA的擴增。

在PCR反應DNA堿基錯配率較高，原因是TaqDNA聚合酶缺乏3'5，外切酶活性的亞基是逖腔￡

在體內染色DNA復制時必須有RNA引物。在哺（bu）乳動物細胞中負責合成線粒體DNA是DNA聚合酶r。RNA酶Tl可特異地作用于嘌呤核苷酸3，端磷酸并切割與相鄰核苷酸相連的磷酸二酯鍵。體內DNA復制與體外PCR不同的是引發酶參與。與體內DNA復制不相關酶是反轉錄酶。在細胞內DNA合成正常進行是RecA蛋白，而RecA蛋白不具有蛋白酶活性。在大腸菌DNA聚合酶Ⅰ klenow片段沒有5?5，外切酶活性。PCR反應中的引物是DNA。反應體系中Taq酶過多及引物過多都可引起非靶序列擴增。

三、寡核苷酸探針合成、放射標記、雜交 標記合成寡核苷酸時dNTP的濃度不應低于1umol/L。

探針是一段帶標記的單鏈DNA，雙鏈DNA，cDNA，單鏈RNA。

雜交液的成分與雜交溫度間的關系正確的是甲酰胺42℃，水68℃。標記探針的最有效簡單方法是體外轉錄法。

標記雙鏈DNA的3，端時，常用T4噬菌體DNA聚合酶，而不是大腸菌DNA聚合酶Ⅰklenow片段，主要是因為3'-5，外切酶活性高。

Western blotting所用探針一般是Ab。Southen blotting一般是用于DNA分子的雜交技術。在核酸分子雜交技術基礎之上又發展了一系列檢測DNA和RNA的技術，如Southen blotting、Western blotting、Dot blotting和菌落雜交。

大腸菌的DNA聚合酶Ⅰ用在切口平移法標記DNA。在20℃～25℃下探針與靶序列退火速率最大，比解鏈溫度低情況下進行雜交。

將外源性質粒導入細菌中稱為轉化。外源性重組質粒與感受態細菌混在一起，一般在42℃作短暫的熱刺激。cDNA基因克隆以mRNA為模板。

四、基因克隆載體：

柯(ke)斯質粒載體具有噬菌體特性，能通過溶菌周期，形成子代噬菌體顆粒的說法是不對的。

五、DNA序列測定：

與Sanger雙脫氧鏈終止DNA測序法相比，Maxam-Gilbert法所測序列為原DNA分子，這是其特點。

六、克隆子DNA定點誘變：

Mu噬菌體DNA轉座成分不含末端反向重復序列。

改變蛋白質密碼序列的個別密碼子最好采用寡核苷酸介導誘變。

七、研究DNA與蛋白質的方法：（1）凝膠阻滯試驗（2）DhAsel足跡試驗（3）甲基化干擾試驗

（4）體內足跡試驗都是研究DNA與蛋白質作用的方法。

1、Ag-Ab反應結合力： 有4種力致使Ag-Ab結合，其中一以靜電引力為最重要。

2、Ag-Ab反應特點（1）特異性（2）階段性（兩個階段）（3）可逆性（4）比例性（Ag與Ab結合比例以3：2為最佳）（Ag=3，Ab=2）。

3、影響Ag-Ab反應的因素：（1）溫度（多數情況下反應適宜溫度為37℃）、（2）PH值（一般反應適宜PH值6～8）、（3）電解質（多用0.85%鹽水）。

當溫度升高反應加快，電解質濃度加大時反應敏感性升高，無電解質時Ag與Ab基本上不反應。

參加反應的Ag也有影響，Ag濃度超出適宜量使反應的敏感性下降，過量的Ab會使反應出現前滯現象。（4）血清交叉反應：出現血清交叉反應是說明有共同抗原存在。

1、血清凝集反應：采用顆粒狀Ag（死菌或活菌，多用死菌）進行的血清反應。

①玻片凝集是其中一種，有許多優點，最重要的優點是報告結果快，多用于快速診斷。

②試管凝集是最多用的一種方法，從溫箱中放24小時后取出反應管在室溫放2個少時再判定為宜，判定凝集滴度以凝集程度為（+ +）而定。

③協同凝集用SPA（葡萄球菌A蛋白）與IgG的Fc結合后進行的凝集反應。SPA與IgG結合具有種屬性，（容）易與兔血清中的IgG結合。用此試驗主要查Ag。、抗球蛋白試驗：是用檢查不完全Ab（半Ab），在試驗中所用第二Ab是雙價抗體。基本方法是以試管凝集試驗為基礎。

3、沉淀反應：其中包括①環狀反應、②絮狀反應、③瓊脂擴散反應等。沉淀反應是用可溶性Ag。Ag-Ab沉淀反應用的電泳是瓊脂電泳和對流電泳。環狀沉淀反應的沉淀環是在Ag與Ab兩液面交界處形成，判定時間是3～7分鐘（環狀沉淀反應）。用瓊脂擴散反應做Ag分析時，其反應溫度在4℃～6℃下進行為宜，一般是72小時后判定結果。（瓊脂擴散反應）

用其進行診斷時多在18℃～22℃下進行，瓊脂濃度多在1%～2%。

4、電泳： 用電泳做診斷多為瓊脂電泳和對流電泳。這類電泳反應本質屬于Ag-Ab沉淀反應。

5、CFT（補體）： 參與CFT有兩個反應系統 5種成分參加。其中補體（CFT用的補體是豚tun鼠血清中補體）是此反應的紐帶。

它（CFT）與兩個系統的結合是非特異性的。在CFT中用豚鼠血清中補體，常用滅活溫度是56℃ 30分鐘，不同動物的血清補體滅活溫度是不同的。CFT又分為①溫CFT、②冷CFT。

溫CFT：是指反應溫度37℃ 30分鐘，主要是查IgG類Ab。反應管出現不溶血現象是陽性反應。補體是多為1：15-1：20稀釋度。

冷CFT：是在4℃～6℃（瓊脂擴散反應做Ag分析時溫度也是4℃～6℃）進行此反應多用于查Ag。此外，補體（CFT）還參與溶血反應和溶菌反應。

Ag是指能夠刺激機體產生免疫應答（產生Ab、細胞免疫等）物質。

完全Ag是指既有免疫原性又有反應原性的物質，而只有反應原性無免疫原性的物質稱為半抗原。決定Ag特異性的最小化學亞單位稱為決定基（蔟cu），又稱為表位。依其與胸腺的關系又分Ti抗原和TD抗原。

Ti抗原刺激機體產生IgM抗體，TD抗原產生需有T細胞輔助。

蛋白質是抗原性最強的物質，其次是多糖、核酸、類脂是抗原性最弱物質。人類血型抗原有A和B抗原，它們（A抗原和B抗原）刺激機體產生抗A和抗B抗體。人類血型抗原是同種異型抗原（同一種屬不同個體間的遺傳標記不同）。器官移植所產生的排異反應。也是因同種異型抗原所致。

佐劑在免疫中常常采用，它主要的機制是增強機體對Ag的免疫應答。

Ag物質刺激機體產生Ab，Ab本質是Ig（免疫球蛋白）。Ig（免疫球蛋白）分為五大類：IgG、IgM、IgA、IgE、IgD。

Ig（免疫球蛋白）的基本結構是：四條肽鏈（2條輕鏈-L鏈，2條重鏈-H鏈），由雙流鍵連接。L鏈（輕鏈）：可分為 可變部分（V）和恒定部分（C），即 V（可變部分）L（輕鏈）+ C（恒定部分）L（輕鏈）即VL + CL。

H鏈（重鏈）：也分可變部分（V）和恒定部分（C），即VH + CH，但CH（恒定部分、重鏈）部分又分為CH1、CH2、CH3。

IgM和IgE還有CH4部分。CH1與CH2區 之間為絞鏈區。

如果用木瓜酶水解后，將IgG水解2Fab和Fc。Fab是Ig與Ag結合部位，Fc是可結晶部分。用胃蛋白酶水解IgG，可分為F(ab,)2和Fc部分，F(ab,)2是2個Fab連在一起的部分。

Ig（免疫球蛋白）的分類是根據H鏈（重鏈）結構特點，主要依Fc部分（CH）。Ig同種型是指H鏈所具有的特性。

Ig（免疫球蛋白）分型是依據L鏈（輕鏈）結構特點，可分為旰碗型。Ig的Fc段部分可與某些細胞的Fc受體結合，如巨噬細胞。

F(ab,)2部分是與Ag結合部，VH（重鏈）+ VL（V可變部分L輕鏈）是F(ab,)2中的高變區，直接與Ag能結合的部位。

人類5種Ig（免疫球蛋白）各具特色：IgG-血清中含量最高；IgM-分子量最大；

IgG：①在血清中含量最高；②它還是唯一能通過人類胎盤的；③IgG是抗感染的主要Ig(IgG抗病毒抗體)；④結合補體；

⑤起到條理作用；⑥結合SPA（葡萄球菌A蛋白）；⑦起到沉淀反應；⑧中和反應；⑨溶解細菌。(10)H抗原主要刺激機體產生IgG類抗體；(11)肥達試驗IgG類H抗體出現較晚；(12)IgG是人血清中的主要抗體(13)IgG是固定補體

IgM:①分子量最大；②早期多為IgM（IgM早期診斷）；③IgM是種屬發育過程中最原始的Ig（早期出現抗體的是IgM）；

④IgM有很高的結合價和凝集能力。⑤IgM是動物機體在受到初次抗原刺激后最早產生的一種抗體球蛋白。

⑥抗原刺激機體產生IgM類抗體。⑦肥達試驗IgM類()抗體出現較早。⑧IgM是感染早期出現的抗體 IgA：①有分泌型存在；②局部Ab；③IgA抗蛋白酶的水解作用。④IgA對大腸桿菌有一定抑制作用；⑤其含量僅次于IgG。

⑥呼吸系統的非特異性防御機制機械物理性防御富含IgA IgE：①與肥大細胞膜上Fc受體結合（結合肥大細胞）；②是血清中含量最少的一類Ig； IgD：①在血清中含量很少；②因其性質很不穩定、半衰期很短，所以對其了解尚少。

補體是存在于人和動物血清中，即可參加特異免疫又可參與非特異免疫 作用的大分子物質。它有9種成分，11種蛋白組成。

9種成分是：C1（q.r.s）、C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9。它們對溫度很敏感，易破壞。補體系統包括補體及D、P、B等因子組成，約有20種成分。

補體的激活有兩個途徑：（1）傳統途徑（第一途徑）和旁路（第二途徑）。

傳統途徑（第一途徑）：可被Ag-Ab免疫復合物（IC）活化。活化順序是：C1、C4、C2、C3、C5 C6 C7 C8 C9。

1、免疫組織器官：

（1）中樞：骨髓、胸腺、法氏囊（禽類）；

（2）周圍器官：脾臟、淋巴結、皮膚免疫系統、黏膜免疫系統。

2、免疫細胞：干細胞系、淋巴細胞系（TH、TC、TS、TDH、BC、漿細胞等）、單核細胞、巨噬細胞、肥大細胞、NK細胞等。

單核細胞及巨噬細胞產生IL-l。

3、免疫分子：TCR、BCR、CD、MHC、Ig、補體、細胞因子（IL-l、IL-2）

1、T細胞：是由一群細胞組成。T細胞定位于淋巴結副皮質區。可分幾群，其中TH細胞是很重要的免疫細胞，CD+4可被PHA、ConA、PWM、花生凝集素刺激活化進行有絲分裂，幫助產生Ab，司管細胞免疫。TS細胞是抑制細胞，CD+8參加免疫調節。TC是細胞毒細胞。TH是成熟需要胸腺加工處理。

2、B細胞：B淋巴細胞主管體液免疫細胞。表面有抗原抗體受體（SmIg）。B細胞成熟骨髓中（相當于禽類法氏囊）。

未成熟的B細胞最初可查到Ig的u鏈，活化B細胞可衍（yan）變成漿細胞，漿細胞能產生Ab和分泌Ab。PWM是可以刺激B細胞有絲分裂。人類外周血中T細胞和B細胞之比為2：1。

3、單核類細胞：無Ag受體，但能處理Ag，加工Ag，并向T細胞遞呈Ag。國際公認的過敏反應（變態反應）是四個型：

Ⅰ型（速發型）、Ⅱ型（溶細胞型）、Ⅲ型（免疫復合物或血管炎型）Ⅳ型（遲發型）。

Ⅰ型（速發型）：是由IgE抗體所致，IgE與肥大細胞的IgE的Fc受體結合產生一系列變化，出現Ⅰ型過敏。

如青霉素過敏（皮內注射過敏原），患有慢性寄生蟲感染患者。IgE抗體升高顯著。

Ⅱ型（溶細胞型）、Ⅲ型（免疫復合物或血管炎型）：過敏系由IgM、IgG抗體及補體等參與介導。Ⅳ型（遲發型）：過敏反應是由T細胞中TDTH細胞釋放淋巴因子所致。如結核菌素過敏試驗（皮內注射過敏原）

使毒素的毒力減弱，病理作用減弱，但免疫原性仍保留。

Ag是指能夠刺激機體產生免疫應答（產生Ab、細胞免疫等）物質。

完全Ag是指既有免疫原性又有反應原性的物質，而只有反應原性無免疫原性的物質稱為半抗原。決定Ag特異性的最小化學亞單位稱為決定基（蔟cu），又稱為表位。依其與胸腺的關系又分Ti抗原和TD抗原。

Ti抗原刺激機體產生IgM抗體，TD抗原產生需有T細胞輔助。

蛋白質是抗原性最強的物質，其次是多糖、核酸、類脂是抗原性最弱物質。人類血型抗原有A和B抗原，它們（A抗原和B抗原）刺激機體產生抗A和抗B抗體。人類血型抗原是同種異型抗原（同一種屬不同個體間的遺傳標記不同）。器官移植所產生的排異反應。也是因同種異型抗原所致。

佐劑在免疫中常常采用，它主要的機制是增強機體對Ag的免疫應答。

Ag物質刺激機體產生Ab，Ab本質是Ig（免疫球蛋白）。Ig（免疫球蛋白）分為五大類：IgG、IgM、IgA、IgE、IgD。

Ig（免疫球蛋白）的基本結構是：四條肽鏈（2條輕鏈-L鏈，2條重鏈-H鏈），由雙流鍵連接。L鏈（輕鏈）：可分為 可變部分（V）和恒定部分（C），即 V（可變部分）L（輕鏈）+ C（恒定部分）L（輕鏈）即VL + CL。

H鏈（重鏈）：也分可變部分（V）和恒定部分（C），即VH + CH，但CH（恒定部分、重鏈）部分又分為CH1、CH2、CH3。

IgM和IgE還有CH4部分。CH1與CH2區 之間為絞鏈區。

如果用木瓜酶水解后，將IgG水解2Fab和Fc。Fab是Ig與Ag結合部位，Fc是可結晶部分。用胃蛋白酶水解IgG，可分為F(ab,)2和Fc部分，F(ab,)2是2個Fab連在一起的部分。

Ig（免疫球蛋白）的分類是根據H鏈（重鏈）結構特點，主要依Fc部分（CH）。Ig同種型是指H鏈所具有的特性。

Ig（免疫球蛋白）分型是依據L鏈（輕鏈）結構特點，可分為旰碗型。Ig的Fc段部分可與某些細胞的Fc受體結合，如巨噬細胞。

F(ab,)2部分是與Ag結合部，VH（重鏈）+ VL（V可變部分L輕鏈）是F(ab,)2中的高變區，直接與Ag能結合的部位。

人類5種Ig（免疫球蛋白）各具特色：IgG-血清中含量最高；IgM-分子量最大；

IgG：①在血清中含量最高；②它還是唯一能通過人類胎盤的；③IgG是抗感染的主要Ig(IgG抗病毒抗體)；④結合補體；

⑤起到條理作用；⑥結合SPA（葡萄球菌A蛋白）；⑦起到沉淀反應；⑧中和反應；⑨溶解細菌。(10)H抗原主要刺激機體產生IgG類抗體；(11)肥達試驗IgG類H抗體出現較晚；(12)IgG是人血清中的主要抗體(13)IgG是固定補體

IgM:①分子量最大；②早期多為IgM（IgM早期診斷）；③IgM是種屬發育過程中最原始的Ig（早期出現抗體的是IgM）；

④IgM有很高的結合價和凝集能力。⑤IgM是動物機體在受到初次抗原刺激后最早產生的一種抗體球蛋白。

⑥抗原刺激機體產生IgM類抗體。⑦肥達試驗IgM類()抗體出現較早。⑧IgM是感染早期出現的抗體 IgA：①有分泌型存在；②局部Ab；③IgA抗蛋白酶的水解作用。④IgA對大腸桿菌有一定抑制作用；⑤其含量僅次于IgG。

⑥呼吸系統的非特異性防御機制機械物理性防御富含IgA IgE：①與肥大細胞膜上Fc受體結合（結合肥大細胞）；②是血清中含量最少的一類Ig； IgD：①在血清中含量很少；②因其性質很不穩定、半衰期很短，所以對其了解尚少。

補體是存在于人和動物血清中，即可參加特異免疫又可參與非特異免疫 作用的大分子物質。它有9種成分，11種蛋白組成。

9種成分是：C1（q.r.s）、C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9。它們對溫度很敏感，易破壞。補體系統包括補體及D、P、B等因子組成，約有20種成分。

補體的激活有兩個途徑：（1）傳統途徑（第一途徑）和旁路（第二途徑）。

傳統途徑（第一途徑）：可被Ag-Ab免疫復合物（IC）活化。活化順序是：C1、C4、C2、C3、C5 C6 C7 C8 C9。

1、T細胞：是由一群細胞組成。T細胞定位于淋巴結副皮質區。可分幾群，其中TH細胞是很重要的免疫細胞，CD+4可被PHA、ConA、PWM、花生凝集素刺激活化進行有絲分裂，幫助產生Ab，司管細胞免疫。TS細胞是抑制細胞，CD+8參加免疫調節。TC是細胞毒細胞。TH是成熟需要胸腺加工處理。

2、B細胞：B淋巴細胞主管體液免疫細胞。表面有抗原抗體受體（SmIg）。B細胞成熟骨髓中（相當于禽類法氏囊）。

未成熟的B細胞最初可查到Ig的u鏈，活化B細胞可衍（yan）變成漿細胞，漿細胞能產生Ab和分泌Ab。PWM是可以刺激B細胞有絲分裂。人類外周血中T細胞和B細胞之比為2：1。

3、單核類細胞：無Ag受體，但能處理Ag，加工Ag，并向T細胞遞呈Ag。國際公認的過敏反應（變態反應）是四個型：

Ⅰ型（速發型）、Ⅱ型（溶細胞型）、Ⅲ型（免疫復合物或血管炎型）Ⅳ型（遲發型）。

Ⅰ型（速發型）：是由IgE抗體所致，IgE與肥大細胞的IgE的Fc受體結合產生一系列變化，出現Ⅰ型過敏。

如青霉素過敏（皮內注射過敏原），患有慢性寄生蟲感染患者。IgE抗體升高顯著。

Ⅱ型（溶細胞型）、Ⅲ型（免疫復合物或血管炎型）：過敏系由IgM、IgG抗體及補體等參與介導。Ⅳ型（遲發型）：過敏反應是由T細胞中TDTH細胞釋放淋巴因子所致。如結核菌素過敏試驗（皮內注射過敏原）

使毒素的毒力減弱，病理作用減弱，但免疫原性仍保留。病毒屬于微生物界，其不同于其他微生物的特性如下：

1、病毒一般只含有一種核酸DNA或RNA，而其它微生物，包括細菌、支原體、衣原體、立克次體，則都同時含有兩種核酸。

2、病毒通過基因組復制和表達產生子代病毒的核酸和蛋白質，隨后裝配完整的病毒粒子。

3、病毒缺乏完整的酶系統，不具備其他生物“產能”所需的遺傳信息，因此必須利用宿主細胞的酶類和產能機構，并借助宿主細胞的生物合成機構復制其核酸以及合成由其核酸編碼的蛋白質，乃至直接利用細胞成分。

4、某些RNA病毒的RNA經反轉錄合成互補DNA（cDNA），與細胞基因組整合，并隨細胞DNA復制而增殖，即所謂的DNA前病毒。

5、病毒沒有細胞壁，也不進行蛋白質、糖和脂類的代謝活動，因此對于干擾微生物的這些代謝過程而影響微生物結構和功能的抗生素，具有明顯的抵抗力。

一個簡單的病毒粒子，實質上只是一團遺傳物質（DNA或RNA）和它外圍的一層蛋白外殼。這層蛋白外殼就是衣殼，衣殼和核酸一起總稱為核衣殼。病毒不含氨基酸，這是病毒與其他微生物，包括細菌、衣原體、立克次體等又一明顯區別。

病毒的分類系統采用 目、科、亞科、屬和種的等級制度。

屬名應是一個以“virus”結尾的單詞；亞科“virinae”； 科“viridae”；目“virales” 結尾的單詞。動物病毒“種”的名稱大多引用其所引起疾病的名稱，后加“病毒”，獸醫學上則常再加上宿主（動物的名稱）種類，也有的在病名前再加最初發現該病毒的地名。毒珠名稱至少應能反映該毒珠的分離地點和時間以及該毒珠的類別。根據其病毒核酸組成還可以將病毒分成DNA病毒和RNA病毒。RNA病毒可分為（1）正鏈RNA病毒；（2）負鏈RNA病毒，正鏈RNA病毒可以直接呈現mRNA的作用，同時又是合成互補鏈的模板； 一般情況下，正鏈RNA病毒的基因組RNA具有感染性。

負鏈RNA病毒不能直接呈現mRNA的作用，即不能直接指導合成互補鏈。

病毒缺乏自身增殖所需的完整酶系統，增殖時必須依靠宿主細胞合成核酸和蛋白質，甚至直接利用宿主細胞的某些成分，這就決定了病毒在細胞內專性寄生的特性。

病毒的增殖過程大致可以分為：（1）吸附與侵入、（2）脫殼、（3）病毒成分的合成及裝配、（4）釋放等4個主要階段。

病毒屬于微生物界，其不同于其他微生物的特性如下：

1、病毒一般只含有一種核酸DNA或RNA，而其它微生物，包括細菌、支原體、衣原體、立克次體，則都同時含有兩種核酸。

2、病毒通過基因組復制和表達產生子代病毒的核酸和蛋白質，隨后裝配完整的病毒粒子。

3、病毒缺乏完整的酶系統，不具備其他生物“產能”所需的遺傳信息，因此必須利用宿主細胞的酶類和產能機構，并借助宿主細胞的生物合成機構復制其核酸以及合成由其核酸編碼的蛋白質，乃至直接利用細胞成分。

4、某些RNA病毒的RNA經反轉錄合成互補DNA（cDNA），與細胞基因組整合，并隨細胞DNA復制而增殖，即所謂的DNA前病毒。

5、病毒沒有細胞壁，也不進行蛋白質、糖和脂類的代謝活動，因此對于干擾微生物的這些代謝過程而影響微生物結構和功能的抗生素，具有明顯的抵抗力。

一個簡單的病毒粒子，實質上只是一團遺傳物質（DNA或RNA）和它外圍的一層蛋白外殼。這層蛋白外殼就是衣殼，衣殼和核酸一起總稱為核衣殼。病毒不含氨基酸，這是病毒與其他微生物，包括細菌、衣原體、立克次體等又一明顯區別。

（1）實驗動物、（2）雞胚、（3）體外培養的器官、（4）細胞，這4種都可以作為人工增殖病毒的基本工具。

而大量病毒的，又是病毒學實驗研究以及制備疫苗和特異性診斷試劑的先決條件。

1、組織培養：病毒在細胞內的增殖及其對細胞的作用，可以根據細胞病變、細胞培養物內出現血凝素或其他病毒抗原、紅細胞吸附現象以及通過“指示病毒”的干擾等方法加以識別。組織培養用的玻璃器皿要用（硫酸、重鉻酸鉀）。

常用于組織培養的人工綜合營養液的主要成分有：氨基酸、糖類、無機鹽、維生素、輔助生長因子等。常用的人工綜合營養液為：MEM和RPM1640。

用人工綜合營養液配制細胞生長液時需要加入①適量血清和谷氨酰胺溶液，②還需要加入規定量的抗生素溶液防止細菌污染，③加入碳酸氫鈉溶液修正PH，④根據情況還可加入HEPES溶液可使生長液具有較強的PH緩沖能力。能使組織和成片細胞分散成單個細胞的化學制劑為胰蛋白酶和EDTA，EDTA使用液又可稱之為Versen溶液，其分散細胞的作用原理是EDTA可以結合鈣、鎂離子，使組織細胞分散。

動物血清中具有細胞生長所必須的各種營養因子，它能促進細胞的貼壁和生長，且有很強的酸堿緩沖能力。

細胞培養液在細胞培養過程中可分為（1）細胞生長液（2）細胞維持液兩種。細胞生長液：是使細胞發育增殖的液體，因此要求營養條件豐厚； 細胞維持液：用于延緩細胞代謝，從而延長細胞的存活時間，以利于實驗的進行。這兩種液體成分的主要區別是血清含量不同。

細胞生長適宜的PH范圍是 PH 7.2～7.6。細胞培養技術全過程的關鍵是防止污染。

2、細胞株的保存是組織培養中一個十分重要的工作，二甲基亞砜是細胞低溫保存的良好的保護劑，含10%二甲基亞砜的血清可以作為懸浮細胞的液體在液氮中保存細胞。

3、病毒學上常用的細胞類型可分為（1）原代細胞、（2）二倍體細胞、（3）傳代細胞，三大類，原代細胞培養和傳代細胞培養的根本區別在于細胞是否能在體外無限傳代。

4、細胞的純化：細胞的純化可以用細胞克隆技術。

克隆是指用無性繁殖方法產生的一組遺傳上相同的細胞和生物群體的過程。

1、病毒的分離和鑒定：（P219）病毒對細胞的感染性具有嚴格的選擇性和特異性，因此用組織培養細胞接種病毒必須首先選擇敏感細胞。（1）病毒增殖的判定：（略）

（2）細胞病變（CPE）：大部分病毒在敏感細胞系均可出現CPE（細胞病變），CPE（細胞病變）可以表現為嚴重的細胞破壞、細胞腫大、顆粒增多、細胞融合成合胞體或無明顯的細胞變化等。CPE（細胞病變）經常具有病毒“種”的特性，因此常常作為病毒堅定依據。

（3）病毒蝕(shi)斑技術（又稱空斑）：病毒蝕(shi)斑是指病毒在已長成的單層細胞上形成的局限性病灶，主要用于病毒的純化或病毒懸液中感染病毒含量的測定。（用病毒蝕斑技術測定含量-病毒純化或病毒懸液中感染的病毒）

（4）病毒感染力的滴定：有兩種，一種方法是用實驗動物測定LD50(半數致死量)；另一種方法是在組織細胞上測定TCID50（半數細胞培養物感染量。

（5）病毒的保存：分離或鑒定后的病毒經過冷凍干燥后可以長期保存。

2、免疫-血清學實驗：免疫-血清學實驗是利用抗原和抗體的特異性結合的原理進行的，主要用于兩個目的：

①從病料獲得病毒株后，應用已知的抗病毒血清或單克隆抗體進行免疫-血清學試驗，鑒定病毒的種類乃至型別；

②由發病動物采集血清標本，應用全病毒或特異性病毒抗原，測定發病動物體液中的特異性抗體，或進一步比較發病動物的急性發病期和恢復期血清中的抗體效價，了解病毒性抗體是否有明顯的增長，從而判定病毒感染的存在。

（1）中和試驗：動物在受到病毒感染后，在體內產生抗體，如果該抗體能與相應的病毒粒子特異性地結合，使后者喪失感染力，這種抗體就成為中和抗體。

應用已知的病毒或病毒抗原，可以測知患者體內中和抗體的存在及其效價；

用已知的抗病毒血清或中和性單克隆抗體，也可以進行病毒的鑒定，因此中和試驗也常用于新分離病毒株的鑒定。

（2）血凝和血凝抑制試驗：許多病毒能夠凝集某些種類動物的紅細胞，病毒凝集的紅細胞種類隨病毒種類的不同而不同。

血凝反應可被特異性抗體所抑制，因此血凝抑制試驗可以應用于：

①應用于標準病毒懸液測定血清中的相應抗體；②應用于特異性抗體鑒定新分離的病毒。

用枸櫞酸鈉配置的阿氏液具有抗紅細胞凝集作用，用于血凝和血凝抑制試驗中配置紅細胞懸掖。同一患者急性發病期和恢復期雙份血清（相距2～3周）的抗體效價增高4倍以上者，說明本次發病是由所測抗體相應病毒引起的。

（3）補體結合試驗：一個抗體分子與抗原結合后，可以導致數百個補體分子的激活，呈現一定程度的放大作用，所以補體結合試驗是一個比較敏感的方法，一般用于人及動物血清中特異性抗體的定量檢測（補體結合試驗），也常用于新分離病毒的鑒定。（4）免疫熒光技術：將抗原或抗體標記上熒光素，再進行抗原-抗體反應，出現熒光就說明標記物的存在，同時也反映了抗原或抗體的存在。

免疫熒光技術具有抗原-抗體反應的特異性和染色技術的快速性，并可在細胞水平上進行抗原定位，故在病毒學研究和病毒病的診斷中都是一種應用很廣的方法。熒光抗體染色技術包括（1）直接法、（2）間接法、（3）補體法、（4）SPA(葡萄球菌A蛋白)免疫熒光法。

（5）酶免疫技術：以酶作為標記物，通過化學方法將其與抗原或抗體共價結合，形成酶標記物，可與被檢的抗原或抗體起反應，形成酶標記免疫復合物。制備酶結合物的方法很多，目前應用最廣泛的有過碘酸鹽法和戊二醛法。

酶免疫測定試驗包括：①間接法（測抗體）、②雙抗體夾心法（測抗原）、③IgM捕獲ELISA（酶鏈免疫吸附實驗）、④競爭法。IgM是動物機體在受到初次抗原刺激后最早產生的一種抗體球蛋白，因此IgM捕獲ELISA常應用于多

種病毒病的早期診斷。抗u鏈抗體特異性結合IgM，可以應用于IgM捕獲ELISA。

IgG是主要的抗病毒抗體，在第二次抗原刺激時，由于免疫回憶，發生迅速的加強反應IgG量顯著增高（分子量大）。在病毒病的診斷中，也常將這一原理用于判斷病毒病的感染狀況，但常常需要采集恢復期和急性期雙份血清

進行抗體效價的比較如IgG水平4倍或4倍以上增加具有血清學診斷意義。

（6）膠體金免疫檢測技術：膠體金免疫檢測技術是以膠體金為載體吸附抗體和抗原，完成檢測特異性抗原或抗體的。膠體金免疫檢測技術優于ELISA（酶鏈免疫吸附實驗）法和免疫熒光法的最主要一點是肉眼直接判定結果。

（總結：膠體金免疫檢測技術就是直接用肉眼可以觀察結果）。

3、病毒病的分子生物學診斷：分子生物學診斷的特異性取決于核酸序列的特異性，病毒病的分子生物學診斷，包括對病毒核酸和蛋白質的測定。

PCR（全稱是聚合酶鏈反應），是在引物、摸板DNA和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應。

由于引物是按照與擴增區段兩端序列彼此互補的原則設計的，因此每一條新生鏈的合成都是從引物的退火結合位點開始，并沿著相反鏈延伸。

因此，PCR（聚合酶鏈反應）的特異性是由人工合成的一對寡核苷酸引物所決定的。PCR（聚合酶鏈反應）可以在數小時內對僅有的幾個拷貝的基因放大數百萬倍，使PCR（聚合酶鏈反應）擴增結果在瓊脂糖凝膠電泳后形成明顯可見的DNA帶。

溴化乙錠（EB）可以插入核酸分子之間并在紫外線下放射熒光，因此可以作為核酸分子電泳的指示劑。（核酸分子電泳的指示劑用溴化乙錠-EB）。

（1）RT-PCR(聚合酶鏈反應)技術：由于DNA聚合酶不能以RNA為摸板合成cDNA，所以不能對RNA病毒核酸進行直接PCR（聚合酶鏈反應）。

首先必須提取病毒RNA。提取病毒RNA時，要注意避免RNA酶對病毒RNA的降解作用。為此，所用的試劑和用品均需要進行無Rnase處理，（Rnas必須使用無熱原質水制備）如加入RNA酶抑制劑或高壓滅菌。加入反轉錄酶經過逆轉錄反應合成與病毒RNA互補的DNA(cDNA)，然后才能進行PCR（聚合酶鏈反應），這就是所謂的RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）。

目前常用的逆轉錄酶（RT-PCR）包括MMV和AMV。RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）反應的特異性取決于模板和引物，引物序列必須是被檢病毒特異的，原則上要求引物3'端堿基與模板一定要配對，對引物5'末端的堿基并沒有嚴格的限制，只要與模板DNA結合的引物長度足夠，其5'末端堿基可以不與模板DNA匹配而呈游離狀態，因此對引物5'末端可以進行自由修飾。

PCR（聚合酶鏈反應）反應中，引物1又稱Watson引物，是與模板正鏈互補的寡核苷酸鏈。

（2）核酸雜交檢測技術：雜交的基本原理是帶互補序列的單鏈核苷酸相遇時，會退火形成雙鏈。“用于診斷目的”雜交雙方是已知序列的病毒探針和待測樣品中的病毒核酸，如果是陽性結果說明病毒感染的存在。在核酸分子雜交技術基礎之上又發展了一系列檢測DNA和RNA的技術，如Southrn blotting、Western blotting、Dit blotting和菌落雜交。

聚丙烯酰胺凝膠電泳也可簡稱為PAGE（PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳-測雜交）DNA限制性內切酶可以識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列。

利用不同的內切酶切割病毒DNA，依據切割后的片段在凝膠電泳中泳動速率不同所形成的電泳帶型做出診斷。

（3）病毒病的免疫預防：決定疫苗免疫效果的關鍵因素是疫苗本身的質量。

目前普遍應用的病毒疫苗主要分為弱毒（活）疫苗和滅活疫苗兩類。弱毒（活）疫苗分解成（弱毒疫苗、弱活疫苗）。

近年來隨著分子病毒學研究的不斷深入，相繼研究出了（1）亞單位疫苗、（2）基因工程疫苗、（3）活載體疫苗、（4）分子疫苗。

蟲媒病毒是由媒介昆蟲作為病毒的傳遞者的一類病毒，由蟲媒病毒引起的疾病即為蟲媒病毒，如乙型腦炎、新疆出血熱、登革熱、黑熱病等。

類病毒沒有外殼蛋白，對各種有機溶劑有抵抗力，說明也沒有脂質外膜，只是一個裸露的RNA分子，類病毒只出現于植物。

在人和動物中存在著一類被稱為亞急性海綿樣腦病的中樞神經系統疾病，如瘋牛病。瘋牛病能夠通過食物鏈傳染給人。

研究證明，這種奇特疾病的病原，即不是病毒，也不是類病毒，大體上是由蛋白質組成，目前稱之為阮病毒。（總結：病毒-亞急性海綿樣腦病的中樞神經系統疾病，如瘋牛病）

1、病原學：流行性乙型腦炎病毒屬于黃病毒科。黃病毒科能夠致人疾病的病毒有登革熱病毒、丙型肝炎病毒和乙型腦炎病毒。

由于1924年乙型腦炎病毒首先證實于日本，故也稱其為日本乙型腦炎。C6/36細胞適合于乙型腦炎病毒的分離和培養。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：由蚊為媒介而傳播，引起人畜感染的主要媒介可能是三帶啄庫蚊，其他庫蚊也有可能。

（2）傳染途徑：流行性乙型腦炎是一種自然疫源性疾病，豬是傳播乙型腦炎病毒（乙腦病毒）的主要動物宿主。

乙型腦炎病毒通過蚊-豬-蚊的循環維持自身的存在。（3）人群易感性：除人、馬和豬外，通常不呈現臨床癥狀。

3、臨床表現：流行性乙型腦炎是一種中樞神經系統的急性傳染病，以高熱和狂暴或沉郁等神經癥狀為特征。

4、預防：疫苗預防注射。

1、病原學：登革病毒屬于黃病毒科黃病毒屬含單股正鏈RNA。登革熱（DH）和登革出血熱（DHF）是由4個血清型病毒引起的兩種不同臨床類型的急性傳染病。C6/36細胞可用于登革病毒分離和培養。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：中國DH/DHF的傳播媒介主要為埃及伊蚊和白紋wen伊蚊，這些蚊種主要生活在家庭儲水容器中。

（2）傳染途徑：登革熱存在城市型（人-蚊-人循環）、叢林型（猴-蚊-猴循環）兩種疫源地。中國主要為人-蚊-人循環。

（3）人群易感性：DH/DHF主要發生于熱帶和亞熱帶地區。中國從嬰兒到老人均可發病，以兒童和青壯年患病率較高。

3.臨床表現：潛伏期：一般為5～8天。

登革熱主要以高熱、頭痛、肌肉和關節痛為主，與登革熱的主要區別是有無嚴重出血。

DSS（登革休克綜合征）是DH/DHF的嚴重形式，其含義是登革休克綜合征。主要診斷依據為出血、休克、口唇發紺和血壓低或測不到。

（這些癥狀是登革休克綜合征臨床表現）世界衛生組織(WHO)對DHF/ DSS的診斷限定了嚴格的標準。有四種主要的臨床表現：高熱、出血、肝腫大和循環衰竭。WHO根據疾病的嚴重程度把DHF/ DSS（登革出血熱/登革休克綜合征）

分為四個等級：Ⅰ級和Ⅱ級表現為DHF（登革出血熱）輕型，Ⅲ級和Ⅳ級表現為更嚴重的形式—DSS的（登革休克綜合征）

4、預防：防蚊滅蚊。傳染源的管理。

1、病原學：流行性出血熱病毒屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬，基因為負鏈分節段RNA。中國目前發現的流行性出血熱主要有2種類型：

HTNV型（野鼠型）和SEOV型（家鼠型）。Vero-E6細胞適合于流行性出血熱病毒的分離和培養。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：在我國流行性出血熱主要傳染源和病毒宿主為嚙nie齒動物（黑線姬鼠和褐家鼠）。嚙nie-咬如蟲咬嚙。

（2）傳染途徑：接觸帶病毒的宿主動物及其排泄物可以造成感染。（3）人群易感性：普遍易感。

3、臨床表現：潛伏期：一般為7～14天。

典型的臨床表現有三大特征：發熱、出血和腎損害。流行性出血熱主要以腎臟損害為特征，故又稱之為腎綜合征出血熱。

4、預防：

（1）防鼠滅鼠。

（2）接種疫苗：目前我國所使用的流行性出血熱的疫苗是細胞培養滅活疫苗，可以分為3種類型（家鼠型、野鼠型、家鼠、野鼠雙價混合苗）經過近幾年的應用已證明在預防流行性出血熱方面有效。（3）講究衛生。

5、診斷：流行性出血熱對于明確疫源地類型、選擇所用疫苗的種類、指導防治策略等都非常重要。目前流行性出血熱的分型診斷方法有多種，包括（1）免疫熒光法（2）單抗分型

（3）RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）

（4）ELISA（酶鏈免疫吸附實驗）法。鼠帶毒率調查是常用的監測手段之一，用于流行性出血熱鼠帶毒率調查標本制備的主要方法為鼠肺冰凍切片，鼠帶毒率調查的常用方法為免疫熒光法。、病原學：克里米亞—剛果出血熱是布尼亞病毒科、內羅病毒屬的病毒，故又稱為新疆出血熱。病毒基因組為負鏈分節段RNA。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：30多種蜱，特別璃眼蜱屬既是該病毒的儲存宿主又是傳播媒介；多種不同的脊椎動物既是蜱的宿主，也可能是病毒的儲存宿主。

（2）傳染途徑：人的感染是因為蜱的叮咬或密切接觸感染動物或患者。（3）人群易感性：普遍易感。

3、臨床表現：潛伏期：蜱叮咬至疾病發作之間的時間為潛伏期，一般為3～6天。

臨床表現：克里米亞—剛果出血熱是一種神經系統的疾病，神經系統的癥狀出現于血管異常造成的顯著的出血綜合征之前。

常常為突發和急性，發熱（39℃～41℃）、寒戰、頭痛、風濕痛、腰痛和上腹部痛等。隨后迅速發展到短暫的、最嚴重的出血期，一般4天后在疾病高峰期導致死亡。

4、預防：目前尚無特異性疫苗進行接觸前的主動預防。有效的預防首先應避免與傳染源及媒介的接觸。

1、甲型肝炎病毒：甲型肝炎病毒（HAV）可以引起甲型肝炎。在病毒分類上甲肝病毒屬于小RNA病毒科。

甲型肝炎實驗室診斷方法主要依賴于檢測患者血清中的抗HAV（甲型肝炎病毒）的IgM。

2、乙型肝炎病毒：（HBV）

（1）病原學：乙型肝炎病毒（HBV）屬于嗜肝DNA病毒科、正嗜肝DNA病毒屬，是傳染性肝炎的一個重要病因。

（2）流行病學：HBV（乙型肝炎病毒）的唯一宿主是人。嗜肝DNA病毒可以存活于那些與感染者粘膜或皮膚創口接觸的物品表面。

（3）診斷：HBV（乙型肝炎病毒）侵入機體后進入血液循環，主要在白細胞中進行繁殖。HBV（乙型肝炎病毒）主要有3種抗原，分別為HBsAg（乙型肝炎表面抗原）、HBcAg（乙型肝炎核心抗原）、HBeAg（乙肝e抗原）。

HBsAg（乙型肝炎表面抗原）：

①HBsAg可誘導機體產生乙型肝炎表面抗體（抗—HBs）,具有抗HBV（乙型肝炎病毒）感染的作用 ②HBsAg與病毒的中和性作用有關。

HBcAg（乙型肝炎核心抗原）：為病毒核心的主要抗原，是急性乙型肝炎病毒感染的重要診斷指標之一，是檢測到抗HbcAgM。

HBeAg（乙肝e抗原）：在乙型肝炎潛伏期的后期出現并且HBeAg的存在表示HBV（乙型肝炎病毒）的存在。

HBeAg是在病毒復制活躍時的宿主血清中檢測到的一種可溶性抗原，HBeAg成分的消失和出現相應的抗體，預示著乙型肝炎病毒的繁殖減弱和疾病有可能向好的方面轉化。

血清中HBV（乙型肝炎病毒）DNA聚合酶的存在，表明HBV的感染處于病毒活動復制期。

（4）預防：疫苗接種：目前用于預防接種的乙型肝炎疫苗主要有基因工程乙肝疫苗和乙型肝炎表面抗原佐劑疫苗。防止血源性污染和傳播。

3、丙型肝炎病毒：（HCV）——非甲非乙型肝炎病毒（1）病原學：

丙型肝炎病毒（HCV）屬于黃病毒科、類丙型肝炎病毒屬。病毒粒子含有一單股正鏈RNA。丙型肝炎又可稱為非甲非乙型肝炎，根據其流行病學特征、臨床表現和傳播方式，可以將其分為 ①腸道傳播的非甲非乙型肝炎 ②輸血后非甲非乙型肝炎。（2）流行病學：

①宿主動物與傳染源：人是丙型肝炎的自然宿主和貯zhu存者。尚未確認別的自然宿主和非脊椎動物傳播媒介。

②傳染途徑：約60%的丙型肝炎病例都是由血液接觸引起的，而非腸道感染。③人群易感性：普遍易感。

4、丁型肝炎病毒（HDV）：丁型肝炎病毒（HDV）為缺陷型RNA病毒，必須借助乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包裹才能成為感染性病毒顆粒，常與HBV（乙型肝炎）同時或重疊感染。HDV（丁型肝炎病毒）主要通過非腸道傳播途徑傳播。HDV感染的指標是血液和體液中可測得HDV抗原。抗HDV抗體檢測可以反映HDV感染狀況。慢性HDV感染與多種肝臟疾病密切相關，包括重癥肝炎、肝硬化、丁型肝炎和慢性活動性肝炎。

1、病原學：流感病毒屬于正粘病毒科。按流感病毒核蛋白與基質蛋白抗原性的不同，流感病毒又可分為甲、乙、丙3型。

流感病毒基因組為單股RNA，由8個階段組成。流感病毒基因組片段具有共同的特點：所有的RNA階段具有相同的5’端。

1980年WHO公布的流感病毒命名方法，一株流感病毒名稱中包括下面幾項內容：型別/宿主/分離地點/毒株序號/分離年代（亞型）。

流感病毒血凝素變異性很強是造成流感病毒易發生抗原變異的主要原因。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染源：

人的絕大多數甲型流感病毒能自然感染家禽、家畜，并進一步支持人甲型流感病毒新亞型可能來源于動物的觀點。

乙型流感病毒能引起人的呼吸道感染，丙型流感病毒也是感染人的病毒。（2）傳播途徑：流感病毒的主要傳播途徑是空氣飛沫。

（3）人群易感性：3個型流感病毒沒有共同抗原，都能感染人；但甲型流感病毒的感染范圍很廣，容易引起大規模流行。

3、免疫預防：由于流感病毒變異頻繁，因此疫苗注射必須有針對性，即必須針對當前的流行株，才能取得良好的免疫效果。

4、診斷：用于流感病毒分離與鑒定的標本應取自患者鼻咽分必物。流感病毒的快速診斷主要依賴于檢查抗病毒血凝素抗體。

1、病原學：絲狀病毒科、絲狀病毒屬包括兩種病毒，即①埃博拉病毒和②馬爾堡病毒。研究絲狀病毒的重要意義在于：

（1）這兩種病毒均具極高的傳染性，對人類的危害極大；（2）室溫下非常穩定；（3）埃博拉病毒

60℃1小時仍不能被完全滅火，由于特有的生物學性質和致病力，WHO將其列為潛在的生物戰劑之一。（4）埃博拉病毒最初流行于扎伊爾北部的埃博拉河流域而命名為埃博拉病毒。

2、流行病學：埃博拉病毒的自然宿主尚末確定。自然條件下，人和猴都能發生嚴重感染并死亡。埃博拉病毒感染后可以引起出血的臨床表現，因此常將其歸為出血熱病毒。

根據埃博拉病毒的抗原性的差異，又可將埃博拉病毒分為3個血清型，不同血清型的埃博拉病毒其致病型有很大的差異。

目前認為，埃博拉病毒的疫源地主要在非洲大陸，但1989年自菲律賓運往美國的獼猴發生了感染，泰國也有埃博拉病毒感染的血清學證據，提示東南亞地區也可能是疫源地之一。馬爾堡病毒也可引起人的嚴重出血熱，在人-人或猴-人之間傳播。

鼻病毒屬于小核糖核酸病毒科、鼻病毒屬，是與人類普遍感冒有關的病毒。流行性腮腺炎是由副粘病毒科、副粘病毒屬的腮腺炎病毒引起。流行性腮腺炎最具有流行病學意義的傳染源是亞臨床型者。

天花是痘病毒科、正痘病毒屬的天花病毒引起的一種傳播迅速的烈性傳染病。由于使用痘苗病毒疫苗預防，1977年天花在全世界流行終止。

1、病原學：狂犬病毒屬于彈狀病毒科、狂犬病毒屬。因其特有的臨床表現，狂犬病又可稱為“恐水病”。

從感染動物或患者中發現的狂犬病毒又可稱之為野毒株或街毒；狂犬病毒街毒經過系列傳代適應特定宿主后即為固定毒。根據對不同毒株的血清反應和單克隆抗體分析，將狂犬病毒分成5個血清型：血清1型、血清2型、血清3型、血清4型、血清5型。

血清2、3、4、5型又稱為狂犬病相關病毒，野外分布的主要為血清2、3、4型。

在血清分型的基礎上，利用分子生物學技術對狂犬病毒也進行了遺傳學分型，即將狂犬病毒屬分為6種基因型：

基因型1（血清1型）、基因型2（血清2型）、基因型3（血清3型）、基因型4（血清4型）、基因型5和基因型6（血清5型）相對應。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染源：狂犬病毒幾乎可以感染所有溫血動物，但造成人類感染的主要傳染源是帶病毒犬。

（2）傳播途徑：因感染狂犬病毒的動物咬傷，感染性唾液污染傷口發生感染。（3）人群易感性：人及所有溫血動物皆能感染。

3、預防：狂犬病的預防主要包括兩個方面：（1）即控制傳染源（2）暴露后應用免疫制劑。控制傳染源主要是家養犬的免疫。

狂犬病免疫制劑包括被動免疫與主動免疫兩種。

狂犬病的被動免疫制劑有動物源抗狂犬病病毒的精制血清和人源狂犬病免疫球蛋白。

主動免疫即注射狂犬疫苗。我國于1981年開始用地鼠腎細胞疫苗，近幾年又開始應用Vero（非洲綠猴腎）細胞狂犬病疫苗。

4、診斷：狂犬病病毒或病毒抗原可以在患者身體多個部位，如角膜壓片、腦脊髓液、唾液和咬傷處皮膚組織檢測到。

實驗室診斷狂犬病最具特性的診斷依據是—感染神經原內的Negri小體（內基氏小體），最常見于海馬及小腦普爾金耶組織的神經細胞內，是狂犬病病毒的集落。

WHO推薦快速熒光灶抑制試驗取代了傳統的小鼠中和實驗檢測狂犬疫苗免疫后中和抗體水平。

1、病原學：輪狀病毒屬于呼腸孤病毒科、輪狀病毒屬，是各種幼齡動物非細胞性腹瀉的主要病原之一。

病毒由11個節段的雙鏈RNA組成。根據輪狀病毒RNA11個節段的聚丙烯酰胺電泳圖形不同，可以將輪狀病毒進行分型和鑒定。

絕大多數哺乳動物輪狀病毒，具有一種相同的群抗原，這些輪狀病毒被命名為A群輪狀病毒，是研究的主要對象。

2、流行病學：輪狀病毒宿主范圍甚廣，已知的有人及多種動物。據初步統計，全世界幼兒發生的腸炎至少有50%是由輪狀病毒引起的。（腸道病毒）。

3、預防：人用口服輪狀病毒活疫苗可是兒童獲得保護。

4、診斷：輪狀病毒感染的可靠的實驗室診斷依賴于檢出輪狀病毒或抗原，進行該項診斷應收集糞便。培養輪狀病毒使用最普遍的是MA-104傳代細胞系。

輪狀病毒復制方式不同于其他呼腸孤病毒，它不是通過吞飲作用進入細胞，而是通過胞漿膜直接進入胞漿，胰蛋白酶對病毒進行處理可以使病毒變為有感染性。

因此為了在細胞培養中復制輪狀病毒和連續傳代通常需要用胰蛋白酶對病毒進行處理，從而促進輪狀病毒的感染性。

皰疹病毒是一群較大的有囊膜的雙鏈DNA病毒。

根據進行該項診斷皰疹病毒的感染性質，又可將皰疹病毒分為A群和B群兩個亞群。

A群：凡在體外培養時，容易從細胞內釋放到營養液中的病毒為A群；B群：病毒同細胞緊密結合很難釋放到營養液中為B群，又名細胞結合性病毒。

皰疹病毒基因組結構由末端重復序列和內部重復序列所組成，重復序列的數量和長度在不同的皰疹病毒有較大的差異。

皰疹病毒的基因可以整合于細胞的基因組內，成為細胞DNA的一部分，長遠地復制下去，形成長期潛伏感染狀態。

皰疹病毒與腫瘤發生關系的機制目前已經證明與皰疹病毒隱性感染有關。

人皰疹病毒共有5型，皰疹病毒4型，即EB病毒（EBV），EBV除引起人類皮膚和黏膜的皰疹樣病變外，還與人類鼻咽癌有密切關系。

逆轉錄病毒科最基本的特征是在其生命活動過程中有RNA到DNA的復制過程。

逆轉錄病毒病毒的基因組是單股、正鏈、線性RNA的二聚體，病毒粒子中的RNA不具備感染性。逆轉錄病毒RNA反轉錄成為DNA后，病毒DNA可以整合在宿主染色體中，這是逆轉錄病毒生命存在的一種形式，這種形式稱之為前病毒。能夠引起腫瘤的逆轉錄病毒在文獻中被稱之為RNA腫瘤病毒。

致瘤性逆轉錄病毒中可以引起惡性疾患，潛伏期長，并且不引起靶細胞培養物產生明顯的變化的病毒為白血病病毒。

逆轉錄病毒獨特的基因組結構和生命周期使逆轉錄病毒在分子生物學研究和基因治療中其到了基因轉移載體的重要作用。人Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV-1）和人Ⅱ型免疫缺陷病毒（HIV-2）引起人的獲得性免疫缺陷綜合征。（AIDS）

1、、病原學：人Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV-1）和人Ⅱ型免疫缺陷病毒（HIV-2）引起人的獲得性免疫缺陷綜合征，簡稱艾滋病（AIDS）。

艾滋病病毒屬于逆轉錄病毒科、慢病毒屬。

2、致病機制：HIV對CD+4細胞有選擇性的親嗜性。病毒侵入細胞后，借助反轉錄酶合成DNA，與細胞DNA整合，并利用宿主細胞的酶系統進行生物合成，產生病毒產物，致使宿主細胞死亡，釋放出大量新病毒，攻擊新的靶細胞，從而使T4淋巴細胞數量不斷減少；

正常的T4細胞，通過CD+4細胞結合病毒與病毒表面蛋白，而被細胞毒作用T細胞（T8）識別，進而被殺傷。

T4淋巴細胞在免疫應答過程中起調節作用，與①單核-巨噬細胞、②細胞毒性T細胞③NK細胞、④B細胞等均有密切關系，所以T4細胞耗竭、功能下降，必將使免疫系統的多種功能發生缺陷。

3、傳播途徑：性接觸為最主要的傳播途徑；經注射途徑、孕婦胎盤以及破損皮膚等均可造成感染。

4、診斷：測定HIV感染的最簡便方法是測定HIV抗體。

5、預防：切斷各種傳播途徑。

脊髓灰質炎病毒屬于小核糖核酸病毒科，腸道病毒屬的病毒，主要經過糞-口途徑傳播。脊髓灰質炎病毒進入機體后，主要侵犯脊髓前角運動神經元。目前脊髓灰質炎在世界上許多國家，包括中國，已經消失。

口蹄疫病毒屬于小核糖核酸病毒科、口蹄疫病毒屬，是一種主要感染偶蹄動物的烈性傳染病，人和非偶蹄動物也可感染，但癥狀相對較輕。

口蹄疫一旦發生則呈暴發性流行，可以跳躍式傳播，在適合的氣候條件下還可通過風媒的途徑傳播。人感染口蹄疫病毒后只在口腔黏膜、手、足處皮膚出現水皰，可自愈，個別嚴重病例見于兒童。動物患口蹄疫后其生產性能急劇下降；對疫區要進行封鎖，封鎖期間疫區內正常的畜產品交易和生產活動都不能進行；

對確診為口蹄疫的動物要立即捕殺、銷毀。所以口蹄疫暴發后對畜、牧、業生產乃至整個國民經濟都會造成巨大的損失。

呼吸道合胞病毒屬于副粘病毒科、肺病毒屬。因在組織培養繁殖時能引起細胞融合而定為現在的名稱。呼吸道合胞病毒可以引起嬰幼兒產生嚴重的下呼吸道感染。

1、病毒的分離和鑒定：（P219）病毒對細胞的感染性具有嚴格的選擇性和特異性，因此用組織培養細胞接種病毒必須首先選擇敏感細胞。（1）病毒增殖的判定：（略）

（2）細胞病變（CPE）：大部分病毒在敏感細胞系均可出現CPE（細胞病變），CPE（細胞病變）可以表現為嚴重的細胞破壞、細胞腫大、顆粒增多、細胞融合成合胞體或無明顯的細胞變化等。CPE（細胞病變）經常具有病毒“種”的特性，因此常常作為病毒堅定依據。

（3）病毒蝕(shi)斑技術（又稱空斑）：病毒蝕(shi)斑是指病毒在已長成的單層細胞上形成的局限性病灶，主要用于病毒的純化或病毒懸液中感染病毒含量的測定。（用病毒蝕斑技術測定含量-病毒純化或病毒懸液中感染的病毒）

（4）病毒感染力的滴定：有兩種，一種方法是用實驗動物測定LD50(半數致死量)；另一種方法是在組織細胞上測定TCID50（半數細胞培養物感染量。

（5）病毒的保存：分離或鑒定后的病毒經過冷凍干燥后可以長期保存。

2、免疫-血清學實驗：免疫-血清學實驗是利用抗原和抗體的特異性結合的原理進行的，主要用于兩個目的：

①從病料獲得病毒株后，應用已知的抗病毒血清或單克隆抗體進行免疫-血清學試驗，鑒定病毒的種類乃至型別；

②由發病動物采集血清標本，應用全病毒或特異性病毒抗原，測定發病動物體液中的特異性抗體，或進一步比較發病動物的急性發病期和恢復期血清中的抗體效價，了解病毒性抗體是否有明顯的增長，從而判定病毒感染的存在。

（1）中和試驗：動物在受到病毒感染后，在體內產生抗體，如果該抗體能與相應的病毒粒子特異性地結合，使后者喪失感染力，這種抗體就成為中和抗體。

應用已知的病毒或病毒抗原，可以測知患者體內中和抗體的存在及其效價；

用已知的抗病毒血清或中和性單克隆抗體，也可以進行病毒的鑒定，因此中和試驗也常用于新分離病毒株的鑒定。

（2）血凝和血凝抑制試驗：許多病毒能夠凝集某些種類動物的紅細胞，病毒凝集的紅細胞種類隨病毒種類的不同而不同。

血凝反應可被特異性抗體所抑制，因此血凝抑制試驗可以應用于：

①應用于標準病毒懸液測定血清中的相應抗體；②應用于特異性抗體鑒定新分離的病毒。

用枸櫞酸鈉配置的阿氏液具有抗紅細胞凝集作用，用于血凝和血凝抑制試驗中配置紅細胞懸掖。同一患者急性發病期和恢復期雙份血清（相距2～3周）的抗體效價增高4倍以上者，說明本次發病是由所測抗體相應病毒引起的。

（3）補體結合試驗：一個抗體分子與抗原結合后，可以導致數百個補體分子的激活，呈現一定程度的放大作用，所以補體結合試驗是一個比較敏感的方法，一般用于人及動物血清中特異性抗體的定量檢測（補體結合試驗），也常用于新分離病毒的鑒定。

（4）免疫熒光技術：將抗原或抗體標記上熒光素，再進行抗原-抗體反應，出現熒光就說明標記物的存在，同時也反映了抗原或抗體的存在。

免疫熒光技術具有抗原-抗體反應的特異性和染色技術的快速性，并可在細胞水平上進行抗原定位，故在病毒學研究和病毒病的診斷中都是一種應用很廣的方法。熒光抗體染色技術包括（1）直接法、（2）間接法、（3）補體法、（4）SPA(葡萄球菌A蛋白)免疫熒光法。

（5）酶免疫技術：以酶作為標記物，通過化學方法將其與抗原或抗體共價結合，形成酶標記物，可與被檢的抗原或抗體起反應，形成酶標記免疫復合物。制備酶結合物的方法很多，目前應用最廣泛的有過碘酸鹽法和戊二醛法。

酶免疫測定試驗包括：①間接法（測抗體）、②雙抗體夾心法（測抗原）、③IgM捕獲ELISA（酶鏈免疫吸附實驗）、④競爭法。IgM是動物機體在受到初次抗原刺激后最早產生的一種抗體球蛋白，因此IgM捕獲ELISA常應用于多

種病毒病的早期診斷。抗u鏈抗體特異性結合IgM，可以應用于IgM捕獲ELISA。

IgG是主要的抗病毒抗體，在第二次抗原刺激時，由于免疫回憶，發生迅速的加強反應IgG量顯著增高（分子量大）。在病毒病的診斷中，也常將這一原理用于判斷病毒病的感染狀況，但常常需要采集恢復期和急性期雙份血清

進行抗體效價的比較如IgG水平4倍或4倍以上增加具有血清學診斷意義。

（6）膠體金免疫檢測技術：膠體金免疫檢測技術是以膠體金為載體吸附抗體和抗原，完成檢測特異性抗原或抗體的。膠體金免疫檢測技術優于ELISA（酶鏈免疫吸附實驗）法和免疫熒光法的最主要一點是肉眼直接判定結果。

（總結：膠體金免疫檢測技術就是直接用肉眼可以觀察結果）。

3、病毒病的分子生物學診斷：分子生物學診斷的特異性取決于核酸序列的特異性，病毒病的分子生物學診斷，包括對病毒核酸和蛋白質的測定。

PCR（全稱是聚合酶鏈反應），是在引物、摸板DNA和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應。

由于引物是按照與擴增區段兩端序列彼此互補的原則設計的，因此每一條新生鏈的合成都是從引物的退火結合位點開始，并沿著相反鏈延伸。

因此，PCR（聚合酶鏈反應）的特異性是由人工合成的一對寡核苷酸引物所決定的。PCR（聚合酶鏈反應）可以在數小時內對僅有的幾個拷貝的基因放大數百萬倍，使PCR（聚合酶鏈反應）擴增結果在瓊脂糖凝膠電泳后形成明顯可見的DNA帶。

溴化乙錠（EB）可以插入核酸分子之間并在紫外線下放射熒光，因此可以作為核酸分子電泳的指示劑。（核酸分子電泳的指示劑用溴化乙錠-EB）。

（1）RT-PCR(聚合酶鏈反應)技術：由于DNA聚合酶不能以RNA為摸板合成cDNA，所以不能對RNA病毒核酸進行直接PCR（聚合酶鏈反應）。

首先必須提取病毒RNA。提取病毒RNA時，要注意避免RNA酶對病毒RNA的降解作用。為此，所用的試劑和用品均需要進行無Rnase處理，（Rnas必須使用無熱原質水制備）如加入RNA酶抑制劑或高壓滅菌。加入反轉錄酶經過逆轉錄反應合成與病毒RNA互補的DNA(cDNA)，然后才能進行PCR（聚合酶鏈反應），這就是所謂的RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）。

目前常用的逆轉錄酶（RT-PCR）包括MMV和AMV。RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）反應的特異性取決于模板和引物，引物序列必須是被檢病毒特異的，原則上要求引物3'端堿基與模板一定要配對，對引物5'末端的堿基并沒有嚴格的限制，只要與模板DNA結合的引物長度足夠，其5'末端堿基可以不與模板DNA匹配而呈游離狀態，因此對引物5'末端可以進行自由修飾。

PCR（聚合酶鏈反應）反應中，引物1又稱Watson引物，是與模板正鏈互補的寡核苷酸鏈。

（2）核酸雜交檢測技術：雜交的基本原理是帶互補序列的單鏈核苷酸相遇時，會退火形成雙鏈。

“用于診斷目的”雜交雙方是已知序列的病毒探針和待測樣品中的病毒核酸，如果是陽性結果說明病毒感染的存在。在核酸分子雜交技術基礎之上又發展了一系列檢測DNA和RNA的技術，如Southrn blotting、Western blotting、Dit blotting和菌落雜交。

聚丙烯酰胺凝膠電泳也可簡稱為PAGE（PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳-測雜交）DNA限制性內切酶可以識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列。

利用不同的內切酶切割病毒DNA，依據切割后的片段在凝膠電泳中泳動速率不同所形成的電泳帶型做出診斷。

（3）病毒病的免疫預防：決定疫苗免疫效果的關鍵因素是疫苗本身的質量。

目前普遍應用的病毒疫苗主要分為弱毒（活）疫苗和滅活疫苗兩類。弱毒（活）疫苗分解成（弱毒疫苗、弱活疫苗）。近年來隨著分子病毒學研究的不斷深入，相繼研究出了（1）亞單位疫苗、（2）基因工程疫苗、（3）活載體疫苗、（4）分子疫苗。

蟲媒病毒是由媒介昆蟲作為病毒的傳遞者的一類病毒，由蟲媒病毒引起的疾病即為蟲媒病毒，如乙型腦炎、新疆出血熱、登革熱、黑熱病等。

類病毒沒有外殼蛋白，對各種有機溶劑有抵抗力，說明也沒有脂質外膜，只是一個裸露的RNA分子，類病毒只出現于植物。

在人和動物中存在著一類被稱為亞急性海綿樣腦病的中樞神經系統疾病，如瘋牛病。瘋牛病能夠通過食物鏈傳染給人。

研究證明，這種奇特疾病的病原，即不是病毒，也不是類病毒，大體上是由蛋白質組成，目前稱之為阮病毒。（總結：病毒-亞急性海綿樣腦病的中樞神經系統疾病，如瘋牛病）

1、病原學：流行性乙型腦炎病毒屬于黃病毒科。黃病毒科能夠致人疾病的病毒有登革熱病毒、丙型肝炎病毒和乙型腦炎病毒。

由于1924年乙型腦炎病毒首先證實于日本，故也稱其為日本乙型腦炎。C6/36細胞適合于乙型腦炎病毒的分離和培養。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：由蚊為媒介而傳播，引起人畜感染的主要媒介可能是三帶啄庫蚊，其他庫蚊也有可能。

（2）傳染途徑：流行性乙型腦炎是一種自然疫源性疾病，豬是傳播乙型腦炎病毒（乙腦病毒）的主要動物宿主。

乙型腦炎病毒通過蚊-豬-蚊的循環維持自身的存在。（3）人群易感性：除人、馬和豬外，通常不呈現臨床癥狀。

3、臨床表現：流行性乙型腦炎是一種中樞神經系統的急性傳染病，以高熱和狂暴或沉郁等神經癥狀為特征。

4、預防：疫苗預防注射。

1、病原學：登革病毒屬于黃病毒科黃病毒屬含單股正鏈RNA。登革熱（DH）和登革出血熱（DHF）是由4個血清型病毒引起的兩種不同臨床類型的急性傳染病。C6/36細胞可用于登革病毒分離和培養。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：中國DH/DHF的傳播媒介主要為埃及伊蚊和白紋wen伊蚊，這些蚊種主要生活在家庭儲水容器中。

（2）傳染途徑：登革熱存在城市型（人-蚊-人循環）、叢林型（猴-蚊-猴循環）兩種疫源地。中國主要為人-蚊-人循環。

（3）人群易感性：DH/DHF主要發生于熱帶和亞熱帶地區。中國從嬰兒到老人均可發病，以兒童和青壯年患病率較高。

3、臨床表現：潛伏期：一般為5～8天。

登革熱主要以高熱、頭痛、肌肉和關節痛為主，與登革熱的主要區別是有無嚴重出血。

DSS（登革休克綜合征）是DH/DHF的嚴重形式，其含義是登革休克綜合征。主要診斷依據為出血、休克、口唇發紺和血壓低或測不到。

（這些癥狀是登革休克綜合征臨床表現）世界衛生組織(WHO)對DHF/ DSS的診斷限定了嚴格的標準。有四種主要的臨床表現：高熱、出血、肝腫大和循環衰竭。WHO根據疾病的嚴重程度把DHF/ DSS（登革出血熱/登革休克綜合征）

分為四個等級：Ⅰ級和Ⅱ級表現為DHF（登革出血熱）輕型，Ⅲ級和Ⅳ級表現為更嚴重的形式—DSS的（登革休克綜合征）

4、預防：防蚊滅蚊。傳染源的管理。

1、病原學：流行性出血熱病毒屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬，基因為負鏈分節段RNA。中國目前發現的流行性出血熱主要有2種類型：

HTNV型（野鼠型）和SEOV型（家鼠型）。Vero-E6細胞適合于流行性出血熱病毒的分離和培養。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：在我國流行性出血熱主要傳染源和病毒宿主為嚙nie齒動物（黑線姬鼠和褐家鼠）。嚙nie-咬如蟲咬嚙。

（2）傳染途徑：接觸帶病毒的宿主動物及其排泄物可以造成感染。（3）人群易感性：普遍易感。

3、臨床表現：潛伏期：一般為7～14天。

典型的臨床表現有三大特征：發熱、出血和腎損害。流行性出血熱主要以腎臟損害為特征，故又稱之為腎綜合征出血熱。

4、預防：

（1）防鼠滅鼠。

（2）接種疫苗：目前我國所使用的流行性出血熱的疫苗是細胞培養滅活疫苗，可以分為3種類型（家鼠型、野鼠型、家鼠、野鼠雙價混合苗）經過近幾年的應用已證明在預防流行性出血熱方面有效。（3）講究衛生。

5、診斷：流行性出血熱對于明確疫源地類型、選擇所用疫苗的種類、指導防治策略等都非常重要。目前流行性出血熱的分型診斷方法有多種，包括（1）免疫熒光法（2）單抗分型

（3）RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）

（4）ELISA（酶鏈免疫吸附實驗）法。鼠帶毒率調查是常用的監測手段之一，用于流行性出血熱鼠帶毒率調查標本制備的主要方法為鼠肺冰凍切片，鼠帶毒率調查的常用方法為免疫熒光法。、病原學：克里米亞—剛果出血熱是布尼亞病毒科、內羅病毒屬的病毒，故又稱為新疆出血熱。病毒基因組為負鏈分節段RNA。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染原：30多種蜱，特別璃眼蜱屬既是該病毒的儲存宿主又是傳播媒介；多種不同的脊椎動物既是蜱的宿主，也可能是病毒的儲存宿主。

（2）傳染途徑：人的感染是因為蜱的叮咬或密切接觸感染動物或患者。（3）人群易感性：普遍易感。

3、臨床表現：潛伏期：蜱叮咬至疾病發作之間的時間為潛伏期，一般為3～6天。

臨床表現：克里米亞—剛果出血熱是一種神經系統的疾病，神經系統的癥狀出現于血管異常造成的顯著的出血綜合征之前。

常常為突發和急性，發熱（39℃～41℃）、寒戰、頭痛、風濕痛、腰痛和上腹部痛等。隨后迅速發展到短暫的、最嚴重的出血期，一般4天后在疾病高峰期導致死亡。

4、預防：目前尚無特異性疫苗進行接觸前的主動預防。有效的預防首先應避免與傳染源及媒介的接觸。

1、甲型肝炎病毒：甲型肝炎病毒（HAV）可以引起甲型肝炎。在病毒分類上甲肝病毒屬于小RNA病毒科。

甲型肝炎實驗室診斷方法主要依賴于檢測患者血清中的抗HAV（甲型肝炎病毒）的IgM。

2、乙型肝炎病毒：（HBV）

（1）病原學：乙型肝炎病毒（HBV）屬于嗜肝DNA病毒科、正嗜肝DNA病毒屬，是傳染性肝炎的一個重要病因。

（2）流行病學：HBV（乙型肝炎病毒）的唯一宿主是人。嗜肝DNA病毒可以存活于那些與感染者粘膜或皮膚創口接觸的物品表面。

（3）診斷：HBV（乙型肝炎病毒）侵入機體后進入血液循環，主要在白細胞中進行繁殖。HBV（乙型肝炎病毒）主要有3種抗原，分別為HBsAg（乙型肝炎表面抗原）、HBcAg（乙型肝炎核心抗原）、HBeAg（乙肝e抗原）。

HBsAg（乙型肝炎表面抗原）：

①HBsAg可誘導機體產生乙型肝炎表面抗體（抗—HBs）,具有抗HBV（乙型肝炎病毒）感染的作用 ②HBsAg與病毒的中和性作用有關。

HBcAg（乙型肝炎核心抗原）：為病毒核心的主要抗原，是急性乙型肝炎病毒感染的重要診斷指標之一，是檢測到抗HbcAgM。

HBeAg（乙肝e抗原）：在乙型肝炎潛伏期的后期出現并且HBeAg的存在表示HBV（乙型肝炎病毒）的存在。

HBeAg是在病毒復制活躍時的宿主血清中檢測到的一種可溶性抗原，HBeAg成分的消失和出現相應的抗體，預示著乙型肝炎病毒的繁殖減弱和疾病有可能向好的方面轉化。

血清中HBV（乙型肝炎病毒）DNA聚合酶的存在，表明HBV的感染處于病毒活動復制期。

（4）預防：疫苗接種：目前用于預防接種的乙型肝炎疫苗主要有基因工程乙肝疫苗和乙型肝炎表面抗原佐劑疫苗。防止血源性污染和傳播。

3、丙型肝炎病毒：（HCV）——非甲非乙型肝炎病毒（1）病原學：

丙型肝炎病毒（HCV）屬于黃病毒科、類丙型肝炎病毒屬。病毒粒子含有一單股正鏈RNA。丙型肝炎又可稱為非甲非乙型肝炎，根據其流行病學特征、臨床表現和傳播方式，可以將其分為 ①腸道傳播的非甲非乙型肝炎 ②輸血后非甲非乙型肝炎。（2）流行病學：

①宿主動物與傳染源：人是丙型肝炎的自然宿主和貯zhu存者。尚未確認別的自然宿主和非脊椎動物傳播媒介。

②傳染途徑：約60%的丙型肝炎病例都是由血液接觸引起的，而非腸道感染。③人群易感性：普遍易感。

4、丁型肝炎病毒（HDV）：丁型肝炎病毒（HDV）為缺陷型RNA病毒，必須借助乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包裹才能成為感染性病毒顆粒，常與HBV（乙型肝炎）同時或重疊感染。HDV（丁型肝炎病毒）主要通過非腸道傳播途徑傳播。HDV感染的指標是血液和體液中可測得HDV抗原。抗HDV抗體檢測可以反映HDV感染狀況。

慢性HDV感染與多種肝臟疾病密切相關，包括重癥肝炎、肝硬化、丁型肝炎和慢性活動性肝炎。

1、病原學：流感病毒屬于正粘病毒科。按流感病毒核蛋白與基質蛋白抗原性的不同，流感病毒又可分為甲、乙、丙3型。

流感病毒基因組為單股RNA，由8個階段組成。流感病毒基因組片段具有共同的特點：所有的RNA階段具有相同的5’端。

1980年WHO公布的流感病毒命名方法，一株流感病毒名稱中包括下面幾項內容：型別/宿主/分離地點/毒株序號/分離年代（亞型）。

流感病毒血凝素變異性很強是造成流感病毒易發生抗原變異的主要原因。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染源： 人的絕大多數甲型流感病毒能自然感染家禽、家畜，并進一步支持人甲型流感病毒新亞型可能來源于動物的觀點。

乙型流感病毒能引起人的呼吸道感染，丙型流感病毒也是感染人的病毒。（2）傳播途徑：流感病毒的主要傳播途徑是空氣飛沫。

（3）人群易感性：3個型流感病毒沒有共同抗原，都能感染人；但甲型流感病毒的感染范圍很廣，容易引起大規模流行。

3、免疫預防：由于流感病毒變異頻繁，因此疫苗注射必須有針對性，即必須針對當前的流行株，才能取得良好的免疫效果。

4、診斷：用于流感病毒分離與鑒定的標本應取自患者鼻咽分必物。流感病毒的快速診斷主要依賴于檢查抗病毒血凝素抗體。

1、病原學：絲狀病毒科、絲狀病毒屬包括兩種病毒，即①埃博拉病毒和②馬爾堡病毒。研究絲狀病毒的重要意義在于：

（1）這兩種病毒均具極高的傳染性，對人類的危害極大；（2）室溫下非常穩定；（3）埃博拉病毒

60℃1小時仍不能被完全滅火，由于特有的生物學性質和致病力，WHO將其列為潛在的生物戰劑之一。（4）埃博拉病毒最初流行于扎伊爾北部的埃博拉河流域而命名為埃博拉病毒。

2、流行病學：埃博拉病毒的自然宿主尚末確定。自然條件下，人和猴都能發生嚴重感染并死亡。埃博拉病毒感染后可以引起出血的臨床表現，因此常將其歸為出血熱病毒。

根據埃博拉病毒的抗原性的差異，又可將埃博拉病毒分為3個血清型，不同血清型的埃博拉病毒其致病型有很大的差異。

目前認為，埃博拉病毒的疫源地主要在非洲大陸，但1989年自菲律賓運往美國的獼猴發生了感染，泰國也有埃博拉病毒感染的血清學證據，提示東南亞地區也可能是疫源地之一。馬爾堡病毒也可引起人的嚴重出血熱，在人-人或猴-人之間傳播。

鼻病毒屬于小核糖核酸病毒科、鼻病毒屬，是與人類普遍感冒有關的病毒。流行性腮腺炎是由副粘病毒科、副粘病毒屬的腮腺炎病毒引起。流行性腮腺炎最具有流行病學意義的傳染源是亞臨床型者。

天花是痘病毒科、正痘病毒屬的天花病毒引起的一種傳播迅速的烈性傳染病。由于使用痘苗病毒疫苗預防，1977年天花在全世界流行終止。

1、病原學：狂犬病毒屬于彈狀病毒科、狂犬病毒屬。因其特有的臨床表現，狂犬病又可稱為“恐水病”。

從感染動物或患者中發現的狂犬病毒又可稱之為野毒株或街毒；狂犬病毒街毒經過系列傳代適應特定宿主后即為固定毒。

根據對不同毒株的血清反應和單克隆抗體分析，將狂犬病毒分成5個血清型：血清1型、血清2型、血清3型、血清4型、血清5型。

血清2、3、4、5型又稱為狂犬病相關病毒，野外分布的主要為血清2、3、4型。

在血清分型的基礎上，利用分子生物學技術對狂犬病毒也進行了遺傳學分型，即將狂犬病毒屬分為6種基因型：

基因型1（血清1型）、基因型2（血清2型）、基因型3（血清3型）、基因型4（血清4型）、基因型5和基因型6（血清5型）相對應。

2、流行病學：

（1）宿主動物與傳染源：狂犬病毒幾乎可以感染所有溫血動物，但造成人類感染的主要傳染源是帶病毒犬。（2）傳播途徑：因感染狂犬病毒的動物咬傷，感染性唾液污染傷口發生感染。（3）人群易感性：人及所有溫血動物皆能感染。

3、預防：狂犬病的預防主要包括兩個方面：（1）即控制傳染源（2）暴露后應用免疫制劑。控制傳染源主要是家養犬的免疫。

狂犬病免疫制劑包括被動免疫與主動免疫兩種。

狂犬病的被動免疫制劑有動物源抗狂犬病病毒的精制血清和人源狂犬病免疫球蛋白。

主動免疫即注射狂犬疫苗。我國于1981年開始用地鼠腎細胞疫苗，近幾年又開始應用Vero（非洲綠猴腎）細胞狂犬病疫苗。

4、診斷：狂犬病病毒或病毒抗原可以在患者身體多個部位，如角膜壓片、腦脊髓液、唾液和咬傷處皮膚組織檢測到。

實驗室診斷狂犬病最具特性的診斷依據是—感染神經原內的Negri小體（內基氏小體），最常見于海馬及小腦普爾金耶組織的神經細胞內，是狂犬病病毒的集落。

WHO推薦快速熒光灶抑制試驗取代了傳統的小鼠中和實驗檢測狂犬疫苗免疫后中和抗體水平。

1、病原學：輪狀病毒屬于呼腸孤病毒科、輪狀病毒屬，是各種幼齡動物非細胞性腹瀉的主要病原之一。

病毒由11個節段的雙鏈RNA組成。根據輪狀病毒RNA11個節段的聚丙烯酰胺電泳圖形不同，可以將輪狀病毒進行分型和鑒定。

絕大多數哺乳動物輪狀病毒，具有一種相同的群抗原，這些輪狀病毒被命名為A群輪狀病毒，是研究的主要對象。

2、流行病學：輪狀病毒宿主范圍甚廣，已知的有人及多種動物。據初步統計，全世界幼兒發生的腸炎至少有50%是由輪狀病毒引起的。（腸道病毒）。

3、預防：人用口服輪狀病毒活疫苗可是兒童獲得保護。

4、診斷：輪狀病毒感染的可靠的實驗室診斷依賴于檢出輪狀病毒或抗原，進行該項診斷應收集糞便。培養輪狀病毒使用最普遍的是MA-104傳代細胞系。

輪狀病毒復制方式不同于其他呼腸孤病毒，它不是通過吞飲作用進入細胞，而是通過胞漿膜直接進入胞漿，胰蛋白酶對病毒進行處理可以使病毒變為有感染性。

因此為了在細胞培養中復制輪狀病毒和連續傳代通常需要用胰蛋白酶對病毒進行處理，從而促進輪狀病毒的感染性。

皰疹病毒是一群較大的有囊膜的雙鏈DNA病毒。

根據進行該項診斷皰疹病毒的感染性質，又可將皰疹病毒分為A群和B群兩個亞群。

A群：凡在體外培養時，容易從細胞內釋放到營養液中的病毒為A群；B群：病毒同細胞緊密結合很難釋放到營養液中為B群，又名細胞結合性病毒。

皰疹病毒基因組結構由末端重復序列和內部重復序列所組成，重復序列的數量和長度在不同的皰疹病毒有較大的差異。

皰疹病毒的基因可以整合于細胞的基因組內，成為細胞DNA的一部分，長遠地復制下去，形成長期潛伏感染狀態。

皰疹病毒與腫瘤發生關系的機制目前已經證明與皰疹病毒隱性感染有關。

人皰疹病毒共有5型，皰疹病毒4型，即EB病毒（EBV），EBV除引起人類皮膚和黏膜的皰疹樣病變外，還與人類鼻咽癌有密切關系。

逆轉錄病毒科最基本的特征是在其生命活動過程中有RNA到DNA的復制過程。

逆轉錄病毒病毒的基因組是單股、正鏈、線性RNA的二聚體，病毒粒子中的RNA不具備感染性。逆轉錄病毒RNA反轉錄成為DNA后，病毒DNA可以整合在宿主染色體中，這是逆轉錄病毒生命存在的一種形式，這種形式稱之為前病毒。能夠引起腫瘤的逆轉錄病毒在文獻中被稱之為RNA腫瘤病毒。

致瘤性逆轉錄病毒中可以引起惡性疾患，潛伏期長，并且不引起靶細胞培養物產生明顯的變化的病毒為白血病病毒。

逆轉錄病毒獨特的基因組結構和生命周期使逆轉錄病毒在分子生物學研究和基因治療中其到了基因轉移載體的重要作用。人Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV-1）和人Ⅱ型免疫缺陷病毒（HIV-2）引起人的獲得性免疫缺陷綜合征。（AIDS）

1、、病原學：人Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV-1）和人Ⅱ型免疫缺陷病毒（HIV-2）引起人的獲得性免疫缺陷綜合征，簡稱艾滋病（AIDS）。

艾滋病病毒屬于逆轉錄病毒科、慢病毒屬。

2、致病機制：HIV對CD+4細胞有選擇性的親嗜性。病毒侵入細胞后，借助反轉錄酶合成DNA，與細胞DNA整合，并利用宿主細胞的酶系統進行生物合成，產生病毒產物，致使宿主細胞死亡，釋放出大量新病毒，攻擊新的靶細胞，從而使T4淋巴細胞數量不斷減少；

正常的T4細胞，通過CD+4細胞結合病毒與病毒表面蛋白，而被細胞毒作用T細胞（T8）識別，進而被殺傷。

T4淋巴細胞在免疫應答過程中起調節作用，與①單核-巨噬細胞、②細胞毒性T細胞③NK細胞、④B細胞等均有密切關系，所以T4細胞耗竭、功能下降，必將使免疫系統的多種功能發生缺陷。

3、傳播途徑：性接觸為最主要的傳播途徑；經注射途徑、孕婦胎盤以及破損皮膚等均可造成感染。

4、診斷：測定HIV感染的最簡便方法是測定HIV抗體。

5、預防：切斷各種傳播途徑。

脊髓灰質炎病毒屬于小核糖核酸病毒科，腸道病毒屬的病毒，主要經過糞-口途徑傳播。脊髓灰質炎病毒進入機體后，主要侵犯脊髓前角運動神經元。目前脊髓灰質炎在世界上許多國家，包括中國，已經消失。

口蹄疫病毒屬于小核糖核酸病毒科、口蹄疫病毒屬，是一種主要感染偶蹄動物的烈性傳染病，人和非偶蹄動物也可感染，但癥狀相對較輕。

口蹄疫一旦發生則呈暴發性流行，可以跳躍式傳播，在適合的氣候條件下還可通過風媒的途徑傳播。人感染口蹄疫病毒后只在口腔黏膜、手、足處皮膚出現水皰，可自愈，個別嚴重病例見于兒童。動物患口蹄疫后其生產性能急劇下降；對疫區要進行封鎖，封鎖期間疫區內正常的畜產品交易和生產活動都不能進行；

對確診為口蹄疫的動物要立即捕殺、銷毀。所以口蹄疫暴發后對畜、牧、業生產乃至整個國民經濟都會造成巨大的損失。

呼吸道合胞病毒屬于副粘病毒科、肺病毒屬。因在組織培養繁殖時能引起細胞融合而定為現在的名稱。呼吸道合胞病毒可以引起嬰幼兒產生嚴重的下呼吸道感染。1． 非細胞型微生物（病毒）：

（1）是最小的一類微生物，能通過除菌濾器。

（2）沒有典型的細胞結構，無產生能量的酶系統，只能在活細胞內生長增殖。（病毒屬之）2． 原核細胞型微生物（細菌、支原體、立克次氏體衣原體、螺旋體、放線菌）：（1）僅有原始核質，系呈裸(luo)露(lou)的環狀DNA團塊(kuai)無核膜或核仁。（2）細胞器不很完善，只有核蛋白體。

細菌的基本結構包括：細胞壁、細胞膜、細胞質、核質、核蛋白體等； 細菌的特殊結構包括：菌毛、鞭毛、莢膜等；細菌可分為自養菌和異養菌； 細菌按形態不同可分為：球菌、桿菌、螺形菌（螺菌和弧菌）。

在細菌的組成中，水為主要成分，而蛋白質類在固體成分中的比例最高。3． 核細胞型微生物（真菌）：（1）細胞核分化程度高，有核膜和核仁；（2）細胞質內細胞器完整。（真菌屬之）（3）不能在活細胞內內生長增殖。

機體的屏障作用包括：皮膚與粘膜、血腦屏障和胎盤屏障。毒力主要由侵襲力和毒素所決定。

毒素包括：外毒素（如金黃色葡萄球菌腸毒素、產毒性大腸桿菌腸毒素、白喉毒素、痙攣毒素、肉毒毒素、表皮剝脫毒素、霍亂腸毒素）和內毒素 外毒素包括：神經毒素、細胞毒素、和腸毒素；

細菌的內毒素為脂多糖成分，均由革蘭陰性菌產生、160℃，2-4小時才被破壞，其毒害效應不具有組織器官選擇性。（毒性作用包括DIC、Shwartzman現象、發熱反應、白細胞反應、內毒素血癥與內毒素休克）雖毒性作用較弱，但不能像外毒素那樣經甲醛脫毒而成為類毒素鱟（hou）。

試驗可以用對細菌內毒素的測定。致病性螺形菌有弧菌如霍亂弧菌，和螺菌如鼠咬熱螺菌。幼齡細菌菌體較長，老齡細菌往往呈多形態性。

細菌的結構：有些細菌在一定條件下可以發生轉化而進入休眠狀態，稱為芽孢。

其結構和性狀與其繁殖狀態有明顯不同；還有的細菌在環境因素的用下，還可以形成L型。細菌細胞壁的主要成分是肽聚糖，又稱為粘肽、胞壁質。肽聚糖原核型生物細胞的特有成分。肽聚糖（1）是細胞壁抗胞內高滲透壓

（2）保護細胞結構和功能完整的主體成分

（3）凡能破壞肽聚糖分子結構或抑制其合成的物質，都有抑菌或殺菌作用。革蘭氏陽性細菌的細胞壁：由肽聚糖及穿插于其內磷壁酸組成。其中（1）肽聚糖不僅曾數多、含量高，占細胞壁干重50%-80%；

（2）而且質地致密，是具有高機械強度的三維空間結構。磷壁酸分為壁磷壁酸和膜磷壁酸兩種。磷壁酸有很強的抗原性，是G+細菌的重要表面抗原，可用以對細菌進行血清學分型。

革蘭氏陰性細菌的細胞壁：依次包括肽聚糖、脂蛋白、外膜、類脂A、多糖等成分。還有胞質周圍間隙。

肽聚糖：陰性細菌的肽聚糖僅1-2層，占細胞壁干重的10%左右。是疏松薄弱的二維網狀結構。

脂蛋白：由蛋白和脂質組成，連接于外膜與肽聚糖之間。脂蛋白是陰性細菌含量最高的蛋白質，其功能是穩定外膜并將之固定于肽聚糖層。

外膜：外膜是陰性細菌的細胞壁特有成分，約占細胞壁干重80%。外膜由平行排列的脂質雙層構成，其內鑲嵌以具有不同功能的多種特異性蛋白；外膜還有性菌毛、噬菌體的受體。

脂多糖（LPS）:（稱為內毒素）：是細胞壁外膜伸出于細胞表面的特殊結構，由類脂A、核心多糖和特異性多糖組成。LPS對動物具有強烈毒性作用。LPS牢固地結合在細菌細胞表面，只在菌體溶解時才釋放，故稱為細菌內毒素。

類脂A：類脂A耐熱，是內毒素的主要成分和毒性部位類脂A無種屬特異性，各種細菌的類脂A都相同，故不同細菌產生的內毒素的毒性作用均相似。

核心多糖：位于類脂A的外層，具有屬特異性，同一屬的細菌其核心多糖的組成是相同的。特異性多糖：具有抗原性，G?細菌的菌體抗原（O抗原）

細胞膜：細胞膜由平行排列的脂質雙層組成，其內鑲嵌以多種蛋白和少量多糖； 細胞膜的主要功能：

（1）物質納泄：細胞膜具有選擇性通透作用，可選擇性地攝取營養物質，排出代謝產物。物質納泄是細胞膜的主動運轉過程，其中載體蛋白和酶類物質起重要作用。

（2）生物合成：細胞膜上有多種合成酶，是細菌細胞生物合成重要場所。肽聚糖、磷壁酸、磷脂、脂多糖、莢膜、鞭毛等多種菌體成分，都是在細胞膜上合成的。（3）呼吸作用：細胞膜上有多種呼吸酶，包括細胞色素和一些脫氫酶，可以運轉電子完成氧化磷酸化，參與細胞呼吸過程，與能量的產生、貯（zhu）存和利用有密切關系。

（4）形成中介體：中介體是細菌細胞內陷、折疊、卷曲形成的囊狀結構。多見于G+細菌。

細胞質：是由細胞膜包裹著的溶膠性物質，其基本成分是水、蛋白質、核酸、脂類、少量糖和無機鹽等。用光鏡和電鏡觀察細胞質，大小不等的顆粒。

（1）核糖體：核糖體是游離于細胞質中的微小顆粒，當mPNA連成多聚核糖體時，就成為蛋白質的合成場所。

（2）核質：細菌的遺傳物質是由裸露的雙股DNA回旋、盤繞、卷曲而成的松散網狀結構，無組蛋白包饒、無核膜、無核仁，故稱為核質或擬核。

核質具有細胞核功能，決定細菌性狀和遺傳特征。

（3）質粒：質粒是核質之外的雙股環狀DNA，攜有遺傳信息，控制非細菌存活所必須的某些特定性質，細菌的質粒具有自我復制、傳給子代、可幾個質粒共存于一個菌體、可自然丟失，以及可通過結合或轉化轉移至受體菌等特性。

醫學上重要的質粒有決定細菌性菌毛的F因子，決定細菌耐藥性的R因子，決定大腸桿菌產生大腸菌素的col因子等。

（4）胞質顆粒：細胞質中的顆粒多為暫時貯存的營養物質。較為常見的是異染顆粒多見于白喉桿菌、鼠疫桿菌、結核桿菌等

白喉桿菌的異染顆粒多在菌體的一端或兩端，故稱為極體，有助于鑒別細菌。特殊結構：莢膜（粘稠性物質）：細菌的莢膜有多種功能

（1）其中最重要的是抗吞噬作用。莢膜抗吞噬作用是構成細菌毒力的因素之一。（2）莢膜還有抗溶菌酶，抗補體、抗干燥作用

（3）在營養缺乏時莢膜還可作為營養物質而被吸收。莢膜具有抗原性，可以鑒別細菌和進行細菌分型。

鞭毛是由細胞質伸出的蛋白性絲狀物。一般認為鞭毛是細菌的運動器官，有鞭毛的細菌能活潑運動；鞭毛具有抗原性，稱“H”抗原。

菌毛許多G-細菌各別的G+細菌，細胞表面有極其纖細的蛋白性絲狀物，稱為菌毛。菌毛與細菌的運動無關，須用電鏡進行觀察。

細菌的芽孢：某些細菌在一定條件下變成為圓形或卵圓形的小體，稱為。由于芽孢在細菌細胞內形成。故常稱為內芽孢。

（1）芽孢攜有成套的核質、酶及合成菌體成分的各種機構，保存有細菌的全部生命活性；（2）在適宜條件下可以發芽而形成新的繁殖體。

因此，芽孢是細菌適應環境變化的特殊存活形式，亦即細菌的休眠狀態。

芽孢本身并不直接引起疾病，擔當其發芽轉化成繁殖后，則可迅速大量繁殖，引起疾病。在人類，有四種常見的嚴重疾病是由能形成芽孢的細菌引起。（1）炭疽(ju)桿菌引起炭疽(ju)菌病（2）肉毒桿菌引起肉毒毒素食物中毒（3）氣性壞疽病原菌引起氣性壞疽（4）破傷風桿菌引起破傷風（常見）。

細菌L型：細胞壁有維持細菌形態和保護菌體內部的重要作用。在某些因素影響下細菌可以失去細胞壁，形成細菌的細胞壁缺陷型，亦即細菌L型。

細菌L型需要高滲透壓培養基培養。細菌L型兼有多種繁殖方式，能以（1）二分裂方式（2）出芽方式（3）巨形體釋放顆粒方式進行增殖。L型菌落有三種類型：

（1）L型，呈油煎蛋樣，中心致密，透光性差，周邊透明呈顆粒狀；（2）G型，顆粒狀，整個菌落由透明顆粒組成，無核心部分；（3）F型，呈絲狀，菌落似L型，但周邊為透明性絲狀。

L型以引起慢性和反復發作性感染為其致病特點，主要致病物質是毒素。細菌的營養物質（無機鹽）：各類無機鹽的作用為：（1）構成菌體成分；

（2）調節菌體內外滲透壓；

（3）促進酶的活性或作為某些輔酶組分；

（4）某些元素與細菌的生長繁殖及致病作用密切相關。

生長因子：很多細菌在其生長過程中還必需一些自身不能合成的有機物質，成為生長因子。生長因子必須從外界得以補充，其中包括維生素、某些氨基酸、脂類、嘌呤、嘧啶等。根據細菌在代謝過程中對營養物質的需要，可將細菌分為自養菌和異養菌兩種營養類型。

自養菌：該類菌能以簡單的無機物為原料合成復雜的菌體成分。根據能量的來源，自養菌又分為（1）光能營養菌（2）化能營養菌。

異養菌：該類菌必須以多種有機物為原料，合成菌體原生質及獲得能量。異養菌又分為（1）腐生菌（2）寄生菌。

腐生菌：以死亡生物或腐敗食物等有機物作為營養物質；寄生菌：在活體的生物體內寄生，從宿主的有機物中取得營養。大部分病原菌是寄生菌。

營養物質進入菌體的方式有：（1）易化擴散（2）主動運轉（3）基因移位。細菌生長繁殖的條件：（1）充足的營養

（2）適宜的溫度：細菌生長的溫度極限為-7℃～90℃。各類細菌對溫度的要求不同，可分為嗜冷菌，最適生長溫度為（10℃～20℃）；嗜溫菌（20℃～40℃）；嗜熱菌（56℃～60℃）生長最好。病原菌均為嗜溫菌，最適溫度為人的溫度，即37℃，故實驗室一般采用37℃培養細菌。

（3）合適的酸堿度：多數病原菌最適pH為中性或弱堿性（pH7.2～7.6）（4）必須的氣體環境：根據細菌對氧的需要情況，可將其分為三類：

① 專性需氧菌，該類細菌僅能在有氧條件下生長； ②專性厭氧菌，只能在無氧環境下生長；

③兼性厭氧菌，大多數病原菌在有氧及無氧的條件下均能生長，稱之兼性厭氧菌。一般細菌代謝中都需要CO2，但多數細菌自身代謝所產生的CO2即可滿足需要。

有些細菌，如腦膜炎雙球菌、布魯氏菌，在初次分離時需要較高濃度的CO2（5%～10%）。細菌以簡單的二分裂方式無性繁殖，其突出的特點為繁殖速度快。

細菌分裂倍增的必須時間，成為代時，細菌代時決定于細菌種類又受環境條件影響，細菌代時一般為20′（分）～30′（分）。

細菌的生化反應：吲哚（I）、甲基紅（M）、VP(V)、枸櫞酸鹽（C）四種試驗，常用于鑒定腸道桿菌，合稱之為IMViC。

大腸桿菌呈“++--”，產氣桿菌為“--++”。細菌通過新陳代謝能合成很多在醫學上具有重要意義的代謝產物。

1熱原質：熱原質即菌體中的脂多糖，大多是G-菌產生的。注入人或動物體內能引起發熱反應，故名熱原質。熱原質耐高熱，高壓蒸汽滅菌121℃20′。

不能使其破壞，除去熱原質最好的方法是蒸餾。生物制品或注射液制成后除去熱原質比較困難，所以，必須使用無熱原質水制備。

2毒素與酶：細菌可產生內、外毒素及侵襲性酶，與細菌的致病性密切相關。內毒素即G-菌細胞壁的脂多糖，其毒性成分為脂質A。菌體死亡崩解后釋放出來。

外毒素是有G+菌及少數G-菌在生長代謝過程中釋放至菌體外的蛋白質。具有抗原性強、毒性強、作用特異性強的突出特點。

某些細菌可產生具有侵襲性的酶，能損傷機體組織，促使細菌的侵襲、擴散，是細菌重要的致病因素，如鏈球菌的透明質酸酶。等

3色素：有些細菌能產生色素，對細菌的鑒別有一定意義。細菌色素有兩類： ① 水溶性色素，能彌（mi）散至培養基或周圍組織。如綠膿桿菌產生的綠膿色素使培養基或膿汁（zhi）呈綠色。

② 脂溶性色素，不溶于水，僅保持在菌落內使之呈色而培養基顏色不變，如金黃色葡萄球菌色素。4抗生素：某些微生物代謝過程中可產生一種能抑制或殺死某些其他微生物或癌細胞的物質，稱抗生素。

稱抗生多由放線菌和真菌產生，細菌僅產生少數幾種，如多粘菌素、桿菌肽等。

5細菌素：某些細菌能產生一種僅作用于有近緣關系的細菌的抗菌物質，稱細菌素。細菌素為蛋白類物質，抗菌范圍很窄。

實驗室中細菌的常規培養應掌握以下幾點（細菌的人工培養）：（1）選用適當的培養基；

（2）必需的氣體環境，一般需氧及兼性厭氧置空氣中即可，專性厭氧則必須在嚴格無氧條件中培養。另外少數細菌在初次分離培養時，必須額外補充適量比例的CO2，如腦膜炎雙球菌、布魯氏菌等CO2的濃度在（5%～10%）時才生長；（3）溫度一般為37℃；

（4）培養時間多數為18～24小時，但根據菌種及培養目的應酌情處理，如培養細菌進行藥敏試驗時，最好選取其對數生長期，即6～12小時培養較適宜。結核菌生長緩慢，需延長培養時間數天至數周；

（5）為獲取大量細菌或其代謝產物，可采用連續培養法。培養過程中不斷通入適當氣體、更換培養液并校正pH值以維持細菌較長的對數生長狀態。

噬菌體：噬菌體是侵襲細菌或其他特殊微生物的病毒，它具有病毒的共同特性，噬菌體多數呈蝌蚪狀，由頭部和尾部組成，在電子顯微鏡下可見。

噬菌體中心為核酸，有尾噬菌體的核酸為雙股線狀DNA，蛋白質組成包繞核酸的頭部外殼和尾部。噬菌體通過吸附、穿入易感細胞，毒性噬菌體在細胞內經生物合成、裝配，最后裂解宿主細胞，放出大量成熟子代噬菌體，渾濁菌液可變清，固體培養物上出現空斑。

溫和噬菌體感染敏感菌后并不增殖，其基因整合于宿主菌基因組中，這種帶有噬菌體基因組的細菌即溶原性細菌。

噬菌體基因可隨細菌分裂而傳到子代細菌，在一定條件下，帶噬菌體的溶原狀態可自發停止，細菌被裂解。

噬菌體的種類多，分布廣，幾乎凡是有細菌的場所，就可能有相應噬菌體存在。

噬菌體有嚴格的宿主特異性，只寄居在易感宿主內，故可用于未知細菌的鑒定和分型。細菌的突變：生物體表型突然發生可遺傳的變化，成為突變。突變包括兩類：

（1）基因突變：亦稱點突變，是基因內部結構發生微細變化，如DNA分子上排列的堿基對的變化。有堿基置換和錯碼兩種類型。

（2）染色體畸(ji)變：是指染色體的一大段發生了變化，有易位、倒位、重復或缺失等數種。

在細菌中，這些變化常是致死性的，以基因突變較常見。按其發生原因，分自發突變和誘發突變兩類。自發突變和誘發突變可能不存有質的差別，僅是量的不同。

細菌的結構：有些細菌在一定條件下可以發生轉化而進入休眠狀態，稱為芽孢。

其結構和性狀與其繁殖狀態有明顯不同；還有的細菌在環境因素的用下，還可以形成L型。細菌細胞壁的主要成分是肽聚糖，又稱為粘肽、胞壁質。肽聚糖原核型生物細胞的特有成分。肽聚糖（1）是細胞壁抗胞內高滲透壓

（2）保護細胞結構和功能完整的主體成分

（3）凡能破壞肽聚糖分子結構或抑制其合成的物質，都有抑菌或殺菌作用。革蘭氏陽性細菌的細胞壁：由肽聚糖及穿插于其內磷壁酸組成。其中（1）肽聚糖不僅曾數多、含量高，占細胞壁干重50%-80%；

（2）而且質地致密，是具有高機械強度的三維空間結構。磷壁酸分為壁磷壁酸和膜磷壁酸兩種。磷壁酸有很強的抗原性，是G+細菌的重要表面抗原，可用以對細菌進行血清學分型。

革蘭氏陰性細菌的細胞壁：依次包括肽聚糖、脂蛋白、外膜、類脂A、多糖等成分。還有胞質周圍間隙。

肽聚糖：陰性細菌的肽聚糖僅1-2層，占細胞壁干重的10%左右。是疏松薄弱的二維網狀結構。

脂蛋白：由蛋白和脂質組成，連接于外膜與肽聚糖之間。脂蛋白是陰性細菌含量最高的蛋白質，其功能是穩定外膜并將之固定于肽聚糖層。

外膜：外膜是陰性細菌的細胞壁特有成分，約占細胞壁干重80%。外膜由平行排列的脂質雙層構成，其內鑲嵌以具有不同功能的多種特異性蛋白；外膜還有性菌毛、噬菌體的受體。

脂多糖（LPS）:（稱為內毒素）：是細胞壁外膜伸出于細胞表面的特殊結構，由類脂A、核心多糖和特異性多糖組成。LPS對動物具有強烈毒性作用。LPS牢固地結合在細菌細胞表面，只在菌體溶解時才釋放，故稱為細菌內毒素。

類脂A：類脂A耐熱，是內毒素的主要成分和毒性部位類脂A無種屬特異性，各種細菌的類脂A都相同，故不同細菌產生的內毒素的毒性作用均相似。

核心多糖：位于類脂A的外層，具有屬特異性，同一屬的細菌其核心多糖的組成是相同的。特異性多糖：具有抗原性，G?細菌的菌體抗原（O抗原）

細胞膜：細胞膜由平行排列的脂質雙層組成，其內鑲嵌以多種蛋白和少量多糖； 細胞膜的主要功能：

（1）物質納泄：細胞膜具有選擇性通透作用，可選擇性地攝取營養物質，排出代謝產物。物質納泄是細胞膜的主動運轉過程，其中載體蛋白和酶類物質起重要作用。

（2）生物合成：細胞膜上有多種合成酶，是細菌細胞生物合成重要場所。肽聚糖、磷壁酸、磷脂、脂多糖、莢膜、鞭毛等多種菌體成分，都是在細胞膜上合成的。

（3）呼吸作用：細胞膜上有多種呼吸酶，包括細胞色素和一些脫氫酶，可以運轉電子完成氧化磷酸化，參與細胞呼吸過程，與能量的產生、貯（zhu）存和利用有密切關系。

（4）形成中介體：中介體是細菌細胞內陷、折疊、卷曲形成的囊狀結構。多見于G+細菌。

細胞質：是由細胞膜包裹著的溶膠性物質，其基本成分是水、蛋白質、核酸、脂類、少量糖和無機鹽等。用光鏡和電鏡觀察細胞質，大小不等的顆粒。

（1）核糖體：核糖體是游離于細胞質中的微小顆粒，當mPNA連成多聚核糖體時，就成為蛋白質的合成場所。

（2）核質：細菌的遺傳物質是由裸露的雙股DNA回旋、盤繞、卷曲而成的松散網狀結構，無組蛋白包饒、無核膜、無核仁，故稱為核質或擬核。

核質具有細胞核功能，決定細菌性狀和遺傳特征。

（3）質粒：質粒是核質之外的雙股環狀DNA，攜有遺傳信息，控制非細菌存活所必須的某些特定性質，細菌的質粒具有自我復制、傳給子代、可幾個質粒共存于一個菌體、可自然丟失，以及可通過結合或轉化轉移至受體菌等特性。

醫學上重要的質粒有決定細菌性菌毛的F因子，決定細菌耐藥性的R因子，決定大腸桿菌產生大腸菌素的col因子等。

（4）胞質顆粒：細胞質中的顆粒多為暫時貯存的營養物質。較為常見的是異染顆粒多見于白喉桿菌、鼠疫桿菌、結核桿菌等

白喉桿菌的異染顆粒多在菌體的一端或兩端，故稱為極體，有助于鑒別細菌。特殊結構：莢膜（粘稠性物質）：細菌的莢膜有多種功能

（1）其中最重要的是抗吞噬作用。莢膜抗吞噬作用是構成細菌毒力的因素之一。（2）莢膜還有抗溶菌酶，抗補體、抗干燥作用

（3）在營養缺乏時莢膜還可作為營養物質而被吸收。莢膜具有抗原性，可以鑒別細菌和進行細菌分型。

鞭毛是由細胞質伸出的蛋白性絲狀物。一般認為鞭毛是細菌的運動器官，有鞭毛的細菌能活潑運動；鞭毛具有抗原性，稱“H”抗原。

菌毛許多G-細菌各別的G+細菌，細胞表面有極其纖細的蛋白性絲狀物，稱為菌毛。菌毛與細菌的運動無關，須用電鏡進行觀察。

細菌的芽孢：某些細菌在一定條件下變成為圓形或卵圓形的小體，稱為。由于芽孢在細菌細胞內形成。故常稱為內芽孢。

（1）芽孢攜有成套的核質、酶及合成菌體成分的各種機構，保存有細菌的全部生命活性；（2）在適宜條件下可以發芽而形成新的繁殖體。

因此，芽孢是細菌適應環境變化的特殊存活形式，亦即細菌的休眠狀態。

芽孢本身并不直接引起疾病，擔當其發芽轉化成繁殖后，則可迅速大量繁殖，引起疾病。在人類，有四種常見的嚴重疾病是由能形成芽孢的細菌引起。（1）炭疽(ju)桿菌引起炭疽(ju)菌病（2）肉毒桿菌引起肉毒毒素食物中毒（3）氣性壞疽病原菌引起氣性壞疽（4）破傷風桿菌引起破傷風（常見）。

細菌L型：細胞壁有維持細菌形態和保護菌體內部的重要作用。在某些因素影響下細菌可以失去細胞壁，形成細菌的細胞壁缺陷型，亦即細菌L型。

細菌L型需要高滲透壓培養基培養。細菌L型兼有多種繁殖方式，能以（1）二分裂方式（2）出芽方式

（3）巨形體釋放顆粒方式進行增殖。L型菌落有三種類型：

（1）L型，呈油煎蛋樣，中心致密，透光性差，周邊透明呈顆粒狀；（2）G型，顆粒狀，整個菌落由透明顆粒組成，無核心部分；（3）F型，呈絲狀，菌落似L型，但周邊為透明性絲狀。

L型以引起慢性和反復發作性感染為其致病特點，主要致病物質是毒素。

噬菌體：噬菌體是侵襲細菌或其他特殊微生物的病毒，它具有病毒的共同特性，噬菌體多數呈蝌蚪狀，由頭部和尾部組成，在電子顯微鏡下可見。

噬菌體中心為核酸，有尾噬菌體的核酸為雙股線狀DNA，蛋白質組成包繞核酸的頭部外殼和尾部。噬菌體通過吸附、穿入易感細胞，毒性噬菌體在細胞內經生物合成、裝配，最后裂解宿主細胞，放出大量成熟子代噬菌體，渾濁菌液可變清，固體培養物上出現空斑。溫和噬菌體感染敏感菌后并不增殖，其基因整合于宿主菌基因組中，這種帶有噬菌體基因組的細菌即溶原性細菌。

噬菌體基因可隨細菌分裂而傳到子代細菌，在一定條件下，帶噬菌體的溶原狀態可自發停止，細菌被裂解。

噬菌體的種類多，分布廣，幾乎凡是有細菌的場所，就可能有相應噬菌體存在。

噬菌體有嚴格的宿主特異性，只寄居在易感宿主內，故可用于未知細菌的鑒定和分型。細菌的突變：生物體表型突然發生可遺傳的變化，成為突變。突變包括兩類：

（1）基因突變：亦稱點突變，是基因內部結構發生微細變化，如DNA分子上排列的堿基對的變化。有堿基置換和錯碼兩種類型。

（2）染色體畸(ji)變：是指染色體的一大段發生了變化，有易位、倒位、重復或缺失等數種。

在細菌中，這些變化常是致死性的，以基因突變較常見。按其發生原因，分自發突變和誘發突變兩類。自發突變和誘發突變可能不存有質的差別，僅是量的不同。

1、腸桿菌科的共同生物學特性為直桿狀，革蘭染色陰性，大多數有菌毛，多數有鞭毛，以周鞭毛運動，或無鞭毛不能運動(塔特姆菌屬以極毛或側毛運動)。少數有莢膜或包膜。

2、腸桿菌的共同抗原為氨基糖聚合物，其菌體抗原(()抗原)為細胞壁的脂多糖層，鞭毛抗原(H抗原)存在于鞭毛蛋白，H抗原的特異性決定于氨基酸的排列順序和空間結構，不耐熱，60~C 30分鐘被破壞，細菌失去鞭毛后，運動隨之消失，菌體抗原外露，發生H—()變異。

3、腸桿菌科細菌兼性厭氧，有機營養型，兼具呼吸型(氧化型)和發酵型代謝。不需特殊營養，普通培養基上均能生長。

大多數種在37℃生長良好，某些種于25℃~30℃生長較好并更具活力。在營養瓊脂平板上形成大而濕潤灰白或黃色的粘液狀菌落，液體培養基中均勻渾濁，有菌 膜。分解葡萄糖和其他糖類產酸，許多種同時產氣。

4、氧化酶陰性（痢疾志賀菌1型和發光致病桿菌氧化酶陽性其它的腸桿菌科氧化酶陰性）。除痢疾志賀菌1型和發光致病桿菌以外的其他致病桿菌外，觸酶陽性。

除許多歐文菌、大多數致病桿菌及肺炎克雷伯菌臭鼻亞種、多源桿菌屬和耶爾森菌屬的某些株外，能還原硝酸鹽（除這5種菌以外腸桿菌科能還原硝酸鹽）。

5、腸桿菌科的關鍵特征是：

①氧化酶陰性和觸酶陽性(個別除外)； ②硝酸鹽還原(個別除外)和葡萄糖發酵；

③有動力者為周身鞭毛，而弧菌屬(除麥氏弧菌和產氣弧菌外)、氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬均為氧化酶陽性和端極單鞭毛或叢毛。

6、鑒定腸桿菌科的基本條件是：

發酵葡萄糖、氧化酶陰性、還原硝酸鹽。

分離腸道致病菌常用麥康凱瓊脂，其他還可用中國藍瓊脂、伊紅—美藍瓊脂、HE瓊脂。

概述 ：（1）霍亂是由霍亂弧菌引起的急性腸道傳染病，以劇烈的無痛性水樣腹瀉為特點，偶有嘔吐，未經治療的病例很快出現脫水、酸中毒、循環衰竭和腎衰。僅有輕刮腹瀉的病例較多見。（2）霍亂主要由01群的古典型和El Tor型以及0139群菌株引起。

（3）01群的霍亂弧菌又稱為凝集弧菌，非01群的霍亂弧菌又稱為不凝集弧菌，一般不引起腹瀉。01群霍亂弧菌依菌體中主要抗原成分A、B、C組分的不同分為不同亞群。各稱為小川型(含A、B抗原)、稻葉型（含A、C抗原）和彥島型(含A、B、C抗原)。

（4）0139群霍亂弧菌是第一個引起大范圍霍亂暴發流行的非0l群霍亂弧菌，其暴發最早出現于1992年在東南亞暴發和流行，并波及東南亞其他國家。0139群的一般生物學特征與01群El Tor型是比較相似的，有鞭毛，有與01群相同的霍亂毒素基因，兩者0抗原不同（①0139群和01群El To0抗原不同、②有相同的霍亂毒素基因），對0抗原的免疫血清兩者無交叉凝集.0139群霍亂弧菌的一個獨特特點是：有莢膜多糖，而01群菌株沒有。目前應用的0139群霍亂弧菌的國際標準株為M045。

霍亂通過受到感染者糞便或嘔吐物污染的食物或水傳播，感染霍亂后的潛伏期一般為l～2天，短至數小時，長可達5天。

在高鹽、高糖食品中，霍亂弧菌存活時間短，在堿性條件下要比其他腸道菌更容易存活，對酸類極為敏感，水中的弧菌l00℃煮沸一般短至l～2分鐘后即可被殺死。霍亂弧菌可在河水及底泥中越冬。霍亂弧菌不侵入上皮細胞，其在人的小腸內定居、增殖，并釋放霍亂毒素，從而引起霍亂病癥。霍亂毒素為A、B兩種亞基組成，每個毒素分子的A：B亞基數量之比為1：5，其中A亞單位又分為A1和A2兩部分，霍亂毒素的毒素酶活性部分在A1亞單位。

近年研究發現霍亂毒素基因位于溶原噬菌體基因組上，可在產毒與非產毒菌株之間轉移，而不像以前認為的穩定于染色體上。

霍亂毒素通過其B亞單位與人小腸上皮細胞上的GMl受體結合，因此用GMl—ELISA（酶聯免疫吸附實驗）的方法可檢測霍亂毒素的存在。

兔小腸段結扎試驗也可用來檢測霍亂弧菌是否產生霍亂毒素。霍亂弧菌引起的腸道局部黏膜免疫是霍亂保護性免疫的基礎。

針對菌體產生的抗菌免疫以及針對霍亂毒素的抗毒免疫是對霍亂免疫的因素。2．分離培養與鑒定

自患者新分離出的霍亂弧菌，在顯微鏡下觀察呈逗點狀或弧形，而經人工培養傳代后，顯微鏡下觀察呈類似大腸桿菌的桿狀。

對霍亂弧菌有選擇性培養基可應用自標本中進行霍亂弧菌的選擇培養。

慶大霉素瓊脂、4號瓊脂等培養基可用于霍亂弧菌的選擇性培養，為強選擇性的培養基，堿性瓊脂、堿性膽鹽瓊脂等為弱選擇性培養基。

霍亂弧菌在慶大霉素瓊脂選擇培養基平皿上的菌落形態為帶灰色、半透明、圓形扁平稍隆起、菌落邊緣濕潤。

在處理標本時可先進行增菌處理，增菌培養基一般用堿性蛋白胨水。

對于可疑霍亂感染者，取糞便進行堿胨水增菌時，在37~C培養至少培養6一8小時。

自河水、池塘水等外環境水中采水樣進行霍亂弧菌分離時，一般采集33．3cm以內的表層水，采集的水樣分離霍亂弧菌前，先用lmol/L 的Na0H將水樣pH值調整到8.4—9.2。在用堿性蛋白胨水增菌6—8小時后，霍亂弧菌主要在培養液的上層增殖最多。堿性蛋白胨水可用作霍亂弧菌的運輸保存培養基。

霍亂弧菌檢驗中的V—P試驗和第Ⅳ組霍亂噬菌體裂解試驗可作為區分01群古典型與El Tor型菌株的參考指標。

對0139群霍亂弧菌，則可用特異的診斷血清。

3．霍亂弧菌的①流行株與②非流行株（噬菌體型為1～6且生物型為a至f的為流行株）在中國利用噬菌體—生物分型方案，可將01群E1 Tor型霍亂弧菌區分為流行株與非流行株。噬菌體分型方案中共有5個分型噬菌體，命名為VPl、VP2、VP3、VP4和VP5。噬菌體型共有32個型，屬于流行株范疇的噬菌體型為l～6型。

分型方案中的生物分型包括：溶原性測定、對溶原性噬菌體的敏感性、山梨醇發酵試驗和溶血試驗，根據不同反應結果將生物型分成從a至l共12個型，其中a至f屬于流行株的范疇。

由此，噬菌體型為1～6且生物型為a至f的為流行株。對于霍亂弧菌兩類菌株(流行株與非流行株)的噬菌體—生物分型試驗，最少可用兩平皿兩試管來完成。區分流行株與非流行株的溶血試驗中所用的紅細胞為綿羊紅細胞。

溶原性測定試驗中用雙層瓊脂法，其中上層半固體瓊脂的濃度為0.7％。

進行山梨醇發酵實驗時，待檢霍亂弧菌接種pH8．0的山梨醇發酵管后37℃培養3小時觀察結果。霍亂弧菌流行株對山梨醇為慢發酵。

4、生化反應：兩個生物型（流行株與非流行株）的霍亂弧菌均能分解 葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、產酸不產氣。

遲緩發酵乳糖，不分解阿拉伯糖。

氧化酶、明膠酶試驗和ONA酶試驗均陽性。

能產生靛基質，霍亂紅反應（即亞硝基靛基質試驗）陽性。(二)其他弧菌（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

1．副溶血弧菌檢驗（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

副溶血弧菌是一種嗜鹽性弧菌。常存在于近海岸海水、海產品及鹽漬（zi）食品中。它是我國沿海地區最常見的食物中毒病原菌。

副溶血弧菌是一種腸道傳染病，主要癥狀有腹痛，腹瀉、脫水、畏寒、嘔吐、發熱和頭痛，糞便多呈水樣或湖狀，少數為粘液血便。病程持續1～7天，一般恢復較快。病后免疫力不強，可重復感染。副溶血弧菌已確定有12種不同的0抗原和約60種不同的K抗原。副溶血弧菌所致細菌性食物中毒的主要污染食品來自于海產晶。副溶血弧菌為一種噬鹽菌，可在含8％NaCl胨水中生長。

副溶血性弧菌食物中毒是由于食入未煮熟的海產品或污染本菌的鹽腌食物而引起。潛伏期1~26小時，一般6~10小時。

大部分致病菌能產生一種特征性的溶血反應(稱為神奈川現象)。

致病菌株能產生的耐熱直接溶血素和不耐熱溶血素是副溶血弧菌的主要致病物質。檢驗方法：（1）標本采集：主要是患者的糞便、可疑食物。

（2）分離培養：首先稱取樣品25g，加225ml 3.5％滅菌鹽水，用均質器打碎或用乳缽磨碎，接種氯化鈉瓊脂平板和嗜鹽再菌選擇性瓊脂平板各1個，同時取10ml，加入100 ml增菌液中（40g/LNaCl），放37℃8～16小時培養后，進行平板分離，于37 ℃18—24小時培養后取出觀察。（3）挑取上述可疑菌落，轉種3.5％氯化鈉三糖鐵斜面，37℃、24小時觀察結果。

（4）涂片鏡檢：將三糖鐵培養基反應可疑者(底層變黃，葡萄糖產酸不產氣，斜面不變，乳糖蔗糖不分解，有動力，不產生硫化氫)進行涂片革蘭染色鏡檢形態。革蘭染色鏡檢形態。

①形態染色：革蘭陰性桿菌，隨培養基不同菌體形態差異較大，有卵圓形、棒狀、球桿狀、梨狀、弧形等多種形態。兩極濃染。

菌體一端有單鞭毛，運動活潑。無芽孢、無莢膜。

②培養特性：營養要求不高，在普通培養基中加入適量NaCl即能生長。NaCl最適濃度為35g/LNaCl，在無鹽培養基中不生長。

生長所需 PH 7.0～9.5，最適 PH 7.7。需氧，在液體培養基表面形成菌膜。在厭氧環境下生長較慢。①在35g/LNaCl瓊qiong脂平板上呈蔓延生長，菌落邊緣不整齊，凸起、光滑濕潤，不透明； ②在副溶血弧菌專用選擇培養基上形成1~2.5mm，稍隆起、渾濁、無粘性、綠色菌落； ③在SS平板上不生長或長出1~2mm扁平無色半透明的菌落，不易挑起，挑起時呈粘絲狀。

④在羊血瓊脂平板上，形成2~3mm、圓形、隆起、濕潤、灰白色菌落，某些菌株可形成餿苧蜥溶血 ⑤在TCBS瓊脂（副溶血弧菌專用選擇培養基）上不發酵蔗糖，菌落綠色。

⑥生化反應：所有用于該菌的生化反應（副溶血弧菌）培養基需加入30g/LNaCl。本菌（副溶血弧菌）在70g/LNaCl培養基生長，在無鹽或10%NaCl以上培養基不生長。能分解葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、淀粉產酸不產氣，不分解乳糖、蔗糖；靛基質，甲基紅試驗陽，V-P、H2S、尿素酶試驗陰性；

神奈川試驗是致病菌株能使人或兔紅細胞發生溶血，對馬紅細胞不溶血，稱神奈川試驗陽性。

（5）、嗜鹽性試驗 將上述可疑培養物分別接種于不同濃度的鹽胨水中，37℃ 24小時培養后觀察生長情況，在無鹽和l0％以上鹽的胨水中不生長，在7％鹽的胨水中生長良好者進行下列有關試驗。（6）生化試驗（總結）：分別接種各類生化培養基，放37℃，除V-P、靛基質、甲基紅試驗培養48小時后加試劑觀察外，其他均可在24小時觀察。動物試驗

將上述各類反應的副溶血性弧菌接種3.5％氯化鈉胨水，經37℃16～18小時培養后，小鼠腹腔注射0.3ml，觀察2～3天，將死亡小鼠進行解剖并做分離培養。預防原則

預防與其他細菌性食物中毒相似。如對水產品及鹽漬zi（漬是臟的意思）品等應煮熟后食用。可用復方新若明、慶大霉素、氟哌酸等抗菌藥物治療。

2、擬態弧菌（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）“擬態弧菌與霍亂弧菌相似——形態學、培養特性、抗原結構”是引起胃腸炎和某些腸外感染的病原菌。

該菌形態學和培養特性及抗原結構與霍亂弧菌相似，但對01群霍亂弧菌標準診斷血清不凝集，可與霍亂弧菌相鑒別。

另外擬態弧菌與霍亂弧菌生化特性上最重要的區別在于擬態弧菌不發酵蔗糖（霍亂弧菌發酵蔗糖）。V-P試驗、酒石酸鹽及對多粘菌素B的耐藥性等也可作為區別這兩種弧菌（擬態弧菌和霍亂弧菌）的參考試驗。

3．其他（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）①河弧菌 ②霍利斯弧菌

③弗尼斯弧菌等可引起急性胃腸炎

④創傷弧菌可引起重癥創傷性感染和原發性敗血癥，⑤海魚弧菌可引起創傷性及耳部感染，⑥有跡象表明溶藻弧菌與胃腸炎有關系，但還需進一步確定。大腸桿菌是人和動物腸道中的正常菌群，一般對人無害。

本菌為革蘭陰性的短桿菌，其抗原結構有3種，即菌體抗原(O抗原)、包膜抗原(K抗原)和鞭毛抗原(H抗原)。

（1）0抗原是血清分型的基礎，目前已發現有170多種，其中一些特殊的血清型具有病原性，能引起人類腹瀉，故稱為致腹瀉性大腸桿菌，而由其引起之腸炎稱致腹瀉性大腸桿菌腸炎。世界各地廣泛存在本菌感染，嬰兒腹瀉中檢出率較高，在成人中亦可呈散在或暴發流行。臨床表現為：旅游者腹瀉或食物中毒。新生兒病房及托幼機構可引起交叉感染而發生流行。

根據發病機制、臨床表現、流行病學特征、0抗原血清型及細菌的毒力測定可將致腹瀉性大腸桿菌分為5類：

①致病性大腸桿菌(EPEC)②腸產毒素性大腸桿菌(ETEC)③侵襲性大腸桿菌(EIEC)④出血性大腸桿菌(EHEC)⑤腸集聚粘附性大腸桿菌(EAggEC)。(一)病原學

①腸致病性大腸桿菌(EPEC)的主要毒力因子有菌毛、志賀樣毒素(SLTs)和LEE毒力島。②腸產毒性大腸桿菌(ETEC)的主要毒力因子為熱不穩定毒素、熱穩定毒素及與致病性相關的定居因子。

③腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)在毒力因子和致病機制上與志賀菌基本一致。

④腸出血性大腸桿菌(EHEC)的主要毒力因子有志賀樣毒素(SLTs)、溶血素、LEE毒力島及其他未知的毒力因素。

⑤腸集聚性粘附大腸桿菌(EAggEC)是一類新發現的致瀉性大腸桿菌，目前已知的毒力因子有菌毛和熱穩定腸毒素。(二)臨床表現

ETEC（腸產毒性大腸桿菌）感染的主要臨床癥狀是水樣腹瀉、腹痛、惡心和低熱；日腹瀉可達8一12次，可持續4～5天。

EPEC（腸致病性大腸桿菌）的主要臨床癥狀是發熱、不適、嘔吐、腹瀉，糞便中含有大量粘液而無血，癥狀可持續2周以上，多引起社區的小型暴發。

EIEC（腸侵襲性大腸桿菌）引起的腹瀉在臨床癥狀上與細菌性痢疾不可區分，主要是發熱、腹部劇烈疼痛與不適、毒血癥、水樣腹瀉，糞便中有少量粘液和血。

EHEC（腸出血性大腸桿菌）感染的主要臨床癥狀為突發腹部痙攣性疼痛、不適、初期水樣便，進而轉為鮮血樣糞便、不發熱或低熱，可伴有上呼吸道癥狀，白細胞計數稍高或正常。

EAggEC（腸集聚性粘附大腸桿菌）感染主要與小兒頑固性腹瀉有關，癥狀可持續2周或2周以上。(三)診斷標準

1、流行病學資料 致瀉性大腸桿菌（腸致瀉性大腸埃希菌）引起的腹瀉一年四季均可發病，夏秋季多發，有不潔飲食(水)和(或)與腹瀉患者、腹瀉動物、帶菌者接觸史。如為食物源性則常為集體發病及有共進可疑食物史。

2、臨床表現

腹瀉：大便每日≥3次，糞便的性狀異常，可為稀便、水樣便、粘液便、膿血便，可伴有惡心、嘔吐、食欲不振、發熱、腹痛及全身不適等。病情嚴重者會引起脫水、電解質紊亂甚至休克。（已除外霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒）。

3、實驗室檢查

(1)糞便常規檢查：糞便可為稀便、水樣便、粘液便、血便或膿血便，鏡檢可見多量紅白細胞，亦可有少量或無細胞。

(2)病原學檢查：糞便中可檢出腸致瀉性大腸桿菌（EPEC）或檢出特異性抗原、核酸或從血清中檢出特異性抗體。

臨床診斷：ETEC（腸產毒性大腸桿菌）感染的主要臨床癥狀是水樣腹瀉、腹痛、惡心和低熱；日腹瀉可達8一12次，可持續4～5天。致瀉性大腸桿菌（腸致瀉性大腸埃希菌）引起的腹瀉一年四季均可發病，夏秋季多發，有不潔飲食(水)和(或)與腹瀉患者、腹瀉動物、帶菌者接觸史。如為食物源性則常為集體發病及有共進可疑食物史。病原診斷：臨床診斷腹瀉：大便每日≥3次，糞便的性狀異常，可為稀便、水樣便、粘液便、膿血便，可伴有惡心、嘔吐、食欲不振、發熱、腹痛及全身不適等。

病情嚴重者會引起脫水、電解質紊亂甚至休克。（已除外霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒）。4．鑒別診斷

由腸致病性大腸桿菌（EPEC）引起的腸炎需要與下列疾病進行鑒別診斷： ①痢疾、②沙門菌腸炎、③空腸彎曲菌腸炎、④病毒性腸炎、⑤幼兒急疹等。由腸產毒性大腸桿菌引（ETEC）起的腸炎需要與下列疾病進行鑒別診斷 主要與①霍亂鑒別，其次需要與②病毒性腸炎以及③沙門菌腸炎鑒別。由腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）引起的腸炎需要與下列疾病進行鑒別診斷 與細菌性痢疾非常相似（腸侵襲性大腸桿菌與細菌性痢疾非常相似），很難鑒別，確定診斷需要有EIEC（腸侵襲性大腸桿菌）血清凝集試驗陽性，同時大便培養所得的大腸桿菌作豚鼠角膜試驗陽性。（總結：EIEC血清凝集試驗陽性與大便培養所得的大腸桿菌作豚鼠角膜試驗陽性才能診斷）(四)、治療

1．腸致病性大腸桿菌（EPEC）引起的腸炎的治療采取抗菌消炎、控制腹瀉、糾正脫水酸中毒等綜合措施。

(1)飲食療法：基本同輪狀病毒腸炎。目前對腹瀉病兒多主張繼續喂養，在脫水較重時，可暫不喂養。用靜脈輸液或口服補液療法(()RS)糾正脫水及電解質紊亂。待脫水基本糾正，病兒有食欲時即可開始母乳喂養，母乳中IgA對大腸桿菌有一定抑制作用。

人工喂養患兒可用l／2牛奶，或脫脂奶與米湯混合，定時定量喂養，2個月以上嬰兒，每4小時喂1次，夜間可免喂1次。

逐步提高牛奶濃度及增加總量，經5天左右恢復至病前飲食。

病情越重、年齡越小者，腸道功能恢復越慢，計劃飲食時間需要適當延長。

(2)液體療法：按患兒脫水程度，脫水性質(多為等滲，少數為低滲，高滲罕見)及代謝性酸中毒輕重，制定輸液計劃，初6～8小時補充累計損失量，可分批靜脈滴人，等滲脫水的補液，總張力為1／2～2／3張，低滲脫水為2／3張至等張。

有尿后，注意鉀的補充。有佝僂病時可適當補鈣。輕、中度脫水，也可采用()RS（口服補液療法）補液。

脫水糾正，繼之以l／3～1／4張的液體補充生理需要。

(3)抗菌藥物：成人輕型病例可不用抗生素。通過調整腸道正常菌群而白愈。嬰幼兒一般均需用敏感抗生素。既往用新霉素口服治療，療效極佳，現多已產生耐藥。口服慶大霉素或多粘菌素E有一定效果，但遠不如當初的新霉素。

目前臨床上試用①諾氟沙星、②環丙沙星或③鹽酸黃連素，另加④甲氧芐啶(TMP)等治療；療效有待進一步證實。

(4)對癥治療及支持療法：有人報道用山莨菪堿足三衛八位封閉可減少便次。胃蛋白酶、胰酶、鞣酸蛋白、中藥肥兒散等，可促進大便性狀好轉并加強消化功能，但尚需臨床實踐證實。對于重癥及營養不良患兒，可少量多次輸血或白蛋白，以改善傘身狀況。

(5)護理：保持肛周皮膚清潔于燥，防止臀紅及肛周膿腫。臀紅外線局部烤干，肛周花粉、鞣酸軟膏等。

2．腸產毒性大腸桿菌（ETEC）引起的腸炎的治療。

ETEC為有自限性傾向的疾病，輕者可不用抗生素治療，重者使用抗生素可縮短病程及排菌時間。主要選用①環丙沙星或②諾氟沙星，合并用思密達或鹽酸黃連素。劑量同EPEC（腸致病性大腸桿菌）腸炎的治療。

本病治療重點是糾上脫水、酸中毒和低血鉀癥。輕癥可用0RS液（口服補液療法），重者需要靜脈補液．首選“5：4：1”液，即每1000ml液體加氯化鈉5g、碳酸氫鈉4g、氯化鉀1g。

3、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）引起的腸炎的治療，同細菌性痢疾的治療，重癥者應用抗生素。

4、腸出血性大腸桿菌（EHEC）引起的腸炎的治療，是否應該使用抗菌藥，學術上尚無定論。有學者提出，抗菌藥對本病不能縮短病程，不能減少并發癥的發生，甚至有可能促進釋放Vero毒素，導致合并溶血性尿毒癥綜合征(HUS)的發生，因此提出要避免使用抗牛素。

但也有學者提出，原則上可按其他感染性腹瀉來處理。重癥應使用抗生素，如①環丙沙星、②鹽酸黃連素等；

輕癥，可采用腸黏膜保護劑①思密達或②微生態凋節劑。同時，注意，糾正脫水，加強支持療法。合并溶血性尿毒癥綜合征(HUS)者，按HUS（溶血性尿毒癥綜合征）搶救。HUS的治療：

(1)治療腎衰：按急性腎衰處理，保證足夠熱量，嚴格限制人量，每日液體總量為前一天的丟失量加300—500mi，兒童加400ml／m2體表面積。必要時血液透析。無尿24小時以內者。透析效果好。(2)輸血：血紅蛋白50g/L以下者靜脈輸新鮮紅細胞，以次2.5～5ml/kg每6～12小時1次，維持血紅蛋白在7()～80g/L。必要時輸血小板。

(3)其他：肝素與激素的應用，學術上有不同看法，應慎用。

5．腸集聚粘附性大腸桿菌（EaggEC）引起的腸炎的治療，同腸致病性大腸桿菌（EPEC）引起的腸炎的治療。

(五)監測：感染性腹瀉屬于中國丙類傳染病，在各省沒有監測點，負責對包括腸致瀉性大腸桿菌性腹瀉在內的感染性腹瀉的監測工作。

腸致瀉性大腸桿菌（EPEC）的監測工作主要是對腹瀉患者、重點人群、食品、糞便、蒼蠅等進行監測。在監測點內對改水、糞管等措施的落實情況及其他防疫措施作出科學評價。(六)控制措施 1．預防措施

(1)健康教育：利用多種形式深入開展健康教育，宣傳講究衛生，減少疾病發生。(2)預防接種：目前尚沒有成熟的、可供大范圍使用的疫苗。

(3)預防原則：應以改善公共衛生條件、切斷傳播途徑為主，同時加強對傳染源的管理，采取綜合性預防措施，對重點人群、集體單位應特別注意預防暴發和流行。

2．患者、接觸者及其直接接觸環境的管理，發現患者及時報告；立即隔離及治療患者；采樣做病原學或血清學檢查，盡快查明病原；

對患者的嘔吐物、排泄物隨時消毒；對患者直接接觸的環境進行消毒；對接觸者進行管理，必要時給予預防服藥。

3、流行期措施：流行期應采取緊急措施，加大宣傳教育的力度和范圍。

醫療機構做到早診斷，早報告。對患者做好隔離、消毒知識的宣傳，落實各項消毒措施，防止交叉感染。

加強衛生監督，管好食品和集市貿易，進行飲水消毒。對暴發疫情應立即作出疫情報告，衛生防疫部門應盡快查明暴發原因，采取果斷措施切斷傳播途徑，防止疫情蔓延。

一、增 菌

樣品采集后應盡快檢驗。除了易腐食品在檢驗之前應預冷藏外，一般不冷藏。

以無菌手續稱取檢樣25g，加在225ml營養肉湯中，以均質器打碎1分鐘或用乳缽加滅菌砂磨碎。取出適量，接種乳糖膽鹽培養基（測大腸菌群的培養基），以測定大腸菌群MPN，其余的移人500ml廣口瓶內，于36℃土1℃培養6小時。

挑取l環，接種于1管30ml腸道菌增菌肉湯內，于42℃培養18小時。

二、分 離

將乳糖發酵陽性的乳糖膽鹽發酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍瓊脂平板；

污染嚴重的檢樣，可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱或伊紅美藍平板，于36℃±1℃培養18～24小時，觀察菌落。

不但要注意乳糖發酵的菌落，同時也要注意乳糖不發酵和遲緩發酵的菌落。

三、生化試驗

1、自鑒別平板上直接挑取數個菌落分別接種三糖鐵瓊脂(TSI)或克氏雙糖鐵瓊脂(KI)。

同時將這些培養物分別接種蛋白胨水、半固體、pH7．2尿素瓊脂、KCN肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗培養基。以上培養物均在36℃培養過夜。2．TSI（三糖鐵瓊脂）斜面產酸或不產酸，底層產酸，H2S陰性，KCN陰性和尿素陰性的培養物為大腸埃希菌。

TSI（三糖鐵瓊脂）底層不產酸，或H2S、KCN、尿素有任意一項為陽性的培養物，均非大腸埃希菌。必要時做氧化酶試驗和革蘭染色。

四、血清學試驗

1、假定試驗 挑取經生化試驗證實為大腸埃希菌的瓊脂培養物，用①致病性大腸埃希菌、②侵襲性大腸埃希菌和③產腸毒素大腸埃希菌多價O血清和④出血性大腸埃希菌O157血清做玻片凝集試驗。

當與某一種多價O血清凝集時，再與該多價血清所包含的單價O血清作試驗。如與某一個單價O血清呈現強凝集反應，即為假定試驗陽性。

2、證實試驗 制備O抗原懸液，稀釋至與Mac Farland3號比濁管相當的濃度。原效價為1：160～1：320的O血清，用0.5％鹽水稀釋至1：40。稀釋血清與抗 原懸液在10mm×75mm試管內等量混合，作單管凝集試驗。

混勻后放于50℃水浴箱內，經16小時后觀察結果。如出現凝集，可證實為該O抗原。(一)病原學：

沙門菌屬是一大群寄生于人類和動物腸道中，生化反應和抗原構造相似的革蘭陰性桿菌。目前至少有67種O抗原和2000個以上的血清型，但對人致病的僅少數，如引起①腸熱癥的傷寒、②副傷寒甲和③乙沙門菌，以這類菌的感染最多見（①腸熱癥的傷寒、②副傷寒甲和③乙沙門菌）

其他對動物致病，有些菌種偶兒可傳染給人，引起食物中毒或敗血癥，如①鼠傷寒沙門菌（最常見）、②腸炎沙門菌、③鴨沙門菌、④豬沙門菌等，其中以鼠傷寒沙門菌最常見。

沙門菌屬除雞沙門菌和雛沙門菌，都有周身鞭毛。一般無莢膜。營養要求不高，在普通平板上形成中等大小、五色半透明的S型菌落。

沙門菌屬不發酵乳糖或蔗糖。大多產生硫化氫。對葡萄糖、麥芽糖和甘露醇發酵，除傷寒沙門菌產酸不產氣外，其他沙門菌均產酸產氣。

傷寒沙門菌(一十一一)、甲型副傷寒沙門菌(一十一一)、乙型副傷寒沙門菌(一十一V)和鼠傷寒沙門菌(一十一V)的IMViC(吲哚形成、甲基紅反應、VP反應和枸櫞酸鹽利用試驗)的結果分別為一十一一、一十一一、一十一V、一+一V。沙門菌的生化檢驗主要用于菌屬鑒別。

傷寒沙門菌與大腸埃希菌在糖發酵方面的主要差別之一在于傷寒沙門菌不分解乳糖。(大腸埃希菌分解乳糖)對沙門菌的選擇分離培養可用SS瓊脂，在SS瓊脂上其菌落呈現微黃色或無色。在發病早期(一般l周內)可從血液中分離到該菌，且此時從血液中的分離率最高；

l周后可從糞便或尿中分離到，發病第3周時采取糞便標本進行病原分離率最高；骨髓培養是細菌學確診的最好方法，在發病第1周時也較高，檢出率可達到90％以上。膽汁標本也可以進行分離。

沙門菌屬抗原非常復雜，其分類也很復雜。完整的血清學分類僅包括具有分類診斷意義的3類抗原：即O抗原、H抗原和K抗原，另外K抗原又有兩種，即Vi抗原和M抗原（Vi抗原和M抗原屬于K抗原）。O抗原系耐熱性菌體抗原，由多糖—磷脂復合物組成； H抗原系不耐熱抗原，存在于鞭毛中，由鞭毛素組成；

K抗原存在于莢膜或被膜中，其中Vi抗原是覆蓋在細菌細胞壁LPS（脂多糖）外的莢膜多糖抗原。傷寒沙門菌和丙型副傷寒沙門菌具有Vi抗原。

O抗原由多個成分組成，引起人類疾病的沙門菌大多數屬A—E組，O抗原刺激機體產生IgM類抗體。H抗原分第1相和第2相，第l相特異性高，第2相特異性低，每組內根據H抗原不同可再分為種或型，H抗原主要刺激機體產生IgG類抗體。傷寒沙門菌、丙型副傷寒沙門菌等少數菌新從患者標本中分離時有Vi抗原，存在于菌表面，可阻止O抗原與相應抗體的凝集反應，抗原性弱，刺激機體產生的抗體效價低，當體內有菌存在時有一定量抗體，細菌清除后，抗體隨之消失，故測定（Vi抗原屬于K抗原分類）有助于檢出傷寒帶菌者。

同一種或同一血清型的沙門菌，有時可用噬菌體進一步分為若干噬菌體型，在流行病學上可用于追蹤傳染源和調查傳播途徑。

沙門菌的抗原有時發生變異，這對菌型診斷及在制備菌苗上有重要意義，變異的類型包括○1H—O、○2S-R、○3V-W變異和位相變異。

肥達試驗為用已知的傷寒沙門菌O、H和甲、乙型副傷寒沙門菌H抗原與不同稀釋度的待檢血清作定量凝集試驗，根據抗體的含量和動態變化

以輔助臨床診斷傷寒病原菌的一種血清學試驗。在病起的第2周，血清中抗體就可有較明顯增多，恢復期達到高峰。

一般O凝集價≥l：80，H凝集價≥l：160時才有診斷價值，有時單次效價增高不能定論，病程中應逐周復查，若效價依次遞增或恢復期效價增加≥4才有意義。IgM類O抗體出現較早，持續約半年，消失后不易受傷寒等病原菌的非特異性抗原刺激而重新出現。IgG類H抗體出現較晚，維持時間長達數年，消失后易受非特異性抗原刺激而能短暫重現。因此若O、H凝集效價均超過正常值，則傷寒或副傷寒感染的可能性大；如兩者均低，則患傷寒的可能性甚小；若O不高H高，有可能是預防接種或是非特異性回憶反應；如O高H不高，則可能是感染早期或與傷寒沙門菌O抗原有交叉反應的其他沙門菌(如腸炎沙門菌)。少數病例，在整個病程中，肥達試驗始終在正常范圍內，可能是早期使用大量抗生素，或患者免疫功能低下等因素。(二)流行病學

人是傷寒副傷寒的貯主，少數情況下，家畜家禽也可能是副傷寒的貯主。該病潛伏期一般為1—3周，由患者、帶菌者的糞便或尿污染食物和水而傳播。傳播因素還包括生活用品、蒼蠅等，還可經接觸動物傳播。

未感染過或未接種過菌苗的人或動物均易感，傷寒沙門菌為胞內寄生菌，病愈后有較牢固免疫力。(三)臨床表現

1、傷寒和副傷寒沙門菌：由傷寒沙門菌，副傷寒甲、乙、丙沙門菌引起。前驅期癥狀有 發熱、不適、全身疼痛等。

主要臨床表現為持續高熱，出現相對緩脈，肝脾腫大，全身中毒癥狀顯著，皮膚出現玫瑰疹，外周血白細胞明顯下降。嚴重的有出血或腸穿孔并發癥。腎中的細菌可隨尿排出。以上病變在疾病的第2～3周出現。若無并發癥，自第2周以后病情開始好轉。

2、炎型(食物中毒)沙門菌：是最常見的沙門菌感染，由攝人大量鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌等污染的食物引起。

潛伏期6—24小時。主要癥狀為發熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉，一般在3～5天內較快恢復。偶爾低熱持續，腹瀉不停，可長達10一14天。病后很少有慢性帶菌者。常為集體性食物中毒。

3、敗血癥沙門菌：多見于兒童或免疫力低下的成人。病菌以豬霍亂沙門菌、丙型副傷寒沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌等常見。

癥狀嚴重，有高熱、寒戰、厭食和貧血等。腸道中的病菌人血，轉移至多個組織、器官導致感染，例如腦膜炎、骨髓炎、膽囊炎、心內膜炎等，但胃腸炎很少見。(四)預防

應切實采取以切斷傳播途徑為主導的綜合性措施，開展群眾性健康教育，認真開展以“三管一滅??(管水、管食物、管糞便和消滅蒼蠅)為中心的群眾性衛生活動，防止水源和食品污染。對傷寒的預防，疫苗的接種也是措施之一。目前我國普遍使用的（傷寒疫苗的接種）傷寒疫苗為Vi疫苗。

（五）實驗室：沙門菌檢驗

1、前增菌和增菌

凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應經過前增菌。鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經加工的食品不必經過前增菌。

2、分離

取增菌液1環，劃線接種于一個亞硫酸鉍瓊脂平板和一個DHL瓊脂平板(或HE瓊脂平板、WS或LS瓊脂平板)。兩種增菌液可同時劃線接種在同一個平板上。于36℃±1分別培養18～24小時(DHL、HE、WS、SS)或40—48小時(BS)，觀察各個平板上生長的菌落特征。

3、生化試驗

（1）．自選擇性瓊脂平板上直接挑取數個可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂。在三糖鐵瓊脂內，腸桿菌科常見屬種的反應結果不同。

在三糖鐵瓊脂內只有斜面產酸并同時硫化氫(H2S)陰性的菌株可以排除，其他的反應結果均有沙門菌的可能，同時也均有不是沙門菌的可能。（2）、在接種三糖鐵瓊脂的同時，再接種蛋白胨水(供作靛基質試驗)、尿素瓊脂(pH7.2)、氰化鉀(KCN)培養基和賴氨酸脫羧酶試驗培養基及對照培養基各1管，于361℃±1培養18～24小時，必要時可延長至48小時，按表7—3判定結果。（看結果在后面）

4、血清學分型鑒定（1）抗原的準備

一般采用1.5％瓊脂斜面培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。

O血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的(如2.5％～3％)培養基上再檢查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應時，可挑取菌苔于1ml生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。H抗原發育不良時，將菌株種在0.7％～8％半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查；

或將菌株通過裝有0.3％～0.4％半固體瓊脂的小玻管l一2次，自遠端取菌培養后再檢查。（2）O抗原的鑒定

用A—F多價O血清做玻片凝集試驗，同時用生理鹽水做對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙形菌株，不能分型。

被A—F多價O血清凝集者，依次是O4；O3、10；O7；O8；O9；O2 和O11因子血清做凝集試驗。根據試驗結果，判定O群。

被O3、10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19單因子血清做凝集試驗，判定E1、E2、E3、E4各亞群，每一個O抗原成分的最后確定均應根據O單因子血清的檢查結果，沒有O單因子血清的要用兩個O復合因子血清進行核對。

不被A～F多價O血清凝集者，先用57種或163種沙門菌因子血清中的9種多價O血清檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清所包括的O群血清逐一檢查，以確定O群。（3）H抗原的鑒定

屬于A～F各O群的常見菌型，依次用H因子血清檢查第1相和第2相的H抗原。

不常見的菌型，先用163種沙門菌因子血清中的8種多價H血清檢查，如有其中一種或兩種血清凝集，則再用這一種或兩種血清所包括的各種H因子血清逐一檢查，以確定第l相和第2相的H抗原。

每一個H抗原成分的最后確定均應根據H單因子血清的檢查結果，沒有H單因子血清的要用兩個H復合因子血清進行核對。

檢出第1相H抗原而末檢出第2相H抗原的或檢出第2相H抗原而未檢出第1相H抗原的，可在瓊脂斜面上移種1～2代后再檢查。如仍只檢出一個相的H抗原，要用位相變異的方法檢查其另一個相。單相菌不必作位相變異檢查。

位相變異試驗方法如下：(1)小玻管法：將半固體管(每管約1～2m1)在酒精燈上溶化并冷至50℃，取已知相的H因子血清0.05～0.1ml，加入溶化的半固體內，混勻后，用毛細吸管吸取分裝于供位相變異試驗的小玻管內，俟凝固后，用接種針挑取待檢菌，接種于一端。將小玻管平放在平皿內，并在其旁放一團濕棉花，以防瓊脂中水分蒸發而于縮，每天檢查結果，待另一相細菌解離后，可以從另一端挑取細菌進行檢查。培養基內血清的濃度應有適當的比例，過高時細菌不能生長，過低時同一相細菌的動力不能抑制。一般按原血清l：200～1：800的量加入。

(2)小倒管法：將兩端開口的小玻管(下端開口要留一個缺口，不要平齊)放在半固體管內，小玻管的上端應高出于培養基的表面，滅菌后備用。

臨用時在酒精燈上加熱溶化，冷至50℃，挑取因子血清1環，加入小套管中的半固體內，略加攪動，使其混勻；

俟凝固后，將待檢菌株接種于小套管中的半固體表層內，每天檢查結果，待另一相細菌解離后，可從套管外的半固體表面取菌檢查，或轉種1％軟瓊脂斜面，于37℃培養后再做凝集試驗。

簡易平板法：將0.7％～0.8％半固體瓊脂平板烘干表面水分，挑取因子血清l環，滴在半因體平板表面，放置片刻，待血清吸收到瓊脂內，在血清部位的中央點種待檢菌株，培養后，在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。

(4)、Vi抗原的鑒定：用Vi因子血清檢查。已知具有Vi抗原的菌型有：①傷寒沙門菌，②丙型副傷寒沙門菌，③都柏林沙門菌。

5、菌型的判定和結果報告：綜合上述生化試驗和血清學分型鑒定的結果，按照常用沙門菌抗原表或有關沙門菌屬抗原表判定菌型，并報告結果。(一)病原學

志賀菌為腸桿菌科志賀菌屬，革蘭陰性，需氧，無鞭毛、不能運動，引起細菌性痢疾。

根據抗原結構的不同，分為A、B、C、D四群，其中A群為痢疾志賀菌，B群為福氏志賀菌，C群為鮑氏志賀菌，D群為宋內志賀菌。

志賀菌的主要毒力因素包括：○1其表面結構脂多糖、○2細菌侵襲性以及○3分泌的志賀毒素。

志賀毒素由A和B亞單位組成，A亞單位是毒素的活性部位，能抑制蛋白合成。

志賀菌A群Ⅰ型產生的志賀毒素具有○1神經毒、○2細胞毒和○3腸毒性。目前已知各群志賀菌的侵襲相關基因都位于質粒上。

志賀菌在普通瓊脂平板上生長形成中等大小、半透明的光滑型菌落(D群的宋內志賀菌：培養中常出現扁平的粗糙型菌落)。

其O抗原為群特異性抗原，K抗原為型特異型抗原，分解葡萄糖，產酸不產氣，不分解乳糖。

（總結 志賀菌：革蘭陰性，需氧，無鞭毛、不能運動、分解葡萄糖，產酸不產氣，不分解乳糖，在普通瓊脂平板上生長形成中等大小、半透明的光滑型菌落，D群的宋內志賀菌：培養中常出現扁平的粗糙型菌落）(二)流行病學

志賀菌菌型較多，菌群分布隨國家、地區、年份的不同而有不同，基本上發展中國家以A、B、C群多見，而發達國家以D群感染為主。

目前在我國以B群福氏志賀菌為多，其次是D群。患者和帶菌者是傳染源，病菌隨患者或帶菌者糞便排出，通過污染食物、水、生活接觸或借蒼蠅傳播等，使易感的接觸者發病。

人對志賀菌較易感，10～200個細菌就可使10％～50％志愿者致病。志賀菌痢疾（A群為痢疾志賀菌）在中國全年均有發生，以夏秋兩季多見。

志賀菌感染的一些特點包括：（A群）痢疾志賀菌感染患者病情較重，（D群的）宋內志賀菌多引起輕型感染，（B群）福氏志賀菌感染易轉變為慢性；急性中毒性菌痢以小兒多見；感染后免疫期短。(三)病原分離

取新鮮糞便粘液或膿血部分接種于SS瓊脂選擇培養基上，并按常規鑒定菌群與菌型。注意在三糖鐵培養基上，痢疾志賀菌與傷寒沙門菌的表現相似。需要增菌時，如自可疑食品中進行分離，可先用GN增菌液增菌，提高檢出率。(四)診斷標準

細菌性痢疾的（志賀菌）診斷原則為依據流行病學史、癥狀、體征及實驗室檢查進行綜合診斷，確診則需依賴于病原學檢查。

志賀菌根據癥狀體征可診斷為○1急性非典型菌痢、○2急性典型菌痢、○3急性中毒型菌痢和○4慢性菌痢。

志賀菌感染病程在2個月以上屬慢性。(五)防治原則

1．預防：應以切斷傳播途徑為主，同時加強對傳染源管理的綜合性防治措施。對重點人群、集體單位應特別注意預防暴發或流行。

2．治療：一般對癥治療中注意進易消化飲食，注意水電解質平衡，可給口服補液鹽(ORS)，必要時ORS（口服補液鹽）和靜脈輸液同時應用。

病原治療中，細菌性痢疾可以是自限性的，一般情況下可以不使用抗生素。對癥狀比較嚴重的患者，抗生素治療可縮短病程、減輕病情和縮短排菌期。

對休克型菌痢進行抗感染、抗休克處理。對腦型菌痢需抗感染、防治腦水腫和呼吸衰竭。

（六）實驗室志賀菌檢驗

1、增菌

稱取檢樣25g，加入裝有225mLGN增菌液的500ml廣口瓶內，固體食品用均質器以8000～10000轉／分打碎1分鐘，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用金屬匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培養6～8小時。培養時間視細菌生長情況而定，當培養液出現輕微混濁時即應中止培養。

2、分離和初步生化試驗

（1）、取增菌液1環，劃線接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個；另取l環劃線接種子麥康凱瓊脂平板或伊紅美藍瓊脂平板1個，于36℃培養18～24小時，志賀菌在這些培養基上呈現無色透明不發酵乳糖的菌落。

（總結：志賀菌在HE瓊脂平板或SS瓊脂平板：麥康凱瓊脂平板或伊紅美藍瓊脂平板（志賀菌）在這些培養基上呈現無色透明不發酵乳糖的菌落）。

（2）、挑取平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體各1管。一般應多挑幾個菌落，以防遺漏，經36℃培養18～24小時，分別觀察結果。（3）、下述培養物可以棄去。

①在三糖鐵瓊脂斜面上呈蔓延生長的培養物。

②在18～24小時內發酵乳糖、蔗糖的培養物。（因為志賀菌不發酵乳糖、蔗糖的培養物）

③不分解葡萄糖和只生長在半固體表面的培養物。（因為志賀菌分解葡萄糖和不能只生長在半固體表面的培養物）

④產氣的培養物。（因為志賀菌產酸不產氣）

⑤有動力的培養物。（因為志賀菌無鞭毛、不能運動所以無動力的培養物）⑥產生硫化氫的培養物。（因為志賀菌不產生硫化氫的培養物）

（4）凡是乳糖、蔗糖不發酵，葡萄糖產酸不產氣(福氏志賀菌6型可產生少量氣體)，無動力的菌株，可做血清學分型和進一步的生化試驗。

3、血清學分型和進一步的生化試驗（1）、血清學分型 挑取三糖鐵瓊脂上的培養物，做玻片凝集試驗。先用4種志賀菌多價血清檢查，如果由于K抗原的存在而不出現凝集，應將菌液煮沸后再檢查；如果呈現凝集，則用A1、A2、B群多價和D群血清分別試驗。如系B群福氏志賀菌，則用群和型因子血清分別檢查。可先用群因子血清檢查，再根據群因子血清出現凝集的結果，依次選用型因子血清檢查。

4、種志賀菌多價血清不凝集的菌株，可用鮑氏多價1、2、3分別檢查，并進一步用1～15各型因子血清檢查。

如果鮑氏多價血清不凝集，可用痢疾志賀菌3～12型多價血清及各型因子血清檢查。（2）進一步的生化試驗

在作血清學分型的同時，應作進一步的生化試驗，即：○1葡萄糖銨，○2西蒙檸檬酸鹽，○3賴氨酸和○4鳥氨酸脫羧酶，○5pH7.2尿素，○6KCN生長，以及○7水楊苷的分解。除宋內菌和鮑氏13型為鳥氨酸陽性外，志賀菌屬的培養物均為陰性結果。必要時還應做革蘭染色檢查和氧化酶試驗，應為氧化酶陰性的革蘭陰性桿菌。生化反應不符合的菌株，即使能與某種志賀菌分型血清發生凝集，仍不得判定為志賀菌屬的培養物。

已判定志賀菌屬的培養物，應進一步作5％乳糖發酵，甘露醇、棉子糖和甘油的發酵和靛基質試驗。志賀菌屬4個生化群的培養物，應符合該群的生化特性。但福氏6型的生化特性與A群或C群相似。

3、結果報告：綜合生化和血清學的試驗結果判定菌型并作出報告。一)病原學

小腸結腸炎耶爾森菌病，是由小腸結腸炎耶爾森菌感染引起的，與鼠疫耶爾森菌和假結核耶爾森菌構成了這個屬的3個主要致病種（小腸結腸炎耶爾森菌病、鼠疫耶爾森菌、假結核耶爾森菌），為革蘭陰性小桿菌，對營養要求不嚴格，在0℃～42℃時均可生長，是腸道致病菌中能在4℃生長的少數細菌之一（小腸結腸炎耶爾森菌病、鼠疫耶爾森菌、假結核耶爾森菌）。

小腸結腸炎耶爾森菌的鑒定主要依靠27種生化反應和動力試驗，本病原體在37℃生長時無動力，而在25℃~28℃生長時有動力形成。該病原體常污染多種食品和水源。

（總結：小腸結腸炎耶爾森菌是由小腸結腸炎耶爾森菌感染引起的，該菌屬于腸桿菌科，耶爾森菌屬。小腸結腸炎耶爾森菌是 腸道致病菌中能在4℃生長的少數細菌之一，37℃生長時無動力，而在25℃~28℃生長時有動力形成。腹瀉病種之—）小腸結腸炎耶爾森菌有如下特征：

1、抗原：這種病原體有革蘭陰性腸桿菌特異性的多糖抗原和腸道菌的共同抗原，小腸結腸炎耶爾森菌血清型是根據脂多糖O抗原確定的。

現在國際上常報告的有57個抗原因子，將小腸結腸炎耶爾森菌分成50多個血清型。

2、V、W因子：由質粒編碼的抗原，是—種毒力決定因子，也是毒力的標記。小腸結腸炎耶爾森菌在37℃生長時需要鈣離子（小腸結腸炎耶爾森菌），而在25℃～28℃生長時不需要鈣離子（小腸結腸炎耶爾森菌）。

3、自凝性：小腸結腸炎耶爾森菌在含有10％小牛血清的組織培養液內37℃培養1天，發生自凝，而在25℃則不發生自凝。

目前的研究已證實這種自凝作用是由質粒編碼的外膜蛋白A(YOPA)引起的。（YOPA—外膜蛋白A）

4、侵襲性：小腸結腸炎耶爾森菌能侵入腸上皮細胞，并且能侵入到人工培養的Hep-2及Hela細胞內，這種侵入性是由染色體編碼的侵襲素所決定的。

目前還發現染色體上有另一基因位點，稱作粘附侵襲位點(ail)，編碼的—種蛋白質，是介導低水平的粘附侵襲作用。

5、外膜蛋白：小腸結腸炎耶爾森菌都具有一個約60kb的占力質檢，編碼10多種外膜蛋白(YOPs)，現已證實這些外膜蛋白中的—些與致病密切相關。

有關小腸結腸炎耶爾森菌病原體的研究還在不斷深入。(二)臨床表現：

1、急性腸炎和急性胃腸炎：是小腸結腸炎耶爾森菌病最常見的臨床類別，表現為腹瀉和發熱，病情輕重不一，部分患者伴有腹痛和嘔吐。

2．有類似于闌尾炎的癥狀：有報道在外科手術后的闌尾內容物中分離別小腸結腸炎耶爾森菌。

3、慢性反應性關節炎及結節性紅斑：這兩種癥狀（慢性反應性關節炎及結節性紅斑）引起的機制可能相似，很有可能都是該菌腸道感染后的遲發型免疫后遺癥。

目前的研究發現，小腸結腸炎耶爾森菌質粒編碼的外膜蛋白A(YopA)是引起關節炎的關鍵因素，有學者推測該菌產生的超抗原也是引起這兩種癥狀（慢性反應性關節炎及結節性紅斑）另一個原因。

4、耶氏肝炎：前蘇聯和我國學者都發現該菌感染可引起肝炎，稱“耶氏肝炎”。這種病原體引起的與②病毒性肝炎癥狀相似。區別是前者（①肝炎）高熱、抗生素治療效果顯著，然后根據血清學和病原體檢測作出進一步診斷。

5、其他：還有一些少見癥狀，如敗血癥等全身性癥狀。這些癥狀雖然少見，但死亡率較高。(三)診斷標準

對小腸結腸炎耶爾森菌病的確診主要依靠病原體分離及血清學診斷。

在未分離到病原體之前，應根據臨床癥狀(先有發熱、腹瀉，不久發生咽喉炎、扁桃體炎、頸部淋巴結腫大、關節炎以及結節性紅斑等)作出初步診斷。

目前還發展了一些分子生物學方法，以利于對該菌的感染作出快速診斷，如PCR技術(聚合酶鏈反應)，針對于外膜蛋白的單克隆抗體檢查技術等。但這些方法推廣卻受到一定限制。

(四)治療原則： 一般說來小腸結腸炎耶爾森菌感染癥狀較輕，主要采取支持療法，癥狀很快消失。對于一些嚴重病例，特別是一些腸外型的感染應及時采用抗生素治療。鏈霉素和慶大霉素是臨床上常用的藥物。（小腸結腸炎耶爾森菌常用的藥物是鏈霉素和慶大霉素）

(五)監測：小腸結腸炎耶爾森菌常存在于一些冷藏食品中，這類感染通常稱作“冰箱病”因此食品檢驗是對該菌最好的監測方法。(六)控制措施：

1．控制傳染源：(1)發現和治療患者，執行隔離制度，以免病菌擴散。(2)在我國，牛、豬等家畜是主要的傳染源，加強管理，防止排泄物污染水源和食物。(3)有一些鼠類和昆蟲也是攜帶有對人類致病性的小腸結腸炎耶爾森菌，因此消滅也是防治該病的主要環節。2． 切斷傳播途徑：(1)加強環境衛生管理。(2)保護水源。

3． 個人防護：(1)講究個人衛生，不食不潔食物，防止病從口入。(2)不喝牛水(水源極易被該菌污染)和未消毒的牛奶。(一)病原學：

彎曲菌為革蘭陰性菌，為嚴格的微需氧菌。鏡下觀察菌細胞末端是尖的，且形態細長，呈弧形、螺旋形或“海鷗展翅”狀，一端或兩端各有一根鞭毛。(二)流行病學：

彎曲菌為人獸共患病，與人類感染有關的主要是家禽和家畜，也是主要的傳染源，患者和帶菌者也可以成為傳染源。

最常見的傳播途徑是進食污染的食物和水。人群普遍易感。本病（空腸彎曲菌）的胃腸炎癥狀表現不一，可由無癥狀的帶菌、輕型腹瀉以至嚴重腹瀉，潛伏期為l一10天，多數為3～5天。主要癥狀有發熱、腹瀉和腹痛，少數有嘔吐等。與細菌性痢疾相似，但病情較輕。

空腸彎曲菌是彎曲菌中最常見的病原菌，感染后可表現為輕微的胃腸炎或重型的小腸結腸炎。近年報道該菌（空腸彎曲菌）感染與格林巴利綜合征的發生密切相關。(三)病原分離 取新鮮糞便標本或肛拭子插入C—B運送培養基，在24小時內或經增菌后接種于相應抗生素的硫乙醇酸鈉培養基（空腸彎曲菌），置42℃、微氧(濃度5％～10％)、高二氧化碳(3％～4％)的條件下培養約48小時。作生化試驗和藥敏試驗以進一步確定細菌種。(一)克雷伯菌屬（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

克雷伯菌屬細菌一般不致病，當機體免疫力低下時，能引起多種感染。對人類關系密切的有①肺炎克氏菌和②臭鼻克氏菌和③鼻硬結克氏菌。

肺炎克氏菌是形態較短粗的革蘭陰性桿菌，常見端端排列，無鞭毛，多數有菌毛，有較厚的莢膜。營養要求不高，在普通培養基上生長的菌落大，呈粘液狀，相互融合，以接種環挑之易拉成絲。

肺炎克氏菌是除大腸桿菌外的最重要條件致病菌，已成為醫源性感染的重要細菌。

存在于人類腸道、呼吸道及水和谷物中，當機體免疫力降低或應用免疫抑制劑，也可因長期大量使用抗生素導致菌群失調而引起感染。

常見有支氣管炎、肺炎、泌尿道和創傷感染，有時導致嚴重的敗血癥、腦膜炎、腹膜炎等。(二)變形桿菌屬（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

變形桿菌屬中與醫學關系密切的包括①普通變形桿菌和②奇異變形桿菌，為多形性的革蘭陰性桿菌，可為球形或絲狀，無莢膜，幼齡培養物中有周身鞭毛，運動活潑。有菌毛，可粘附至植物和真菌細胞表面，但不與動物組織細胞或紅細胞表面吸附。需氧或兼性厭氧。

營養要求不高。在固體培養基上常呈擴散生長，形成以菌接種部位為中心的厚薄交替、同心圓形的層層波狀菌苔，稱為遷徙xi(遷移的意思)生長現象。

在血瓊脂平板上有溶血現象。能迅速分解尿素，是本屬的一個重要特征。個別菌株發酵乳糖。變形桿菌根據菌種抗原分群，再以鞭毛抗原分型，現至少分為100多個血清型。

X19、X2、和XK菌株含有特殊菌體O抗原，可與某些立克次體的部分抗原發生交叉反應，故可替代立克次體作為抗原與患者血清進行凝集反應，此稱為外斐試驗，以輔助診斷斑疹傷寒、恙蟲病等立克次體病。

變形桿菌屬在自然界分布廣泛，人和動物腸道也經常存在。對人類一般不致病，在特定條件下可單獨或與其他細菌混合感染。

變形桿菌是尿道感染最常見菌之一，其尿素酶可分解尿素產氨，使尿液pH增高，堿性環境有利于變形桿菌的生長。

腎結石和膀胱結石的形成與變形桿菌屬可能也有關，因該菌屬可使尿堿化促進磷酸銨鎂結石的形成。變形桿菌還能引起皮膚、耳、乳突小房、眼等局部感染，以及腹膜炎、敗血癥等，有的菌株可引起食物中毒。

(三)腸桿菌屬（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

為革蘭陰性的桿菌或球桿菌，具周鞭毛，能運動，有些菌株有莢膜，無芽胞。兼性厭氧，無特殊營養要求，最適生長溫度為30℃。

在營養培養基中均勻渾濁，有菌膜。對大多數對糖類產酸產氣，但44.5℃只產酸不產氣，IMViC(吲哚形成、甲基紅反應、VP反應和枸櫞酸鹽利用試驗)反應大多為+ +--。

是腸桿菌科中最常見的環境菌群，但不是腸道的常居菌群。在水和日常食品中比埃希菌屬更常見，常自尿道感染和敗血癥時分離出，為機會病原菌（腸桿菌）。（腸桿菌比大腸埃希菌感染更常見）(四)沙雷菌屬（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

與醫學有關的是①粘質沙雷菌和②液化沙雷菌，革蘭陰性菌，具周鞭毛、能運動，一般無莢膜，不產芽胞。

兼性厭氧，營養要求不高，菌落不透明，常呈白色、粉紅色或紅色。

液體培養物形成菌膜。觸酶強陽性，氧化酶陰性，發酵葡萄糖產氣或不產氣，VP陽性，DNA酶陽性，少數菌株可產生非水溶性紅色色素，臨床分離的粘質沙雷菌35℃大多不產色，轉種22℃培養數天后可恢復產色。為環境常居菌群，常導致醫院內感染，為機會病原菌。(五)哈夫尼菌屬（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

只有1個種，即蜂房哈夫尼菌。革蘭陰性桿菌，具周鞭毛，無莢膜，不產芽胞。兼性厭氧菌，菌落光滑、濕潤、半透明，呈灰色帶亮的表面和完整的邊緣，最適生長溫度為25℃～30℃，本菌的動力和許多生化反應在35℃時為陰性。觸酶陽性，氧化酶陰性，發酵葡萄糖產酸產氣。

為周圍環境常居菌，常導致醫院內感染，為機會性病原菌。(六)普城菌屬（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

革蘭陰性菌，兩端鈍圓，有多形性，有周鞭毛，運動活潑，無芽胞，無莢膜。

兼性厭氧菌，在25℃時動力比35℃時好。菌落小而透明，在含①膽鹽培養基上較扁平和透明，在②SS瓊脂上產硫化氫，中心黑色（普城菌培養基的生長特點SS）。

液體培養時，培養基均勻渾濁生長，表面有菌膜，管底有沉淀。尿素和苯丙氨酸酶陽性，乳糖陰性，枸櫞酸鹽和阿東醇陽性，而鳥氨酸陰性。

為常見的環境和腸道寄居的正常菌群，也是醫院內感染常見的機會菌，常分離自腹瀉和尿道感染。(七)摩根菌屬（腸道菌疾病檢驗—腸道屬）

革蘭陰性菌，在固體和液體培養基上的生長特性與普城菌屬的一致。

某些株30℃以上不形成鞭毛和不能運動。尿素和苯丙氨酸酶陽性，乳糖陰性，枸櫞酸鹽和阿東醇陰性，而鳥氨酸陽性。

為常見的環境和腸道寄居的正常菌群，也是醫院內感染常見的機會菌，常分離自腹瀉和尿道感染。(一概述人體感染某些寄生蟲后，會引起急性腹瀉和慢性腹瀉，多為慢性腹瀉，或在急性發作后經常再發如艾滋病相關性腹瀉中，以原蟲尤其是最常見的隱孢子蟲引起的感染性腹瀉，往往病程遷延，治療困難，已成為艾滋病死亡原因之一（寄生蟲性腹瀉）。

去某些地區旅游會導致較高的藍氏賈第鞭毛蟲感染性腹瀉。現已知能引起寄生蟲性腹瀉的寄生蟲有50多種。

寄生蟲性腹瀉的發病機制主要為①滲出型、②滲透型、③分泌型、④脂肪瀉及腸外致病等。寄生蟲性腹瀉與其他腸道病原體引起的腹瀉往往難以鑒別，但有些流行病學和臨床體征方面還是有差別的，主要表現在（寄生蟲性腹瀉）：潛伏期長，起病緩慢；呈地方性分布特征；發熱少見；在艾滋病相關腹瀉中常見；蠕蟲性腹瀉患者外周血嗜酸性粒細胞增多；確診須依據病原學檢查；針對病原治療有效。(二)阿米巴痢疾（寄生蟲性腹瀉—腸道菌疾病檢驗）

其病原體為溶組織內阿米巴，感染者中有90％為無癥狀的攜帶者，約10％的感染者由于阿米巴滋養體侵襲腸壁組織引起腹痛、腹瀉、粘液血便等癥狀。本病易復發、遷延成慢性。如病原體由腸道借血流或直接蔓延而侵入腸外組織，則產生相應臟器的阿米巴病等腸外并發癥。

最常見為①阿米巴肝膿腫，其次還有②阿米巴肺膿腫、③腦膿腫及其他部位的膿腫。溶組織內阿米巴有①滋養體和②包囊二期。滋養體又分為大小兩型

①寄生于結腸腸腔或腸壁內，以二分裂法繁殖。主要傳染源為無癥狀帶包囊者、慢性患者和恢復期患者其糞便中不斷排出包囊。

②急性期患者主要排出包囊，故不成為主要傳染源。該病的傳播主要通過包囊污染飲水、食物等而感染。污染的手、蒼蠅、蟑螂等可攜帶包囊而傳播。糞便中檢出阿米巴滋養體或包囊是確診的重要依據。(三)藍氏賈第鞭毛蟲（寄生蟲性腹瀉—腸道菌疾病檢驗）

藍氏賈第鞭毛蟲屬于寄生于腸道的一種鞭毛蟲，營二分裂繁殖。其生活史分①滋養體和②包囊兩個時期，與之相應，其形態也有這兩種。