第一篇：實驗報告等電點聚焦測蛋白質等電點

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等電點聚焦測蛋白質等電點 1.了解蛋白質的兩性解離性質和等電點聚焦的原理； 2.學習測定蛋白質等電點的方法并掌握圓盤電泳技術。

二.實驗原理 等電點聚焦（IEF）是在電場中分離蛋白質技術的一個重要發展，IEF 實質 就是在穩定的 pH 梯度中按等電點的不同分離兩性大分子的平衡電泳方法。

在電場中充有兩性載體和抗對流介質，當加上電場后，由于兩性載體移動的 結果，在兩極之間逐步建立起穩定的 pH 梯度，當蛋白質分子或其它兩性分子存 在于這樣的 pH 梯度中時，這種分子便會由于其表面電荷在此電場中運動，并最 終到達一個使其表面靜電荷為 0 的區帶，這時的 pH 則是這種分子的 pl。聚焦在 等電點的分子也會不斷地擴散。一旦偏離其等電點后，由于 pH 環境的改變，分 子又立即得到正電荷或負電荷，從而又向 pl 遷移。因此，這些分子總是處于不 斷地擴散和抗擴散的平衡之中，在 pl 處得以“聚焦”。

三.實驗步驟 1.凝膠制備 按表 1 的比例配制 4ml 工作膠液，在真空干燥器中抽氣 10min。每組 4 管，每管 加膠液 1.8ml。混勻后立即注入到已準備好的凝膠管中，膠液加至離管頂部 1cm 處，在膠面上再覆蓋 3mm 厚的水層，應注意不要讓水破壞膠的表面，室溫下放置 20?30min 即可聚合。

表 1 凝膠工作液配比 凝膠母液（丙烯酰胺 30%甲叉雙丙烯 酰胺 0.8%）

1ml 10%±硫酸銨 0.02ml 水 2.68ml 載體兩性電解液 0.15ml 蛋白樣品液 0.1ml,0.05ml TEMED 0.02ml 2.電泳 吸去凝膠柱表面上的水層，將凝膠管垂直固定于圓盤電泳槽中。于電泳槽下槽加 入0.2 %的 500ml 硫酸作正極；上槽加入 0.5 %的 800ml 乙醇胺作負極打開電源，/ 4

將電壓恒定為 300V,因為聚焦過程是電阻不斷加大的過程，故聚焦電泳過程中，電流將不斷下降，降至穩定時，即表明聚焦已完成，繼續電泳約 30min 后，停止 電泳，全程約需 3h。

3.剝膠 電泳結束后，取下凝膠管，用水洗去膠管兩端的電極液，按照柱狀電泳剝膠的方 法取出膠條，以膠條的正極為“頭”，負極為“尾”，正極端呈酸性，負極端呈堿 性。剝離后，量出并記錄凝膠的長度。

4.固定 取其中的凝膠條 3 根置于一個小培養皿內，倒入 10%放在三氯乙酸固定液中固定，約半小時后，即可看到膠條內蛋白質的白色沉淀帶。

固定完畢，倒出固定液用直 尺量出膠條長度 L i 和正極端到蛋白質白色沉淀帶中心，即聚焦部位的長度 L 2 o 5.pH 梯度的測量 切段法：將未經固定的 1 根膠條，按照從正極端（酸性端）到負極端（堿性端）的順 序切成相等的 10 段，按次放人有標號的、裝有 0.0IM 氯化鉀的試管中，浸泡過 夜。然后用 pH 計測出每管浸泡液的 pH 并記錄。

四?實驗結果 1.凝膠條的長度及染色蛋白帶的位置 凝膠條編號 1 2 3 4 固定前的長度 7.8cm 7.8cm 7.4cm 7.7cm L o

固定后的長度 7.7cm 7.8cm 7.4cm 未染色，測 pH L 1

梯度 蛋白帶距酸端 1.3cm 1.4cm 1.3cm

距離 L 2

蛋白質距正極 1.32cm 1.4cm 1.3cm

實際長度 L S

2.pH 梯度表及其相應標準曲線 標號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 長度 /cm 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 pH 值 3.05 3.72 5.04 6.76 7.24 7.99 8.62 9.58 10.1 4 10.1 8 / 4

蛋白質樣品等電點的計算：

蛋白質聚焦部位距凝膠條正極端的實際長度 =固定后的蛋白區帶中心距凝膠條正 極端的距離*固定前凝膠條長度/固定后凝膠條長度 則將上述數據代入 L F L 2 *

-L O，求出蛋白質距正極實際長度 L s 分別為 1.3cm、1.4cm、L I

1.3cm o 由凝膠條 1、2 和 3 及其相應蛋白帶距離可計算出蛋白帶距酸端的平均距 離：(1.3+1.4+1.32)/3=1.34 ②計算出蛋白質聚焦部位距凝膠條正極端的實際長度后，直接從 pH 梯度曲線上 求出該蛋白質等電點。

得出其標準公式為：y = 0.8372X + 2.6273 則待測蛋白質的等電點為 0.8372*1.34+2.6273=3.75 五?實驗分析及討論(1)實驗結果測得的樣品蛋白的等電點為 3.75，通過查常見蛋白質等電點參 考值表格可知，其為 B-卵黃脂磷蛋白。由于記錄凝膠長度及蛋白質距正極的距 離存在讀數誤差，所以也可能是伴花生球蛋白(3.7-5.0)o(2)

等電點聚焦測蛋白質等電點分辨率高，可將等電點相差 0.01 — 0.02pH 單位 的蛋白質分開。不像一般電泳易受擴散作用影響，使區帶越走越寬；聚焦電泳則 能抵消擴散作用，使區帶越走越窄。同時，很稀的樣品也可以聚焦而濃縮，實驗 操作起來也簡單方便。

(3)其存在其不足之處是在實驗操作過程當中，讀數的取值、樣品溶液是否含 鹽、在等電點時蛋白質是否溶解或變性，都會影響實驗結果。因為鹽會增大電流 量，產生熱量；鹽分子移至兩極時，將產生酸或堿，中和兩性電解質。由于這些 影響因素的存在，個人認為利用這一種方法還不足以鑒定出蛋白質種類。/ 4

附 常見蛋白質等電點參考值

第電點 實 m 質 SFfe

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第二篇：點贊電商 點贊

佛山點贊網絡科技有限公司（點贊電商）成首批進駐佛山市青年創業基地電商托管商3月19日，市青年創業孵化基地落戶大瀝廣佛智城，該創業孵化基地首期投入500萬，將為青年創業者提供免租金水電支持，以及包括人力資源培訓、證照辦理等一站式服務。“你有網店，但你不會運營，為什么不交給我們，讓我來幫你做服務。”佛山點贊網絡科技有限公司聯合創世人兼總經理張祖奎是首批進駐基地的電商團隊，從大一開始學習電子商務專業以來，該點贊電商團隊成員均開過網店，任職過電商托管公司，更當過傳統企業電商項目負責人，對于托管的創業前景，他們顯得信心滿滿，目前已經有5家企業與該托管公司簽約合作。

該創業基地成立后，將依托廣佛智城打造中國電商體驗之都等電子商務資源，首期將斥資500萬打造面積約950平方米，設有可以容下100多號人的開放式辦公區。基地同時成立了青年創業導師團，并為首批導師代表頒發聘書。今后，佛山各級團組織將整合青商會、青聯資源，攜手政府職能部門、高校、金融機構成立青年創業導師團。導師團成立后將重點物色好輔導群體和項目，著力加大對青年創業者的創業實踐指導和創業后續經驗供給，進行一對一或一對多的督導，降低青年創業風險，提高創業成功率。

“年輕人不一定有錢，但一定要有夢想。”授牌儀式上，王樹斌勉勵青年人要懷抱創業的激情，敢于追夢。作為我市青年創業平臺的一個標桿，佛山市青年創業孵化基地廣佛智城基地整合了政府、高校和群團組織的資源，該基地有關經驗將在我市其他工商業園推廣。

第三篇：電商聯盟助點贊電商等年輕人圓電商夢

電商聯盟助點贊電商等年輕人圓電商夢隨著南海電商服務聯盟在廣佛智城的成立，進駐的中小型電商企業可以得到綜合性專業服務，為不少剛畢業的大學生圓了他們的電商創業夢。

佛山點贊電商的負責人，這個月初和另外兩個合伙人湊資30萬創辦了電子商務公司，業務范圍主要是電子商務托管和網店代運營，是第一個進駐廣佛智城的電商托管團隊，也終于圓了他5年的電商夢。

企業其實有很多好的產品可以在網絡渠道上銷售，但是佛山這邊，我們經過一年的調查，其實佛山這邊很少有這種電子商務第三方服務公司。

目前公司已經承接了佛山、英德等地瓷磚、紅茶、坐墊等產品的電商托管業務，而佛山的中小企業將是我們下一步合作的客戶。負責人非常看好廣佛智城以及臨近的淘寶村的發展前景，公司下一步的發展目標將圍繞電商人才進行服務培訓。我們可以對他們（電商從業人員）進行培訓，把一些更專業的東西教給他，這相當于一個產業鏈，我們只是產業鏈中的其中一個環節，淘寶村不可能全部都是賣家，也需要有倉儲、物流的服務商。

到目前為止，營銷服務類、攝影類、物流類等電商企業已經陸續進駐廣佛智城。廣佛智城電商運營總監：我們的總體規劃是建造中國最大的電子商務體驗之都，讓線上的企業有機會體驗的環境，也讓線下的企業有機會通過廣佛智城走向網絡、走向電子商務。

第四篇：水、電、辦公用品等管理制度

水、電、辦公用品管理制度

為規范公司水、電、辦公用品的使用，確保辦公所需，倡導勤儉節約、物盡其用、杜絕鋪張浪費、大手大腳，管好用好辦公物品，特制定本制度。

一、節約用水

1、自然用水將龍頭盡量開小，用完隨手關閉，堅決避免“長流水”現象發生。

2、飲用水量身倒水，杜絕“剩半杯”現象，給顧客倒水以六七分為宜，喝完再續。飲水機一經發現漏水等損壞情況立即保修。

二、節約用電

1、強化照明系統節電。辦公時間要充分利用自然光照，在陽光充足、室內光線好的情況下不開燈，長時間離開辦公室或下班時要做到人走燈滅。

2、注重用電設備節電。各部門人員使用電腦、傳真機、復印機等辦公自動化設備時，盡量減少開啟和使用次數，長時間不使用或下班后要徹底切斷電源，減少辦公設備待機能耗。

3、辦公室、會議室等辦公區域做到無人時不開空調，開空調時不開門窗。

三、節約辦公用品（規定中的辦公用品分為固定資產和一般辦公用品）

1、固定資產主要指：桌椅、公文柜、電腦、電話機、打印機、飲水機、車輛等。

2、一般辦公用品包括剪刀、膠帶、橡皮擦、回形針、直尺、訂書器、涂改液、裁紙刀、筆、信箋、筆記本、打印紙、復印紙、復寫紙、印泥、釘書針、大頭針、夾子、名片、賬冊、卷宗、檔案袋（盒）、標簽、紙杯、計算器、電池等。

3、節約用紙。公司鼓勵員工盡量雙面打印紙張，一面留白廢紙應作草稿使用。

4、公司員工請自帶飲水杯具，一般情況下禁止使用一次性紙杯。

5、盡量減少電話的通話時間，盡量長話短說；禁止私人電話與辦公電話捆綁；禁止在辦公場所用辦公電話聊天。

6、節約辦公用品。保管和使用好自己的辦公用品，申領有度。對辦公電器要注意保管和維修，長時間不用應切斷電源，降低折舊。

7、辦公用品應為辦公所用，不得據為己有，不得移作他用或私用。

8、所有員工要勤儉節約，杜絕浪費，不許將辦公用品隨意丟棄廢置，努力降低消耗和辦公費用，精心使用辦公設備。

第五篇：電機車、點瓶車司機承諾書

電機車、電瓶車司機承諾書

針對當前運輸系統事故發生頻繁，經礦研究決定，對全礦所有持電瓶車、電機車司機證人員進行培訓，努力提高司機操作能力和崗位責任心，杜絕一切習慣性違章行為，實現安全生產。

特承諾如下：

1、全礦所有電機車、電瓶車司機必須經過專業技術培訓，經考試合格后，持證上崗。

2、司機一律不準將機車轉讓他人操作，司機應隨身攜帶手柄、礦燈、礦帽。

3、機車運行時，牽引礦車數量必須按礦規定數量牽引，嚴禁超掛礦車。

4、嚴禁司機在車外開車，嚴禁不松閘開車。

5、司機操作機車必須在駕駛室內，目視前方，不得背臉開車和將身體任何部位露出車外。

6、在檢查過程中，如發現機車閘、燈、警鈴、喇叭、鏈接器和撒沙裝置任何一項不正常和防暴部分失爆時都不得開車。

7、機車運行時速度不得超過4米/秒，頂車速度不得超過1.4米/秒。

8、無頂車措施，絕對禁止頂車運行。

9、兩臺機車在同一條線路同一方向運行時，應保持不小于100米的距離。

10、空、重車在岔道相遇時，空車必須讓重車先行通過。

11、機車接近風門、道口、彎道、道岔和坡度較大的地方及前方有機車、行人或視線有障礙時，必須發出警鈴，減速行駛。

12、在行車時禁止倒轉電機代替制動閘。

13、停車處理故障或檢修時，必須拉下受電弓，切斷電源，不準帶電作業。

14、電瓶車充電時，嚴禁正負極插銷接反。

15、機車在運行中若停電應將控制手柄扳回零位，等送電后再重新啟動。

16、司機不準擅自離開座位，離開座位時必須切斷電機電源，將控制手柄取下保管好，扳緊車閘，但不得關閉車燈。

17、以上內容如有違反，礦將視情節處以200元至1000元罰款，安通科備案，如一內沒有違反，礦將對每人獎勵200元至500元。

承諾人：

日期：