第一篇：萬用表實用檢測技術

萬用表實用檢測技術編輯詞條編輯摘要

摘要I S B N ：7502588426 作 者：馬克聯出 版 社：化學工業出版時間：2006-08-01版 次：初版開 本：16開包 張：平裝目錄

1內容簡介

2目錄 目錄

1內容簡介

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收起 編輯本段內容簡介

本書以實用為出發點，用較通俗易懂的語言闡述了指針、數字萬用表的結構原理、使用方法和實用檢測技術。介紹了用萬用表檢測電阻、電容、二極管、三極管、場效應管、可控硅等電子元器件，檢測光電二極管、光電三極管、光電耦合器、激光二極管、LED數碼管、液晶顯示器等光電器件，檢測基本電氣控制線路及電動機的方法和技巧。涵蓋了部分家電的結構、原理及檢修技術，其中包括電熨斗、電熱毯、電熱水器、飲水機、電熱淋浴器、節能燈、調光燈、電飯鍋、電子脈沖點火器、微波爐、消毒柜、食品加工機、吸塵器、洗衣機等。在家電檢修方面，詳細講解了一些故障案例的現象、檢修過程，具有較強的針對性和實用性。本書圖文并茂、通俗易懂，適合初、中等水平家電維修人員、無線電愛好者閱讀，也可作為高職高專相關專業、中專、中技以及短訓班的輔助教材。本書以實用為出發點，用較通俗易懂的語言闡述了指針、數字萬用表的 結構原理、使用方法和實用檢測技術，介紹了用萬用表檢測電子元器件，光 電器件，以及基本電氣控制線路及電動機的方法和技巧，涵蓋了部分家電的 結構、原理及檢修技術。在家電檢修方面，詳細講解一些故障案例的現象、檢修過程，具有較強的針對性和實用性。本書圖文并茂、通俗易懂，適合初、中等水平家電維修人員、無線電愛好者閱讀，也可作為高職高專相關專業、中專、中技以及短訓班的輔助教材。

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1萬用表基礎知識1.1模擬指針式萬用表的結構和工作原理1.1.1指示部分

1.1.2測量電路1.1.3萬用表的操作面板1.1.4萬用表的準確度等級及測量誤差分析

1.1.5使用萬用表時應注意的事項1.2數字萬用表的結構和工作原理1.2.1采用數字化測量技術1.2.2顯示位數及顯示特點1.2.3準確度1.2.4分辨力1.2.5輸入阻抗1.2.6抗干擾能力1.2.7功耗低1.2.8集成度高1.2.9測量功能全1.2.10具有完善的保護功能1.2.1l數字萬用表的工作原理1.2.12數字萬用

表的使用方法1.2.13使用數字萬用表注意事項1.2.14常用袖珍式數字萬用表介紹2常用電子元件的檢測2.1電阻器及其檢測2.1.1固定電阻及其檢測2.1.2電位器及其檢測2.1.3濕敏電阻及其檢測2.1.4光敏電阻及其檢測2.1.5熱敏電阻及其檢測2.1.6NTC功率熱敏電阻器的檢測2.1.7正溫度系數熱敏電阻(PTC)的檢

測2.1.8氧化鋅壓敏電阻及其檢測2.1.9排電阻檢測2.2電容器及其檢測

2.2.1電容器概述2.2.2電解電容極性的判斷2.2.3電解電容容量和漏電電阻的檢測

2.2.4可變電容的檢測2.2.55000pF以上非電解電容的檢測2.2.6小電容好壞的檢測

2.3二極管2.3.1晶體二極管的種類及命名方法2.3.2普通晶體二極管的極性檢測

2.3.3普通晶體二極管的性能檢測2.3.4萬用表判別硅管和鍺管2.3.5穩壓二極管

2.3.6穩壓二極管的極性與好壞的判別2.3.7穩壓二極管與普通二極管的鑒別2.3.8穩壓二極管穩壓值的測量2.3.9三管腳穩壓管與普通三極管的區分2.3.10普通發光二極管2.3.11普通發光二極管好壞和極性的檢測2.3.12數字萬用表檢測普通發光二極管好壞和極性2.3.13普通發光二極管工作電流的檢測2.3.14雙向變色發光二極管性能的檢測2.3.15三色變色發光二極管的檢測2.3.16數字萬用表檢測三色變色發

光二極管管腳及性能2.3.17閃爍發光二極管的檢測2.3.18變容二極管的檢測

2.3.19光電二極管的檢測2.3.20激光二極管的檢測2.3.21紅外發光二極管的檢測

2.3.22紅外接收二極管的檢測2.3.23紅外發射、接收對管的檢測2.3.24整流橋的檢測2.3.25磁敏二極管的檢測2.3.26高壓整流硅堆的檢測2.3.27雙向觸發二極管的檢測(一)2.3.28雙向觸發二極管的檢測(二)2.3.29單結晶體管的檢測

2.3.30單結晶體管與三極管的判別2.3.31單結晶體管質量的檢測2.3.32單結晶體管分壓比η的檢測2.3.33保護二極管的檢測2.4晶體三極管2.4.1晶體三極管概述2.4.2晶體三極管基極和管型的判別2.4.3硅管與鍺管的判別2.4.4用萬用表測三極管的穿透電流Iceo2.4.5高頻管與低頻管的判別2.4.6用數字萬用表測三極管2.4.7三極管質量好壞的測量2.4.8三極管的電流放大系數測量

2.4.9三極管的在路測量2.4.10光電三極管的檢測2.4.11磁敏三極管的檢測

2.4.12用萬用表判斷三極管是否工作于振蕩狀態2.5電感器的檢測2.5.1電感器概述2.5.2電感通斷測量2.5.3電感量L的測量2.5.4伏安法測量電感量L和品

質因數Q2.6變壓器的檢測2.6.1變壓器概述2.6.2變壓器直流電阻的檢測

2.6.3變壓器的空載測試2.6.4電源變壓器的測量2.6.5變壓器繞組平衡測量

2.6.6變壓器質量好壞的估測2.6.7變壓器絕緣電阻的測量2.6.8變壓器同名端的測定

2.6.9兩個變壓器的并聯測定2.6.10中周(中頻變壓器)的檢測2.7單向晶閘管的檢

測2.7.1晶閘管概述2.7.2晶閘管的極性判別2.7.3單向晶閘管的好壞判別

2.7.4單向晶閘管的觸發能力測試2.7.5晶閘管的直流轉折電壓、反向擊穿電壓的測量

2.7.6光控晶閘管的檢測2.7.7雙向晶閘管的檢測2.7.8單、雙向晶閘管的區分

2.7.9萬用表檢測可關斷晶閘管GTO2.8場效應管的檢測2.8.1場效應管概述

2.8.2場效應管的電極和溝道類型判別2.8.3場效應管的性能測量2.8.4結型場效應管夾斷電壓測量2.8.5結型場效應管零偏壓下的跨導測量2.8.6絕緣柵場效應管電極的判別2.8.7絕緣柵場效應管好壞的判別2.8.8絕緣柵場效應管放大能力的判別

2.8.9VMOS場效應管質量性能的檢測2.9光電池的檢測2.9.1光電池概述

2.9.2萬用表測光電池開路電壓2.9.3萬用表測光電池短路電流2.9.4萬用表檢測光電池的好壞2.9.5耳機檢測光電池的好壞2.10光電耦合器的檢測2.10.1光電

耦合器概述2.10.2光電耦合器飽和壓降的測量2.10.3光電耦合器好壞的檢測

2.10.4光電耦合器輸入一輸出之間絕緣電阻測量2.10.5光電耦合器電流傳輸特性的測試2.11LED數碼顯示器的檢測2.11.1LED數碼管2.11.2用電阻擋來檢測LED數碼管2.11.3數字萬用表的hFE擋檢測LED數碼管2.11.4LCD液晶顯示器

2.11.5液晶顯示器的檢測2.11.6真空熒光數碼管(VFD)2.11.7真空熒光數碼管的檢測2.12繼電器的檢測2.12.1繼電器分類2.12.2電磁繼電器2.12.3電磁繼電器的檢測2.12.4干簧管繼電器2.12.5干簧管繼電器的檢測2.12.6固態繼電器的檢測2.13集成穩壓器的檢測2.13.1集成穩壓器的分類2.13.2三端固定式集成穩壓器2.13.3正三端固定式集成穩壓器的檢測2.13.4負三端固定式集成穩壓器的檢測2.13.5三端可調式集成穩壓器2.13.6三端可調式集成穩壓器好壞的檢測

2.13.7三端可調式集成穩壓器穩壓值的檢測2.14電聲器件的檢測2.14.1耳機的檢測2.14.2揚聲器好壞的檢測2.14.3揚聲器發音是否有失真的簡易檢測2.14.4揚聲器阻抗的估測2.14.5揚聲器相位的檢測2.14.6壓電蜂鳴片的檢測2.14.7電磁式蜂鳴器的檢測2.14.8動圈式話筒的檢測2.14.9駐極體話筒的檢測

2.14.10對駐極體式話筒相位的檢測2.14.11電容式傳聲器的檢測2.14.12錄音機磁頭好壞的檢測2.14.13錄音機磁頭是否被磁化的檢測2.14.14交流抹音磁頭與直流抹音磁頭的判別2.14.15單聲道和雙聲道錄放音磁頭的區分2.14.16消音磁頭和錄

放音磁頭的判別2.14.17磁頭絕緣性能的檢測2.14.18萬用表檢測1vrL系列集成塊的好壞3萬用表在電氣檢測中的應用3.1一般電氣及電子線路檢測3.1.1數字萬用表判別電源火線、零線3.1.2指針萬用表判別電源火線、零線3.1.3檢測墻體中的導線接頭3.1.4電烙鐵的電阻及功率測量3.1.5電子蚊蠅拍的檢測

3.1.6電熱滅蚊器的檢測3.1.7利用萬用表對紐扣電池充電3.1.8汽車用交流發電機的檢測3.1.9檢測石英晶體的好壞3.1.10檢測電子手表功耗電流3.1.11彩色

顯像管是否老化的檢測3.1.12高壓包相位的檢測3.2萬用表對電動機的檢測

3.2.1電動機極數的簡易判斷3.2.2測定電動機三相繞組首末端3.2.3繞組串接法測定電動機三相繞組頭尾3.2.4三相電動機繞組反接的檢查3.2.5測算三相電動機轉速3.2.6繞組斷路故障的檢測3.2.7繞組多根斷線的檢測3.2.8繞組短路故障的檢測3.2.9感應法檢測繞組短路故障3.2.10從電動機的引線頭測定旋轉方向

3.2.11星形多支路并聯三相繞組斷路檢查3.2.12三角形多支路并聯三相繞組斷路檢查

3.2.13三相電動機轉子斷條的檢查3.2.14單相串勵電動機電樞繞組通地檢查

3.2.15單相串勵電動機電樞繞組短路故障檢查3.2.16單相串勵電動機電樞繞組斷路故障檢查3.2.17單相串勵電動機電樞繞組接反故障檢查3.3萬用表對電氣控制線路的檢測3.3.1檢測電氣線路故障的方法3.3.2斷路故障的檢測3.3.3短路(短接)故障的檢修3.3.4檢測電動機正反轉控制電路4萬用表檢修家用電器4.1電熱器具4.1.1普通型電熨斗的檢修4.1.2調溫型電熨斗的檢修4.1.3電熱毯的檢修4.2電熱水器的檢修4.2.1電熱杯的檢修4.2.2電熱水瓶的檢修

4.2.3電熱飲水機的檢修4.2.4電熱淋浴器的檢修4.3燈具的檢修4.3.1節能燈的檢修4.3.2石英射燈的檢修4.3.3調光燈的檢修4.4廚房電器的檢修

4.4.1自動保溫式電飯鍋的檢修4.4.2壓力式電飯鍋的檢修4.4.3電子脈沖點火器的檢修4.4.4機械式微波爐的檢修4.4.5微電腦控制微波爐的檢修4.4.6電子消毒柜的檢修4.4.7食品加工機的檢修4.5吸塵器的檢修4.6洗衣機的檢修

4.6.1電動機4.6.2定時器4.6.3電容4.6.4進水電磁閥4.6.5水位開關

4.6.6安全開關4.6.7選擇開關4.6.8電加熱管4.6.9溫度控制器4.6.10排水泵4.6.11程序控制器4.6.12排水電磁閥4.6.13蜂鳴器4.6.14萬用表檢測洗衣機的三種方法4.6.15雙桶半自動洗衣機的檢測4.6.16波輪式全自動洗衣機控制系統故障的檢測及排除方法4.6.17滾筒式全自動洗衣機控制系統常見故障與維修

第二篇：檢測技術[推薦]

《檢測技術》實驗時間安排表

第九周星期四上午 8：00-11:20C11-4班前半班20110143--20110163

星期六上午 8：00-11:20C11-4班后半班 20110164---…

第十周星期四上午8:00-9:40

20110143--20110163

星期四上午9:40-11:20

20110164---…

C11-4班前半班C11-4班后半班

第三篇：MF47萬用表組裝與檢測教學教案

MF-47型萬用表的組裝與檢測

現在萬用表已不再是專業人員使用的專用檢測工具，隨著家用電器的普及，萬用表正在走向千家萬戶。選擇自己裝配一臺萬用表，不僅可以學到相應的電子技術，同時也可以留著家用，真可謂一舉兩得。

本項目主要介紹市場上能買到的標準型MF47萬用表套件的組裝和檢測。簡述萬用表的電路工作原理

萬用表一般是用于檢測電路中的電壓、電流、電阻的儀表。早期稱三用表，現在都稱萬用表。

指針式萬用表的顯示部份是一個動圈式表頭。在測量過程中，表頭中的動圈在通過直流電流時，由于磁場的作用，與動圈相連的指針會隨著動圈在表頭刻度盤上一起偏轉，從而顯示各種測量結果。

指針式萬用表檢測高電壓電路的基本原理是用串聯電阻分壓的方式來擴展電壓的量程；檢測大電流電路的基本原理是用分流電阻分流的方式擴展電壓的量程；在測量電阻時，萬用表內的電池、表頭、表內的標準電組及外部的被測電組都是串連的。當被測電阻為零時，表頭偏傳最大，當被測電阻不為零時，表頭指針的偏轉角度大小是隨著被測電阻和表內的標準電阻的比值增大而偏轉減小，我們用它的對應位置，檢測電阻的阻值。

單一檢測電路都是比較簡單的，但是要用同一只表頭檢測到多量程的電壓、電流、電阻，就需要通過一個多點切換撥動開關來實現，這樣就顯得比較復雜了。慶幸的是，現在的萬用表在電路設計上已經非常成熟，只要我們將所有的配件都按圖裝配上去，即可正常使用。

MF47型萬用表電路原理圖如圖1所示。F47型萬用表安裝過程

1、清點材料

電阻27只，阻值如下： R1 0.47 R6 30k R11 1.8M R16 1.78k R21 20k R26 6.75M R2 5 R7 150k R12 2.25M R17 165 R22 2.69k R27 6.75M

R3 50.5 R4 555 R8 800k R9 84k R13 4.5M R14 17.3k R18 15.3 R19 56 R23 141k R24 20k

R27 0.025k（分流器）

R5 15k R10 360k R15 55.4k R20 15k R25 20k

安裝小貼士：

1、打開元件包時請小心，不要將塑料袋撕破，以免材料丟失。

2、清點材料時可以將表箱后蓋當容器，將所有的東西都放在里面。

3、清點完后請將材料放回塑料袋備用。

4、清點元器件時，電阻較多，阻值不同。可以預先將每個電阻的阻值測量好后，按順序貼在一張白紙上，在白紙上標上各電阻的阻值，以備焊接線路板時方便查找。

電路板元器件的焊接與安裝

1、線路板正面元器件的安裝 取出線路板，將各元器件按線路板黃面上的標識插在線路板上，并用烙鐵焊接牢固。如下圖所示

安裝小貼士：

1、焊接工具一般選用35W電烙鐵和0.8mm直徑的焊錫。焊接各焊點的時間不易太長，以免印制電路板上的焊盤因溫度過高而脫落。

2、焊接元器件時，注意不要將焊錫粘在線路板綠面三圈電刷環上。焊接完畢后，可用橡皮將電刷環上的松香及汗漬等殘留物擦干凈，以免造成電刷與電刷環接觸不良影響到萬用表的使用。

3、裝配完線路板后，請仔細對照裝配圖，檢查元件焊接部位是否有錯漏焊。對于初學焊接者來說，還需檢查焊點是否有虛焊、連焊現象，可用鑷子輕輕撥動零件，檢查是否松動。

萬用表的總裝

1、電池夾的安裝

a.如下圖所示分別將各個連接線焊接在電池夾的焊接端。b.將焊好線的電池片分別插入表頭一體化面板上相對應的電池片插孔內。

2、表頭正負極線與線路板的連接：

將表頭一體化面板上的表頭的正極線（紅線）和負極線（黑線）分別焊在線路板正面所標示的B+ 和B-插孔內。

3、V型電刷的安裝：

將V型電刷安裝在表頭一體化面板的電刷卡槽內，如下圖所示。

安裝小貼士：

因為線路板上的3條電刷軌道中間2條間隙較小，外側2條間隙較大，與V型電刷的三個凸出點相對應，所以一定要注意電刷的安裝方向。安裝完成后，用手輕輕按，看是否有彈性并能自動復位。

4、線路板的安裝：

將焊好連接線的線路板卡放表頭一體化面板中。將線路板上的三個卡槽卡在表頭一體化面板上的三個卡鉤下，聽到咔嗒聲響后，線路板就安裝到位了。安裝小貼士： 安裝完線路板后，旋轉表頭一體化面板上的檔位開關旋鈕一周，檢查手感是否靈活。如有阻滯感，應查明原因后加以排除。可重新拆下線路板檢查線路板上電刷（刀位）銀條（分段圓弧，位于線路板中央），電刷（刀位）銀條上應留下清晰的刮痕，如出現痕跡不清晰或電刷銀條上無刮痕等現象，應檢查電刷與線路板上的電刷銀條是否接觸良好或裝錯裝反。直至檔位開關旋鈕旋轉時手感良好后，方可進入下一階段工作。

5、安裝電池、后蓋和Ω調零旋鈕：

裝后蓋時左手拿面板，稍高，右手拿后蓋，稍低，將后蓋從向上推入面板，擰上螺絲，注意擰螺絲時用力不可太大或太猛，以免將螺孔擰壞。抽出后蓋上的電池蓋板，分別將2號電池和9V層疊電池裝入電池槽內，注意電池的正負極不要裝反，最后合上電池蓋板。將電位器旋鈕安裝在表頭一體化面板正面的電位器處。

安裝小貼士：

裝上電池后需檢查電池兩端是否接觸良好。插入+、— 表棒，將萬用表檔位 旋鈕旋至Ω檔最小檔位，將+、—表棒搭接，表針應向右偏轉。調整Ω調零旋鈕，表針應可以準確指示在Ω擋零位位置。依次從最小檔位調整至最大檔位（R×1Ω-蜂鳴器-R×10k），每檔均應能調整至Ω擋零位位置。如不能調整至零位位置，常見故障如下：指針位于零位左邊，可能是電池電壓不足（更換新電池）或電池電刷接觸不良。MF47型萬用電表的簡易檢測方法

萬用表套件中所提供的各種零部件都是預先經過標準化設計的。安裝完成的萬用表只要正確裝配，不少零件，不漏焊虛焊焊點，通常不需要逐檔檢測，其測量精度即可達到一般指針式萬用表的各種技術指標。但是在業余情況下檢測萬用表的好壞是每一個電子愛好者完成裝配后的第一心愿。下面介紹在沒有專業儀器的情況下，幾個基本檔位的檢測方法。

在檢測自裝萬用表前，需準備電流/電壓源和用于對比檢測的標準表。

1、檢測用的電流/電壓源：可以使用成品MF47型萬用表替代。將檔位旋鈕撥至電阻檔，此時表棒插口輸出的電流大約為：R×1Ω檔（100mA）、R×10Ω檔（10mA）、R×100Ω檔（1mA）、R×1k檔（0.1mA）。輸出的直流電壓大約為：R×1Ω（1.5V）。如果能找到專用的電壓/電流源，可以逐個檢測所有量程的檔位。

2、用于檢測對比的標準表。可以用同型號指針表，檢測時標準表與被測表放在相同檔位進行對比測量。也可以使用精度較高的數字表，檢測時兩只表應選擇功能相同，量程相近的檔位進行對比測量。

1、電流檔的檢測：

a.檢測電路如圖所示串聯連接：

b.將表

（一）的檔位旋鈕撥在電阻檔上，使其輸出相應的電流。

c.將標準表和被測表的檔位旋鈕撥至相同的電流檔位置，如兩只表顯示值相同，則被測表與標準表同樣準確。

2、直流電壓檔的檢測：

a.將電池、標準表和被測表并聯連接，如下圖所示。

b.將標準表和被測表的檔位旋鈕分別旋至相同的直流電壓檔，如兩只表顯示值相同，則被測表與標準表同樣準確。

3、交流電壓檔的檢測：

將標準表和被測表的檔位旋鈕分別撥在交流250V或500V檔，分別測試市電220V，如兩只表顯示值相同，則被測表與標準表同樣準確。

4、直流電阻檔的檢測： a.準備一些普通電阻，阻值盡可能靠近被測表的中心值。如47型中心值為16.5,就可分別選用16Ω（R×1檔用），160Ω（R×10檔用），1.6k（R×100檔用），16k（R×1k檔用），160k（R×10k檔用）。

b.將電池裝入萬用表，按照R×1檔-R×10檔-R×100檔-R×1k檔-R×10k檔的順序逐檔測量。用標準表和被測表分別測量同樣阻值的電阻，如兩只表顯示值相同，則被測表與標準表同樣準確。

安裝小貼示：

1、指針萬用表每更換一次檔位后，必須重新調零，即短接萬用表的兩根表棒，調整Ω調零旋鈕，使指針準確的指向表盤右邊的零位（滿度零位）。

2、測量高值電阻時，應避免用手接觸電阻兩端，否則測量數值不準確。自裝萬用表常見故障的排除

1、測量所有檔位，表針都沒有反應 a.檢查表棒和保險絲是否完好。

b.表內零件或接線漏裝錯裝，電刷與線路板接觸不良。c.表頭損壞了。

2、電壓、電流檔測量正常，電阻檔不能測量 a.表內電池沒有裝或者沒電。b.電池和電池夾接觸不良。c.電池夾上的連接線沒連好。

3、使用直流電壓/電流檔時，測量極性正確，但表頭指針反向偏轉，檢查表頭上紅黑線是否接反。

4、使用電阻檔時，表頭指針反向偏轉，檢查電池極性是否裝反。

5、電壓或電流的測量值偏差很大

a.電路板上的零件錯裝、漏裝、虛焊。b.相關電阻損壞

6、電阻檔測量值偏差很大

線路板上的15.3Ω或165Ω電阻燒壞。表頭指針不能準確停留在左邊零位用一字起調整表頭一體化面板上的機械調零。一般情況下都可以將指針細調至準確的位置。如果指針偏差較大，調整機械調零，仍然調整不到零位，可以用鑷子撥動表頭一體化面板后部的焊片（如下圖）進行粗調后，然后再用機械調零進行細調。

第四篇：檢測技術及儀表

檢測技術及儀表》課程組

自動化與電子工程學院

2010年5月

《檢測技術及儀表》課程精品課程

建設方案

一、課程簡介

《檢測技術及儀表》課程是自1972年我校創辦化工自動化專業以來，一直是自動化專業以及現在的測控專業的一門主干專業基礎課。30多年來，很多老師曾主講過本門課程，也使用過很多版本的教材。特別是近年來由于電子信息、計算機技術的迅猛發展以及現代控制理論的廣泛應用，使得該門課程的內容不斷更新，技術含量不斷提高。

本門課程是在學習模擬電子、數字電子、控制理論之后的一門專業基礎課。通過本門課程的系統學習，可以使學生充分掌握檢測壓力、溫度、流量和物位的方法和儀表類型，以及顯示裝置的種類、結構、性能及其使用方法。

二、課程建設的目標與思路

根據學校建設“教學研究型名牌大學”的定位，以及“厚基礎、高素質、重創新、強能力的新型優秀人才”的培養目標。在實現校級優秀課程建設的基礎上，按照教學研究型大學的教學課程的基礎性與前沿性。落實講授、討論、作業、考試考核和教材等教學要素的教學理念，進一步向教學研究型的教學模式轉化。全面深入地開展教學內容、體系和方法的現代化改革，結合檢測技術及儀表研究的進展和高新技術發展的需要，不斷更新課程內容，提升各教學環節的培養能力和功能。開展立體化的多媒體課件、學件等課程資源的研究與制作，充分利用現代教育技術，為課程的教與學構建高效、暢通和靈活的多維網絡環境。并且形成一支合理的優秀教師梯隊，將本課程建設內容繼續細化，從質量上進一步提高，建設成有影響力的校級精品課程。

本課程的建設目標是：通過對師資隊伍、教學內容、教學方法和教學手段、教材建設等方面的建設，力爭使“檢測技術及儀表”課程建設，在教學質量、教學管理、教學條件等方面再上一個新臺階，努力將該課程建成校級、省級精品課程，為國家培養出更多優秀人才。

三、課程建設的內容與特色

本門課程的教學質量的好壞，直接關系到我校自動化和測控專業的畢業生的專業水平，也直接影響這兩個專業學生的就業就職。因此課程組老師們，經過認真討論，準備從下面幾個方面進行課程建設：

（1）改革現有的教學內容和教學模式。教學內容要依據教材，但又不能完全依賴于教材，要緊緊跟隨檢測技術及儀表的發展步伐，站在學科的前沿，將最新、最適用的檢測技術及儀表裝置引入教學內容。教學上要采用板書、多媒體、實驗、實訓、設計等多種模式。開展雙語教學和網絡教學等先進教學模式的研究及應用，形成具有一定創新特色的教學模式，注重工程特色和學科優勢的結合，加強課程的實用性。

（2）建立結構合理的教師梯隊。要大力提高課程組的職稱層次、學歷層次和教學科研水平，鼓勵教師們走出校門多參加國內外的各種學術交流活動，鼓勵年輕教師攻讀碩士、博士學位。

（3）編寫具有特色的適用的高水平教材和講義，進一步完善多媒體課件和課程網站，為學生提供優質的教學資源。

（4）重視實踐教學。結合工程實際，自制實驗裝置，自編實驗講義、在保質保量的完成基本實驗的基礎上，充分利用好綜合實驗和設計性實驗等裝置，建立穩定的校內外實習基地，著重培養學生的綜合實踐能力和創新能力。

（5）抓好課程設計、畢業設計環節的教學，鼓勵老師多選擇一些具有實際意義的設計題目，使學生一畢業就能很快適應新的工作環境，擔負起自己的具體實際工作任務。

四、課程建設的步驟與進度

經過近兩年的優秀課程的建設，經過課程組全體老師們的積極努力，已經基本達到了最初設定的優秀課程建設目標，這次如能獲得校級精品課程建設立項，為達到校級精品課程建設目標，經課程組研究決定，將按照如下步驟和時間進度開展課程建設工作。

1、課程建設步驟：

（1）師資隊伍建設

一流的師資隊伍是精品課程建設的根本保證。檢測技術及儀表課程在精品課程的建設過程中,要把精品課程建設與高水平教師隊伍建設相結合, 著力培養并

逐步形成一支教學水平和科研水平高、知識結構和年齡結構合理、素質較高的教師梯隊。

今后還要進一步提高課程組老師的職稱層次和學歷層次，鼓勵青年教師進修提高，攻讀碩士、博士學位。

（2）實驗室建設

“檢測技術及儀表”是一門實踐性很強的課程，近幾年實驗室投入了大量經費，購置了檢測技術、自動控制儀表與裝置、傳感器、虛擬儀器等大量實驗裝置，滿足了基本實驗要求，下一步的計劃是：開設針對性強的綜合實驗項目，開放測控實驗室，為學生提供開放性實驗教學環境。并結合社會需求與學科發展情況，及時調整實驗室設備與實驗項目。

（3）教材建設規劃

采用全國優秀教材、面向21世紀的重點教材，保證教材內容與相關專業領域的科技發展水平相同步。

同時積極參加教材的編寫和出版工作，近年來課程組已出版教材2部。目前《檢測技術及儀表》和《智能儀器基礎》兩門課程2009年獲學校教材立項。這些教材將融入課程組教師科研成果，教材的編寫和出版將會極大推動課程建設。

另外還要進一步完善《檢測技術及儀表實驗指導書》。

（4）雙語教學改革

在教學形式上，擬在課堂教學中部分采用英漢雙語教學，并選用國外著名高等學校現用教材。雙語教學的內容要求學生用英文完成作業，并用英文考試。提高學生的專業外語水平，改變為考試學英語的傾向，提高學生的英語聽、說、讀、寫能力，為檢測技術及儀表教學與國際接軌起到積極的推動作用。

（5）網絡教學建設

學校校園網的鋪設為網絡教學提供了良好的平臺，我們擬建設檢測技術及儀表網站，提供檢測技術及儀表課程的電子教案和多媒體課件、習題集、雙語教學中對應的中文學習參考、實驗的基本操作和注意事項等內容，實現網上授課、網上答疑、網上討論、網上測試一體化，滿足學生進一步自學的需求。

2、課程建設時間進度安排：

（1）2010年6月-2010年10月：總結前面優秀課程建設的工作，對照校級

精品課程的標準和要求，找差距、不足，研究對策；

（2）2010年11月-2011年3月：修改教學大綱、試驗大綱、實驗講義等相

關教學材料；編寫教材；

（3）2011年4月-2011年9月： 修改和完善多媒體教學課件、電子教案；

完善教材編寫；

（4）2011年10月-2012年6月：編寫自學輔導類資料，實現基本教學資源

（教案、課件等）全部上網，至少一位主

講教師部分章節授課錄像上網。

五、課程組已取得的成果及條件保證

1、近幾年主要的教學建設與改革成就

（1）師資隊伍建設 幾年來以培養和引進相結合，現在基本形成了一支知識結構、學歷結構、年齡結構比較合理的師資隊伍。經過多年的建設，現有教授2人，副教授5人，講師2人，高級實驗師1人；具有博士學位的教師2人，碩士學位6人，學士學位2人。通過師資隊伍的建設努力形成一支結構合理，人員穩定，師德優良，教學水平高，教學效果好的5～6人主講的教師隊伍，并配備數量適當的實驗教師。

（2）課件制作 課程組老師根據多年教學經驗，制作了《檢測技術及儀表》，經過幾輪使用教學效果良好；并且此課件獲得第九屆全國多媒體課件大賽優秀獎和校第二屆多媒體課件大賽二等獎。

（3）教學文件修訂 修訂了測控專業人才培養計劃，修改了本課程的教學大綱、實驗大綱、實驗講義等教學文件；

（4）實驗室建設 實驗在原來實驗的基礎上，增加了智能顯示儀表、超聲波流量計實驗，現在測控實驗室與自動化實驗室合并為自動化測控實驗中心，并被評為校級實驗示范中心，實現了實驗設備資源的共享。

（5）網絡教學建設 學校校園網的鋪設為網絡教學提供了良好的平臺，我們已經建設了檢測技術及儀表課程網頁，提供了檢測技術及儀表電子教案、多媒體課件、習題集、參考文獻等內容，滿足了學生進一步自學的需求。

（6）獲獎情況 課程組負責人2008、2009年獲得校級教學研究成果一等獎、二等獎各一項。課程組中兩名老師獲得“我最喜愛的教師”稱號。2009課程組老師還獲得省部級三等獎。

（7）課程組科研、教研水平大大提高 無論是教改項目還是科研項目以及論文都有明顯增加。其中教改項目6項、教改論文5篇、科研項目11項、論文35篇，被EI/ISTP等收錄的論文16篇，編寫教材2部。

第五篇：pcr檢測技術

《食品安全學》綜述

PCR快速檢測技術綜述

1．前言

聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍，是肉眼能直接觀察和判斷；可從一根頭發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。過去幾天幾個星期才能做到的事情，用PCR幾個小時便可完成。PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑。

該酶促反應最基本的3個環節是：[1]模板DNA的變性，即在94℃下模板雙鏈DNA變為單鏈DNA；[2]引物與模板鏈的特異性復性；[3]引物鏈的延伸。

2.研究的目的與意義

聚合酶鏈反應（PCR）技術建立以來，定性技術不斷改進和完善，可以達到檢測單個靶序列的水平、但實際工作中常需要定量檢測標本中核酸，而不是某一特定序列存在與否，借助PCR對基因快速、敏感、特異而準確定量成為目前分子生物學技術研究的熱點之一。定量PCR旨在評估樣品中靶分子數，此測定可以是絕對的，如每微克樣本中靶DNA的分子數；也可以是相對定量，即與設定的內參照或外參照比較而言。鑒于PCR方法主要有5個，即對PCR產物的直接定量、極限稀釋法、靶基因與參照基因的同步擴增、競爭性PCR和熒光定量PCR[1]。這幾種放啊各有利弊，對其選擇取決于靶基因的特性、對PCR產量的期望值、對準確度的要求、需要相對還是絕對定量。

人類對于核酸的研究已經有100多年的歷史。20世紀60年代末70年代初，人們致力于研究基因的體外分離技術。但是，由于核酸的含量較少，一定程度上限制了DNA的體外操作。Khorana于1971年最早提出核酸體外擴增的設想。但是，當時的基因序列分析方法尚未成熟，對熱具有較強穩定性的DNA聚合酶還未發現，寡核苷酸引物的合成仍處在手工、半自動合成階段，這種想法似乎沒有任何實際意義。

1985年，美國科學家Kary Mullis在高速公路的啟發下，經過兩年的努力，發明了PCR技術，并在Science雜志上發表了關于PCR技術的第一篇學術論文。從此，PCR技術得到了生命科學界的普遍認同，Kary Mullis也因此而獲得1993年的諾貝爾化學獎。

但是，最初的PCR技術相當不成熟，在當時是一種操作復雜、成本高昂、“中看不中用”的實驗室技術。1988年初，Keohanog通過對所使用的酶的改進，提高了擴增的真實性。爾后，Saiki等人又從生活在溫泉中的水生嗜熱桿菌內提取到一種耐熱的DNA聚合酶，使得PCR技術的擴增效率大大提高。也正是由于此酶的發現使得PCR技術得到了廣泛地應用，使該技術成為遺傳與分子生物學 分析的根本性基石。在以后的幾十年里，PCR方法被不斷改進：它從一種定性的分析方法發展到定量測定；從原先只能擴增幾個kb的基因到目前已能擴增長達幾十個kb的DNA片段。到目前為止，PCR技術已有十幾種之多，例如，將PCR與反轉錄酶結合，成為反轉錄PCR，將PCR與抗體等相結合就成為免疫PCR等。3.國內外研究現狀

3.1.基礎研究方面的應用

目前從事分子生物學的實驗室和研究人員，幾乎每天都在使用PCR，可以說幾乎沒有一個分子生物學家沒有使用過PCR。因此，PCR與分子克隆一樣是分子生物學實驗室的常規方法，可用于達到以下目的：

[1] 擴增目的基因和鑒定重組子； [2]克隆基因；

[3]基因功能和表達調控的研究； [4]基因組測序； [5]制備單鏈模板； [6]致突變；

3.2.PCR在臨床上的應用[2]

[1]在遺傳學上的應用：人類的遺傳性疾病是因為某一堿基序列發生了突變，使之缺失或形成某一限制性內切酶的識別位點，通過PCR結合限制片段長度多態性分析（PCR-RFLP），就可以從基因的水平對遺傳性疾病進行分析。例如，血友病甲是一種常見的遺傳性出血性疾病，患者體內缺乏凝血因子FVIII這是由于基因第14個外顯子的第336位氨基酸的編碼基因發生了突變，產生了一個新的PstI酶切點，因此可以使用PCR-RFLP對血友病進行診斷。PCR還可以用來檢測遺傳性耳聾和Leber遺傳性視神經病。

[2]在腫瘤研究中的應用：PCR已日益廣泛應用于腫瘤的病因與發病機理研究以及腫瘤診斷與治療的研究中。例如，差異顯示PCR技術能針對不同腫瘤尋找其特異而敏感的標志物，并用于腫瘤早期診斷、判斷預后及療效評估。另一方面，在使用普通放療、化療的同時可結合定量PCR技術檢測微小殘留病灶，以進一步改進治療方案。此外，由于癌癥的發生在一定意義上是單個細胞分子發生變化，因而可以使用單細胞PCR技術對癌癥的發病機理進行研究。[3]在基因分型中的應用：當進行器官移植時并須先組織配型工作，此時常應用序列特異性寡核苷酸多態性PCR（PCR-sequence specific oilgonucleotide polymorphism,PCR-SSOP）對人類白細胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）進行分型，使移植成功率大大提高。此外PCR-限制性片段長度多態性也可以用于對HLA的分型。3．3.在法醫學中的應用[3]

例如：最早應用DNA限制性片段長度多態性結合PCR-RFLP來進行法醫學個體識別和親子鑒定。目前發現在真核生物基因組編碼和非編碼序列中的短串聯重復序列的重復次數在個體間存在著差異，因此可以使用短串聯重復PCR技術對其進行分析。使用PCR技術進行法醫鑒定的優點是樣品用量小并且適于對高度降解材料的檢測。除剛才提到的之外，可變數目串聯重復序列（variable number tandem repeat,VN-TR）PCR也可以用于法醫學個體識別和親子鑒定。所以，綜上所述，PCR的確是一種分子生物學研究的基礎技術。在它30多年的發展中衍生出了諸如PCR-RFLP、PCR-SSOP、VN-TR，以及免疫PCR、致突變PCR和定量PCR等十幾種不同的技術方法。PCR技術可以為基因工程提供目的基因，并廣泛地應用于個體識別、親子鑒定、免疫配型、疾病診斷等方面。可以說，PCR已經滲透到了生命科學的各個領域。21世紀是生物工程的世紀。我相信，在今后的發展中PCR技術會不斷地得到擴充和完善，PCR技術也將4.相關檢測技術 4.1.技術原理

DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。實驗中發現，DNA在高溫下也能發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。

但是，DNA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。4.2.工作原理

類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR 擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍 4.3.工作步驟

標準的PCR過程分為三步：

1.DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA 2.退火（25℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。

3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP為原料，從引物的5′端→3′ 端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。每一循環經過變性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。現在有些PCR因為擴增區很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的時間內復制完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次升降溫過程，提高了反應速度 5.研究方案

醫學檢驗大致可分為形態學、生物化學、血清免疫學和分子生物學幾大類，其分別代表幾代實驗診斷技術。60年代DNA雙螺旋結構及半保留復制模式的出現，70年代基因重組及體外基因克隆技術、分子雜交技術的應用使分子生物學在疾病診斷中得到了長足的發展。特別是1985年Mullis發明了聚合酶鏈式反應（PCR）技術，使醫學界真正興起了基因診斷技術熱，成為現代醫學發展的又一里程碑。用于臨床檢驗的PCR技術與經典的PCR反應在操作上稍有區別，有其自己的特色。一般在樣品處理上，多采用非離子去污劑一次加熱處理，這種方法對DNA純化有限，但適應臨床微量、快速的特點。另外PCR反應體系中各組成成份往往都預分裝到反應管中，既減少操作者的工作強度而且也減少了污染的機會，具有極高的使用價值。本公司率先研制并推出單管單人份的PCR診斷試劑，具有開創性意義。這些改進都不影響PCR效果，同樣表現出高特異性、高敏感性、簡便快捷等PCR最優秀的特征，在常見傳染病、性病、腫瘤、遺傳病、寄生蟲病、優生優育、法醫學等廣泛領域中有相當高的實際應用價值。5.1研究方法

① 早期診斷，因為PCR擴增極其敏感，理論上可檢出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潛伏期即可被PCR法檢出。

② 對低持續感染乙肝病人的診斷，有些乙肝病人體內的病毒長期低復制感染，血清病毒濃度極低，一般酶標試劑無法檢出，可以用PCR法檢出。

③ 療效跟蹤及病程判斷，因為PCR能半定量檢測乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其數量多少的最直接指標。在治療過程中通過監測血清或白細胞中病毒基因存在與否及其動態變化即能準確地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的濃度很低，丙肝病毒的分離尚未成功。目前用于丙肝病毒檢驗的方法主要是ELISA法測定血清中的HCV抗體。由于HCV尚無法分離純化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，這些人工抗原與天然病毒抗原有一定的區別，理論上是存在假陽性或假陰性。同時血清中抗體的出現及動態變化與病人病情無線性相關關系。RT－PCR技術使這些困難得到解決。HCV是RNA病毒，需先將病毒RNA逆轉錄為cDNA（RT）后再進行PCR擴增，這種技術稱之為逆轉錄－PCR（RT－PCR）。PCR敏感性高可以檢測出血清中低濃度的病毒，了解病毒在體內復制的動態狀況。RNA純化要求嚴格，是RT－PCR的技術關鍵，本公司目前使用的高效基因釋放劑，聯合特異性固相基因吸附乳膠顆粒，對樣本中的RNA進行分離純化，使這一問題得到解決。通常用于RNA→cDNA逆轉錄的酶大致可以分為二大類，即低溫逆轉錄酶，如AMV/MLV逆轉錄酶，高溫逆轉錄酶，如Tth酶。Tth酶在錳離子作用下，具有逆轉錄酶活性，Tth酶活性溫度高，可以使核酸充分線性化，提高逆轉錄效率及特異性。Tth酶在鎂離子的作用下，又具有DNA聚合酶活性，從而真正實現單管單酶單人份的擴增要求，這樣就在不降低擴增敏感性的條件下，一步完成擴增，不僅簡化操作，而且又減少污染，提高檢測的準確性。國內本公司已采用這種技術推出單管單酶單人份的RT－PCR診斷試劑。丁型肝炎病毒是缺陷病毒，與乙型肝炎病毒協同感染。甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒主要存在于急性病人糞便樣本中，戊型肝炎病毒也長期存在于血清中。在PCR檢測時，需注意取材的合理性。在消化道傳染性疾病中，另一類最重要的感染性疾病是幽門螺旋桿菌（HP）所引起的胃炎、胃潰瘍等。HP可以經口－口途經傳播并定位于胃粘膜上皮細胞，早期表現為淺表性胃炎，可發展成為胃潰瘍。我國胃炎發病率之高估計比乙型肝炎更嚴重，對HP的檢測應受到廣大醫務工作者的重視。對HP的檢測可以用生化法測試尿素酶或用免疫法測試血清中對HP特異性抗體，也可對胃液、胃粘膜樣本進行細菌培養及菌種鑒定。PCR法檢測HP非常敏感且特異性高，有研究發現可以從病人的唾液或口腔含漱液中檢出HP.PCR法避免了取胃液及胃粘膜，減少病人痛苦，5.2.技術路線

PCR技術

聚合酶鏈式反應技術（PCR）是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法。具有特異性強、敏感性高、快速、簡便、可擴增RNA或cDNA、對起始材料質量要求低等優點。5.3.所用儀器與材料

引物: PCR產物的特異性主要取決于引物鏈的特異性。由于存在同源序列，隨意設計的引物鏈，其PCR產物在電泳分析時可能出現多條鏈，因此在設計引物鏈時應充分考慮引物特異性。引物長度一般為15-30個堿基,G+C含量為40-60%,濃度0.1-1umol/L。TaqDNA聚合酶：濃度為1-4ul/100ul。TaqDNA聚合酶單位用量增長可能導致非特異DNA擴增。模板DNA：應避免混有任何蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制劑及能結合DNA的蛋白酶。DNA摸板的制備方法有加熱法、凍溶法、超聲波粉碎法、堿變性法、SDS裂解法等多種。

4×dNTPs ： dNTP儲存液pH應為7.0，在反應體系中，4種dNTP的濃度應相同，每種dNTP的濃度以50-200 umol/L為宜。緩沖液及其他成份：PCR反應體系中，一般采用Tris-HCl緩沖液。適宜的Mg2+濃度為高于dNTP總濃度0.2-2.5 mmol/L。

6．研究內容

PCR技術的出現對法醫學的發展也有不可低估的作用。在法醫物證如血斑、毛發、組織碎片等的確證，DAN多態性分析遠比血清學或等方法確實可靠。早期DNA多態性分析主要使用Southern印跡雜交的方法。1985年Jeffreys首先采用肌紅基因第一個內含子中的串聯重復序列作探針，從人的基因庫中篩選出小衛量DNA，使用阿交法產生雜交圖譜即DNA指紋。這一技術成功地應用于個人識別及親子鑒定。這種方法仍受到樣本量的限制，當樣本DNA數量不足時或DAN嚴重降解則不能正常檢出。且雜交技術常使用同位素杯記探針要求較鎬的防護措施。PCR技術的出現，可以對極少量物證如一根毛發、一滴血液、極小精斑都可以進行分析。在人類基因組中有許多由10-15bp核心順序構成的串聯重復DNA序列，具有單位點特征的稱為VNTR結構，多位點串聯成為衛星DNA。6．1.檢測對象

常見的傳染性疾病有細菌、病毒、衣原體、支原體等，可引起消化、呼吸、循環、泌尿生殖等不同系統相應的病變。消化系統感染性疾病在我國具有代表性意義的有肝炎、胃炎及腸道感染性疾病。引起肝炎的病原體主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它還有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。這幾種肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均為RNA病毒。我國是乙肝高發區，乙肝病人為世界乙肝病人總數的50％。[4]乙肝病毒經血液傳播，病毒主要在肝細胞中增殖，也可以長期存留在骨髓細胞或外周血白細胞中。通常用PCR法檢測血清中的乙肝病毒。有報道用PCR法可以在淚液、乳汁、精液及血白細胞中檢出乙肝病毒，這些發現提示其它傳染途經存在的可能 6．2檢測內容

PCR反應混合物經過循環擴增后，所需做的工作就是檢測反應液中是否存在預期擴增產物及產物的特異性。目前已經發展了許多檢測分析PCR擴增產物的方法。包括凝膠電泳、高壓液相色譜、核酸探針雜交、探針捕獲酶免疫分析、酶切圖譜分析、單鏈構型多態性分析、核酸序列分析。

PCR技術類型[5]

免疫PCR技術 原位PCR技術 不對稱PCR技術 巢式PCR技術 反向PCR技術 逆轉錄PCR技術

復合PCR技術

彩色PCR技術

抗原捕獲PCR技術 增敏PCR技術

酶標PCR技術

二溫式PCR技術

錨定PCR技術

定量PCR技術

毛細管PCR技術

多重PCR技術

巢式或套式PCR技術 7.預期目標PCR 技術在大腸桿菌O157: H7檢測中

（1)簡單PCR： Meng等以eae基因5′末端附近一段688bp DNA片段為基礎設計了一對引物,擴增產物為633bp的DNA片段。其退火溫度為60℃－63℃, 應用煮沸法與基因釋放法,大腸桿菌O157: H7檢出限分別為25與38CFU/ml,檢測時間為3h。Thomas等用PCR擴增了slt基因片段。引物： 正鏈5′-(TTTACGATAGACTTCTCGAC)-3', 反鏈5′-（CACATATAAATTATTTCGCTC）-3’

其PCR產物由凝膠電泳測定,檢測時間為ld。

徐建國等根據O157: H7 特有的hlyA、B基因序列設計了PCR引物,產物為338bp。

PCR技術在大腸桿菌O157: H7檢測中（2）多重PCR:由于鑒定O157: H7血清型不能僅僅依靠簡單PCR,近年來國外學者對多重PCR方法在大腸桿菌O157: H7的診斷價值方面進行了研究。Meng等同時擴增了eae 上游基因片段、sitⅠ基因片段、sit Ⅱ基因片段,其長度分別為633、210、484bp。此引物設計可有效區別O157: H7血清型與O55: H7、O55: NM。Fratamico等在一個單一反應中同時擴增了eae基因、slt Ⅰ、Ⅱ的保守序列及60MDa質粒保守序列,其產物分別為1087、227、224、166bp。嚴笠選用針對大腸桿菌O157: H7志賀樣毒素Ⅰ、Ⅱ（SLT－Ⅰ、SLT－Ⅱ）和溶血素（Hly）基因的三對引物,在同一擴增體系中進行PCR,檢測12株不同來源的O157: H7大腸桿菌及其它致病性大腸桿菌及沙門菌、志賀菌15株。結果復合PCR方法較單一PCR方法具有較高的特異性，12株O157: H7取得了穩定、可靠的陽性結果。能迅速、有效地與其它致病性大腸桿菌及沙門氏菌、志賀菌相鑒別。

PCR技術在大腸桿菌O157: H7檢測中的應用（3）原位PCR: kurokawa等不用培養過程,直接用原位PCR技術結合落射顯微鏡,在單細胞水平快速檢測O157: H7。

4.23SrRNA在大腸桿菌O157: H7分型、檢測中

傳統的細菌分類方法主要依賴于細菌的形態學、代謝產物、酶活性和表面抗原等特征。隨著現代分子生物學理論和技術的迅速發展，微生物檢測進入了基因時代，以核糖體核糖核酸序列為基礎的分類方法為微生物的鑒別提供了新的分子生物學方法。[6]如16srRNA、23srRNA、16-23srRNA區間序列分析等等，它完全不同于傳統方法，具有快速、簡便、敏感和特異等優點。

參考文獻

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[2] 徐煥賓,賁昆龍,曾濤,李勁光;檢測HIV-1載量的熒光實時定量PCR技術的建立及其應用[J];中國病毒學;2001年02期

[3] 顧鳴，韓偉.復合PCR鑒定沙門菌的方法.中國衛生檢驗雜志[J]，2003，13(2):154-157 [4] 冉陸.腸出血性大腸埃希菌(EHEC)流行趨勢.中國食品衛生雜志[J]，1999，3:31-35 [5] 石嵐;實時定量PCR檢測IgH基因重排的研究[D];昆明醫學院;2004年 [6] 王穎.食品安全學技能訓練.2010.10