第一篇：微生物鑒定的生理生化反應匯總

微生物鑒定的生理生化反應

各種細菌具有各自獨特的酶系統，因而對底物的分解能力不同，其代謝產物也不同。用生物化學方法測定這些代謝產物，可用來區別和鑒定細菌的種類。利用生物化學方法來鑒別不同細菌，稱為細菌的生物化學試驗或稱生化反應。生物化學試驗的方法很多，主要有以下幾類。

一、碳水化合物的代謝試驗 1．糖（醇、苷）類發酵試驗

（1）原理：不同種類細菌含有發酵不同糖（醇、苷）類的酶，因而對各種糖（醇、苷）類的代謝能力也有所不同，即使能分解某種糖（醇、苷）類，其代謝產物可因菌種而異。檢查細菌對培養基中所含糖（醇、苷）降解后產酸或產酸產氣的能力，可用以鑒定細菌種類。

(2)方法：在基礎培養基中（如酚紅肉湯基礎培養基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）類。所使用的糖（醇、苷）類有很多種，根據不同需要可選擇單糖、多糖或低聚糖、多元醇和環醇等，見表6-4-1。將待鑒定的純培養細菌接種入試驗培養基中，置35℃孵育箱內孵育數小時到兩周（視方法及菌種而定）后，觀察結果。若用微量發酵管，或要求培養時間較長時，應注意保持其周圍的濕度，以免培養基干燥。

(3)結果：能分解糖（醇、苷）產酸的細菌，培養基中的指示劑呈酸性反應（如酚紅變為黃色），產氣的細菌可在小倒管（Durham小管）中產生氣泡，固體培養基則產生裂隙。不分解糖則無變化。

(4)應用：糖（醇、苷）類發酵試驗，是鑒定細菌的生化反應試驗中最主要的試驗，不同細菌可發酵 不同的糖（醇、苷）類，如沙門菌可發酵葡萄糖，但不能發酵乳糖，大腸埃希菌則可發酵葡萄糖和乳糖。即便是兩種細菌均可發酵同一種糖類，其發酵結果也不盡相同，如志賀菌和大腸埃希菌均可發酵葡萄糖，但前者僅產酸，而后者則產酸、產氣，故可利用此試驗鑒別細菌。

表6-4-1 常用于細菌糖發酵試驗的糖、醇類

單糖 四碳糖：赤蘚糖 , 五碳糖：核糖 核酮糖 木糖

阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖 果糖 半乳糖 甘露糖

雙糖 蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麥芽糖（兩分子葡萄糖）三糖 棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖 菊糖（多分子果糖）淀粉

醇類 側金盞花醇 衛茅醇 甘露醇 山梨醇 非糖類 肌醇

2．葡萄糖代謝類型鑒別試驗

(1)原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型；能進行無氧降解的為發酵型；不分解葡萄糖的細菌為產堿型。發酵型細菌無論在有氧或無氧環境中都能分解葡萄糖，而氧化型細菌在無氧環境中則不能分解葡萄糖。本試驗又稱氧化發酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）試驗，可用于區別細菌的代謝類型。

(2)方法：挑取少許純培養物（不要從選擇性平板中挑取）接種2支HL培養管中，在其中一管加入高度至少為0.5cm的無菌液體石蠟以隔絕空氣（作為密封管），另一管不加（作為開放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。

(3)結果： 兩管培養基均不產酸（顏色不變）為陰性；兩管都產酸（變黃）為發酵型；加液體石蠟管不產酸，不加液體石蠟管產酸為氧化型。(4)應用：主要用于腸桿菌科與其它非發酵菌的鑒別。腸桿菌科、弧菌科細菌為發酵型，非發酵菌為氧化型或產堿型。也可用于鑒別葡萄球菌（發酵型）與微球菌（氧化型）。3．甲基紅（MR）試驗

(1)原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸進一步被分解為甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培養基pH下降至4.5以下時，加入甲基紅指示劑呈紅色。如細菌分解葡萄糖產酸量少，或產生的酸進一步轉化為其它物質（如醇、醛、酮、氣體和水），培養基pH在 5.4以上，加入甲基紅指示劑呈桔黃色。

(2)方法：將待試菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培養基中滴加5~6滴甲基紅指示劑，立即觀察結果。

(3)結果判定：呈現紅色者為陽性，桔黃色為陰性，桔紅色為弱陽性。

(4)應用：常用于腸桿菌科內某些種屬的鑒別，如大腸埃希菌和產氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬為陰性，而沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬等為陽性。

4．β－半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）

(1)原理：乳糖發酵過程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些細菌只有半乳糖苷酶，因而只能遲緩發酵乳糖，所有乳糖快速發酵和遲緩發酵的細菌均可快速水解鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黃色的鄰硝基酚。用于枸櫞酸菌屬、亞利桑那菌屬與沙門菌屬的鑒別。

(2)方法：將待試菌接種于ONPG肉湯中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：呈現亮黃色為陽性，無色為陰性。

(4)應用：可用于遲緩發酵乳糖細菌的快速鑒定，本法對于迅速及遲緩分解乳糖的細菌均可短時間內呈現陽性。埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷菌屬和腸桿菌屬等均為試驗陽性，而沙門菌屬、變形桿菌屬和普羅威登斯菌屬等為陰性。

5．VP試驗

(1)原理：測定細菌產生乙酰甲基甲醇的能力。某些細菌如產氣腸桿菌，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸進一步脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進而與培養基中的精氨酸等含胍基的物質結合形成紅色化合物。即V-P試驗陽性。(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙醇溶液）0.6ml，輕輕振搖試管，然后加0.2ml 400g/L KOH，輕輕振搖試管30s至1min，然后靜置觀察結果。

(3)結果：紅色者為陽性，黃色或類似銅色為陰性。

(4)應用：主要用于大腸埃希菌和產氣腸桿菌的鑒別。本試驗常與MR試驗一起使用，一般情況下，前者為陽性的細菌，后者常為陰性，反之亦然。但腸桿菌科細菌不一定都這樣規律，如蜂房哈夫尼亞菌和奇異變形桿菌的VP試驗和MR試驗常同為陽性。6．膽汁七葉苷水解試驗

（1）原理：在10%~40％膽汁存在下，測定細菌水解七葉苷的能力。七葉苷被細菌分解生成的七葉素，七葉素與培養基中的枸櫞酸鐵的二價鐵離子發生反應形成黑色化合物。

(2)方法：將被檢菌接種于膽汁七葉苷培養基中，35℃孵育18~24h后，觀察結果。(3)結果：培養基完全變黑為陽性，不變黑為陰性。

(4)應用：主要用于鑒別D群鏈球菌與其它鏈球菌的區別，以及腸桿菌科的某些種、某些厭氧菌（如脆弱擬桿菌等）的初步鑒別。D群鏈球菌本試驗為陽性。7．淀粉水解試驗

(1)原理：產生淀粉酶的細菌能將淀粉水解為糖類，在培養基上滴加碘液時，可在菌落周圍出現透明區。

(2)方法：將被檢菌劃線接種于淀粉瓊脂平板或試管中，35℃孵育18~24h，加入革蘭碘液數滴，立即觀察結果。

(3)結果：陽性反應，菌落周圍有無色透明區，其它地方藍色；陰性反應，培養基全部為藍色。

(4)應用：用于白喉棒狀桿菌生物型的分型，重型淀粉水解試驗陽性，輕、中型陰性；芽胞桿菌屬菌種和厭氧菌某些種的鑒定。8．甘油復紅試驗

(1)原理：甘油可被細菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脫去羧基為乙醛，乙醛與無色的復紅生成醌式化合物，呈深紫紅色。

(2)方法：取被檢菌接種于甘油復紅肉湯培養基中，于35℃孵育，觀察2~8d。應同時做陰性對照。

(3)結果：紫紅色為陽性，與對照管顏色相同為陰性。

(4)應用：主要用于沙門菌屬內各菌種間的鑒別。傷寒沙門菌、甲（丙）型副傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、孔道夫沙門菌和仙臺沙門菌本試驗為陰性，乙型副傷寒沙門菌結果不定，其它不常見沙門菌多數為陽性。9．葡萄糖酸氧化試驗

(1)原理：某些細菌可氧化葡萄糖酸鉀，生成α-酮基葡萄糖酸。α-酮基葡萄糖酸是一種還原性物質，可與班氏試劑起反應，出現棕色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖酸鹽培養基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏試劑1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷卻，觀察結果。

(3)結果：出現黃到磚紅色沉淀為陽性。不變或仍為藍色為陰性。

(4)應用：主要用于假單胞菌的鑒定和腸桿菌科菌分群。

二、氨基酸和蛋白質的代謝試驗 1．硫化氫試驗

(1)原理：某些細菌能分解含硫氨基酸生成硫化氫，與亞鐵離子或鉛離子結合形成黑色沉淀物。

(2)方法：將待檢菌接種于含硫化物及亞鐵離子的培養基或克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）中，35℃孵育18~24h，觀察有無黑色沉淀出現。或用醋酸鉛紙條，懸掛于KIA管中（白色濾紙，根據試管大小裁剪適當，在熱的50g/L醋酸鉛飽和水溶液中浸泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高壓滅菌備用）。醋酸鉛是最敏感的方法。(3)結果：有黑色沉淀物為陽性。

(4)應用：主要用于鑒別腸桿菌科細菌，如沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、愛德華菌屬等為陽性，其它菌屬大多為陰性。但沙門菌屬中亦有部分硫化氫陰性菌株，如甲型副傷寒、仙臺、豬霍亂沙門菌等。2．明膠液化試驗

(1)原理：細菌分泌的胞外蛋白水解酶（明膠酶）能分解明膠，使明膠失去凝固能力而液化。(2)方法：將待檢菌接種于明膠培養基中，35℃孵育24h到7d或更長時間，每24h取出放入4℃冰箱約2h后，觀察有無凝固。

(3)結果：如無凝固，則表示明膠已被水解，液化試驗陽性。如凝固，則繼續培養。

(3)應用：奇異變形桿菌、普通變形桿菌、沙雷菌屬和陰溝腸桿菌等到能液化明膠，腸桿菌科中的其它細菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外，許多假單胞菌也能產生明膠酶而使明膠液化。3．吲哚試驗（靛基質試驗）(1)原理：某些細菌有色氨酸酶，能分解色氨酸產生吲哚，吲哚與對二甲氨基苯甲醛形成紅色的玫瑰吲哚。

(2)方法：將待檢菌接種于富含色氨酸的蛋白胨水培養基中，35℃孵育24~48h，加入靛基質試劑，觀察結果。

(3)結果：紅色為陽性，無色為陰性。

(4)應用：主要用于腸桿菌科細菌的鑒定，如大腸埃希菌與產氣腸桿菌，肺炎克雷伯菌和產酸克雷伯菌等的鑒別。4．苯丙氨酸脫氨酶試驗

(1)原理：測定細菌是否產生苯丙氨酸脫氨酶。細菌產生的苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨后生成苯丙酮酸，加入三氯化鐵試劑后產生綠色反應。若延長時間，會引起退色。

(2)方法：將待檢菌大量接種入苯丙氨酸培養基中，35℃孵育18~24h，滴加100g/L三氯化鐵試劑4~5滴，立即觀察菌落生長處有無綠色出現。(3)結果：有綠色出現為陽性。

(4)應用：變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬均為陽性，腸桿菌科其它細菌均為陰性。5．氨基酸脫羧酶試驗

(1)原理：某些細菌可產生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養基變為堿性，可用指示劑指示出來。

(2)方法：將待檢菌分別接種于1支氨基酸（賴氨酸，鳥氨酸或精氨酸）脫羧酶試驗管和1支氨基酸脫羧酶對照管（無氨基酸），各覆蓋至少0.5cm高度的無菌石蠟油，35℃孵育1~4d，觀察結果。

(3)結果：若為溴甲酚紫指示劑，則試驗管紫色為陽性，黃色為陰性，對照管應為黃色。(4)應用：主要用于某些細菌種間的鑒別，如賴氨酸用于產氣腸桿菌（陽性）與陰溝腸桿菌（陰性）；鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和產氣腸桿菌（陰性）等。6．精氨酸雙水解酶試驗

(1)原理：精氨酸經兩次水解后,生成鳥氨酸、氨及二氧化碳。鳥氨酸又在脫羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均為堿性物質，故可使培養基變堿，用指示劑指示出來。(1)方法：將待檢菌接種于試驗培養上，置35℃孵箱孵育1~4d，觀察結果。

(2)結果：溴甲酚紫指示劑呈紫色為陽性，酚紅指示劑呈紅色為陽性。黃色為陰性。(3)應用：主要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。7．尿素酶試驗

(1)原理：某些細菌能產生尿素酶，分解尿素產生大量的氨，使培養基變堿。(2)方法：將待檢菌接種于含有尿素的培養基中，35℃孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：紅色為陽性，不變為陰性。

(4)應用：主要用于腸桿菌科變形桿菌屬、普羅威登菌屬、克雷伯菌屬及假單胞菌屬的鑒定。

8．霍亂紅試驗

(1)原理：霍亂弧菌分解色氨酸生成吲哚，并能使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，當加入硫酸后生成亞硝酸吲哚，呈紅色反應。

(2)方法：將待檢菌接種于蛋白胨水中，置35℃孵育24h，加入濃硫酸數滴，觀察結果。(3)結果：呈紅色者為陽性。

(4)應用：霍亂弧菌呈陽性反應，但本試驗并非霍亂弧菌所特有。凡能產生吲哚并還原硝酸鹽為亞硝酸鹽的細菌，均可呈現陽性反應。

三、碳源和氮源利用試驗 1．枸櫞酸鹽利用試驗

(1)原理：某些細菌能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源，而在此培養基上生長，并分解枸櫞酸鹽生成碳酸鈉，使培養基變堿性。

(2)方法：將待檢菌接種于枸櫞酸鹽培養基上，置35℃孵育1~4d，逐日觀察結果。

(3)結果：若用溴麝香草酚蘭指示劑，斜面出現菌落或菌苔，培養基變藍色為陽性；無菌落生長，培養基綠色為陰性。

(4)應用：可用此試驗作細菌種屬間鑒定。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性，沙門菌屬、克雷伯菌屬通常陽性，粘質和液化沙雷菌和某些變形桿菌及枸櫞酸桿菌陽性。此外，銅綠假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌和嗜水氣單胞菌也能利用枸櫞酸鹽。

2．丙二酸鹽利用試驗

(1)原理：某些細菌能利用丙二酸鹽作為唯一碳源，丙二酸鹽被分解生成碳酸鈉，使培養基變堿。

(2)方法：將待檢菌接種于丙二酸鹽培養基中，置35℃孵育24~48h，觀察結果。(3)結果：培養基由綠色變為藍色為陽性。顏色無變化為陰性。

(4)應用：腸桿菌科中亞利桑那菌和克雷伯菌屬為陽性，枸櫞酸桿菌屬、腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬有不同生物型反應，其它各菌屬均為陰性。

3．醋酸鈉利用試驗

(1)原理：細菌利用銨鹽作為唯一氮源，同時，利用醋酸鹽作為唯一碳源時，可在醋酸鹽培養上生長，分解醋酸鹽生成碳酸鈉，使培養基變為堿性。

(2)方法：將被檢菌接種于醋酸鹽培養基中，置35℃孵育2~7d，逐日觀察結果。(3)結果：培養基上有細菌生長，并變為藍色為陽性。

(4)應用：主要用于大腸埃希菌和志賀菌屬的鑒別，前者為陽性，而后者為陰性。4．馬尿酸鈉水解試驗

(1)原理：某些細菌可具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸與三氯化鐵試劑結合，形成苯甲酸鐵沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于馬尿酸鈉培養基中，置35℃孵育48h，離心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化鐵試劑0.2ml，立即混勻，經10~15min觀察結果。(3)結果：出現恒定之沉淀物為陽性。(5)應用：主要用于B群鏈球菌的鑒定。

5、乙酰胺利用試驗

(1)原理：許多非發酵菌產生一種脫酰胺酶，可使乙酰胺經脫酰胺作用釋放氨，使培養基變堿。

(2)方法：將被檢菌接種于乙酰胺培養基中，置35℃孵育24~48h，觀察結果。

(3)結果：培養基由綠色變為藍色為陽性。如不生長，或稍有生長，但培養基顏色不變為陰性。

(4)應用：主要用于非發酵菌的鑒定。銅綠假單胞菌、去硝化產堿桿菌、食酸假單胞菌為陽性，其它非發酵菌大多數為陰性。

四、酶類試驗 1.氧化酶試驗

(1)原理：氧化酶又稱細胞色素氧化酶，是細胞色素氧化酶系統中的最終呼吸酶。此酶并不直接與氧化酶試劑起反應，而是先使細胞色素C氧化，然后此氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，產生顏色反應。因此，本試驗結果與細胞色素C的存在有關。

(2)方法：取潔凈濾紙條，沾取菌落少許，加氧化酶試劑（10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液或10g/L鹽酸二甲基對苯二胺水溶液）1滴，1min內觀察結果。也可將試劑滴加到菌落上進行試驗。

(3)結果：陽性者立即變粉紅色，5~10s內呈深紫色。無色為陰性。

(4)應用：用于奈瑟菌屬的菌種鑒定，該屬細菌均陽性。此外，也用于假單胞菌屬與腸桿菌科細菌的區別，前者陽性，而后者陰性。莫拉菌屬、產堿桿菌屬等均為陽性。

注意事項： ①試驗時應避免接觸含鐵物質，以免出現假陽性。②10g/L鹽酸四甲基對苯二胺或10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液為無色溶液，在空氣中易被氧化而失效，故應經常更換新試劑，并盛于棕色瓶中，若試劑已變成深藍色，應棄去不用。

2．觸酶試驗

(1)原理：觸酶又稱過氧化氫酶，具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫成為水和原子態氧，繼而形成氧分子，出現氣泡。

(2)方法：取潔凈玻片1張，用接種環挑取細菌，加3％H2O2 1滴，立即觀察結果。(3)結果：若立即出現大量氣泡為陽性。無氣泡為陰性。

(4)應用：大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶，但鏈球菌科陰性，故常用此試驗來鑒定。此外，金氏桿菌屬的細菌也為陰性。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗，結核分枝桿菌為陰性，戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。

注意事項：①3％H2O2溶液要新鮮配制。②不宜用血瓊脂平板上生長的菌落，因紅細胞含有觸酶，可致假陽性反應，③取對數生長期的細菌。3．凝固酶試驗

(1)原理：凝固酶試驗是鑒定葡萄球菌致病性的重要試驗。致病性葡萄球菌可產生兩種凝固酶，一種是與細胞壁結合的凝聚因子，稱結合凝固酶，它直接作用于血漿中纖維蛋白原，使發生沉淀，包圍于細菌外面而凝聚成塊，玻片法陽性結果是由此凝聚因子所致；另一種凝固酶是分泌至菌體外，稱為游離凝固酶，它能使凝血酶原變成凝血酶類產物，使纖維蛋白原變為纖維蛋白，從而使血漿凝固。試管法可同時測定結合型和游離型凝固酶。(2)方法: ①玻片法：在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環取待檢培養物與其混合（設陽性和陰性對照）制成菌懸液，若經10~20s內無自凝現象發生，則加入人或兔新鮮血漿1環，與菌懸液混合，觀察結果。②試管法：于試管內加1﹕4稀釋的兔或人血漿0.5ml，再加1~2個待試菌菌落，置37℃水浴，每30min觀察1次結果。

(3)結果：①玻片法：5~10s內出現凝集者為陽性。②試管法：如有凝塊或整管凝集出現為陽性。2h后無上述現象出現，則放置過夜后再觀察。

(4)應用：本試驗僅用于致病性葡萄球的鑒定。

注意事項：①玻片法為篩選試驗，陽性、陰性均需進行試管法測定。②血漿必須新鮮。③應使用肝素而非枸櫞酸鹽作抗凝劑抗凝的血漿。④本試驗也可用市購的膠乳凝集試驗試劑盒測定。

4．DNA酶試驗

(1)原理： 某些細菌能產生DNA酶，水解外源性DNA使之成為寡核苷酸。DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸則不會。故在DNA瓊脂平板上加鹽酸后，可在菌落周圍形成透明區。

(2)方法：在DNA瓊脂平板上點種待檢菌，35℃孵育18~24h，用1 mol/L鹽酸傾注平板，觀察結果。

(3)結果：如菌落周圍有透明區者為陽性，無透明區為陰性。

(4)應用：主要用于腸桿菌科及葡萄球菌屬某些菌種的鑒定。沙雷菌、變形桿菌和金黃色葡萄球菌DNA酶均陽性。

5．膽汁溶菌試驗

(1)原理：膽汁或去氧膽酸鈉能導致某些細菌溶解，一方面是由于膽汁或去氧膽酸鈉降低了細菌細胞膜上的表面張力，使細菌的細胞膜破損或使菌體裂解。另一方面可能與激活細菌體內的自溶酶有關。

(2)方法：①試管法：用純培養物制備1ml生理鹽水濃菌懸液，pH調至7.0，分裝兩支試管，各0.5ml。其中一管加0.5ml 100g/L去氧膽酸鈉為試驗管，另一管加0.5ml生理鹽水作對照。35℃孵育每小時觀察1次結果。②平板法：在血平板上選取單個可疑菌落，作好標記，直接在菌落上加1接種環20g/L去氧膽酸鈉（pH7.0），置35℃孵育30min（平板不要翻轉）觀察結果。

(3)結果：①試管法：在3h內液體透明為陽性。②平板法：如菌落消失，僅留下溶血區為陽性，菌落不消失為陰性。

(4)應用：用于肺炎鏈球菌的鑒定。6．硝酸鹽還原試驗

(1)原理：硝酸鹽還原反應包括兩個過程，其一是在合成代謝過程中，硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉化為氨基酸和細胞內其它含氮化合物；另一是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統中的終末受氫體。硝酸鹽還原過程可因細菌不同而異。有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌等；有的細菌可使其還原為亞硝酸鹽和離子態的銨；有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如沙雷菌屬；有的細菌還可以將其還原產物在合成性代謝中完全利用。硝酸鹽或亞硝酸鹽如果還原生成氣體的終末產物如氮或氧化氮，則稱為脫硝化或脫氮化作用。某些細菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸作用，生成亞硝酸，亞硝酸與試劑中的對氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者與α-萘胺結合生成N-α萘胺偶苯磺酸。

(2)方法：將待檢菌接種于硝酸鹽培養基（內含小倒管）中，35℃孵育1~4d。將甲、乙等量混合液（用時混合）0.1ml加于試管內，立即或10min內觀察結果。

(3)結果：出現紅色為陽性反應。如欲觀察有無氮氣產生，可于培養基管內加1只小倒管，有氣泡產生，則表示有氮氣生成。如欲檢查培養基中硝酸鹽是否被分解，可取鋅粉少許加入培養基內，如出現紅色表明硝酸鹽仍存在；若不出現紅色，表示硝酸鹽已被分解。

(4)應用：本試驗廣泛用于細菌鑒定。腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；假單胞菌屬中有的細菌能產生氮氣，如銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、斯氏假單胞菌，有的則能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，如鼻疽假單胞菌等；厭氧菌如韋榮菌也能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。7．卵磷脂酶試驗

(1)原理：細菌產生的卵磷脂酶，經鈣離子作用，能迅速分解卵黃或血清中的卵磷脂形成混濁沉淀狀的甘油酯和水溶性磷酸膽堿。

(2)方法：取待檢菌劃線接種或點種在卵黃瓊脂平板上，置35℃孵育3~6h，觀察結果。(3)結果：3h后在菌落周圍形成乳白色混濁，即為卵磷脂酶試驗陽性，6h后該混濁圈可擴大到直徑5~6mm。(4)應用：該試驗主要用于厭氧的鑒定。產氣莢膜梭菌和諾維梭菌為陽性，其他梭菌為陰性。蠟樣芽孢桿菌亦為陽性。8．磷酸酶試驗

(1)原理：磷酸酶是磷酸脂的水解酶，可使單磷脂水解，其反應可根據反應基質不同而異，如用磷酸酚酞為基質，經磷酸酶水解后可釋放酚酞，在堿性環境中呈紅色。

(2)方法：取待檢菌接種于磷酸酚酞瓊脂平板上，置35℃孵育18~24h，于平皿蓋內加1滴濃氨水，熏蒸片刻，觀察結果。亦可用液體培養基，經孵育后，向管內加400g/L氫氧化鈉溶液1滴，觀察結果。

(3)結果：菌落變為紅色者為陽性。

(4)應用：主要用于致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌的鑒別，前者為陽性，后者為陰性。

9．脂酶試驗

(1)原理：細菌產生的脂酶可分解脂肪為游離脂肪酸。在培養基中加入維多利亞藍可與脂肪結合成為無色化合物，如果脂肪被分解，則維多利亞藍釋出，呈藍色。

(2)方法：將待檢菌接種于含維多利亞藍的脂酶培養基中，置35℃孵育24h，觀察結果。(3)結果：培養基變為深藍色者為陽性，否則可呈無色或粉紅色。

(4)應用：主要用于厭氧菌鑒定。在擬桿菌中產黑色素擬桿菌中間亞種產生脂酶，其它擬桿菌陰性；在梭菌屬中諾維梭菌和產芽胞梭菌也產生此酶，其它梭菌為陰性。10．CAMP試驗

(1)原理：B群鏈球菌（無乳鏈球菌）產生一種“CAMP”因子，此種物質能促進葡萄球菌的β-溶血素的活性。因此，可在兩種細菌的交界處溶血力增強，出現箭頭型透明溶血區。

(2)方法：在羊血或馬血瓊脂平板上，先以β-溶血的金黃色葡萄球菌劃一橫線接種。再將待檢菌與前一劃線作垂直接種，兩者應相距1cm，于35℃孵育18~24h，觀察結果。每次試驗應做陰陽性對照。

(3)結果：兩種細菌劃線交接處出現箭頭型溶血區為陽性。

(4)應用：主要用于B群鏈球菌（陽性）的鑒定，其他鏈球菌均為陰性。11．石蕊牛乳試驗

(1)原理：由于牛乳內含有豐富的蛋白質和糖類，各種細菌對這些物質的分解能力不同，故可有數種不同反應，用以鑒別細菌。(2)將待檢菌接種于石蕊牛乳培養基中，若為芽胞梭菌，要在培養基中加入無菌鐵末，置35℃孵育18~24h，必要時可延長至14d。觀察結果。

(3)結果：①產酸：發酵乳糖產酸，使指示劑變為粉紅色。②產氣：發酵乳糖而同時產氣，可沖開上面的凡士林。③凝固：因產酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固。④胨化：將凝固的酪蛋白繼續水解為胨，培養基上層液體變清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白。⑤產堿：乳糖未發酵，因分解含氮物質，生成胺及氨，培養基變堿，指示劑變為藍色。(4)應用：主要用于梭菌、鏈球菌和丙酸桿菌的鑒定。

五、抑菌試驗

1．Optochin敏感試驗

(1)原理：Optochin(奧普托欣)是鹽酸乙基氫化羥基奎寧的商品名。對肺炎鏈球菌有特異抑制作用，其作用機制可能是干擾葉酸生物合成作用，而對其它鏈球菌則無此作用。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養物均勻涂布于血瓊脂平板上，貼上一張含5μg奧普托欣紙片，置燭缸或二氧化碳孵箱，35℃ 孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：抑菌圈直徑大于14mm為敏感，小于或等于 14mm為陰性。(4)應用：主要用于肺炎鏈球菌（敏感）與其它鏈球菌（耐藥）的鑒別。2．桿菌肽敏感試驗

(1)原理：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎是100%敏感，而其它群鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。故此試驗可對鏈球菌進行鑒別。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養物均勻涂布于血瓊脂平板上，稍干后貼一張含0.04U的桿菌肽紙片，置35℃ 孵育18~24h，觀察結果。

(3)結果：抑菌圈直徑大于10mm為敏感，小于10mm為耐藥。(4)應用：主要用于A群與非A群鏈球菌的鑒別。從臨床分離的菌株中有5%~15%非 A群鏈球菌也對桿菌肽敏感，如6%的B群鏈球菌、7.5%的C群鏈球菌和G群鏈球菌等。3．新生霉素敏感試驗

(1)原理：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低濃度新生霉素所抑制，表現為敏感，而腐生葡萄球菌則表現為耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于M-H瓊脂平板或血平板上，在平板中央貼含5μg/片新生霉素診斷紙片一張，置35℃孵育16~18h，觀察結果。(3)結果：抑菌圈直徑大于16mm為敏感，小于或等于16mm為耐藥。(4)應用：主要用于葡萄球菌某些種的鑒定。4．O/129試驗

(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二異丙基喋啶）能抑制弧菌屬、發光桿菌屬和鄰單胞菌屬細菌生長，而氣單胞菌屬和假單胞菌屬細菌則耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于堿性瓊脂平板上，將10μg/片及150μg/片的O/129診斷紙片貼于平板上，置35℃孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：出現抑菌圈者表示敏感，無抑菌圈者為耐藥。

(4)應用：主要用于弧菌屬、鄰單胞菌屬與氣單胞菌屬的鑒別，弧菌屬和鄰單胞菌屬菌為敏感，氣單胞菌屬菌為耐藥。其它菌屬有發光桿菌屬為敏感，假單胞菌屬為耐藥。5．氰化鉀試驗

(1)原理：氰化鉀可抑制某些細菌的呼吸酶系統。細胞色素、細胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶均以鐵卟啉作為輔基，氰化鉀與鐵卟啉結合，使這些酶失去活性，使細菌生長受到抑制。(2)方法：將待檢菌接種于氰化鉀培養基中，同時接種一支不含氰化鉀的對照培養基，置35℃孵育24~48h，觀察結果。

(3)結果：細菌在氰化鉀培養基中生長的（不受抑制）為陽性，不生長（抑制）為陰性。(4)應用：腸桿菌科中的沙門菌屬、志賀菌屬和埃希菌屬細菌的生長受到抑制，而其它各菌屬的細菌均可生長。

六、其它試驗

1．克氏雙糖鐵或三糖鐵瓊脂培養基試驗

(1)原理：克氏雙糖鐵(KIA)或三糖鐵瓊脂(TSI)培養基制成高層和短的斜面，其中葡萄糖含量僅為乳糖或蔗糖的十分之一，若細菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，分解葡萄糖產酸使pH降低，因此斜面和底層均先呈黃色，但因葡萄糖量較少，所生成的少量酸可因接觸空氣而氧化，并因細菌生長繁殖利用含氮物質生成堿性化合物，使斜面部分又變成紅色；底層由于處于缺氧狀態，細菌分解葡萄糖所生成的酸類一時不被氧化而仍保持黃色。細菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖產酸產氣，使斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。細菌產生硫化氫時與培養基中的硫酸亞鐵作用，形成黑色的硫化鐵。

(2)方法：用接種針挑取待檢菌的菌落，先穿刺接種到KIA或TSI深層，距管底3~5mm為止，再從原路退回，在斜面上自下而上劃線，置35℃孵 育18~24h，觀察結果。(3)結果：常見的KIA反應有如下幾種： ①斜面堿性/底層堿性：不發酵碳水化合物，系不發酵菌的特征。如銅綠假單胞菌。②斜面堿性/底層酸性：葡萄糖發酵、乳糖（和TSI中的蔗糖）不發酵，是不發酵乳糖菌的特征，如志賀菌。③斜面堿性/底層酸性（黑色）：葡萄糖發酵、乳糖不發酵并產生硫化氫，是產生硫化氫不發酵乳糖菌的特征。如沙門菌、亞利桑那菌、枸櫞酸桿菌和變形桿菌等。④斜面酸性/底層酸性：葡萄糖和乳糖（和TSI中的蔗糖）發酵，是發酵乳糖的大腸菌群的特征，如大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。

(4)應用：鑒別腸道桿菌用。KIA或TSI對初分離出的、可疑為革蘭陰性桿菌鑒定特別有用。其反應模式是許多桿菌鑒定表的組成部分，也可作為觀察其他培養基反應的有價值的質控依據。

2．氫氧化鉀拉絲試驗

(1)原理：革蘭陰性細菌的細胞壁在稀堿溶液中易于破裂，釋放出未斷裂的DNA螺旋，使氫氧化鉀菌懸液呈現粘性，可用接種環攪拌后拉出粘絲來，而革蘭陽性細菌在稀堿溶液中沒有上述變化。

(2)方法：取1滴40g/L氫氧化鉀水溶液（應新鮮配制）于潔凈玻片上，取新鮮菌落少許，與氫氧化鉀水溶液攪拌混勻，并每隔幾秒鐘上提接種環，觀察能否拉出粘絲。(3)結果：用接種環拉出粘絲者為陽性，仍為混懸液者為陰性。

(4)應用：主要用于革蘭陰性菌與易脫色的革蘭陽性菌的鑒別。大多數革蘭陰性菌于5~10s內出現陽性反應，有的則需30~45s，假單胞菌、無色桿菌、黃桿菌、產堿桿菌、莫拉菌等大多數在10s內呈陽性，不動桿菌、莫拉菌反應較慢，大多數菌株在60s內出現陽性，而革蘭陽性菌在60s以后仍為陰性。

第二篇：微生物與生化藥學專業

微生物與生化藥學專業

2009年碩士研究生入學復試具體實施辦法

生物與制藥工程學院“微生物與生化藥學”專業2009年碩士研究生入學復試辦法按《武漢工業學院2009年碩士研究生復試辦法》執行，具體實施辦法如下：

一、復試內容

1、綜合面試：包含外語聽說能力測試、專業知識考核和面試及實踐環節測試等復試內容。

（1）外語聽說能力測試：主要包括專業外語和日常用語兩方面的考核，采取口試形式，滿分為100分。

（2）專業知識考核：滿分為100分。重點考查考生對專業理論與技能及相關知識的掌握是否扎實、深厚和寬廣，是否具備本專業研究生入學的基本要求。考核設天然藥物資源利用、藥物設計與合成、藥物的微生物轉化和提取、微生物與生化藥物四個方向的問題。

（3）面試及實踐環節測試：采取口試形式，滿分為100分。主要考查政治思想品德、專業綜合知識、實踐動手能力、科學思維、創新能力和反應的能力等。

（4）計分方法：總分＝外語聽說能力測試成績×20%＋專業知識考核成績×40%＋面試及實踐環節測試成績×40%。

說明：考生復試程序為：首先進行專業知識考核的考試，然后進行逐個面試。面試部分先進行英文自我介紹，導師提問，最后進行實踐環節測試。

2、同等學歷加試

同等學歷加試科目：生物工程專業加試“生物工藝原理”和“分子生物學”；

制藥工程專業加試“藥劑學”和“藥理學”。均采取筆試形式，滿分為100分，答題時間為120分鐘。

二、復試時間及地點

1、綜合面試：4月13日上午9:00進行專業知識及綜合面試。地點為生工學院會議室。

2、同等學歷加試： 4月14日上午9:00－11:00，藥理學、生物工藝原理；下午2：00～4：00，藥劑學、分子生物學，地點為生工學院會議室。

三、復試次序

考生的個人復試次序按研究生處提供的名單次序進行。考生在參加復試時，應提供復試通知書、畢業證書（應屆生帶學生證）、個人身份證和準考證。

四、分次復試安排

4月13日以后調劑我碩士點的考生采用分階段復試方式，靈活復試時間，一考生到校時間為主。

五、復試小組

組長：陳平

成員：劉志國陶興無趙靜國繆禮鴻鐘方旭劉軍閆達中張紅菱

記錄員：王繼剛

聯系電話：027－83956793聯系人：王老師

武漢工業學院生物與制藥工程學院

2009.04.10

第三篇：考研生理生化資料總結

詞解釋；01.根壓——植物根系的生理活動使液流從根部上升；04.內聚力學說——以水分具有較大的內聚力保證由；05.礦質營養——植物對礦物質的吸收、轉運和同化；06.必需元素——指在植物營養生理上表現為直接的；08.離子對抗——在發生單鹽毒害的溶液中，如加入；09.平衡溶液——對植物生長有良好作用而無毒害作；10.還原氨基化——還原氨直接使酮酸氨基化而形成；1 01.根壓——植物根系的生理活動使液流從根部上升的壓力 02.蒸騰作用——水分通過植物體表面（如葉片等），以氣體狀態從體內散失到體外的現象 03.水分臨界期——指在植物生長發育過程中對缺水最為敏感，最易受害的階段

04.內聚力學說——以水分具有較大的內聚力保證由葉至根水柱不斷來解釋水分上升原因的學說

05.礦質營養——植物對礦物質的吸收、轉運和同化，通稱為礦質營養

06.必需元素——指在植物營養生理上表現為直接的效果、如果缺乏時則植物生育發生障礙，不能完成生活史、以及去除時植物表現出專一的、可以預防和恢復的癥狀的一類元素 07.單鹽毒害——溶液中只有一種金屬離子對植物起有害作用的現象

08.離子對抗——在發生單鹽毒害的溶液中，如加入少量其他金屬離子來減弱或消除單鹽毒害的作用叫離子對抗

09.平衡溶液——對植物生長有良好作用而無毒害作用的溶液

10.還原氨基化——還原氨直接使酮酸氨基化而形成相應氨基酸的過程 11.胞飲作用— —物質吸附在質膜上，然后通過膜的內折而轉移到細胞內的攫取物質及液體的過程

12.通道蛋白 ——在細胞質膜上構成圓形孔道的內在蛋白 13.植物營養臨界期 —— 14.C3途徑——以RUBP為CO2受體，CO2固定后的最初產物為PGA的光合途徑為C3途徑

15.交換吸附——根部細胞在吸收離子的過程中，同時進行著離子的吸附與解吸附的過程，總有一部分離子被其它離子所置換，所以細胞吸附離子具有交換性質

16.C4途徑——以PEP為CO2受體，CO2固定后最的初產物是四碳雙羧酸的光合途徑為C4途徑。

17.光系統——由不同的中心色素和一些天線色素、電子供體和電子受體組成的蛋白色素復合體。

18.反應中心——由中心色素、原初電子供體及原初電子受體組成的具有電荷分離功能的色素蛋白復合體結構。

19.熒光現象——葉綠素溶液在透射光下呈綠色，在反射光下呈紅色的現象

20.磷光現象——當去掉光源后，葉綠素溶液和能繼續輻射出極微弱的紅光，它是由三線態回到基態時所產生的光。這種發光現象稱為磷光現象。21.愛默生效應——如果在長波紅光（大于685nm）照射時，再加上波長較短的紅光（650nm），則量子產額大增，比分別單獨用兩種波長的光照射時的總和還要高。

22.光合作用——綠色植物吸收光能，同化CO2和水，制造有機物質并釋放O2并積蓄能量的過程

23.聚光色素——沒有光化學活性，只有收集光能的作用，并將之傳到反應中心色素的色素 24.光合磷酸化——葉綠體在光下把無機磷和ADP轉化為ATP形成高能磷酸鍵的過程 25.光補償點——光合過程中吸收的CO2和呼吸過程中放出的CO2等量時的光照強度。26.光飽和點——增加光照強度，光合速率不再增加時的光照強度。

27.呼吸作用——生活細胞內某些有機物在有氧和無氧條件下進行徹底或不徹底的氧化分解，并釋放能量過程

28.呼吸鏈——呼吸代謝中間產物的電子和質子，沿著一系列有順序的電子傳遞體組成的電子傳遞途徑，傳遞到分子氧的總過程

29.三羧酸循環——丙酮酸在有氧的條件下，通過一個包括三羧酸和二羧酸的循環而逐步氧

化分解，直到形成水和CO2為止的過程

30.巴斯德效應——氧可以降低糖類的分解代謝和減少糖酵解產物的積累的現象叫巴斯德效應

31.P/O——一對電子通過電子傳遞鏈每消耗1個氧原子與所用去的磷酸的比值 32.氧化磷酸化作用——氧化過程中伴隨著ATP的合成，即氧化作與磷酸化作用同時進行的 過程

33.植物生長物質——是指一些調節植物的生長發育的物質，它包括植物激素和植物生長調節劑

34.植物生長調節劑——指具有一些激素活性人工合成的物質 35.植物生長調節物質——指在植物體內合成的、能調節植物生長發育的非激素類的生理活性物質。36.激素受體——能與激素特異地結合，并引起特殊生理效應的蛋白質類物質

37.生長素結合蛋白——機位于質膜上的生長素受體，可使質子泵將膜內質子泵膜外，引起質膜的超級化，胞壁松弛。也有位于胞基質和核質中，促進mRNA的合成。

38.植物激素—— 一些在植物體內合成，并從產生之處運到別處，對生長發育產生顯著作用的微量有機物

39.自由生長素——易于從各種溶劑中提取的生長素

40.束縛生長素——指沒有活性，需要通過酶解、水解或自溶作用從束縛物質釋放出來的生長素

41.乙烯的“三重反應”——指乙烯使黃花豌豆幼苗變矮，變粗和橫向生長。42.生長抑制劑——抑制植物頂端分生組織生長、破壞頂端優勢的生長調節劑 43.生長延緩劑——抑制植物亞頂端分生組織生長、抑制節間伸長的生長調節劑

44.植物生長——:是指植物體積和重量（干重）上的不可逆增加，是由細胞分裂、細胞伸長以及原生質體、細胞壁的增長而引起。45．再分化——指離體培養中形成的處于脫分化狀態的細胞團再度分化形成另一種或幾種類型的細胞、組織、器官、甚至最終再形成完整植株的過程。

46.植物細胞全能性——植物體的每一個細胞攜帶著一套完整的基因組，并有發育成完整植株的潛在能力

47.植物組織培養——指在無無菌條件下，將外植體接種到人工配制的培養基中培育離體植物組織、器官或細胞，以及培育成植株的技術。48.生長溫周期現象——植物對晝夜溫度周期性變化的反應

49．生長的相關性——植物各部分間在生長上相互依賴有相互制約的現象 50.頂端優勢——植物頂端在生長上占有優勢并抑制側枝或側根生長的現象 51．光形態建成——光控制植物生長、發育和分化的過程

52．光敏色素——在植物體內存在著一種吸收紅光和遠紅光并且可以互相轉化的光受體蛋白，具有紅光吸收型（Pr）和遠紅光吸收型（Pfr）兩種形式，其中Pfr型具有生理活性，參與光形態建成、調節植物生長發育

53．光受體——是指植物體中存在的一些微量色素，能夠感受到外界的光信號，并把光信號放大使植物做出相應的反應，從而影響植物的光形態建成

54.向性運動——是由光、重力等外界因素刺激而產生決定運動方向的，生長引起的不可逆高等植物運動

55.感性運動——是由外界刺激或內部時間機制而引起的、但不能決定運動方向的高等植物運動

56.生理鐘——又稱生物鐘，指植物內生節奏調節的近似24小時的周期性變化節律。

57.春化作用——用低溫促使植物開花的作用叫春化作用 58.光周期現象——植物對白天和黑夜的相對長度的反應

59.雙重日長植物——花誘導和花形成兩個過程很明顯地分開，要求不同日常的植物 60.識別反應——花粉落在雌蕊柱頭上能否正常萌發并導致受精，決定于雙方的親和性，即它們之間的“認可”和“拒絕”稱為識別反應

61.蒙導花粉——親和的花粉可使柱頭不能識別不親和的花粉，被稱為蒙導花粉

62.單性結實——有些植物的胚珠不經受精，子房仍然能繼續發育成為沒有種子的果實，稱為單性結實

63.休眠——種子在合適的萌發條件下仍不萌發的現象

64.驟躍變型結實——指在成熟期出現呼吸躍變現象的果實。65.非驟變型果實——指在成熟期不出現呼吸躍變現象的果實 66.后熟——種子在休眠期內發生的生理、生化過程 67.層積處理——對一些薔薇科和松柏科植物的種子，用濕砂將種子分層堆積在低溫處1至3個月，經后熟才萌發的催芽技術

68.衰老——衰老是植物生命周期的最后階段，是成熟的細胞，組織，器官和整個植株自然地終止生命活動的一系列機能衰敗過程

69.脫落——脫落是指有機體發育過程中，在結構和生理功能方面出現進行性的衰退變化，其特點是有機體對環境的適應能力逐漸減弱，但不立即死亡

70.逆境——又稱脅迫，指對植物生存和生長不利的各種環境因素的總稱

71.抗逆性——植物對逆境的抵抗和忍耐能力，簡稱為抗性。抗性是植物對環境的一種適應性反應，是在長期進化過程中形成的。

72.交叉抗性——植物經歷了某種逆境后，能提高對另一些逆境的抵抗能力，這種對不同逆境間相互適應作用，稱為交互適應。73．滲透調節——植物細胞通過主動增加溶質降低滲透勢，增強吸水和保水能力，以維持正常細胞膨壓的作用。

74．凍害——溫度下降到零度以下，植物體內發生冰凍，因而受傷甚至死亡的現象

75．冷害——零度以上低溫，雖無結冰現象，但能引起喜植物的生理障礙，使植物受傷甚至死亡的現象

76．逆境蛋白——由逆境因素和紫外線等誘導植物體內形成新蛋白質（酶）。

77．大氣干旱——空氣極度干燥，相對濕度極低，根系吸水趕不上蒸騰失水，因而發生水分虧缺現象。

78.鈣調素——一種耐熱的球蛋白

79.臨界暗期——引起短日照植物或長日照植物成花反應的最低或最高暗期極限稱為臨界暗期

80.短日植物——每日在短于一定臨界日長的日照下才開花的植物

81.襯質勢——是細胞膠體物質親水性和毛細管對自由水束縛而引起水勢降低的值（以負值表示）

82.代謝源——指葉子，它制造出光合產物并輸送到其他器官

83.生長的相關性——植物在生長過程中各部分間的相互制約與協調現象

簡 答 題 01.植物體內水分存在狀態與代謝活力有何關系？

答：自由水參與各種代謝作用，它的含量制約著植物的代謝強度，自由水占總含水量的百分比越大，植物代謝越旺盛；束縛水不參與代謝作用，但植物要求低微的代謝強度去度過不良的外界條件，因此，束縛水的含量與植物抗性大小有密切關系。02.簡述蒸騰作用的部位及生理意義？

答：蒸騰作用的部位有（1）植物幼小時，暴露在地面上的全部表面都能蒸騰；植物長大后蒸騰作用發生在莖枝上的皮孔和葉片。蒸騰作用的生理意義有（1）它是植物水分吸收和運輸的主要動力；（2）它對吸收礦物質和有機物以及它們在植物體內的運輸都是有幫助的；（3）它能降低葉片的溫度。

03.根系吸水的方式、動力？ 答: 根系吸水的途徑有三條：（1）質外體途徑；（2）跨膜途徑；（3）共質體途徑.。根系吸水的動力有根壓和蒸騰拉力。04.氣孔開關假說有哪些？

答：氣孔開關假說有（1）淀粉—糖轉化學說；（2）無機離子吸收學說；（3）蘋果酸生成學說

05．植物必需的礦質元素應具備哪些條件？ 答：植物必需的礦質元素應具備下列條件：（1）如缺乏該元素，植物生育發生障礙，不能完成生活史（2）除去該元素，則表現出專一的缺乏癥，而且這種缺乏癥是可以預防和恢復的；（3）該元素在植物營養生理上表現為直接的效果。06．植物吸收礦質元素的方式？ 答：（1）離子通道運輸；（2）載體運輸；（3）離子泵運輸；（4）胞飲作用。06． 植物吸收礦質元素的特點？ 答：植物吸收礦質元素的特點有：（1）一方面與吸水有關系，另一方面又有其獨立性；（2）對不同離子的吸收還有選擇性；〔3〕會出現單鹽毒害和離子對抗現象。07． 試述植物細胞對礦質元素的被動吸收和主動吸收的機理？ 答：植物細胞對礦質元素的被動吸收 08． 02抑制光合作用的原因？ 答：（1）加強氧與CO2對RUBP的結合競爭，提高光呼吸速率。（2）氧能與NADP+競爭接受電子，使NADPH合成量減少，使碳同化需要的還原能力減少。（3）氧接受電子后形成的超氧陰離子會破壞光合膜。（4）在強光下氧參與光合色素的光氧化，破壞光合色素 09． 作物為什么會出現午休現象？

答：植物種類不同，生長條件不同，造成光合午休的原因也不同。有以下幾種原因：（1）中午水分供給不足，氣孔關閉。（2）CO2供應不足。（3）光合產物淀粉等來不及分解運走，累積在葉肉細胞中，阻礙細胞內CO2的運輸。（4）中午時的高溫低濕降低了碳同化酶的活性。（5）生理鐘調控。

10． C4比C3植物的光呼吸低，簡述原因？ 答：光呼吸是由RUBP加氧酶催化RUBP加氧造成的。C4植物在葉肉細胞中只進行由PEP羧化酶催化的羧化活動，且PEP羧化酶對CO2親和力高，固定CO2的能力強，在葉肉細胞形成C4二羧酸之后，再轉運到維管束鞘細胞，脫羧后放出CO2，就起到了“CO2泵”的作用，增加了維管束鞘細胞中的CO2濃度，抑制了鞘細胞中的Rubisco的加氧活性并提高了它的羧化活性，有利于CO2的固定和還原，不利于乙醇酸的形成，不利于光呼吸進行，所以C4植物光呼吸值很低。而C3植物，在葉肉細胞內固定CO2，葉肉細胞的CO2/O2的比值低，此時，RUBP加氧酶活性增強，有利于光呼吸的進行，而且C3植物中RUBPP羧化酶對CO2 親和力低，此外，光呼吸是釋放的CO2不易被重新固定。

11． 把大豆和高粱放在同一密閉照光室內，一段時間后會出現什么現象，為什么？ 答：大豆首先死亡，一段時間后高粱也死亡。因為大豆是C3植物，它的CO2補償點高于C4植物高粱。隨著光合作用的進行，室內的CO2濃度越來越低，當低于大豆的CO2補償點時，大豆便沒有凈光合只有消耗，不久便死亡。此時的CO2濃度仍高于高粱的CO2補償點，所以高粱仍然能夠進行光合作用，當密閉室內的CO2濃度低于高粱的CO2補償點時，高粱便因不能進行光合作用而死亡。

12． 長時間無氧呼吸，植物為什么會死亡？

答：長時間無氧呼吸，植物會死亡的原因有三點：（1）無氧呼吸產生酒精，使細胞只的蛋白質發生變性；（2）無氧呼吸利用葡萄糖產生的能量很少，植物要維持正常生理需要，就要消耗更多的有機物；（3）沒有丙酮酸氧化過程，許多由這個過程的中間產物形成的物質就無法繼續合成。

13． 氧為何抑制糖酵解和發酵？

答：糖酵解和發酵都是糖類物質在無氧的情況下分解成不徹底的氧化產物，同時釋放能量的過程。而氧可以降低糖類的分解代謝和減少糖酵解產物的積累，在氧氣充足的情況下，產生較多的ATP和檸檬酸，降低ADP和Pi的水平。ATP和檸檬酸是負效應物，抑制磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的活性，糖分分解就慢，糖酵解和發酵也就受到抑制。

14． 試述收縮蛋白學說與細胞質泵動學說的主要內容？這兩個學說主要解決了運輸方面的哪些問題？

答：篩分子內腔的細胞質呈幾條長絲，形成胞縱連束，縱跨篩分子，在束內呈環狀的蛋白質反復地有節奏的收縮和張弛，就產生一種蠕動，把細胞質長距離泵走，糖分就隨之流動的學說被稱之為細胞質泵動學說。而收縮蛋白學說認為，篩分子的內腔有一種由微纖絲相連的網狀結構。微纖絲是由具收縮能力的P蛋白收縮絲所組成。微纖絲一端固定，一端游離于篩管細胞質內，微纖絲似鞭毛一樣顫動。收縮蛋白的收縮與伸展可能是同化產物沿篩管運輸的動力，它影響原生質的流動。這兩個學說主要解決了植物同化產物在篩分子內腔的運輸問題。15． 何為壓力流動學說？實驗依據是什么？有哪些不足之處？

答：德國E.Munch1930年提出的學說，主張篩管液流是靠源端和庫端的膨壓差建立起來的壓力梯度來推動的。實驗依據有：利用快速冷凍和固定技術的試驗證明P蛋白沿著長軸分布在細胞壁附近，而不會堵塞開放的篩孔；Knoblauch等利用共聚焦激光掃描顯微鏡，加入與蔗糖結合的綠色熒光染料，觀察到蠶豆葉片的韌皮部是活的，有運輸蔗糖的功能。該學說的不足之處在于不能解決單一篩管能否同時進行雙向運輸蔗糖的問題，且對于裸子植物同化產物的長距離運輸不適用。16． 為什么“樹怕剝皮”？

答：有機物的運輸主要是由韌皮部擔任的，如被剝皮，則同化產物的運輸受阻，而且剝口下端也長不出枝條，時間一長，根系原來貯存的有機物消耗完畢，根部就會餓死，從而導致整個植株的死亡。

17． 束縛態的生長素在植物體內有何作用？

答：束縛態的生長素在植物體內的作用可能有下列幾個方面：（1）作為貯藏形式；（2）作為運輸形式；（3）解毒作用；（4）調解自由生長素含量。18． 乙烯在生產上有何作用？

答：乙烯在生產上的作用有（1）果實催熟和改善品質；（2）促進次生物質排出；（3）促進開花

19． 乙烯誘導果實成熟原因是什么？ 答： 乙烯與質膜的的受體結合之后，能誘發質膜的透性增加，使氧氣容易通過質膜進入細胞質，誘導水解酶的合成，使呼吸作用增強，分解分解有機速度加快，達到促使果實成熟的作用。

21． 種子萌發必需的外界條件有哪些？第一、三階段靠什么吸水？種子萌發時吸水可分為哪三個階段？

答：種子萌發必須的外界條件有：（1）足夠的水分；（2）充足的氧氣；（3）適當的溫度；（4）某些植物種子的萌發還受光的影響。種子萌發時吸水可分為三個階段：（1）急劇的吸水；（2）吸水的停止；（3）胚根長出后的重新迅速吸水。第一階段細胞主要靠吸脹性吸水；第三階段是靠滲透性吸水。

24．土壤中缺氮時為什么根冠比會增大？

答：氮素是由根系從土壤中吸收后再供應地上部分的。因此，土壤缺氮是對地上部分生長的影響就比對根的影響大。另外，缺氮時地上部分蛋白質合成減少，積累的糖分多，這樣對根系供應的糖分也增多，促進了根系的生長，故使根冠比值增大。25．光敏色素作用的模式主要有哪兩類假說？ 答：（1）膜作用假說認為光敏色素能改變細胞中一種或多種膜的特性或功能而參與光形態建成，從而引發一系列的反應。顯然光敏色素調控的快速反應都與膜性質的變化有關；（2）基因調節假說認為光敏色素對光形態建成的作用，是通過調節基因表達來實現的。一般認為光敏調空的長期反應與基因表達有關。

26． 高山上的樹木為什么比平地長得矮小？ 答：（1）高山上水分較少，土壤也較瘠薄，肥力較低，造成植物因缺少水、肥而生長不良。（2）氣溫也較低，且晝夜溫差大，夜間溫度過低，造成植物代謝緩慢，因而表現出植生長緩慢。（3）高山風力較大，使植株受到的機械刺激多，體內激素平衡不利植物生長發育。（4）高山頂上空氣中灰塵較少，光照較強，紫外光也較多，由于強光特別是紫外光抑制植物生長，因而高山樹木生長緩慢而矮小。

27． 種子萌發時，有機物質發生哪些生理、生化變化？ 答：種子萌發時，有機物質發生的生理、生化變化有：（1）淀粉的轉化。淀粉在淀粉酶、麥芽糖酶作用下轉變成葡萄糖（或磷酸葡萄糖）。（2）脂肪的轉化。脂肪在脂肪酶作用下轉變為甘油和脂肪酸，再進一步轉化為糖。（3）蛋白質的轉化。胚乳或子葉內貯藏的蛋白質在蛋白質酶和肽酶的催化下，分解為氨基酸。（4）植酸的動員。植酸在植酸酶的作用下分解為肌醇和磷酸。

28．生物鐘有何特征？ 答：（1）需要光暗交替作為啟動信號，一旦節奏啟動了，就可以在穩恒條件下持續一段時間。（2）具有內生的近似晝夜節奏，約為22小時至28小時。（3）生物鐘有自調重撥功能。若日夜顛倒，則可自行調整，而適應于新的環境節奏。還可重新撥回。（4）生物鐘的周期長度對溫度鈍感。

29．植物產生向光性彎曲的原因是什么？

答：植物的向光彎曲是由于向光面的生長與背光面生長的不均勻所致。究其原因目前主要有兩種一種觀點認為由于生長素分布不均勻，單方向的光照會引起生長素向背光面移動，以至引起背光面生長素含量增多，而較高濃度的生長素促進莖細胞生長，因而背光面比向光面生長快，而表現向光彎曲。生長素向背光面移動的原因可能與光照引起器官尖端的不同部位產生電勢差有關。向光面帶負電荷、背光面帶正電荷，弱酸性的生長素陰離子被正電荷吸引移向背面。另一種觀點認為是由于抑制物質分布不均勻而造成的。30．常言道：“根身葉茂”是何道理？ 答：所謂“根身葉茂”，有以下理由：（1）地上部分生長需要的水分和礦物質主要是由根系供給的。另外根系還能合成多種氨基酸、細胞分裂素等供應地上部分。因此，根發育得好，對

地上部分生長有利。（2）植物地上部分對根的生長也有促進作用，葉片中制造的糖類、生長素、維生素等也可以供應根，以利于根的生長。因此，地上部分長不利，根系也長不好，反之，根系生長不好，地上部分也不可能生長的好，它們是相互依賴相互促進的。31．含羞草受震動后葉子下垂的機理是什么？

答：含羞草受震動后幾秒鐘內葉子就下垂，機理是，由于復葉葉柄基部的葉枕中細胞緊張度發生變化的結果。在解剖結構上，葉枕的上半部的細胞胞壁較厚，而下半部組織較薄，下半部組織的胞間隙也比上半部的大。在震動刺激下，葉枕下半部細胞的透性增大，水分和溶質由液泡中透出，進入胞間隙，因此下半部組織細胞的緊張度下降，組織疲軟，而上半部組織此時仍保持緊張狀態，復葉下垂。

32． 植物生長的最適溫度和協調溫度有何不同？

答：植物生長的最適溫度是指植物生長最快的溫度，這個溫度對于植物健壯生長來說，往往不是最適宜的。因為植物生長最快時，物質較多用于生長，消耗太快，沒有在較低溫度下生長那么結實。在生產實踐上培育健壯的植株，常要求在比生長最適溫度略低的溫度，即“協調的最適溫度”下進行。

33． 什么是春化作用？如何證明植物感受低溫的部位是莖間生長點？

答：春化作用就是用低溫促使植物開花的作用。將芹菜種植在高溫的溫室中由于得不到花分化所需要的低溫，不能開花結實。但是以橡皮管纏繞芹菜莖的頂端，管內不斷通過冰冷的水流，使莖的生長點獲得低溫，就能通過春化，可以開花結實。反之，將芹菜種植在冰冷的室內，而使莖生長點處于高溫下，也不能開花結實。34． 赤霉素與春化作用有何關系？

答：小麥、油菜、燕麥等多種作物經過春化處理后，體內赤霉素含量增多。一些需要春化的植物未經低溫處理，如施用赤霉素也能開花。這表明赤霉素可以某種方式代替低溫的作用。35． “南麻北種”有何利弊，為什么？

答：麻類是短日植物，南種北引可推遲開花，營養生長期長，使麻桿生長較長，提高纖維產量和質量，但因為北方地區較難滿足短日作物麻類成花所需的短日條件，因而南麻北種會延遲開花，種子不能及時成熟。若在留種地采用苗期短日處理方法，可解決留種問題。36．舉例說明光周期在農業生產實踐中的應用？ 答：（1）光周期的人工控制，可以促進和延遲開花；（2）在溫室中延長或縮短日照強度，控制作物花期，可解決花期不遇問題，對雜交育種也將有很大的幫助；（3）引種。37． 種子成熟時主要發生哪些生理、生化變化？ 答：種子成熟時主要發生的生理、生化變化有：（1）從植株營養器官轉運過來的可溶性低分子化合態養料被逐漸轉化為不溶性高分子化合態物質積累起來；（2）呼吸作用由強到弱，由高到低；（3）種子內的內源激素由少變多，再由多變少；（4）種子的含水量隨著種子的成熟而逐漸減少。

38． 在逆境中，植物體內積累脯氨酸有何作用？ 答：在逆境中，植物體內積累脯氨酸的作用有：（1）作為滲透調節物質，用于保持胞質溶膠與環境的滲透平衡，防止水分散失；（2）保持膜結構的完整性。39． 外施ABA提高植物抗逆性的原因？ 答：外施ABA提高植物抗逆性的原因有：（1）減少膜的傷害；（2）減少自由基對膜的破壞；（3）改變體內代謝；（4）減少水分喪失。

40． 零上低溫對植物組織的傷害大致可分哪幾個步驟？ 答：零上低溫對植物組織的傷害大致可分為兩個步驟：第一步是膜相的改變，第二步是由于膜損壞而引起代謝紊亂，導致死亡。41． 提高作物抗旱性的途徑？

答：（1）播種前對萌動種子進行干旱鍛煉；（2）利用根冠比的特征選擇出不同抗旱性的作物品種，或作為抗旱育種的親本，加速抗旱育種的步驟；（3）控制土壤水分；（4）施用植物激素。

論 述 題：

1．病毒對在植物生理生化的影響如下：①水分平衡失調，許多植物感病后發生萎焉或猝倒。②呼吸作用加強。染病組織一般比健康組織的呼吸速率可增加許多倍，且氧化磷酸化截偶聯，大部分能量以熱能形式釋放出去，所以染病組織的溫度大大升高。③光合作用下降。染病后，葉綠體破壞，葉綠體含量減少，光合速率顯著下降。④生長改變。有些植物染病后由于IAA、GA增加，引起植物徒長，偏上生長，形成腫瘤等。

2．作物抗病的生理基礎是：①加強氧化酶（抗壞血酸氧化酶、過氧化物酶）的活性，可以分解毒素，促進傷口愈合，抑制病菌水解酶活性。②植物染病后產生過敏性組織壞死，使有些只能寄生于活細胞的病原菌死亡。③產生抑制物質。如馬鈴薯植株產生綠原酸，可以防止黑疤病菌的感染，亞麻的根分泌一種含氰化物的物質，抑制微生物的呼吸。④作物還具有免疫反應。即在病菌侵入時，體內產生某種對病原菌有毒的化合物（多為酚類化合物）防止病菌侵染。此外，作物內還含有一些化學物質，如生物堿、單寧、苦杏仁苷等，對侵入的病菌有毒殺作用或防御反應，能減輕病害。3．植物滲透調節物質可分為兩大類：一是由外界引入細胞中的無機離子，包括鉀、鈉、鈣、鎂、氯等；二是在細胞內合成的有機溶質，主要是蔗糖、山梨醇、脯氨酸、甜菜堿等。其主要生理功能包括： ⑴維持細胞膨脹壓變化不大，利于其他生理生化過程進行；⑵維持氣孔開放，以保證光合作用較正常的進行。

4．植物在逆境條件下合成的逆境蛋白有：⑴熱激蛋白f，可以和受熱激傷害后變性蛋白質結合，維持它們的可溶狀態或使其恢復原有的空間構象和生物活性。熱激蛋白也可以與一些酶結合成復合體，使這些酶的熱失活溫度明顯提高；⑵低溫誘導蛋白，亦稱冷擊蛋白，它與植物抗寒性的提高有關。由于這些蛋白具有高親水性，所以具有誠少細胞失水和防止細胞脫水的作用；⑶滲條蛋白，有利于降低細胞的滲透勢和防止細胞脫水，提高植物的抗鹽性和抗旱性；⑷病程相關蛋白（PRs），與植物局部和系統誘導抗性有關。還能抑制真菌孢子的萌發，抑制菌絲生長，誘導與其他防衛系統有關的酶的合成，提高其抗病能力。5.植物器官脫落與植物激素有何關系？ 答：（1）生長素：實驗證明，葉片年齡增長，生長素含量下降，便不能阻止脫落的發生。Addicott等提出脫落的生長素梯度學說，認為不是葉片內生長素的絕對含量，而是橫過離層區兩邊的生長素的濃度梯度影響脫落。梯度大，即遠軸端生長素含量高，不易脫落；梯度小時，即近端生長素含量高于或等于遠軸端的量，則促進脫落。此外，已證明有些果實的自然脫落與生長素含量的降低也密切相關。在生長素產生少的時期，往往引起大量落果。（2）脫落酸：幼果和幼葉的脫落酸含量低，當接近脫落時，它的含量最高。主要原因是可促進分解細胞壁的酶的活性，抑制葉柄內生長素的傳導。（3）乙烯：棉花子葉在脫落前乙烯生成量增加一倍多，感病植株乙烯適放量增多，會促進脫落。（4）赤霉素：促進乙烯生成，也可促進脫落。細胞分裂素延緩衰老，抑制脫落。2.北方小麥與南方小麥相比，哪個蛋白質含量高？為什么？

答：北方小麥蛋白質含量高。因為水分供應不良對淀粉合成的影響比對蛋白質的影響大。在小麥成熟期，北方雨量及土壤水分比南方少，所以北方小麥蛋白質含量高。3.導致脫落的外界因素有哪些？ 答：（1）氧濃度 氧分壓過高過低都能導致脫落。高氧促進乙烯的形成，低氧抑制呼吸作用；（2）溫度異常溫度加速器官脫落。高溫促進呼吸消耗。此外，高溫還會引起水分虧缺，加速葉片脫落；（3）水分干旱缺水會引起葉、花、果的脫落。這是一種保護性反映，以減少水分散失。干旱會促進乙烯、脫落酸增加，促進離層形成引起脫落；（4）光照 光照弱脫落增加，長日照可以延遲脫落，短日照可以促進脫落；（5）礦質元素缺Zn、N、P、K、Fe等都可能導致脫落。

4．目前有關植物衰老機理的假說有哪些，并敘述自由基傷害假說的基本內容。

答：關于植物衰老機理的假說有三種：一是營養虧缺假說；二是植物激素調空理論；三是自由基傷害假說。自由基傷害假說是人體和動物衰老機理的眾多學說之一。該學說認為衰老過程即氧代謝失調、自由基累積的過程。研究表明，植物細胞通過多種途徑產生超氧陰離子自由基、羥自由基和過氧化氫、單線態氧等活性氧。同時，植物細胞本身具有清、清除自由基活性氧的酶保護系統和非酶保護系統。在正常情況下，細胞自由基活性氧的產生與清除處于動態平衡狀態，自由基活性氧濃度很低，不會引起傷害。但在植物衰老劣變過程中，特別是處于干旱、高鹽、SO2等逆境條件下，這種平衡遭到破壞，結果自由基活性氧的濃度超過了傷害”閾值“導致蛋白質、核酸的氧化破壞，特別是膜脂中不飽和雙鏈酸最易受自由基的攻擊發生過氧化作用；過氧化過程產生新的自由基，會進一步促進膜脂質過氧化，膜的完整性受到破壞，最后導致植物傷害或死亡。5.花粉管為什么能向著胚囊定向生長？ 答：一般認為這是由于花粉管的向化性運動所引起的。生長的花粉管從頂端到基部存在著由高到低的Ca2+濃度梯度。這種Ca2+梯度的存在有利于控制高爾基體小泡的定向分泌、運轉與融合，從而使合成花粉管壁和質膜的物質源源不斷地運到花粉管頂端，以保持頂端的極性生長。雌性生殖單位中的助細胞與花粉管的定向生長有關。棉花的花粉管在雌蕊中生長時，花粉管中的信號物質如赤霉素會引起一個助細胞的首先解體，并釋放出大量的Ca2+，造成花柱與株孔間的Ca2+梯度，而Ca2+則被認為是一種向化性物質，因此，花粉管會朝Ca2+濃度高的方向生長，最后穿過株孔，進入胚囊。此外，花粉管可能有向電性生長。7.授粉后雌蕊中生長素含量劇增的只要原因是什么？

答：只要不是花粉帶進去的，而是因為花粉中含有使色氨酸轉變成吲哚乙酸的酶體系，花粉管在伸長過程中，能將這些酶分泌到雌蕊組織中去，因此，會引起花柱和子房形成大量生長素

8.影響植物花器官形成的條件有哪些？

答：1.內因(1)營養狀況 營養是花芽分化以及花器官形成與生長的物質基礎。其中的碳水化合物對花的形成尤為重要，C/N過小，營養生長過旺，影響花芽分化。(2)內源激素 花芽分化屬內源激素的調控。2.外因(1)光照 光照對花器官形成有促進作用。在植物花芽分化期間，若光照充足，有機物合成多，則有利于花芽分化。此外，光周期還影響植物的育性。(2)溫度 一般植物在一定的溫度范圍內，隨溫度升高而花芽分化加快。溫度主要影響光和作用、呼吸作用和物質的轉化及運輸等過程，從而間接地影響花芽的分化。低溫還影響減數分裂期花粉母細胞的發育，使其不能正常分裂。(3)水分 不同植物的花芽分化對水分的需求不同，如對稻麥等作物來說，孕穗期對缺水敏感，此時缺水影響幼穗分化；而對果樹而言，夏季的適度干旱可提高果樹的C/N比，反而有利于花芽分化。(4)礦質營養 缺氮，花器官分化慢且花的數量減少；氮過多，營養生長過旺，花的分化推遲，發育不良。在適宜的氮肥條件下，如能配合施用磷、鉀肥，并注意補充錳、鉬、硼等微量元素，則有利于花芽分化。

9.花粉和柱頭之間的相互識別的機制是什么？

答：花粉的識別物質是外壁蛋白中的糖蛋白，它在花粉濕潤后幾秒鐘內就迅速釋放出來。而雌蕊的識別物質是柱頭表面的親水性蛋白質薄膜，它具有粘性，易于捕捉花粉。當親和花粉落到柱頭上時，花粉就釋放出外壁蛋白并擴散入柱頭表面，與柱頭表面蛋白質膜相互作用，認可后花粉管伸長并穿過柱頭，沿花柱引導組織生長并進入胚囊受精。如果是不親和的花粉則不能萌發，或花粉關生長受阻，或柱頭乳突細胞產生胼胝質阻礙花粉管穿過柱頭

10.如何用實驗證明植物感受光周期的部位，以及光周期刺激可能是以某種化學物質來傳遞的？ 答：植物在適宜的光周期誘導后，成花部位是莖端的生長點，而感受光周期的部位卻是葉片。這一點可以用對植株不同部位進行光周期處理后觀察對開花效應的情況來證明：①將植物全株置于不適宜的光周期條件下，植物不開花而保持營養生長；②將植物全株置于適宜的光周期下，植物可以開花；③只將植物葉片置于適宜的光周期條件下，植物正常開花；④只將植物葉片置于不適宜的光周期下，植物不開花。用嫁接實驗可證明植物的光周期刺激可能是以某種化學物資來傳遞的：如將數株短日植物蒼耳嫁接串聯在一起，只讓其中一株的一片葉接受適宜的短日光周期誘導，而其它植株都在長日照條件下，結果數株蒼耳全部開花。

第四篇：菌種生化反應檢查標準操作規程

菌種生化反應檢查標準操作規程

依據：《中華人民共和國藥典》2005年版第三部。

范圍：適用于大腸桿菌表達的重組人基因工程產品。

目的：通過生化試驗鑒定所用的菌種是否為標準的大腸桿菌。

原理：枸椽酸鹽利用試驗原理：枸椽酸鹽培養基中僅含一種氮源（銨鹽）和唯一碳源（枸椽酸鈉）一般細菌能利用磷酸二氫銨作為氮源，但不一定能分解枸椽酸鹽而取得碳源，因此可否利用該鹽，能將不同細菌鑒別。

吲哚試驗原理：有些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，吲哚本身沒有顏色，不能直接觀察，所以加入二甲基氨基苯甲醛試劑，使之與吲哚作用形成紅色的玫瑰吲哚。

甲基紅試驗原理：大腸桿菌和產氣桿菌在糖代謝中都能分解葡萄糖產生丙酮酸。產氣桿菌能將兩個分子丙酮酸脫羧生成一個分子中性乙酰甲基甲醇，故培養物中形成酸類較少，使酸堿度PH可在5.4以上，因此加入甲基紅指示劑后呈桔黃色，是為甲基紅試驗陰性，而大腸桿菌能進一步分解丙酮酸，產生酸類較多，使培養物的酸堿度在PH4.5或更低，故甲基紅指示劑呈紅色，是為甲基紅試驗陽性。

V-P試驗原理：測定細菌分解葡萄糖后能否產生乙酰甲基甲醇，產氣桿菌可使丙酮酸脫羧變為中性的乙酰甲基甲醇，在堿性條件下被空氣中的氧氣氧化成二乙酰，后者又與培養基蛋白胨中精氨酸所含胍基起作用，生成紅色化合物，稱為U-P試驗陽性。

內容：

1材料、設備

1．1 材料：

1．1．1 菌種：PBV888/DH5α，來源于主種子批或工作種子批。

1．1．2注射用水：符合《中華人民共和國藥典》2005年版要求。

1．1．3 試劑

蛋白胨

氯化鈉NaCl分析純

葡萄糖C6H12O6分析純

溴麝香草酚蘭C27H28Br2O5S分析純

對二甲基氨基苯甲醛C9H11NO分析純

戊醇C5H15O分析純

濃鹽酸HCl分析純

甲基紅C15H15N3O2分析純

無水乙醇CH3CH2OH分析純

氫氧化鈉NaOH分析純

氫氧化鉀KOH分析純

α-萘酚C10H7OH分析純

硫酸鎂MgSO4?7H2O分析純

磷酸氫二鉀K2HPO4分析純

磷酸二氫銨NH4H2PO4分析純

枸椽酸鈉C6H5Na3O7·2H2O分析純

瓊脂粉分析純

1．2 器皿

鹽水瓶、中試管、膠頭滴管、燒杯、量筒（100ml、500ml、1000ml）、吸管（10ml）、試劑瓶（250ml、500ml）。

1．3 儀器、設備

PH計PHC-3C型上海大中分析儀器廠

電子秤ES-200A型沈陽騰龍電子儀器公司

電子天平ACS太原

恒溫培養箱HG303-5B型湖北省黃石市醫療器械廠

水浴箱6 LiterLKB

生物安全臺Ⅱ級A型安徽蚌埠凈化設備廠

1．4 其它材料

硫酸紙、牛皮紙、片帶、橡皮膏、吸球（1ml及10ml）玻棒、接種環、透氣栓。2方法

2．1 準備工作

2．1．1 工作環境：在十萬級潔凈室內進行，確認場地清場合格，摘下“清場合格”標志牌，掛上“使用中”標志牌。

2．1．2 器皿清潔要求

經本室洗刷間處理烤干后用二層硫酸紙、一層牛皮紙包好，用線繩系緊，經121.3℃，60分鐘高壓蒸汽滅菌備用。

2．1．3調試儀器設備

2．1．3．1 確認PH計運行狀態良好，已掛有“備用”標志牌。

2．1．3．2 確認電子秤運行狀態良好，已掛有“備用”標志牌。

2．1．3．3 確認電子天平運行狀態良好，已掛有“備用”標志牌。

2．1．3．4 確認培養箱運行狀態良好，已掛有“運行”標志牌。

2．1．3．4 確認水浴箱運行狀態良好。已掛有“備用”標志牌。

2．1．4溶液及培養基的配制：

2．1．4．11N NaOH 100ml

摘下電子秤“備用”標志牌，掛上“運行”標志牌，接通電源，校零。

用電子秤稱取NaOH 4克，加注射用水80ml溶解，用量筒定容至100ml，置試劑瓶中，標明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．21%的溴麝香草酚蘭（BTB）100ml

摘下電子天平“備用”標志牌，掛上“運行”標志牌，接通電源，校零。用電子天瓶稱取1克溴麝香草酚蘭，加1N NaOH 1.6ml，加注射用水定容至100ml。置試劑瓶中，標明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．30.4%的溴麝香草酚蘭（BTB）100ml

用電子天平稱取溴麝香草酚蘭0.4克加1N NaOH 0.64ml，加注射用水至100ml裝入試劑瓶中，標明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．4 95%乙醇500ml

量取475ml無水乙醇，加注射用水定容500ml，裝入試劑瓶中，標明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．5 甲基紅試劑 500ml

用電子天平稱取甲基紅0.1克，溶于95%乙醇300ml，然后加注射用水定容至

500ml，置試劑瓶中，標明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．6 枸氏試劑 100ml

摘下水浴箱“備用”標志牌，掛上“運行”標志牌，接通電源，設定56℃，預熱。用電子天平稱取對二甲基氨基苯甲醛5克，加入到75ml戊醇內，置于56℃水浴中，不斷搖動使其溶解，取出冷卻后徐徐滴入濃鹽酸25ml，滴加時隨滴隨搖，以免驟熱。放置一夜，即成淡褐色透明液體，置250ml試劑瓶中，標明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，保存于冷暗處或冰箱內。

2．1．4．7 40%氫氧化鉀溶液100ml

用電子秤稱取40克KOH，充分溶于80ml注射用水，補足體積至100ml，搖勻，盛于250ml試劑瓶中，標明溶液名稱、濃度、體積、批號、配制日期、放室溫待用。

2．1．4．8 6% α-萘酚酒精溶液100ml

用吸管吸取6mlα-萘酚，用無水乙醇定容至100ml，置250ml試劑瓶中，標明名稱、濃度、體積、批號、配制日期，放室溫待用。

2．1．4．9 75%乙醇的配制

取無水乙醇75ml，用注射用水定容至100ml，混勻，裝入250ml試劑瓶中，貼標簽，標明液體名稱、濃度、體積、批號、日期。室溫備用。

2．1．4．10 培養基的配制

2．1．4．10．1 蛋白胨水培養基（吲哚試驗用）1000ml：

摘下pH計“備用”標志牌，掛上“運行”標志牌。用電子秤稱取蛋白胨10克，NaCl 5克，加入800ml注射用水，混勻，調PH值7.4-7.6，定容1000ml，115.6℃，30分鐘高壓滅菌。

2．1．4．10．2 葡萄糖蛋白胨水培養基（甲基紅和U-P試驗用）1000ml

用電子秤分別稱取蛋白胨5克，葡萄糖5克，磷酸氫二鉀5克，加800ml注射用水，混勻，調PH7.2-7.4，定容1000ml，115.6℃，30分鐘高壓滅菌。

2．1．4．10．3 枸椽酸鹽培養基1000ml

用電子天平分別稱取NaCl5克，MgSO4·7H2O 0.2克，磷酸氫二鉀1克，磷酸二氫銨1克，枸椽酸鈉2克，瓊脂20克，溶于注射用水1000ml，調PH6.8-7.2，加入1% BTB指示劑10ml，搖勻，115.6℃，30分鐘高壓滅菌。

2．2操作步驟

2．2．1 吲哚試驗

2．2．1．1 摘下生物安全臺“備用”標志牌，掛上“運行”標志牌。用75%酒精棉擦拭臺內，接通電源，打開風機，吹30分鐘。在生物安全臺內，將蛋白胨水培養基用吸管分裝于滅菌中試管，每管2ml。用接種環（經火焰滅菌，冷卻后）取細菌接種于蛋白胨水培養基中，蓋上透氣栓。

2．2．1．2 于37℃恒溫培養箱中培養48小時后取出，每管加2-3滴枸氏試劑，輕輕振搖，使戊醇分散于液體中，將培養物靜置，待戊醇升至培養液面后，如有吲哚存在，就可以被提取在戊醇層中，反應呈玫瑰紅色者為陽性，以“+”表示，仍呈黃色者為陰性以“-”表示。

2．2．2 甲基紅試驗

2．2．2．1 在生物安全臺中將葡萄糖蛋白胨水培養基分裝于滅菌中試管中，每管2ml。用接種環（火焰滅菌，冷卻后）接種細菌于葡萄糖蛋白胨水培養基中，用透氣栓蓋好。

2．2．2．2 37℃恒溫培養箱培養2-3天后，取出滴加甲基紅試劑2-3滴，可立即觀察，顯現紅色為陽性，用“+”表示，否則為陰性，用“-”表示。

2．2．3 V-P試驗

2．2．3．1 在生物安全臺中將葡萄糖蛋白胨水培養基用吸管分裝于滅菌中試管中，每管2ml。用接種環（火焰滅菌，冷卻后）取細菌，接種于該培養基中，用透氣栓蓋好。

2．2．3．2 37℃恒溫培養箱培養2-3天取出后，在每管中加入0.4ml 4%的KOH和1ml 6% α-萘酚酒精溶液，混勻，室溫下靜置5-15分鐘，如出現紅色為陽性，以“+”表示，否則為陰性以“-”表示。

2．2．4 枸椽酸鹽利用試驗

2．2．4．1 將滅菌后的枸椽酸鹽培養基冷卻至50℃左右，在生物安全臺中用吸管分裝于試管中，每管5ml，傾斜放置。斜面培養基冷卻后，用接種環（經火焰滅菌，冷卻后）取細菌，接種于該斜面培養基中，用透氣栓蓋好。

2．2．4．2 37℃恒溫培養箱中培養24小時，觀察，有菌生長，培養顏色由綠

變為深蘭者為陽性，以“+”表示，否則為陰性以“-”表示。

工作場地摘下“使用中”標志牌，掛上“待處理”標志牌。結果判定

3．1判定標準

吲哚、甲基紅、U-P及枸椽酸鹽利用四項試驗，合稱為IMVIC試驗，鑒別大腸桿菌的結果應為“++--”。

3．2判定結果

判定結果經二人復核，填寫檢定記錄，注明菌種名稱、批號、判定日期、檢定結果、工作者及復核者等。

4清場

4．1配液清場

4．1．1稱取藥品之后將藥品瓶蓋好，放回藥品柜中。

4．1．2將電子秤、電子天平和PH計切斷電源后，清潔干凈，放回原處，填寫使用記錄，摘下“運行”標志牌，掛“備用”標志牌。生物安全臺，用75%酒精棉擦拭臺內，繼續吹10分鐘后，關閉風機，切斷電源，摘下“運行”標志牌，掛上“備用”標志牌，并填寫使用記錄。

4．1．3清潔操作臺面，用專用抹布擦凈。

4．1．4地面用專用拖布拖凈。

4．2操作清場

4．2．1試驗完畢，含細菌的中試管121.3℃，60分鐘高壓滅菌。

4．3 清場結束后，由車間工序負責人或質量監督員檢查合格后，摘下“待處理”標志牌，掛上“清場合格”標志牌，并填寫清場記錄。注意事項

5．1 各種培養基的標識一定要醒目，以免判定時失誤。

5．2 清場時，必須將帶菌的器皿先送高壓滅菌處理后，再送洗刷組處理。

5．3 所有工作均應經二人復核，并及時填寫工作記錄。

第五篇：2013微生物與生化藥學復試

復試分為三部分：

分科面試、英語筆試、專業課筆試分科面試

考試內容比較隨機，2012年考試內容有：

①考看視頻回答問題：視頻為配制培養基、使用滅菌鍋。要回答的問題好像是操作注意事項，和不同菌種使用的培養基，比如培養放線菌使用的培養基等。

② 實驗操作部分：顯微鏡的使用和斜面劃線接種，兩個任選一，抽簽方式。③專業英語筆試：20min，20個選擇題，有關生物方面的專業詞匯，還有個詞條提示。

④面試：英語口試（自我介紹），與老師交流，老師提問問題

注：聽說2013年的入學面試與2012年不同，沒有①和②，而是換成看圖片辨認儀器；還有專外筆試換成翻譯文獻，是去年獲得諾貝爾獎的文章，有關G蛋白歐聯受體，30min，翻譯幾段，涉及專業詞匯。面試部分，面試部分比較靈活，題型隨機，我覺得事先準備個英文自我介紹比較好，不一定怎么考。英語筆試（為四六級考試形式，有聽力，閱讀比較簡單，我感覺聽力的語速介于四六級之間，我們考試那年的考試形式與四六級不太一樣，不是邊聽變涂卡，而是一下聽完，然后再涂卡，可能每年都會有點不一樣，這個需要練習一下）專業課筆試：包含三科，即分離純化，生物技術制藥，發酵工藝學原理 ①分離純化，我復習的是課本，不是所有的章節都考到了，記得我們那年考題里有些什么大分子和小分子的分離純化方法的簡答題，有些關于分離純化的名詞解釋

②發酵工藝學原理，看的是課件，不記得考過什么了

③生物技術制藥，看的是課本與課件，課件看的稍多些，這科的重點是基因工程部分，好像還有些關于抗體的東西。

可以在學校復印社買到以上三門課的復習資料，如課件，期末試題，或者有人總結的筆記資料等，也有些重復的題，但是好像每年考的都不一樣。另外可以看一些關于微生物的復習材料。