第一篇：醫學檢驗儀器學濟寧醫學院考試重點

靈敏度： 檢驗儀器在穩態下輸出量變化與輸入量變化 特定波長以下的光不能通過前向角散射： 前向角散射 陽性瓶的判斷有三個標準：

1、CO2 初始值超過生物 從安全柜內排出的氣流經高效空氣過濾器過濾后排 之比，即檢驗儀器對單位濃度或質量的被檢物質通過 與被測細胞的大小有關，確切地說與細胞直徑的平方 指數基值

2、CO2 產生的速度持續增加

3、CO2 生成速 出，保護環境不受污染。②Ⅱ級生物安全柜是指用于 檢測器時所產生的響應信號值變化大小的反應能力，密切相關 它反映儀器能夠檢測的最小被測量。誤差：當對某物理量進行檢測時，所測得的數值與標 號，可提供細胞內精細結構和顆粒性質的信息。了測量值對真值的偏離程度。相對誤差：它是絕對誤差與被測量真值之比。時，儀器輸出信號的波動或變化范圍即為噪音。技術叫做電泳技術。度異常高。保護操作人員、處理樣品安全與環境安全的通風安全 側向角散射： 是指與激光束正交 90°方向的散射光信 酶標儀工作原理：光通過被檢測物，前后的能量差異 柜。前窗操作口向內吸入的氣流用以保護操作人員的 即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被 安全； 工作空間為經高效空氣過濾器凈化的垂直下降 氣流用以保護產品的安全； 柜內的氣流經高效空氣過 酶標儀與普通光電比色計的不同之處：

1、酶標儀比 濾后排出，以保護環境不受污染③Ⅲ級生物安全柜是

稱值(即真值)之間的差異稱為誤差，誤差的大小反映 電泳技術：利用電泳現象將多組分物質分離、分析的 檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。

絕對誤差：它是測得值 X 與被檢測值真值 X0 之差。醋酸纖維素薄膜： 醋酸纖維素是纖維素的羥基乙酰化 色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板

2、以垂直 具有完全密閉、不漏氣結構的通風安全柜。工作空間 形成的纖維素醋酸酯，由該物質制成的薄膜稱為醋酸 光束通過微孔板中的待測液

3、酶標儀的酶值表示方 為經高效空氣過濾器凈化的無渦流的單向流空氣，在 式是 OD 值，分光光度計的表示方式為吸光度值 A 值。安全柜內的操作是通過與安全柜密閉連接的手套完 Ⅱ級生物安全柜分類和適用范圍①A1 型生物安全柜，免疫透射比濁法 ：用于測定產生抗原抗體特異性濁 發光免疫分析法是將發光反應與免疫反應相結合，產 成的。噪音： 檢測儀器在沒有加入被檢驗物品(即輸入為零)纖維素薄膜

最小檢測量：檢測儀器能確切反映的最小物質含量。度反應的項目，在光源的光路方向測量透射光強度來 生的一種很有發展前途的分析方法。檢測者、

第二篇：檢驗儀器學,問答題13

二、選擇題

【A型題】

1．A2．B3．B4．E5．C6．A7．C8．B9．E10．A

11．E12．A

13．D14．B15．A16．E17．D18．C19．A20．B21．C22．E

23．E24．E

25．A26．B27．C

【X型題】

1．ABDE2．ACDE3．BCDE4．ABCD5．ADC6．ABD

7．ABD8．ABCD9．AC10．ACDE11．ABCD

三、簡答題

1．尿液分析的臨床意義是什么？

答：尿液分析是臨床診斷泌尿系統疾病的重要措施之一，通過對尿液物理學檢查和化學檢查，可觀察尿液物理性狀和化學成份的變化。在尿沉渣檢查中能夠看到的有形成份為紅細胞、白細胞、上皮細胞、管型、巨噬細胞、腫瘤細胞、細菌、精子以及由尿液中沉析出來的各種結晶（包括藥物結晶）等。這些檢查資料對腎和尿路疾患的診斷、鑒別診斷以及疾病的嚴重程度和預后的判斷，都有極重要的意義

2．簡述尿液分析技術的進展。

答：尿液分析是最古老的醫學檢驗之一。公元前400年，古希臘學者Hippocrates 已注意到人發熱時，尿液顏色和氣味的變化。此后，人們對尿液檢驗與疾病之間關系的認識逐漸加深。真正科學的尿液檢驗始于18世紀-19世紀，1827年，Bright，最早把尿液檢驗用于患者的診斷和護理，成為尿液常規分析最早期的開拓者和支持者；20世紀40年代，逐漸出現了尿液干化學試劑帶法，并成為篩檢健康人或患者尿液的首選方法；20世紀70年代，第一臺尿液化學分析儀問世，從此在相當程度上改變了傳統尿液檢驗繁瑣費時的操作方式，成為現代尿液分析的標志；20世紀80年代，逐漸將色譜和免疫技術用于干化學試紙中，生產出具有檢測敏感性和特異性極高的單克隆抗體的試劑帶；20世紀90年代以來，尿液分析儀自動化程度、性能得到迅猛發展。

3．簡述我國現代尿液分析技術的發展過程。

答：我國的尿液分析儀的研制起步較晚，1966年，北京協和醫院和上海醫學化學研究所開始研制尿液試劑帶，1985年廣西桂林醫療電子儀器廠從日本引進當時具有國際先進水平的MA-4210型尿液分析儀和專用試劑帶的生產技術及設備，由此填補了國內空白。經過近三年的努力，實現了部分國產化，1990年尿液分析儀達到全部國產化。目前我國也已經能夠生產功能齊全的尿液分

析儀。

4．尿液分析儀是如何進行分類的？

答：尿液分析儀按工作方式可分為濕式尿液分析儀和干式尿液分析儀。其中干式尿液分析儀主要著眼于自動評定干試紙法的測定結果，因其結構簡單、使用方便，目前臨床普遍應用。

尿液分析儀按測試項目的數量可分為8項尿液分析儀、9項尿液分析儀、10項尿液分析儀、11項尿液分析儀和12項尿液分析儀。檢測項目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿pH、尿酮體、尿膽紅質、尿膽原、尿潛血、亞硝酸鹽、尿白細胞、尿比重、維生素C和濁度。

尿液分析儀按自動化程度可分為半自動尿液分析儀和全自動尿液分析儀。

5．簡述試劑帶結構。

答：采用了多層膜結構，第一層尼龍膜起保護作用，防止大分子物質對反應的污染；第二層絨制層，包括碘酸鹽層和試劑層，碘酸鹽層可破壞維生素C等干擾物質，試劑層含有試劑成分，主要與尿液中所測定物質發生化學反應，產生顏色變化；第三層是固定有試劑的吸水層，可使尿液均勻快速地浸入，并能抑制尿液流到相鄰反應區；最后一層選取尿液不浸潤的塑料片作為支持體。

6．尿液分析儀的檢測項目有哪些？

答：檢測項目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿pH、尿酮體、尿膽紅質、尿膽原、尿潛血、亞硝酸鹽、尿白細胞、尿比重、維生素C和濁度。

7．尿液分析儀的檢測原理是什么？

答：把試劑帶浸入尿液中后，除了空白塊外，其余的試劑塊都因和尿液發生了化學反應而產生了顏色的變化。試劑塊的顏色深淺與光的吸收和反射程度有關，顏色越深，相應某種成分濃度越高，吸收光量值越大，反射光量值越小，反射率也越小。反之，反射率越大。即顏色的深淺與光的反射率成比例關系，而顏色的深淺又與尿液中各種成分的濃度成比例關系。所以只要測得光的反射率即可以求得尿液中各種成分的濃度。

8．簡述尿液分析儀的結構。

答：尿液分析儀一般由機械系統、光學系統、電路系統三部分組成。

9．現代尿液分析儀的光學系統有幾種？

答：有三種。濾光片分光系統：采用光源燈（鹵燈）發出的白光通過球面積分儀的通光筒照射到試劑帶上，試劑帶把光反射到球面積分儀中，透過濾色片，得到特定波長的單色光，照射到光電二極管上，實現光電轉換。

LED系統：采用了可發射特定波長的發光二極管（LED）作為檢測光源，兩個檢測頭上都有三個不同波長的光電二極管，對應于試劑帶上特定的檢測項目分別為紅、橙、綠單色（660nm、620nm、555nm），它們相對于檢測面以60°照射在反應區上。作為光電轉換器件的光電二極管垂直安裝在反應區的上方，在檢測光照射的同時接收反射光。

CCD系統：采用了目前比較尖端的光學元件CCD技術進行光電轉換。它是把反射光分解為紅

綠藍（RGB：610nm、540nm、460nm）三原色，又將三原色中的每一種顏色分為2592色素，這樣整個反射光分為7776色素，可精確分辨顏色由淺到深的各種微小變化。CCD的基本單元是MOS（金屬氧化物半導體），當光照射到CCD硅片上時，在柵極附近的半導體內產生電子-空穴對，其多數載流子被柵極電壓排開，少數載流子則被收集在勢阱中形成信號電荷。將一定規則變化的電壓加到CCD各電極上，電極上的電子或空穴（信號電荷）就能沿著半導體表面按一定方向移動，形成電信號。

10．尿液分析儀的安裝注意事項有哪些？

答：（1）避免安裝在有水分、潮濕的地方。應安裝在清潔、通風處，室內溫度應在10℃-30℃，相對濕度應≤80％；（2）安裝在穩定的水平實驗臺上（最好是水泥臺）。禁止安裝在高溫、陽光直接照射處，要遠離高頻、電磁波干擾源、熱源及有煤氣產生的地方；（3）應安裝在大小適宜、有足夠空間便于操作的地方；（4）要求儀器接地良好，電源電壓穩定。

11．如何進行尿液分析儀的調校？

答：（1）首先應該用標準的校正帶對儀器進行測定，對儀器的光路、狀態進行校正，以達到最佳狀態；（2）應該對尿液分析儀及試劑帶的準確度進行評價。準確度的評價應根據儀器制造商規定的測定范圍配制成一定濃度的標準物，在儀器上嚴格按說明書操作，每份標準物測定3次，看測定結果是否與標準物濃度相符合的程度；（3）用傳統的方法與尿液分析儀測定作對比分析，對尿液分析儀的敏感性和特異性進行評價。與傳統濕化學法對比分析時，應注意兩種方法測試原理不同帶來的實驗誤差；（4）了解該儀器對每項測試指標的測試范圍，并建立該儀器的正常人的參考值范圍。

12．尿液分析儀使用注意事項是什么？

答：（1）保持儀器的清潔；（2）保證使用干凈的取樣杯；（3）使用新鮮的混合尿液，標本留取檢查應不超過2h；（4）不同類型的尿液分析儀使用不同的尿試帶，在試帶從冷藏溫度變成室溫時，不要打開盛裝試劑帶的瓶蓋，防止試劑帶受潮變質；（5）試劑帶浸入尿樣的時間為2s，試劑帶過多的尿液標本應用濾紙吸走，所有試劑塊包括空白塊在內都要全部浸入尿液中；（6）儀器使用最佳溫度應在20℃-25℃室溫，尿液標本和試劑帶最好也維持在這個溫度范圍內；（7）在觀看儀器測試結果時，不能單獨以符號代碼結果來解釋，要結合半定量值進行分析，以免因定性結果的報告方式不夠妥當，給臨床解釋帶來混亂。

13．如何進行尿液分析儀的維護和保養？

答：不規范地操作儀器，會擾亂儀器的正常工作，引起不良結果。儀器應避免陽光長時間的照射及溫度過高．濕度過大。

日常維護在常規工作中必須嚴格按一定的操作規程進行操作，否則會因使用不當影響實驗結果。（1）操作前應仔細閱讀分析儀說明書及尿試劑帶說明書，每臺尿液分析儀應建立操作程序，并按其進行操作；（2）對尿液分析儀要有專人負責，建立專用的儀器登記本，對每天儀器操作的情況、出現的問題，以及維護、維修情況逐項登記；（3）每天測定開機前，要對儀器進行全面檢

查，確認無誤時才能開機，測定完畢，要對儀器進行全面清理．保養；（4）開瓶但未使用的尿試劑帶，應立即收入瓶內蓋好瓶蓋，根據要求妥善保存，以免下次使用影響結果。

每日保養儀器表面應用清水或中性清洗劑擦拭干凈；試劑帶托盤，每日測定完畢，使用無腐蝕性的洗滌劑清洗，也可用清水或中性清洗劑擦拭干凈；不要使用有機溶劑清洗傳送帶，清洗時勿使水滴入儀器內，有些儀器的試劑帶托盤是一次性的，應注意更換；廢物（廢水．廢試劑帶）裝置，每日用完應清除干凈，并用水清洗干凈。

每周或每月保養各類尿液分析儀的每周或每月保養，要根據儀器的具體情況而定。

14．簡述引起尿液分析儀故障的原因。

答：儀器的故障分為必然性故障和偶然性故障。必然性故障是各種元器件．零部件經長期使用后，性能和結構發生老化，導致儀器無法進行正常的工作；偶然性故障是指各種元器件．結構等因受外界條件的影響，出現突發性質變，而使儀器不能進行正常的工作。通常出現故障的原因分為以下幾類。

（1）人為引起的故障是由于操作不當引起的，故障輕者導致儀器不能正常工作，重者可能損害儀器。因此在操作使用前，必須熟讀用戶使用說明書，了解正確的使用操作步驟；（2）儀器設備質量缺陷引起的故障是指儀器元器件質量不好、設計不合理、裝配工藝上因疏忽造成的故障；（3）長期使用后的故障這類故障與元器件使用壽命有關，所以是必然性故障，如光電器件、顯示器的老化，傳送機械系統的逐漸磨損等等；

（4）外因所致的故障是由儀器設備的使用環境條件不符合要求所引起的，常常是造成儀器故障的主要原因。一般指的是電壓、溫度、電場、磁場及振動等。

15．尿沉渣分析儀有幾大類型？

答：迄今為止尿沉渣分析儀大致有兩類，一類是通過尿沉渣直接鏡檢再進行影像分析，得出相應的技術資料與實驗結果；另一類是流式細胞術分析。

16．簡述流式細胞術尿沉渣分析儀的結構。

答：它包括光學檢測系統、液壓系統、電阻抗檢測系統和電子系統。

17．簡述流式細胞術尿沉渣分析儀的工作原理。

答：測定是應用流式細胞術和電阻抗的原理進行的。當一個尿液標本被稀釋并經染色液染色后，靠液壓作用通過鞘液流動池。反應樣品從樣品噴嘴出口進入鞘液流動室時，被一種無粒子顆粒的鞘液包圍，使每個細胞以單個縱列的形式通過流動池的中心（豎直）軸線，在這里每個尿液細胞被氬激光光束照射。每個細胞有不同程度的熒光強度、前向散射光強度和電阻抗的大小。儀器將這種熒光．散射光等光信號轉變成電信號，并對各種信號進行分析，最后得到每個尿液標本產生出的直方圖（histogram）和散射圖（scattergram）。通過分析這些圖形，即可區分每個細胞并得出有關細胞的形態

18．尿沉渣分析儀的安裝、使用注意事項是什么？

答：（1）安裝儀器必須安裝在通風好，遠離電磁干擾源、熱源，防止陽光直接照射，防

潮的穩定水平實驗臺上（最好是水泥臺上）。環境大小應適宜，儀器兩側至少有0.5m空間，儀器后面最少有0.2m空間。最好安裝在有空調裝置的房間內（室內溫度為15℃-30℃，最適溫度為25℃，相對濕度應為30％-85％）。

（2）使用和注意事項安裝新儀器時或每次儀器大維修之后，必須對儀器技術性能進行調試，這對保證檢驗質量起著重要的作用。全自動尿沉渣分析儀的鑒定必須由儀器制造公司的工程師來進行。每天開機前，操作者要對儀器的狀態進行全面檢查，確認無誤后方可開機。開機時嚴格按說明書進行操作，儀器先進行自檢，自檢通過后，儀器再進行自動沖洗并檢查本底。本底檢測和質控通過后，方可進行樣品測試。

下列情況應禁止上機測試：①尿液標本血細胞數>2000/μl時，會影響下一個標本的測定結果；②尿液標本使用了有顏色的防腐劑或熒光素，可降低分析結果的可信性；③尿液標本中有較大顆粒的污染物，可引起儀器阻塞。

19．簡述UD自動染色尿沉渣分析儀的主要功能和特點。

答：（1）儀器定量準確，具有極高的重復性；（2）系統自動化、智能化程度高，具備靈活的操作方式；（3）克服了不染色方法易誤認、漏檢的缺點，提高了典型沉渣成分的檢出率；（4）符合標準化要求，克服人為因素后，使尿沉渣分析達到尿沉渣分析的規范化、標準化的要求；（5）安全潔凈，減少了對實驗室及操作人員的污染；（6）智能控制，軟件功能強大，可全面實現人機對話；（7）功能齊備，人性化設計，環保節約、易于擺放和觀察。

20．自動尿液分析質控物選擇的要求有哪些？

答：對質控物的要求必須達到以下幾點：（1）質控物應成分穩定，批內分裝均勻，易于保存和運輸，復溶后成分無變化。（2）選擇質控物時，最好使用多項復合控制品。有條件的實驗室最好同時使用高．低兩個值的質控物。也有人利用紅細胞．白細胞醛化固定，霉菌孢子固定，作為有形成分的質控物。（3）在一天內做質控時最好使用同一份質控物，并采用高．低兩種質控物對照。（4）根據各實驗室的具體情況每天或隔日隨機做質控檢測，使用不同批號的試劑帶前均需做質控，并對儀器進行校正。（5）質控物的測定結果由于某些原因超出質控要求的范圍表示失控,則需從檢查試劑帶、質控物、校準儀器等方面查找原因。

第三篇：檢驗儀器學,問答題12

二、選擇題

【A型題】

1．D 2．B 3．C 4．A 5．E 6．C 7．B 8．C 9．C 10．C 11．B 12．E 13．D 14．A 15．B 16．B 17．D 18．B 19．C 20．D 21．E 22．C 23．E 24．D 25．A 26．C 27．E 28．D 29．A 30．E 31．B 32．A 33．C 34．E 35．B 36．B 37．A 38．E 39．D 40．C 41．B 42．D 43．D 44．B 45．D 46．B 47．A 48．E 49．A 50．E 51．B 52．D 53．C 54．A 55．D

【X型題】

1．ABE 2．ABCD 3．ACE 4．ABDE 5．BC 6．BD 7．BCDE 8．BCDE 9．ACDE 10．BCDE 11．ABC 12．ACDE 13．BCE 14．BCDE 15．ABCD 16．AB 17．ABCD 18．ABCD 19．CD 20．ABCE 21．BCDE 22．CDE 23．ABCD 24．ABCE 25．ABDE 26．BCE 27．ACE 28．ABCE 29．ABC 30．ABC 31．AC 32．ABCE 33．ABC 34．BCDE 35．BCDE 36．ABCE 37．ABCE 38．BDE 39．ABCE 40．ABCE

三、簡答題

1．BCA的概念及功能是什么？

答：血細胞分析儀是指對一定體積全血內血細胞異質性進行自動分析的臨床常規檢驗儀器。其主要功能是：血細胞計數；白細胞分類；血紅蛋白測定；相關參數計算。

2．如何對BCA進行分類？

答：按自動化程度分半自動血細胞分析儀、全自動血細胞分析儀、血細胞分析工作站、血細胞分析流水線；按檢測原理分電容型、光電型、激光型、電阻抗型、聯合檢測型、干式離心分層型、無創型；按對白細胞的分類水平分二分群、三分群、五分群、五分群＋網織紅BCA。

3．簡述電阻抗（庫爾特）血細胞檢測原理。

答：血細胞與等滲的電解質溶液相比為相對的不良導體，其電阻值大于稀釋溶液的電阻值；當血細胞通過檢測器的孔徑感受區時，檢測器內外電極之間的恒流源電路的電阻值瞬間增大，產生電壓脈沖信號；脈沖信號數等于通過的細胞數，脈沖信號幅度大小與細胞大小成正比。

4．簡述電阻抗血細胞分析技術的應用及其缺點。

答：應用電阻抗原理可進行白細胞計數和分群、血小板計數、紅細胞計數、紅細胞平均體積和血小板平均體積測定及獲得其他相關參數等。

1白細胞分類計數不特異；○2技術所限，影響紅細胞有關參數的準確性；電阻抗法的缺點：○3血小板計數的干擾因素多；④不易發現異常細胞。○5．簡述聯合檢測型BCA白細胞分類計數的實質和共有特點。

答：實質是選用較特異的方法將血中含量較少的嗜酸、嗜堿性粒細胞檢出，發現異常細胞。共有特點是：均使用了鞘流技術，將細胞重疊限制到最低限度。

6．聯合檢測型BCA在白細胞分類上主要有哪些技術？

1容量、電導、光散射聯合檢測技術；○2答：聯合檢測型BCA在白細胞分類技術上主要有：○

3多角度激光散射、電阻抗聯合檢測技術；○4光散射與電阻抗、射頻與細胞化學聯合檢測技術；○細胞化學檢測技術。

7．簡述BCA網織紅細胞檢測原理。

答：利用網織紅細胞中殘存的嗜堿性物質—RNA，在活體狀態下與特殊的熒光染料結合；激光激發產生熒光，熒光強度與RNA含量成正比；用流式細胞技術檢測單個的網織紅細胞的大小和細胞內RNA的含量及血紅蛋白的含量；由計算機數據處理系統綜合分析檢測數據，得出網織紅細胞數及其他眾多參數。

8．簡述電阻抗型BCA和聯合檢測型BCA的基本結構。

答：電阻抗型BCA和聯合檢測型BCA的基本結構：主要由機械系統、電學系統、血細胞檢測系統、血紅蛋白測定系統、計算機和鍵盤控制系統以不同形式的組合而構成。

9．對BCA進行評價的指標有哪些？

答：在細胞計數、血紅蛋白測定方面，主要評價儀器測試樣本的總變異、攜帶污染率、線性范圍、可比性和準確性等，這對保證檢驗質量將起重要作用。

10．簡述BCA堵孔情況的判斷。

答：根據微孔堵塞的程度，將分為完全堵孔可不完全堵孔兩種。堵孔判斷：當檢測器小孔管的微孔完全阻塞或泵管損壞時，血細胞不能通過微孔而不能計數，儀器在屏幕上顯示“CLOG”，1觀察計數時間；○2觀察示波器波形；為完全堵孔。而不完全堵孔主要通過下述方法進行判斷：○3看計數指示燈閃動；○4聽儀器發出的不規則間斷聲音等進行判斷。○11．BCA常見的堵孔原因有哪些？如何處理？

1儀器長時間不用，試劑中水分蒸發，鹽類結晶堵孔，可用去離答：常見堵孔原因與處理：○

2未梢采血不順或用棉球擦拭微量取血管；○3抗凝劑子水浸泡，完全溶解后，按CLEAN鍵清洗；○

4小孔管微孔蛋白沉積多，需清洗；○5樣品杯未蓋量與全血不匹配或靜脈采血不順，有小凝塊；○好，空氣中的灰塵落入杯中。后四種原因，一般按CLEAN鍵清洗，如果不行須按說明書卸下檢測器進行清理。

12．BCA保證血小板準確計數的技術有哪些？

答：主要有：鞘流技術、掃流技術、隔板技術、浮動界標和擬合曲線技術等，保證血小板計數的精確性。

13．BCA的進展表現在哪幾個方面？

答：主要表現在：儀器測試原理的不斷創新；新血細胞分析參數的出現；各種特殊技術的應用；儀器自動化水平的提高；無創型全血細胞分析儀的研究等幾個方面。

14．血凝儀常用檢測原理有哪些？

答：血凝儀常用的檢測原理主要：有凝固法、底物顯色法、免疫學方法、干化學技術法檢測原理等。凝固法原理是最基本、最常用的方法。

15．半自動與全自動在使用方法上有何不同？

答：半自動血凝儀以凝固法原理測量為主，全自動血凝儀除了使用凝固法外，還使用其他的分析方法，如底物顯色法、免疫學法等。

16．簡述血凝儀光學法檢測原理。

答：光學法屬凝固法的一種；是利用一束光線通過樣品杯，樣品杯中的血漿在凝固過程中導致血漿濁度發生變化；透射光或散射光的強度也發生改變；儀器根據光強度的變化來判斷血漿凝固終點的檢測方法稱為光學法檢測原理。

17．光學法血凝儀從光路結構上分哪兩類？

1散射比濁法：根據待測答：根據儀器光路結構的不同又可分為散射比濁法和透射比濁法；○樣品在凝固過程中散射光的變化來確定凝固終點；其光源、樣本、接收器成直角排列；接收器得2透射比濁法：根據待檢樣品在凝固過程中吸光度的變化來到的完全是濁度測量所需的散射光。○確定凝固終點；其光源、樣本、接收器成一直線排列；接收器得到的是很強的透射光和較弱的散射光。

18．簡述雙磁路磁珠法的測定原理。

答：屬磁電檢測原理。在測試杯的兩側各有一組驅動線圈，它們產生恒定的交替電磁場，使測試杯內特制的去磁小鋼珠保持等幅振蕩運動；凝血激活劑加入后，隨著纖維蛋白的增多，小鋼珠的運動振幅逐漸減弱；另一組測量線圈感應到小鋼珠運動的變化；儀器將運動幅度衰減到50?時確定為凝固終點。

19．簡述凝固法與免疫學方法中的透射比濁、散射比濁的區別。

答：凝固法是檢測血漿在凝固過程中所致一系列物理量的變化，來反映相關因子的活性，也稱生物物理法。凝固法中的透射比濁、散射比濁是根據血漿中的纖維蛋白原逐漸轉變成纖微蛋白，導致血漿濁度發生變化，進行光電比濁測定。而免疫學方法中的透射比濁、散射比濁雖屬光電比濁原理的光學法,但有抗原抗體參與。前者是血漿凝固過程中纖維蛋白形成所致的濁度，后者是相應的抗原抗體反應形成的復合物所致的濁度。20．血凝儀光學法與雙磁路磁珠法主要區別及優缺點是什么？

答：主要區別在于：前者是檢測血漿凝固過程中光信號的變化，后者是檢測該過程中磁電信號的變化。光學法血凝儀測試的優點在于靈敏度高、儀器結構簡單、易于自動化。缺點是樣本的光學異常、測試杯的光潔度、加樣中的氣泡等都會成為測量的干擾因素。雙磁路磁珠法不受溶血、黃疸、高血脂癥及氣泡的嚴重影響；該法有利于血漿和試劑的充分混勻。

21．簡述半自動和全自動血凝儀的基本結構。

答：半自動血凝儀的基本結構：主要由樣本和試劑預溫槽、加樣器、檢測系統（光學、磁場）及微機組成。全自動血凝儀基本結構包括：樣本傳送及處理裝置、試劑冷藏位、樣本及試劑分配系統、檢測系統、計算機、輸出設備及附件等。

22．簡述全自動血凝儀的主要特點及其維護與保養。

答：主要特點：①自動化程度高；②檢測方法多；③速度快；④項目任意組合，隨機性；⑤測量精度好，易于質控和標準化；⑥智能化程度高，功能多；⑦價格昂貴；⑧對操作人員的素質要求高。

維護與保養：①清洗或更換空氣過濾器；②檢查及清潔反應槽；③清洗洗針池及通針；④檢查冷卻劑液面水平；⑤清潔機械運動導桿和轉動部分并加潤滑油；⑥及時保養定量裝置；⑦更換樣品及試劑針；⑧數據備份及恢復等。

23．簡述血凝儀的的性能評價與臨床應用。

答：血凝儀性能評價的內容主要有：重復性、線性范圍、準確性、攜帶污染率、干擾因素、可比性分析評價等幾方面。臨床應用主要有：①凝血系統的檢測，常規篩選實驗和單個凝血因子含量及活性的測定。②抗凝系統的檢測。③纖維蛋白溶解系統的檢測。④臨床用藥監測等。

24．血凝儀的進展體現在哪幾個方面？

答：主要體現在：①多方法、多功能、快速高效；②智能化程度高，軟件開發進一步完善；③全自動血凝分析儀工作站；④床旁分析（即時檢）；⑤在臨床中的應用日趨廣泛。

25．簡述毛細管黏度計的工作原理與基本結構。

答：毛細管黏度計是依據牛頓流體遵循泊肅葉定律而設定的。即一定體積的液體，在恒定的壓力驅動力下，流過一定管徑的毛細管所需的時間與黏度成正比。

基本結構：包括毛細管、儲液池、控溫裝置、計時裝置等。26．簡述旋轉式黏度計的工作原理與基本結構。

答：以牛頓粘滯定律為理論依據。錐板式黏度計是同軸錐板構型，平板與錐體間充滿被測樣本；調速電機帶動圓形平板同速旋轉；錐體與平板及馬達間均無直接聯系。因此，當圓形平板以某一恒定角速度旋轉時，轉動的力矩通過被測樣本傳遞到錐體；樣本越粘稠，傳入的力矩越大。當此力矩作用于錐體時，立即被力矩傳感裝置所俘獲，其信號大小與樣本黏度成正比。

基本結構：包括樣本傳感器、轉速控制與調節系統、力矩測量系統、恒溫系統。27．毛細管黏度計有何特點？ 答：其特點是：價格低廉、操作簡便、速度快、易于普及；測定牛頓流體黏度結果可靠，是血漿、血清樣本測定的參考方法；全血在毛細管中的不同部位，剪切率不一樣，黏度亦不一樣；不能直接檢測某一剪切率下的表觀黏度；難以反映全血等非牛頓流體的黏度特性；對進一步研究RBC、WBC的變形性和血液的粘彈性等也無能為力。

28．旋轉式黏度計有何特點？

答：其特點是：能提供所需不同角速度下的剪切率；在被測液體中各流層的剪切率一致，使液體在剪切率一致的條件下做單純的定向流動；可以定量的了解血液、血漿的流變特性，RBC與WBC的聚集性、變形性、時間相關性等很多流變特性。操作使用較為簡單，是目前血液流變學研究和應用較為理想的儀器。但價格較毛細管黏度計要貴一些，操作要求也更精細一些。

29．什么情況下需對黏度計進行技術性能評價？指標有哪些？

答：性能評價在儀器安裝、維修及使用一定時間后，至少每半年，應對儀器準確度、分辨率、重復性、靈敏度與量程進行1次檢驗。

30．簡述錐板式激光衍射法紅細胞變形測定儀的工作原理與基本結構。

答：工作原理：根據紅細胞被激光照射時發生衍射，產生反映細胞幾何狀態的衍射圖像，當有剪切應力作用于紅細胞時，紅細胞發生形變，衍射圖也隨之變化，測定該作用力前后紅細胞形變率的大小來反映其變形性。

基本結構：主要由能提供可變剪切場的透明錐板結構、光路系統、攝像系統、控溫裝置、光電轉換器、處理器及顯示打印裝置組成。

第四篇：急診醫學考試重點

⒈簡述心搏停止的診斷要點 ①主要依據：突然意識喪失；心音或大動脈（頸動脈，股動脈）搏動消失；心電圖可以有3種表現-------心室顫動，室性自主心律即心肌電-機械分離，心室停搏（心搏停止）②次要依據：雙側瞳孔散大，固定，對光反射消失；自主呼吸完全消失，或先呈嘆息或點頭狀呼吸，隨后自主呼吸消失；口唇，甲床等末梢部位出現紫紺

⒋一般監測內容包括哪幾項？重癥監護的適應癥

1意識狀態2體溫3心律與心率脈搏4呼吸頻率與節律5無創血壓 ①心搏，呼吸驟停需CPR或者復蘇后生命體征不穩定，或者出現嚴重并發癥②休克③急性呼吸衰竭需機械通氣治療④急性心血管事件⑤各種原因引起的大出血

⑥嚴重水電解質酸堿失衡⑦嚴重創傷，多發傷⑧MODS ⒌如何診斷ARDS？簡述其治療措施，以及ARDS病因 病因：①休克②嚴重創傷（大面積燒傷）③嚴重感染（敗血癥）④誤吸（誤吸胃內容物，淹溺）⑤吸收有害氣體（氯氣，光氣）⑥急性中毒（急性藥物中毒）⑦代謝紊亂（尿毒癥）⑧過量補液（輸庫存血）⑨其他（婦產科疾病，其他急性疾病）

診斷：①歐美ARDS聯席會議：a急性起病b氧合指數（PaO2/FiO2）≤200mmhg（不管PEEP水平為多少）c胸部X線片顯示雙肺浸潤陰影d肺動脈楔壓（PCWP）≤18mmhg或者沒有左房壓升高的臨床證據

②中華醫學會呼吸分會急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合癥：a有發病的高危因素b急性起病，呼吸頻數和（或）呼吸窘迫c低氧血癥，ALI時氧合指數（PaO2/FiO2）≤300mmhg，ARDS時氧合指數（PaO2/FiO2）≤200mmhg d胸部X線片表現為兩肺浸潤陰影e毛細血管楔壓（PCWP）≤18mmhg或者臨床上能除外心源性肺水腫 治療：原則：改善肺氧合功能，糾正缺氧，生命支持，保護器官功能，防止并發癥，積極治療原發病 ①祛除誘因，積極治療原發病：及時有效的控制感染，是關鍵②氧療：糾正缺氧為搶救患者的關鍵措施，高濃度給氧3機械通氣： PEEP或者 CPAP④維持液體平衡：限制液體攝入

⑤藥物治療：a非皮質類固醇藥物b肺表面活性物質cNO d糖皮質激素⑥監測臟器功能，防止MODS⑦加強支持治療，足夠的熱卡

⒐簡述休克的分類，常見病因及診斷治療 分類：①失血性休克、失液性休克、創傷性休克②心源性休克、心臟壓塞性休克③感染性休克、過敏性休克、神經源性休克、細胞性休克

病因：①低血容量：大出血，嚴重燒傷，大手術等②心泵功能障礙：急性心肌梗死 大量心包積液等③心血管功能失常：重癥肺炎，藥物創傷氫化物等 診斷要點：①有誘發休克的誘因②意識障礙③脈搏細速大于100/每分鐘或者不能觸之④四肢濕冷，胸骨不問皮膚指壓征，皮膚花紋，粘膜蒼白或者發紺，尿量大于30ml每小時⑤收縮壓小于80mmhg⑥脈壓差小于20mmhg⑦高血壓患者收縮壓較基礎血壓下降30%以上

符合1及234忠的兩項，和567中一項 ⒑休克的治療措施 ⑴病因防治：積極防治原發病，去除休克的原始動因如止血，控制感染，輸液鎮痛等 ⑵緊急處理：平臥或者頭胸與下肢抬高30度，保暖鎮靜少搬動。吸氧2~4L每分鐘或者更高，建立靜脈通道，建立必要檢測項目⑶，抗休克的措施：①補充血容量②糾正電解質與酸堿平衡失調③應用血管活性藥物（擬腎上腺素，腎上腺素能α受體，阻滯劑，硝普鈉，氯丙嗪等）④維護臟器功能⑷其他治療措施 ：①納洛酮②環氧化酶抑制劑③其他

⒒口服有機磷農藥中毒的治療措施

⑴一般處理 使患者脫離中毒現場，脫去被污染的衣物佩戴物，保持保持呼吸道通暢⑵清除毒物：①徹底清晰污染部位②經口中毒者，催吐，2%碳酸氫鈉溶液或者1:5000高錳酸鉀溶液洗胃，而后催吐，并反復進行③洗胃后導瀉

⑶應用特效解毒藥物：①抗膽堿能藥物 阿托品②膽堿酯酶復能劑 雙復磷

⑷對癥治療，針對呼吸異常、心律失常、肺水腫、休克、腦水腫，抽搐等嚴重表現，應注意加強呼吸功能的支持措施，吸氧，維持水電解質平衡，必要時適量應用糖皮質激素，及時給予呼吸機治療

⒓簡述有機磷農藥中毒的臨床表現及“阿托品化”的判斷要點

臨床表現：①毒蕈堿樣表現（最早）： A腺體分泌增加，流淚，流涎，大汗 B平滑肌痙攣，惡心嘔吐，腹痛，腹瀉 C心臟抑制，心動過緩 D瞳孔括約肌收縮，縮小呈指針樣 ②煙堿樣表現：肌肉顫動，嚴重時強直痙攣，抽搐，伴脈動加速，血壓升高等

③中樞神經系統表現：頭痛頭暈，行走不穩，共濟失調等，嚴重者煩躁，抽搐，甚至腦水腫④經皮膚黏膜吸收中毒，過敏性皮炎，水泡與剝落性皮炎，少數遲發性腦病，中間綜合癥

阿托品化—意識好轉，皮膚干燥，顏面潮紅，肺部濕羅音小時，瞳孔較前擴大，心律較前增快等 阿托品中毒——瞳孔擴大，煩躁不安，神志不清，抽搐，尿潴留甚至昏迷

⒗中毒的治療原則 ⑴一般處理：①邊實施救治，邊采集病史，留取含有毒物或者采血送檢查②給患者取恰當的體位，保持呼吸道通暢，及時清除口咽鼻腔內分泌物，給氧③及時向患者家屬交待病情及可能發生的病情變化

⑵消除未吸收的毒物：①口服毒物：催吐，洗胃（口服法、胃管法），導瀉，灌腸②皮膚黏膜吸收中毒：立即用清水或者能溶解度無的容積徹底洗滌接觸毒物部位，持續沖洗至少15分鐘以上 ③吸入中毒：立即移離現場，吸氧④注射中毒：止血帶護著布條扎緊注射部位上端，注射部位放射狀注射1%腎上腺素

⑶排出吸收的毒物：①利尿②吸氧③改變尿液酸堿度④血透，血漿置換等

⑷應用特效解毒劑：a氯磷定、解磷定、雙復磷；阿托品—有機磷農藥 b氟馬西尼—苯二氮卓類 c納洛酮—阿片類 ⑸腐蝕性毒物的中毒處理：①強酸中毒時服MgO乳劑300ml ②強堿中毒時服橘汁300ml③嚴禁洗胃、導瀉、催吐、灌腸④口服牛奶或豆漿100~200ml，一方面稀釋一方面保護胃粘膜

全身炎癥反應綜合征（SIRS）診斷標準（符合其中二項或二項以上即可診斷）：①T>38℃或T<36℃。②P>90次/min。③R>20次/min或PaCO2<4.0kPa。④WBC>12×109/L或<4×109/L

MODS診斷標準:

1、循環系統收縮壓＜90mmHg，持續1h以上，或循環需要藥物支持維持穩定

2、呼吸系統急性起病，PaO2/FiO2≤200（已用或未用PEEP），X線胸片見雙肺浸潤，PCWP≤18mmHg，或無左房壓升高的證據

3、腎臟血Cr ＞177μmol/L伴有少尿或多尿，或需要血液透析

4、肝臟血清總膽紅素＞34.2μmol/L,血清轉氨酶在正常值上限的2倍以上或有肝性腦病

5、胃腸道上消化道出血，24h出血量＞400ml，或不能耐受食物，或消化道壞死或穿孔

6、血液系統血小板計數＜50×109／L或減少25％，或出現DIC7、代謝不能為機體提供所需能量，糖耐量降低，需用胰島素；或出現骨骼肌萎縮、無力

8、中樞神經系統GSW＜7分

膿毒癥診斷標準：

1、一般指征① 發熱② 心率＞90次/分③ 呼吸＞30 次/分④ 意識狀態改變⑤ 明顯水腫⑥ 高糖血癥 BS>7.1mmol/L2、炎癥反應指標① 白細胞增多②C反應蛋白＞ 正常值2個標準差③ 降鈣素原＞正常值2個標準差

3、血流動力學指標① 低血壓② 混合靜脈血氧飽和度＞70%③ 心排出指數＞3.5L/（min·m2）

4、組織灌注指標① 高乳酸血癥（乳酸＞3mmol/L）② 毛細血管再充盈時間延長＞ 2秒或皮膚出現花斑

5、① 低氧血癥② 少尿，肌酐增加③ 凝血異常④ 血小板減少⑤ 腹脹⑥ 高膽紅素血癥⒉簡述心肺腦復蘇過程的三階段九步驟 三個時期：基礎生命支持，加強生命支持，復蘇后生命維護。九步驟：A airway：開放氣道B breathing呼吸支持C circulation循環支持D difibrillation+drug除顫+給藥E electrocardiograph心電圖G gauge監測H human mentation保持和恢復人的智能活動I intensive care強化監護

1急診：突然發生的急性疾病以及意外傷害。2急診醫學：在急救醫學的基礎上，危重病醫學，復蘇醫學，災害學，急性中毒學，創傷學，急診醫學管理學等逐步發展，共同組成了現代急診醫學。

3院前急救：事發現場的第一目擊者實行的初步急救，實施急救的地點可以是家庭，公共場所，社區，野外等，施救者可以使院前急救專業人員，院前急救輔助人員，全科醫生，公民或者公民本人。4反應時間：接到患者呼救信息至急救力量到達現場所需要的時間，為國際上用以衡量急救系統質量的重要指標，按照國際化慣例，失去的反應時間不超過8分鐘，郊區的反應時間不超過15~30分鐘。

5急診醫療服務體系(EMSS)：急診醫學將院前急救，醫院急診室，重癥監護病房三部分組成一個完整的體系。

6專科型ICU：專科建設的衍生和發展，是英語專科建設醫院或者專業特色十分明顯的學科。收治某一專業分為內的危重患者。

綜合性ICU:跨學科，面向全院的監護病房，其任務是收治多科為重患者，適應絕大多數醫院。

7院內獲得性感染：入院前無感染，入院后48~72小時后發生的感染，常見獲得性肺炎，血源性感染，泌尿系統感染，外科感染等等。

8心肺腦復蘇術：心跳呼吸驟停后，是自主心臟和自主呼吸得以恢復并積極保護腦功能的急救技術。

9生存鏈：用來描述VF所致SCA患者復蘇時間重要性的一個四環接鏈。包括：早期識別和啟動急救醫療系統，或者聯系當地急救反應系統，呼叫120。早期由目擊者進行CPR，早期進行電擊除顫，早期由醫務工作者進行復蘇后的高級生命支持。

10黃金時間：發生傷病后的前四分鐘。

11休克：是集體遭受強烈的致病因素侵襲后，有效循環血量顯著下降，不能維持機體臟器與組織的正常灌注，繼而發生全身微循環功能障礙的一種危急重癥。

12心源性休克：狹義上是指心臟泵血功能衰竭引起的休克綜合癥，見于大面積急性心肌梗死等，廣義上是指各種原因所致的心臟泵功能極度衰減退，心室充盈或者射血障礙，導致心排血量銳減，多重要臟器和周圍組織灌注不足而發生的一系列代謝與功能障礙綜合癥。精神源性休克：即神經原性休克或者中樞循環衰竭，是指由于強烈的神經刺激如創傷，劇烈疼痛等，引起某些血管活性物質如緩激肽，5——羥色胺等釋放增加，或者腦損傷缺血，深度麻醉，脊髓高位麻醉或者脊髓損傷交感神經傳出通路被阻斷，最終導致周圍血管擴張，大量血瘀滯于擴張的血管中，有效循環血量突然減少而引起的休克。13 MODS（多器官功能障礙綜合征）：是指機體在經受嚴重損害如嚴重疾病，外傷，手術，感染等之后，同時或者序貫性發生兩個或者以上急性器官功能障礙，甚至功能衰竭的綜合征。SIRS（全身性炎性反應綜合征）：當機體經受打擊后，發生全身性自我破壞性炎性反應過程。15 ARDS（急性呼吸窘迫綜合癥）：由于肺外或者肺內的嚴重疾病引起肺毛細血管炎癥性損傷，通透性增加，繼發以急性高通透性肺水腫和進行性缺氧為臨床特征的急性呼吸衰竭，是急性呼吸衰竭常見類型，也是急性肺損傷（ALI）的病情發展結局。PEEP（呼吸末正壓通氣）：為機械呼吸機在吸氣相產生正壓氣體進入肺部，在呼吸末起到開放時，祈禱壓力仍保持高于大氣壓，以防止肺泡萎縮塌陷。

17急性心力衰竭：是指由于急性心臟病變引起心排血量急驟降低，導致組織器官灌注不足和急性淤血的臨床綜合癥，為常見循環系統急癥。

18高血壓急癥：是指原發性或者繼發性高血壓在其病變過程中，由于某些誘導因素導致血壓突然或者短時間內升高，造成的心腦腎眼底等主要靶器官功能嚴重障礙的臨床急癥。19高血壓腦病：急進行或者嚴重的緩進行高血壓病患者，尤其是伴有明顯腦動脈硬化者，在其病程過程中因各種誘因導致的血壓突然或者短時間內明顯升高，突破腦血管自身調節機制，腦部小動脈發生持久的痙攣，繼之擴張，導致急性腦循環障礙，腦水腫和顱內壓增高，從而出現一系列臨床表現。

20惡性高血壓：為高血壓并的嚴重臨床類型，月1%~5%的中重度高血壓患者可發展為惡性高血壓，發病機制尚不清楚，可能與不及時治療或者治療不當有關，常伴有心腦腎等靶器官損害，而以腎臟損害更加突出，病情進行性加重，故又稱為急進型高血壓病。

21高血壓危象：高血壓病程中，由于各種誘因導致循環血液中兒茶酚胺水平升高，交感神經興奮性增加，外周血管阻力突然增加，血壓迅速升高，出現神經精神癥狀，靶器官功能障礙及交感神經興奮性增加表現。22 ACS（急性冠狀動脈綜合癥）：是指由于冠狀動脈內粥樣硬化斑塊不穩定導致冠脈血流量急劇減少而形成的臨床急性綜合癥。

23慢快綜合征：（心動過緩——過速綜合癥）：多出現于疾病晚期，在原有竇性心動過緩的基礎上，發作快速性心律失常，如陣發性室上性心動過速，心煩顫動等等。出現突發心悸，氣急，頭暈，暈厥等臨床表現，嚴重時導致猝死。24上消化道大出血：是指在數小時內失血量超出10000ml或者循環血容量的20%，臨床主要變現為嘔血，和（或）黑糞，往往伴有血容量減少引起的急性周圍性循環衰竭。低血糖癥：是指多種病因引起血葡萄糖下降至正常值以下，引起交感神經興奮和中樞神經系統功能障礙為突出表現的臨床綜合癥。

25糖尿病危象：指糖尿病控制不佳，在應激情況下誘發的酮癥酸中毒，高滲性非酮癥性昏迷，乳酸性酸中毒等急性并發癥，糖尿病治療不當或者胰島素分泌異常而引起的低血糖也屬于此類。

26甲狀腺功能亢進癥危象：是指甲狀腺功能亢進癥的一種嚴重表現，不常見，但是病情嚴重，死亡率高。

27腎上腺危象：凡有原發性和繼發性，急性或者慢性的腎上腺皮質功能不全時，在應激狀態下不能相應的增加皮質醇的分泌引發的危急癥。主要表現為高熱，胃腸紊亂，休克和腦功能障礙。

28癲癇持續狀態（癲癇狀態）：是指一次癲癇發作持續30分鐘以上，或者多次發作，發作間期意識或者神經功能未恢復至正常水平。29氧合指數：即PaO2/FiO2，動脈血氧分壓與吸入氧濃度之比，正常值為400~500mmHg.30急性中毒：一定量的毒物短時間內進入機體，產生相應的毒性損害，起病急病情重，甚至危及生命。

31慢性中毒：長時間反復接觸小劑量毒物而引起的中毒，起病隱匿病程長，已漏診與誤診。

32阿托品化：即應用阿托品后患者出現意識好轉，皮膚干燥，顏面潮紅，肺部濕羅音消失，瞳孔較前擴大，心率較前增快等表現。

33濕性淹溺：喉部肌肉松弛，吸入大量水分重賽呼吸道和肺泡發生窒息。

34干性淹溺：呼吸道和肺泡很少或者無水吸入，喉痙攣導致窒息。

35中暑：人體長時間暴露在高溫或者強烈輻射環境中，引起以機體溫度調節中暑功能障礙，汗腺功能衰竭及水電解質紊亂等對高溫環境適應不全的表現為特點的一組疾病。36糖尿病酮癥酸中毒（DKA）：是糖尿病的常見急性并發癥，也是內科急診之一，是以高血糖高酮血癥，代謝性酸中毒為主要特點的臨床綜合癥。由胰島素絕對和相對不足及胰島素拮抗激素增多，引起組織細胞利用葡萄糖障礙，導致代謝紊亂，脂肪分解加重，血清酮體積聚。

第五篇：臨床醫學檢驗考試輔導醫學檢驗

第九章　酶免疫技術

第一節　酶免疫技術的特點

它是將酶與抗體或抗原結合成酶標記抗體或抗原，在酶標抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應完成后，加入酶的相應底物，通過酶對底物的顯色反應，對抗原或抗體進行定位、定性或定量的測定分析。

一、酶和酶作用底物

（一）酶的要求：一個酶蛋白分子每分鐘可催化103～104個底物分子轉變成有色產物。

1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。

2.易與抗體或抗原偶聯，標記后酶活性保持穩定，且不影響標記抗原與抗體的免疫反應性。

3.作用專一性強，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢組織或體液中不存在與標記酶相同的內源性酶或抑制物。用于均相酶免疫測定的酶還要求當抗體與酶標抗原結合后，酶活性可出現抑制或激活。

4.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。

5.酶、輔助因子及其底物對人體無害，酶的底物易于配制、保存，酶及其底物應價廉易得。

（二）常用的酶

1.辣根過氧化物酶（HRP）：目前酶聯免疫吸附試驗中應用最廣泛的標記用酶。由無色的糖蛋白（主酶）和亞鐵血紅蛋白（輔基）結合而成的復合物。輔基是酶活性基團，而主酶則與酶活性無關，HRP的純度用RZ（HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值）表示，RZ值應大于3.0。

RZ值僅說明血紅素基團在HRP中的含量，并非表示HRP制劑的真正純度，而且RZ值高的HRP并不意味著酶活性也高，RZ值與酶活性無關。

酶活性以單位U表示：即1分鐘將1μmol底物轉化為產物所需的酶量。酶變性后，RZ值不變但活性降低，因此使用酶制劑時，酶活性單位比RZ值更為重要。

2.堿性磷酸酶（AP）：大腸桿菌來源的AP分子量80kD，酶作用最適pH為8.0；小牛腸黏膜AP分子量為100kD，最適pH為9.6；后一種AP的活性高于前者。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）：β-Gal來源于大腸桿菌。因人血中缺乏此酶，以其制備的酶標志物在測定時不易受到內源性酶的干擾，從而提高特異性，被用于均相酶免疫測定。

（三）常用的底物

1.HRP的底物

（1）鄰苯二胺（OPD）：是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD應用液穩定性差，易變色，需新配制后在1小時內使用，顯色反應過程需避光，而且具有致癌性。

（2）四甲基聯苯胺（TMB）：TMB經HRP作用后變為藍色，加入硫酸終止反應后變為黃色，最大吸收峰波長450nm。TMB穩定性好，成色無需避光，無致突變作用，是目前ELISA中應用最廣泛的底物。缺點是水溶性差。

（3）其他：5-氨基水楊酸（5-ASA）和2，2-聯氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）。

2.AP的底物

常用對-硝基苯磷酸酯（p-NPP），p-NPP經AP作用后的產物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405nm。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）的底物

常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU），酶作用后，生成高強度熒光物4-甲基傘形酮（4-MU），其敏度性較HRP高30～50倍，但測量時需用熒光計。

二、酶標記抗體或抗原

（一）酶標記抗體或抗原的制備

標記方法應符合：技術方法簡單、產率高，且重復性好；標記反應不影響酶和抗原或抗體的活性；酶標志物穩定，應避免酶、抗體（抗原）以及酶標志物各自形成聚合物等。

1.戊二醛交聯法：同源雙功能交聯劑。

（1）一步法：連接AP。

①優點：操作簡便、有效，重復性好。

②缺點：交聯時分子間比例不嚴格，大小不一，影響效果。

（2）二步法：連接HRP。

先將HRP與戊二醛作用，透析除去戊二醛，在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標抗體。

優點：酶標志物質量較均一，標記效率也較一步法高。

2.改良過碘酸鈉法

HRP標記抗體或抗原的最常用方法。

（二）酶標記物的純化及鑒定

常用的純化方法有葡聚糖凝膠G-200/G-150過柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。

常用免疫電泳或雙相擴散法進行鑒定。

1.出現沉淀線表示酶標記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。

2.沉淀線經生理鹽水漂洗后，滴加酶的底物溶液，若沉淀線上顯色，則酶標記物中的酶活性仍保留。

三、固相載體

除均相酶免疫測定外，各種非均相酶免疫測定反應最后都需要分離游離和結合的酶標記物。

固相抗體或抗原就是把抗體或抗原結合到固相載體的表面上，是酶免疫技術中將游離和結合的酶標志物迅速分離的最常用方法。

（一）固相載體的要求　結合抗體或抗原的容量大；可將抗體或抗原牢固地固定在其表面，經長期保存和多次洗滌也不易脫落；不影響所固定的抗體或抗原的免疫反應性，而且為使反應充分進行，最好其活性基團朝向反應溶液，固相方法簡便易行，快速經濟。

（二）固相載體的種類和選擇

1.塑料制品：聚苯乙烯塑料最常采用。抗原或抗體以非共價或物理吸附方式結合到此載體上。

主要缺點是抗體（抗原）結合容量不高、固相抗體（抗原）脫吸附率較高且不均一，孔間變異大，重復性差，從而影響測定的靈敏度、精確度及檢測范圍。

目前采用非共價和化學偶聯共價吸附方法進行抗原或抗體的固相化可改善上述缺點

2.微粒：易與抗體（抗原）形成化學偶聯，且結合容量大。均勻地分散到整個反應溶液中，因此反應速度快。可制成磁化微顆粒。自動化檢測中常用。

3.膜載體：常有硝酸纖維素膜（Nc）、玻璃纖維素膜及尼龍膜等通過非共價鍵吸附抗體（抗原），廣泛用于定性或半定量斑點ELISA的固相載體。

（三）包被與封閉

1.包被：將抗原或抗體結合在固相載體上的過程。普遍使用的聚苯乙烯載體，將抗原或抗體溶于緩沖液（常用為pH9.6的碳酸鹽緩沖液）中，加于ELISA板孔中4℃過夜。包被好的固相載體在低溫可放置一段時間而不失去免疫活性。

2.封閉：包被的蛋白質濃度過低，固相載體表面不能被此蛋白質完全覆蓋，其后加入的血清標本和酶結合物中的蛋白質也會部分地吸附于固相載體表面，最后產生非特異性顯色致本底偏高，在這種情況下，需用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清再包被一次，消除此干擾，此過程稱為封閉。

第二節　酶免疫技術的分類

包括兩種：

酶免疫組織化學技術：用于組織切片或其他標本中抗原的定位。

酶免疫測定技術（EIA）：用于液體標本中抗原或抗體的定性和定量。根據抗原抗體反應后是否需將結合和游離的酶標志物分離，EIA一般可分為均相和異相兩種類型。

一、均相酶免疫測定

利用酶標志物與相應的抗原或抗體結合后，標記酶的活性會發生改變的原理，可以在不將結合和游離酶標志物分離的情況下，通過測定標記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。該法主要用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定，均相法的優點是適合于自動化測定，但反應中被抑制的酶活力較小，需用靈敏的光度計測定，反應的溫度也需嚴格控制。

（一）酶放大免疫測定技術（EMIT）EMIT的基本原理是半抗原與酶結合成酶標半抗原。當與抗體結合后，所標的酶與抗體密切接觸，使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。

（二）克隆酶供體免疫分析（CDEIA）DNA重組技術可分別合成某種功能酶（如β-D半乳糖苷酶）分子的兩個片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨均無酶活性，一定條件下結合形成四聚體方具酶活性。克隆酶供體免疫測定（CDEIA）的反應模式為競爭法。

標本中的抗原和酶供體（ED）標記的抗原與特異性抗體競爭結合，形成兩種抗原抗體復合物。ED標記的抗原與抗體結合后由于空間位阻，不再能與酶受體（EA）結合，而游離的ED標記的抗原上的ED可和EA結合，形成具有活性的酶，加入底物測定酶活性，酶活力的大小與標本中抗原含量成正比。

二、異相酶免疫測定

是目前應用最廣泛的一類標記免疫測定技術。

（一）異相液相酶免疫測定　主要用于檢測樣品中極微量的短肽激素和某些藥物等小分子半抗原。酶標志物具有更好的穩定性，且無放射性污染。

1.平衡法：將待測樣品抗原、酶標抗原及特異性抗體進行一次性溫育，待反應達平衡后，測定離心沉淀物（酶標抗原抗體復合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。

2.非平衡法：先將樣品（或標準品）與抗體混合反應達平衡，然后加入酶標記抗原繼續溫育一段時間，測定離心沉淀物（酶標抗原抗體復合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。

（二）固相酶免疫測定　酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。

第三節　酶聯免疫吸附試驗

一、基本原理

把抗原或抗體結合到固相載體表面，測定時將受檢樣品和酶標記抗原或抗體與結合在固相載體上的抗原或抗體反應形成抗原抗體復合物；洗去未結合成分；加入底物后，底物被固相載體上的酶催化變成有色產物。故：

①固相的抗原或抗體；

②酶標記的抗原或抗體；

③酶反應的底物三種試劑為反應必備。

二、方法類型及反應原理

（一）檢測抗原的方法

1.雙抗體夾心法：屬于非競爭結合，檢測抗原最常用的方法，檢測含有至少兩個抗原決定簇的多價抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接；加入待測標本，形成固相抗原抗體復合物；再加入酶標抗體形成雙抗體夾心，洗滌；加底物顯色，根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量檢測。

如血清標本中有類風濕因子（RF）存在，則可出現假陽性反應，因為RF是一種抗變性IgG的自身抗體，它能與多種動物的變性IgG的Fc部分結合，因此RF就可作為固相抗體和酶標抗體之間的橋接抗原。

雙抗體夾心法只適用于二價或以上的較大分子抗原的測定，不能用于小分子半抗原的檢測。

2.雙位點一步法：針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠的決定簇，包被使用一種單抗，酶標記使用另一種單抗。測定時將待測抗原和酶標抗體同時加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。若待測抗原濃度過高時，過量的抗原可分別同固相抗體和酶標抗體結合而抑制夾心復合物的形成，出現鉤狀效應，顯色降低，甚至假陰性。必要時可將標本經過適當稀釋后重復測定。

3.競爭法

用于測定小分子抗原，如藥物、激素等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時加入待測樣本和酶標記的小分子，兩種小分子競爭與固相上的抗小分子的特異性抗體結合，溫育一定時間后洗滌，加入酶底物顯色。

特點是：

①酶標記抗原與樣品或標準品中的非標記抗原具有相同的與固相抗體結合的能力；

②反應體系中，固相抗體和酶標抗原是固定限量，且前者的結合位點少于酶標記和非標記抗原的分子數量和；

③免疫反應后，結合于固相載體上復合物中被測定的酶標抗原的量（酶活性）與樣品或標準品中非標記抗原的濃度成反比。

（二）檢測抗體的方法

1.間接法：最常用的方法，屬非競爭性結合試驗。原理：將抗原包被在固相載體上，加入待測樣本形成固相抗原-受檢抗體復合物；經溫育洗滌后，加入酶標二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待測抗體-酶標抗抗體復合物，加入底物后根據顯色的深淺確定待測抗體含量。多用于檢測IgG類型抗體。

2.雙抗原夾心法

此法可檢測各類抗體，因此雙抗原夾心法的靈敏度和特異性要高于間接法。其原理及操作步驟類似雙抗體夾心法，也可采用一步法。由于機體產生抗體IgG的效價有限，一般不會出現鉤狀效應。

臨床上乙型肝炎表面抗體的測定常用此法。

3.競爭法

一般抗體檢測是較少采用，當相應抗原材料中含有與抗人IgG反應的物質，而且不易得到足夠的純化抗原或抗原的結合特異性不穩定時，可采用這種方法測定抗體，目前臨床運用較多的是乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）的檢測。

競爭抗體與待測抗體的特異性及親和力越接近，則測定的可靠性越強。

4.捕獲法又稱反向間接法

主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定，最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。原理：先將針對IgM的二抗包被于固相載體，加入待測標本，其中IgM類抗體可被固相抗體捕獲，再加入特異性抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結合后，加入酶標記特異性抗原的抗體，形成固相二抗-IgM-抗原-酶標記抗體復合物，加底物顯色后，即可對待測標本中IgM是否存在及含量進行測定。

第四節　酶免疫測定的應用

幾乎所有的可溶性抗原抗體系統均可用酶免疫測定檢測。

均相酶免疫測定主要用于藥物和小分子物質的檢測。

非均相免疫測定中的ELISA在多種物質的檢測中被廣泛的使用。

實戰演練

目前酶免疫技術中應用較廣、提純較簡便的酶是

A.脲酶

B.堿性磷酸酶

C.葡萄糖氧化酶

D.辣根過氧化物酶

E.半乳糖苷酶

『正確答案』D

『答案解析』HRP是目前在酶聯免疫吸附試驗中應用最為廣泛的標記用酶。

酶放大免疫測定技術（EMIT）主要用來檢測

A.抗原

B.抗體

C.半抗原

D.不完全抗體

E.抗原抗體復合物

『正確答案』C

『答案解析』酶放大免疫測定技術（EMIT）主要用來檢測半抗原。

以下關于酶標記抗體或抗原不正確的是

A.過碘酸鹽氧化法只用于HRP的標記

B.未標記上的游離的抗體與酶標記抗體競爭固相上的抗原

C.制備的標記物無須純化，因為游離的酶或未標記上的抗原或抗體成分在測定過程中被洗掉

D.制備的結合物需要純化

E.標價物需要鑒定

『正確答案』C

『答案解析』每批制備的酶標志物都要進行質量和標記率的鑒定，質量鑒定包括酶活性和抗體（抗原）的免疫活性鑒定。常用免疫電泳或雙相擴散法，出現沉淀線表示酶標記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。沉淀線經生理鹽水反復漂洗后，滴加酶的底物溶液，若在沉淀線上能顯色，則表示酶標記物中的酶活性仍保留。也可直接用ELISA方法測定。

關于酶聯免疫吸附試驗（ELISA）錯誤的是

A.屬于液相和固相酶免疫測定

B.固相常用聚苯乙烯反應板

C.通過洗滌除去未結合成分

D.底物顯色

E.既能定性又能定量分析

『正確答案』A

『答案解析』酶聯免疫吸附試驗（ELISA）屬于固相酶免疫測定。

酶免疫技術中最常用的固相載體是

A.聚氯乙烯

B.聚苯乙烯

C.硝酸纖維素膜

D.瓊脂糖

E.尼龍膜

『正確答案』B

『答案解析』酶免疫技術中最常用的固相載體是聚苯乙烯。

酶免疫技術中懸浮在溶液中具有液相反應速率的固相載體是

A.聚氯乙烯

B.聚苯乙烯

C.硝酸纖維素膜

D.磁性微粒

E.尼龍膜

『正確答案』D

『答案解析』酶免疫技術中懸浮在溶液中具有液相反應速率的固相載體是磁性微粒。

將抗原或抗體固相化的過程稱為

A.吸附

B.包被

C.封閉

D.標記

E.交聯

『正確答案』B

『答案解析』將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。

ELISA技術中，最常用來檢測抗體的方法是

A.雙抗體夾心法

B.間接法

C.競爭法

D.捕獲法

E.應用生物素和親和素的ELISA

『正確答案』B

『答案解析』ELISA技術中，最常用來檢測抗體的方法是間接法。

下列有關雙位點一步法ELISA的敘述中，錯誤的是

A.使用針對同一抗原不同決定簇的兩種單克隆抗體作為酶標抗體

B.一種單克隆抗體作為固相抗體，另一種作為酶標抗體

C.采用高親和力的單克隆抗體將提高測定的敏感性和特異性

D.可使標本和酶標抗體同時加入

E.標本中抗原過高時，會出現鉤狀效應

『正確答案』A

『答案解析』雙位點一步法：在雙抗體夾心法基礎上，進一步發展了雙位點一步法。該法是針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠的決定簇的兩種單克隆抗體，即包被使用一種單抗，酶標記使用另一種單抗。測定時將含待測抗原標本和酶標抗體同時加入進行反應，兩種抗體互不干擾，經過一次溫育和洗滌后，即可加入底物進行顯色測定。但當待測抗原濃度過高時，過量的抗原可分別同固相抗體和酶標抗體結合而抑制夾心復合物的形成，出現鉤狀效應（hook

effect），顯色降低，嚴重時可出現假陰性結果。必要時可將標本經過適當稀釋后重復測定。這是應用此法必須要注意的問題。

ELISA技術中待測孔（管）顯色顏色的深淺與待測抗原或抗體呈負相關的是

A.雙抗體夾心法

B.雙位點一步法

C.間接法測抗體

D.競爭法

E.捕獲法

『正確答案』D

『答案解析』ELISA技術中待測孔（管）顯色顏色的深淺與待測抗原或抗體呈負相關的是競爭法。

雙位點一步法鉤狀效應產生是因為

A.標本中的抗原不純

B.洗滌不充分

C.孵育時間過長

D.酶標抗體過量

E.標本中的抗原濃度過高

『正確答案』E

『答案解析』雙位點一步法鉤狀效應產生是因為標本中的抗原濃度過高。

用一種標記物可檢測多種與抗原相應的抗體的ELISA方法是

A.雙抗體夾心法

B.間接法

C.競爭法

D.雙抗原夾心法

E.雙位點一步法

『正確答案』B

『答案解析』用一種標記物可檢測多種與抗原相應的抗體的ELISA方法是間接法。

關于ELISA競爭法的敘述中，正確的是

A.只用于檢測抗原

B.待測成分優先于酶標記物與固相結合C.被測物含量多則標記物被結合的機會少

D.待測管顯色顏色越淡表示被測物含量越少

E.只用于檢測抗體

『正確答案』C

『答案解析』關于ELISA競爭法的敘述中，正確的是被測物含量多則標記物被結合的機會少。

ELISA間接法中固相上包被的是

A.抗體

B.不完全抗體

C.抗原

D.抗抗體

E.酶標抗體

『正確答案』C

『答案解析』ELISA間接法中固相上包被的是抗原。

臨床上檢測IgM抗體常用的ELISA方法是

A.雙抗體夾心法

B.間接法

C.競爭法

D.雙抗原夾心法

E.捕獲法

『正確答案』E

『答案解析』捕獲法，又稱反向間接法。主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定，目前最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。

酶免疫技術分為兩類酶免疫測定，它們是

A.均相和異相

B.固相和液相

C.酶免疫組化和酶免疫測定

D.均相和固相

E.異相和液相

『正確答案』C

『答案解析』酶免疫技術分為兩類酶免疫測定，它們是酶免疫組化和酶免疫測定。

ELISA一般不用于檢測

A.病原體及其抗體

B.Ig、補體、腫瘤標志物等蛋白質

C.非肽類激素

D.藥物

E.半抗原

『正確答案』E

『答案解析』ELISA一般不用于檢測半抗原。半抗原一般用均相酶免疫測定法。