第一篇：實驗四 PCR擴增基因特異片段

實驗四

PCR擴增基因特異片段

一、實驗目的

1、學會PCR儀的使用方法。

2、掌握PCR反應的實驗技術。

二、實驗原理

聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction）簡稱PCR。聚合酶鏈式反應（PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復性）及適溫延伸等幾步反應組成一個周期，循環進行，使目的DNA得以迅速擴增，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶鏈式反應又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。

GLBI蛋白是玉米胚中含量最豐富的蛋白質之一，其編碼基因glb1位于第一染色體長臂，基因表達僅限于種子組織。該蛋白對于幼苗生長與存活并非必需。本實驗擴增glb1基因部分序列，全長1200bp左右。

真核生物基因組中編碼核糖體的基因包括28S rDNA、5S rDNA、18S rDNA和5.8S rDNA 4 種,它們在染色體上頭尾相連、串聯排列,相互之間由間隔區分隔。其中18S、5.8S和28S rDNA基因組成一個轉錄單元，三者高度保守,適合于較高等級水平的生物群體間的系統分析, 其間的間隔區為內轉錄間隔區(Internal Transcribed Spacer, ITS)，本實驗擴增榨菜黑斑病ITS序列，序列全長500kb左右。

三、實驗儀器及藥品耗材

1、主要儀器：移液器、振蕩器、PCR儀、電子天平、量筒、微波爐、電泳儀、水平電泳槽和凝膠成像系統等。

2、主要藥品及耗材：一次性手套、PCR板、移液器吸頭、無菌水、2×PCR 混合酶（Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR穩定劑和增強劑組成的混合液）、液體石蠟、瓊脂糖、0.5×TBE緩沖液、Goldview染料、DNA Marker 2000和溴酚藍等。

四、實驗步驟

（一）PCR擴增玉米目的基因glb1

1、在PCR管中配制25ul反應體系 雙蒸水 8.5ul 2×PCR 混合酶

12.5ul 正向引物ul 反向引物 1 ul DNA 2 ul 液體石蠟 20 ul

2、按一下程序進行擴增 94℃預變性5 min，1個循環；

94℃變性1 min，64℃退火1 min，72℃延伸2 min，共設35個循環； 72℃延伸10 min； 4℃保存

(二)瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR結果

配制1%瓊脂糖凝膠，在25ul PCR擴增產物加1ul溴酚藍，200伏，200毫安，電泳并觀察結果。

五、作業

繪畫出PCR擴增電泳圖，標明DNA Marker 位置及檢測PCR產物位置，并根據DNA Marker位置及亮度估算PCR擴增產物的大小及濃度。

第二篇：臨床基因擴增(PCR)診斷實驗室工作規范(試行)

附件

2臨床基因擴增（PCR）診斷實驗室工作規范（試行）

為使基因擴增診斷技術規范有效的用于臨床，保證檢測質量，更好地為臨床疾病的診療服務，特制定本規范。

1．臨床基因擴增實驗室的設置：和儀器設備

臨床PCR實驗室應分為四個隔開的工作區域，每一區域都應有專用的儀器設備。即1）試劑貯存和準備區；2）標本制備區；3）擴增反應混合物配制和擴增區和的擴增產物分析區。如使用擴增和產物檢測同時完成的熒光定量PCR方法或全自動分析儀如Cobas－T（Anplicor）等，則3）和4）兩個區可合并。

與上述特定實驗區有關的各個房間必須有明確的標記，以避免不同工作區內的設備物品如加樣器、試劑等的移出或不同的工作區間發生混淆。進入各個工作區必須遵循一嚴格的）順序，只能按單一方向進行，即從試劑貯存和準備區～標本制備區～擴增反應混合物配制和擴增區～擴增產物分析區。不同的工作區必須使用不同的工作服，可以不同的顏色來區別。此外，當工作人員離開各工作區時，不得將各區特定的工作服帶出。

1．l．試劑貯存和準備區

本區用于貯存溶液的制條、溶液的分裝和主反應混合液的制各。本區儀器設備配置：（l）4 冰箱和一20 冰柜；（2）混勻器；（3）微量加樣器若干支（覆蓋1～1000pl）；（5）專用工作服和工作鞋；（6）專用辦公用品；（7）消耗品： 一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離。心管和加樣器吸頭（帶濾心）；（8）可移動紫外燈（近工作臺面）。

1．2．標本制備區

標本貯存、核酸提取及貯存均在本區內進行。RNA測定時的單鍵。cDNA合成也在本區進行。本區儀器設備自己置：（l）4冰箱、－20 或-70 冰柜三（2）高達臺式冷凍離心機；（3）混勻器；（4）水浴箱或加熱模塊；（5）微量如排器若干支（覆蓋l～1000μl）；（6）專用工作服和工作鞋；（7）專用辦公用品；（8）消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的部心管和加樣器吸頭（帶濾心）；（9）可移動紫外燈（近工作臺面）；（10）超凈工作臺；（11）超聲波水浴（處理大分子DNA適用）。

1．3．擴增反應混合物配制和擴增區

模板材料（來自標本制備區）和主反應混合液（來自試劑貯存和準備區）的加入以及擴增反應等專門在本二．作區內近行。本區儀器設備自己置：（l）核酸擴增僅三（2）微量加樣器（覆蓋1～1000 μl）；（3）專用工作服和工作鞋；（4）專用辦公用品；（5）消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、高壓處理的部心管和加樣器吸頭（帶濾心）；（6）可移動紫外燈（近工作臺面）。

1．4.擴增產物分析區

本區面積應為6～8m。擴增嚴物的分析在本區進行。本區儀器設備配置：視檢測方法不同而定，如為PCR�ELISA，則需（l）微量加樣器若干支（覆蓋l～2s（2）酶標權、洗報機和恒溫箱;（3）專用工作服和工作鞋；（4）專用辦么，用品；（5）消耗品：～次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）；（6）可移動紫外燈（近工作臺面）。

2．臨床基因擴增診斷實驗室質量保證

臨床基因擴增診斷實驗室質量保證涉及到整個基因擴增檢測的所有階段，即測定分析前的標本來集處理、測定中的核酸提取、擴增和產物分析以及測定后的結果報告等。

2．1．標本的采集

常用于基因擴增檢測的臨床標本包括EDTA或拘檬酸鈉抗凝全血或骨髓、血清或血漿．痰、腦普液、尿及分泌物等。采樣容器最好是密閉的一次性的，如真空系血管。一次性塑料容器使用時無需進一步預處理。當使用非密鬧采樣系統時，如尿、分泌物和骨髓的采禪，必須注意防止來自來樣者的皮屑或分泌物的污染。采樣者采樣時起碼要談．一次性手套。可重復使用的玻璃器〔應高壓處理，因為玻璃器（常含有不易失活的ANA酶。RNA酶的主要來源是實驗人員的手。最好是熱滅菌，250 烘烤 4小時以上可使RNA酶永久性失活。全血和骨髓標本必須進行抗凝處理。通常EDTA和拘檬酸鹽是首選的抗凝劑。不能使用肝素抗凝，因為肝素是Taq酶的強抑制劑，而且在其后的核酸提取步驟中很難去除肝素。臨床用于RNA（如HCV RNA）測定的血標本最好進行抗凝處理，并盡快（3小時以內）分離血漿，以避免RNA的降解。如未作抗凝處理，則物血后，必須在1小時內分離血清。

2．2．標本的穩定化處

DNA分析，標本采集后一般不需要特殊的穩定化處理，但標本應及時送到實驗室。由于RNA易于降解，因此用于RNA測定的標本的穩定化處理有時是必不可少的，Chaotropic物質[特別是異硫氨酸抓鹽（Guanidine thiocyanate，GITC）]可使DNAse和RNAse立即失活。在采集標本時，可將標本材料如血清或血漿加入含有GITC的試劑管中進行穩定化處理。GITC可使RNAse不可逆失活的適合濃度為5mol/L。如果GITC濃度小于 4mol／L；RNA會很快降解。在適當的穩定化處理后，標本一般不需要冷藏即可郵寄。如果溫度低于室溫，GITC即會結晶，所以在加入標本前應使之完全溶解。如標本不能及時送到實驗室，最好選用 GITC處理方法以穩定標本。

2．3標本的運送

標本來集后應盡快送至實驗室，經過適當穩定化處理的標本可在常溫下通過郵寄運送。如用于 DNA提取的含 EDTA的全血標本及用于 RNA提取的經 GITC 穩定化處理的標本。是否冷藏取決于標本的用途，較長時間在室溫貯存會導致靈敏度大大降低。通常應采用不易破碎的容器裝載標本。用于RNA檢測的標本，如果在未經穩定化處理，則必須速凍后，放在干冰中運送。

2．4．標本的貯存

臨床體液標本如血清／血漿等可于-70 下長時間貯存。用于DNA測定的核酸樣本應在 10mmol／L Tris，lmmol／L EDTA緩沖液（pH 7．5－8．0）中 4 保存。用于RNA測定的核酸樣本應在緩沖液中一80 C或液氮中貯存。用乙醇沉淀的核酸樣本貯存在一20OC即可。用 GIT（：穩定化處理的 RNA標本在室溫可保存 7天，如貯存時間較長，則RNA測定敏感性略有下降。

2．5．標本的處理（核酸提取）

核酸提取是決定擴增檢測成敗的關鍵性步驟。通常，核酸制備質量不高是由于抑制物去除不完全所致。抑制物可能來源于標本本身（如血紅素及其前體或降解產物）或核酸提取過程中確．留的有機溶劑（如酚、氯份等），這些物質對其后的酶反應步驟具有強烈的抑制作用，從而影響靶核酸的擴增測定。如在 HBVDNA PCR測定中。采用對血清杯水煮沸裂解以釋放DNA的方法時，肉眼觀察不明顯的溶血也會對擴增測定有很強的抑制作用，應使用正規的核酸提取方法（如經典的酚一氯份提取方法、硅吸附法等）。當標本為疾時，則必須先進行液化處理。再提取核酸。需注意的是；液化時不能加熱，液化時間不能過長。此外，當靶核酸為 RNA時，降解是一個主要問題。RT－PCR測定失敗的常見原因是標本在運送前來經充分的穩定化處理．及核酸提取試劑的RNase的污染。對于前者，要核查測定分析前的步驟，如果沒．現RNA降解的證據。實驗室則應拒絕接受標本，要求重新采取標本，并對運送者給以詳細的指導。對于后者，建議常規使用高質量的商品核酸提取試劑。

2．6靶核酸的逆轉錄和擴增

2．6.l靶RNA的逆轉錄

cDNA合成為RT-PCR中的第一個酶反應步驟，所產生的 cDNA為靶RNA的反向互補鏈。為后面擴增的模板。下述因素通常影響cDNA合成的效率：

l）RT活性的降低或完全缺乏。必須排除由于酶質量不高、試劑降解或加樣錯誤而引起的 cDNA合成不充分。

2）RT或熱穩定聚合酶的抑制物（如酚、血紅素）。當RNA明顯為完整而沒有擴增時，應懷疑有此類抑制物。

3）RNA的降解。

2．6．2影響擴增的因素

有多種因素可引起PCR的假陽性或假陰性結果，如抑制劑或酶活性喪失（見上）、遲大溫度不對、晚十十濃度不佳、患者標本或試劑受污染等。反應孔中熱傳導的均一性極為重要，循環儀的溫度控制和加熱塊中熱傳導的一致性必須有常規的檢查以避免假陰性結果。

2．7污染

在實際工作中，常見有以下幾種污染類型：PCR片段的污染（產物污染）三天然基因組DNA的污染；試劑污染（貯存液或工作液）：以及交及污染（如氣溶膠從一個陽性標本擴散到原本陰性的標本）。對于所有的擴增技術，由于圍繞實驗室來尋找污染源不僅耗時而且還很繁瑣，所以防止污染重在預防。一旦發生了污染，實驗就必須停止，直到發現了污染源為止。如果沒有例外，實驗結果必須作廢，即使平行的污染質控中僅有一管顯示出有PCR片段污染。

2．7．l．測定分析前的污染源。

測定分析前實驗材料的污染主要來自非病人標本來源的核酸。

2．7．2．測定分析階段的污染源。

通常，測定分析階段的每一步都可能發生對樣本的污染。反應混合液的任何成分及核酸的制備和反應建立階段所涉及到的實驗設備的任何部位都是可能的污染源。如受污染的試劑（例如今血清白蛋白，明腋成礦物油）；商品酶制劑；消耗品（如反應管，吸頭）和實驗設備（如加樣器、離心機）。污染的來源之一是許多樣本在同時制備時的交及污染，但最主要的污染來源為以前擴增產生的特異產物DNA片段。在前面三個工作區中，不當的實驗操作

會引起所使用的試劑、消耗品或實驗設備的污染。而在產物分析區，當吸取PCR產物用于檢測時，非常容易引起污染，因此必須制定并嚴格執行標準操作程序。

2．7．3．污染的避免。

要避免污染，首先應是預防而不是排除污染，前面所述工作區的嚴格劃分的目的正是為了預防污染。為避免以前測定中所產生的擴增產物的污染，可設法將其破壞掉。如在擴增反應中用dUTP取代部分dTTP：從而產生的特異擴增片段含有尿嘧啶，這樣擴增前在反應混合液中加入尿嘧啶糖激酶（UNG），可破壞來自以前測定的擴增產物，從而避免其對將要進行的擴增測定的污染。另外一種方法是持續的長波紫外燈照射，通過異補骨脂素光化；單產生DNA加合物，由于DNA加合物對擴增沒有反應但又不妨礙PCR后雜交過程，所以這些方法也能防止污染。由于上面提到的方法會給人一種假的安全感，所以不能以其來替代嚴格的實驗室設置和管理，尤其是這些方法不能防止外來非擴增的天然 DNA的污染。

2．7．4．去除污染的措施。

工作完后必須定期采取有效的去污染措施，結合各種不同的方法可達到最佳效果。去污染措施包括但不僅限下面幾種：用100ml／L次氨酸鈉清潔表面；試驗了后長時間的紫外照射實驗操作臺和其他表面；實驗設備如加樣器的高壓消毒。

2．8．擴增產物的分析

擴增產物的測定有各種方法。如電泳、限制性酶切、斑點印跡、雜交、測序、分光光度法定量等。但臨床PCR測定項目基本上都使用探針雜交方法。

2．8．l．與雜交檢測有關的干擾。

雜交結果不充分的原因可能是基因探針不合適、標記方法不對、對探針的標記不夠、雜交或洗滌方法不合適。最常使用的基因探針有：DNA片段、合成的尊核普酸和體外的轉錄本（反義 RNA探針）。探針的標記物常用的有生物素、地高辛、熒光景和同位素等。在擴增后的雜交檢測中，應該嚴格遵守商品試劑盒確定的雜交程序和雜交條件。溫度太低或離子強度太高都會降低雜交的嚴格性。還會給檢測信號的特異性帶來負面影響。相反，提高潤度和／或降低離子強度會增加雜交的嚴格性。因此，嚴密控制溫度和試劑是避免假陽性和假陰性結果的先決條件，要注意的是，溫度和離子強度不能同時改變。

2．9．質量控制

如上所述，應該開展各種質控來評價測定分析當中各步驟的質量，如RNA的完整性、對擴增是否合適和敏感。

2．9．1．室內質量控制

必須對DNA和RNA分析的各步進行質量控制，以避免假陽性和假陰性，保證測定結果的準確性。由于PCR測定的高敏感性，所以試劑的生產、實驗材料的準備、PCR本身和實驗中的每一步都要求有質控。擴增反應前后的酶反應各步也應有質控，只不過在質控細節上稍有不同。

2．9．1．1．與實驗材料的準備有關的質控。

對DNA提取試劑的效果最常用球脂糖凝膠電冰來檢測。可知所提取的DNA是否發生降解。用常規的手工提取方法制備的DNA的平均長度一般為～100kb，用適合PCR的DNA

提取試劑盒制備的DNA的長度平均范圍為30�40kb。然而；明顯出現降解的DNA（在1和10kb的低分子量范圍內）在經瓊脂糖凝膠電冰分離和用溴化乙錠染色后也可見有強的熒光信號。用對甲基化不敏感的限制性內切酶（如EcoRI）消化DNA，然后電泳分離，能夠對酶活性的抑制劑進行質控（在抑制劑存在的情況下，高分子量的片段不被酶切）。潛在的抑制劑的存在通常用260nm和280nm的分光光度測定來估計，好的 DNA提取物，A260/A280 比值應該在 1． 75--2．0之間；否則，污染（殘留的蛋白或酚）可能會很高。僅用光度計比色方法不能對DNA的完整性下結論。

最快的對總RNA提取質量控制的方法是在非變性條件下作瓊脂糖凝膠電冰，這一點跟DNA分離相同，然而，如果對結果產生懷疑，就應該在變性的條件下作瓊脂糖凝膠電泳以檢測RNA的完整性。在理想情況下，三種主要的核糖體RNA(28S、18s和 5S）在凝膠上出現的帶相對較窄。如發生RNA的降解。則帶被拖向低分子量或出現帶的缺失。測定核糖體RNA帶的密度指數可作為對RNA制備的質量評價的實驗室內的標準；對向低分子量拖尾的、不對稱性的峰的評估也是RNA完整性的合適的指標。另外，瓊脂糖凝膠電泳能顯示出在RNA的制備中被DNA污染的程度。由于這些原因，單獨的光電比色不能對RNA的完整性下結論。

2．9．1．2．對cDNA合成和擴增的質控。

本部分包括陽性質控和陰性質控。

2．．9．l．2．l．cDNA的合成。

對CDNA合成的效率進行監控的關鍵性的質控是使用一個內反應質控。cDNA的合成可以從存在子每一個RNA提取物中的cRNA 轉錄本開始(即普遍表達的mRNA，如核糖體蛋白轉錄本這一類的所謂的管家基因），也可從在制備時加入樣本中的作為內標準的 RNA開始。cDNA合成的內質控是能夠產生確定產物的陽性質控；如果擴增不成功，質控就顯示出有RNA的降解、cDNA合成的過程中錯誤啟動或酶活性喪失。

加入確定量的擴增質控物可以檢測RT�PCR的靈敏度。對于RT－PCR方法 所必須的污染質控為無逆轉錄靶RNA的陰性質控。

2．9．1．2．2．PCR反應。

內反應質控是陽性質控。可使用對有機體存活所必須的靶基因作質按，這些基因至少以豐臺子狀態存在，因為如果基因組缺失這些基因，將使有機體致死（所謂的致死因子），一個比較好的例子就是維生素D血漿結合蛋白的基因；在世界范圍內的許多種族已發現其廣泛的多態性，并且還沒有發現基因活性的同源性丟失，因此，通過PCR共同擴增這種基因的一個片段，在所有患者中均可獲得成功，并且也會證明擴增反應是成功的。

在測定血清／血漿病原體核酸如HBV DNA、HCV RNA等時，應使用已知的弱陽性血清／血漿作為質控樣本，與持測臨床標本等同處理提取核酸及擴增，以判斷擴增檢測的有效性。

使用這些外加弱陽性質控不但可檢測擴增反應液的質量，還可獲得有關PCR檢測下限和特異性的信息。這些質控必須使用與診斷實驗（即患者的標本）所使用的相同的主反應混合液。如果懷疑方法的檢測下限不足以檢測出產物時，則每一個反應管都必須加擴增質控。

外加陰性質控（污染質控）在每一個PCR實驗中都必須設有，應該包括幾種陰性質控。通常，這些質控是民來指明PCR過程中污染出現的階段。包括在樣品制備的整個過程中所帶的空白反應管、含有樣品制備時所用的所有反應液但不含可擴增的模板（所謂的模擬制備）的反應管等。模擬質援可以評估PCR實驗的綜合質量。

此外，為對吸樣過程進行質控，可以水質控樣本來代替核酸樣本加入至反應管，反應管中含所有的反應成分。實際工作中僅通過水樣本來檢測污染是否存在的方法是不可取的，因為它不能發現樣本處理過程中的污染源，水僅可作為擴增試劑的質控。

在擴增靶RNA的PCR實驗中，應做省略逆轉錄的污染質控，通過這種方法，可發現以前擴增的DNA片段所引起的污染。

2．9．l．3．對測定結果評價的質控．

2．9．1．3．1．板上來交和膜上斑點印跡雜交的質控。

在板上雜交和斑點雜交時，陽性和陰性質控應該在同一板或膜上與病人標本平行進行分析，這可排除不同反應中使用了不同雜交條件而造成的對結果的錯誤解釋。

2． 9． 2．室間質量評價能力驗證，proficiency testing）

所有開展臨床基因擴增檢測的實驗室都應參加由衛生部臨床控驗中心組織的全國臨床基因擴增項目的空間質量評價，并作為開展臨床基因擴增診斷的依據之一。

本工作規范自公布之日起實施。

衛生部醫政司

第三篇：臨床基因擴增PCR實驗室質量手冊的書寫

臨床基因擴增PCR實驗室質量手冊的書寫

許

斌

（江蘇省臨床檢驗中心）質量管理的歷史

1950年代臨床實驗室開始質量控制（Quality Control,QC）;1980年代參照工業的GMP管理思路建立良好實驗室實踐準則（Good Laboratory Practice,GLP）；進入質量保證（Quality assurance,QA）；1990年代實驗室引入質量體系認證及實驗室認可制度，實現全面質量管理（TQM，Total Quality Management）。質量體系認證——ISO9000（2000版）；實驗室認可——ISO/IEC標準17025-2000《校準和檢測實驗室資格的通用要求》；ISO/DIS標準15189-1999“醫學實驗室的質量管理。” 美國臨床實驗室認證

?發證機構：HCFA（Health Gare Financing Administrations）,衛生保健署 ?認證依據，CLOA38，行業認可，強制，體系+能力 ?認證中介機構：

*JCAHO（Joint Commission on Accreditation of Healthcare Organizations）衛生機構認可聯合委員會

*CAP(College of American Pathologist)美國病理家學會

*COLA（Commission on Office Laboratory Accred-itation）

醫生實驗室認可委員會 我國實驗室合格評定

?認可

*依據：ISO/IEC 17025，15189 *國家評審，自愿，體系+能力 ?認證

*依據：ISO 9000：2000版 *中介機構，自愿，體系 ?行業技術驗收

*《臨床實驗室管理辦法》，《江蘇省醫院檢驗科建設與管理規范》 *省、市臨床檢驗中心，強制，體系+能力 4 PCR驗收意義及驗收依據

2002年開始的PCR實驗室驗收工作開創臨床檢驗技術準入的先河、推動臨床實驗室標準化建設、規范檢測市場、建立醫療事故預防機制。其依據為： 《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》衛醫發[2002]10號 《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規范》衛檢字[2002]8號 《關于成立臨床基因擴增檢驗專家組的通知》蘇衛醫[2002]42號 規定應具有的SOP（13個）

儀器設備的維護保養程序、儀器設備的校準程序、儀器設備的操作程序、臨床標本收集程序、臨床標本的處理（核酸純化）程序、臨床標本的保存程序、試劑的質檢操作程序、消耗品購置驗收和儲存程序、廢棄物的處理程序、內務管理程序、室內質量控制程序、核酸擴增及產物分析檢測的操作程序、抱怨處理程序。質量管理體系

6.1 定義 在質量方面指揮和控制組織的管理體系。（Quality Management System）管理體系是指建立方針和目標并實現這些目標的體系。實驗室通過把組織機構、職責、工作程序、質量活動過程和各類資源、信息等協調統一起來所形成的有機整體即為實驗室的質量體系。

6.2 質量體系的文件構成 第一層：質量手冊（綱領性文件）；第二層：程序性文件（體系要素的規定）；第三層：作業指導書（具體項目的操作指導）；第四層：記錄包括表格、簽名、原始記錄、報告等質量記錄和技術記錄。

6.3 質量手冊定義

GB/T6583定義：質量手冊是闡明一個實驗室的質量方針，并描述質量體系的文件。它既是質量體系的表征形式，又是質量體系建立和運行的綱領。它對實驗室的組織結構（含職責）、程序、活動能力（過程）和資源作出規定，是實驗室長期遵循的文件。

6.4 質量手冊的分類

根據手冊的內容和用途分為二類：質量保證手冊——用于證明，供客戶使用，質量管理手冊——用于運行，供實驗室內部使用。

6.5 質量手冊的作用

編寫質量手冊的健全和完善質量體系的首要環節。根據實驗室的內外因素合理調整、選擇體系要素，分配和落實質量職責，理順管理關系，明確管理責任，合理安排各類文件的層次，把實驗室積累的經驗變成法規性文件。協調各工作環節的準則。

內部質量審核的依據；對外證實實驗室的質量保證能力，提高客戶的信任度。

6.6 質量手冊的特征

?以客戶為關注焦點：以病人為中心，為臨床服務 ?領導作用：創造使員工能夠充分參與實現目標的環境 ?全員參與：各負其責

?過程方法：將資源和活動作為過程進行有效管理 ?管理的系統方法：各個過程的有效連接 ?持續改進：根據實際不斷完善

?基于事實的決策方法：遵循科學，實事求是出報告 ?與供方互利的關系：相互協作，共同獲利

6.7 質量手冊的結構 ?封面

?批準頁：包括實驗室名稱、標志，發行版次，生效日期，批準人簽名，手冊編號，受控狀態。

?實驗室公正性聲明

?修訂頁：以表格描述修訂序號、修訂的章節條款和簡要內容、批準人及日期。?目錄：各章節條款的名稱及頁碼

?前言：介紹實驗室的一般情況和手冊的適用范圍以及手冊中術語或縮略語的定義 ?手冊的管理：對手冊的保存、分發、評審、修訂以及保密作出規定 ?質量方針及目標

?組織結構及人員責權利關系

?要素描述：由系列SOP文件對溯源、人、機、料、樣、法、測等質量諸要素的陳述 ?支持性文件：包括實驗室平面圖、人員一覽表、儀器設備一覽表、引用標準及參考文獻等

6.8 標準操作程序

Standard Operational Procedure,簡稱SOP。程序的定義為：為進行某項活動所規定的途徑。SOP是臨床實驗室內部以文件的形式對質量活動用規定的方法進行連續而恰當的控制。實驗室的SOP應涵蓋所有的質量活動，包括檢測或校準計劃、管理性程序、技術性程序、項目操作程序和記錄表格等。由于影響每個實驗室的質量活動的條件和因素不一樣，一個SOP只在某個實驗室內有效，而不一定適用于其他實驗室。

6.9 標準操作程序的一般要求

?對完成各項質量活動的方法作出規定，每個SOP都應對一個或一組相互關系的活動進行描述；

?每個SOP應說明該項質量各環節的輸入、轉換和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以及它們與有關活動的接口關系；

?規定開展質量活動的各個環節的物資、人員、信息和環境等方面應具備的條件； ?明確每個環節轉換過程中各項因素的要求，即由誰做、做什么、做到什么程序、達到什么要求，如何控制、形成什么記錄和報告，以及相應的審批手續； ?規定在質量活動中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施； ?SOP應簡練、明確和易懂并且工作人員熟練掌握和嚴格遵守。

6.10 推薦PCR實驗室質量手冊目錄 1.質量方針和宗旨 2.工作制度

2.1 實驗室的設置、布局及組織結構 2.2 實驗室內務管理制度 2.3 實驗室的人員配置及管理制度 2.4 生物防護與安全制度 2.5 實驗室廢棄物處理制度 2.6 實驗室清潔消毒制度 2.7 儀器設備的管理制度

2.8 儀器、試劑、耗材購置程序及管理制度 2.9 臨床標本的管理制度 2.10 實驗室記錄的管理制度 2.11 質量控制工作管理制度 2.12 結果報告管理制度 2.13 崗位責任制 2.14 抱怨制度 3.操作指導書（SOP）3.1 消毒標準操作程序

3.2 超凈工作臺使用標準操作程序 3.3 超凈工作臺維護和保養標準操作程序 3.4 PCR儀使用標準操作程序 3.5 PCR儀維護和保養標準操作程序 3.6 臺式離心機使用標準操作程序 3.7 高速冷凍離心操作標準操作程序 3.8 移液器使用標準操作程序 3.9 加樣器校準標準操作程序 3.10 冰箱維護和保養標準操作程序 3.11 電熱恒溫水浴箱操作程序 3.12 電子天平使用和校正操作程序 3.13 可移動紫外消毒車使用操作程序 3.14 溫度計校準程序 3.15 試劑的質檢操作程序 3.16 標本唯一標識編號編制規則 3.17 臨床標本的采集及處理操作程序 3.18 臨床標本的保存程序

3.19 乙肝病毒核酸擴增熒光檢測標準操作程序 3.20 室內質量控制標準操作程序 3.21 室間質評標準操作程序 4.引用圖表

4.1 實驗室組織結構圖 4.2 實驗室工作人員一覽表 4.3 人員培訓計劃及培訓記錄表 4.4 主要儀器設備一覽表 4.5 臨床送檢標本流程圖 4.6 PCR擴增可接受標本記錄表 4.7 PCR擴增拒收標本記錄表 4.8 室內質控結果記錄表 4.9 室間質控記錄表 4.10 消耗性材料驗收記錄表 4.11 試劑驗收記錄表 4.12 故障處理表 4.13 儀器設備使用記錄表 4.14 儀器設備維護保養記錄表 4.15 實驗室清潔消毒記錄表 4.16 工作區溫度、濕度記錄表 4.17 抱怨記錄表

4.18 標本超低溫保存記錄表 4.19 應急處理記錄表 4.20 垃圾處理記錄表 4.21 冰箱溫度記錄表 4.22 水浴箱溫度記錄表 4.23 移動紫外消毒車記錄表 4.24 設備校正記錄表 4.25 檢測結果報告流程 4.26 報告單樣張 6.11 文件格式 一 目的 二 范圍 三 職責 四 工作流程 五 引用文件及表格

6.12 寫作技巧

?目的：WHY，為什么要開展這項活動 ?范圍：WHAT，活動涉及的方面 ?職責：WHO+WHAT，誰做，誰負責

?工作流程：列出活動順序和細節，明確各環節“輸入——轉換——輸出”，即做何事（WHAT）、何人做（WHO）、何時做（WHEN）、何地做（WHERE）、如何做（HOW）?引用文件和表格：

開展此項活動涉及的文件、標準以及使用的表格、證明文件和記錄保存期 評審中常見問題

7.1 手冊

文件不全，無系統性；質量要素描述不全；格式不對；與實際工作脫節；無現行有效性（無手簽，各區無相應手冊）；記錄不全、不規范

7.2 人員

人員檔案：每人一個檔案袋，有關資格證書（如上崗證）、培訓、技能和經歷等。培訓計劃及實施記錄：每人有、季度、月的培訓內容及實施記錄；內容包括外出學習、進修，內部質量手冊學習、業務學習、新項目引進等。

7.3 設施與環境

通風、紫外、清潔、消毒的程序及記錄、生物安全防護的程序及記錄、生物垃圾的處理。

7.4 儀器設備

采購程序及驗收標準；校準程序及狀態標識，使用、維護、保養的程序及記錄；檔案：每個與檢測質量相關的設備均應建檔，內容包括：設備的名稱；制造商名稱、型號、序號或其它唯一性標識；接收日期和啟用日期；）目前放置地點；接收時的狀態（例如全新的、經改裝的）；儀器使用說明書或其復印件；校準和/或檢測的日期和結果以及下次校準和/或檢測的日期；迄今所進行的維護和今后維護計劃的細節；損壞、故障、改裝或修理的歷史。

7.4 料（試劑、耗品）

采購程序及領用記錄，質檢標準、程序及記錄，應急程序；缺貨、試劑變質；室內質控品。

7.5 樣（品）

標本唯一編號，年月日項目順序號；標本采集標準操作程序；標本接受（拒收）標準、交接記錄；標本保存、銷毀的程序及記錄；標本處理標準操作程序

7.6（方）法

方法學的有效性——依據；SOP的合理性——生搬硬套；分區操作的協作——流程合理；質控點的安排——提取效率、擴增效率；基線的調整——CT值、本底熒光值。

7.7（檢）測

?室內質控的SOP：耗品質檢，試劑質檢，質控方法（糾錯措施），質控圖。?室間質評的SOP：糾偏措施

7.8 報告

?發放范圍：門診、病區、外單位 ?發放方式：保密、電子、郵件

?報告單的格式：唯一編號、檢測下限、實驗室申明 ?審核、標準、不合格報告的處理

7.9 抱怨

?實驗室服務、質量改進的依據

?對象：病人、醫生、工作人員。SOP應明確方式、職責、反饋、記錄。

摘自《2003年華東區臨床檢驗中心協作線臨床實驗室質量管理

及新技術應用高級研討會資料匯編》

第四篇：16sRNA PCR 擴增及凝膠電泳分析實驗報告

16sRNA PCR 擴增及凝膠電泳分析

微生物學20092474王紫楓

一、實驗目的1．熟悉細菌活化及培養過程

2．掌握PCR擴增技術及方法

3．掌握凝膠電泳分析技術

二、實驗原理

rRNA進化緩慢，具有高度保守性。不同微生物的rRNA的基因序列在某些位點以不同的幾率發生突變。同時，小核糖體亞基16sRNA分子量大，攜帶信息量大，可作為屬種鑒定的基礎。

通過篩選的細菌，做活化培養后，細菌在緩沖液酶解，通過細胞破壁、裂解、離心得到RNA相關序列，在經過設定PCR相關條件。溫度、循環次數，將裂解液加入到體系中進行擴增。在完成循環后進行凝膠電泳、拍照、序列分析。

三、實驗用品

供試菌種53種、編號試管每株兩個LB固體和液體培養基、Mg2+、無菌水、EB Buffer、TE離心管、移液槍

四、實驗步驟

1．將供試菌株編號，沒人分得3個菌株。

2．將菌株接入固體培養基進行活化，培養24小時。

3．將活化后的菌株挑一環，接入5ml液體培養基內振蕩培養16小時得到菌懸液。

4．取1.5ml菌懸液于離心管，10000轉5分鐘棄上清。

5．用無菌水洗滌一次，沉淀懸浮于150ul TE Bufler。

6．將上述懸液在沸水上煮10分鐘，水浴10分鐘，10000轉5分鐘離心后，上清液于-20℃保存。

7．取上述上清液1ul于PCR中。

8．3小時PCR擴增。

9．將擴增后的序列取1ul于EB，并注入電泳槽中。

10． 經過電泳后的凝膠，取出于紫外熒光燈中顯色，拍照并分析。

五、實驗結果

經過拍照，僅有2、3、6、9、22、38、39、40號擴增出了新的序列顯色明顯。其他沒有擴增出來的原因可能是提取過程中丟失。另外第三塊膠板沒有明顯變化的主要原因可能是電泳時入緩沖液使用了舊的緩沖液，并未出現預期的結果。

六、注意事項

1．預制固體培養基瓊脂要加夠量，否則很難凝固。

2．在轉接時，挑取的一環盡量多一些，肉眼可看見的狀態為宜，生長期長一些。

3．緩沖液先用現配。

第五篇：檢驗科基因擴增實驗室管理制度

檢驗科基因擴增實驗室管理制度

2021年11月

綿陽經開區松埡人民醫院檢驗科

目錄

文件編號	文件名	頁碼
	實驗室設置與布局
	實驗室內務管理制度
	實驗室人員配置及管理制度
	實驗室工作人員崗位職責
	實驗室工作程序
	生物防護與安全制度
	基因擴增實驗室復檢規則
	儀器設備管理制度
	儀器設備維護及保養制度
	儀器設備校準程序
	檢測結果報告程序
	實驗室清潔程序
	廢棄物處理程序
	室內質量控制程序
	室間質評管理程序
	試劑與耗材購買驗收及管理程序
	實驗記錄管理制度
	投訴處理程序
	應急處理程序
	實驗室保密制度
	實驗室生物安全管理制度
	個人三級防護用品穿脫流程
	壓力蒸汽滅菌器滅菌操作流程
	紫外消毒操作及維護程序

實驗室設置與布局 目的：

建立科學、合理的實驗室設置及管理，防止實驗室交叉污染，保證檢測結果準確。適用范圍：

適用于臨床分子生物實驗室的設置、工作流程和日常管理等。內容：

實驗室分為試劑制備區、標本處理區、產物擴增分析區，共三個區，各工作區有專用的儀器設備、辦公用品、工作服、實驗耗材和清潔用具等，并貼上標簽加以區別，不得混用。

3.1實驗室各區室溫宜為20-25℃，空氣濕度宜≤80%。

3.2實驗室各區設有獨立進風排風系統，保持實驗室處于負壓狀態。實驗室設置與分區

4.1 試劑制備區

4.1.1儀器及配套設置 試劑貯存冰箱（－20℃）、各種規格的加樣器（0.5ul～10ul、5～50ul、20～200ul）各種規格的吸頭、移動式紫外線消毒車、溫濕度監測計、臺式高速離心機、各種消毒用具及用品、各種辦公用品、專用工作服、一次性鞋套和一次性手套。

4.1.2 文檔設置 臨床分子生物學實驗室試劑制備區溫濕度記錄表、冰箱溫度記錄表、實驗室清潔消毒記錄表、各儀器的使用維護記錄表。

4.2 標本處理區

4.2.1儀器及配套設施 核酸提取儀、標本保存冰箱（2℃～8℃、－20℃）、臺式高速離心機、高速冷凍離心機、生物安全柜、混勻器、各種規格的加樣器（0.5ul～10ul 5～50ul、20～200ul、100～1000ul）、各種規格的吸頭、移動式紫外線消毒車、醫用空氣消毒機、溫濕度監測計、干式恒溫器；各種消毒用具及用品、各種辦公用品、專用工作服、一次性鞋套和一次性手套。

4.2.2文檔設置 臨床分子生物學實驗室標本處理區溫濕度記錄表、冰箱溫度記錄表、實驗室清潔消毒記錄表、各儀器的使用維護記錄表。

4.3 產物擴增分析區

4.3.1儀器及配套設施 實時熒光定量PCR擴增儀、工作分析電腦、移動式紫外線消毒車、溫濕度監測計、各種消毒用具及用品、各種辦公用品、專用工作服、一次性鞋套和一次性手套。

4.3.2文檔設置 臨床分子生物學實驗室擴增區溫濕度記錄表、冰箱溫度記錄表、實驗室清潔消毒記錄表、各儀器的使用維護記錄表。

實驗室內務管理制度 目的：

使實驗室工作開展有序可依、有序必依，保證實驗正常進行。適用范圍：

適用于分子生物實驗室內務管理。內容：

3.1 本實驗室進行臨床基因擴增檢測及相關實驗工作，不得進行其它實驗操作。

3.2 臨床分子生物實驗室的工作人員須經基因擴增技術培訓合格方可上崗。

3.3 進入工作區須戴上口罩，帽子，更換各室專用的工作服，各室之間物品不可混用。

3.4 非本實驗室工作人員，未經許可不得入內；進修、實習或其他科人員需在本室進行相關實驗，須在本實驗室人員指導下進行。

3.5每天實驗開始前，對實驗臺面和器材進行滅菌消毒。

3.6 本室工作人員必須嚴格遵守各項規章制度和操作規程，及時做好各項記錄。實驗完畢后，做好實驗室清潔、整理及分析統計等工作。

3.7 室內儀器由專人負責，定期進行維護和保養，并完成相關記錄。

3.8 每日實驗結束后，做好室內的清潔衛生和消毒工作。

3.9工作人員下班前須關閉實驗室的門窗、切斷電器電源。

3.10 非實驗室相關物品不得放置在工作區內。

3.11 實驗室為工作場所，不得吸煙、吃東西，應保持整潔、安靜、良好的工作環境。

實驗室人員配置及管理制度 目的：

配置足夠的實驗室工作人員，進行統一的管理，保證本室工作順利開展。適用范圍：

適用于分子生物實驗室的人員配置、培訓考核及管理等。程序：

3.1 人員要求

3.1.1具備較好的分子生物學知識和實驗經驗。

3.1.2具有PCR上崗證, 已完成臨床分子生物學實驗室所有培訓計劃。

3.2 人員配置

3.2.1 實驗室根據工作需要配備足夠的工作人員。現有獲PCR上崗培訓合格證者2名。

3.2.2 各級技術人員履行相應的工作職責，見《實驗室工作人員崗位職責》

3.3 人員培訓及考核

3.3.1負責人參加每年衛生部PCR室間質評總結會。

3.3.2工作人員每年應接受PCR技術相關繼續教育課程，參加相關學術交流會議。

3.3.3尚未取得上崗證的人員在適當的時間內參加技術培訓。

3.3.4人員管理：建立工作人員的技術檔案，包括相關材料的復印件。

實驗室工作人員崗位職責 目的：

對實驗室工作人員進行合理分工，明確個人職責。適用范圍：

適用于臨床分子生物學實驗各個崗位工作。崗位資格

3.1 具備較好的分子生物學知識和實驗經驗。

3.2 具有PCR上崗證, 已完成臨床分子生物學實驗室所有培訓計劃。職責范圍

4.1 各級技術人員按崗位工作責任與任務完成工作。

4.2 主任具體負責崗位內各業務適用范圍內技術、質控、結果核對及簽發工作。

4.3 組長負責室內日常管理工作、試劑預算和領用；質量監督員協助組長對室內質量工作的完成。各崗位職責細則

5.1 標本收集、處理、編號

5.1.1 負責分子生物室檢驗項目送檢標本的處理、歸類、查對、編號工作，檢查標本狀態。

5.1.2 負責對不合格（條碼無效、標本量過少、容器用錯、運送時間過長等）的標本處理。與相應臨床科室聯系，根據病房的意見處理標本。登記在《實驗室不合格標本記錄單》上。

5.1.3 接受、協助電話查詢、咨詢，將不能解答的問題轉達給高一級技術人員。

5.1.4 負責指導實習、進修人員學習標本接收、編號、審核工作。

5.1.4 科室分配的其它工作職責。

5.2新型冠狀病毒核酸檢測崗位

5.2.1 負責檢測前準備，負責離心管及吸頭的滅菌，檢查當天相關的試劑、實驗儀器配備及儀器的工作狀態情況，確認儀器的正常運作。

5.2.2 如果儀器異常，要及時處理，對于無法解決的問題負責與相關工程師聯系，盡快排除儀器故障，以保證檢測工作順利進行。

5.2.3 負責標本的處理、歸類、查對、編號工作。

5.2.4 負責對不合格標本的處理。

與相應臨床科室聯系，根據病房的意見處理標本。登記并填寫《不合格標本記錄表》。

5.2.5 接受、協助電話查詢、咨詢，將不能解答的問題轉達給高一級技術人員。

5.2.6 負責實驗操作，具體操作見《新型冠狀病毒核酸檢測操作程序》；負責結果的錄入和核對。

5.2.7 工作完畢，負責實驗室清潔消毒工作以及儀器的維護保養，完善當天實驗相關記錄。

5.2.8 認真學習國內外的先進醫學科學技術，參與臨床科研工作。

5.2.9 按照醫院制訂的具體的實施細則和科室規范化培訓的要求，完成相關培訓計劃。

5.3 報告核發崗位

5.3.1 綜合分析標本的檢測結果，注意所要求檢測項目的完成情況，結果的可靠性，與歷史對照差別的合理性等，按相關復查標準對可疑結果進行復查。

5.3.2 監察儀器運行狀況，及時處理異常情況。

5.3.3 負責標本復查、補漏，確認、打印、整理報告，及時發急診報告。

5.3.4 負責指導實習、進修人員學習PCR技術。

5.3.5 接受并處理初級崗人員轉達的問題，接受臨床咨詢、投訴，調查事件原因，及時向上級匯報。

實驗室工作程序

1目的保證臨床分子生物學實驗室各項工作按質量手冊協調運行，確保科室質量體系的方針和目標得以實現。適用范圍

臨床分子生物學實驗室日常工作。職責

3.1 組長：

全面負責臨床分子生物室管理工作。管理工作包括臨床分子生物室工作人員及進修學員和實習學生的政治學習、業務學習、工作安排，臨床分子生物室質量體系、人員管理、教學管理、儀器、試劑管理等。

3.2 質量管理員：

主要負責分子生物實驗室目前已開展項目的室內質控和室間質評的管理工作，包括每月的室內質控匯總、小結。質量管理員要在衛生部臨床檢驗中心和四川省檢驗中心室間質評辦公室通知的時間適用范圍內，督促完成室間質評工作，包括室間質評項目的檢測、報告、總結等，并管理室內質控工作，包括參與和檢查室內質控工作、測定質控品靶值、儀器間比對實驗等。

3.3 主管及以上技師

3.3.1 負責實驗室室內質量控制，審核室內質控，并作相應處理，發現失控時報告上級。3.3.2 負責儀器檢測前準備工作，檢查當天相關的試劑配備及儀器的工作狀態情況，確認儀器的正常運作，負責實驗、復查、補漏、確認、打印、整理報告，及時分發急診報告。

3.3.3 負責處理初級崗人員轉達的問題，接受臨床咨詢、投訴，調查事件原因，及時向上一級匯報。

3.3.4 負責儀器維護保養，包括每日、周、月儀器保養。監察儀器運行狀況，及時處理異常情況。儀器故障時及時向上一級匯報，與相關工程師聯系。

3.3.5負責檢查并確保當日報告正常發出，整理當日工作日志。

3.3.6 負責領取本組試劑，確保有足夠試劑完成所有項目的檢測。

3.3.7 負責指導、協助初級技術人員的工作；實習生、進修生的帶教。

3.3.8 負責完成室間質評工作。

3.4技士/師

3.4.1 負責分子生物室標本的處理、歸類、查對、編號工作。

3.4.2 負責對不合格標本處理，與相應臨床科室聯系，根據病房的意見處理標本。登記在《不合格標本記錄表》上。

3.4.3 負責核對病人資料（核對內容包括：患者姓名、性別、年齡、申請科室、病區、床號、住院號或門診號、申請檢測項目、標本種類以及輸入申請單上的備注以及標本狀態）。

3.4.4 負責接受、協助電話查詢、咨詢，將不能解答的問題轉達給高一級技術人員。

3.4.5 輔助完成實驗、樣本復查、補漏以及未檢驗樣本的保存，處理。

3.4.6 當日工作結束后，負責實驗室的清潔工作。工作程序

4.1 各技術人員按《實驗室崗位職責》要求完成工作。

4.2 實驗前工作

4.2.1 工作開始前穿戴好工作服、口罩、帽子、手套。

4.2.2 記錄并調整實驗室溫濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%），并作好冰箱溫度記錄，根據實驗需要設置恒溫器溫度，并校正顯示溫度，作好相應記錄

4.2.3 開啟生物安全柜紫外線消毒1小時，操作前開啟風機運行30分鐘。

4.2.4 實驗器具、耗材的準備：如離心管及吸頭的高溫滅菌，檢查當天相關的試劑，實驗儀器配備及儀器的工作狀態情況，確認儀器的正常運作。

4.2.5 提前30分鐘從冰箱取出當天所用核酸提取試劑和凍存標本。

4.2.6 標本的收集、離心、編號 ：合格標本按照各項目編號規則編號，并錄入LIS相應工作站；不合格標本（條碼無效、標本量少、肝素抗凝管、嚴重溶血等）與相應臨床科室聯系，根據病房的意見處理標本。登記并填寫《實驗室不合格標本記錄單》。

適用于PCR檢測全過程，包括試劑制備，標本處理，核酸提取，擴增產物分析。

4.3 實驗過程

4.3.1 試劑的準備（試劑制備區）

4.3.1.1 記錄并調整實驗室溫度、濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%），并作好冰箱溫度記錄

4.3.1.2 清點庫存試劑，檢查是否有過期或將近到期的試劑，作報廢處理或排列優先使用，避免浪費。

4.3.1.3 取出當天實驗需使用的試劑復溶至室溫，配制當天所需試劑，并按《試劑使用登記表》規定記錄配制的人份數；若是當天新開使用的試劑，按《試劑使用登記表》規定記錄試劑盒數。

4.3.1.4 試劑準備或配制好后，傳送到下一工作區。

4.3.2 標本處理（標本在標本處理區進行）

4.3.2.1記錄并調整實驗室溫濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%），冰箱溫度，并作好記錄；根據實驗需要設置恒溫器溫度，并校正顯示溫度，作好相應記錄。

4.3.2.2 配制1000mg/L的含氯消毒劑

4.3.2.3 待測標本檢測前30分鐘復融，完全復融后振蕩30秒。抽提DNA或RNA前，取出經高壓滅菌處理的離心管，編寫相應的標本號并做好核對。樣品的核酸提取應按相應的SOP進行，整個過程應使用本區專用的經滅菌處理的吸頭、離心管等。

4.3.2.4 使用過的離心管、吸頭及其他廢棄物浸泡于1000mg/L的含氯消毒劑中，至少浸泡2小時。

4.3.2.5 未檢測標本按各自存儲要求，分別保存（見各項目SOP具體規定）；每次實驗完畢后，將樣本暫存4℃，待結果審核后，陰性樣本用三層黃色垃圾袋密封后送至高壓滅菌室高壓滅菌，陽性樣本復核后高壓滅菌處理。

4.3.2.6 實驗中必須設立陰、陽性質控，并與被測臨床標本同步檢測。

4.3.2.7 不同檢測項目的核酸提取和保存按相應的檢測項目SOP進行。

4.3.3 基因擴增（基因擴增在擴增區進行）

4.3.3.1 記錄并調整實驗室溫度、濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%）。

4.3.3.2 按照實驗要求啟動相應的PCR儀,按相關PCR儀操作程序進行樣品擴增。

4.3.3.3 擴增完成后，按相應項目要求將檢測結果調至最佳，傳送結果進LIS系統；關閉PCR儀及相關電腦，記錄PCR儀使用時間和運行狀態。

4.3.3.4 實驗完畢后及時并小心清除擴增儀內的樣品管或反應板，放入有生物污染標記的垃圾桶中，交科室工人統一處理。

4.3.3.5 PCR檢測結果的確認：綜合分析標本的檢測結果，注意所要求檢測項目的完成情況，結果的可靠性，與歷史對照差別的合理性等，按相關復查標準對可疑結果進行復查。結果報告

5.1 初級檢驗人員責任標本的編號、上機檢測、結果的錄入等。初級職稱人員、待聘中級職稱人員可以作為報告名單的錄入者和檢驗者，不能作為核對及核發報告。

5.2 中級及其以上職稱人員參與標本的檢測，并負責對檢驗報告進行審核、簽發，負責結果的解釋和說明。

5.3 綜合分析標本的檢測結果，注意所要求檢測項目的完成情況，結果的可靠性，與歷史對照差別的合理性等，按相關復查標準對可疑結果進行復查實驗結束后

6.1 完善實驗室各工作區的記表表。

6.2 清潔實驗室各工作區的臺面，儀器設備、加樣器，開啟紫外線消毒。

生物防護與安全制度 目的：

規范實驗室生物安全管理，保證實驗室安全運作，將事故控制在最低限度。適用范圍：

適用于臨床分子生物實驗室。程序：

3.1 臨床基因擴增檢驗實驗室的設置遵循《臨床基因擴增檢驗實驗室設置標準》，嚴格分區，各區物品不得混用。

3.2 臨床實驗室可能接觸的微生物：病毒、細菌及其它具有高毒力的病原體。

3.3 實驗室應提供個人防護裝備，如一次性手套、口罩、帽子、工作服、實驗服、面罩、護目鏡、鞋套等。

3.4 可能的感染途徑：

3.4.1 空氣傳播：具有傳染性的溶液可能形成氣煙霧散布空氣中。

3.4.2 經口傳播：用口吸移液可能導致微生物進入人體傳染。也可通過間接途徑引起“手——口”傳染。

3.4.3 直接接種：偶然的針刺、碎玻璃劃傷或其它方式造成的感染原通過損傷的表皮進入人體可引起傳染。

3.4.4 粘膜接觸：HBV、HIV等病原體可通過與粘膜（如眼結膜）的直接接觸進入人體。

3.5 常規預防措施：

3.5.1 來自所有病人的血液和體液都被認為是具有傳染性的。所有血液和體液標本應放置于具有安全蓋的結構優良的容器里，以防在運輸過程中發生泄漏。采集標本時應防止污染容器的外表或隨標本的檢驗單。如果存在潛在的或實際的污染，則應再加一層包裝。

3.5.2 所有處理血液和體液（例如：取下真空試管的塞子）的工作人員都應戴上手套。如果有可能發生血液或體液的噴濺，則應使用面部防護裝備。

3.5.3 實驗室應使用機械移液裝置。絕對禁止用口吸移液。

3.5.4 使用銳器時應防止受傷。如被銳器刺傷，應脫下手套盡量擠壓傷口周圍使血流出，然后用絡合碘、酒精消毒。如樣本進入眼睛，應立即用清水沖洗后到眼科進行相應處理。

3.5.5 血液或其他體液發生泄漏或工作結束后，均應使用合適的化學殺菌劑對實驗室工作區進行表面消毒。消毒液通常采用新鮮配制的1000mg/L的含氯消毒劑和75%酒精。具體操作參閱《實驗室清潔程序》。

3.5.6 實驗中用過的污染品在重復使用前或裝入容器中按傳染性廢棄物進行處理前，應先進行去污處理。參閱《廢棄物處理程序》。

3.5.7 被血液或其他體液污染的設備在實驗室內或外送商家進行維修之前，應先進行清潔和消毒。無法徹底消毒的設備必須貼上生物危害的標簽。

3.5.8 手或其他部位的皮膚在接觸血液或其他體液后必須立即徹底清洗。在實驗工作結束后或取下手套后應立即洗手。在離開實驗室之前應脫下所有的個人防護裝備。

3.5.9 如果實驗人員工作時有可能接觸到血液、其它可能具傳染性的物質、病人的粘膜或要損傷的皮膚、或在處理污染的物品或表面時，都應戴上手套。在進行血管穿刺時，包括靜脈采血、手指或腳背穿刺，也應戴上手套。如果手套破損、刺破、或失去其屏障功能，則應盡快更換。

基因擴增實驗室復檢規則 目的：

規范操作，保證向實驗室服務對象提供準確、及時、可靠的檢驗結果 適用范圍：

臨床分子生物學實驗室樣本分析及復檢。職責：

3.1 首先檢查儀器是否處于正常狀態，室內質控是否在允許范圍內，結合臨床，根拒本室制定的標準，確定是否需要復檢。

3.2 根據基因擴增實驗室制定的標準，不需要復查的標本，3.3對需要復查的標本，首先檢查標本是否合格，復檢內容

標本狀態、儀器狀態、反應線性、偶然誤差、其它異常

實驗項目	復檢條件	措施
新型冠狀病毒	可疑陽性擴增曲線	重新提取或重新擴增
實驗完畢八聯管扭曲變形	重新擴增
內標未擴增	重新提取核酸
醫生要求復檢	重新提取核酸

儀器設備管理制度 目的：

保證實驗室儀器設備得到妥善的管理和正確使用。適用范圍：

臨床分子生物實驗室所有的儀器設備。程序：

3.1 臨床分子生物實驗室的主要儀器均建檔，儀器有：熒光實時定量PCR儀、移液器、離心機、干式恒溫箱、生物安全柜、超凈工作臺、移動式紫外燈。

3.2 儀器檔案包括：序號、產地、名稱、型號、制造商、購入日期、啟用日期、使用記錄、維護記錄、故障記錄等。同時儀器備有相關的說明書、操作手冊、保修卡、負責人，并由本室工作人員對儀器設備進行管理。

3.3 如儀器出現故障不能正常使用，應在儀器上作好故障標識，并記錄故障情況和處理意見，通知醫院維修人員或儀器經銷商進行維修。

3.4 儀器應明確標識工作狀態及校正時間。

3.5 臨床分子生物實驗室的儀器實行嚴格分區使用，不能混用。

儀器設備維護和保養制度 目的：

保護儀器設備穩定、正常功能狀態 適用范圍：

臨床分子生物實驗室所有設備 程序：

3.1 儀器設備的日常維護、清潔保養由本室人員負責，內容主要為儀器設備的清潔消毒。

3.2 大型儀器由廠家工程師每年對儀器進行一次全面保養。小型儀器如移液器的長期保養可由廠家或實驗室工作人員每年至少保養兩次。

3.3 建立儀器設備維護保養登記本。

儀器設備校準程序 目的：

保證儀器設備檢測的有效性和準確性。適用范圍：

適用于有可能對檢測結果造成誤差的儀器設備。主要有：PCR擴增儀、核酸提取儀、干式恒溫箱，溫度計、可調移液器等。程序：

3.1 新購入儀器出廠時由廠家校準，可直接投入使用。

3.2常規校準頻率：

3.2.1擴增儀為每年校準一次.3.2.2移液器：每年校準至少兩次校準。

3.2.3干式恒溫箱：每次使用時用溫度計校準設定溫度，并作好校準記錄。如在使用過程中發現漂移、偏差或可疑情況須進行重新校準，必要時通知醫院維修人員或工程師進行維修，并記錄在案。

3.3 儀器設備維修后須經校準方可重新使用。

3.4 各區儀器的校準順序必須按照分區順序進行。

檢測結果報告程序 目的規范實驗室檢驗報告程序。對檢驗報告的基本信息、審核、結果解釋與說明，保證向實驗室服務對象提供準確、及時、可靠的檢驗結果。適用范圍

適用于檢驗結果報告的全過程。職責

3.1 初級檢驗人員責任標本的編號、上機檢測、結果的錄入等。初級職稱人員、可以作為報告名單的錄入者和檢驗者，不能作為核對及核發報告。

3.2 中級及其以上職稱人員參與標本的檢測，并負責對檢驗報告進行審核、簽發，負責結果的解釋和說明。

3.3 實習生、進修人員、見習期的工作人員無發報告權，需由帶教老師簽發。結果報告程序

4.1 檢驗報告應包括以下信息：

4.1.1 檢驗報告單的抬頭統一為“綿陽經開區松埡人民醫院檢驗報告單”。

4.1.2 患者的惟一性標識（診療卡號、流水號或住院號）

4.1.3 患者的姓名、年齡、性別、科別，當患者的地點和報告的送達地不同時應注明報告的送達地；

4.1.4 檢驗申請者、錄入者、檢驗者、核對者姓名或其他惟一性標識；

4.1.5 樣品的類別，當原始樣品的質和量對檢驗結果有影響時，應注明樣品的狀態，如溶血、脂血等，并在報告中說明可能對結果造成的影響；

4.1.6 注明原始樣品送檢的日期和時間，實驗室檢測樣品的日期和時間，報告發布日期和時間；

4.1.7 檢測項目的名稱、結果、單位及參考范圍，相關時應提供原始結果和修正后的結果；

4.1.8 適用時，應按要求提供檢出限和測量不確定度的信息；當臨床或病人有要求時應注明結果的檢測方法，若要求檢驗科為其檢驗報告提供解釋和說明時，檢驗技術人員應提供此服務；定性檢驗結果必須以中文形式報告，不得以符號報告。

4.1.9 危急值是指檢驗結果的極度異常，如不及時處理會危及病人生命的檢驗值。實驗室應與臨床緊密聯系。

4.2 檢驗報告單核發標準：

4.2.1 當天儀器運行正常，相關項目室內質控在控；

4.2.2 檢驗申請單或電子標簽上的信息完整，標本質量符合要求；

4.2.3 檢驗項目結果完整、無漏項，可疑結果已經復查；

4.2.4 特殊狀態標本的信息已經在狀態欄注明；

4.2.5 已經對檢驗結果進行評審：包括結合臨床資料分析、同一標本不同項目結果的相關性分析。

4.2.6 當發現檢驗報告中有缺陷而對其準確性及有效性產生懷疑時，應由相關人員處理追回已發出有缺陷的報告單，并報告實驗室和科室負責人。對其做必要的修改后再發出，并及時做好記錄。

4.2.7 檢驗工作人員不得向無關人員透露檢驗結果及相關信息。

4.2.8 檢驗報告使用者因特殊原因造成報告損壞或遺失的。只有檢驗系統歷史記錄中能夠調出者或者登記存根上有記錄者，才可補發。并要求做好記錄。

4.2.9 申訴及處理：檢驗報告申請人或委托人對檢驗報告的內容有異議時，可向本科室負責或科室質量負責人提出申訴，按照投訴處理程序執行。

實驗室清潔程序目的：

保證實驗室工作環境衛生，防止污染。適用范圍：

適應于實驗室工作環境、實驗臺面、離心機、移液器等的清潔消毒工作。程序：

3.1 每個實驗室均有各自的清潔用具，不可混用，由本室人員負責清潔。

3.2 實驗室清潔按“試劑制備區→標本處理區→擴增區→產物分析區”的方向進行。

3.3 實驗過程中如發生標本或試劑外濺，應用浸有1000mg/L的含氯消毒劑衛生紙或紗布覆蓋60分鐘，再用紫外線燈照射過夜并記錄。

3.4 每日工作結束后，用1000mg/L的含氯消毒劑擦拭工作臺面、拖地面，用75%酒精擦洗加樣槍。

3.5離心機的清潔：實驗完畢后，用75%酒精擦洗離心機的外殼，用1000mg/L的含氯消毒劑浸過的軟布擦洗離心機的轉頭及內壁，再用潔凈的濕布擦洗，待干后蓋上機蓋。

3.6 實驗完成后，按各區要求紫外燈照射消毒。

3.7 各區工作服每周統一送洗衣房高壓滅菌洗滌。

廢棄物處理程序 目的：

保證實驗室工作的正常開展，防止廢棄物對實驗室和社會環境造成污染。適用范圍：

實驗室所有廢棄標本、使用過的耗材等。程序：

3.1 實驗室放置有蓋污物桶，并貼有明確的分類標識。

3.2醫源性廢棄物處理：

3.2.1廢棄血液標本：由實驗室工作人員高壓滅菌消毒處理后，交醫院專門廢棄物處理護工定時收集統一處理。

3.2.2廢棄的吸頭、離心管、各種分泌物標本丟入黃色垃圾袋中，由實驗室人員高壓滅菌消毒處理后，再交醫院專門廢棄物處理護工定時收集統一處理。

3.2.3新冠檢測標本、廢棄耗材、實驗室一次性防護用品一同高壓滅菌后，按醫療廢物處理流程處理。

3.2.4所有用過的非一次性實驗用品，均先在實驗室內用1000mg/L的含氯消毒劑消毒液浸泡6小時后煮沸，清洗后再交醫院供應室高壓消毒。

室內質量控制程序 目的對臨床分子生物檢驗程序進行質量控制，以保證檢驗結果的準確性。適用范圍

適用于分子生物室所有開展的檢測項目。職責

3.1 實驗室主任和組長負責制定本室、本組內室內質控規則和檢驗過程的質量控制程序。

3.2 檢測人員負責執行檢驗過程的質量控制程序及對本崗位室內質控進行分析和處理。

3.3 質量監督員負責監督本組內是否按照程序文件和操作文件的質量要求進行。工作程序

4.1 標本接收的質量控制

檢驗人員嚴格按規定對標本進行審核，并對不合格標本進行正確處理。

4.2 標本前處理的質量控制

各專業組收到標本后要及時處理標本，不能立即處理的標本要按照正確的方式進行標本保存。檢測人員或指定的編號人員對所有標本按各項目規范標號，嚴格防止錯號。需要離心分離的標本在分離過程中要正確選擇離心速度和時間，盡可能避免標本溶血。標本采集后要在規定的時間內完成檢測。

4.3 檢驗過程的質量控制

4.3.1 校準品、質控品、試劑

校準品、質控品、試劑的評價按照《合格供應商評審程序》執行。

4.3.2 儀器設備

儀器要定期檢查并定期維護保養（包括日保養、周保養、月保養、供應商的定期保養），使儀器設備處于最佳狀態。

4.3.3 操作文件

檢驗人員必須嚴格按照操作文件進行操作。

4.3.4 檢驗人員

檢驗人員的資格和經歷必須能夠符合相應崗位的要求。

4.4 室內質量控制

4.4.1 室內質控的通用要求

檢驗人員按照檢驗項目對質控的具體要求準備質控物，并按照與常規標本相同條件測定質控物，分析判斷質控結果。若發現失控，應按照失控處理程序處理。

4.4.2 質控品的選擇

質控品的選擇要點：

4.4.2.1商品化質控品

4.4.2.1.1 應該盡量選擇與待測病人標本具有相同基本的質控品；

4.4.2.1.2 在實驗室保存的有效期應在半年以上；

4.4.2.1.3 瓶間差應該應盡量小；

4.4.2.1.4 分析物的水平；

4.4.2.1.5 定值與不定值。

4.4.3 質控品的使用和保存

嚴格按照質控品說明書進行操作，嚴格按照使用說明書規定的方法保存質控品，不使用過期質控品。

4.4.4 室內質量控制程序

4.4.4.1 設定靶值和控制限

4.4.4.1.1 靶值：對于穩定性較長的質控品，要求對新批號的質控品與當前使用的質控品一起進行測定，根據20批測定獲得的質控測定結果，進行離群值檢驗，計算出均值和標準差，作為靶值和標準差。

4.4.4.1.2 控制限：通常以標準差的倍數表示。

4.4.4.2 質控品的更換

更換新批號的質控品時，應在原批號質控品用完前與其一起測定。4.4.4.1程序確定靶值。

4.4.4.3 質控參數的設置

在檢驗系統中設置各檢驗項目的質控參數，X、s、CV。

4.4.4.4 失控的分析和處理

4.4.4.4.1 失控原因分析

失控的因素多種多樣，如操作失誤、試劑變質、校準品或質控品失效、儀器問題、質控規則選擇不當、質控參數設置錯誤等。

分析誤差類型：檢查質控圖，判斷是系統誤差還是隨機誤差；系統誤差的來源：試劑問題、校準問題、儀器問題、人員問題、質控品失效等；隨機誤差的來源：試劑瓶或儀器吸樣管道中有氣泡，試劑沒有充分混勻，電壓不穩，溫度變化，操作不熟練等。

4.4.4.4.2 失控后的糾正措施

檢查質控品（重測同一質控品→新開一瓶質控品→新開一批質控品，重測失控項目）→更換試劑，重測失控項目→進行儀器維護，重測失控項目→重新校準儀器，重測失控項目→

4.4.4.4.3 失控處理程序

a．保留原始數據，如實記錄質控結果，在檢驗系統應該有如實反應；

b.分析失控原因，采取糾正措施；

c.如實記錄糾正后的在控結果，并在檢驗系統中體現出來；

d.填寫失控報告，上交專業組長，由專業組長決定是否可以發出檢驗報告，必要時由實驗室主任和科質量負責人處理。

e.若患者報告不能發出，應該及時確定失控的標本數，對這些標本進行重新測定，發出合格的報告。

4.4.4.5 室內質控數據的管理

4.4.4.5.1 月質控數據的統計匯總

由實驗室主任安排質量監督員負責匯總當月原始質控數據并進行統計分析。

4.4.4.5.2 月質控數據的歸檔保存

當月所有室內質控數據的原始記錄和質控圖要交實驗室存檔；由實驗室主任負責將統計報表、失控報告上交科質量負責人進行審核，存檔。

4.4.4.5.3 室內質控總結

各專業組組長負責對本組的檢驗項目室內質控情況進行月總結，匯報實驗室主任，由實驗室主任匯總成當月室內質控小結上報科質量負責人。實驗室主任應定期主持召開室質量分析會，提出質量持續改進的措施。

室間質評管理程序目的：

保證患者檢驗結果和其報告的準確性和可靠性，評價實驗室之間結果的可比性。適用范圍：

參加衛生部或省臨檢中心下發的PCR室間質控檢測。程序：

3.1 質控標本的接收和驗收：收到質控血清后接收人員登記、簽字，根據質控標本的有關說明對標本的數量、批號、包裝進行驗收并將質控標本按要求置-20℃保存于標本制備區。

3.2 質控標本的檢測按常規臨床標本對待。

3.3 室間質評樣本必須按實驗室常規工作一樣進行，由負責常規工作的人員測試，工作人員必須使用實驗室的常規檢測方法和試劑，不得特殊對待。

3.4 EQA樣本的檢測在部或省臨檢中心規定的時間內進行，檢測結果的上報也必須在截止日期前上報。

3.5 室間質評的檢測結果和反饋結果應作討論分析，如有失控應查找原因，采取相應的措施，并作好記錄。

3.6 不得于其它實驗室交流室間質評的檢測結果。

試劑與耗材購買驗收及管理程序 目的：

保證PCR檢測所使用的試劑及耗材供貨渠道和質量的穩定、可靠而建立本程序。適用范圍：

適應于實驗室所購的診斷試劑盒、實驗耗材。程序：

3.1 試劑的購買和管理

3.1.1試劑的購買原則：檢測試劑應與擴增儀相配套，并三證（生產許可證、產品注冊證、經營許可證）齊全的商品試劑。

3.1.2 試劑的驗收：供貨商送來的試劑由實驗室負責人驗收并簽字，項目操作人員負責試劑質量驗收（內外包裝），試劑驗收登記。

3.1.3 試劑的貯存：試劑登記后，及時放入試劑貯存區的冰箱，保存條件按說明書規定進行。

3.1.4 試劑的質檢按SOP進行。

3.2 耗材的購買、驗收和管理

3.2.1 購買：實驗負責人向科主任提交計劃，由科主任簽字同意并購買。

3.2.2 驗收：核對數量、規格，檢查外包裝是否破損。

3.2.3 貯存：消耗品購進后，按要求存入各區指定位置。

3.2.4 根據日常工作量定期檢查庫存、定期購置，并做好記錄。

實驗記錄管理制度 目的：

保證資料的記錄，完整、保存狀態在控。適用范圍：

適用于病人原始資料，實驗結果，實驗室各種數據資料的記錄和保存。包括標本接收記錄、檢驗申請單，檢測結果記錄、室內質控結果記錄，室間質評結果，儀器使用維護記錄、環境溫度、濕度記錄等。程序：

3.1 每日工作應按照實驗室規章制度和相關SOP認真執行，同時及時完整填寫各項實驗室工作記錄。

3.2 每個工作區配置專門的文件框、文件夾，放置本區域有關的各項實驗室記錄。

3.3 年終，所有的實驗室記錄本，裝進文件盒里，并標明年份，放進文件柜里，以便查閱。

3.4 所有的實驗室記錄,結果存根由科室建檔封存，專人保管至少5年。

3.5 注意保密，涉及醫療糾紛及特殊情況除外，本室無義務提供各種記錄給他人借閱或復印。

投訴處理程序 目的：

正確處理好“抱怨”，鞏固和完善實驗室質量體系.適用范圍：

來自于患者，臨床醫護人員或實驗室工作人員針對檢測結果質量、服務質量或實驗室管理等問題的投訴。程序：

3.1 所有實驗室工作人員要認真對待病人或者醫生及其它部門人員就實驗室工作所提出的投訴，對提出投訴的人員要做到語言文明，熱情接待。

3.2 由實驗室負責人負責對投訴申訴進行處理，實驗室負責人不在時由其委托人處理，實驗室所有工作人員均有責任接待申訴者。

3.3 對投訴應進行相應記錄，包括日期、申訴人、申訴內容、處理措施、處理者、聯系方式等。

3.4 對于當時能解決的申訴應及時處理，當時不能解決的，要限時處理，并明確告知申訴者。

3.5 如投訴涉及到實驗室操作程序是否符合《臨床基因擴增實驗室管理辦法》、《臨床臨床分子生物實驗室工作規范》等，實驗室負責人應召集實驗室工作人員討論，如實驗室的操作程序確實不符合有關規定，應重新修訂操作規程，并報科主任批準后執行。

當實驗室負責人無法滿意解決投訴時，移交醫務科并遵循醫務科處理程序和方法。

投訴處理記錄存檔，保存五年。

應急處理程序 目的為避免因儀器設備發生故障和試劑盒發生質量問題而影響到臨床檢測報告的及時性和準確性，特制定本程序。適用范圍

可能影響到檢測報告發出的儀器設備和試劑等。程序

3.1 本室負責人接到儀器設備故障的報警后，立即現場確認異常情況的性質和故障程度并及時排除。

3.2 儀器設備故障本室不能解決的，應及時通知有關設備修理人員或供應商，具體程序見儀器設備管理程序。對于發生故障的儀器設備，及時維修的同時，采取以下處理方法。

3.2.1 有滿足使用要求的替用設備的，啟用替用設備。

3.2.2 需借用其他部門儀器設備時，核實該設備的使用狀態良好后可借用。

3.2.3 替用、借用或備用設備的使用在滿足質量要求的同時，必須同時滿足實驗室管理措施（特別是防污染）的要求。

3.3 試劑盒質量發生問題，經核實后，及時通知供貨商更換另一批次試劑，使用前需先作質量檢測，合格后方可使用。

3.4 儀器設備故障或試劑質量問題不能得到解決如停電或試劑污染等，預期將會影響到檢測報告的及時發出，可將標本送至其它實驗室檢查（該實驗室同樣應為獲同類認準的PCR檢測實驗室）；如已影響到報告的及時發出，應向病人或相關病人或相關病區公告，取得病人和醫生的諒解。

3.5 影響到檢測報告發出的情況，應在應急處理登記表作記錄。

實驗室保密制度 目的保護病人的隱私權，確保實驗室工作的有序開展。適用范圍

本實驗室所有工作人員。職責

3.1 實驗室所有原始資料應各自歸檔保存于專柜中，保存時間至少5年；所有病人資料和實驗檢測記錄非經許可，一般人員不可查詢或借閱，特殊情況時必須在科主任或本室負責人同意的情況下方可查詢。

3.2 當臨床科室要求電話報告結果時，核對其所查詢的病人姓名、病區床號等情況后，由室負責人或其授權者報告結果并登記醫生或護士姓名，并明確告知對方，實驗的最終結果以檢測報告單為準。

3.3 患者因故不能由本人親自拿取檢測報告而需親友代取時，代取報告者須出示檢測項目的繳費發票，經核對患者姓名、性別、年齡及檢測項目后方可發出報告。

實驗室生物安全管理制度1、學習和遵守國家關于醫療服務安全、消防治安安全、生物安全防護、公共衛生突發事件處理、危險物品管理等方面的相關法律法規，提高安全知識，加強防范意識。2、科室主任是科室的安全管理負責人，每位職工對本崗位及值班期間的管理負責。3、科室安全管理小組由科主任、各專業組組長組成。4、要把安全管理工作納入科室日常管理工作當中。每季度至少一次全科的相關學習與宣傳。管理小組每季度至少有一次專題研究科室安全工作，每月一次安全工作自查，并納入每個人的績效考核。5、菌種、毒種、劇毒試劑、易燃、易爆物專柜存放，指定專人嚴加保管、定期檢查。領用時須主管人員和領用人員都在場，作好領用登記。6、在崗位職責、操作規程、值班及交接班等制度中，要明確規定醫療安全，生物安全防護、貴重儀器使用，劇毒藥品、易然易爆物品管理，電氣安全，防火、防盜、防不安全事故等有關內容，并經常檢查監督，改進落實。7、建立和不斷完善突發事件應急處理預案。對實驗室所發生的涉及安全的事件和處理情況應及時按規定上報，并作好記錄。8、若在實驗室檢查中發現疑似重大傳染病陽性標本，應立即通知科主任及相關專業組長，作進一步確認，通知醫務科、院感科或院總值班。9、若在實驗室發生微生物或毒物外溢事故，或其它意外事故，立即按相關應急規程作處理，并報告科主任及相關主管部門。

個人三級防護用品穿脫流程

穿

1、更衣：換穿專用工作服/鞋。

2、清潔手部衛生：七步洗手法。

3、戴一次性帽子：佩戴后整理帽子至頭發、耳朵全部被包裹。

4、戴醫用防護口罩（N95）：一手托住口罩外側面，將口罩緊貼面部，另一手拉下方系帶至于頸后雙耳下，拉上方系帶至于頭頂部，注意避免系帶壓迫耳朵。塑形。行氣密性測試。使用中口罩如遇污染或潮濕，應及時更換。

5、穿防護服：取防護服，注意避免接觸地面，檢查效期及完好情況。拉開拉鏈，先穿下半身，再穿上半身，后戴帽子，系好拉鏈、扣子、密封條，雙人互檢。若防護服未能完全貼合面部，可用膠帶輔助固定。使用中防護服如破損，應及時更換。

6、戴護目鏡：一手托住護目鏡，另一手拉系帶至于頭頂部，調整位置，確保皮膚黏膜完全被防護用品遮蓋。

7、戴內層手套：內層手套最好為深色。檢查有無破損，穿戴后確保防護服袖口完全被包裹。手套如破損，應及時更換。

8、穿靴套、穿隔離衣：檢查，穿著后確保背部完全被包裹。使用中隔離衣如遇血液體液污染或破損，應及時更換。

9、戴外層手套：檢查有無破損，穿戴后確保隔離衣袖口完全被包裹。戴手套不能代替手衛生；對多名患者進行診療操作時，不同患者間應更換手套；手套如破損，應及時更換。

10、相互檢查。

脫

1、手消毒。

2、噴淋：兩人間距大于1m，由頭頂至鞋底z字形噴灑消毒液，注意噴灑鞋底以及避開面部。

3、脫隔離衣連同外層手套：脫時注意雙手避免觸碰隔離衣內側，脫下的隔離衣避免觸碰身體前側，動作輕緩，全程避免抖動。將外層手套一同脫下。

4、手消毒。

5、摘護目鏡：上身稍前傾，閉合雙眼，雙手提起后方系帶摘下，摘下后將護目鏡至于指定消毒容器內。全程避免觸碰護目鏡前側面。

6、手消毒。

7、脫防護服連同內層手套、靴套、鞋套：一手拎住同側衣領，另一手拉開拉鏈、摘掉帽子后拎另一側衣領，順勢向外后方邊脫邊卷起防護服，動作輕緩，全程避免抖動。將內層手套、鞋套、靴套一同脫下。

8、手消毒。

9、摘醫用N95防護口罩：上身稍前傾，屏息閉眼，雙手先取下方系帶，隨后再摘取上方系帶。全程避免觸碰口罩外側面。

10、手消毒。

11、摘一次性帽子：上身稍前傾，屏息閉眼，提起帽頂由后向前摘下。

12、洗手，沐浴。

壓力蒸汽滅菌器滅菌操作流程

一、滅菌前準備：

a)接通電源，打開電源開關，待數控面板處于待機狀態，打開上蓋檢查密封墊與滅菌室開口處是否有污漬或灰塵并清潔；

b)加水：在滅菌器內桶內加入蒸餾水，所加水位必須至滅菌桶底板中心凹孔，連續使用時，必須在每次滅菌后補足水量，以免干燒而發生重大事故；

c)在排氣箱中加入蒸餾水，所加水位處于低水位標志處，將排氣軟管接入排氣箱并檢查排氣軟管密封墊與排氣箱插孔結合密封，以免滅菌過程中蒸汽泄露造成事故；

d)物品擺放：將待高壓滅菌的物品予以妥善包扎，每包均放入滅菌效果化學指示卡和貼好滅菌指示膠帶，有順序的放入滅菌網籃內，相互之間留有間隙，這樣有利于蒸汽的穿透，提高滅菌效果，注意不要堵塞溫度傳感器和插孔，否則導致控制不能或滅菌效果不良。

二、滅菌：

a)根據待滅菌物品選擇程序：①液體滅菌工序、②滅菌工序、③器具滅菌工序

b)工序設定：按下“設定/確認”，設定項目開始閃爍，按“▲”、“可以調節當前項目，再次按“設定/確認”使下一設定項目開始閃爍，所有項目設定完畢最后按“設定/確認”會發出“嗶”的蜂鳴，設定的項目即保存在當前程序中；

c)工序滅菌設定：液體滅菌工序：121℃/15min，滅菌工序：121℃/30min，器具滅菌工序：121℃/30min；

d)滅菌：按下“開始”，儀器開始工作，蓋子鎖指示燈亮，此時不能打開上蓋也不能更改工序程序；

e)開封：當滅菌完成后，時間顯示欄為“---”，按下“停止”，確認壓力表顯示為0，溫度顯示在60℃以下，可打開上蓋取出被滅菌物。

三、滅菌后清潔：

一天滅菌完成后，接上膠管打開放水閥將加熱用水排干并清潔滅菌室，蓋上上蓋關閉電源，長期停止使用時關閉電源主開關并斷開電源。

紫外消毒操作及維護程序 目的對傳入潔凈區及無菌生產區的物品進行紫外滅菌，規范紫外燈的使用、加強紫外燈的操作確認，保其滅菌功能 適用范圍

適用于本科室所有紫外燈使用操作包括區域消毒紫外燈 職責

3.1 操作人員按本規程使用和衛生清潔。

3.2 維修人員按本規程維修和保養

4主要技術參數

4.1正常工作條件;

a.環境溫度: 5-40C

b.相對濕度: 80%

c.電源: 220V+ 22V 50Hz+1Hz

4.2定時范圍: 0-120分鐘，其最大定時誤差<15min(帶遙控的有306090120150五檔選擇)

4.3消毒車采用的消毒燈管符合GB19258的規定。

4.4熔斷器規格: FUSES 2Ax205維護保養操作流程

5.1打開保護門，取出燈臂，并緩慢抬至所需高度即可自行鎖定;

5.2插上電源，開啟開關，順時針方向旋轉定時器(帶遙控器的，通過面板上按鍵或者遙控器定時啟動)，設定消毒時間，每次照射90分鐘以上

5.3人員離開現場，殺菌燈工作;

5.4消毒完畢，定時器自動關閉燈管電源;

5.5使用完畢后，關閉啟動開關，拔下電源插頭，用手托起燈臂，向上抬至最大角度即可解鎖，緩慢放下燈臂入門內，關上保護門。

6注意事項

6.1 定時器必須按順時針方向使用，嚴禁反方向使用;

6.2使用前應進行通電試驗，電源必須裝有接地線，以防觸電;

6.3消毒車在使用一段時間后，燈管表面如有灰塵，應用酒精棉球或紗布擦凈燈管，以免影響效果;

6.4消毒燈工作時，人員必須離開現場，嚴禁在有人狀態下使用，以防燒傷眼睛和皮膚;

6.5本產品與電網電源切斷裝置為電源插頭，在維修或待用時應拔去電源插頭;

6.6經包裝后的消毒車應存放在干燥、通風良好、無腐蝕性物質的室內;

6.7熔斷器更換時，必須拔掉電源插頭,以防觸電:

6.8熔斷器更換時，必須由專業維修人員進行操作。