第一篇：獸醫微生物學實驗講稿(精)

獸醫微生物學實驗講稿

動物科技學院預防獸醫學教研室 胡桂學

實驗一

顯微鏡的使用、細菌形態和結構觀察與革藍氏染色法

一、目的

1．學會顯微鏡特別是油浸鏡的使用方法 2．認識細菌形態、排列與特殊結構

3．學會細菌涂片制備方法，掌握革藍氏染色方法

二、實驗內容

（一）顯微鏡的構造和使用

1．構造：機械部分，光學部分。2．使用方法與注意事項。

（二）細菌形態與結構的觀察：球菌、桿菌，莢膜、芽孢等。

（三）細菌涂片的制備與染色方法

1．涂片的制備：液體材料，固體材料，組織臟器 2．干燥：自然干燥，火焰干燥 3．固定：化學固定，火焰固定 4．染色方法：單染法，復染法

革藍氏染色原理。革藍氏（Gram`s）染色法：涂片干燥固定，草酸銨結晶紫染色2分鐘，水洗，革藍氏碘液媒染2分鐘，95%酒精脫色30秒鐘，稀釋石炭酸復紅復染2分鐘。

三、實驗報告內容

1．顯微鏡油鏡的使用方法及注意事項。

2．繪制2種細菌鏡下圖及自制的革藍氏染色鏡下圖，注意細菌形態結構，兩端形態及顏色。

第二篇：微生物學實驗

細菌群體生長表現為細胞數目的增加或細胞物質的增加。測定細胞數目的方法有顯微鏡直接計數法(direct microscopic count)、平板菌落計數法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。測定細胞物質的方法有細胞干重的測定，細胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測定，代謝產物的測定等。總之，測定微生物生長量的方法很多，各有優缺點，工作中應根據具體情況要求加以選擇。本實驗主要介紹生產、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計數法、平板菌落計數法和光電比濁計數法。

一 顯微鏡直接計數法

（一）目的要求

1．明確血細胞計數板計數的原理。

2．掌握使用血細胞計數板進行微生物計數的方法。

（二）基本原理

顯微鏡直接計數法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。目前國內外常用的計菌器有：血細胞計數板、Peteroff-Hauser計菌器以及Hawksley計菌器等，它們都可用于酵母、細菌、霉菌孢子等懸液的計數，基本原理相同。后兩種計菌器由于蓋上蓋玻片后，總容積為0.02mm3，而且蓋玻片和載波片之間的距離只有0.02mm，因此可用油浸物鏡對細菌等較小的細胞進行觀察和計數。除了用這些計菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細菌學檢查。顯微鏡直接計數法的優點是直觀、快速、操作簡單。但此法的缺點是所測得的結果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點，如結合活菌染色微室培養（短時間）以及加細胞分裂抑制劑等方法來達到只計數活菌體的目的。本實驗以血球計數板為例進行顯微鏡直接計數。另外兩種計菌器的使用方法可參看各廠商的說明書。

用血細胞計數板在顯微鏡下直接計數是一種常用的微生物計數方法。該計數板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個方格網，每個方格網共分為九個大方格，中間的大方格即為計數室。血細胞計數板構造如圖l5-1。計數室的刻度一般有兩種規格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規格的計數板，每一個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計數室的容積為0.lmm3(萬分之一毫升)。

圖15—1 血細胞計數板構造

（一）圖15—2 血細胞計數板構造

（二）A.正面圖；B.縱切面圖； 放大后的方格網，中間大方格為計數室

1.血細胞計數板；2.蓋玻片；3.計數室

計數時，通常數五個中方格的總菌數，然后求得每個中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個大方格中的總菌數，然后再換算成lml菌液中的總菌數。

設五個中方格中的總菌數為A，菌液稀釋倍數為B，如果是25個中方格的計數板，則

1mL菌液中的總菌數=A/5×25×104×B=50000A·B（個）

同理，如果是16個中方格的計數板，1mL菌液中的總菌數=A/5×16×104×B=32000A·B（個）

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母

2．儀器或其他用具 血細胞計數板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細滴管。

（四）操作步驟

l．菌懸液制備

以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當的菌懸液。

2．鏡檢計數室

在加樣前，先對計數板的計數室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數。

3．加樣品

將清潔干燥的血細胞計數板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數室，一般計數室均能充滿菌液。

取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數室不可有氣泡產生。

4．顯微鏡計數

加樣后靜止5min，然后將血細胞計數板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數。

調節顯微鏡光線的強弱適當，對于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計數室方格線，或只見豎線或只見橫線。

在計數前若發現菌液太濃或太稀，需重新調節稀釋度后再計數。一般樣品稀釋度要求每小格內約有5~10個菌體為宜。每個計數室選5個中格(可選4個角和中央的一個中格)中的菌體進行計數。位于格線上的菌體一般只數上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數。計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算樣品的含菌量。

5．清洗血細胞計數板

使用完畢后，將血細胞計數板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢，觀察每小格內是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復洗滌至干凈為止。

（五）實驗報告

l．結果

將結果記錄于下表中。A表示五個中方格中的總菌數；B表示菌液稀釋倍數。

各中格中菌數AB二室平均值菌數/ml

12345

第一室

第二室

2．思考題

(1)根據你的體會，說明用血細胞計數板計數的誤差主要來自哪些方面?應如何盡量減少誤差．力求準確?

(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設計1～2種可行的檢測方法。

二平板菌落計數法

（一）目的要求

學習習近平板菌落計數的基本原理和方法。

（二）、基本原理

平板菌落計數法是將待測樣品經適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經過培養，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個細胞。因此平板菌落計數的結果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計數的結果，現在已傾向使用菌落形成單位(colony-forming units，cfu)而不以絕對菌落數來表示樣品的活菌含量。

平板菌落計數法雖然操作較繁，結果需要培養一段時間才能取得，而且測定結果易受多種因素的影響，但是，由于該計數方法的最大優點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數或污染程度的檢測。

（三）器材

1．菌種 大腸桿菌菌懸液。

2．培養基 牛肉膏蛋白陳培養基。

3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，盛有4.5ml無菌水的試管，試管架，恒溫培養箱等。

（四）操作步驟

l．編號

取無菌平皿9套，分別用記號筆標明10-

4、10-

5、10-6。(稀釋度)各3套。另取6支盛有4.5mL無菌水的試管，依次標是10-

1、10-

2、10-

3、10-

4、10-

5、10-6。

2．稀釋

用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測樣品)，精確地放0.5ml至10-1的試管中，此即為10倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。

OptionsEmail Replies將10-1試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進一步將菌體分散、混勻。吹吸菌液時不要太猛太快，吸時吸管伸人管底，吹時離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內液體外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋。……其余依次類推，整個過程如圖15-3所示。

放菌液時吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結果誤差較大。

3，取樣

用三支1mL無菌吸管分別吸取10-

4、10-5和10-6。的稀釋菌懸液各lmL，對號放入編好號的無菌平皿中，每個平皿放0.2mL。

不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀釋菌液放入平皿臼，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。

圖15—3平板菌落計數操作步驟

4．倒平板．

盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養基與菌液混合均勻，而又不使培養基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。由于細菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養皿后，應盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養基，立即搖勻，否則細菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計數。

待培養基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養箱中培養。

5．計數

培養48h后，取出培養平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數，并按下列公式進行計算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復的平均菌落數×稀釋倍數×5

一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個重復對照的菌落數不應相差很大，否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復對照平板不能少于三個，這樣便于數據統計，減少誤差。由10-

4、10-

5、10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數也不應相差太大。

平板菌落計數法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個連續稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養后所出現的平均菌落數在50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調整。

平板菌落計數法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養基融化后倒平板，待凝固后編號，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺上適當吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實驗臺上20～30min，使菌液滲入培養基表層內，然后倒置37℃的恒溫箱中培養24～48h。

涂布平板用的菌懸液量一般以0.1ml較為適宜，如果過少菌液不易涂布開，過多則在涂布完后或在培養時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。

五、實驗報告

1．結果

2．將培養后菌落計數結果填入下表

稀釋度10-410-510-6

Cfu數/平板123平均123平均123平均

每毫升中的cfu

2．思考題

(1)為什么融化后的培養基要冷卻至45℃左右才能倒平板?

(2)要使平板菌落計數準確，需要掌握哪幾個關鍵?為什么?

(3)試比較平板菌落計數法和顯微鏡下直接計數法的優缺點及應用。

(4)當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里?

(5)用倒平板法和涂布法計數，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養較長時間(48h)后觀察結果?

三 光電比濁計數法

一、目的要求

1．了解光電比濁計數法的原理。

2．學習、掌握光電比濁計數法的操作方法。

二、基本原理

當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定的范圍內，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖15-4)。因此，可用一系列已知菌數的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數標準曲線。然后，以樣品液所測得的光密度，從標準曲線中查出對應的菌數。制作標準曲線時，菌體計數可采用血細胞計數板計數，平板菌落計數或細胞干重測定等方法。本實驗采用血細胞計數板計數。

光電比濁計數法的優點是簡便、迅速，可以連續測定，適合于自動控制。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細胞大小、形態、培養液成分以及所采用的光波長等因素的影響。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數應采用相同的菌株和培養條件制作標準曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經過最大吸收波長以及穩定性試驗來確定。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質的懸液不適合用此法進行測定。

圖15—4 比濁法測定細胞濃度的原理

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母培養液

2．儀器或其他用具 721型分光光度計，血細胞計數板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。

（四）操作步驟

1．標準曲線制作

（1）編號 取無菌試管7支，分別用記號筆將試管編號為1、2、3、4、5、6、7。

（2）調整菌液濃度 用血細胞計數板計數培養24小時的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調整為每毫升1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106、12×106含菌數的細胞懸液。再分別裝入已編好號的1至7號無菌試管中。

（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表

管號12345678

細胞數106/ml

光密度（OD）

每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定

(4)以光密度(OD)值為縱坐標，以每毫升細胞數為橫坐標，繪制標準曲線。

2．樣品測定

將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。

各種操作條件必須與制作標準曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數就不準確。

3．根據所測得的光密度值，從標準曲線查得每毫升的含菌數。

（五）實驗報告

l．結果

每毫升樣品原液菌數=從標準曲線查得每毫升的菌數×稀釋倍數

2．思考題

(1)光電比濁計數的原理是什么?這種計數法有何優缺點?

(2)光電比濁計數在生產實踐中有何應用價值?

(3)本實驗為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實驗中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?

四 大腸桿菌生長曲線的測定

(一)目的要求

1．通過細菌數量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規律，繪制生長線。

2．復習光電比濁法測量細菌數量的方法。

(二)基本原理

大多數細菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細胞每20min分裂一次。將一定量的細菌轉入新鮮液體培養基中，在適宜的條件下培養細胞要經歷延遲期，對數期、穩定期和衰亡期四個階段。以培養時間為橫坐標，以細菌數目的對數或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養條件下所繪制的生長曲線也不相同。測定細菌的生長曲線，了解其生長繁殖規律，這對人們根據不同的需要，有效地利用和控制細菌的生長具有重要意義。

用于測定細菌細胞數量的方法已在上述實驗作了介紹。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養時間細菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖15-5)測定“klett units”值的光度計。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養時間(橫坐標)取樣測定，以測得的klett units為縱坐標，便可很方便地繪制出細菌的生長曲線。如果需要，可根據公式1 klett units=OD/0.002換算出所測菌懸液的OD值。

圖15—5 帶側臂試管的三角燒瓶

(三)器材

1．菌種 大腸桿菌

2．培養基 LB液體培養基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。

3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。

圖15—6 直接用試管測OD值

(四)操作步驟

1．標記

取11支無菌大試管，用記號筆分別標明培養時間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。

2．接種

分別用5ml無菌吸管吸取2.5ml大腸桿菌過夜培養液(培養10~12h)轉入盛有50ml LB液的三角瓶內，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標記的11支無菌大試管中。

3．培養

將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(振蕩頻率250r/min)，分別培養0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標有相應時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。

4．比濁測定

用未接種的LB液體培養基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。從早取出的培養液開始依次測定，對細胞密度大的培養液用LB液體培養基適當稀釋后測定，使其光密度值在0.1~0.65之內(測定OD值前，將待測定的培養液振蕩，使細胞均勻分布)。

本操作步驟也可用簡便的方法代替：

1．用1ml無菌吸管取0.25ml大腸桿菌過夜培養液轉入盛有3~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調零點，測定樣品中培養0h的OD值。測定完畢后，取出試管置37℃繼續振蕩培養。

2．分別在培養0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養物試管按上述方法測定OD值。該方法準確度高、操作簡便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準確度愈高。

(五)實驗報告

1．結果

(1)將測定的OD600值填入下表：

培養時間對照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值OD600

(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。

2．思考題

(1)如果用活菌計數法制作生長曲線，你認為會有什么不同？兩者各有什么優缺點？

(2)細菌生長繁殖所經歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細胞密度為103/ml，培養4.5h后，其密度高達2×108/ml，計計算出其代時。

(3)次生代謝產物的大量積累在哪個時期？根據細菌生長繁殖的規律，采用哪些措施可使次生代謝產物積累更多？

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第三篇：獸醫微生物學習題及答案

3．試述各種熱力滅菌法的方法原理及其主要用途。

4．根據對微生物的滅活作用可分為哪些類型？列舉常用的輻射方法及其殺菌原理和應用。5．試述濾過除菌的概念及其應用。

1．試述葡萄球菌屬的基本特征。

2．試述金黃色葡萄球菌的菌落特征及在普通肉湯中的生長特征。 3．金黃色葡萄球菌常致動物哪些疾病?

4．試述金黃色葡萄球菌可產生的毒素和酶及其致病作用。 5．試述鑒定致病性金黃色葡萄球菌的主要試驗。 6．闡述鏈球菌區分血清群的依據及各型的主要致病特性。 7．鏈球菌各型的溶血表現及在血清肉湯中的生長特征如何？

8．試比較豬鏈球菌與馬鏈球菌獸疫亞種的致病性及微生物學診斷中的鑒別要點。

1．病毒顆粒的基本結構如何？畫出模式圖。2．病毒的核衣殼的對稱型有哪些？各有什么特點？ 3．闡述病毒核酸及蛋白的特點。

4．如何確定病毒是否有囊膜？其依據何在？ 5．比較病毒與細菌分類體系的異同。6．簡述病毒分類的機構和標準。

總論

各論

3．輪狀病毒是如何發現的？給人以何種啟示？ 4．闡述傳染性囊病病毒的致病機理及主要致病特點。

各論

各論 第九章

1．朊病毒有哪些主要的生物學特性？ 2．比較并分析PrPc及PrPsc的主要異同。3．朊病毒如何復制？基因起何作用？

4．試述牛海綿狀腦病的成因、特點及與人類健康的關系。5．提出癢病的控制措施并分析其依據及可行性。6．朊病毒的發現對你有何啟示？

答案參見我的新浪博客：http://blog.sina.com.cn/s/blog_3fb788630100muda.html

第四篇：微生物學實驗考試題

《微生物學實驗》試題

1、在進行高壓蒸汽滅菌時，是否只要滅菌鍋壓力表到達所需的值時鍋內就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？

2、在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？

3、高壓蒸汽滅菌鍋的操作有哪幾個步驟？每一步驟應注意哪些問題？

4、在微生物學實驗中，常用于配制固體培養基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？

5、環境樣品梯度稀釋、涂布平板法分離微生物時，如何選擇不同稀釋梯度樣品的涂布順序？為什么？

6、在革蘭氏染色實驗中，為什么會出現假陽性和假陰性？如何避免？

7、在革蘭氏染色實驗中，不經復染這一步，能否區別革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌？為什么？

8、為何用計數板可以計得樣品中的總菌值？如何計算樣品中的菌體濃度？

9、血球計數板計數時，計數室內如有氣泡會對結果產生怎樣的影響？如何避免產生氣泡？

10、試分析血球計數板計數法的誤差來源，并提出減少誤差的方法和措施。

要求把題目和答案寫在實驗報告紙上，統一收齊后和第一次實驗報告一起送到我辦公室-生科樓104。

第五篇：微生物學實驗考核辦法

本科微生物學實驗考核辦法

考核方式：按學號順序逐一進場應考。考核內容共8項，每位同學通過抽簽考其中的一項內容。考核時間：每人限6分鐘內完成。

考核地點：微免實驗課上課的實驗室

考核內容及要求如下：

1、顯微鏡（油鏡）的使用和保護方法

（1）、提供一張細菌玻片標本，要求能正確使用油鏡觀察到細菌的基本形態。

（2）、掌握顯微鏡（油鏡）保護方法

2、血清對倍稀釋法

（1）、用生理鹽水將血清進行對倍稀釋，終濃度達到1/ 2、1/ 4、1 /8三個稀釋度。

（2）、掌握血清對倍稀釋的原理及方法，能正確使用刻度吸管。

3、玻片凝集試驗

（1）、要求用傷寒診斷血清，采用玻片凝集試驗的方法檢測待檢細菌是否為傷寒桿菌。

（2）、要求操作方法、步驟正確，能準確判斷結果。

（3）、無菌操作正確。

4、革蘭氏染色法

（1）、口試回答細菌涂片的制作方法

（2）、將一張已涂好的細菌玻片進行革蘭氏染色

（3）、要求染色步驟及各項染色時間正確，操作熟練。

5、細菌的劃線分離培養技術

（1）、將細菌分區劃線到普通瓊脂平碟上。

（2）、要求劃線分區正確，接種劃線手法正確、熟練。

（3）、無菌操作正確。

6、液體和半固體培養基的細菌接種方法（無菌操作）

（1）、將菌種接種到液體培養基和半固體培養基內。

（2）、要求各環節無菌操作正確。

7、細菌在培養基中生長情況及細菌特殊結構觀察

（1）、正確描述固體培養基的菌落、菌苔。

（2）、正確描述液體培養基中的細菌生長情況。

（3）、正確觀察出鏡下細菌的特殊結構。

8、抗酸染色法

（1）、正確回答抗酸染色的各個步驟（包括用加熱法或不加熱法 初染的時間）。

（2）、操作技術手法正確熟練

（3）、脫色程度控制較好。

注：經一次考核不及格者，可在全班同學考核結束后，允許補考一次。補考成績通過后只計及格。