第一篇:斐林試劑鑒定還原糖步驟
斐林試劑鑒定還原糖步驟
1:向試管內注入 2mL 待測組織樣液。
2:配制 0.1 g/mL 的氫氧化鈉溶液(甲液),0.05 g/mL 的硫酸銅溶液(乙液)
2:向試管內注入 1mL 斐林試劑。(甲乙液混合均勻,甲液量較多,乙液只需少量。然后再注入)。【人教版高一生物必修一第十八頁說的是“甲乙液等量混合均勻后再注入】
3:將試管放入盛有 50~65℃溫水的大燒杯中加熱約 2min。
4:觀察試管中出現的顏色變化。(出現磚紅色沉淀)
核糖、葡萄糖、果糖均為磚紅色沉淀;蔗糖、淀粉無變化。
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第二篇:還原糖的鑒定中的易錯點
高中生物實驗中的還原糖鑒定實驗之易錯點
河南師大附中吳彥軍
斐林試劑和班氏試劑都是高中生物必修一中檢驗還原性糖的試劑,但其二者在成分和使用原理以及保存方法方面都有一定的區別。下面就從這兩種試劑的使用原理、所含成分及使用方法等方面做一簡單比較:
1、成分不同:
班氏試劑的配制方法:把CuSO4溶液倒入檸檬酸鈉溶液-Na2CO3溶液中,邊加邊攪,濾去沉淀即可。
斐林試劑的配制方法:斐林試劑甲液為0.1 g/mLNaOH的溶液。乙液為0.05 g/mL CuSO4的溶液。使用時,將4~5滴乙液滴入2 mL甲液中,混合后立即使用。
2、使用原理不同:檸檬酸鈉和碳酸鈉都是強堿弱酸鹽,在水中水解時均可產生OH-。檸檬酸鈉-Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合時,Cu2+和OH-結合,所生成的Cu(OH)2與葡萄糖中的醛基(-CHO)發生反應生成磚紅色沉淀。而斐林試劑則是將CuSO4溶液與NaOH溶液發生反應生成Cu(OH)2。因此,無論是班氏試劑還是斐林試劑,歸根結底都是Cu(OH)2與還原糖分子中的醛基(-CHO)在沸水浴加熱條件下相互作用生成磚紅色的Cu2O沉淀,兩者反應現象是一樣的,這是兩種試劑在鑒定還原糖的結果上的相同之處。
3、保存方式不同:在班氏試劑的配方中,檸檬酸鈉為-Na2CO3是一對緩沖物質,產生的OH-數量不大,與CuSO4溶液混合后產生的Cu(OH)2濃度相對較低,不易析出,因此該試劑可長期保存。正因為如此,醫療上一般使用班氏試劑鑒定尿糖;而斐林試劑甲和斐林試劑乙混合后可以產生較多地Cu(OH)2,很容易沉淀析出,因此斐林試劑一般為現用現配。
4、反應條件與現象:斐林試劑是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加熱條件下與醛基反應,被還原成磚紅色的Cu2 O沉淀,可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍色→棕色→磚紅色(沉淀)。班氏試劑亦如此。
該實驗中還應掌握常見還原糖種類:單糖(葡萄糖、果糖、核糖、半乳糖)和部分二糖(乳糖和麥芽糖)
本實驗最理想的實驗材料是含糖量較高的生物組織(或器官),而且組織的顏色較淺,或近于白色的,如蘋果和梨的果實。
鑒定還原糖一般不宜選擇葉片作為實驗材料:
在雙子葉植物中,光合作用的主要產物葡萄糖形成后合成為淀粉,暫時儲藏在葉子內,因此最好不用雙子葉植物的葉子作實驗材料。
有些單子葉植物,如韭菜、鳶尾,葉內盡管含有大量的可溶性單糖,但是,由于葉片中葉綠素的顏色較深,對于鑒定時的顏色反應起著掩蓋作用,導致實驗現象不明顯,因此,也不宜用單子葉植物的葉子作實驗材料。
第三篇:1糖的呈色反應和還原糖的檢驗(講稿)
糖的呈色反應和還原糖的檢驗(講稿)
本次實驗目的是了解鑒定糖和還原糖的原理以及方法,并通過實驗操作予以驗證。2人一組,前1-18組1個實驗室。
二、實驗原理。
糖的鑒定:糖經濃無機酸處理,脫水產生糠醛或糠醛衍生物。戊糖形成糠醛,己糖則形成羥甲基糠醛。這些糠醛和糖醛衍生物在濃無機酸作用下,能與酚類化合物縮合生成有色物質。與一元酚如α-萘酚作用,形成三芳香環甲基有色物質。與多元酚如間苯二酚作用,則形成氧雜蒽有色物質。
通常使用的無機酸為硫酸。如用鹽酸,則必須加熱。常用的酚類為α-萘酚、甲基苯二酚、間苯二酚和間苯三酚等,有時也用芳香胺、膽酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶類化合物等。
還原糖和非還原糖的鑒別:含有自由醛基(-CHO)或酮基(>C=O)的單糖和二糖為還原糖。在堿性溶液中,還原糖能將金屬離子(銅、鉍、汞、銀等)還原,糖本身被氧化成酸類化合物,此性質常用于檢驗糖的還原性,并且常成為測定還原糖含量的各種方法的依據。
三、實驗內容
本次實驗一共采用了6種糖液作為測試糖液,2%葡萄糖,果糖,麥芽糖,蔗糖,1%淀粉溶液和1種未知糖液,每種糖液均有專門的移液管移取(貼有標簽,有些實驗可能只需加幾滴,可以在移液管頭部套上膠頭滴加),不要弄混,所有試劑都有相應的移液管移取(大概4個組公用1套),用后請放回原位,方便別的同學使用。實驗包括2個部分,共7個實驗。
(一)糖的呈色反應
1.Molish反應(α-萘酚反應)本實驗是鑒定糖類最常用的顏色反應。糖在濃酸作用下形成的糠醛及其衍生物與α-萘酚作用,形成紅紫色復合物。在糖溶液與濃硫酸兩液面間出現紫環,因此又稱紫環反應。自由存在和結合存在的糖均呈陽性反應。此外,各種糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈顏色近似的陽性反應。因此,陰性反應證明沒有糖類物質的存在;而陽性反應,則說明有糖存在的可能性,需要進一步通過其他糖的定性試驗才能確定有糖的存在。
步驟:取6支已標號的試管,分別加入各種測試糖液lmL(約15滴),再各加入Molish試劑2滴,搖勻。逐一將試管傾斜,分別沿管壁慢慢加入濃硫酸l mL,然后,小心豎直試管,使糖液和硫酸清楚地分為兩層,觀察交界處顏色變化。如幾分鐘內無呈色反應,可在熱水浴中溫熱幾分鐘。記錄各管出現的顏色,說明原因,檢定未知糖液。
該實驗希望大家注意:
1、按書上步驟操作,盡量不要讓糖液和濃硫酸混合,以方便觀察出現的紫環。
2、該實驗陽性只能說明有糖的存在。
3、Molisch反應非常靈敏,0.001%葡萄糖和0.0001%蔗糖即能呈現陽性反應。因此,不可使碎紙屑或濾紙毛混入樣品中。過濃的果糖溶液,由于硫酸對它的焦化作用,將呈現紅色及褐色而不呈紫色。需稀釋糖溶液后重做。2.蒽酮反應
糖經濃酸水解,脫水生成的糠醛及其衍生物與蒽酮(10-酮-9,10-二氫蒽)反應生成藍-綠色復合物。
步驟:取6支標號的試管,分別加入lmL蒽酮溶液,再將測試糖液分別滴加到各試管內,混勻,觀察顏色變化,鑒定未知糖液。
注意:加入糖液的量會影響顏色的變化,本次實驗加入量不要太多,幾滴即可,(太多形成的顏色不再是藍綠色)
3.Seliwanoff反應(間苯二酚反應)該反應是鑒定酮糖的特殊反應。在酸作用下,己酮糖脫水生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚結合生成鮮紅色的化合物,反應迅速,僅需20-30s。在同樣條件下,醛糖形成羥甲基糠醛較慢。只有糖濃度較高時或需要較長時間的煮沸,才給出微弱的陽性反應。蔗糖被鹽酸水解生成的果糖也能給出陽性反應。
步驟:取試管6支,編號,各加人Seliwanoff試劑ImL。再依次分別加入測試糖液各4滴,混勻,同時放人沸水浴中,比較各管顏色變化及出現顏色的先后順序,分析說明原因。注意:
1、該反應注意觀察顏色出現(反應)的先后順序,并記錄下來。可將出現顏色的試管及時取出,避免干擾。
2、這是鑒別醛糖和酮糖的反應,注意蔗糖比較特殊,為什么?
4.Bial反應(甲基間苯二酚反應)戊糖與濃鹽酸加熱形成糠醛,在有Fe3+存在下,它與甲基間苯二酚(地衣酚)縮合,形成深藍色的沉淀物。此沉淀物溶于正丁醇。己糖也能發生反應,但產生灰綠色甚至棕色的沉淀物。
步驟:將2滴測試糖液加到裝有1ml Bial試劑的試管中,沸水浴中加熱,觀察顏色變化。如遇到未知糖呈色不明顯,可以3倍體積水稀釋,并加入1ml戊醇,搖動,醇液呈藍色,即為陽性反應。注意:
本次實驗提供的已知糖液全為己糖
(二)還原糖的鑒定
(課堂上講的那些糖屬于還原糖?)1.Fehling反應
費林試劑是含有硫酸銅與酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱,則生成黑色的氧化銅沉淀。若同時有還原糖存在,則產生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。
在堿性條件下,糖不僅發生烯醇化、異構化等作用。也能發生糖分子的分解、氧化、還原或多聚作用等。由這些作用所形成的復雜混合物具有強烈的還原作用,因此企圖用簡單的氧化還原作用來寫出反應平衡式是不可能的。
為了防止銅離子和堿反應生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀,Fehling試劑中加入酒石酸鉀鈉,它與Cu2+形成的酒石酸鉀鈉絡合銅離子是可溶性的絡離子,該反應是可逆的。平衡后溶液內保持一定濃度的氫氧化銅。費林試劑是一種弱的氧化劑,它不與酮和芳香醛發生反應。
步驟:取8支試管,各加Fehling試劑A和B各lmL。搖勻后,分別加人測試糖液各4滴,沸水浴煮2—3min,取出冷卻,觀察沉淀和顏色的變化。2.Benedict反應
Benedict試劑是Fehling試劑的改良。它利用檸檬酸作為Cu2+的絡合劑,其堿性比Fehling試劑弱,靈敏度高,干擾因素少,因而在實際應用中有更多的優點。
步驟:于8支試管中先各加入Benedict試劑2ml,再分別加入測試糖各4滴,沸水浴中煮2-3min,冷卻后,觀察顏色變化。
3.Barfoed反應
該反應的特點是在酸性條件下進行還原作用。在酸性溶液中,單糖和還原二糖的還原速度有明顯差異。單糖在3min內就能還原Cu2+而還原二糖則需20min。所以,該反應可用于區別單糖和還原二糖。當加熱時間過長,非還原性二糖被水解也能呈現陽性反應,如蔗糖在10 min內水解而發生反應。還原二
糖濃度過高時,也會很快呈現陽性反應,若樣品中含有少量氯化鈉也會干擾此反應。步驟:分別加入測試糖液2-3滴到含有1ml Barfoed試劑的試管中,煮沸約3min,放置20min以上,比較各管顏色變化及紅色出現的先后順序。
注意:
1、本實驗需要比較紅色出現的先后順序,因此在20分鐘的放置過程中,需不時拿起試管觀察底部。
2、理論上是出現Cu2O紅色沉淀,但試劑反應時若反應速度快則生成的Cu2O顆粒較小,呈黃綠色;反應慢時,生成的Cu2O顆粒較大,呈紅色。有保護膠體存在時,常生成黃色沉淀。實際生成的沉淀含有大小不同的Cu2O顆粒,因而每次觀察到顏色可能略有不同。溶液中還原糖的濃度可以從生成沉淀的多少來估計,而不能依據沉淀的顏色來區別。
三、實驗試劑的配制
以上實驗中,有4種試劑需要在臨用前配制: ①Molish 氏試劑
稱取α-萘酚2克,溶于95%乙醇中并定容到100ml。注意臨用前,新鮮配制,貯于棕色瓶中。
②蒽酮(Anthrone)試劑
溶解0.2g蒽酮于100mL濃硫酸(A.R.,比重1.84,含量95%)中。當日配制、使用。③Seliwanoff氏試劑
溶解50mg間苯二酚(resorcin01)于100rnl,鹽酸(鹽酸:水=1:2V/V)中。臨用前配制。鹽酸濃度不宜超過12%,否則,它將導致糖形成糠醛或其衍生物。以上3種以實驗室為單位配置。④Barfoed 試劑
溶解33.3g中性結晶的乙酸銅與約400ml蒸餾水中,加3ml冰乙酸,以蒸餾水定容至500ml,臨用時配制。
以上2個班共配置1份。
另外,Fehling試劑已經配好A液和B液,臨用時,將試劑A和B等量混合。
四、其他注意事項
1、注意水浴加熱時燒杯里面水不要太滿;燒杯底部外壁不要沾上水,否則容易被燒裂。
2、實驗過程中使用移液管移取試劑后及時用水清洗,切忌亂甩。
3、取用硫酸時可以使用鑷子開內蓋。
4、不要亂動實驗室其他儀器。
5、實驗完成后等待老師檢查簽字,經允許后方可離開。
6、值日安排。
五、實驗報告要求以及思考題
1、判斷實驗結果,推測未知糖液。
2、應用Molish反應和Seliwanoff反應分析未知樣品時應注意那些問題?
3、運用本實驗的方法,設計一個鑒定未知糖的方案。
第四篇:工傷鑒定步驟
工傷鑒定步驟
.因工傷殘職工在醫療終結后應攜帶資料到當地社保機構申請傷殘等級評定;
2.鑒定者攜帶醫療機構出具的傷、并殘診斷證明,如:病歷、出院證明、CT片、化驗單、心電圖等相關診斷材料及《職工傷病殘勞動鑒定審批表》于每周一、二、三、五來做鑒定,工傷鑒定步驟。
3.鑒定辦對鑒定者攜帶的材料由專家確認后,交納200元鑒定費。如材料不全,由我辦出據委托診斷后,再來鑒定。
4.鑒定辦于每周四定期召開鑒定會,做出等級或結論,并予以公布。
5.自鑒定材料收下登記之日起15日后,由單位勞資人員前來領取鑒定結果及所收全部材
你應該找用人單位或勞動部門,先要做鑒定,提交勞動、聘用合同文本復印件或者與用人單位存在勞動關系(包括事實勞動關系)、人事關系的其他證明材料;醫療機構出具的受傷后診斷證明書或者鑒定書,賠償標準因地方而不同,一般計算方法是一、一級至四級傷殘待遇標準
【一】一次性傷殘補助金
1、一級傷殘補助金=本人工資×24個月
2、二級傷殘補助金=本人工資×22個月
3、三級傷殘補助金=本人工資×20個月
4、四級傷殘補助金=本人工資18個月
【二】按月享受傷殘津貼(按月支付)
1、一級傷殘津貼=本人工資×90%
2、二級傷殘津貼=本人工資×85%
3、三級傷殘津貼=本人工資×80%
4、四級傷殘津貼=本人工資×75%
(注:傷殘津貼實際金額低于當地最低工資標準的,由工傷保險基金補足差額)
二、五級、六級傷殘待遇標準
(一)一次性傷殘補助金
1、五級傷殘補助金=本人工資×16個月
2、六級傷殘補助金=本人工資×14個月
(二)傷殘津貼
1、五級傷殘津貼=本人工資×70%
2、六級傷殘津貼=本人工資×60%
(注:難以安排工作的工傷職工由用人單位按照月發給傷殘津貼,傷殘津貼實際金額低于當地最低工資標準的,由用人單位補足差額)
三、七級至十級傷殘待遇標準
(一)一次性傷殘補助金
1、七級傷殘=本人工資×12個月
2、八級傷殘=本人工資×10個月
3、九級傷殘=本人工資×8個月
4、十級傷殘=本人工資×6個月
(二)勞動合同期滿終止,或者職工本人提出解除勞動合同的,由用人單位支付一次性工傷醫療補助金和傷殘就業補助金
第五篇:《檢測生物組織中還原糖、脂肪和蛋白質》教案
《檢測生物組織和食品中還原糖、脂肪和蛋白質》教案
主講人:于壽田 課時:1課時 2012年5月
一、實驗原理(見學案)(1)鑒定實驗設計的理念:
某些化學試劑 + 生物組織中有關有機化合物件 產生特定顏色反應。(2)具體原理:
①可溶性還原糖+ 斐林試劑→磚紅色沉淀。②脂肪小顆粒 + 蘇丹Ⅲ染液→橘黃色小顆粒。③蛋白質 + 雙縮脲試劑→紫色反應。
二、目標要求(見學案)1.知識目標:
識記:記住鑒定所用材料,懂得選材的要求。
理解:理解實驗的目的、原理和方法步驟,進一步歸納出生物組織中可溶性還原糖、脂肪和蛋白質的鑒定原理。
2.能力目標:
⑴學會制備生物組織試樣,并能按規范化要求操作,獨立完成鑒定工作。
⑵能正確選取鑒定試劑,并能進行規范化操作。
⑶明確觀察對象,正確說出鑒定過程中試樣的顏色變化,并能用準確的語言解釋實驗現象,作出結論;填寫實驗報告冊。
3.情感目標:培養科學思維能力和科學研究方法。
三、重點、難點 1.重點
①初步掌握鑒定生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質的基本方法。
②通過實驗的操作和設計培養學生的動手能力,掌握探索實驗設計技巧,從而培養創新思維能力。2.難點
根據此實驗方法、原理,設計實驗來鑒定常見食物的成分。
四、實驗材料
1.可溶性還原糖的鑒定實驗:選擇含糖量較高、顏色為白色或近白色的植物組織,以蘋果、梨為最好。
2.脂肪的鑒定實驗:根據農村學校花生產區的實際,選擇花生油替代花生種子進行實驗。
3.蛋白質的鑒定實驗:利用常見食品——雞蛋蛋白稀釋液作為檢測材料。
五、儀器、試劑(見學案)
1.儀器: 研笨一套、試管架、試管(6支)、500mL大燒杯(2個)、250mL小燒杯(1個)、小量筒、溫度計、試管夾、試管刷、滴管(3支)、暖水瓶、空礦泉水瓶(1個)、解剖刀、紗布、廢液桶。
2.試劑: 斐林試劑(甲液:質量濃度為0.1g/ml的NaOH溶液,乙液:質量濃度為0.05g/ml的CuSO4溶液),蘇丹Ⅲ染液,雙縮脲試劑(A液:質量濃度為0.1g/ml的NaOH溶液,B液:質量濃度為0.01g/ml的CuSO4溶液),熱水,清水。
六、教學方法:合作探究、教學演示、多媒體教學。
七、教學過程
新課引入:我們在化學中學習過物質的鑒定,其原理是被鑒定的物質與所用的化學試劑要么發生顏色反應,要么產生沉淀,我們生物學上也采用此原理,在生物學中物質鑒定的理念是:某些化學試劑能夠使生物組織中的有關
有機化合物產生特定的顏色反應。
原理展示(多媒體)
① 可溶性還原糖+ 斐林試劑→磚紅色沉淀。注:需要用備用的熱水,在大燒杯中進行水浴加熱。② 脂肪小顆粒 + 蘇丹Ⅲ染液→橘黃色小顆粒。
注:需要用花生油(可以稍加稀釋)進行實驗;及時刷洗實驗用具。③蛋白質 + 雙縮脲試劑→紫色反應。(要先加A液NaOH 溶液再加B液CuSO4 溶液)
教師提問:在我們高中生物中還學習過那些利用顏色反應鑒定物質的?用到了那些化學試劑?由產生了那些特定的顏色呢?
學生回答:略。如果回答不全教師補充: ①RNA+ 吡啰紅 紅色 ②淀粉+碘液
藍色
③DNA+甲基綠 綠色(水浴加熱)④線粒體+健那綠
染為藍綠色
⑥染色質(體)+醋酸洋紅(龍膽紫)紅色或紫色
今天,我們學習鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的基本方法。實驗步驟:
(一)、還原糖的鑒定
1、還原糖的鑒定步驟:
選材: 蘋果:洗凈、去皮、切塊,取5g放如研缽中 制備組織樣液 研磨成漿:加石英砂,加3 ml水研磨
注入組織樣液2ml 過濾:將研磨液隔一層紗布過濾到小燒杯中,再將紗布中的殘渣進一步揉擠,往燒杯中加1ml水進一步稀釋。
加斐林試劑:2ml(由斐林試劑甲液和乙液充分混合而成,不能分別加入)水浴加熱:在50-60℃溫水中,水浴加熱2分鐘。觀察溶液顏色變化:(淺藍色→棕色→磚紅色)。結論:還原糖與斐林試劑生成磚紅色沉淀
2、實驗成功的要點:
①還原糖的鑒定實驗:選擇含糖量較高、顏色為白色或近白色的植物組織,以蘋果、梨為最好。
②斐林試劑要兩液混合均勻且現配現用。斐林試劑的配制過程示意:
斐林試劑甲液(0.1 g/ml的 NaOH 溶液)斐林試劑乙液(0.05 g/ml的 CuSO4 溶液)
(二)、脂肪的鑒定
1、脂肪的鑒定步驟:
取材:取花生油2ml(可稍加稀釋,用量筒量取)。
結論:細胞中的圓形脂肪小顆粒已經被染成橘黃色。
待一段時間后觀察其現象。
2、實驗成功的要點:
實驗前可用稍量的清水稀釋,滴蘇丹Ⅲ染液染色2-3min,要注意充分振蕩。
(三)、蛋白質的鑒定
1、蛋白質的鑒定步驟:
選材:用量筒量取卵清稀釋液2ml。
2、實驗成功的要點:
②雙縮脲試劑的使用,一定要先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液),再加入雙縮脲試劑B液(即0.01 g/ml的 CuSO4 溶液)。
③還可設計一只加底物的試管,不加雙縮脲試劑,進行空白對照,說明顏色反應的引起是蛋白質的存在與雙縮脲試劑發生反應,而不是空氣的氧化引起。
八、結果與交流:請兩個小組根據所做的實驗總結基本實驗步驟,并說明實驗現象和結論。
九、進一步探究與提高(見學案):
某商場所賣的脫脂奶粉被懷疑為假冒偽劣產品。生物學研究性學習學習小組的同學想把調查脫脂奶粉的合格率作為研究課題。假如你是課題組成員,交給你的任務是鑒定真假脫脂奶粉。(1)搜集資料:
①全脂奶粉含有蛋白質,脂肪和蔗糖等成分,脫脂奶粉含有高蛋白、微量脂肪等成分。
②假冒脫脂奶粉有兩種:一是全脂奶粉冒充脫脂奶粉,二是用淀粉冒充。討論并說明:
(1)鑒定是否用淀粉冒充:
(2)鑒定是否用全脂奶粉冒充:
結果分析
十、作業:完成實驗學案上的選擇練習。