第一篇：食品中柑橘紅2號測定（BJS,12）

附件1 食品中柑橘紅2號的測定 BJS 201912 1 范圍 本方法規定了柑橘類水果、果醬、蜜餞、果汁飲料、辣椒油、辣椒醬、火鍋底料、肉制品中柑橘紅2號的液相色譜-串聯質譜測定方法。

本方法適用于柑橘類水果、果醬、蜜餞、果汁飲料、辣椒油、辣椒醬、火鍋底料、肉制品中柑橘紅2號的測定。

原理 試樣用乙腈提取后，經氨基固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯質譜儀測定，外標法定量。

試劑與材料 除另有規定外，本方法中所用試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規定的一級水。

3.1 試劑 3.1.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。

3.1.2 二氯甲烷（CH2Cl2）：色譜純。

3.1.3 甲酸（HCOOH）：色譜純。

3.1.4 氯化鈉（NaCl）。

3.1.5 氮氣（N2）：純度≥99.9 %。

3.2 試劑配制 3.2.1 乙腈-二氯甲烷溶液（1 %）：準確量取乙腈（3.1.1）1mL，于100mL容量瓶中，用二氯甲烷（3.1.2）定容至刻度，搖勻后備用。

3.2.2 甲酸-乙腈溶液（1 %）：準確量取甲酸（3.1.3）1mL于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）定容至刻度，搖勻后備用。

3.2.3 甲酸水溶液（0.1 %）：準確量取甲酸（3.1.3）1mL于1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后備用。

3.3 標準品 柑橘紅2號標準物質：分子式C28H16N2O3，CAS 號：6358-53-8，純度≥90.0 %。

3.4 標準溶液配制 3.4.1 柑橘紅2號標準儲備溶液（200μg/mL）：準確稱取按其純度折算為 100% 質量的柑橘紅2號標準品（3.3）0.01g（精確至0.00001g）于50mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）溶解并定容至刻度，搖勻，配制成濃度為200μg/mL的標準儲備溶液，溶液轉移至試劑瓶中，4℃冷藏保存，有效期6個月。

3.4.2 柑橘紅2號中間溶液：準確移取一定量柑橘紅2號標準儲備溶液（3.4.1），用乙腈（3.1.1）稀釋成一定濃度的中間溶液，溶液轉移至試劑瓶中，4℃冷藏保存，有效期3個月。

儀器與設備 4.1 液相色譜-串聯質譜儀：配電噴霧離子源（ESI源）。

4.2 電子分析天平：感量分別為0.00001g和0.01g。

4.3 超聲波清洗器。

4.4 渦旋混合器。

4.5 離心機：轉速≥8000r/min。

4.6 氮吹儀。

4.7 固相萃取裝置。

4.8 氨基固相萃取柱：500mg，3mL。

4.9 微孔濾膜：有機相，孔徑0.22μm。

4.10 均質機。

分析步驟 5.1 試樣制備 固體樣品切成小塊，經均質機粉碎、混勻，分裝于潔凈容器中。其中水果樣品只取果皮部分粉碎。

半固體樣品直接經均質機均質、混勻，分裝于潔凈容器中。

液體樣品搖勻后備用。

5.2 試樣前處理 5.2.1 試樣提取 稱取試樣2g（精確至0.01g）于50mL離心管中，準確加入10mL乙腈（3.1.1），渦旋振蕩1min，加入2g氯化鈉，劇烈振搖1min，超聲10min，以8000r/min離心3min。取上清液乙腈層至15mL離心管中，40℃氮吹濃縮至干，用3mL乙腈-二氯甲烷溶液（1 %）（3.2.1）渦旋、超聲溶解殘渣，溶液待凈化。

5.2.2 試樣凈化 用6mL乙腈-二氯甲烷溶液（1%）（3.2.1）活化固相萃取柱，待液面降至柱床表面時，將5.2.1的待凈化液轉移至固相萃取柱，同時收集流出液。用6mL乙腈-二氯甲烷溶液（1 %）（3.2.1）分兩次洗滌15mL離心管，將洗滌液淋洗固相萃取柱同時收集流出液。合并流出液，在40℃條件下氮吹濃縮至干，準確加入10mL甲酸-乙腈（1%）溶液（3.2.2）溶解殘渣，過微孔濾膜后，上機測定。

5.3 基質標準溶液制備 稱取5個經質譜確認不含柑橘紅2號的陰性樣品于50mL離心管中，加入一定濃度的柑橘紅2號的中間溶液，得到柑橘紅2號含量為20ng、50ng、100ng、200ng、400ng的基質樣品，其余按5.2步驟操作完成。其中陰性樣品按照5.2步驟操作完成后，上機測試，不含有柑橘紅2號。

5.4 儀器參考條件 5.4.1 液相色譜參考條件? a)色譜柱：C18柱（粒徑1.7 μm, 75 mm× 2.1 mm），或性能相當者；

b)流動相：A為0.1 %甲酸水溶液（3.2.3），B為乙腈（3.1.1），梯度洗脫條件見表1；

c)進樣體積：2.0μL；

d)流速：0.30mL/min；

e)柱溫：40℃；

表1 流動相及梯度洗脫條件 時間/min 流動相A/% 流動相B/% 0.0 90 10 3.0 50 50 5.0 5 95 7.0 5 95 7.1 90 10 9.0 90 10 5.4.2 質譜參考條件? a）離子源：電噴霧離子源（ESI源），正離子模式；

b）監測方式：多反應監測（MRM）；

c）毛細管電壓：3.0kV；

d）脫溶劑氣溫度：500℃；

e）離子源溫度：150℃；

f）脫溶劑氣流速：850L/h；

g）錐孔氣流速：150L/h；

h）碰撞氣（Ar）流速：0.12mL/min；

柑橘紅2號的定性、定量離子對、駐留時間及碰撞能量見表2。

表2 柑橘紅2號的質譜參考條件 化合物 母離子（m/z）子離子（m/z）錐孔電壓（V）駐留時間（ms）碰撞能量（eV）柑橘紅2號 309.1 153.0* 25 100 20 278.0 25 100 12 注：* 定量離子 5.4.3 定性測定 在相同試驗條件下測定試樣和基質標準溶液，若樣品溶液中檢出色譜峰的保留時間與基質標準溶液中目標物色譜峰的保留時間一致（變化范圍在±2.5%之內），且樣品溶液的質譜離子對相對豐度與濃度相當基質標準溶液的質譜離子對相對豐度相比較，相對離子豐度的相對偏差不超過表3規定的范圍，則可判定樣品中存在該組分。

表 3 定性時相對離子豐度的最大允許偏差 相對離子豐度（%）k﹥50% 50%≥k﹥20% 20%≥k﹥10% k≤10% 允許的最大偏差（%）± 20 ± 25 ± 30 ± 50 5.4.4 定量測定 將基質標準溶液注入液相色譜-串聯質譜儀測定，得到柑橘紅2號的峰面積。以基質標準溶液濃度為橫坐標，以柑橘紅2號定量離子的峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。將試樣溶液（5.2）按儀器參考條件（5.4）進行測定，得到相應的試樣溶液的色譜峰面積，根據校正曲線得到試樣溶液柑橘紅2號的濃度。試樣溶液中目標物響應值若高于校正曲線線性范圍，應稀釋后進行分析。

在上述色譜和質譜條件下，柑橘紅2號的標準溶液多反應監測質量色譜圖參見附錄A。

5.5 空白試驗 除不加試樣外，均按上述步驟進行操作。

分析結果的表述 試樣中柑橘紅2號的含量按式（1）計算：

................................................................（1）式中：

X — 試樣中柑橘紅2號的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

m — 由基質加標工作計算出的測定樣液中柑橘紅2號的含量，單位為納克（ng）；

M — 試樣的質量，單位為克（g）；

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留兩位有效數字。

精密度 在重復性條件獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10 %。

其他 當稱樣量為2g時，柑橘紅2號的檢出限為5μg/kg，定量限為10μg/kg。

附錄A 柑橘紅2號多反應監測質量色譜圖 圖A.1 柑橘紅2號標準溶液的多反應監測質量色譜圖（濃度10ng/mL）本方法負責起草單位：山東省食品藥品檢驗研究院。

方法驗證單位：北京市疾病預防控制中心、上海市質量監督檢驗技術研究院、、四川省食品藥品檢驗檢測院、武漢食品化妝品檢驗所、山西省食品藥品檢驗所。

方法主要起草人：張艷俠、尹麗麗、盧躍鵬、薛霞、劉艷明、王駿。

第二篇：食品中辛基酚等5種酚類物質的測定（BJS 201913）

附件2

食品中辛基酚等5種酚類物質的測定

BJS

201913

范圍

本標準規定了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的液相色譜-串聯質譜測定方法。

本標準適用于嬰兒配方食品、畜肉、禽蛋、水產品、罐頭食品、植物油中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的測定。

2原理

試樣中加入同位素內標后，經乙腈提取，離心，取上清液經固相萃取柱凈化，采用液相色譜-串聯質譜儀測定，內標法定量。

3試劑和材料

除另行規定外，本實驗所用試劑均為分析純，水為GB/T

6682規定的一級水。

3.1

試劑

3.1.1

甲醇（CH3OH）：質譜級。

3.1.2

乙腈（CH3CN）：質譜級。

3.1.3

氨水（NH4OH）：色譜級。

3.2

試劑配制

0.05%

氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3）0.5mL用水稀釋至1000

mL。

3.3

標準品

辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A標準物質和辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A

-D4同位素內標的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見附錄A表A.1，純度≥98%。

3.4

標準溶液配制

3.4.1標準儲備溶液（100

mg/L）：分別稱取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A標準物質（3.3）10

mg（精確至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并轉移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，標準儲備液濃度為100

mg/L。溶液轉移至試劑瓶中，貯存于-20

℃冰箱中，有效期12個月。

3.4.2混合標準中間溶液（1

mg/L）：分別準確吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A標準儲備液(100

mg/L)(3.4.1)

mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成1

mg/L的混合標準中間溶液，溶液轉移至試劑瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3個月。

3.4.3同位素內標標準儲備溶液（100

mg/L）：分別稱取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A

-D4同位素內標（3.3）10

mg（精確至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并轉移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，標準儲備液濃度為100

mg/L。溶液轉移至試劑瓶中，貯存于-20

℃冰箱中，有效期12個月。

3.4.4同位素內標混合標準中間溶液（1

mg/L）：分別準確吸取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A

-D4同位素內標標準儲備液(100

mg/L)(3.4.3)各1

mL至100

mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成1

mg/L的混合標準中間溶液，溶液轉移至試劑瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3個月。

3.4.5

同位素內標混合標準工作液（100

μg/L）：分別準確吸取同位素內標標準儲備液(1

mg/L)(3.4.4)各1

mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成100

μg

/L的混合標準工作液。臨用時配制。

3.4.6混合標準工作溶液：分別準確吸取混合標準中間液

(1

mg/L)(3.4.2)適量，加入同位素內標混合標準中間溶液（1

mg/L）(3.4.4)，使辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A濃度分別為0.5

μg/L、1

μg/L、5

μg/L、10

μg/L、20

μg/L和50

μg/L的混合標準系列工作溶液。臨用時配制。

3.5

材料

固相萃取小柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱）：200

mg，6

mL。

儀器和設備

4.1高效液相色譜-串聯質譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。

4.2天平：感量分別為0.001g和0.000

g。

4.3渦旋混合器。

4.4

離心機：轉速≥8000

r/min。

4.5

超聲波清洗器。

分析步驟

5.1

試樣制備

5.1.1

乳粉、米粉：試樣混合均勻，密封并標明標記，于-20℃冰箱冷藏保存。

5.1.2

禽蛋：取代表性試樣約200

g，去殼后用組織勻漿機攪拌均勻，裝入潔凈容器中，密封并標明標記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.3水產品、畜肉：取代表性試樣約200

g，用勻漿機勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標明標記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.4

植物油：試樣混合均勻，裝入潔凈容器中，密封并標明標記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.5

罐頭食品：取罐頭中固形物試樣約50

g,用勻漿機勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標明標記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

冷藏保存后的樣品解凍后需再次經勻漿機均質后使用。

5.2

提取

準確稱取1

g（精確至0.001

g）樣品于15

mL具塞玻璃試管中，加入0.1mL同位素內標混合標準工作液（100

μg/L）(3.4.5)

和5

mL乙腈（3.1.2），渦旋混勻，超聲提取15

min，8000

r/min離心5

min，取上層乙腈相；殘留部分再用5

mL

乙腈重復提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃冷凍2h，取出于8000

r/min離心5

min，取上清液待凈化。

5.3

凈化

取固相萃取柱（3.5），使用前用18

mL甲醇活化，6mL水平衡。將5.2項所得上清液加30

mL水稀釋,充分搖勻后以1

mL/min~2

mL/min的速度上樣，棄去濾液，用12

mL60

%甲醇水溶液（V/V）淋洗，棄去淋洗液，再用6

mL乙腈洗脫，洗脫液于50℃用氮氣吹至近干。用1

mL甲醇溶解殘渣，待測。

5.4

空白試驗

除不加樣品外，采用相同的分析步驟進行操作。

5.5儀器參考條件

5.5.1色譜條件

a)

分析柱：

C18

柱（3

μm，50

mm

×

mm），或性能相當者；捕集柱：

C18

柱（5

μm，50

mm

×

4.6

mm），或性能相當者；捕集柱位于進樣閥之前。

b）流動相：A為0.05%氨水溶液（3.2），B為甲醇（3.1.1），洗脫梯度見表1。

c）流速：400

μL/min。

d)

柱溫：30℃。

e)

進樣量：10

μL。

表1

梯度洗脫程序表

時間（min）

A(%)

B(%)

0

14.5

14.51

5.5.2

質譜條件

a)

離子源：電噴霧離子源（ESI源）。

b)

檢測方式：多反應離子監測（MRM）。

c)

碰撞氣為高純氮氣，干燥氣、霧化氣、鞘氣等均為氮氣或其他合適氣體，使用前應調節相應參數使質譜靈敏度達到檢測要求，毛細管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、噴嘴電壓、碰撞能量、碎裂電壓等參數應優化至最佳靈敏度，監測離子對和定量離子對等信息詳見附錄B。

5.6

定性測定

按照超高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜條件測定試樣和標準工作溶液，記錄試樣和標準溶液中各化合物的色譜保留時間，當試樣中檢出與某標準品色譜峰保留時間一致的色譜峰（變化范圍在±2.5%之內），并且試樣色譜圖中所選擇的監測離子對的相對豐度比與相當濃度標準溶液的離子相對豐度比（k）的偏差不超過表2規定的范圍，可以確定試樣中檢出相應化合物。

表2

定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度（%）

k＞50%

50%≥k＞20%

20%≥k＞10%

k≤10%

允許的最大偏差（%）

±

±

±

±

5.7定量測定

5.7.1標準曲線的制作

將混合標準工作溶液（3.4.6）分別按儀器參考條件（5.5）進行測定，得到目標化合物峰面積與內標峰面積的比值，根據標準曲線得到待測液中目標化合物的濃度。

對照品色譜圖參見附錄C。

5.7.2試樣溶液的測定

將試樣溶液（5.3）按儀器參考條件（5.5）進行測定，得到相應的樣品溶液的色譜峰面積。根據標準曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數不少于兩次；樣品中各待測組分的響應值應在標準曲線的線性響應范圍內，若超出標準曲線線性范圍，應用甲醇（3.1.1）稀釋后進行分析。

結果計算

結果按式（1）計算：

…………………………………………（1）

式中：

X—試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

c—由標準曲線得出的樣液中某種組分的濃度，單位為納克每毫升（μg/L）；

co——由標準曲線計算得到的過程空白樣品中某種組分的濃度，單位為微克每升（μg/L）

V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質量，單位為克（g）；

f—稀釋因子。

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,結果保留三位有效數字。

精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。

8檢出限和定量限

當稱樣量為1

g，定容體積為1

mL時，本方法中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A的檢出限均為1.0μg/kg，定量限均為2.0μg/kg。

9其他

9.1實驗中所用的器具均為玻璃材質，液相色譜-串聯質譜儀的管線均為不銹鋼或聚四氟乙烯材質。

9.2

嚴格控制試劑空白，空白值應不得對檢測結果產生明顯影響，否則扣除空白時會引起較大的誤差。

附錄A

辛基酚等5種酚類物質相關信息

表A.1

辛基酚等5種酚類物質英文名稱、中文名稱、分子式、CAS號、相對分子質量

序號

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號

分子式

相對分子量

辛基酚

4-tert-Octyl

phenol

140-66-9

C14H22O

206.33

正辛基酚

4-n-Octyl

phenol

1806-26-4

C14H22O

206.33

壬基酚

Nonylphenol

25154-52-3

C15H24O

220.35

正壬基酚

4-n-Nonylphenol

104-40-5

C15H24O

220.35

雙酚A

Bisphenol

A

80-05-7

C15H16O2

228.29

辛基酚-13C6

4-tert-Octylphenol-13C6

1173020-24-0

C14H22O

212.28

正辛基酚-D17

4-n-Octyl

phenol-D17

1219794-55-4

CD3(CD2)7C6H4OH

223.43

壬基酚-13C6

3,6,3-Nonylphenol-13C6

1173020-38-6

C15H24O

226.40

正壬基酚-D4

4-n-Nonylphenol

-2,3,5,6-D4,OD

358730-95-7

C15H19D5O

225.38

雙酚A-D4

Bisphenol

A

-3,3’,5,5’-D4

347841-41-2

C15H12

D4O2

232.31

附錄B

超高效液相-三重四極桿串聯質譜參考條件

質譜參考條件

a）電離方式：電噴霧負離子模式；

b）檢測方式：多反應監測（MRM）；

c）離子源溫度(TEM):650℃;

d）霧化氣(Gas1):

55;

e）輔助氣(Gas2):

65；

f）氣簾氣(Gurtain

Gas):

20;

g）電噴霧電壓：-4500V；

h）干燥氣流速：11

L/min；

i）定性離子、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見表B.1。

表B.1

化合物定性、定量離子和質譜分析參數

化合物

Q1

Q3

DP/V

CE/V

辛基酚

205

133*

-80

205

117

-80

-80

正辛基酚

205

106*

-80

205

119

-80

-54

4-壬基酚

219

133*

-80

219

147

-80

4-正壬基酚

219

106*

-80

219

119

-80

雙酚A

227

212*

-80

227

133

-80

辛基酚-13C6

211

139*

-73

正辛基酚-D17

222

108*

-80

壬基酚-13C6

225.1

138.9*

-90

正壬基酚-D4

223

110*

-80

雙酚A-D4

231

216*

-80

*

定量離子。

附錄C

超高效液相-三重四極桿串聯質譜標準品色譜圖

雙酚A

雙酚A-D4

B.2

B.1

壬基酚-13C6

4-壬基酚

B.4

B.3

4-正壬基酚

壬基酚-D4

B.6

B.5

對辛基酚-13C6

4-辛基酚

B.8

B.7

4-正辛基酚

辛基酚-D17

B.10

B.9

0.01

μg/mL混合標準溶液中各化合物MRM色譜圖

圖C.1

雙酚A；圖C.2

雙酚A-D4；圖C.壬基酚；圖C.4壬基酚-13C6；圖C.5正壬基酚；圖C.6

正壬基酚-D4；圖C.7辛基酚；圖C.8

辛基酚-13C6；圖C.9正辛基酚；圖C.10

正辛基酚-D17

本方法負責起草單位：中國食品藥品檢定研究院。

方法驗證單位：北京市疾病預防控制中心、國家食品安全風險評估中心、陜西省食品藥品監督檢驗研究院、中國肉類食品綜合研究中心、遼寧省食品檢驗檢測院、湖北省食品質量安全監督檢驗研究院。

方法主要起草人：寧霄、金紹明、邵兵、黃傳峰、曹進、丁宏、張爍。

第三篇：豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測定（BJS 201909）

豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測定

BJS

201909

范圍

本標準規定了豆腐、豆干、火鍋底料、麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司帕沙星、環丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星的高效液相色譜-串聯質譜檢測法。

本標準適用于豆腐、豆干、火鍋底料、麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司帕沙星、環丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星的測定和確證。

原理

采用0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液提取樣品中的喹諾酮類化合物，經離心和過濾后，上清液經HLB固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜-串聯質譜儀檢測和確證，內標法定量。

試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純，水為GB/T

6682規定的一級水。

3.1

乙腈（CH3CN）：色譜純。

3.2

甲醇（CH3OH）：色譜純。

3.3

甲酸（CHOOH）：色譜純。

3.4

甲醇（CH3OH）。

3.5

氨水（NH4OH）：濃度25%～28%。

3.6

乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2Na2O8·2H2O）。

3.7

檸檬酸（C6H8O7·H2O）。

3.8

磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。

3.9

氫氧化鈉（NaOH）。

3.10

鹽酸（HCl）：含HCI

38%。

3.11

乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

3.12

磷酸氫二鈉溶液（0.2

mol/L）：稱取71.63

g磷酸氫二鈉（3.8），用水溶解并定容至1000

mL。

3.13

檸檬酸溶液（0.1

mol/L）：稱取21.01

g檸檬酸（3.7），用水溶解并定容至1000

mL。

3.14

Mcllvaine緩沖溶液：將1000

mL

0.1

mol/L檸檬酸溶液（3.13）與625

mL

0.2

mol/L磷酸氫二鈉溶液（3.12）混合，用鹽酸或氫氧化鈉調節pH至4.0±0.1。

3.15

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（0.1

mol/L）：稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉（3.6）至1625mL

Mcllvaine緩沖溶液（3.14）中，超聲使其溶解。

3.16

5%甲醇水溶液：取5

mL甲醇（3.4），用水稀釋至100

mL。

3.17

25%氨水甲醇溶液：取25

mL氨水（3.5），用甲醇（3.4）稀釋至100

mL。

3.18

標準品：標準品中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量見附錄A表A.1，純度≥99%。

3.19

標準儲備液配制：分別精密稱取標準品（3.18）約10

mg，置10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超聲使溶解，用乙腈（3.1）定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1.0

mg/mL的標準儲備液，轉移至溶劑瓶中于-18℃以下避光保存，有效期6個月。

3.20

混合標準溶液的配制：準確吸取標準儲備液（3.19）1

mL于100

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為0.01

mg/mL的混合標準溶液（環丙沙星、沙拉沙星濃度約0.015mg/mL），于4℃以下避光保存，有效期3個月。

3.21

混合標準中間溶液的配制：準確吸取混合標準溶液（3.20）1

mL至10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為1.0

μg/mL的混合標準中間溶液（環丙沙星、沙拉沙星濃度約1.5

μg/mL），于4℃以下避光保存，臨用新配。

3.22

內標標準儲備液配制：分別稱取氘代同位素標準品（3.18）約10

mg，至10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超聲溶解，用乙腈（3.1）稀釋至刻度，配制成濃度為1.0

mg/mL的標準儲備液，于-18℃以下避光保存，有效期6個月。

3.23

混合內標標準中間溶液的配制：準確吸取內標標準儲備液（3.22）0.01mL于10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為1.0

μg/mL的混合內標標準中間溶液，于4℃以下避光保存，臨用新配。

3.24

固相萃取小柱（500

mg，6

mL）：HLB柱或相當者。使用前依次以6

mL甲醇、6mL水活化，保持柱體濕潤。

儀器和設備

4.1

液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。

4.2

分析天平：感量0.001g和0.00001

g。

4.3

渦旋振蕩器

4.4超聲儀

4.5離心機：轉速≥8000

r/min

4.6

均質器

4.7

氮氣濃縮儀

測定步驟

5.1

試樣制備與保存

豆制品、火鍋和麻辣燙的食材

從待檢樣品中取出樣品約500g，用組織搗碎機充分搗碎混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于-18℃冷凍存放。

火鍋底料、麻辣燙底料

固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，用組織搗碎機充分搗碎混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于4℃冷藏存放。

半固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，放入研缽中，迅速研磨均勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記于4℃冷藏存放。

液體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，攪拌均勻后裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于4℃冷藏存放。

5.2

樣品溶液制備

提取：稱取5.0

g均勻樣品（精確至0.001g），置50

mL離心管中，精密加入混合內標標準中間溶液（3.23）0.1mL，加入20

mL

0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15），渦旋混勻1min，超聲提取15

min，8000

r/min離心5

min，上清液轉移至50

mL容量瓶中，殘渣用EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15）同法重復提取兩次，每次10

mL，合并上清液至同一容量瓶中，用EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15）定容至刻度，混勻。用濾紙過濾（必要時10000

r/min離心5

min后過濾），續濾液待凈化。

凈化：精密吸取上述待凈化液25.0

mL，以約1

mL/min的流速全部通過固相小柱（3.24），用3

mL

5%甲醇水溶液（3.16）淋洗，抽干，先后以6

mL甲醇、3

mL氨水甲醇（3.17）洗脫，合并甲醇及氨水甲醇洗脫液，45

℃氮吹至近干，準確加入2.0

mL流動相初始比例復溶液溶解殘渣，過0.22

μm濾膜，續濾液供液相色譜-串聯質譜儀分析。

5.3

基質標準工作溶液的制備

稱取5.0

g空白試樣（精確至0.001g），置50

mL離心管中，除不加入混合內標標準中間溶液外，其余同5.2操作處理后得到空白基質，共制備6份。

分別精密吸取混合標準中間溶液（3.21）0

mL、0.010

mL、0.020

mL、0.050

mL、0.100

mL、0.200

mL及混合內標標準中間溶液（3.23）0.025

mL于試管中，氮吹至近干，精密加入1.0

mL空白基質復溶，過0.22

μm濾膜，制成濃度為0

ng/mL、10

ng/mL、20

ng/mL、50

ng/mL、100

ng/mL、200

ng/mL的基質標準工作溶液（環丙沙星、沙拉沙星濃度為0

ng/mL、15

ng/mL、30

ng/mL、75

ng/mL、150

ng/mL、300

ng/mL，同位素內標濃度約25ng/mL）。

5.4

測定

5.4.1

液相色譜參考條件

1）

色譜柱：C18色譜柱，2.1

mm×50

mm×1.7

μm，或性能相當者。

2）

柱溫：40℃。

3）

流速：0.25

mL/min。

4）

進樣量：2

μL。

5）

流動相：A-5

mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸），B-乙腈。梯度洗脫條件見表1。

表1

梯度洗脫條件

時間（min）

A(%)

B(%)

0

10.5

13.1

5.4.2

質譜參考條件

1）

電離方式：電噴霧電離（ESI）；

2）

掃描方式：正離子掃描；

3）

檢測方式：多反應監測MRM；

4）

離子源參數參考條件：

離子源接口電壓，4000

V；離子源接口溫度，350

℃；脫溶劑溫度，250

℃；離子源加熱溫度，400

℃；霧化氣流速，2.9

L/min；干燥氣流速，10.0

L/min；加熱氣流速，10.0

L/min。

5）定性離子對、定量離子對參見表2。

表2

喹諾酮類藥物主要質譜參數

序號

組分

母離子

子離子

Q1

預四極桿電壓

碰撞電壓

Q3

預四極桿電壓

（m/z）

（m/z）

（V）

(V)

（eV）

諾氟沙星

320.2

*302.0

231.1

氧氟沙星

362.2

*318.2

261.1

洛美沙星

352.0

*265.0

308.0

培氟沙星

334.0

290.1

*316.2

氟羅沙星

370.0

*326.0

269.0

沙拉沙星

386.2

342.0

299.1

*368.1

雙氟沙星

400.0

*356.0

299.0

司帕沙星

393.0

*349.0

292.0

環丙沙星

332.1

*314.1

287.8

231.0

達氟沙星

358.0

*340.1

283.2

82.1

恩諾沙星

360.0

*342.1

316.0

245.2

D8-環丙沙星

340.3

322.1

D5-恩諾沙星

365.1

321.1

D5-諾氟沙星

325.3

307.2

注：1.“*”表示定量離子；2.所列質譜參考條件是在島津（LC/MS-8050）質譜儀上完成的，此處所列試驗用儀器型號僅供參考，不涉及商業目的，鼓勵方法使用者嘗試不同廠家或型號的儀器；3.對不同質譜儀，儀器參數可能存在差異，測定前應將質譜參數優化到最佳；4.由于喹諾酮類化合物離子化受基質干擾較為

顯著，方法使用者可根據實際情況選擇表中所列離子對進行定性定量測定。

5.4.3

標準曲線繪制

取基質標準工作溶液（5.3）按濃度由低到高依次進樣檢測，內標法繪制標準曲線。

5.5

定性

在相同實驗條件下，試樣中待測物質的保留時間與標準工作溶液中對應的保留時間偏差應在±2.5%之內；且試樣譜圖中各組分定性離子的相對豐度與標準工作溶液定性離子的相對豐度，其允許偏差不超過表3規定的范圍時，則可確定為樣品中存在此種待測物。基質標準溶液多反應監測（MRM）典型圖譜見附錄B。

表3

定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度，%

＞50%

＞20%～50%

＞10%～20%

≤10%

允許的相對偏差，%

±20%

±25%

±30%

±50%

5.6

定量

待測樣液中喹諾酮藥物的響應值應在標準曲線線性范圍內，諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、氟羅沙星以氘代諾氟沙星為內標，洛美沙星、雙氟沙星、環丙沙星、達氟沙星以氘代環丙沙星為內標，司帕沙星、沙拉沙星、恩諾沙星以氘代恩諾沙星為內標，內標法定量。本方法中所列內標能基本滿足方法要求，如條件允許，可采用各化合物的對應同位素化合物作為內標。

結果計算

試樣測定結果按公式（1）計算目標物的含量：

………….(1)

式中：

X——試樣中被測組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

m——試樣的稱樣量，單位為克（g）；

C——由工作曲線計算得到的試樣中被測組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V——定容體積，單位為毫升（mL）。

F——稀釋倍數

計算結果需扣除空白值（空白基質），并保留三位有效數字。

檢測方法靈敏度、準確度、精密度

7.1

靈敏度

諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、雙氟沙星、司帕沙星、達氟沙星、恩諾沙星檢出限均為5

μg/kg，環丙沙星檢出限為7.5

μg/kg，沙拉沙星檢出限為7.5

μg/kg。

諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、雙氟沙星、司帕沙星、達氟沙星、恩諾沙星定量限均為15

μg/kg，環丙沙星定量限為22.5

μg/kg，沙拉沙星定量限為22.5

μg/kg。

7.2

準確度

本方法在15.0～100.0

μg/kg的添加水平上的回收率范圍為65.0%～120.0%。

7.3

精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。

附錄A

標準品信息

表A.1

標準品中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量

序號

化合物名稱

英文名

CAS登錄號

分子式

相對分子質量

諾氟沙星

Norfloxacin

70458-96-7

C16H18FN3O3

319.33

氧氟沙星

Ofloxacin

82419-36-1

C18H20FN3O4

361.37

洛美沙星

Lomefloxacin

98079-51-7

C17H19F2N3O3

351.35

培氟沙星

Pefloxacin

70458-92-3

C17H20FN3O3

333.36

氟羅沙星

Fleroxacin

79660-72-3

C17H18F3N3O3

369.34

鹽酸沙拉沙星

Sarafloxacin

Hydrochloride

91296-87-6

C20H18ClF2N3O3

421.81

鹽酸雙氟沙星

Difloxacin

Hydrochloride

91296-86-5

C21H20ClF2N3O3

435.85

司帕沙星

Sparfloxacin

110871-86-8

C19H22F2N4O3

392.40

環丙沙星

Ciprofloxacin

85721-33-1

C17H18FN3O3

331.34

甲磺酸達氟沙星

Danofloxacin

mesylate

119478-55-6

C20H24

FN3O6S

453.48

恩諾沙星

Enrofloxacin

93106-60-6

C19H22FN3O3

359.39

D8-環丙沙星

Ciprofloxacin-d8

/

C17H10D8FN3O3

339.39

D5-恩諾沙星

Enrofloxacin-d5

/

C19H17D5FN3O3

364.37

D5-諾氟沙星

Norfloxacin-d5

/

C16H13D5FN3O3

324.37

注：市售標準品中部分為其鹽酸鹽或甲磺酸鹽。

附錄B

14種喹諾酮類化合物多反應監測（MRM）譜圖

14種喹諾酮類化合物火鍋底料基質標準溶液(100

ng/mL，氘代內標為25

ng/mL)多反應監測（MRM）譜圖

本方法負責起草單位：四川省食品藥品檢驗檢測院

方法的參與驗證單位：上海市食品藥品檢驗所、遼寧省食品藥品檢驗檢測院、深圳出入境檢驗檢疫局食品檢驗檢疫技術中心、山東省食品藥品檢驗研究院、湖北省食品藥品監督檢驗研究院。

主要起草人：余曉琴，李道霞，黃麗娟，成長玉，李澍才，唐昌云

第四篇：食品中匹可硫酸鈉的測定（2019）

附件

食品中匹可硫酸鈉的測定

（BJS

201911）

范圍

本標準規定了食品（含保健食品）中匹可硫酸鈉的高效液相色譜-串聯質譜聯用測定方法。

本標準適用于果凍、蜜餞、糖果、飲料等食品（含與上述基質相同的保健食品及片劑、硬膠囊劑保健食品）中匹可硫酸鈉的測定。

原理

試樣粉碎后經水或甲醇溶液提取，必要時經聚酰胺凈化后，經反相色譜柱分離，電噴霧離子源離子化，多反應離子監測檢測，外標法定量。

試劑和材料

除另有規定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T

6682規定的一級水。

3.1

試劑

3.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。

3.1.2

甲醇（CH3OH）。

3.1.3

無水乙醇（CH3CH3OH）。

3.1.4

氨水（NH3?H2O）：濃度25

%~28

%。

3.1.5乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

3.1.6

三氯乙酸（C2HCl3O2）。

3.1.7聚酰胺固相萃取柱：取1

g聚酰胺粉（層析用，200目），用10

mL水活化，并裝填于帶有適量脫脂棉花的10

mL一次性注射器中。亦可采用商品化固相萃取小柱（1000

mg，6

cc），使用前用水活化，或按商品說明書進行活化操作。

3.2

試劑配制

3.2.1

三氯乙酸溶液（1

%）：稱取10

g三氯乙酸（3.1.6），加1000

mL水溶解。

3.2.2

%甲醇溶液：量取700

mL甲醇（3.1.2），加水定容至1000

mL。

3.2.3無水乙醇-氨水-水溶液（7+1+2，體積比）：量取100

mL氨水（3.1.4），700

mL無水乙醇（3.1.3），水200

mL，混勻。

3.2.4乙酸銨溶液（10

mmol/L）:稱取0.77

g乙酸銨（3.1.5），加入1000

mL水溶解，經0.22

μm水相微孔濾膜過濾后備用。

3.3

標準品：匹可硫酸鈉，其中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量、結構式見附錄A。

3.4

標準溶液配制

3.4.1

標準儲備液（1000

mg/L）：準確稱取匹可硫酸鈉標準品10

mg（精確至0.00001

g），置于10

mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1000

mg/L標準儲備液，4℃避光保存，有效期1個月。

3.4.2

標準使用液（5

mg/L）：取標準儲備液（3.4.1）1

mL于200

mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為5

mg/L的標準使用液，4℃避光保存，有效期7天。

3.4.3

標準系列工作溶液：準確量取標準使用液（3.4.2）適量，用水配制成質量濃度為5

ng/mL、10

ng/mL、50

ng/mL、100

ng/mL、250

ng/mL、500

ng/mL，或依儀器響應和實際情況配制適當濃度的標準系列工作溶液。

3.5

材料

3.5.1

微孔濾膜：0.22

μm，PES濾膜和PTFE濾膜。

儀器與設備

4.1液相色譜-三重四極桿串聯質譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。

4.2

分析天平：感量分別為0.0001

g和0.00001

g

4.3

超聲波水浴。

4.4

恒溫水浴鍋。

4.5

固相萃取裝置。

試樣制備

5.1

果凍、蜜餞、糖果、固體飲料、片劑、硬膠囊劑

取適量代表性樣品（硬膠囊劑取內容物），采用搗碎、剪碎或研碎等方式混勻，裝入潔凈容器中，密封并標記。

5.2

液體飲料

充分混勻，直接取用。

分析步驟

6.1

試樣提取

6.1.1

果凍

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于50

mL離心管中，加入20

mL水，80

℃水浴至膠質溶散，水浴過程中注意搖散，提取液轉移至25

mL容量瓶中，加入2.5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25

mL，待凈化。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.2

蜜餞

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于50

mL離心管中，準確加入40

mL水，超聲提取15

min，8000

r/min離心5

min，上清液轉移至50

mL容量瓶中，用5mL水洗滌殘渣，洗滌液并入同一容量瓶，加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL，待凈化。

6.1.3糖果

6.1.3.1壓片糖果

稱取0.5

g（精確到0.0001

g）試樣于50

mL離心管中，準確加入10

mL

%甲醇溶液（3.2.2），渦旋30

s，超聲提取30

min，8000

r/min離心5

min。取上清液1

mL于5

mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，過PTFE微孔濾膜，待測。可根據實際濃度用水適當稀釋至線性范圍內，供液相色譜-質譜聯用儀分析。

6.1.3.2其他糖果

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于小燒杯中，加入40

mL水，80℃水浴至樣品溶解（膠基糖果水浴15min，水浴過程中注意搖散），轉移至50

mL容量瓶中，用5

mL水洗滌燒杯，洗滌液并入同一容量瓶，加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL，待凈化。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.4

固體飲料

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于50

mL離心管中，加入25

mL水，80℃水浴10

min，8000

r/min離心5

min，收集提取液，加入20

mL水洗滌殘渣，渦旋30

s，8000

r/min離心5

min，合并兩次提取液，于提取液中加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.5

液體飲料

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于25

mL具塞比色管中，加入20

mL水，80℃水浴10

min，放冷后加入2.5mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25

mL。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.6

片劑、硬膠囊劑

同“6.1.3.1壓片糖果”。

6.2

試樣凈化

6.2.1果凍、液體飲料

取10

mL待凈化液至已活化的聚酰胺固相萃取柱（3.1.7）內，待溶液流盡后，依次用10

mL水、15

mL

%甲醇溶液（3.2.2）洗滌，20

mL無水乙醇-氨水-水溶液（3.2.3）洗脫，收集洗脫液于80

℃水浴上蒸發至近干，用水定容至10

mL，過0.22

μm

PES或PTFE濾膜，待測。可根據實際濃度用水適當稀釋至線性范圍內，供液相色譜-質譜聯用儀分析。

6.2.2蜜餞、其他糖果、固體飲料

凈化操作同“5.2.1果凍、蜜餞、液體飲料”，洗脫液于80

℃水浴上蒸發至近干，用水定容至5

mL，過0.22

μm

PES或PTFE濾膜，待測。可根據實際濃度用水適當稀釋至線性范圍內，供液相色譜-質譜聯用儀分析。

6.3

空白試樣

稱取空白試樣適量，與試樣同法處理，制得空白基質溶液。

6.4

儀器參考條件

6.4.1

色譜條件

6.4.1.2色譜柱：C18柱，2.1

mm×100

mm，2.6

μm，或同等性能的色譜柱。

6.4.1.2

流動相：10

mmol/L乙酸銨溶液+乙腈（85+15）

6.4.1.3

流速：0.3

mL/min

6.4.1.4

柱溫：35℃

6.4.1.5進樣量：5

μL

6.4.2質譜條件

6.4.2.1離子源：電噴霧離子源（ESI）。

6.4.2.2

掃描方式：正離子掃描。

6.4.2.3檢測方式：多反應模式（MRM）。

6.4.2.4干燥氣、霧化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應調節相應參數使質譜靈敏度達到檢測要求，噴霧電壓、離子源溫度、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量等參數應優化至最佳靈敏度。

6.4.2.5參考監測離子對和參考參數

表1匹可硫酸鈉定性、定量離子和質譜分析參數參考值

名稱

母離子

子離子

去簇電壓（V）

碰撞能（V）

匹可硫酸鈉

438.2

183.9*

120

438.2

278.2

120

*定量離子對

6.5

試樣測定

將標準系列工作溶液和試樣溶液分別注入高效液相色譜-質譜聯用儀中測定。根據保留時間和相對離子對豐度比定性，外標峰面積定量。

表2

定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度（%）

>50

>20—50

>10—20

≤10

允許的相對偏差（%）

±20

±25

±30

±50

空白試驗

除不加試樣外，均按試樣同法處理。

結果計算

試樣中匹可硫酸鈉的含量按下式計算：

式中：

X—食品中匹可硫酸鈉（以C18H13NNa2O8S2?H2O計）的含量，mg/kg；

c—試品溶液中匹可硫酸鈉（以C18H13NNa2O8S2?H2O計）的濃度，ng/mL；

V—試品稀釋液體積，mL；

1000—單位換算；

m—試品質量，g。

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。

檢測方法的靈敏度、精密度、專屬性

9.1

靈敏度

果凍、蜜餞、其他糖果、飲料取樣量為1

g，稀釋倍數為25時，定量限為0.125

mg/kg，檢出限為0.05

mg/kg；壓片糖果、片劑、硬膠囊劑取樣量為0.5

g，稀釋倍數為50時，定量限為0.5

mg/kg，檢出限為0.2

mg/kg。

9.2精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。

9.3

專屬性

空白試驗應無干擾。

附錄A

匹可硫酸鈉相關信息

表A.1

匹可硫酸鈉名稱、CAS號、分子式、分子量、結構式

名稱

CAS號

分子式

分子量

結構式

匹可硫酸鈉

Sodium

picosulfate

10040-45-6

C18H13NNa2O8S2

481.41

附錄B

標準色譜圖

B.1

標準品總離子流色譜圖（250ng/mL）

B.2標準品提取離子（定量）色譜圖（250ng/mL）

B.3標準品提取離子（定性）色譜圖（250ng/mL）

本方法負責起草單位：廣東省藥品檢驗所

驗證單位：廣東省食品檢驗所（廣東省酒類檢測中心）、廣東省食品工業研究所有限公司（廣東省質量監督食品檢驗站）、國家糖業質量監督檢驗中心、上海食品藥品檢驗所、中國檢驗檢疫科學院、中國食品藥品檢定研究院

主要起草人：何嘉雯、溫家欣、賴宇紅、劉亞雄、羅卓雅、方繼輝

第五篇：實習六 食品中人工合成色素的測定

實習六

食品中人工合成色素的測定

（一）原理

聚酰胺是一種高分子化合物，又稱“尼龍6”，在酸性條件下可與水容性酸性染料牢固結合；在堿性條件下則可解吸色素，用紙層析法或薄層層析法進行分離鑒別后，再與標準比較予以定性、定量。

（二）試劑

1． 聚酰胺粉（尼龍6）200目 2． 正丁醇 3． 無水乙醇 4． 1%氨溶液

5． 乙醇-氨液（9：1）6． 20%檸檬酸

7． 0.1%色素標準貯備液(1mg/ml):精確稱取商品色素胭脂紅、莧菜紅0.1克容于蒸餾水，稀釋至100毫升。

8． 展開劑（臨用現配）正丁醇：無水乙醇：1%氨水（6：2：3）

（三）儀器 9． 沙氏漏斗-G3 10．抽濾瓶：500ml 11．100 ml，500 ml 12．血紅蛋白吸管 13．展開缸

14．玻璃水泵

15．帶塞刻度比色管：10 ml 16．恒溫水浴

17．量筒：25 ml，50 ml 18．天平19．吹風機

20．吸管：1 ml 21．白瓷蒸發皿 22．中速層吸濾紙 23．溫度計 24．PH試紙 25．玻璃棒 26．滴管(四)操作方法

1.樣品處理（汽水類樣品）：將樣品用兩個杯子反復傾倒100次除去CO2，精確吸取樣品50 ml放入100 ml燒杯中，加熱到70℃，備用。2．吸附去雜質：稱取聚酰氨粉1g，加少量水調成糊狀后倒入前處理的70℃的樣品中，充分攪拌使樣液色素全部被吸附，將樣液全部移入沙氏-G3漏斗抽濾，用300ml 70℃ PH=4的蒸餾水分多次洗滌沉淀物，至洗液與原蒸餾水PH相同為止（洗滌過程必須充分攪拌，使所用的洗滌液與聚酰氨粉充分接觸）。3.解吸: 用乙醇氨溶液15mlf分三次洗滌色素，解吸過程時時攪拌直至濾出液無色為止并收集全部解吸液。

4．濃縮: 將色素解吸液置于蒸發皿中在80℃水浴上濃縮至0.5-1ml，轉入10ml刻度試管中，用少量50%乙醇洗滌蒸發皿，洗液并入并入刻度試管中。

5紙層析定性:為了判斷樣品中存在有幾種色素以及是什么色素，必須進行紙層析進行鑒定。經上述濃縮后樣品色素溶液于新華中速層析濾紙（8cm*16cm）距底邊2cm的基線上點樣點樣點的直徑應不超過2毫米為宜，樣點間距離以及左右紙邊各距2厘米。點樣量20微升，同時根據樣品顏色點上色素標準溶液點作對照。用展開劑在展開槽展開（展開前層析缸及濾紙先用相應的溶劑系統平衡10分鐘后再展開）。待溶劑前沿到達離起始線12cm處，將濾紙取出于空氣中晾干，測量各色素點的Rf值，于標準色素Rf值對照確定何種色素（以標準色素斑點Rf值衡量樣品各色素斑點的Rf值是否于標準點在同一條直線上，色素的顏色是否完全一致，就可確定樣品色素屬于何種色素）。

Rf（比移值）=斑點移動距離/溶劑前沿距離 所使用的展開劑有：

1)正丁醇︰無水乙醇︰1%氨水 = 6︰2︰3 2)正丁醇︰吡啶︰1%氨水 = 6︰3︰4 3)異丁醇︰無水乙醇︰水 = 3︰2︰2 6．紙層析定量：將紙色譜的條狀色斑剪下，用少量熱水洗滌數次，洗液移入10ml比色管中，并加水稀釋至刻度，作比色測定用。

分別吸取0.0 0.1 0.2 0.3 0.4ml胭脂紅或莧菜紅色素標準液分別置于10ml比色管中，各加水稀釋至刻度。目視比色。

（五）結果計算

X（g/kg，g/L）=A/（m*V2/V1）

式中 A：測定樣液中色素的含量（mg）

m：樣品質量或體積（g，ml）V1：樣品解吸后總體積（ml）V2：樣液點紙體積（ml）