第一篇：微生物學單元測試

微生物學檢驗16~18、21~31章單元測試題

一、填空（42分）

1．2．螺旋體是一類細長、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運動活潑的型微生物，常用的染色方法是。

3．1956年我國學者表現為不同的存在形式，一種是，一種是。

4．5．病毒屬于必須在內寄生，對不敏感，對敏感。

6．7．HIV在病毒分類學上屬

8．HDV的感染只有在感染了

二、選擇題（32分）

1．測定病毒大小最準確的方法是（）

A 超濾法B 超速離心法C 油鏡D 電鏡

2．對于需要較長時間保存的病毒標本，最適宜的貯存溫度是（）

A-70℃B 25℃C 37℃D 4℃

3．下列哪種方法在病毒感染的實驗室檢查中有“金標準”之稱（）

A ELISAB 病毒分離培養C 免疫熒光D PCR

4．傳染性最強的乙型病毒性肝炎指標是（）

A HBsAg+、HBeAg+、HBeAb-、HBcAb+、HBsAb-

B HBsAg+、HBeAg-、HBeAb+、HBcAb+、HBsAb-

C HBsAg+、HBeAg-、HBeAb-、HBcAb+、HBsAb-

D HBsAg-、HBeAg-、HBeAb+、HBcAb+、HBsAb-

5．關于HIV復制，錯誤的是（）

A 病毒體的包膜糖蛋白刺突gP120與細胞表面受體CD8吸附

B 病毒以RNA為模板，逆向轉錄產生互補的負股DNA，構成RNA：DNA雜交體

C 前病毒利用宿主細胞的轉錄系統進行復制

D 病毒核衣殼經過細胞膜以出芽方式形成完整病毒體

6．對酸穩定，不易被胃酸和膽汁滅活的病毒是（）

A 脊髓灰質炎病毒B 鼻病毒C 副流感病毒D 皰疹病毒

7．下列哪種疾病不由沙眼衣原體引起（）

A 沙眼B非淋菌性尿道炎C鸚鵡熱D 性病淋巴肉芽腫

8．下列哪種試驗屬于密螺旋體抗原試驗（）

A VDRLB USRC TPID RPR

四、簡答（26分）

1．分別簡述HBV、HIV的傳播方式。

2．鑒定病毒時常用的血清學反應有哪幾種？

第二篇：微生物學實驗

細菌群體生長表現為細胞數目的增加或細胞物質的增加。測定細胞數目的方法有顯微鏡直接計數法(direct microscopic count)、平板菌落計數法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。測定細胞物質的方法有細胞干重的測定，細胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測定，代謝產物的測定等。總之，測定微生物生長量的方法很多，各有優缺點，工作中應根據具體情況要求加以選擇。本實驗主要介紹生產、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計數法、平板菌落計數法和光電比濁計數法。

一 顯微鏡直接計數法

（一）目的要求

1．明確血細胞計數板計數的原理。

2．掌握使用血細胞計數板進行微生物計數的方法。

（二）基本原理

顯微鏡直接計數法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。目前國內外常用的計菌器有：血細胞計數板、Peteroff-Hauser計菌器以及Hawksley計菌器等，它們都可用于酵母、細菌、霉菌孢子等懸液的計數，基本原理相同。后兩種計菌器由于蓋上蓋玻片后，總容積為0.02mm3，而且蓋玻片和載波片之間的距離只有0.02mm，因此可用油浸物鏡對細菌等較小的細胞進行觀察和計數。除了用這些計菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細菌學檢查。顯微鏡直接計數法的優點是直觀、快速、操作簡單。但此法的缺點是所測得的結果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點，如結合活菌染色微室培養（短時間）以及加細胞分裂抑制劑等方法來達到只計數活菌體的目的。本實驗以血球計數板為例進行顯微鏡直接計數。另外兩種計菌器的使用方法可參看各廠商的說明書。

用血細胞計數板在顯微鏡下直接計數是一種常用的微生物計數方法。該計數板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個方格網，每個方格網共分為九個大方格，中間的大方格即為計數室。血細胞計數板構造如圖l5-1。計數室的刻度一般有兩種規格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規格的計數板，每一個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計數室的容積為0.lmm3(萬分之一毫升)。

圖15—1 血細胞計數板構造

（一）圖15—2 血細胞計數板構造

（二）A.正面圖；B.縱切面圖； 放大后的方格網，中間大方格為計數室

1.血細胞計數板；2.蓋玻片；3.計數室

計數時，通常數五個中方格的總菌數，然后求得每個中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個大方格中的總菌數，然后再換算成lml菌液中的總菌數。

設五個中方格中的總菌數為A，菌液稀釋倍數為B，如果是25個中方格的計數板，則

1mL菌液中的總菌數=A/5×25×104×B=50000A·B（個）

同理，如果是16個中方格的計數板，1mL菌液中的總菌數=A/5×16×104×B=32000A·B（個）

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母

2．儀器或其他用具 血細胞計數板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細滴管。

（四）操作步驟

l．菌懸液制備

以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當的菌懸液。

2．鏡檢計數室

在加樣前，先對計數板的計數室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數。

3．加樣品

將清潔干燥的血細胞計數板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數室，一般計數室均能充滿菌液。

取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數室不可有氣泡產生。

4．顯微鏡計數

加樣后靜止5min，然后將血細胞計數板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數。

調節顯微鏡光線的強弱適當，對于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計數室方格線，或只見豎線或只見橫線。

在計數前若發現菌液太濃或太稀，需重新調節稀釋度后再計數。一般樣品稀釋度要求每小格內約有5~10個菌體為宜。每個計數室選5個中格(可選4個角和中央的一個中格)中的菌體進行計數。位于格線上的菌體一般只數上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數。計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算樣品的含菌量。

5．清洗血細胞計數板

使用完畢后，將血細胞計數板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢，觀察每小格內是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復洗滌至干凈為止。

（五）實驗報告

l．結果

將結果記錄于下表中。A表示五個中方格中的總菌數；B表示菌液稀釋倍數。

各中格中菌數AB二室平均值菌數/ml

12345

第一室

第二室

2．思考題

(1)根據你的體會，說明用血細胞計數板計數的誤差主要來自哪些方面?應如何盡量減少誤差．力求準確?

(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設計1～2種可行的檢測方法。

二平板菌落計數法

（一）目的要求

學習習近平板菌落計數的基本原理和方法。

（二）、基本原理

平板菌落計數法是將待測樣品經適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經過培養，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個細胞。因此平板菌落計數的結果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計數的結果，現在已傾向使用菌落形成單位(colony-forming units，cfu)而不以絕對菌落數來表示樣品的活菌含量。

平板菌落計數法雖然操作較繁，結果需要培養一段時間才能取得，而且測定結果易受多種因素的影響，但是，由于該計數方法的最大優點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數或污染程度的檢測。

（三）器材

1．菌種 大腸桿菌菌懸液。

2．培養基 牛肉膏蛋白陳培養基。

3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，盛有4.5ml無菌水的試管，試管架，恒溫培養箱等。

（四）操作步驟

l．編號

取無菌平皿9套，分別用記號筆標明10-

4、10-

5、10-6。(稀釋度)各3套。另取6支盛有4.5mL無菌水的試管，依次標是10-

1、10-

2、10-

3、10-

4、10-

5、10-6。

2．稀釋

用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測樣品)，精確地放0.5ml至10-1的試管中，此即為10倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。

OptionsEmail Replies將10-1試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進一步將菌體分散、混勻。吹吸菌液時不要太猛太快，吸時吸管伸人管底，吹時離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內液體外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋。……其余依次類推，整個過程如圖15-3所示。

放菌液時吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結果誤差較大。

3，取樣

用三支1mL無菌吸管分別吸取10-

4、10-5和10-6。的稀釋菌懸液各lmL，對號放入編好號的無菌平皿中，每個平皿放0.2mL。

不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀釋菌液放入平皿臼，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。

圖15—3平板菌落計數操作步驟

4．倒平板．

盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養基與菌液混合均勻，而又不使培養基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。由于細菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養皿后，應盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養基，立即搖勻，否則細菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計數。

待培養基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養箱中培養。

5．計數

培養48h后，取出培養平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數，并按下列公式進行計算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復的平均菌落數×稀釋倍數×5

一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個重復對照的菌落數不應相差很大，否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復對照平板不能少于三個，這樣便于數據統計，減少誤差。由10-

4、10-

5、10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數也不應相差太大。

平板菌落計數法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個連續稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養后所出現的平均菌落數在50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調整。

平板菌落計數法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養基融化后倒平板，待凝固后編號，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺上適當吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實驗臺上20～30min，使菌液滲入培養基表層內，然后倒置37℃的恒溫箱中培養24～48h。

涂布平板用的菌懸液量一般以0.1ml較為適宜，如果過少菌液不易涂布開，過多則在涂布完后或在培養時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。

五、實驗報告

1．結果

2．將培養后菌落計數結果填入下表

稀釋度10-410-510-6

Cfu數/平板123平均123平均123平均

每毫升中的cfu

2．思考題

(1)為什么融化后的培養基要冷卻至45℃左右才能倒平板?

(2)要使平板菌落計數準確，需要掌握哪幾個關鍵?為什么?

(3)試比較平板菌落計數法和顯微鏡下直接計數法的優缺點及應用。

(4)當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里?

(5)用倒平板法和涂布法計數，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養較長時間(48h)后觀察結果?

三 光電比濁計數法

一、目的要求

1．了解光電比濁計數法的原理。

2．學習、掌握光電比濁計數法的操作方法。

二、基本原理

當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定的范圍內，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖15-4)。因此，可用一系列已知菌數的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數標準曲線。然后，以樣品液所測得的光密度，從標準曲線中查出對應的菌數。制作標準曲線時，菌體計數可采用血細胞計數板計數，平板菌落計數或細胞干重測定等方法。本實驗采用血細胞計數板計數。

光電比濁計數法的優點是簡便、迅速，可以連續測定，適合于自動控制。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細胞大小、形態、培養液成分以及所采用的光波長等因素的影響。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數應采用相同的菌株和培養條件制作標準曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經過最大吸收波長以及穩定性試驗來確定。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質的懸液不適合用此法進行測定。

圖15—4 比濁法測定細胞濃度的原理

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母培養液

2．儀器或其他用具 721型分光光度計，血細胞計數板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。

（四）操作步驟

1．標準曲線制作

（1）編號 取無菌試管7支，分別用記號筆將試管編號為1、2、3、4、5、6、7。

（2）調整菌液濃度 用血細胞計數板計數培養24小時的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調整為每毫升1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106、12×106含菌數的細胞懸液。再分別裝入已編好號的1至7號無菌試管中。

（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表

管號12345678

細胞數106/ml

光密度（OD）

每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定

(4)以光密度(OD)值為縱坐標，以每毫升細胞數為橫坐標，繪制標準曲線。

2．樣品測定

將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。

各種操作條件必須與制作標準曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數就不準確。

3．根據所測得的光密度值，從標準曲線查得每毫升的含菌數。

（五）實驗報告

l．結果

每毫升樣品原液菌數=從標準曲線查得每毫升的菌數×稀釋倍數

2．思考題

(1)光電比濁計數的原理是什么?這種計數法有何優缺點?

(2)光電比濁計數在生產實踐中有何應用價值?

(3)本實驗為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實驗中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?

四 大腸桿菌生長曲線的測定

(一)目的要求

1．通過細菌數量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規律，繪制生長線。

2．復習光電比濁法測量細菌數量的方法。

(二)基本原理

大多數細菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細胞每20min分裂一次。將一定量的細菌轉入新鮮液體培養基中，在適宜的條件下培養細胞要經歷延遲期，對數期、穩定期和衰亡期四個階段。以培養時間為橫坐標，以細菌數目的對數或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養條件下所繪制的生長曲線也不相同。測定細菌的生長曲線，了解其生長繁殖規律，這對人們根據不同的需要，有效地利用和控制細菌的生長具有重要意義。

用于測定細菌細胞數量的方法已在上述實驗作了介紹。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養時間細菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖15-5)測定“klett units”值的光度計。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養時間(橫坐標)取樣測定，以測得的klett units為縱坐標，便可很方便地繪制出細菌的生長曲線。如果需要，可根據公式1 klett units=OD/0.002換算出所測菌懸液的OD值。

圖15—5 帶側臂試管的三角燒瓶

(三)器材

1．菌種 大腸桿菌

2．培養基 LB液體培養基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。

3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。

圖15—6 直接用試管測OD值

(四)操作步驟

1．標記

取11支無菌大試管，用記號筆分別標明培養時間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。

2．接種

分別用5ml無菌吸管吸取2.5ml大腸桿菌過夜培養液(培養10~12h)轉入盛有50ml LB液的三角瓶內，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標記的11支無菌大試管中。

3．培養

將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(振蕩頻率250r/min)，分別培養0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標有相應時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。

4．比濁測定

用未接種的LB液體培養基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。從早取出的培養液開始依次測定，對細胞密度大的培養液用LB液體培養基適當稀釋后測定，使其光密度值在0.1~0.65之內(測定OD值前，將待測定的培養液振蕩，使細胞均勻分布)。

本操作步驟也可用簡便的方法代替：

1．用1ml無菌吸管取0.25ml大腸桿菌過夜培養液轉入盛有3~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調零點，測定樣品中培養0h的OD值。測定完畢后，取出試管置37℃繼續振蕩培養。

2．分別在培養0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養物試管按上述方法測定OD值。該方法準確度高、操作簡便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準確度愈高。

(五)實驗報告

1．結果

(1)將測定的OD600值填入下表：

培養時間對照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值OD600

(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。

2．思考題

(1)如果用活菌計數法制作生長曲線，你認為會有什么不同？兩者各有什么優缺點？

(2)細菌生長繁殖所經歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細胞密度為103/ml，培養4.5h后，其密度高達2×108/ml，計計算出其代時。

(3)次生代謝產物的大量積累在哪個時期？根據細菌生長繁殖的規律，采用哪些措施可使次生代謝產物積累更多？

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第三篇：環境微生物學

一．緒論

1）微生物：微生物是肉眼看不見的，必須在電子顯微鏡或光學顯微鏡下才能看見的所有微小生物的總稱。

2）微生物的特點：1個體極小2分布廣種類繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區別：真核微生物有發育完好的細胞核，原核微生物只有擬核。第一章

4）病毒：病毒是沒有細胞結構，專性寄生在活的敏感宿主體內的超微小生物。

5）病毒的特點：只能在電子顯微鏡下看見。沒有核糖體，沒有酶系統，不具備代謝能力，必須專性寄生在活的敏感宿主細胞內。

6）病毒的分類：按專性宿主分類：動物病毒，植物病毒，細菌病毒，放線菌病毒，藻類病毒，真菌病毒。按核算分類：DNA病毒，RNA病毒。7）類病毒：類病毒是比病毒更加小的致病感染因子。

8）朊病毒：朊病毒是一種引起牛，羊疾病的感染因子（蛋白質感染顆粒）。9）病毒的繁殖過程：1吸附2侵入3復制與聚集4宿主細胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細胞后，隨即引起宿主細胞裂解的噬菌體。溫和噬菌體，侵入宿主細胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復制，宿主細胞不裂解而繼續生長，不引起宿主細胞裂解。含有溫和噬菌體宿主細胞被稱作溶原細胞。溶原細胞內的溫和噬菌體核酸，稱為原噬菌體。

11）噬菌體：噬菌體是感染細菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。第二章

12）細菌的形態：球狀，桿狀，螺旋狀和絲狀。分別稱為球菌，桿菌，螺旋菌和絲狀菌。13）細菌：一大類細胞核無核膜包裹，只存在稱作擬核區的裸露DNA的原始單細胞生物。14）細菌的結構：細菌為單細胞結構，所有的細菌均有如下結構：細胞壁，細胞質膜，細胞質及其內含物，擬核。部分細菌有特殊結構：芽孢，鞭毛，莢膜，黏液層，衣鞘及光合作用片等。

15）細胞壁：細胞壁是包圍在細菌體表最外層的，堅韌而有彈性的薄膜。16）原生質體：原生質體包括細胞質膜，細胞質及其內含物，擬核。

17）細胞質膜：細胞質膜是緊貼在細胞壁的內側而包圍細胞質的一層柔軟而富有彈性的膜。（半滲透膜），含有蛋白質，脂質和多糖。脂質是由磷脂，甘油，脂肪酸和含氮堿組成。18）細胞質膜的生理功能：1,維持滲透壓的梯度和溶質的轉移2，膜上含有合成細胞壁和形成橫膈膜組分的膜，故在膜的外表面合成細胞壁3，膜內的中間體含有細胞色素，參與呼吸作用。4，細胞質膜上含有酶，進行物質代謝和能量代謝5，細胞質膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長出，為鞭毛提供附著點。19）核糖體;合成蛋白質

20）擬核：細胞的核因沒有核膜和核仁，故稱為原始核或擬核。21）鞭毛：有細胞質膜上的鞭毛基粒長出穿過細胞壁伸向體外的一條纖細的波浪狀的絲狀物叫鞭毛。

22）細菌的染色方法簡單染色法和復合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無菌的條件下，用接種環挑取少量細菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。2用草酸銨結晶紫染色1MIN，水洗去掉浮色。3用碘-碘化鉀溶液媒染1MIN，傾去多余染液。4用中性脫色劑如乙醇或丙醇脫色，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。5，用番紅溶液復染1MIN，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現紅色。24）革蘭氏染色的機制：1）革蘭氏染色與細菌等電點有關系：革蘭氏陽性菌的等電點比革蘭氏陰性菌的等電點低，說明革蘭氏陽性菌帶的負電荷比革蘭氏陰性菌多。革蘭氏陽性菌的等電點低，與草酸銨結晶紫結合的牢固，對乙醇脫色抵抗力強，所以革蘭氏陽性菌呈紫色。2，革蘭氏染色與細胞壁有關：革蘭氏陽性菌的脂質的含量很低，肽聚糖含量高，革蘭氏陰性菌則相反，因此用乙醇脫色時革蘭氏陰性菌的脂質被乙醇溶解，增加細菌細胞壁的孔徑和通透性，乙醇很易進入細胞內將結晶紫和碘-碘化鉀復合物提取出來，噬菌體呈現無色。3,*革蘭氏陽性菌含特殊的RNA-Mg2+鹽與革蘭氏染色有關。25）放線菌：放線菌因在固體培養基上呈輻射狀生長而得名。分為三類營養菌絲，氣生菌絲，孢子絲。

26）放線菌的結構：放線菌的菌體由纖細的，長短不一的菌絲組成，菌絲分枝，為單細胞，在菌絲生長過程中，核物質不斷復制分裂，然后細胞不形成橫膈膜，也不分裂，而是無數分枝的菌絲組成很細密的菌絲體。第三章

27）原生動物：原生動物是動物中最原始，最低等，結構最簡單的單細胞動物。28）原生動物的營養類型：1全動性營養2植物性營養3腐生性營養

29）原生動物的繁殖：有性生殖和無性生殖（二分裂發，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動物的作用：所有原生動物在污水生物處理過程中都起著指示生物的作用。31）主要的原生動物：P71 32）微型后生動物：原生動物以外的多細胞動物叫后生動物。因有些后生動物體型微小，要借助光學顯微鏡方可看得清楚，故叫微型后生動物。33）藻類的繁殖;有性生殖和無性生殖。P84 34）真菌：真菌屬低等生物，種類繁多，形態，大小各異，包括酵母菌，霉菌及各種傘菌。真菌屬真核微生物，有單細胞和多細胞之分。

35）酵母菌：酵母菌是單細胞真菌。分發酵型和氧化型兩種。氧化型的酵母菌則是無發酵能力或發酵能力弱而氧化能力強的酵母菌。球擬酵母菌，白色假絲酵母菌，類酵母的阿氏囊霉屬，短梗霉屬在石油加工業中起積極作用，如石油脫蠟，降低石油的凝固點等。處理廢水及用酵母菌檢測重金屬。

36）酵母菌的繁殖：有性生殖和無性生殖（芽生殖和裂殖)37）霉菌：分為腐生和寄生

38）霉菌的繁殖：有性孢子和無性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。39）傘菌：無毒的有機廢水可用于培養食用菌的菌絲體。40）酶：酶是由細胞產生的，能在體內或體外起催化作用的一類具有活性中心和特殊構想的生物大分子。

41）酶的分類：化學組分；單成分酶（只含有蛋白質）和全酶（蛋白質及輔基或輔酶的熱穩定的非蛋白質小分子有機物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時存在起作用）

42）全酶的分類：1酶蛋白+非蛋白質小分子有機物2酶蛋白+非蛋白質小分子有機物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子

43）酶的分類：六類，氧化還原酶，轉移酶，水解酶類，裂解酶類，異構酶類和合成（連接）酶類。

44）酶的反應通式：氧化還原酶類：AH2+B=A+BH2

轉移酶類：AR+B=A+BR

水解酶類：AB+H2O=AOH+BH

裂解酶類：AB=A+B

異構酶：---------葡萄糖=果糖（例）

合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi

或

A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專一性（只作用一種或以類物質）3酶的催化反應條件溫和4酶對環境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高

46）酶促反應的動力學方程式：

E酶S底物ES中間產物P最終產物

47）酶的濃度對酶促反應速率的影響：下圖

48)底物濃度對酶促反應速率的影響：P116 49)溫度對酶促反應速率的影響：上圖 50)PH對酶促反應速率的影響：P117 51)激活劑對酶促反應速率的影響：凡能激活酶的物質稱酶的激活劑。分為無機離子激活劑和有機化合物兩類。

52)抑制劑對酶促反應速率的影響：引起抑制作用的物質稱為酶的抑制劑。抑制作用是指由于某些物質與酶的活性部位結合。分為不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。

53)培養基;根據各種微生物對營養的需要，包括水，碳源，能源，氮源，無機鹽及生長因子等按一定的比例配置而成的，用以培養微生物的基質，稱為培養基。

54)培養基配制的原則：1不同微生物，不同培養基2各種營養物的濃度及配比3調PH值4考慮加生長因子5培養基物美價廉

55)培養基的種類：按培養基組成物的性質分類：合成培養基，天然培養基（天然有機物配制而成的培養基），復合培養基。按物理性質分為;液體培養基，半固體培養基，固體培養基。根據培養基對微生物的功能和用途不同：選擇培養基，鑒別培養基，加富培養基。56)營養物質進入微生物細胞的方式：單純擴散，促進擴散，主動運輸，基團轉位

57)單純擴散：單純擴散是物理過程，不包括細胞的主動代謝。雜亂運動的，水溶性的溶質分子（水，無機鹽，O2，CO2）通過細胞質膜中含水的小孔從高濃度區向低濃度區擴散，不與膜上的分子發生反應，這種擴散是非特異的，擴散速度慢。

58)促進擴散：細胞膜上的載體蛋白分子有和被運輸物質特異結合的位置，這樣載體在膜的外表面能夠和物質結合，形成的底物-載體蛋白復合體，便從高濃度向低濃度區域擴散或越膜。由于被運輸物質的濃度在膜的內表面較低，所以復合體傾向解離，被運輸的物質就留在細胞內，而載體回到膜的外表面，只要存在需要運輸物質的越膜濃度梯度，這個過程就將繼續進行，從而加快了物質的運輸速度。不消耗能量。

59)主動運輸：當微生物細胞內積累的營養物質濃度高于細胞外的濃度時，營養物質就不能按濃度梯度擴散到細胞內，而是逆濃度梯度被“抽”進細胞內。這一過程需要滲透酶和消耗能量。滲透酶在此過程中起改變平衡點的作用，這種需要能量和滲透酶的逆濃度梯度積累營養物質的過程。60)基團轉位：基團轉位是存在于某些原核生物中的一種物質運輸方式。與主動運輸相比，有一個復雜的運輸系統，被運輸的物質發生了化學變化，主要用于糖的運輸，運輸總效果與主動運輸相似，可以逆濃度梯度將營養物質移向細胞內，結果使細胞內結構發生變化的物質濃度大大超過未改變結構的同類物質的濃度。需要代謝能量。61)微生物的能量代謝：P135-P150

62）微生物的生長：微生物在適宜的環境條件下，不斷吸收營養物質，按照自己的代謝方式進行新陳代謝活動。正常情況下，同化作用大于異化作用，微生物的細胞質量不斷迅速增長，稱為生長。

63）微生物的發育：從生長到繁殖這個由量變到質變的過程叫發育 64）代時：細菌兩次細胞分裂之時的時間。65）生長曲線：

66)微生物的生存因子：微生物除了需要營養外，還需要環境中合適的生存因子，例如：溫度，PH，氧化還原電位，溶解氧，太陽輻射，活度與滲透壓，表面張力等。

67)根據微生物對溫度的最適生長需求，可將微生物分為4大類：嗜冷菌，嗜中溫菌，嗜熱菌及嗜超熱菌。

68)大多數細菌，藻類和原生動物的最適PH為6.5-7.5，他們對PH的適應范圍為4-10。69)任何兩種濃度的溶液被半滲透膜隔開，均會產生滲透壓。

70)微生物之間的關系：微生物之間的關系有種內的關系和種間的關系。相同種內的關系有競爭和互助。不同種間關系有6種，競爭關系，原始合作關系，共生關系，偏害關系，捕食關系，寄生關系。

71)競爭關系：競爭關系是指不同的微生物種群在同一環境中，對食物等營養，溶解氧，空間和其他共同要求的物質互相競爭，互相收到不利影響。

72)原始合作關系：原始合作關系是指兩種可以單獨生活的生物共存于同一環境中，相互提供營養及其他生活條件，雙方互為有利，相互受益。當兩者分開時各自可單獨生存。

73)共生關系：共生關系是指兩種不能單獨生活的微生物共同生活于同一環境中，各自執行優勢的生理功能，在營養上互為有利而所組成的共生體，這兩者之間的關系就叫共生關系。74)偏害關系：共存于同一環境的兩種微生物，甲方對乙方有害，乙方對甲方無任何影響。一種微生物在代謝過程中產生一些代謝產物，其中有的產物對一種（或一類）微生物生長不利，或者抑制或者殺死對方。上述這種微生物與微生物之間的對抗關系叫偏害關系。分非特異性偏害和特異性偏害。

75)捕食關系：有的微生物不是通過代謝產物對抗對方，而是吞食對方，這種關系稱為捕食關系。

76)寄生關系：一種生物需要在另一種生物體內生活，從中社區營養才得以生長繁殖，這種關系成為寄生關系。77)微生物在土壤中的分布：土壤中微生物的類群、數量與分布，由于土壤質地發育母質、發育歷史、肥力、季節、作物種植狀況、土壤深度和層次等等不同而有很大差異。土壤微生物中細菌最多，作用強度和影響最大，放線菌和真菌類次之，藻類和原生動物等數 量較少，影響也小。土壤中微生物的水平分布取決于碳源。土壤中微生物的垂直分布與紫外輻射的照射，營養，水，溫度等因素有關。78)遺傳和變異是一切生物最本質的屬性。

79)遺傳有保守性，是微生物在它的系統發育過程中形成的系統。80)遺傳可改變的一面是變異

81)遺傳是相對的，變異是絕對的。82)遺傳和變異的物質基礎DNA：P203 83)基因突變：基因突變即微生物的DNA被某種因素引起堿基的缺失，置換或插入，改變了基因內部原有的堿基排列順序，從而引起其后代表現型的改變。當后代突然變現和親代顯然不同的，能遺傳的性狀時，就稱為突變。

84)自發突變：自發突變是指某種微生物的自然條件下，沒有人工參與而發生的基因突變。原因有多因素低劑量的誘變效應，互變異構效應。

85)誘發突變：誘發突變是利用物理或化學的因素處理微生物群體，促使少數個體細胞的DNA分子結構發生變化，在基因內部堿基配對發生錯差，引起微生物的遺傳性狀發生突變。分物理誘變，化學誘變，復合處理及其協同效應，定向培育和馴化。

86)基因重組：兩個不同形狀個體細胞的DNA融合，使基因重新組合，從而發生遺傳變異，產生新品種，此過程稱為基因重組。

87)雜交;雜交是通過雙親細胞的融合，使整套染色體的基因重組；或者是通過雙親細胞的溝通，使部分染色體基因重組。

88)轉化：受體細胞直接吸收來自供體細胞的DNA片段，并把它整合到自己的基因組里，從而獲得了供體細胞部分遺傳性狀的現象，成為轉化。

89)轉導;通過溫和噬菌體的媒介作用，把供體細胞內特定的基因攜帶至受體細胞中，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現象，稱為轉導。

90)質粒：質粒在原核微生物中除有染色體外，還含有另一種較小的，攜帶少量遺傳基因的環狀DNA分子，稱為質粒，也叫染色體外DNA。質粒在基因工程中常被用作基因轉移的運載工具-載體。

91)基因工程：基因工程是指在基因水平上的遺傳工程，又叫基因剪接或核酸體外重組。基因工程是用人工方法把所需要的某一供體生物的DNA提取出來，在離體的條件下用限制性內切酶將離體DNA切割成帶有目的的基因的DNA片段，每一段平均長度有幾千個核苷酸，用DNA連接酶把它和質粒的DNA分子在體外連接成重組DNA分子，然后將重組體導入某一受體細胞中，以便外來的遺傳物質在其中進行復制，擴增和表達，再進行重組體克隆的篩選和鑒定；最后對外源基因表達產物進行分離提純，從而獲得新品種。92)基因工程操作分5步：1先從供體細胞中選擇獲取帶有目的基因的DNA片段（基因分離）； 2將目的DNA的片段和質粒在體外重組；（體外重組）3將重組體轉入受體細胞（載體傳遞）；4重組體克隆的篩選與鑒定（復制表達）；5外源基因表達產物的分離與提純（篩選，繁殖）

93）天然淡水水體是人類生活和工業生產用水的水源，也是水生動物和植物生長繁殖的場所。

94）水體自凈過程;1有機污染物排入水體后被水體稀釋，有機和無機固體物沉降至河底。2水體中好氧細菌利用溶解氧把有機物分解為簡單有機物和無機物，并用以組成自身有機體，水中溶解氧急速下降至零，此時魚類絕跡，原生動物，輪蟲，浮游甲殼動物死亡，厭氧細菌大量繁殖，對有機物進行厭氧分解。3水體中溶解氧在異樣菌分解有機物時被消耗，大氣中的氧剛溶于水就被迅速用掉，盡管水中藻類在白天進行光合作用放出氧氣，但復氧速率小于耗氧速率，氧垂曲線下降。在最缺氧點，有機物的耗氧速率等于河流的復氧速率。再往下游的有機物減少，復氧速率大于耗氧速率，氧垂1曲線上升。如果河流不再被有機物污染，河水中溶解氧恢復到原來的水平，甚至達到飽和。4隨著水體的自凈，有機物缺乏和其他原因（例如陽光照射，溫度，PH變化，毒物及生物的抗潔作用等）使細菌死亡。據測定，細菌死亡數大約為80%-90%.95）碳循環：

96）脂質的轉化：P274 97）氮循環：P278 98）顯微鏡的分辨率：指顯微鏡能分辨出物體兩點間的最小距離

分辨力=0.61xλ/N.A.計算題

采用目鏡為16X，物鏡為40/0.65的光學系統，直徑為0.3μm的微生物在顯微鏡下是否可分辨 解：

分辨率=0.61xλ/N.A.由題目知：N.A.=0.65

λ=0.55

分辨率=0.61x（0.55/0.65）=0.516μm>0.3μm

不可分辨

第四篇：微生物學實驗報告

微 生 物 學 實 驗 報 告（格式標準）

(生命科學專業)

教 師：黎 勇

目錄索引

實驗一 油鏡的使用和細菌的簡單染色法 3

實驗二 細菌的革氏染色與芽孢染色 5

實驗三 常用培養基的配制 7

實驗四 酵母菌霉菌的形態結構觀察及酵母死活細胞的鑒別 8

實驗

五、微生物大小的測定與顯微計數 10

實驗六 環境中微生物的檢測和分離純化 11

實驗七 細菌鑒定中常用的生理生化反應 12

實驗八（綜合實驗）化能異養微生物的分離與純化 13

課程名稱： 微生物學

實驗班級：化生系生命科學本科

實驗日期：

指導教師：黎勇 實驗一 油鏡的使用和細菌的簡單染色法

〔目的要求〕學習并熟練掌握油鏡的使用技術；觀察細菌的基本形態；學習觀察細菌的運動性的基本方法。

〔基本原理〕

1.N2A=n2sinα

2.D=λ/2N.A

3.目鏡可提高放大倍數，但有效放大率取決于鏡口率。已經分辨的物體不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。

4.用懸滴法或凹玻片法觀察細菌的運動性時，可以通過真運動能定向地由一處快速運動來區別于顆粒的布朗運動。

〔器材用具〕顯微鏡、載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水紙、擦鏡紙；細菌、放線菌等固定裝片；培養18小時左右的B.subtilis.S.arueus菌斜面培養物；無菌水、生理鹽水。

〔方法步驟〕：

（一）油鏡的使用

鏡檢裝片在中倍（或高倍鏡）下找到目的物，并使位于視野正中

聚光鏡上升到最高位置，虹彩光圈開到最大，鏡頭轉開成八字形

在玻片的鏡檢部位（光斑處）滴一滴香柏油

油鏡轉入正下方

側視小心上升載物臺（縮短鏡頭與裝片距離，鏡頭浸入油中，至油圈不擴大為止鏡頭幾與裝片接觸）粗調器徐徐下降載物臺（密切注視視野，當捕捉到物像時，立即用細調器校正）仔細觀察并繪圖

取出裝片，清洗油鏡：擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油

擦鏡紙沾少許二甲苯擦去殘留（用手指輔助，迅速拭擦一、二次）

用清潔擦鏡紙仔細擦干二甲苯（2-3次）。

（二）細菌的簡單染色法：涂片

干燥

火焰固定

染色

水洗

干燥

油鏡觀察

（三）細菌運動性的觀察 取潔凈蓋玻片，四周涂上凡士林

滴加一小滴菌懸液

凹玻片的凹窩向下蓋于蓋玻片上

翻轉觀察

〔結果分析〕

1、畫一圓圈表示視野，選取所觀察的微生物繪圖，注意特殊結構、形狀和排列。（描繪時按視野實際大小5－10倍繪制）

菌名：大腸桿菌

菌名：金黃色葡萄球菌

放大倍數：100310（35）

放大倍數：100310（35）

特殊結構：無 特殊結構：無

視野觀察下微生物的形態

2、油鏡使用時為什么必須干燥裝片？

防止水油分層，光受到折射而影響油鏡性能的發揮

〔實驗討論〕

首次實驗中有幾個要點：一是按無菌操作取用菌；二是涂片技術的掌握；三是油鏡使用技術。凡實驗中學生的所思所想，如無菌操作技術要點、自行處理實驗材料、失敗與思考等均可進行討論（如涂片時蒸餾水不宜過多、取用菌時防止菌被灼燙變形、取菌宜少不宜多等均是可以討論的內容）。

實驗二 細菌的革氏染色與芽孢染色

〔目的要求〕觀察細菌菌落的特征；掌握簡單染色法、革蘭氏染色法的原理及操作步驟；在油鏡下觀察細菌個體形態；學習環境中微生物的檢查方法，并加深對微生物分布廣泛性的認識

〔器材用具〕E.coliB.subtilisS.aureus.的斜面培養物（18－24小時）以及菌落平板各一個；染液：草酸銨結晶紫、劃蘭氏染液、盧戈氏碘、95%的乙醇、蕃紅；無菌水、顯微鏡、載片、濾紙、液體石蠟是、、擦鏡紙、接種環。

〔方法內容〕：

（一）實驗室環境中微生物的檢查

（二）革蘭氏染色法 涂片固定

冷卻

結晶紫染色1min 水洗

碘媒染1min 95%乙醇30-60s 水洗

番紅復染2－3min

水洗

干燥

油鏡鏡檢

（三）芽孢染色 涂片固定

孔雀綠加熱染色（勿干）5min 水洗

番紅復染1min

水洗

鏡檢

〔結果分析〕實驗結果被染成紫色者即為革蘭氏陽性，被染成紅色者為革蘭氏陰性；菌體染成紅色，芽孢被染成綠色。

菌名：大腸桿菌

菌名：金黃色葡萄球菌

放大倍數：100310（35）

放大倍數：100310（35）

染色反應：紅色（陰性）染色反應：紫色（陽性）

菌名：枯草芽孢桿菌

放大倍數：100310（35）

染色反應：紫色（陽性）

圖1 視野觀察下細菌的革蘭氏染色反應

圖2 枯草芽孢桿菌芽孢形態圖

〔實驗討論〕

嚴格掌握脫色程度，是成敗的關鍵。若脫色時間過度，則陽性菌初時之紫色脫出，復染成紅色，誤成陰性，反之脫色時間不足，陰性菌在初染時的紫色未能脫出，復染時不能染成紅色，誤以為陽性菌；涂片不能厚；盧弋氏碘即用即配。

作業

1、繪出所觀察到到細菌的視野圖，并說明染色反應。

2、哪些因素會影響到革蘭氏染色結果的正確？其中是關鍵的一步是什么？ 菌齡及培養條件和染色技術是最主要的，關鍵是脫色。

3、怎樣對未知菌進行革蘭氏染色，以證明你的結果的正確？

與已知菌混合涂片比較。

實驗三 常用培養基的配制

〔目的要求〕了解培養基的配制原理；了解培養基常規配制程序；了解培養基過程各環節的要求和注意事項。了解半合成培養基的配制原理，學習掌握肉膏蛋白胨培養基、馬鈴薯培養基的配制方法。

〔器材用具〕等配各種培養基的組成成分，瓊脂、1N NaoH溶液 1N HCl天平或臺秤高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養皿、玻璃漏斗等。藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙報紙等。

〔方法步驟〕

(一)玻璃器皿的洗滌和包裝 以小組為單位清洗、控水，按9個為一組，分別用報紙包好并放入烘箱中等待滅菌。

(二)液體及固體培養基的配制過程

原料稱量（按配方次序）

溶解

調節ｐH 過濾澄清

分裝

塞棉塞和包札

滅菌

分別按教材配方配制牛肉膏蛋白胨、馬鈴薯液體及固體培養基。

(三)培養基的分裝 用玻璃漏斗，橡皮管，小玻璃管及彈簧夾制作分裝裝置

選用153150平口試管或150mL錐形瓶貼上標簽

分裝（至試管高度1/4-1/3，斜面制作用1/5，半固體用1/3）

要求：每人制作斜面3支。其余分裝至錐形瓶中。

(四)棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎 分別制作試管及錐形瓶棉塞并塞好好以牛皮紙包裝頭部。

(五)培養基的滅菌 培養基用濕熱法滅菌；皿用干熱法分別滅菌。

(六)斜面和平板的制作（下次試驗完成）

(七)培養基的無菌檢查（下次實驗完成）

(八)無菌水的制備 同時制作無菌生理鹽水，置錐形瓶中備用。

〔結果分析〕

以斜面接種培養驗證培養基配制效果；

以平板制作及接種24小時培養驗證滅菌效果；

簡述移液管包裝的注意事項。

〔實驗討論〕

滅菌器的滅菌效果必須間隔一段時間，加以驗證，主要方法除無菌檢查外，還通過壓力試紙同時滅菌來驗證其壓力與溫度；培養基通常成批制作備用。但制作后，其貯藏時間有一定限制，一般室溫條件下不超過三周；冰箱4℃條件下可貯藏半年，過期不能用。

作業：

1、記錄培養基的成分和名稱

2、分析所配制培養基的碳源、氮源、能源及無機鹽、維生素的來源。所配制均為天然培養基，各成分主要來自有機質，微量元素可以由自來水提供。

3、什么是天然培養基？什么是半合成、合成培養基？

實驗四 酵母菌霉菌的形態結構觀察及酵母死活細胞的鑒別

〔目的要求〕觀察并掌握酵母菌霉菌的菌落特征、個體形態、生長及繁殖方式。學習酵母死活細胞的鑒別方法。

〔材料用具〕釀酒酵母、紅酵母、假絲酵母；(釀酒酵母和紅酵母菌落平板各一個。釀酒酵母豆芽汁斜面及釀酒酵母醋酸鈉斜面各一支，假絲酵母加蓋片培養的平板)；7.6%孔雀綠染液，0.5%蕃紅染液，蘇丹黑染液，二甲苯，中性紅染液，碘液；目鏡測微尺、鏡臺測微尺；載片及蓋片。

〔方法步驟〕

(一)菌落特征的觀察

(二)個體形態與出芽

(三)子囊孢子的觀察

(四)酵母死活細胞的觀察。

〔結果分析〕描述釀酒酵母霉菌的菌落形態特征；繪圖釀酒酵母的菌體、出芽方式及細胞細節；

（一）酵母的菌落濕潤，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；

菌名：釀酒酵母

放大倍數：100310（35）

特殊結構：芽（出芽繁殖）

（二）霉菌

菌落特征：干燥，正反面及中央與邊緣不一致；大而疏松。

（如右圖）

菌名：青霉（Penicillium）

菌名：毛霉（Circinella）

放大倍數：100310（35）

放大倍數：100310（35）

特殊結構：分生孢子梗（帚狀分枝）

特殊結構：孢子囊

菌名：曲霉（Aspergillus）

菌名：根霉（Rhizopus）

放大倍數：模式圖

放大倍數：100310（35）

特殊結構：足細胞 特殊結構：假根

〔實驗討論〕

作業：

1、繪圖說明所觀察到的酵母菌、霉菌的形態特征。

實驗

五、微生物大小的測定與顯微計數

〔目的要求〕學習并掌握用測微尺測定微生物細胞大小的方法；了解血細胞計數板的構造及計數原理，掌握使用血細胞計數板進行微生物計數的方法。

〔材料用具〕啤酒酵母；顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺；血球計數板；蓋玻片，載玻片，滴管，試管，無菌水，〔方法步驟〕

(一)酵母細胞大小測定

(1)目鏡測微尺的校正(2)細胞大小的測定

(二)顯微計數法

(1)鏡檢計數室

(2)菌懸液制備及加樣

(3)計數

(4)清洗計數板

〔結果分析〕結果記錄入表中。

1、目鏡測微尺的標定結果（精確到零點幾小格）物鏡倍數

（目鏡均為10倍）目鏡測微尺的格數（小格）

鏡臺測微尺的格數（小格）

目鏡測微尺的每格的長度（μm）40倍

2、酵母菌大小測定結果 菌號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 目鏡測微尺的格數（小格）長軸

短軸

酵母大小平均值＝±（保留小數點后2位）

長軸＝

3、血細胞計數板對酵母菌懸液計數結果 實驗次數 各中格中菌數 總菌數 稀釋倍數平均值

菌數(個/mL)1

短軸＝

〔實驗討論〕

作業：

1.什么更換不同放大倍數的目鏡和物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺校正。2..根據實驗體會說明血細胞計數法的誤差主要來自哪些方面？如何減少誤差？ 3..在滴加菌液時，為什么要先置蓋玻片然后滴加菌液？能否先加菌液再置蓋玻片？ 4..用血球計數板測定微生物數量時，哪些步驟易造成誤差？如何預防？計算細胞數目時此法是否可以適用？ 實驗六 環境中微生物的檢測和分離純化 〔目的要求〕

1、學習并掌握各種無菌操作技術，并用此技術進行微生物的劃線分離接種

2、學習掌握平板菌落計數法 〔基本原理〕

土壤是微生物生活的大本營，是生物多樣性的重要場所，也是發揚微生物資源的重要基地，可以從中分離純化得到許多的菌株。劃線法是常用的分離與純化方法，通過無菌操作條件下，“漸劃漸稀”的效應而得到菌落純的菌株。

平板菌落計數法是將待測樣品經過適當稀釋，使其中的微生物充分分散形成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經過培養，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品含菌量。這種方法為活菌計數法，廣泛應用于生物制品及污染程度（含菌指數）的檢測。

〔材料與用品〕

土樣10g，無菌平皿（20套）及無菌水，牛肉膏蛋白胨平板（2只）；取液器（0.5mL及1mL各三支）；無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環，記號筆，酒精燈，火柴，試管架 〔方法步驟〕

1、周圍環境中微生物的檢測

平板分4個區做好標記

用未洗的手指及肥皂洗過的手指（1次、2次、3次，或其它）分別在四個區上涂抹

倒置到37℃培養24小時觀察結果。

2、土壤中微生物分離純化及平板計數

采土樣（5－20cm）土10g，裝入到已滅菌的牛皮袋（信封）中，封好袋口

1.0g加入99mL無菌水（三角瓶）中

1mL無菌吸管0.5mL加入到4.5mL無菌水試管中，吹吸三次，振蕩均勻(10-3)。同法得10－4－10－6土壤溶液

用接種環沾取10-2土壤懸液在已經凝固的平板表面進行劃線分離

分別取各濃度土壤懸液0.1mL對號均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉膏蛋白胨平板，用無菌涂棒涂勻（多涂幾遍）。每個濃度做3個平板。〔結果分析〕

1、有較大片菌苔生長時，棄用。

2、選擇平均菌落數在30－300之間的平板。只有一個濃度符合此范圍時，以該平均菌落數為準；有兩個濃度的平板菌落數在30－300之間時，按兩者的總數平均決定，比值小于2，取平均，比值大于2則取較少的菌落總數。所有菌落數大于300，取稀釋度最高的平均菌落數乘稀釋倍數；所有菌落數均小于30，取稀釋度最低的平均菌落數乘稀釋倍數（即當所有菌落數均不在30－300之間時，此實驗的精確度要求下，可以最接近30或300的菌落數乘稀釋倍數）。

〔實驗討論〕

土壤中的菌數量在哪個數量級？你分離的微生物主要有哪些種類？為什么？

105數量級，主要是細菌，也有酵母。主要通過其菌落特征來判斷。細菌的菌落為濕潤，其正反面顏色一般一致，普遍比較小。酵母的菌落濕潤，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；而霉菌菌落特征：干燥，正反面及中央與邊緣不一致；大而疏松。

實驗七 細菌鑒定中常用的生理生化反應

〔目的要求〕了解細菌生理生化反應原理，掌握細菌鑒定中常用的生理生化反應方法；通過對不同細菌對不同含碳、氮化合物的分解利用情況，了解基代謝多樣性；學習不同培養基基中的不同生長現象及其代謝產物在鑒別細菌中的意義。

〔實驗原理〕各種細菌所具有的酶系統不盡相同，對營養基質的分解能力也不一樣，因而代謝產物存在差別。細菌的這種代謝方式可供鑒別細菌之用。用生理生化試驗的方法檢測細菌對各種基質的代謝作用及其代謝產物，從而鑒別細菌的種屬，稱為細菌的生理生化反應。有些細菌能發酵葡萄糖，而不能分解乳糖；有些細菌能分解某種糖產生有機酸和氣體；有的細菌則只產酸不產氣。在配制培養基時預先加入溴甲酚紫（ｐH4.4紅色～ｐH6.2黃色），當發酵產酸時，培養基由紫色變黃，氣體的產生則可由試管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來判斷。大腸桿菌不產生丁二醇，V.P.試驗為陰性。其進行混合酸發酵，故甲基紅試驗為陽性。產氣桿菌則進行丁二醇發酵，V.P試驗為陽性，甲基紅試驗為陰性。

〔材料用具〕E.coli，變形桿菌，枯草芽孢桿菌，產氣桿菌，糞水中分離的未知菌種斜面，糖發酵培養基；超凈工作臺，恒溫培養箱，試管，移液管，杜氏小管。甲基紅試劑、V.P.試劑。

〔實驗步驟〕各取4支相應的培養基，標記好發酵培養基的名稱、所接菌種名及組號，1支接大腸桿菌，1支接變形桿菌，1支接未知斜面菌種，1支不接。

1、糖發酵試驗

2、甲基紅試驗

3、V.P.試驗

接種后37℃分別培養24h、48h、48h，觀察實驗結果，將實驗結果填入表中。〔實驗結果〕

表7－1 實驗結果 編號 大腸桿菌 枯草芽孢桿菌 產氣桿菌 未知菌 CK 葡萄糖發酵

乳糖發酵

甲基紅實驗

V.P.試驗

〔實驗討論〕

如：討論通過哪些生理生化反應可以區分大腸桿菌，產氣桿菌？

大腸桿菌不產生丁二醇，V.P.試驗為陰性。其進行混合酸發酵，故甲基紅試驗為陽性。產氣桿菌則進行丁二醇發酵，V.P試驗為陽性，甲基紅試驗為陰性。

實驗八（綜合實驗）化能異養微生物的分離與純化 [目的要求]

1．掌握細菌、放線菌、酵母苗和霉菌稀釋分離、劃線分離等技術。

2．學習從樣品中分離、純化出所需菌株。

3．學習并掌握平板傾注法和斜面接種技術，了解培養細菌、放線菌、酵母菌及霉菌四大類微生物的培養條件和培養時間。

4．學習習近平板菌落計數法。[基本原理]

土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發現有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數量不同，一般土壤中細菌數量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機質豐富的土壤中放線苗數量較多；酵母菌在一般土壤中的數量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數量多些。本次實驗從土壤中分離細菌、放線菌和霉菌；白面曲(發面用的引子)或酒曲或果園土中分離酵母菌。

為了分離和確保獲得某種微生物的單苗落，首先要考慮制備不同稀釋度的苗懸液。各類菌的稀釋度因菌源、采集樣品時的季節、氣溫等條件而異。其次，應考慮各類微生物的不同特性，避免樣品中各類微生物的相互干擾。細菌或放線苗在中性或微堿性環境較多．但細菌比放線萌生長快，分離放線菌時，一般在制備土壤稀釋液時添加10%酚或在分離培養基中加相應的抗生素以抑制細菌和霉菌(如加鏈霉素25-50μg mL以抑制細菌；添加制霉菌素50μg／mL或多菌靈30μ／mL以抑制霉菌)；酵母苗和霉菌都喜酸性環境，一般酵母菌只能以糖為碳源，不能直接利用淀粉，酵母菌在pH 5時生長極快。而細菌生長適宜的酸堿度為pH7，所以分離酵母菌時只要選擇好適宜的培養基和pH，可降低細菌增殖率，霉菌生長慢，也不干擾酵母菌分離。若分離霉菌，需降低細菌增殖率，一般培養基臨用前須添加滅過菌的乳酸或鏈霉素。為了防止菌絲蔓延干擾菌落計數，分離霉菌時常在培養基中加入化學抑制劑。要想獲得某種微生物的純培養，還需提供有利于該微生物生長繁殖的最適培養基及培養條件。四大類微生物的分離培養基、培養溫度、培養時間見表所示。[材料與用品] 1.菌源 選定采土地點舌。鏟去表土層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g，裝入已滅過菌的牛皮紙袋內．封好袋口，并記錄取樣地點、環境及日期。土樣采集后應及時分離，凡不能立即分離的樣品，應保存在低溫、干燥條件下，盡量減少其中菌種的變化。從面曲中分離酵母菌。也可用酒曲等替代。

2．培養基 肉膏蛋白胨培養基、馬丁氏培養基、高氏合成一號培養基、豆芽汁葡萄糖培養基(制平板和斜面，3．無菌水或無菌生理鹽水 配制生理鹽水．分裝于250mL錐形瓶中，每瓶裝99mL(或95mL分離霉菌用)，每瓶內裝10粒玻璃珠；分裝試管，每管裝約4.5-5mL(不超過試管高度的1／5)。

4．其他試劑與用品 無菌培養皿、無菌移液管、無菌玻璃涂棒(刮刀)、稱量紙、藥匙、洗耳球、10％酚溶液。[實驗步驟]

1．稀釋分離法平板分離菌有傾注法和涂布法兩種。本次實驗分離細菌、放線菌、霉菌時采用傾注法，酵母菌分離采用涂布法：

(1)細菌的分離 1)制備土壤稀釋液 稱取土樣1 g，在火焰旁加入盛有99mL并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．振蕩10一20min，使土樣中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成10-2稀釋度的土壤稀釋液。然后按10倍稀釋法進行稀釋分離，以制備10-2稀釋度為例，具體操作過程如下：取4.5 mL無菌水試管6支，按10-2......10-7順序編號，放置在試管架上。取無菌移液管一支，從移液管包裝紙套 中間撕口，將包裝紙套分成上、下兩段，去除下段包裝紙套，在移液管上端管口裝橡皮頭，取出下段移液管紙套放置桌面，以右手拇指、食指、中指拿住移液管卜端的橡皮頭，將吸液端口及移液管外部表面迅速通過火焰2～3次，殺滅撕紙套時可能污染的雜菌，切忌不要用手指去觸摸移液管吸液端口及外部。左手持錐形瓶底，以右手掌及小指、無名指夾住錐形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞(棉塞夾在于上，不能亂放在桌上)，將lmL移液管的吸液端伸進振蕩混勻的錐形瓶土壤懸液底部，用手指輕按橡皮頭，在錐形瓶內反復吹吸二次(吹吸時注意第二次液面要高于第一次吹吸 的液面)，然后準確吸取0.5mL10-2土壤稀釋液，右手將棉塞插回錐形瓶上，左手放下錐形瓶，換持一支盛有4.5mL無菌水的試管，依前法在火焰旁拔除試管帽(或棉塞)，將0.5m10-2土壤稀釋液注入4.5m1無菌水試管內，制成l0-3的土壤稀 釋液，將此移液管通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙套內，以備再用。另取一只未用過的無菌移液管在試管內反復吹吸三次，然后取出移液管，并將其通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙套內，以備再用。蓋上試管帽。右手持10-3稀釋液試管在左手十敲打20～30次。混勻土壤稀釋液。再從紙套取出原來的移液管，插入稀釋液已搖勻的試管內，再吹吸三次，然后準確吸出o.5mL 10-3的稀釋液。置第二支裝有4.5 m1無菌水試管，制成10-4：土壤稀釋液。用同法再制成 10-

5、10-

6、10一7的土壤稀釋液(為避免稀釋過程誤差，進行微生物計數時，最好每一個稀釋度更換一支移液管)：最后用的移液管重新放人紙套內。待滅菌后，再洗刷或將用過的移液管放在廢棄物筒中．用3%-5%來蘇爾浸泡l h后再滅菌洗滌。2)傾注法分離 取無菌培養皿6-9套，分別于培養皿底面按稀釋度編號。稀釋完畢后，用原來的移液管從菌液濃度最小的10-7土壤稀釋液開始吸取1mL稀釋液，按無菌操作技術加到和應編號的無菌培養皿內。再依同方法分別吸取1mLl0-

6、10-5的土壤稀釋液，各加到和應編號為10-

6、10-5的無菌培養皿內。將已滅菌的肉膏蛋白胨固體培養基融化，待冷卻至45-50度左右，分別傾入到已盛有I0-

5、10-

6、10-7土壤稀釋液的無菌培養皿內。注意：溫度過高易將菌燙死，且皿蓋上冷凝水太多，會影響分離效果；低于45％培養基易凝固，平板易出現凝塊、高低不平。傾倒培養基時注意無菌操作，要在火焰旁進行。左手拿培養皿，右手拿錐形瓶底部，左手同時用小指和手掌將棉塞拔開，灼燒瓶口．用左手大拇指將培養皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入培養基約12-15 mL，將培養皿在桌面上輕輕轉動，使稀釋的菌懸液與融化的瓊脂培養基混合均勻．混勻后靜置桌上，待凝。3)培養 待平板完全冷凝后，將平扳倒置于35-37℃恒溫培養箱中，培養24～48h觀察結果。

(2)放線菌的分離

1)制備土壤稀釋液 稱取土樣l g，加入盛有99m1并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．并加人lo滴10％酚溶液(抑制細菌生長，可用l％的重鉻酸鉀溶液代替lo%酚溶液．效果更好)。振蕩后靜置5min，即成10-2土壤稀釋液。

2)傾注法分離 按前法將土壤稀釋液分別稀釋為10-

3、10-

4、10-5三個稀釋度，然后用無菌移液管依次分別吸取lmL 10-

5、l0-

4、10-3土壤稀釋液于對應編號的無菌培養皿內，用高氏合成1號培養基依前法傾倒平板，每個稀釋度做2～3個平行培養皿。理鹽水內，振蕩20min，即成10-2的面曲稀釋液。若選用果園上樣，也依前法稱取土樣，制成10-2壤稀釋液。3)涂布法分離 依前法向無菌培養皿中傾倒已融化并冷卻至45-50℃的豆芽汁葡萄糖培養基，待平板冷凝后，用無菌移液管分別吸取上述l0-

6、l0-

5、10-4三個稀釋度苗懸液0.1mL，依次滴加于對應編號已制備好的豆芽汁葡萄糖培養基平板上。右手持無菌玻璃涂棒，左手拿培養皿，并用拇指將皿蓋打開一縫，在火焰旁右手持玻璃涂棒于培養皿平板表面將菌液自平板中央均勻向四周涂布擴散，切忌用力過猛將菌液直接推向平板邊緣或將培養基劃破。4)培養 接種后，將平板倒置于30℃恒溫培養箱中，培養2～3 d觀察結果。

2劃線分離法 菌種被其他雜苗污染時或混合菌懸液常用劃線法進行純種分離。此法將蘸有混合菌懸液的接種環在平板表面多方向連續劃線，使混雜的微生物細胞在平板表面分散，經培養得到分散成由單個微生物細胞繁殖而成的菌落，從而達到純化目的。平板制作方法如前所述。但劃線分離的培養基必須事先傾倒好，需充分冷凝待平板稍于后方可使用；為便于劃線，一般培養基不宜太薄，每皿約傾倒20mL培養基，培養基應厚薄均勻，平板表面光滑。劃線分離主要有連續劃線法和分區劃線法兩種。(1)連續劃線法 連續劃線法是從平板邊緣一點開始，連續作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環上的菌。以無菌操作用接種環直接取平板上待分離純化的菌落。將菌種點種在平板邊緣一處，取出接種，燒去多余菌體。將接種環再次通過稍打開皿蓋的縫隙伸人平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環冷卻．然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。劃線時平板面與接種環面成30～40°的角度，以手腕力量在平板表面輕巧滑動劃線。接種環不要嵌入培養基內劃破培養基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊。劃線完畢，關上皿蓋。灼燒接種環，待冷卻后放置接種架上。培養皿倒置于適溫的恒溫培養箱內培養(以免培養過程中皿蓋冷凝水滴下，沖散巳分離的菌落)。培養后在劃線甲板上觀察沿劃線處長出的菌落形態，涂片鏡檢為純種后再接種斜面。(2)分區劃線法平板分四區，故又稱四分區劃線法。劃線時每次將平板轉動60一70°劃線，每換一次角度，應將接種環上的菌燒死后，再在上次劃線末尾處繼續劃線。取菌、接種、培養方法與連 續劃線法相似。分區劃線法劃線分離的平板分4個區，其中第四區是單菌落的主要分布區，故其劃線面積應最大。為防止第四區內劃線與l、2、3區線條和接觸，應使4區線條與l區線條和平行，這樣區與區間線條夾角最好保持120度左右。先將接種環沾取少量菌在平板1區劃3～5條平行線，取出接種環，左手關上皿蓋．將平板轉動60～70°，右手把接種環上多余苗體燒死，將燒紅的接種環在子板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線的苗體為菌源，由1區向2區作第二次早行劃線。第二次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60一70°，同樣依次在5、1區劃線。劃線完畢，灼燒接種環，關上皿蓋，同上法培養，在劃線區觀察單菌落。本次實驗在分離細菌的平板上選取單菌落。于肉膏蛋白胨平板上再次劃線分離，使菌進一步純化。劃線接種后的平板，倒置于30℃恒溫培養箱中培養24h后觀察結果。

3．微生物菌落計數(平板菌落計數法)含菌樣品的微生物經稀釋分離培養后，每一個活苗細胞可以在平板上繁殖形成一個肉眼可見的菌落。故可根據平板上菌落的數目．推算出每克含菌樣品中所含的活菌總數。每克菌樣品中微生物的活細胞數＝(同一稀釋度的3個平板上菌落平均數X稀釋倍數)/含菌樣品克數。一般由三個稀釋度計算出的每克含菌樣品中的總活菌數和同一稀釋度出現的 總活菌數均應很接近，不同稀釋度平板上出現的菌落數應呈規律性地減少。如相差較大，表示操作不精確。通常以第二個稀釋度的平板上出現50個左右菌落為好。也可用菌落計數器計數。

4．平板菌落形態及個體形態觀察 從不同平板上選擇不同類型菌落用肉眼觀察，區分細菌、放線菌、酵母茵和霉菌的菌落形態特征。并用接種環挑菌，看其與基質結合緊密程度。再用接種環挑取不同菌落制片，在顯微鏡下進行個體形態觀察。記錄所分離的含菌樣品中明顯不同的各類菌株的主要菌落特征和細胞形態。

5.分離純化菌株轉接斜面(斜面接種)在分離細菌、放線菌，酵母苗和霉菌的不同平板上選擇分離效果較好，認為已經純化的苗落各挑選一個用接種環接種斜面。將細菌接種于肉膏蛋白胨斜面，放線菌接種于高氏1號斜面，酵母菌和霉菌接種于豆芽汁葡萄糖斜面上。貼好標簽，在各自適宜的溫度下培養，培養后觀察是否為純種，記錄斜面培養條件及苗苔特征。置冰箱保藏。[實驗報告] 1.簡述分離微生物純種的原則及列出分離操作過程的關鍵無菌操作技術。2.四大類微生物的分離方法及培養條件

3.分離的微生物平板菌落計數結果

4.樣品中單菌落菌株的菌落培養特征與鏡檢形態 5.斜面培養條件及菌苔特征(包括純化結果)。

[思考題] 1.稀釋分離時．為什么要將已融化的瓊脂培養基冷卻到45～50℃左右才能傾入到裝有菌液的培養皿內? 2.劃線分離時為什么每次都要將接種環上多余的菌體燒掉?劃線時為何不能重疊? 1.3.在恒溫箱中培養微生物時為何培養皿均需倒置? 4.分離某類微生物時培養皿中出現其他類微生物，請說明原因。應該如何進一步分離和純化；經過-次分離的菌種是否皆為純種，若不純，應采用哪種分離方法最合適? 5.根據哪些菌落特征可區分細菌、放線苗、酵母菌與霉菌?它們的細胞結構表現在菌落形態上有什么聯系？

第五篇：微生物學教學大綱

微生物學課程教學大綱

課程中文名稱：微生物學

課程英文名稱：Microbiology 課程類別：專業基礎課

課程編號: 09003011 課程歸屬單位：生命科學學院 制定時間：2007年7月20日

一、課程的性質、任務

微生物是生命科學的主要研究對象，學生應從宏觀到微觀的各個層次上系統地了解微生物。通過本課程的學習，應對微生物學有一個全面的了解，系統地掌握微生物學的基礎理論、基本知識和基本操作技能，掌握微生物學的基本研究方法和手段，為進一步深入學習生物技術專業課打下良好的基礎。

1、教學的基本要求

（一）基礎理論和基本知識要求

（1）系統地掌握各類微生物的形態、結構和功能，掌握其營養、代謝、生長以及遺傳變異、基因重組和生態分布等方面的微生物學基礎理論。

（2）較全面的了解微生物對于人類日常生活的影響，以及微生物在工業、農業、醫藥衛生、食品加工和環境保護等方面的應用。

（3）掌握研究微生物的基本方法和基本操作技能的理論基礎。

（二）基本技能要求

（1）掌握微生物學的制片、染色和觀察技術。（2）掌握微生物細胞大小和數量的測定方法。（3）掌握微生物的分離、培養技術。（4）了解環境條件對微生物生長的影響。

2、適用專業和學時數

本大綱適用于生物技術和生物科學專業本科生。總學時數81，其中理論學時數為54，實驗學時數為27。

3、本課程與其他課程的聯系

微生物學是生物技術和生物科學專業的一門重要專業基礎課程。學習該課程必須具備普通生物學、生物化學、細胞生物學等方面的知識。

4、推薦教材和參考書

（一）教材

（1）周德慶編著《微生物學教程》，高等教育出版社，2002.5。（2）沈萍等編著《微生物學實驗》，第三版，高等教育出版社，1999.6。

（二）參考書

（1）沈萍著《普通微生物學》，高等教育出版社，2000。（2）J.Nicklin etc《Microbiology》，科學出版社，1999。

5、教學方法與媒體要求

本課程的理論課要求采用計算機多媒體教學手段輔助教學。

二、教學內容及安排 理論教學部分54學時。第一章 緒論（2學時）

1、基本內容：微生物及微生物學的定義、微生物的類群和分類地位、微生物的特點、微生物學的發展史、真原核微生物的區別、微生物對于人類的關系和重要性。

1、基本概念：微生物、微生物學。

2、教學重點：微生物及微生物學的概念、真原核微生物的區別。

3、教學難點：微生物的特點。第一節 微生物與微生物學

微生物與微生物學的基本概念，微生物學的研究對象，微生物學的分科和基本任務。第二節 微生物學的發展簡史

微生物學發展過程的五個時期及各時期的代表人物。第三節 微生物在生物分類中的地位

生物分類的發展，目前生物分類的進展，微生物在生物分類中的地位。第四節 微生物的特點

微生物與其他生物的相似性，微生物的八大特點。第五節 真原核微生物的主要區別

真原核微生物在形態結構、化學組成和生理生化上的主要區別。第六節 微生物對于人類社會發展的重要性

從醫藥衛生、食品加工、發酵工業、農業，微生物在現代生物技術發展中的作用等多個方面闡述微生物對于人類發展的影響，說明學習微生物學的重要性。第二章 原核微生物（8學時）

1、基本內容：原核生物的概念、細菌的形態、大小與結構、細菌的繁殖，放線菌、藍細菌和其他的原核微生物。

2、基本概念：原核、原核生物、間體、芽孢、鞭毛、莢膜。

3、教學重點：細菌的形態和結構，尤其是原核生物特有的結構。

4、教學難點：細胞壁的構造。第一節 免疫學的概念

細菌細胞的基本形態、細胞的大小和排列方式。第二節 細菌的細胞結構及功能

細菌的細胞壁與革蘭氏染色反應、細胞膜和間體、細胞質與內含物、原核和質粒等一般結構；莢膜、鞭毛、芽孢等特殊構造；各細胞結構的功能。第三節 細菌的群體形態和繁殖

細菌的群體形態特征——菌落、菌苔和液體培養特征及其在細菌分類中的作用；菌落和菌苔的概念；細菌的繁殖方式。第四節 放線菌

放線菌的形態、基本結構；繁殖方式；放線菌的主要類群。第五節 藍細菌

藍細菌的基本形態和特殊構造，藍細菌的繁殖。第六節 其他類群的微生物

枝原體、衣原體和立克次氏體的基本特征，與其他原核生物的區別。

第三章 真核微生物（5學時）

1、基本內容：真菌的形態、結構，真菌無性繁殖和有性繁殖、真菌的代表類群、真菌對于人類的影響和重要性。

2、基本概念：真菌、菌絲、菌絲體。

3、教學重點：真菌的特殊形態、真菌的繁殖和孢子類型。

4、教學難點：真菌的繁殖。第一節 真菌的形態、結構

真菌的一般形態結構和特殊構造。第二節 真菌的繁殖

真菌的繁殖方式（無性繁殖和有性繁殖）及其特點；各類繁殖所形成的孢子類型。真菌的準性生殖。第三節 酵母菌

酵母菌的形態結構、繁殖方式及生活史。第四節 真菌的代表類群

真菌各代表類群的形態結構，繁殖特點，生活史和生活環境，常見真菌在實際中的應用或對人類造成的危害。

第四章 非細胞結構生物——病毒（4學時）

1、基本內容：病毒的定義、病毒的一般特征、病毒的形態結構、病毒的增殖、病毒的溶原性、亞病毒。

2、基本概念：病毒、病毒粒子、溫和噬菌體、類病毒、朊病毒。

3、教學重點：病毒的一般形態特征；病毒的增殖。

4、教學難點：噬菌體的增殖過程。第一節 病毒的一般特征

病毒的定義；一般形態特征。第二節 病毒的分類

病毒的分類方法和病毒的主要類群。第三節 噬菌體的特性和復制方式

噬菌體的形態結構、增殖方式和增殖過程；噬菌體與人類的關系。第四節 愛滋病毒

愛滋病毒的發現、愛滋病的發病特點，愛滋病毒對人類的危害。第五節 亞病毒

亞病毒的種類和特點。亞病毒與人類的關系。第五章 微生物的營養（4學時）

1、基本內容：微生物的營養、微生物的營養類型、吸收營養物質的方式、培養基。

2、基本概念：微生物的四大營養類型病毒、微生物吸收營養物質的四種方式、培養基。

3、教學重點：微生物的營養類型和培養基。

4、教學難點：微生物吸收營養物質的方式。第一節 營養物質及其功能

微生物生長所需的碳源、氮源、能源、生長因素、礦質元素和水等六大類營養物質及其對微生物生長的影響。第二節 微生物的營養類型

微生物的四大營養類型——光能自養型微生物、光能異養型微生物、化能自養型微生物和化能異養型微生物的概念，各類型微生物的生理特點。第三節 微生物吸收營養物質的方式

微生物吸收營養物質的四種方式（被動運輸、促進擴散、主動運輸和基團轉位）和運輸的特點。

第四節 培養基

培養基的概念；培養基的配制過程；培養基的種類；配制培養基的原則。第六章 微生物的代謝（6學時）

1、基本內容：微生物的能量代謝、能量代謝的類型、己糖的分解代謝、特殊物質的分解代謝、代謝的調節

2、基本概念：產生ATP的三種方式，能量代謝的三種方式。

3、教學重點：微生物的能量代謝。

4、教學難點：微生物的代謝調節。第一節 微生物的能量代謝

ATP產生的三種方式（基質水平磷酸化、氧化磷酸化和光合磷酸化）；微生物能量代謝的類型（有氧呼吸、無氧呼吸和發酵作用）。第二節 微生物的分解代謝

己糖代謝的四條途徑（EMP、HMP、ED和TCA）及其特點。第三節 微生物的特殊合成代謝

生物固氮作用的機制；肽聚糖大分子的合成。第四節 微生物代謝的調節

酶活性調節和酶合成調節的類型和機制；微生物代謝調節在發酵工業中的應用。第七章 微生物的生長（5學時）

1、基本內容：微生物的生長及其測定、生長曲線、環境條件對微生物生長的影響。

2、基本概念：代時、生長曲線、光修復、暗修復。

3、教學重點：微生物的生長曲線。

4、教學難點：環境條件對微生物生長的影響。第一節 微生物生長

微生物生長的定義；微生物群體生長的測定方法。第二節 微生物的生長規律——生長曲線

生長曲線的定義；生長曲線的繪制方法；生長曲線的四個時期及不同時期微生物細胞特點；生長曲線對于實際生產的指導意義。第三節 環境條件對微生物生長的影響

溫度、氧氣、PH值、水份、滲透壓、輻射線和化學藥物對微生物生長的影響；高溫滅菌的原理及方法；消毒和滅菌的概念。

第八章 微生物的遺傳變異和基因重組（6學時）

1、基本內容：微生物的遺傳物質、基因突變和誘變育種、微生物的基因重組。

2、基本概念：基因突變、轉導、轉化、接合。

3、教學重點：基因重組。

4、教學難點：基因重組。第一節 遺傳變異的物質基礎

轉化、噬菌體感染和植物病毒的重建等三個經典實驗；遺傳物質存在的部位和方式。第二節 基因突變和誘變育種

基因突變的類型和特點，突變率；基因突變的機制；自發突變與誘發突變在育種上的應用。

第三節 基因重組（原核生物和真菌）

原核生物基因重組——轉化、轉導、接合及原生質體融合。第四節 基因工程

基因工程的基本操作、基因工程的應用和發展前景。第五節 菌種保藏

菌種的衰退與復壯，菌種的保藏。第九章 微生物生態（5學時）

1、基本內容：微生物在自然界的分布、微生物之間的相互作用關系、微生物在自然界物質循環中的作用。

2、基本概念：微生物區系、極端環境微生物、微生物間的八種關系、生物固氮作用、氨化作用、硝化作用、反硝化作用。

3、教學重點：微生物之間的相互關系；微生物在自然界氮素循環中的作用。

4、教學難點：微生物在自然界氮素循環中的作用。第一節 微生物在自然界中的分布

微生物在土壤、水、空氣和生物體中的分布；極端環境微生物。第二節 微生物之間的相互關系

微生物間的八種相互關系。

第三節 微生物與動物和植物的相互關系

微生物與動物的互生、共生和寄生關系；微生物與植物的互生、共生和寄生關系。第四節 微生物在自然界物質循環中的作用

微生物在自然界碳素、氮素、磷素和硫素等物質循環中的作用。第十章 免疫血清學（6學時）

1、基本內容：傳染與傳染病、影響傳染的因素、非特異性免疫、特異性免疫。

2、基本概念：傳染、傳染病、非特異性免疫、特異性免疫、抗原、免疫球蛋白。

3、教學重點：非特異性免疫和特異性免疫，抗原抗體反應。

4、教學難點：抗原抗體反應。第一節 傳染與免疫

傳染與傳染病；影響傳染的因素。第二節 非特異性免疫

非特異性免疫方式——屏障結構、吞噬作用、炎癥反應等。第三節 特異性免疫

免疫器官、免疫細胞及其作用和免疫分子（抗原、抗體）及其作用。第四節 免疫學方法及其應用

抗原抗體反應的一般規律，主要的抗原抗體反應，現代免疫學技術等。第十一章 微生物的分類與鑒定（3學時）

1、基本內容：微生物的分類單元、種的定義、微生物的命名、原核微生物的分類和分類綱要綱要、真核微生物的分類系統和分類綱要、微生物的鑒定。

2、基本概念：種、亞種、菌株、分類、命名、鑒定。

3、教學重點：物種的定義；微生物的分類、命名和鑒定。

4、教學難點：微生物的分類系統。第一節 微生物的分類單元和物種的概念

微生物的分類單元；物種的定義；亞種以下的分類單元。第二節 微生物的命名

微生物的命名方法和命名原則。第三節 原核生物的分類綱要

原核生物常用的分類系統。第四節 真核生物的分類綱要

真菌的代表性分類系統。第五節 微生物的鑒定

原核微生物的鑒定方法（傳統的分類鑒定方法和現代的分類鑒定方法）。

三、實踐教學內容與安排（27學時）

實驗一 顯微鏡的使用和細菌形態觀察（3學時）實驗二 革蘭氏染色反應（3學時）實驗三 細菌的芽孢染色（2學時）

實驗四 微生物細胞大小的測定（3學時）實驗五 微生物細胞數量的測定（3學時）實驗六 培養基的制備與滅菌（4學時）實驗七 微生物的純系分離（3學時）

實驗八 真菌形態及微生物菌落形態觀察（2學時）實驗九 環境條件對微生物生長的影響（4學時）