第一篇：藥品質量分析方法驗證CN

藥品質量標準分析方法驗證

藥品質量標準分析方法驗證

藥品質量標準分析方法驗證的目的是證明采用的方法適合于相應檢測要求。在起草藥品質量標準時，分析方法需經驗證；在藥物生產方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時、則質量標準分析方法也需進行驗證。方法驗證過程和結果均應記載在藥品標準起草或修訂說明中。需驗證的分析項目有：鑒別試驗，雜質定量或限度檢查，原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分(如降解產物、防腐劑等)的測定。藥品溶出度、釋放度等功能檢查中，其溶出量等測試方法也應作必要驗證。驗證內容有：準確度、精密度(包括重復性、中間精密度和重現性)、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。視具體方法擬訂驗證的內容。附表中列出的分析項目和相應的驗證內容可供參考。方法驗證內容如下。

一、準確度

準確度系指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般以回收率(％)表示。準確度應在規 定的范圍內建立。

1．含量測定方法的準確度

原料藥可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的 結果進行比較。制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定，或與另一個已建立準確度的方法比較結果。如該法已建立了精密度、線性和專屬性，準確度有時也能推算出來，不必再做。

2．雜質定量測定的準確度

可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。如果不能得到雜質或降解產物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經過驗證的方法。如不能測得雜質或降解產物的相對響應因子，則可用原料藥的響應因子。應明確證明單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比(％)，或是面積比(％)。

3．數據要求

在規定范圍內，至少用9次測定結果進行評價，例如制備3個不同濃度的樣品，各測定3次。應報告已知加入量的回收率(％)，或測定結果平均值與真實值之差及其可信限。

二、精密度

精密度系指在規定的測試條件下，同一個均勻樣品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。在相同條件下，由一個分析人員測定所得結果的精密度稱為重復性；在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果的精密度，稱為中間精密度；在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度，稱為重現性。含量測定和雜質定量測定應考慮方法的精密度。

1．重復性在規定范圍內，至少用9次測定結果進行評價，如制備3個不同濃度的樣品，各測定3次，或把被測物濃度當作100％，用至少測定6次的結果進行評價。

2．中間精密度為考察隨機變動因素對精密度的影響，應設計方案進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設備。

3．重現性當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現性試驗。如建立藥典分析方法時通過協同檢驗得出重現性結果，協同檢驗的過程、重現性結果均應記載在起草說明中。

4．數據要求均應報告標準偏差、相對標準偏差和可信限。

三、專屬性

專屬性系指在其他成分(如雜質、降解產物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準確測定出被測物的特性。鑒別反應、雜質檢查、含量測定方法，均應考察其專屬性。如方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充。

1．鑒別反應

應能與可能共存的物質或結構相似化合物區分。不含被測成分的樣品，以及結構相似或組分中的有關化合 1

物，均應呈負反應。

2．含量測定和雜質測定

色譜法和其他分離方法，應附代表性圖譜，以說明專屬性。圖中應標明諸成分的位置，色譜法中的分離度應符合要求。在雜質可獲得的情況下，對于含量測定，試樣中可加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干擾，并可與未加雜質和輔料的試樣比較測定結果。對于雜質測定，也可向試樣中加入一定量的雜質，考察雜質能否得到分離。在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可將含有雜質或降解產物的試樣進行測定，與另一個經驗證了的或藥典方法比較結果。用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解，或氧化的方法進行加速破壞，以研究降解產物。含量測定方法應比對二法的結果，雜質測定應比對檢出的雜質個數，必要時可采用光二極管陣列檢測和質譜檢測，進行純度檢查。

四、檢測限

檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。常用的方法如下。

1．非儀器分析目視法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。

2．信噪比法

用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。

3．數據要求應附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結果。

五、定量限

定量限系指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度。雜質和降解產物用定量測定方法研究時，應確定定量限。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10:1時相應的濃度或注入儀器的量進行確定。

六、線性

線性系指在設計的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。應在規定的范圍內測定線性關系。可用一貯備液經精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進行測定，至少制備5份供試樣品。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經數學轉換，再進行線性回歸計算。數據要求：應列出回歸方程、相關系數和線性圖。

七、范圍

范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區間。范圍應根據分析方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果和要求確定。原料藥和制劑含量測定，范圍應為測試濃度的80％～120％；制劑含量均勻度檢查，范圍應為測試濃度的70％～130％，根據劑型特點，如氣霧劑、噴霧劑，范圍可適當放寬，溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍應為限度的±20％；如規定限度范圍，則應為下限的-20％至上限的+20％；雜質測定，研究時，范圍應根據初步實測，擬訂出規定限度的±20％。如果含量測定與雜質檢查同時測定，用百分歸一化法，則線性范圍應為雜質規定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。

附表 檢驗項目和驗證內容

內容 項目 鑒別 雜質測定 含量測定及溶出量測定

定量 限度

準確度 － ＋ － ＋

精密度－ － － ＋

重復性 － ＋ － ＋

中間精密度 － ＋① － ＋①

專屬性② ＋ ＋ ＋ ＋

檢測限 － －③ ＋ －

定量限 － ＋ － －

線性 － ＋ － ＋

范圍 － ＋ － ＋

耐用性 ＋ ＋ ＋ ＋

①已有重現性驗證，不需驗證中間精密度。②如一種方法不夠專屬，可用其他分析方法予以補充。③視具體情況予以驗證。

八、耐用性

耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為常規檢查提供依據。開始研究分析方法時，就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應在方法中寫明。典型的變動`因素有：被測溶液的穩定性，樣品提取次數、`時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類色譜柱，柱溫，流速等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體、柱溫，進樣口和檢測器溫度等。經試驗，應說明小的變動能否通過設計的系統適用性試驗，以確保方法有效。

第二篇：藥品質量標準分析方法驗證

藥品質量標準分析方法驗證

一、目的：證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求。

二、用途

（一）藥品質量標準起草時，分析方法需經驗證。

（二）藥物生產方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，分析方法需經驗證。

三、需驗證的分析項目

1.鑒別試驗；

2.雜質定量或限度檢查；

3.原料或制劑中有效成分含量測定；

4.制劑中其它成分（降解產物、防腐劑等）的測定；

5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法

四、驗證內容

準確度、精密度（重復性、中間精密度和重現性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性

（一）線性（Linearity）

在設計的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。

?方法：應在規定的范圍內測定線性關系。可用一貯備液經精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列不同濃度標準溶液的方法進行測定（n≥5）。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。

?數據要求：應列出回歸方程、相關系數和線性圖

UV法：吸光度A一般在0.2～0.8，濃度點n＝5。用濃度c對A作線性回歸處理，得一直線方程，r應達到0.9999(n＝5)，方程的截距應近于零。

HPLC法: 用精制品配制一系列標準溶液，濃度點n應為5～7，用濃度c對峰高h或被測物的響應值(峰面積A)之比進行回歸處理，建立回歸方程，r應大于0.999，截距應趨于零。

（二）準確度（accuracy）

準確度是指用該方法測定的結果與真實值接近的程度，用百分回收率表示。

測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗法”和“加樣回收試驗法”。回收試驗：空白+已知量的對照品（或標準品）測定，測定值為M

回收率R?測定平均值?空白?100% 加入量

加樣回收試驗 ： 已準確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為MR?M?P?100% A

數據要求：可向制劑中加入已知量的被測物對照品進行測定規定的范圍內，至少用9次測定結果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。

（三）精密度（precision）

精密度是指在規定條件下，同一個均勻樣品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。用偏差（d）、標準偏差(SD)、相對標準偏差(RSD)表示。

相對標準偏差（RSD），也稱變異系數（CV）

RSD?S?100%S?2??x??i

n?

11.重復性(repeatability):

在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度；在規定的范圍內，至少用9次測定結果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當作100%，至少測6次進行評價。

2.中間精密度同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備所得結果的精密度。

3.重現性(reproducibility)不同實驗室，不同分析人員測定結果的精密度。

數據要求：需報告RD，RSD和可信限。

（四）檢測限（LOD）

檢測限系指試樣在確定的實驗條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。是限度檢驗效能指標，無需定量測定，只要指出高于或低于該規定濃度即可。

1．非儀器分析目視法

用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。

2．信噪比法

用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時的相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。

（1）空白值＝0時；①測定背景10次以上，求出標準差S空。②將S空乘以三倍；③在工作曲線上求出3 S空相對應的濃度X；即為方法的檢出值；

（2）空白值不等于0；①測定背景10次以上，求出標準差S空；②在工作曲線上求出3 S空 相對應的濃度X； ③ 將求得的對應濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。

（五）定量限（LOQ）

指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結果應具有一定準確度和精密度要求。

常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時相應的濃度或注入儀器的量進行確定，也可按1984年國際純粹和應用化學聯合會(IVPAC)規定：用儀器所測空白背景響應標準差（SD）的10倍為估計值，再經試驗確定方法的實際測定下限。

儀器分析：通過測定一組空的樣品的背景信號后計算標準差S。以1OS來估算定量限度。（以定量限度制備的樣品來驗證）

非儀器分析：通過分析己知被測物濃度的樣品并確定一個樣品中被測物可被準確和精密測定出的最低濃度（量）。

（六）耐用性

指測定條件稍有變動時，結果不受影響的承受程度，為常規檢驗提供依據。是衡量在正常情況下實驗結果重現性的尺度。

分析方法重現性的測定是通過在不同的實驗室內不同的實驗者對同一樣品的分別測試而獲得的。（獲得的這種再與正常檢定下的精密度進行比較，從而確定該法的耐用性）

（七）專屬性

（八）范圍

?典型的變動因素有：被測溶液的穩定性，樣品提取次數、時間等。

?液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類色譜柱，柱溫，流速等。

?氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體、柱溫，進樣口和檢測器溫度等。

經試驗，應說明小的變動能否通過設計的系統適用性試驗，以確保方法有效。

含量測定需進行的方法學驗證項目：準確度、精密度、專屬性、線性、范圍、耐用性

五、各種含量測定方法對效能指標的要求

1.容量分析法：用原料藥精制品(含量>99.5％)或對照品考察方法的精密度，相對標準差一般應不大于0.2％；進行回收率試驗。回收率一般在99.7～100.3％之間。

2.UV法：用適當濃度的精制品進行測定，其RSD一般不大于應在98％～102％之間。

3.HPLC法：要求

第三篇：分析方法的驗證(精)

分析方法的驗證

分析方法的驗證，就是對藥品分析實驗所采用的分析方法是否完全達到了預期目的，或證明由分析方法誤差而導致試驗結果判斷錯誤的概率是否在允許范圍之內，而進行的科學證明。

分析方法的驗證以驗證參數表示。在制定藥品質量標準時，可通過這些參數證明所建立的分析方法是否適當。本文所述分析方法驗證是指下述情況：藥局方新收載品種質量標準的建立；藥局方已收載品種質量標準的修訂；根據藥局方的通則建立替代方法。

定量限界是指樣品中所含的被測物質可被進行定量的最小量或最低濃度。定量限界所述樣品測定值的精度，以相對標準偏差表示，一般為10%。2.5.2 評價方法：通常定量限界可以通過空白樣品或被測物定量限界附近的樣品測定值的標準偏差以及定量限界附近的標準曲線的斜率算出。例如，根據定量限界附近的標準曲線的斜率以及空白樣品測定值的標準偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白樣品測定值的標準偏差

slope：定量限界附近標準曲線的斜率

應用色譜法時，測定值的標準偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界應比質量標準中規定值要小。2.6 線性關系

2.6.1 定義：線性關系是指分析方法能夠得到與被測物質的量或濃度具有直線關系的測定值的能力，必要時，被測物質的量或濃度的測定值也可以是從數學公式中得到的變換值。

2.6.2 評價方法：準備一系列不同濃度(量)的被測樣品，按照分析方法的操作步驟進行測定，用測定值得到的回歸方程及相關系數對線性關系進行評價。必要時，將測定值由回歸方程算出的殘差對被測物質的量(濃度)作圖，不應具有某種特定的趨勢。通常，采用5個不同量(濃度)的樣品作線性關系的研究。2.7 范圍(Range)

2.7.1 定義：分析方法驗證中所述范圍是指具有一定精度和準確度的被測物質上限及下限量(濃度)之間的領域。對于上述具有線性關系的分析方法則指：具有一定精度和準確度，并且使線性關系成立的被測物質上下限量(濃度)之間的領域。

2.7.2 評價方法：分析方法驗證的范圍一般為標準中規定值的±20%左右，對范圍的上下限值及范圍中央值附近的樣品進行精度、真度及線性的研究討論。

驗證參數

類型Ⅰ

類型Ⅱ

類型Ⅲ

定量試驗 限度試驗 準確度+ 精密度 并行精度+ 室內再現精度-* 室間再現精度+* 專屬性 + + + + 檢出限界定量限界-直線性+ 范圍

+

+

注：-：一般不需要；+：需要；*：視情況而定。室內或室間再現精度選擇其一進行評價，日本藥局方通常選擇后者進行評價。

類型Ⅰ需做鑒別試驗，即對藥品中的主要成分及其特征進行鑒別。類型Ⅱ需做檢查試驗，即對藥品中的雜質或不純物的量進行測定。類型Ⅲ需做含量測定和溶出度試驗，即對藥品中的成分進行測定(成分包括穩定劑、添加劑等)和藥品有效性試驗。分析方法驗證用語

4.1 適應性/牢固性(Robustness)指故意將分析條件在小范圍內變化時，測定值不受影響的能力。例如，反應的pH值、溫度、室間及試藥的量等分析條件在適當的范圍內改變時，對測定值的穩定性進行研究討論。測定值對于分析條件不穩定時，應對方法加以改進。適應性的研究結果在分析方法中以表示分析條件的有效數字或注意事項的形式得以體現。

4.2 實驗室 指試驗進行的場所、設施。分析方法驗證中所述改變實驗室是指試驗者、裝置以及試藥的批號等試驗條件發生變化。

4.3 試驗法 指藥局方中的試驗方法，例如鑒別試驗、檢查試驗等。試驗方法應包括樣品的制備、規定值、分析方法等。

4.4 生產者危險率 指合格的制品由于試驗原因而錯判為不合格制品的發生概率。一般以α表示，也叫第一過失率，也就是在限度試驗中所說的假陽性率。4.5 消費者危險率 指不合格的制品由于試驗原因而錯判為合格制品的發生概率。一般以β表示，也叫第二過失率，也就是在限度試驗中所說的假陰性率。4.6 測定次數 指分析方法操作程序中規定的次數，為了提高分析方法的精度，有些試驗明確規定試驗次數在2次以上，分析方法驗證是對包括分析方法所規定的測定次數在內的分析方法的評價。它與為了提高分析方法的精度進行重復分析時的重復次數不同。

4.7 測定值 一次分析所得到的一個數值。

第四篇：JP13分析方法的驗證

JP13分析方法的驗證

JP13分析方法的驗證

分析方法的驗證，就是對藥品分析實驗所采用的分析方法是否完全達到了預期目的，或證明由分析方法誤差而導致試驗結果判斷錯誤的概率是否在允許范圍之內，而進行的科學證明。

分析方法的驗證以驗證參數表示。在制定藥品質量標準時，可通過這些參數證明所建立的分析方法是否適當。本文所述分析方法驗證是指下述情況：藥局方新收載品種質量標準的建立；藥局方已收載品種質量標準的修訂；根據藥局方的通則建立替代方法。

1、日本藥局方收載分析方法所需資料

1.1 概要 對分析方法作簡要說明，包括所采用分析方法的必要性，特點與優點及有關驗證的要點。如系分析方法的修訂，則需闡明新方法與原方法的區別以及新方法的優勢。

1.2 分析方法 本項記載的有關分析方法的內容要足以能對分析方法進行評價，并且必要時可用復核試驗進行評價。分析方法主要記載內容包括：分析的步驟、標準品及樣品的制備方法、試劑與試藥的調配、注意事項、分析系統是否正常運轉的檢驗證明方法(例如高效液相色譜法中的分離效率的研究)、分析結果的計算公式、測定次數等。并且，如果使用了藥局方以外的裝置，還需詳述有關內容；如果使用了新的標準品，則必須提供其物理、化學及生物學特征數據，并提供其質量標準。

1.3 有關分析方法驗證的資料 本項應包括求導各驗證參數的試驗設計、試驗數據、計算結果及檢定結果等。

2、驗證參數(validationcharacterisitics)

分析方法適當與否可通過驗證參數進行評價，下面列舉了最典型的分析方法驗證參數的定義及其評價方法。

驗證參數的有關術語及定義因分析方法的應用領域不同而不同，本文所使用的術語及定義僅限于日本藥局方。評價方法項下所述內容也僅為簡要概述。確定驗證參數的方法很多，采用何種方法沒有具體限制。但是，驗證參數的限值常因確定方法的不同而發生變化。故此，確定驗證參數的實驗方法、實驗數據、計算方法等應盡可能詳細地記述。

本文分析方法驗證中未包括驗證參數適應性/牢固性(Robustness)的討論，這是由于牢固性的研究主要在分析方法的開發設計階段進行，其研究結果可以在方法的分析條件或注意事項中得到體現。

2.1 真度/準確度(Accuracy/Trueness)

2.1.1 定義：所謂準確度，指分析方法所得測定值的偏離程度，通常以測定值的總平均值與真值之間的差來表示。

2.1.2 評價方法：準確度一般以測定室內重現精度或室間再現精度時所得總平均值與真值的差表示。真值一般使用理論值(如滴定法)，如果理論值不存在或即使存在但很難求出的情況下，可采用經過確證或認可的數值來代替(如制劑分析常以原料藥的測定值作為真值)。分析方法的專屬性強，可以推斷其分析方法的誤差就小。由推出的真值與室內(室間)再現精度的標準偏差即可計算出真值的95%置信區間，并可判斷這個區間是否包括0點，或區間的上下限值是否在分析方法

1所要求的精度范圍之內。

2.2 精密度(Precision)

2.2.1 定義：精密度是指從均勻樣品中抽取的復數個供試品進行重復分析測定時，所得到的一系列測定數據彼此之間的一致程度。測定值的誤差以偏差、標準偏差、或相對標準偏差的形式表示。精度根據重復實驗的條件不同以三個水平表示，分別稱為：并行精度、室內再現精度、室間再現精度。

并行精度(Repeatability/Intra-assayprecision)：指實驗室、實驗者、實驗日期、裝置、器具以及試藥的批號等實驗條件均未改變的情況下，從均勻樣品中抽取的復數個供試品短時間內進行重復分析測定時(并行條件)的精度。

室內再現精度(Intermediateprecision)：指同一實驗室內，實驗者、實驗日期、裝置、器具以及試藥的批號等實驗條件一部分或全部改變的情況下，從均勻樣品中抽取的復數個供試品進行重復分析測定時(室內再現條件)的精度。

室間再現精度(Reproducibility)：指在不同實驗室間，從均勻樣品中抽取的多個供試品進行重復分析測定時(室間再現條件)的精度。

2.2.2 評價方法：首先，要保證精度研究所用樣品的數量和均勻性。溶液應為均勻性樣品，在得不到均勻性樣品時，通常將大量制劑粉碎混合至認為均勻或制劑的各組分混合至認為均勻的樣品作為均勻性樣品使用。如果同時做兩個水平以上的精度評價時，可以采用諸如單因素方差分析等實驗方法，但為了正確得出分析方法的精度，必須有足夠的實驗次數、分析條件的水平數及實驗室數。并且要對可預想到的致使分析發生變化的要因進行研究。各水平的精度以偏差、標準偏差、相對標準偏差、偏差的90%置信區間以及與其相對應的標準偏差的區間來表示。將其與分析方法所要求精度的標準值進行對照，以確定分析方法是否可行。通常是以室內(間)的再現精度作為方法取舍的依據。

2.3 專屬性/特異性(Specificity)

2.3.1 定義：專屬性指分析樣品中有共存物質的情況下，對被測物質進行正確測定的能力，即表示分析方法的識別能力。如果分析方法的專屬性有個別缺陷，可以用其他方法加以補充。

2.3.2 評價方法：確證分析方法是否達到試驗目的，確實能夠對被測物質進行鑒別或定量。例如，分析方法的專屬性可以通過比較A為僅含被測物質樣品(陽性對照)；B為含有制劑的其他各組成成分及不純物或分解產物中添加被測物質的樣品；C為不含被測物質，僅含制劑的其他組分、不純物及分解產物的樣品(陰性對照)，根據A、B、C三種樣品的分析結果進行評價。如果不純物不易得到時，可以用含有不純物的樣品(如經時發生變化的樣品)替代。

2.4 檢出限界(Detection Limit)

2.4.1 定義：檢出限界是指樣品中所含的被測物質可被檢出的最低量或濃度。在檢出限界內并不意味著一定就能夠進行定量。

2.4.2 評價方法：通常以消費者危險率及生產者危險率在5%以下來規定檢出限界。檢出限界可以通過空白樣品或檢出限界附近的樣品測定值的標準偏差以及檢出限界附近的標準曲線的斜率算出。例如，根據檢出限界附近的標準曲線的斜率以及空白樣品測定值的標準偏差，由下式求出檢出限界。

DL=3.3σ/slope

DL：檢出限界

σ：空白樣品測定值的標準偏差

slope：檢出限界附近標準曲線的斜率

應用色譜法時，測定值的標準偏差可以用信噪比代替。分析方法的檢出限界應比質量標準中規定值要小。

2.5 定量限界(Quantitation Limit)

2.5.1 定義：定量限界是指樣品中所含的被測物質可被進行定量的最小量或最低濃度。定量限界所述樣品測定值的精度，以相對標準偏差表示，一般為10%。

2.5.2 評價方法：通常定量限界可以通過空白樣品或被測物定量限界附近的樣品測定值的標準偏差以及定量限界附近的標準曲線的斜率算出。例如，根據定量限界附近的標準曲線的斜率以及空白樣品測定值的標準偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白樣品測定值的標準偏差

slope：定量限界附近標準曲線的斜率

應用色譜法時，測定值的標準偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界應比質量標準中規定值要小。

2.6 線性關系

2.6.1 定義：線性關系是指分析方法能夠得到與被測物質的量或濃度具有直線關系的測定值的能力，必要時，被測物質的量或濃度的測定值也可以是從數學公式中得到的變換值。

2.6.2 評價方法：準備一系列不同濃度(量)的被測樣品，按照分析方法的操作步驟進行測定，用測定值得到的回歸方程及相關系數對線性關系進行評價。必要時，將測定值由回歸方程算出的殘差對被測物質的量(濃度)作圖，不應具有某種特定的趨勢。通常，采用5個不同量(濃度)的樣品作線性關系的研究。

2.7 范圍(Range)

2.7.1 定義：分析方法驗證中所述范圍是指具有一定精度和準確度的被測物質上限及下限量(濃度)之間的領域。對于上述具有線性關系的分析方法則指：具有一定精度和準確度，并且使線性關系成立的被測物質上下限量(濃度)之間的領域。

2.7.2 評價方法：分析方法驗證的范圍一般為標準中規定值的±20%左右，對范圍的上下限值及范圍中央值附近的樣品進行精度、真度及線性的研究討論。

3、試驗分析方法的分類

根據試驗目的，試驗方法主要可以分為以下3種類型，各類型分析試驗方法的驗證所要求的驗證參數見表1。應該指出，這僅是一個原則，評價分析方法所必需的驗證參數將隨分析方法的特點及試驗目的而改變。

表1 試驗類型與所要求的驗證參數

其一進行評價，日本藥局方通常選擇后者進行評價。

類型Ⅰ需做鑒別試驗，即對藥品中的主要成分及其特征進行鑒別。類型Ⅱ需做檢查試驗，即對藥品中的雜質或不純物的量進行測定。類型Ⅲ需做含量測定和溶出度試驗，即對藥品中的成分進行測定(成分包括穩定劑、添加劑等)和藥品有效性試驗。

4、分析方法驗證用語

4.1 適應性/牢固性(Robustness)指故意將分析條件在小范圍內變化時，測定值不受影響的能力。例如，反應的pH值、溫度、室間及試藥的量等分析條件在適當的范圍內改變時，對測定值的穩定性進行研究討論。測定值對于分析條件不穩定時，應對方法加以改進。適應性的研究結果在分析方法中以表示分析條件的有效數字或注意事項的形式得以體現。

4.2 實驗室 指試驗進行的場所、設施。分析方法驗證中所述改變實驗室是指試驗者、裝置以及試藥的批號等試驗條件發生變化。

4.3 試驗法 指藥局方中的試驗方法，例如鑒別試驗、檢查試驗等。試驗方法應包括樣品的制備、規定值、分析方法等。

4.4 生產者危險率 指合格的制品由于試驗原因而錯判為不合格制品的發生概率。一般以α表示，也叫第一過失率，也就是在限度試驗中所說的假陽性率。

4.5 消費者危險率 指不合格的制品由于試驗原因而錯判為合格制品的發生概率。一般以β表示，也叫第二過失率，也就是在限度試驗中所說的假陰性率。

4.6 測定次數 指分析方法操作程序中規定的次數，為了提高分析方法的精度，有些試驗明確規定試驗次數在2次以上，分析方法驗證是對包括分析方法所規定的測定次數在內的分析方法的評價。它與為了提高分析方法的精度進行重復分析時的重復次數不同。

4.7 測定值 一次分析所得到的一個數值。

本文譯自第13版日本藥局方附錄參考資料3所載內容。

第五篇：化學藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則

化學藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則

一、概述

? 保證藥品安全、有效、質量可控是藥品研發和評價應遵循的基本原則，其中，對藥

品進行質量控制是保證藥品安全有效的基礎和前提。為達到控制質量的目的，需要多角度、多層面來控制藥品質量，也就是說要對藥物進行多個項目測試，來全面考察藥品質量。一般地，每一測試項目可選用不同的分析方法，為使測試結果準確、可靠，必須對所采用的分析方法的科學性、準確性和可行性進行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的要求，這就是通常所說的對方法進行驗證。方法驗證的目的是判斷采用的分析方法是否科學、合理，是否能有效控制藥品的內在質量。? 從本質上講，方法驗證就是根據檢測項目的要求，預先設置一定的驗證內容，并通

過設計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目的要求。

? 方法驗證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質量研究和質量控制的組

成部分。

? 只有經過驗證的分析方法才能用于控制藥品質量，因此方法驗證是制訂質量標準的基礎。方法驗證是藥物研究過程中的重要內容。

二、方法驗證的一般原則

? 原則上每個檢測項目采用的分析方法，均需要進行方法驗證。

? 方法驗證的內容應根據檢測項目的要求，結合所采用分析方法的特點確定。

?同一分析方法用于不同的檢測項目會有不同的驗證要求。例如，采用高效液相色譜

法用于制劑的鑒別和雜質定量試驗應進行不同要求的方法驗證，前者重點要求驗證專屬性，而后者重點要求驗證專屬性、準確度、定量限。

三、方法驗證涉及的三個主要方面

?

（一）需要驗證的檢測項目

? 鑒別、? 雜質檢查

? 定量測定（含量測定、溶出度、釋放度等）、? 其他特定檢測項目（分子量及分子量分布、生物活性等）

? 鑒別的目的在于判定被分析物是目標化合物，而非其它物質，用于鑒別的分析方法

要求具有較強的專屬性。

? 雜質檢查主要用于控制主成分以外的雜質，如有機雜質、無機雜質等。雜質檢查可

分為限度試驗和定量試驗兩種情況。用于限度試驗的分析方法驗證側重專屬性和檢測限。

? 用于定量試驗的分析方法驗證強調專屬性、準確度和定量限。

? 定量測定包括含量測定、制劑的溶出度測定等，由于此類項目對準確性要求較高，故所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準確度和線性。

? 其他特定檢測項目包括粒徑分布、旋光度、分子量分布、生物活性等，由于這些檢

測項目的要求與鑒別、雜質檢查、定量測定等有所不同，對于這些項目的分析方法驗證應有不同的要求。

（二）分析方法

? 分析方法是為完成上述各檢測項目而設定和建立的測試方法。

? 分析方法原理

? 儀器及儀器參數

? 試劑

? 系統適用性試驗

? 供試品溶液制備

? 對照品溶液制備

? 測定

? 計算及測試結果的報告等

? 測試方法

? 化學分析方法

? 儀器分析方法

? 這些方法各有特點，同一測試方法可用于不同的檢測項目，但驗證內容可不相

（三）驗證內容

? 驗證內容：

? 方法的專屬性

? 線性

? 范圍

? 準確度

? 精密度

? 檢測限

? 定量限

? 耐用性

? 系統適用性等

四、方法驗證的具體內容

?

（一）專屬性

? 專屬性系指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法

能夠正確鑒定、檢出被分析物質的特性。

? 通常，鑒別、雜質檢查、含量測定方法中均應考察其專屬性。如采用的方法不夠專

屬，應采用多個方法予以補充。

?

1、鑒別反應

? 鑒別試驗應確證被分析物符合其特征。

? 專屬性試驗要求證明能與可能共存的物質或結構相似化合物區分，需確證含被分析

物的供試品呈正反應，而不含被測成分的陰性對照呈負反應，結構相似或組分中的有關化合物也應呈負反應。

?

2、雜質檢查

?作為純度檢查，所采用的分析方法應確保可檢出被分析物中雜質的含量，如有

關物質、重金屬、有機溶劑等。因此雜質檢查要求分析方法有一定的專屬性。? 在雜質可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質，證明雜質與共存物質能

得到分離和檢出，并具適當的準確度與精密度。

? 在雜質或降解產物不能獲得的情況下，專屬性可通過與另一種已證明合理但分離或

檢測原理不同、或具較強分辨能力的方法進行結果比較來確定。或將供試品用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進行破壞（制劑應考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質個數和量。必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行色譜峰純度檢查。

?

3、含量測定

? 含量測定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價的準確結果。在雜質可獲得的情況下，對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干擾，并與未加雜質和輔料的供試品比較測定結果。

? 在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可采用另一個經驗證了的或藥典方法進行比

較，對比兩種方法測定的結果。

? 也可采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質

或降解產物的試樣，用兩種方法進行含量測定，比較測定結果。

? 必要時進行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。?

（二）線性

? 線性系指在設計的測定范圍內，檢測結果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈

線性關系的程度。線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質定量試驗和含量測定均需要驗證線性。應在設計的測定范圍內測定線性關系。可用一貯備液經精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質濃度系列進行測定，至少制備5個濃度。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經數學轉換，再進行線性回歸計算，并說明依據。

?

（三）范圍

? 范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物

高低限濃度或量的區間。范圍是規定值，在試驗研究開始前應確定驗證的范圍和試驗方法。

? 可以采用符合要求的原料藥配制成不同的濃度，按照相應的測定方法進行試驗。范

圍通常用與分析方法的測試結果相同的單位（如百分濃度）表達。涉及到定量測定的檢測項目均需要對范圍進行驗證，如含量測定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質定量試驗等。

? 范圍應根據劑型和（或）檢測項目的要求確定。

?

1、含量測定范圍應為測試濃度的80％～100％或更寬。

?

2、制劑含量均勻度范圍應為測試濃度的70％～130％。根據劑型特點，如氣霧

劑、噴霧劑，必要時，范圍可適當放寬。

?

3、溶出度或釋放度對于溶出度，范圍應為限度的±20％；如規定限度范圍，則

應為下限的-20％至上限的+20％。對于釋放度，如規定限度范圍為，從1小時后為20％至24小時后為90％，則驗證范圍應為0～110％。

?

4、雜質雜質測定時，范圍應根據初步實測結果，擬訂出規定限度的±20％。如

果含量測定與雜質檢查同時測定，用面積歸一化法，則線性范圍應為雜質規定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。

?

（四）準確度

? 準確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。有時也

稱真實度。一定的準確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項目均需要驗證準確度，如含量測定、雜質定量試驗等。準確度應在規定的范圍內建立，對于制劑一般以回收率試驗來進行驗證。試驗設計需考慮在規定范圍內，制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，即測定9次，報告已知加入量的回收率（％）或測定結果平均值與真實值之差及其可信限。

?

1、含量測定

? 原料藥可用已知純度的對照品或符合要求的原料藥進行測定，或用本法所得結果與

已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定，必要時，與另一個已建立準確度的方法比較結果。

?

2、雜質定量試驗

? 雜質的定量試驗可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。如果不能得到雜質，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典方法或經過驗證的方法。如不能測得雜質的相對響應因子，可在線測定雜質的相關數據，如采用二極管陣列檢測器測定紫外光譜，當雜質的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應因子近似計算雜質含量（自身對照法）。并應明確單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（％）或面積比（％）。

?

（五）精密度

? 精密度系指在規定的測試條件下，同一均質供試品，經多次取樣進行一系列檢測所

得結果之間的接近程度（離散程度）。

? 精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。取樣測定次數應至少6次。?精密度可以從三個層次考察：

? 重復性

? 中間精密度

? 重現性

?

1、重復性

? 重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由同一分析人員測定所得結

果的精密度。重復性測定可在規定范圍內，至少用9次測定結果進行評價，如制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，或100％的濃度水平，用至少測定6次的結果進行評價。

?

2、中間精密度

? 中間精密度系指在同一實驗室，由于實驗室內部條件改變，如時間、分析人員、儀

器設備、測定結果的精密度。驗證設計方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設備。

?

3、重現性

? 指不同實驗室之間不同分析人員測定結果的精密度。當分析方法將被法定標準采用

時，應進行重現性試驗。

?

（六）檢測限

? 檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。該驗

證指標的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力。因此對雜質限度試驗，需證明方法具有足夠低的檢測限，以保證檢出需控制的雜質。

六、對方法驗證的評價

?

（一）有關方法驗證評價的一般考慮

? 總體上，方法驗證應圍繞驗證目的和一般原則來進行，方法驗證內容的選擇和試驗

設計方案應系統、合理，驗證過程應規范嚴謹。并非每個檢測項目的分析方法都需進行所有內容的驗證，但同時也要注意驗證內容應充分，足以證明采用的分析方法的合理性。如雜質限度試驗一般需要驗證專屬性和檢測限，而對于精密度、線性、定量限等涉及定量測定的項目，則一般不需要進行驗證。

?

（二）方法驗證的整體性和系統性

? 方法驗證內容之間相互關聯，是一個整體。因此不論從研發角度還是評價角度，方

法驗證均注重整體性和系統性。例如，對于鑒別項目所需要的專屬性，一般一種分析方法不太可能完全鑒別被分析物，此時采用兩種或兩種以上分析方法可加強鑒別項目的整體專屬性。在方法驗證內容之間也存在較多的關聯性，可以相互補充。如原料藥含量測定采用容量分析法時，由于方法本身原因，專屬性略差，但假如在雜質檢測時采用了專屬性較強的色譜法，則一般認為整個檢測方法也具有較強的專屬

性。

? 總之，由于實際情況較復雜，在方法驗證過程中，不提倡教條地去進行方法驗證。? 此外，越來越多的新方法不斷被用于質量控制中，對于這些方法如何進行驗證需要

具體情況具體分析，而不能照搬指導原則。