第一章

微生物緒論常見考點

第一章?緒論

一、微生物的分類及命名

1、微生物的分類等級為界、門、綱、目、科、屬、種，種是最基本的分類單位。目前國際上普遍采用的分類系統是伯杰分類系統。

2、根據微生物的大小、結構和組成不同，分為三大類型：

（1）非細胞型微生物：此類微生物無細胞結構，由一種核酸和蛋白衣殼組成，必須寄生在活細胞內才能生長繁殖。如病毒、類病毒和朊病毒（又稱朊粒）。

（2）原核細胞型微生物：此類微生物由單細胞組成，細胞核分化程度低，無核膜、核仁，染色體為裸露的DNA分子，缺乏完整的細胞器。如細菌、支原體、衣原體、立克次體和螺旋體。

（3）真核細胞型微生物：此類微生物細胞核分化程度高，有核膜、核仁、完整的細胞器。如真菌、單細胞藻類。

3、每種細菌DNA中的G（鳥嘌呤）+C（胞嘧啶）含量摩爾百分比有一定范圍，變化不大，DNA（G+C）mol%可以作為細菌分類的一個重要依據。

4、微生物命名由屬名和種名組成，中文命名種名在前，屬名在后。拉丁文則相反。

如：Mycobacterium

tuberculosis

中文名:

種名

+

屬名

例:

結核分枝桿菌

二、微生物的發展

1、荷蘭人列文虎克發明了顯微鏡，人類第一次觀察到微生物。

2、法國科學家巴斯德被稱為“微生物學之父”。

3、1929年，弗萊明發現了青霉素。1940年Florey和Chain將青霉素分離提純，應用于臨床。

5、德國醫生郭霍證明了微生物是傳染病的致病因子。

第二章

細菌的基本性狀常見考點

一、細菌的形態與結構

（一）細菌的大小和形態

1、細菌個體微小，通常以微米作為測量單位。

2、細菌的基本形態有三類：球菌、桿菌、螺形菌。

（二）細菌的基本結構

1、細菌的基本結構由外向內依次是細胞壁、細胞膜、細胞質和核質。

2、根據細胞壁的化學組成與結構不同，用革蘭染色將細菌分為G＋和G－兩大類。

3、磷壁酸是革蘭陽性菌細胞壁特有的結構，壁磷壁酸為革蘭陽性菌的重要表面抗原，膜磷壁酸為黏附因子。

4、外膜層是革蘭陰性菌特細胞壁的特殊成分，從外向內依次是脂多糖、脂質雙層、脂蛋白。其中脂多糖是革蘭陰性菌內毒素，脂質A是內毒素的主要毒性部分。

5、由于革蘭陰性菌和革蘭陽性菌細胞壁組成成分的不同，兩者對藥物的敏感性也不一樣。革蘭陽性菌細胞壁有五肽交聯橋，是青霉素作用的部位。

6、中介體：又稱中間體，是細胞膜內陷折疊而成的管狀囊狀結構。其功能類似真核細胞的線粒體，故有人稱之為類線粒體。

7、質粒：是細菌染色體（核質）以外的遺傳物質，為雙鏈閉環DNA分子，攜帶遺傳信息，控制細菌某些特定的遺傳性狀。F質粒控制性菌毛的產生、R質粒與細菌的耐藥性有關。

（二）細菌的特殊結構

1、鞭毛：細菌的運動器官，是由細胞質伸出的蛋白性絲狀物。

2、菌毛：主要出現在革蘭陰性菌中。分為性菌毛和普通菌毛。

僅少數革蘭陰性細菌具有性菌毛，較普通菌毛少，只有1～4根，比普通菌毛長且粗，呈中空管狀，是兩菌之間傳遞遺傳物質的通道。帶有性菌毛的細菌稱為F+菌或雄性菌，無菌毛的細菌稱為F-菌或雌性菌。細菌的耐藥性及某些毒力因子均可通過這種方式轉移。

3、莢膜：通常在機體內和營養物質豐富的環境中形成，在細胞壁外包繞的一層界限分明，且不易被洗脫的黏稠性物質。

4、芽胞：主要為革蘭陽性桿菌在一定條件下細胞質、核質濃縮脫水而形成的一個遮光性很強、具有多層膜狀結構、通透性很低的圓形或卵圓形小體。

▲細菌L型即為細菌細胞壁缺陷型。在人工誘導（少量青霉素、頭孢菌素存在）或自然情況下，細菌L型在體內或體外均可產生。

細菌L型在含血清的高滲低瓊脂培養基中能緩慢生長，可形成“油煎蛋”樣菌落（典型L型細菌）：菌落較小，中心致密并深陷人瓊脂中；四周較薄，由透明的顆粒組成，在低倍鏡下觀察菌落呈“油煎蛋”狀。

細菌L型保留了親代的遺傳特性，可返祖，可致病。

二、細菌的生理

1、細菌的基本化學組成：水、無機鹽、蛋白質、糖類、脂類、核酸（細菌含有RNA和DNA兩種核酸）。

2、細菌有帶電現象，革蘭陽性菌的等電點約為pH2～3，革蘭陰性菌的等電點約為pH4～5。

（一）細菌的生長繁殖、控制、遺傳及變異

1、細菌根據營養類型的不同，分為自養菌（以無機物作為原料）和異養菌，異氧菌又根據所需營養物質的不同分為腐生菌（以無生命的有機物作為原料）和寄生菌（以宿主體內的有機物作為原料）。

2、細菌生長繁殖的主要條件有：

（1）充足的營養物質：水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子。

（2）合適的pH：大多數細菌的最適pH為7.2～7.6，有個別例外，結核分支桿菌在pH6.4～6.8、霍亂弧菌在pH8.4～9.2的環境中生長最好。

（3）合適的溫度：

35～37℃

（4）必要的氣體

根據細菌對氧氣?需求不一，分為：

①需氧菌：必須在有氧（空氣）的情況下才能生長。

②微需氧菌：在5%～6%的低氧環境中才能生長。

③厭氧菌：必須在無氧的環境中才能生長。

④兼性厭氧菌：在有氧和無氧環境中均能生長。

3、細菌生長繁殖的規律

（1）細菌一般一無性二分裂的方式繁殖。

（2）大多數細菌20～30分鐘繁殖一代，結核需要18～20小時才繁殖一代。

（3）細菌的生長曲線分為四個時期：

①遲緩期：適應階段，此階段細菌幾乎不繁殖。一般約1～4小時。

②對數期：細菌的形態、染色性、生理活性都較典型，可以用來觀察細菌的大小、形態、染色性、對抗菌藥物的敏感性等。一般約8～18小時。

③穩定期：細菌繁殖數與死亡數大致平衡。

④衰亡期：細菌死亡逐漸增多，死菌數超過活菌數。

4、細菌合成代謝的產物主要有：熱原質、毒素（革蘭陽性菌合成外毒素、革蘭陰性菌合成內毒素）、侵襲性酶類、色素、抗生素、細菌素、維生素。

▲我國規定生活飲用水的標準是：1ml水中的細菌總數不超過100cfu；100ml水中不得檢出大腸埃希菌。

5、細菌的控制：

（1）消毒：殺死物體上的病原微生物但不一定殺死細菌芽胞的方法。

（2）滅菌：殺滅物體上所有的微生物，包括細菌芽孢。

（3）防腐：防止或抑制微生物生長繁殖的方法。

（4）無菌和無菌操作：無菌是指沒有活的微生物存在。防止微生物進入機體或者其他操作對象的方法稱為無菌操作。

（5）高壓蒸汽滅菌法的壓力為103.4kPa，溫度為121.3℃，維持15-30分鐘。檢測高壓蒸汽滅菌效果的細菌是嗜熱枯草芽孢桿菌。

（6）用于牛奶等物品的消毒方法是巴氏消毒法。

（7）紫外線殺菌的主要機制是干擾DNA的復制。

6、正常情況下，人體與外界相同的器官都有細菌，機體的胃、骨骼、肌肉、血液、腦等無菌。濫用抗生素會導致菌群失調而發生一系列的病理反應。

7、細菌常見的變異現象：

（1）形態與結構變異：如細菌L型。①莢膜變異，從有到無；②鞭毛變異（H-O變異），從有到無；③芽胞變異，從有到無。

（2）菌落變異：S-R變異，細菌菌落光滑型與粗造型之間的變異。

（3）毒力變異：包括毒力加強和毒力減弱。

（4）抗原變異

（5）耐藥性變異：細菌對某種藥物從敏感變為不敏感。

（6）酶活性變異

（7）生化特性的變異

8、細菌的R質粒是耐藥質粒，可通過細菌間的接合或通過噬菌體進行傳遞。

9、細菌基因轉移與重組的方式有轉化、接合、轉導、溶原性轉換、原生質融合等。

（1）轉化：是受體菌直接攝取供體菌提供的游離DNA片段整合重組，使受體菌的性狀發生變異的過程。

（2）轉導：是以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉移到受體菌內，導致受體菌基因改變的過程。

（3）接合：受體菌和供體菌直接接觸，供體菌通過性菌毛將所帶有的F質粒或類似遺傳物質轉移至受體菌的過程。

（4）溶原性轉換：是噬菌體的DNA與細菌染色體重組，使宿主菌遺傳結構發生改變而引起的遺傳型變異。

（5）原生質體融合：兩種經過處理失去細胞壁的原生質體混和可發生融合，融合后的雙倍體細胞可發生細菌染色體間的重組。

10、細菌的主要遺傳物質是染色體，為一條環狀閉合的雙螺旋DNA。質粒也是細菌的遺傳物質。但不是主要遺傳物質。

第三章

微生物致病性與感染常見考點

1、病原微生物能否致病與病原體的毒力、數量、侵入么戶、機體的免疫力、環境因素等密切相關。

2、細菌分泌的侵襲性酶類主要有：

（1）透明質酸酶：分解結締組織的透明質酸，易于細菌擴散。

（2）膠原酶：分解細胞外基質的膠原蛋白。

（3）神經氨酸酶：分解腸黏膜上皮細胞的細胞間質。

（4）磷脂酶：可水解細胞膜的磷脂，破壞組織細胞。

（5）卵磷脂酶：分解細胞膜的卵磷脂。

（6）激酶：將血纖維蛋白酶原激活為纖維蛋白酶，以分解纖維蛋白，防止形成血凝塊。

（7）凝固酶：使血漿發生凝固，保護細菌不被吞噬細胞吞噬和殺滅。

（8）IgA蛋白酶：與細菌的黏附有關。

3、細菌毒素根據來源、性質和作用特點不同分為外毒素和內毒素。

（1）外毒素的特性：①主要是革蘭陽性菌產生；②具有菌種特異性；③毒性作用強；④毒性作用有組織選擇性；⑤具有良好的免疫原性：外毒素經過0.4%的甲醛處理可失去毒性但仍保持免疫原性變為類毒素，可刺激幾天產生抗毒素；⑥不耐熱；⑦都是蛋白質，易被酸及蛋白水解酶滅活。

（2）內毒素的特性：①主要是革蘭陰性菌產生；②化學性質是脂多糖；③抵抗力強，耐熱、耐酸、耐堿、耐強氧化劑；④細菌死亡溶解后釋放；⑤毒性及免疫原性均較外毒素弱，不能用甲醛處理成類毒素。

4、內毒素的主要生物學活性有致熱作用、白細胞增多、感染性休克、DIC等。

5、細菌全身感染在臨床上常見以下幾種情況：

（1）毒血癥：致病菌不進入血液循環，但其產生的外毒素入血。

（2）菌血癥：致病菌侵入血流，但不在其生長繁殖。

（3）敗血癥：致病菌侵入血流，在其中大量繁殖并產生毒性物質。

（4）膿毒血癥：化膿性細菌侵入血流，并在其大量繁殖。

（5）內毒素血癥：革蘭陰性細菌侵入血流，并在其大量繁殖，崩解后釋放大量內毒素。

第四章

細菌檢驗技術常見考點

一、細菌染色標本鏡檢

▲染色標本檢查的基本程序是涂片、干燥、固定、染色、鏡檢。

（一）革蘭染色

1、革蘭染色為兩種染料先后進行染色，為復染色法。

2、染液：結晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、稀釋苯酚復紅液或沙黃。

3、染色步驟：初染1min（結晶紫）→流水沖洗→媒染1min（盧戈碘液）→流水沖洗→脫色20-30s（95%乙醇）→流水沖洗→復染0.5-1min（稀釋苯酚復紅液或沙黃）→流水沖洗→干燥→鏡檢

4、意義：鑒別細菌、指導用藥、指導臨床治療。

5、結果判定：染紫色為革蘭陽性，染紅色為革蘭陰性。

（二）抗酸染色

1、抗酸染色也是兩種染料先后染色，也是復染色法。

2、染液：苯酚復紅、3%鹽酸酒精、呂氏堿性亞甲藍

3、染色步驟：初染5～8min（苯酚復紅加熱）→流水沖洗→脫色（3%鹽酸酒精）→流水沖洗→復染1min（呂氏亞甲藍）→流水沖洗→干燥→鏡檢

4、注意事項：①苯酚加熱冒氣即可，切勿煮沸或煮干；②脫色要脫到無紅色染液脫下為止。③痰標本需要經過酸或堿處理后，使痰液化后接種。

5、臨床意義：一般用于分枝桿菌屬的檢查，如結核分枝桿菌、麻風桿菌等。

6、結果判定：染成紅色為抗酸菌，染成藍色為非抗酸菌。

二、細菌不染色標本鏡檢

▲壓滴法、懸滴法、暗視野聚光法均用于觀察細菌動力。暗視野聚光法使用暗視野顯微鏡可觀察螺旋體及其動力。

三、細菌接種與培養技術

1、液體培養基是在肉浸液中加入1%蛋白胨和0.5%NaCl，調pH至7.4，蛋白胨的作用為提供細菌生長繁殖所需的氮源。

2、半固體培養基是在液體培養基中加入0.2%～0.5的瓊脂。

3、固體培養基是在液體培養基中加入2%～3%的瓊脂。

4、細菌L型的培養基必須采用高滲（3%～5%NaC

l、10%～20%蔗糖等）低瓊脂培養基。

5、制備好的培養基放于4℃活冷暗處一般可以保存一周，最多不超過2周。

6、平板劃線接種法一般用于含有多種細菌的標本，利用此接種法可以得到單個菌落，分為分區劃線法和連續劃線法。

7、分區劃線法下一區應與上一區接觸3～4次，此方法多用于含菌量多的標本，如糞便、濃汁、痰液等標本。連續劃線法多用于含菌量少的標本。

8、斜面接種法主要用于純種增菌及保留菌種或生化反應。

9、穿刺接種法可用于觀察細菌動力，有鞭毛的細菌可沿穿刺線擴散生長。

10、液體接種法多用于普通肉湯、蛋白胨水等液體培養基接種。

11、細菌在液體培養基上的生長現象有三種，分別是：①混濁（大多數細菌）；②沉淀（鏈狀生長的細菌，如鏈球菌、炭疽芽孢桿菌等）；③菌膜（專性需氧菌，如銅綠假單胞菌等）。

12、血瓊脂上的溶血現象：

α溶血：又叫草綠色溶血，菌落周圍血培養基變為綠色環狀。

β溶血：又稱完全溶血，菌落周圍形成一個完全清晰透明的環。

γ溶血：即不溶血，菌落周圍的培養基沒有變化；紅細胞沒有溶解或無缺損。

雙環：上層溶血環，內層為θ溶血，外層為α溶血。如產氣莢膜梭菌。

13、傾注平板法用于水、牛乳、飲料及尿液等液體標本的細菌計數。

14、常用的厭氧培養法有：①皰肉培養基法；②焦性沒食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法，⑥氣體噴射法。

15、最常用的營養培養基：血平板和巧克力平板。

16、鑒別培養基：如糖發酵管、三糖鐵培養基、枸櫞酸鹽培養基、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-美藍瓊脂和動力-吲哚-尿素（MIU）等培養基。

17、選擇培養基：在培養基中加入某種化學成分或抗生素以抑制某些細菌的生長，而有助于需要的細菌生長，此培養基稱為選擇培養基。如SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌，因而使沙門菌、志賀菌容易得到分離。

18、增菌培養基：如乙型溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌的生長需含血液或血清的培養基；霍亂弧菌的增菌常用堿性蛋白胨水。

19、特殊培養基：包括厭氧培養基和細菌L型培養基。巰基乙醇酸鈉是特殊培養基。厭氧培養基如皰肉培養基；細菌L型培養基是針對細胞壁缺陷的細菌L型，由于胞內滲透壓較高，培養基必須采用高滲低瓊脂培養基。

20、細菌血液培養使用的抗凝劑為聚苯乙烯磺酸鈉（SPS）。

四、細菌生化鑒定技術

（一）碳水化合物代謝試驗

1、碳水化合物代謝試驗包括：糖（醇、苷）類發酵試驗、葡萄糖氧化/發酵試驗、甲基紅試驗（MR）、V-P試驗、β-半乳糖苷酶試驗（ONPG）、七葉苷水解試驗。

2、甲基紅試驗的原理是細菌發酵葡萄糖產酸，使培養基pH下降至4.5以下，加入甲基指示劑變紅為試驗陽性。

3、V-P試驗出現紅色為陽性，ONPG出現黃色為陽性，七葉苷水解試驗出現黑色為陽性。V-P試驗常與甲基紅試驗一起使用，因為前者陽性的細菌，后者通常為陰性。

4、七葉苷水解試驗主要用于D族鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別，前者為陽性（黑色）。

（二）蛋白質和氨基酸代謝試驗

1、蛋白質和氨基酸代謝試驗包括：靛基質（吲哚）試驗、硫化氫試驗、尿素酶試驗、苯丙氨酸脫氨酶試驗、氨基酸脫羧酶試驗。

2、吲哚試驗是由于細菌有色氨酸酶，可以分解色氨酸而產生吲哚，與對二甲基苯甲醛反應生成紅色化合物，本試驗呈現紅色為陽性。

3、硫化氫試驗是細菌能分解含硫氨基酸，產生的H2S與Fe2+反應呈黑色為陽性。主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細菌，絕大多數硫化氫陽性，其他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。

4、尿素酶試驗是細菌分解尿素生成氨，使培養基呈堿性，指示劑變紅為陽性。

5、苯丙氨酸脫氨酶的陽性結果為綠色，氨基酸脫羧酶的陽性結果為培養基從黃色變為紫色。

（三）碳源利用試驗

1、碳源利用試驗包括枸櫞酸鹽利用試驗和丙二酸鹽利用試驗。

2、枸櫞酸鹽利用試驗的陽性結果為深藍色，陰性為綠色。

3、丙二酸鹽利用試驗的陽性結果為深藍色。

4、枸櫞酸鹽利用試驗在腸桿菌科中埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性，沙門菌屬、克雷伯菌屬通常為陽性。

（四）酶類試驗

1、觸酶試驗：細菌能催化過氧化氫生成水和氧氣，出現氣泡為陽性。

2、氧化酶試驗：某些細菌具有細胞色素氧化酶，能將二甲基對苯二胺或四甲基對苯二胺氧化成紅色的化合物，出現紅色為陽性。

3、凝固酶試驗：主要用于金黃色葡萄球菌的鑒定。

4、DNA酶試驗：細菌產生DNA酶分解DNA，是菌落周圍出現透明環。葡萄球菌、沙雷菌、變形桿菌均為陽性。

5、硝酸鹽還原試驗：出現紅色為陽性。若加入試劑后無顏色反應，可能是：①硝酸鹽沒有被還原，試驗陰性；②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產物而導致假陰性結果，這時應在試管內加入少許鋅粉（還原劑），如出現紅色則表明試驗確實為陰性。若仍不產生紅色，表示試驗為假陰性。

（五）其他及藥敏鑒定試驗

1、CAMP試驗：B群鏈球菌能產生CAMP因子，可促進葡萄球菌的β-溶血素溶解紅細胞的活性，因此在兩菌（B群鏈球菌和葡萄球菌）的交界處溶血力增加，出現箭頭狀或矢形（半月形）的溶血區。在鏈球菌中，只有B群鏈球菌CAMP試驗陽性，故可作為特異性鑒定。

2、膽汁溶菌試驗：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是由于膽汁降低細胞膜表面的張力，使細胞膜破損或使菌體裂解；或者是由于膽汁加速了肺炎鏈球菌本身自溶過程，促使細菌發生自溶。

3、O/129抑菌試驗：O/129抑菌試驗為藥敏試驗，0／129（二氨基喋啶）對弧菌屬細菌有抑制作用，而對氣單胞菌屬細菌無抑制作用。

4、桿菌肽試驗：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎全部敏感，而其他群鏈球菌絕大多數對其耐藥。

5、奧普托欣（Optochin）試驗：幾乎所有肺炎鏈球菌對奧普托欣試驗敏感，而奧普托欣試驗對其他鏈球菌則無抑制作用。

五、細菌毒力鑒定

▲內毒素

常采用鱟試驗——內毒素激活鱟試劑中凝固酶原轉變為凝固酶，凝固蛋白原生成凝固蛋白。

▲外毒素

常用體內及體外毒力試驗檢測，也用ELISA法測定。

第五章

細菌對抗菌藥物的敏感試驗

一、臨床常用抗菌藥物

（一）β-內酰胺類

1、常見藥物主要是青霉素類、頭孢菌素類和單環β-內酰胺類（氨曲南和卡蘆莫南）。

2、作用機制：β-內酰胺類抗生素的作用機制相似，均是與青霉素結合蛋白（PBP）結合，抑制細菌細胞壁合成，致使細菌死亡。

（二）氨基糖苷類

1、作用機制：①依靠離子的附作用，吸附在菌體表面，造成膜的損傷；②和細菌核糖體30S小亞基發生不可逆結合，抑制mRNA的轉錄和蛋白質的合成，造成遺傳密碼的錯讀，產生無意義的蛋白質。

2、種類：①鏈霉菌屬：如鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龍霉素、新霉素；

②小單胞菌屬：如慶大霉素、福提霉素；

③半合成氨基苷類：阿米卡星、奈替米星、地貝卡星等，氨基苷類抗菌藥物對需氧G-桿菌有較強的抗菌活性，對G+球菌有一定的活性。

（三）喹諾酮類

1、作用機制：①通過外膜孔蛋白和磷脂滲透進入細菌細胞；②作用于DNA旋轉酶，干擾細菌DNA復制、修復和重組。

2、種類：①第一代：為窄譜抗菌藥物，對G+球菌無作用；主要作用于大腸埃希菌，且迅速出現耐藥，較少應用于臨床。

②第二代：對G-和G+細菌均有作用；比較這類藥的抗菌活性強度依次為環丙沙星、氧氟沙星、羅美沙星、氟羅沙星、培氟沙星、諾氟沙星；

③第三代：對G+菌作用高于第二代的4～8倍，對厭氧菌亦有作用；司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟沙星、加替沙星、格帕沙星、莫西沙星等。

（四）大環內酯類

1、作用機制：可逆結合細菌核糖體50S大亞基的23S單位，抑制細菌蛋白質合成和肽鏈延伸；

2、種類：國內常用有紅霉素、吉他霉素、麥迪霉素、乙酰螺旋霉素。新一代大環內酯類有克拉霉素、羅紅霉素、地紅霉素、氟紅霉素、阿奇霉素和乙酰麥迪霉素。

（五）其他抗菌藥物

▲磺胺類：競爭性第與二氫葉酸合成酶結合，阻止核酸形成。

▲四環素類：阻止酰胺基轉移酶RNA與mRNA核糖體的受體位點結合。分為短效（土霉素、四環素）、中效（地美環素、美他環素）和長效（多西環素、米諾環素）。

▲氯霉素類、林克霉素類：能與細菌核蛋白體50S亞基結合，使蛋白質合成呈可逆性抑制。

▲糖肽類：屬于殺菌劑，能與一個或多個肽聚糖合成中間產物形成復合物，阻斷肽聚糖合成，阻止細胞壁合成。包括萬古霉素、去甲萬古霉素、替考拉寧、多粘菌素、桿菌肽等。

◆大環內酯類的抗生素是抑菌劑。

二、抗菌藥物敏感試驗方法

▲細菌多抗菌藥物的敏感分為三種現象：敏感（S）、耐藥（R）、中介（I）。

（一）擴散法（K-B法）

1、目前常用的方法，是一種半定量的方法。采用的接種方法是平板涂布法。

2、抑菌圈的大小可以反映待檢菌對測定藥物的敏感程度，與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

3、含藥紙片貼于含菌瓊脂表面時應注意：①各紙片中心距離不小于24mm，紙片距平板內緣應大于15mm；②一旦碰觸培養基就不可再動；③平板最好單獨平放，不超過兩個疊放。

4、采用標準菌株是進行質控的主要措施。

◆金黃色葡萄球菌ATCC25923，大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853，糞腸球菌ATCC29212或ATCC33186。

5、紙片擴散法的培養基要求其pH值為7.2～7.4，過高或過低的pH值會影響藥物效能。堿性可擴大氨基糖苷類藥物的抑菌圈，酸性可擴大四環素類藥物的抑菌圈。

★其他高頻考點

1、MBC為最低殺菌濃度。

2、體外聯合藥物敏感試驗的FIC（部分抑菌濃度指數）：FIC指數＜0.5

協同作用；FIC指數0.5～1相加作用；FIC指數1～2

無關作用；FIC指數＞2

拮抗作用。

3、抗結核分枝桿菌的首選一線藥物是異煙肼、利福平。

4、產ESBL菌株臨床上用β-內酰胺類抗生素（青霉素類、頭孢菌素類及氨曲南）治療無效。

5、耐甲氧西林金葡菌(MRSA)用β-內酰胺類抗生素治療無效。

6、產AmpC酶菌株對β-內酰胺類抗生素（青霉素類、頭孢菌素類及氨曲南）及含酶抑制劑復合制劑耐藥。治療有效的藥物主要有碳青霉烯類(亞胺培南)和第四代頭(頭孢吡肟、頭孢匹羅)以及某些喹酮類和氨基糖苷類抗生素。

7、藥敏試驗時，采用的菌液濃度為0.5麥氏比濁度，相當于1.5×10^8/ml含菌量。

第六章

各菌屬特征匯總

●葡萄球菌屬

1、葡萄球均屬是一類觸酶試驗陽性的革蘭陽性（G＋）球菌，無鞭毛和芽胞，某些菌株能形成莢膜。包括金黃色、表皮、腐生、溶血葡萄球菌。

2、葡萄球菌觸和鏈球菌鑒別用觸酶試驗，葡萄球菌觸酶陽性，鏈球菌是陰性。

3、葡萄球菌的致病性用凝固酶試驗，致病性葡萄糖球菌為陽性，還可以分解甘露醇產酸，耐熱DNA酶陽性。主要見于金黃色葡萄球菌。

4、葡萄球菌的細胞壁上有葡萄球菌A蛋白（SPA），可以與人類IgG的Fc段結合，可進行協同凝集試驗。

5、葡萄球菌抵抗力強，耐熱、耐干燥、耐高鹽，是抵抗力最強的無芽胞細菌。

6、耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐萬古霉素的金黃色葡萄球菌（VRSA），耐萬古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE），MRSA的首選抗生素為萬古霉素。

7、表皮葡萄球菌為醫院感染的重要病原菌，它是導致血培養污染的常見細菌之一。

8、腐生葡萄球菌是導致尿路感染的常見病原菌之一。

★看到凝固酶、耐熱DNA酶陽性，就選金黃色葡萄糖球菌。

●鏈球菌屬

1、鏈球菌屬是一大群觸酶試驗陰性、在液體培養基上呈鏈狀排列的革蘭陽性（G＋）球菌，但在陳舊培養基或被吞噬細胞吞噬后常呈革蘭陰性（G－）。無鞭毛、無芽胞。

2、肺炎鏈球菌矛頭狀排列，由于其能產生自溶酶，菌落呈臍窩狀，鑒別試驗：奧普托欣試驗（Optochin），陽性、膽汁溶菌試驗陽性、莢膜腫脹試驗陽性、草綠色溶血圈。本菌是社區獲得性肺炎的最常見病原菌。

3、A群鏈球菌用桿菌肽試驗鑒別，為陽性。可產生溶血素和紅疹毒素，前者在血平板上形成β-溶血環，后者引起猩紅熱。對人類有致病性的90%屬A群。

4、B群鏈球菌可以水解馬尿酸和CAMP試驗陽性。

5、D群鏈球菌七葉苷試驗陽性。

6、草綠色鏈球菌是引起亞急性心內膜炎最常見的病原菌。

7、鏈球菌感染引起的變態反應疾病為風濕熱、腎小球腎炎，為Ⅲ。

8、化膿性鏈球菌產生的酶有脫氧核糖核酸酶（鏈道酶）、透明質酸酶（擴散因子）、鏈激酶（溶解纖維蛋白酶）。因為有這幾種酶的的產生，化膿性鏈球菌感染的病灶范圍廣、膿液稀薄、邊界不清。

9、根據溶血現象的不同，將鏈球菌分為甲型溶血性鏈球菌（α溶血）、乙型溶血性鏈球菌（β溶血）、丙型溶血性鏈球菌（γ溶血）。

●腸球菌屬

1、腸球菌屬是腸道的正常棲居菌。G+，成雙或短鏈狀排列的卵圓形球菌，無芽胞，無莢膜，部分腸球菌有稀疏鞭毛。

2、腸球菌能在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（pH9.6）、40%膽汁培養基上和10℃～45℃環境下生長；

●奈瑟菌屬

1、G-，呈腎形，坦面相對，雙球菌，存在于中性粒細胞內（或胞外），無鞭毛，無芽胞，有菌毛。專性需氧，氧化酶陽性。

2、在血瓊脂平板、巧克力瓊脂或EPV瓊脂，置5%～10%C02環境中，35℃培養18～24h后可見圓形、灰褐色、濕潤、光滑、邊緣整齊、直徑1～2mm的小菌落。

3、淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌用麥芽糖發酵試驗區別，前者不發酵乳糖，后者發酵乳糖。

4、奈瑟菌屬初次分離需要5%-10%二氧化碳。營養要求高，要用巧克力平板。

5、腦膜炎奈瑟菌定植于鼻咽部，引起流腦，少數還可引起敗血癥。

6、淋病奈瑟菌人類是唯一宿主。懷疑奈瑟菌感染，標本需保溫保濕送檢。

◆卡他布蘭漢菌：氧化酶和觸酶陽性，產DNA酶，大部分菌株還原硝酸鹽和亞硝酸鹽，營養要求不高，在普通培養基上18～20℃即可生長，借此可與奈瑟菌屬相鑒別。

●腸桿菌科

1、腸桿菌科共同特征：革蘭氏陰性桿菌、氧化酶陰性、觸酶和硝酸鹽還原試驗為陽性。

2、腸桿菌中志賀、克雷伯、鼠疫耶爾菌屬、EIEC沒有鞭毛，也就是說它們的動力陰性。

3、O抗原和H抗原是腸桿菌科分群及分型的依據，4、乳糖發酵是區別致病性與非致病性，致病性不發酵乳糖，非致病性發酵乳糖。

●埃希菌屬

1、G-，短桿菌，多數有周鞭毛，有菌毛，有莢膜或微莢膜。兼性厭氧菌。

2、大腸埃希菌在EMB平板上是帶有金屬光澤呈藍紫色的菌落，麥康凱和SS瓊脂上呈粉紅色菌落。雙糖鐵發酵管（KIA）產酸產氣，IMViC試驗結果＋＋－－。

5、大腸埃希菌腸道外感染以尿系統感染為主，常見腎盂腎炎。

腸道內感染：（1）產毒素性（ETEC）：主要引起旅游者腹瀉、嬰兒腹瀉。

（2）腸致病性（EPEC）：嬰兒腹瀉。

（3）腸侵襲性（EIEC）：類似志賀菌腸炎的癥狀。里急后重。

（4）腸出血性（EHEC）：常見血清型O157：H7，引起出血性腸炎，主要見于嬰幼兒，還可引起溶血性尿毒癥。

（5）腸粘附性（EaggEC）：嬰兒急性水樣腹瀉。

●志賀菌屬

1、G-，短小桿菌，無莢膜，無芽胞，無鞭毛，有菌毛。需氧或兼性厭氧。

2、志賀菌屬是細菌性痢疾最常見的病原菌，中國最常見的是福氏（B群）和宋氏（D群）。

3、志賀菌屬用SS培養基或中國藍（麥康凱）平板，菌落為紅色或粉紅色。

4、由于志賀菌沒有鞭毛，所以它沒有H抗原，有O抗原、K抗原。

5、志賀菌引起的腹瀉常為里急后重。

●沙門菌屬

1、G-，直桿菌，無芽胞，無莢膜，周鞭毛（除雞沙門菌），多數有菌毛。

2、SS瓊脂和麥康凱瓊脂培養基：約2～4mm的透明或半透明菌落，對膽鹽耐受。產H2S者在SS瓊脂上形成黑色中心菌落。

3、傷寒沙門菌的抗原主要包括菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）抗原。

4、傷寒沙門菌檢測用肥達試驗：用已知的傷寒沙門菌O、H抗原，副傷寒甲、乙H抗原稀釋后與被檢血清作定量凝集試驗，以檢測患者血清中抗體的含量，來判斷機體是否受沙門菌感染而導致腸熱癥并判別沙門菌的種類。

5、菌體（O）抗原刺激機體產生的抗體以IgM為主，H抗原則以IgG為主。

6、傷寒沙門菌感染1周取血液標本，2～3周取糞便，3周以后取尿液。

7、所致疾病：腸熱癥，即傷寒與副傷寒病、食物中毒、慢性腸炎、敗血癥、沙門菌的局部感染如頸部、腰部等。

●變形桿菌屬

1、G-，桿菌，多形，有周鞭毛，無芽胞、無莢膜。

2、營養要求不高，在普通培養基上呈遷徙生長。苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性使其重要的生化鑒別反應。

3、變形桿菌X19、X2、Xk等類型的O抗原與立克次體有共同抗原成分，可發生外斐反應。

●耶爾森菌屬4、普通變性桿菌引起食物中毒，奇異變性桿菌引起嬰幼兒腸炎

1、鼠疫耶爾森菌是鼠疫的病原菌，我國將其列為甲類傳染病。

2、鼠疫耶爾森菌為G-，桿菌，球桿狀，兩極濃染，有莢膜，無鞭毛，無芽胞。

3、鼠疫耶爾森菌在血平板上菌落柔軟、黏稠，在液體培養基中，開始為渾濁生長，24小時后為沉淀生長，48小時后形成菌膜，搖動后呈鐘乳石狀下沉。半固體穿刺呈縱樹狀生長。

4、小腸結腸耶爾森菌22～25℃培養有周鞭毛，呈翻滾螺旋運動；35℃時培養該菌無動力，最適生長溫度為20～28℃。

5、小腸結腸耶爾森菌是人畜共患病原菌。

●弧菌屬

1、弧菌科氧化酶都是陽性，動力陽性的G-細菌。包括弧菌屬、氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬等。

2、霍亂弧菌根據生物學特性上的差異，分為古典生物型和Eltor生物型兩個生物型，兩個生物型的抗原同屬O1群霍亂弧菌。

3、O1群霍亂弧菌根據菌體抗原含有A、B、C

3種抗原因子的不同，又可將其分為小川型、稻葉型和彥島型，以小川型和稻葉型為常見流行型。

4、霍亂運動呈穿梭狀或流星狀，排列呈魚群狀，在亞碲酸鉀培養基上是褐色菌落，培養基是堿性蛋白胨水。主要致病物質是霍亂腸毒素，患者大便呈米泔樣便。

5、霍亂弧菌的鑒別培養用硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂平板（TCBS）。

6、霍亂弧菌在堿性蛋白胨水上生長迅速，最適pH為8.4～9.2。

7、霍亂弧菌的O1群、O139群引起霍亂，O2～O138群只引起人類胃腸炎，稱之為非O1群霍亂弧菌。

8、霍亂弧菌的生物分型

9、霍亂弧菌采集的標本若不能及時在堿性蛋白胨水中增菌，應置于文-臘二氏保存液活卡-布運送培養基中由專人運送。

10、副溶血性弧菌是一種嗜鹽菌，常存在與海水及海類產品中，是沿海地區食物中毒最常見的病原菌。

11、副溶血性弧菌與霍亂區別用蔗糖發酵試驗，前者不發酵蔗糖，在TCBS上呈藍綠色菌落，后者呈黃色菌落。

12、副溶血性弧菌能使人或兔的紅細胞發生溶血，對馬紅細胞不溶血，稱為神奈川現象。

●其他菌屬主要特征及高頻考點

1、肺炎克雷伯菌動力和鳥氨酸脫羧酶陰性、黏液狀菌落用接種環可拉絲是主要特征。

2、小結：志賀菌IMViC（-+--），大腸埃希菌IMViC（++--），產氣腸桿菌IMViC（--++）。

3、氣單胞菌屬運動活潑，在血平板上形成大而扁平的β溶血性菌落。嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌可發酵阿拉伯糖。

4、鄰單胞菌屬引起水樣腹瀉，與志賀菌類似，也是引起食物中毒。

5、假單胞菌屬、產檢桿菌屬、不動桿菌屬等不能發酵葡萄糖，均為非發酵革蘭陰性桿菌。

6、銅綠假單胞菌為專性需氧菌，在普通培養基上菌落有生姜味，可產生水溶性的綠色素，在血平板上產生透明溶血環。該菌42℃可生長，可通過該試驗區分其他假單胞菌。

7、銅綠假單胞菌可引起泌尿道、皮膚、呼吸道、燒傷創面感染等，還可以導致菌血癥、敗血癥、心內膜炎、囊性纖維變性及嬰幼兒嚴重腹瀉等。

8、不動桿菌屬有三陰特征，即氧化酶、動力、硝酸鹽還原試驗均為陰性。

9、流感嗜血桿菌能產生自溶酶，生長需要Ⅴ、Ⅹ因子。培養有特殊要求，營養要求高，初次分離需要5%～10%CO2，用巧克力平板。有金黃色葡萄糖球菌（可產生Ⅴ、Ⅹ因子）時候，會出現衛星生長現象。

嗜血桿菌的菌落呈露滴狀。

副流感嗜血桿菌的形態、菌落與?流感嗜血桿菌相似，也能產生衛星現象，在生長過程中只需要V因子而不需要X因子。

10、軍團菌屬培養要求特殊，培養基中必須含有半胱氨酸和鐵，培養基用活性炭-酵母浸液瓊脂培養基（BCYE）。傳播途徑為空氣。

12、布魯菌屬是人畜共患病原菌，包括羊、牛、豬、狗、綿羊布魯菌等。引起布病。如果在做題看到有什么草原養羊、羊接觸史的話，就選布魯菌感染。

13、彎曲菌屬，不分解糖類，氧化酶陽性，分離培養時，培養基中需含有大量抗生素，初次分離，須在5%O2、10%CO2、85%N2的氣體環境中生長。

14、幽門螺桿菌呈海鷗狀彎曲，脲酶強陽性（快速分解尿素）是特征，標本采集部位是胃，十二指腸。

15、白喉棒狀桿菌特異性標志是異染顆粒，在亞碲酸鉀培養基上是黑色菌落，培養基選用呂氏血清斜面和亞碲酸鉀，致

19、炭疽芽孢桿菌在每毫升含有0.05～0.5U青霉素的培養基中，可發生形態變異，形成大而均勻的圓球狀并相連如串珠狀，稱為串

抗酸染色分級報告標準：①－：連續觀察300個視野未發現抗酸桿菌；②±：1～2條/300視野；③1＋：1～9抗酸桿菌條/100個視野；④2＋：1～9條抗酸桿菌/10視野；⑤3＋：1～9條抗酸桿菌/每視野；⑥4＋：≥10條抗酸桿菌/每視野。

27、麻風分枝桿菌，典型的胞內寄生，所在細胞呈泡沫狀，稱為麻風細胞。犰狳對本菌高度敏感，為本菌的良好動物模型。抗酸染色為陽性桿菌。

28、厭氧菌屬，特征是在無氧條件下才能生長，懷疑厭氧菌感染用皰肉培養基培養。

29、破傷風梭菌，嚴格厭氧，有周鞭毛、無莢膜。芽胞呈正圓形，寬于菌體，位于菌體頂端，細菌呈鼓槌狀。本菌的致病物質主要是外毒素，包括破傷風痙攣毒素和破傷風溶血毒素，引起強直性痙攣。

30、產氣莢膜梭菌可以引起氣性壞疽，在牛乳培養基中是洶涌發酵生長是其主要特征。

31、肉毒梭菌引起食物中毒，致病物質是肉毒毒素，是已知最劇烈的神經外毒素。懷疑食物中毒，從患者血清中檢出毒素是最直接、有效的方法。

32、艱難梭菌可以引起腹瀉和假膜性腸炎。

33、衣原體，細胞內專性寄生。有獨特的發育周期：①原體有高度感染性，無繁殖能力；②始體（網狀體），有繁殖能力，沒有感染性。每個發育周期是40～72h。

34、沙眼衣原體培養用McCoy細胞，鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體用Hela-299細胞培養。

35、沙眼衣原體引起四種疾病：①沙眼；②包涵體結膜炎，致盲的主要因素是包涵體結膜炎；③泌尿生殖道感染，非淋菌性生殖道感染的主要病原，男性尿道炎的常見病因。④性淋巴肉芽腫：又稱第四性病。

36、鸚鵡熱衣原體，氣溶膠傳播，引起非典型肺炎（人畜共患病原體）。

37、肺炎衣原體，呼吸道傳播，主要引起肺炎。

38、支原體，無細胞壁，能在人工培養基上生長，能通過細菌濾器，是最小的原核細胞型微生物，典型特征是菌落為“荷包蛋”樣。治療藥物首選紅霉素。

39、肺炎支原體通過呼吸道傳播，引起原發性非典型肺炎。

40、解脲支原體通過性傳播，引起非淋菌性尿道炎。

41、立克次體，細胞內寄生，頭痛，發熱，皮疹以及中樞神經是本病特征。立克次體一個重要試驗是外斐試驗，是非特異性凝集試驗。

42、立克次體不能人工培養，檢測是利用變性桿菌的公共抗原檢測（共同抗原），OX19對應流行性斑疹傷寒，鼠型斑疹傷寒。OX2對應斑點熱，OXK對應恙蟲病。

43、鉤端螺旋體通過疫水傳播，是典型的人畜共患病，鼠和豬是最常見的儲存宿主和傳染源，是一種自然疫源性疾病。治療藥物首選青霉素。

44、梅毒螺旋體為密螺旋體，用鍍銀染色。

45、梅毒三期分型，一期硬下疳，二期梅毒疹，三期梅毒瘤

46、早期梅毒傳染性強，破壞力小，晚期破壞力大，傳染性小

47、梅毒通過性傳播，輸血傳播，垂直傳播

48、梅毒檢查非特異性試驗用牛心類脂質。WHO推薦用VDRL（性病研究實驗室試驗），RPR（快速血漿反應素試驗）做篩查，確診試驗是TPPA。

49、放線菌患者病灶有硫磺顆粒，菌體呈菊花狀，菌落由R型轉變為S型。

50、諾卡菌屬主要有星型諾卡和巴西諾卡致病，星型諾卡菌落表面無白色菌絲，巴西諾卡表面有白色菌絲，諾卡菌屬抗酸染色是弱陽性，諾卡菌為革蘭氏陽性桿菌，有細長的菌絲，菌絲末端不膨大。色素小顆粒壓碎染色鏡檢，可見顆粒呈菊花狀。不同種類可產生不同色素，如橙紅、粉紅、黃、黃綠、紫以及其他顏色。巴西諾卡菌七葉苷、黃嘌呤、肌醇、甘露醇均為陽性。星型不分解黃嘌呤。

●真菌常見考點

1、真菌檢測的標本如皮屑、指甲、頭發等，需要用10%KOH處理。

2、真菌培養一般選用沙氏培養基。

3、白假絲酵母菌鑒別要點：①芽管形成試驗（＋）；②厚膜孢子形成試驗（＋）；③脲酶試驗（－）；④不能形成假菌絲；⑤革蘭陽性。

4、新型隱球菌鑒別要點：①墨汁染色，在黑色背景下可見到透亮菌體和寬厚莢膜；②沙保弱培養基上可生成酵母型菌落；③脲酶試驗（＋）。

5、艾滋病人最易合并感染的真菌是卡氏肺孢子菌。

6、黃曲霉菌產生的黃曲霉毒素可以致癌。

●病毒常見考點

1、病毒是非細胞型微生物，基本結構是核心、衣殼。

2、流感病毒是有包膜的RNA病毒，包膜上的血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA）是重要的表面抗原，其中HA極易發生變異。此病毒的命名方式HXNX（X為型號，比如H1N1、H2N2等）。

3、麻疹病毒是單股的有包膜的RNA病毒，可以引起病毒血癥，發病2天后口腔黏膜出現白色外繞紅暈的黏膜斑（早期診斷有重要意義），之后患者皮膚相繼出現紅色版丘疹。常見并發癥為肺炎。

4、腮腺炎病毒是有包膜的RNA病毒，感染后可引起一側或雙側腮腺腫大，青春期感染者，男性易并發睪丸炎。

5、甲型肝炎病毒（HAV）是無包膜的RNA病毒。傳播途徑是糞-口傳播，引起甲肝，還可以引起病毒血癥。產生的甲肝抗體為IgM，ELISA檢測用捕獲法。

6、乙型肝炎病毒（HBV）是DNA病毒，引起乙肝，嚴重可發展為肝癌。

常見考點：①HBV的大球型顆粒（Dane）有感染性；②乙肝兩對半：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc；③大三陽指HBsAg、HBeAg、抗-HBc均為陽性，此種模式為急性乙肝，傳染性極強；④小三陽指HBsAg、抗-HBe、抗-HBc，此種模式感染趨向恢復期；⑤乙肝的保護性抗體指抗-HBs；⑥HBeAg陽性表示乙肝的傳染性極強；⑦抗-HBs、抗-HBs、抗-HB。

16、細菌的特殊結構包括：鞭毛、菌毛、莢膜、芽胞