第一篇：室內空氣中微生物污染的研究進展

室內環境與微生物 環境污染與防治 網絡版 第9期 2008年9月 1 王毓丹1 段俊超2（1.重慶市環境科學研究院，重慶 400067； 2.重慶工商大學廢油資源化技術與裝備教育部工程研究中心，重慶 400067）介紹了室內空氣微生物的危害、原因、來源及其控制措施，重點分析了在室內空氣微生物的調查研究、毒理學研究、檢測技術研究及空氣凈化和抗菌技術方面取得的成就及存在的問題，最后討論了室內空氣微生物污染的研究發展趨勢。室內空氣品質 空氣污染 室內空氣 微生物 趨勢

室內空氣品質（IAQ）是一門年輕的跨學科的科學，它的研究成果對人類的健康和幸福有著很大的影響，并將影響未來的社會結構。IAQ科學是環境可持續發展不可分割的一部分，其主要研究對象是人類停留90以上時間的室內環境。研究IAQ的科學家們必須為室內環境的質量問題提供依據，揭示室內污染物對人類的危害，并在充分的科學依據基礎上提出降低危險的措施1。

室內空氣品質極大地影響著人們的生活質量、健康水平和生產效率。室內空氣污染在近年來引起了廣泛關注，“非典”病毒肆虐的事實也充分說明，室內生物性污染不可輕視。目前造成城市寫字樓和家庭室內的生物污染主要有細菌、霉菌和螨蟲等，有的如軍團菌、霉菌性肺炎也可傷害人的性命。微生物污染作為室內環境污染的一個重要組成部分，現今已經成為世界各國研究的熱點問題。2005年第251次香山科學會議主題就是室內空氣污染問題。

細菌和真菌等空氣微生物是室內空氣質量的重要參數。室內空氣微生物污染，可引起人們出現眼刺激感、哮喘、過敏性皮炎、過敏性肺炎和傳染性疾病，重者甚至導致死亡，也可稱為“不良建筑物綜合征”SBS2。室內空氣污染及由此引起的SBS等健康問題開始受到普遍關注。研究表明，空氣微生物污染也是造成SBS的主要原因之一。

細菌和真 1第一作者：王毓丹，男，1963年生，高級工程師，主要從事環境工程設計。環境污染與防治 網絡版 第9期 2008年9月 2 菌等微生物在室內孳生繁殖而污染空氣，已經成為目前重要的公共環境衛生問題，在美、日、德、法等國家，是人們最為關注的課題之一。1999年在英國召開第8屆室內空氣環境國際會議講演的700篇論文中，以微生物為議題的就有126篇之多，僅次于揮發性有機物218篇。室內空氣微生物污染影響人體健康甚至危及生命案例時有發生。近幾年，結核在全球死灰復燃，在防治結核的措施中，人們再次認識到環境受污染后進行消毒的重要性3。美國已開始在全國范圍內對空氣微生物的種屬、濃度及季節變化等進行監測4。1.1 污染造成的危害

微生物是室內環境污染源之一，加拿大的一項調查表明，室內空氣質量問題，有21％是微生物污染造成的。國內外大量的調查研究證實，空氣微生物是引發各種中毒、感染和過敏疾病的主要原因之一，主要引起的疾病有軍團病、結核病、呼吸系統疾病和SBS。室內空氣中的微生物主要有青霉、芽枝菌、曲霉、葡萄球菌、微球菌、白霉及各種病毒等，其濃度主要與室內濕度、溫度、人員活動等有關，室外空氣也是室內細菌、真菌的重要來源之一?？諝庵写嬖诖罅课⑸?，它們通常附著在一定粒徑的顆粒物上，以氣溶膠的形式存在，如微塵、飛沫核等，主要通過呼吸侵入機體，造成呼吸道感染。經空氣傳播的傳染病，如流行性感冒、結核等的暴發流行，都與空氣微生物污染有密切關系。一般來說，當空氣中致病性物質達到感染劑量時，往往會引起人類患流感、皮炎、肺炎等急性疾病。細菌可引起人體出現不適、頭痛、干咳、胸疼、腹瀉等癥狀，還是昆士蘭熱、肺結核等呼吸傳染病的重要致病原。真菌污染與過敏性鼻炎、哮喘及呼吸感染等疾病有關。長期接觸室內真菌代謝產物對人體免疫功能尤其是呼吸防疫功能構成威脅。室內環境還是一些病毒的溫床，如青猴病毒、埃博拉病毒、拉沙病毒，這些病毒可引發出血熱。

室內生物氣溶膠主要包括細菌、病毒、真菌、花粉、原生動物及生物有機體成分等幾大類，它們主要通過與人皮膚接觸、呼吸道吸人、消化道攝人等途徑進入人體，導致易感人員的身體健康損害，文獻5列出了幾類具有代表性的室內生物氣溶膠及其危害。一般來說，當空氣中致病性物質達到感染劑量時，往往會引起人類患流感、皮炎、肺炎等急性疾病，并且還會隨著患者打噴嚏、咳嗽等生理活動形成二次生物氣溶膠并加以傳播，CROFT等對居民抱怨有咳嗽、咽喉腫痛、頭疼、疲勞等癥狀的樓房進行了研究，當采取一系列空氣凈化措施，并去除室內可能造成微生物大量繁殖的建筑材料后，樓內居民的上述癥狀得到明顯改善6。許多細菌的細胞成分如內毒素、B-葡聚糖也是重要的病原7。真菌通過其孢子在空氣中傳播，作為條件致病菌主要引起多種呼吸疾病和過敏反應，真菌毒素也可能導致多種中毒反應，SOMERS等8觀測到吸人污染空氣顆粒的小鼠發生基因突變，這也為空氣真菌可能導致肺癌提供了間接證據。室內空氣生物污染不僅危害人體的呼吸系統和免疫系統，ANYANWU研究證明產毒真菌的長時間暴露可能影響到兒童神經生理功能，研究人員通過神經行為學問卷調查和一系列的神經生理學測試，問卷結果證明生活在真菌環境污染與防治 網絡版 第9期 2008年9月 3 污染空氣環境中的兒童發生高水平行為異?，F象，而暴露組和對照組的腦電圖測試EEG異常率分別是70％和10％，腦干誘發電位BAEP波形異常率分別是90％和0，上述研究部分揭示產毒真菌可能對人體神經系統的健康也存在威脅9。此外，從生物技術產業的角度來說，室內生物氣溶膠污染直接影響到其生產的順利進行并可能污染其產品，對于實驗室來說，還有一種潛在的危險，即遺傳物質可能從基因修飾微生物中轉移到環境的野生物種中，造成基因污染10。

在注重生活質量和公共衛生的今天，SBS近年來得到人們的極大關注。世界衛生組織提出的SBS是如今越來越多的寫字樓上班族常感到的一種身體不適，其癥狀主要有鼻咽發炎、頭疼發熱、上呼吸道感染、不明原因的過敏、皮膚干燥等，還伴有整個人感覺懶散惡心11。

1.2 污染類型

（1）真菌（酵母菌和霉菌）真菌是自然界分布最廣的一類生物體，在亞洲、非洲的溫、濕度較高的地區，適合真菌生長。人們受真菌的感染，易患腳氣、皮炎、皮癬、濕疹等癥。有些真菌能通過其毒性代謝物霉菌毒素致癌。

（2）細菌和病毒 室內空氣中，特別在通風不良、人員擁擠的環境中可有較多的致病微生物存在。除空氣中原有的一些微生物外，也存在來自由人體、動物、土壤和植物碎屑攜帶的細菌和病毒的某些病原微生物。許多病毒如流感、非典型性肺炎等病毒可以通過空氣、唾

液傳染，一般過濾、濾毒裝置對它們毫無辦法。

（3）塵螨 塵螨是一種非常小的微生物，在絕大多數住處和辦公場所都能被發現。塵螨適合在空氣不流通，溫度、濕度適合，且密閉的環境中生存，對環境的抵抗力很弱。塵螨是一種極強的變應原，能引起呼吸過敏和皮膚過敏，主要癥狀是哮喘、過敏性皮炎、過敏性鼻炎、蕁麻疹等。目前對塵螨的研究很多。

1.3 室內空氣微生物污染來源

細菌和真菌種類繁多，分布很廣，幾乎無所不在。在一般居住環境中，空氣中的細菌和真菌種類通常也有數十至數百種之多，濃度約在102～l05 cfu/m3。在室內有污染源時，空氣污染更加嚴重，細菌和真菌的濃度可達106～108 cfu/m3，甚至高達1010 cfu/m3。一般來說，空氣缺乏微生物生長所需水分和養料，不是微生物生長的適宜環境。由于人們的生產和生活活動，使得空氣中可存在某些微生物，包括一些病原微生物在內，并通過空氣引起疾病的傳播。室內空氣特別在通風不良、人員擁擠的環境中，可有較多的微生物存在。據監測，通風不良、密封的房間空氣中細菌含量一般較高。開窗通風的房間，每立方米含細菌約5 800個，而密閉的房間每立方米含量可高達19 000個。致病微生物可附著在室內的塵埃上被吸入呼吸道。除大氣中原有的一些微生物外，也可能存在來自人體、植物和寵物的某些病原微生物，可能成為空氣傳播疾病的病原。研究發現，空調機中細菌和真菌可以誘發或加重呼吸系統的過敏性反應而引起哮喘。環境污染與防治 網絡版 第9期 2008年9月 4 在室內有污染源時，空氣污染更加嚴重，細菌和真菌的濃度可達106～108 cfu/m3，甚至高達1010 cfu/m3。產生微生物污染最主要因素：

（1）有營養物質：室內的食物、被污染的地毯、潮濕的墊褥、空調系統中長期存在的冷卻水；（2）持續潮濕且通風不佳的環境：如冰箱和空調機組的滴水盤。室內的污染源可分為人體活動、建筑部件和家具、設備。（1）室內建筑材料導致空氣微生物污染。在室內潮濕、結露的地方或受水侵害的地方，如廚房、浴室和衛生間，環境的相對濕度高達90％～100％，室內的建筑材料和設備，就必然容易孳生細菌和真菌等微生物，特別是真菌，這是個普遍存在的問題12-15。據報道，在北美問卷調查結果顯示，有27％～36％的室內建筑材料和設備有霉菌污染問題，實際測定的結果更高，達到42％～56％；在歐洲，英國為17％～46％，荷蘭為15％～18％，芬蘭為l5％12。在德國的8幢住宅里，地毯中的塵埃真菌總數為103～106 cfu/g，能產生毒素的花斑曲霉為10～105 cfu/g13。室內塵埃中的真菌數達到102～107 cfu/g。受污染的內墻表面的真菌數超過104 cfu/cm2以上。舊建筑材料中往往孳生著大量的真菌，釋放出來污染室內空氣，特別在拆除舊建筑材料時，污染更為嚴重，比未拆除前高出4～25倍，達102～107 cfu/m3，拆除舊建筑材料的工人容易發生呼吸道疾病16。由于空氣流動，導致在建筑材料和設備中的真菌氣溶膠化，懸浮于空氣中，造成室內空氣污染。在家庭里的廢物處理設備中的空氣細菌和真菌濃度達103～105 cfu/m3。

美國政府工業衛生學家協會ACGIH指出，任何一種真菌的濃度≥500 cfu/m3時，表明建筑物內可能存在相關污染源。REYNOLDS等14測定6處住宅和辦公室環境中的空氣真菌總數≥500 cfu/m3980～18 900 cfu/m3，真菌濃度比室外高10至數百倍，表明建筑物內環境處于不正常狀態，影響室內人員的身體健康，出現自覺癥狀。

（2）家用設備導致空氣微生物污染。室內家用設備如空調器和加濕器中也容易孳生細

菌和真菌等微生物，成為室內空氣微生物潛在污染源。家用空調器過濾器上真菌數高達102～104 cfu/cm3?？照{設備中孳生細菌和真菌，導致室內空氣污染，嚴重影響人體健康?？照{設備的空氣過濾器、制冷盤管、通風管和冷卻水中孳生細菌和真菌，導致室內空氣污染，嚴重影響人體健康。國內的一些專業人員通過對一些公共場所、醫院的調查發現，軍團菌普遍存在于空調冷卻塔，已對暴露人群的健康造成威脅17-20。而軍團菌污染在國外有許多案例。例如，1976年美國費城召開退伍軍人會議，與會者中182人突然生病，其中29人死亡。癥狀是發熱、咳嗽、胸痛、肺炎。調查發現，該病癥由空調系統內孳生的一種革蘭陰性桿菌在空氣中傳播引起。這些致病菌后命名為“軍團菌”，“軍團病”由此得名。l988年，英國廣播公司BBC空調設備也引發軍團病，BBC的職員和周邊的居民約有70人生病，3人死亡。1998年，日本東京1所養老院，由于空調設備污染引起職員和病人123人中11人感染軍團病，1人死亡。家庭里廢物處理設備中空氣細菌和真菌濃度達103～105 cfu/m3。另外，超聲波加濕器中孳生的細菌，隨著超聲波加濕器中的加濕用水生成的水霧一起散發出去，可引發感染癥狀21。

（3）人體活動產生微生物污染 日常生活中因不良生活習慣等造成的污染卻是長期環境污染與防治 網絡版 第9期 2008年9月 5 的，需要更多的重視。室內微生物污染程度與周圍環境、居住密度和室內空氣溫度、濕度、灰塵含量及采光通風等因素有關。環境不潔、通風不良、居住擁擠的室內微生物污染比較嚴重。另外居民在室內飼養的貓、狗等寵物會使微生物包括細菌、病毒、真菌、芽孢、霉菌、螨等大量繁殖。人在咳嗽或打噴嚏時，可噴射出上百萬個細小的飛沫小滴。如果在室內吸煙，往往比馬路上一輛汽車的尾氣對人體危害更大。研究發現，使用吸塵器、中央空調和冷熱水系統為室內制造了新的污染源。

（4）建筑部件和家具濕度很高的浴室、廚房容易繁殖霉菌；長期未清潔的地毯上容易滋生螨蟲；一般家具的后面和下面都很難清掃，造成灰塵堆積，給微生物繁殖創造了良好的條件。建筑材料中的縫隙，也是藏污納垢的場所。2.1 調查研究

目前，有關空氣微生物的研究多為調查研究，即對某種場所在一定時間內進行空氣微生物采樣，了解微生物的濃度、種屬等情況。國內、外都對多種場所的空氣微生物進行了調查研究。所涉及的場所包括室內及室外多種公共場所，室內如：醫院各科室22，23、室內娛樂場所舞廳、網吧、保健品生產廠房、居室

24、教室、實驗室等；室外則有：某些城市的交通樞紐區、步行街、校園及不同的風景區等。研究中采用的檢測指標有：菌落總數、真菌總數，以及有針對性的病原菌、條件致病菌及微生物耐藥情況等。張鳳川等25研究了某醫院重癥監護室的空氣細菌譜，劉汝青等26研究了廣州某綜合性大醫院各科門診候診室的空氣細菌污染狀況。國外對工業及醫療場所的空氣微生物狀況進行了調查研究。工業化養豬場常預防性給豬喂食抗生素，周圍環境空氣、土壤及水都受到不同程度污染，在空氣中發現多重耐藥菌，人們可通過多種方式暴露于耐藥菌，如食用豬肉、接觸農場周圍土壤、飲用周圍地面水及地下水等27。某地工業冷卻塔水被嗜肺軍團菌污染，周圍空氣中也同樣檢出該菌

28。SHELTON等29在美國的一項大規模調查中發現，空氣真菌濃度室內低于室外，夏秋季高于冬春季，常見菌株為枝孢霉、青霉、不產孢子真菌、曲霉等。

2.2 毒理學研究

目前國內空氣微生物的毒理學研究尚未見有關報，國外則多為空氣中真菌孢子及毒素的毒理學研究。HUTTUNEN等30研究發現，室內空氣中的真菌孢子暴露，只有黑葡萄穗霉孢子可增加人肺上皮細胞白細胞介素-6的合成。暴露于黑葡萄穗霉孢子及毒素的幼鼠，其肺泡超微結構顯著改變，肺泡表面活性劑轉化酶活性降低。據報道，黑葡萄穗霉可使動物中毒，近來又發現它與嬰兒肺部血鐵質有關。LANDER等31應用嗜堿細胞組胺釋放試驗HRT來檢測真菌特異性血清IgE，發現大部分不良建筑物綜合征與HRT陽性顯著相關。環境污染與防治 網絡版 第9期 2008年9月 6

2.3 檢測技術研究

因為室內外空氣微生物污染，嚴重影響人體健康，通過廣泛用于室內外進行空氣微生物采樣技術，研究和評價醫院、住宅、辦公室等室內空氣質量。

如何選擇空氣微生物采樣器以及相應的分析方法，主要從待采集的空氣微生物的種類和濃度來考慮，在采樣時必須具有獲得最大的收集效率32。選擇檢測方法時要根據檢測目的來選取合適的采樣器和采樣介質，要根據檢測環境來布設采樣點和采樣時間，此外還要考慮到檢測的特異性、準確性、可操作性以及氣溶膠的粒子大小等33，34?？諝馕⑸锊蓸悠骺煞譃閮纱箢悾哼^濾式采樣器和撞擊式采樣器。有固定式和便攜式采樣器兩種。固定式采樣器主要用于室外采集空氣過敏源?？諝馕⑸锊蓸蛹夹g有過濾式空氣采樣器、撞擊式空氣采樣器、其他采樣器（表面空氣系統采樣器、縫隙式空氣采樣器、離心式空氣采樣器、旋風式空氣采樣器、靜電式空氣采樣器和個體采樣器）和平皿法。空氣微生物的測定方法也分為兩大類：培養基方法和非培養基方法。培養基方法是將采集的微生物經過培養繁殖生長成菌落后計數和鑒別，非培養基方法是在采樣后不經過培養就可進行計數和鑒別的方法。在20世紀80年代建立了幾種非培養基方法，如光學顯微鏡方法、熒光顯微鏡、電子掃描顯微鏡和流通式血球計方法。目前國內外最常用的檢測方法是利用空氣微生物采樣器主動抽取空氣于采樣介質中，采樣介質可以是液體也可以是固體培養基。培養計數法是目前國內外檢測生物氣溶膠應用最廣泛，結果最可靠的方法35，36。但是培養計數法依賴于微生物的可培養性，首先不是所有的微生物都能夠在采樣培養基上生長，不同微生物有不同的生長要求。據PARKES和TAYLOR計算，可培養的微生物大約只占空氣微生物總數的0.1％～10.0％，所以說培養計數法很容易低估空氣中生物氣溶膠總量37。

由于傳統的菌落計數法不夠準確而且耗時耗力，所以許多研究都開始嘗試將新方法引入空氣微生物檢測中，主要有以下幾種：①生物發光法。吖啶橙是常用的染色劑，它能夠與微生物染色質結合發出黃色熒光，便于在顯微鏡下細胞計數；②免疫檢測。利用微生物的免疫原性檢測生物氣溶膠，SCHMECHEL等38制備了短密青霉的單克隆抗體，結合酶聯免疫吸附檢測了實驗室發生的生物氣溶膠；③生物標記分子的檢測。鱟變形細胞溶解物試驗廣泛用于檢定革蘭氏陰性細菌的內毒素，但是這種方法更適合于檢測微生物的活性而不是總數37，39。革蘭氏陽性細菌的胞壁酸，真菌細胞膜的麥角固醇也都可作為生物標記37。分子生物學方法在生物氣溶膠檢測方面有巨大的應用前景，針對微生物16SrRNA或18S rRNA基因的保守區設計種屬特異性的引物和探針，利用PCR和基因探針檢測生物氣溶膠，相對于培養法來說，該方法不依賴于微生物的生長或其他生理條件，具有良好的特異性、敏感性和分析速

度40，41。3.1 防止微生物污染的方法

室內空氣是個小環境，各方面條件差異很大，因環境不同而微生物的來源和分布規律環境污染與防治 網絡版 第9期 2008年9月 7 也有所不同，了解不同環境因素對它的影響也有利于進一步對室內空氣質量進行監控。建筑物內部有許多適合微生物生長的載體如植物、書籍、垃圾、窗簾等等。溫度和濕度是微生物生長的關鍵因素，寒冷干燥的空氣不利于微生物的存活。水浸和滲水的建筑物通常有高濃度的空氣微生物濃度，而且室內吸水性的物品或建筑材料往往會成為室內微生物的污染源?？刂瓶諝馑羝臐舛却蠹s60％以下可以降低微生物污染42。封閉的建筑物盡管避免了室外污染物的侵人，但是由于室內外空氣得不到良好交換，所以同樣會發生室內空氣生物污染，尤其是空調系統沒有定期清潔時，室內微生物容易在HVAC的管道、風口或濾網上繁殖，HVAC啟動就會造成整個建筑物內空氣的污染43。同時，人員活動可以產生供微生物吸附的顆粒物，也有利于空氣微生物的傳播。因此，在人員密度較高的地方要采取清理措施，適度疏散人群對維持空氣潔凈有明顯效果?？刂剖覂瓤諝馕廴镜年P鍵措施是良好的通風和較低的濕度。王琨等44研究認為，通風可以有效降低室內空氣微生物濃度，最為經濟、易行。

采取如下措施也可有效改善室內空氣微生物狀況，改善和提高室內空氣質量45-50：（1）去除污染源，被褥經常晾曬。采用降低和消除濕氣，防止結露，使細菌和真菌等微生物不能在室內孳生繁殖，或者徹底清除污染建筑材料；（2）保持室內清潔衛生，可有效降低室內空氣微生物污染；（3）經常通風，保持室內干燥。通常室外空氣中微生物的數量較室內低，將細菌和真菌等微生物排出，降低室內空氣微生物濃度；（4）綠化，綠色植物可吸附塵埃從而降低空氣微生物含量；（5）定期清洗空調器和地毯。長期使用后，空調的濾網上可吸附大量臟物，有利于微生物的滋生；軍團菌常棲息在空調冷卻器處，可以氣霧形式播散到空氣中，使人感染軍團菌?。唬?）凈化空氣：使用空氣凈化器去除室內空氣中的微生物，或者用紫外線照射殺死室內空氣中微生物，也可以采用有機抗菌劑和無機抗菌劑抑制和殺死微生物，試圖減少室內環境中潛在的微生物污染源，達到控制室內空氣微生物污染，改善和提高室內空氣質量的目的。

3.2 空氣凈化及微生物殺滅技術

現代人類生活大部分時間都是在室內度過，尤其是辦公室工作人員，室內空氣質量受到人們的廣泛關注。針對空氣微生物污染，人們采取了多種空氣凈化消毒措施，同時，不斷研究新的方法，改進和完善原有的空氣凈化消毒方法。

第二篇：真菌微生物的研究進展

論文題目：真菌微生物的研究進展

作者：華江濤 專業：生物化工工藝 班級： 生化1321 學號： 2013277102 指導老師：劉磊

2016年4 月12日

真菌微生物的研究進展

目錄

第1章 傳統微生物培養法.................................3 第2章 分子生物學方法...................................3 2．1基于PCＲ的克隆文庫方法..........................3 2．2變性梯度凝膠電泳（DGGE）.........................3 2．3末端限制性長度多態性（T-ＲFLP）...................4 2．4實時熒光定量PCＲ..................................4 2．5熒光原位雜交（FISH）...............................4 2．6序列標簽標記的高通量測序..........................4 第3章 宏基因組學技術（Metagenomics）.....................5 前景與展望........................................5 致謝......................................................6 參考文獻..................................................6

摘要

真菌廣泛存在于自然界，在生態系統中發揮著重要的作用。隨著分子生物學技術在微生物多樣性研究中的廣泛應用以及宏基因組學技術的出現，打破了傳統微生物培養法的局限性，人們對于真菌多樣性的認識日漸提高。該文主要綜述了研究真菌多樣性方法的主要發展歷程，介紹幾種有關真菌多樣性研究常用的分子生物學方法，包括基于PCＲ的克隆文庫方法、變性梯度凝膠電泳、末端限制性長度多態性、實時熒光定量PCＲ、熒光原位雜交、序列標簽標記的高通量測序以及宏基因組技術，并且闡述宏基因組學技術在此領域蘊含的巨大發展潛力

關鍵詞

真菌；多樣性；研究方法 Abstract Fungiwidelyexistsinnatureplayinganimportantroleintheecosystem．Thepervasiveapplicationofmolecularbiol-ogytechnologyinmicrobialdiversityandtheemergenceofmetagenomicbreakedthelimitationsoftraditionalmicrobialculturemeth-odsothatimprovethehumansrecognitionoffungaldiversity．ThispaperreviewedthemaindevelopmentcourseofstudyingfungaldiversityapproachesintroducedseveralcommonlyusedmethodsofmolecularbiologyonfungaldiversityresearchmainlyincludingclonelibraryPCＲbased，DenaturinggradientgelelectrophoresisTerminalrestrictionfragmentlengthpolymorphismeal-timeflu-orescentquantitativePCFluorescenceinsituhybridizationandbarcodedpyrosequencingndexpoundedthehugepotentialofmetagenomicsinthisfield．

Keyword fungi；diversity；method 正文

自然界中的微生物分布廣、種類多、資源極其豐富，主要包括細菌、病毒、真菌等。迄今人們已發現的微生物物種僅為自然界中微生物總數的1%～10%［1］。微生物群落多樣性是環境微生物多樣性研究的核心內容。目前微生物多樣性研究多局限于細菌，而對真菌的研究相對較少。研究真菌群落多樣性可以了解真菌群落結構、真菌的種類和數量分布特點，并且可以進一步為控制和優化真菌群落結構提供參考，同時也是研究微生物群落多樣性的重要內容。真菌遍布于自然界，據估計約有數百萬種，已發現的僅9萬余種，已發現的導致人類疾病的僅約400種。人類也生活在真菌包圍的環境中，日常工作、生活中所接觸到的真菌種類目 前的認知。因此，不論是自然環境還是人體都具有較高的真菌多樣性。真菌多樣性的研究方法很多，從國內外目前采用的方法來看，大致上可分為：傳統的微生物培養法、分子生物學方法以及宏基因組學技術。隨著現代科學技術的發展，越來越多的新技術、新方法用于真菌多樣性領域的研究，使人們對真菌多樣性的認識更加全面深入。

1傳統微生物培養法

從傳統上講，真菌多樣性的研究主要利用分離培養及形態學檢測的方法，該技術在實驗室被廣泛使用。盡管各種新的培養技術不斷出現，但此方法費時費力，敏感度和特異性也較低，也不能反應全部的真菌群落信息。Amann等曾根據微生物原位的、不依賴于培養的微生物系統發育學研究結果認為：在自然界中，通過實驗室人工培養方法已經被分離和描述的微生物物種數量僅占估計數量的1%～5%，而其余大多數微生物種群還仍然未被分離和認識，因此，人們不能利用傳統的微生物培養技術獲得真菌多樣性的全部信息，極大的限制了研究的廣泛性。在臨床致病菌的鑒定方面，培養的方法更為常用。Ｒasi等利用培養法對從伊朗花斑糠疹患者皮膚上分離得到的馬拉色酵母菌進行鑒定過程中，發現球形馬拉色菌是最常分離到的菌種，大約占31．3%，其次是糠秕馬拉色菌（20．5%）等。Findley等［7］通過微生物培養法從10個健康成人的14個部位的皮膚分離真菌，經鑒定11個剛體部位和胳膊表面的優勢真菌是馬拉色菌屬，通過比較，腳底、腳趾甲和趾間具有較高的真菌多樣性。

2分子生物學方法

鑒于分離培養技術的局限性，近年來，利用不依賴培養的方法分析和鑒定微生物群落多樣性的實驗越來越普遍。自從Pace提出將分子生物學方法用于微生物多樣性研究，微生物分子生態學得到了長足的發展。分子生物學技術應用于微生物群落結構分析使得對環境樣品中占大部分的不可培養微生物的研究成為了可能。目前，大多數用于分析微生物群落結構的方法是基于PCＲ擴增的。在分析微生物群落結構多樣性時，rＲNA是目前應用最廣泛的分子標記，它具有在功能上高度保守，其序列上的不同位置具有不同的變異速率，存在于所有的有機體（病毒除外）內等優點。對于細菌而言，16SrＲNA分析在實際應用中最為廣泛，與細菌相比，使用真菌18SrDNA只能鑒定到屬或科的水平。真菌的非編碼rＲNA區域，如ITS區域（Inter-naltranscribedspacer），進化快速，序列上的變化更加廣泛，因此提供了更多的分類信息，彌補了18SrＲNA的局限性。雖然如此，在實際研究內容中仍然要根據對分類等級的不同要求來選擇合適的分子標記。分子生物學方法的應用使在遺傳水平上研究微生物多樣性成為了可能，該方法可歸納為三方面：①基于PCＲ技術的研究方法，這些方法是對樣品直接提取DNA或者ＲNA，然后對特定基因設計引物進行PCＲ擴增，再利用不同的方法進行分析，（Fluorescenceinsituhybridization，FI可以對微生物在特定環境中的存在與否、分布模式及豐度等情況進行研究，具有較高的靈敏性和特異性。③基于DNA序列測定的研究方法，分析具體堿基序列的分布情況，通過與生物信息學結合，進行數據比較分析，如元基因組（Metagenome）測序技術，成為研究難培養微生物或不可培養微生物多樣性的重要方法。

2．1基于PCＲ的克隆文庫方法

基于PCＲ的克隆文庫方法使對不可培養微生物的分析成為可能，Pace提出將PCＲ產物進行克隆后測序，大大提高了對微生物群落結構的認識，是使用較為廣泛的一種方法。目前已有研究采用針對18SrDNA及ITS的克隆文庫構建技術對腸道內真菌群落的多樣性進行分析，研究結果表明人腸道真菌多樣性比較低，主要以不同亞型的芽囊原蟲屬為主

2．2變性梯度凝膠電泳（DGGE）

DGGE最初是lerman等［12-13］發明的，起初主要用來檢測DNA片段中的點突變。1993年，Muyzer等［14］首次將其用于微生物群落多樣性的研究。DGGE普遍用于分析環境中細菌、真菌、病毒群落的生物多樣性。Kim等利用PCＲ-DGGE技術分析了日本和中國發酵豆瓣醬中的細菌和真菌群落多樣性，確定了米曲霉和魯氏酵母的存在。We-erasekera等［16］通過PCＲ-DGGE方法研究人唾液中的酵母菌，在其中六個樣品中鑒定出兩種酵母菌，分別是白色念珠菌和杜氏假絲酵母，有力的證明利用DGGE技術研究口腔中的酵母菌是一種相對快速便捷的方法。

2．3末端限制性長度多態性（T-ＲFLP）

T-ＲFLP技術是在末端限制性片段長度多態性技術基礎上發展起來的，依據rDNA序列的保守性和特異性，選擇具有系統進化標記特征的序列作為目 的序列。T-ＲFLP技術靈敏度高，對于評估復雜環境樣品的多樣性和快速的比較不同生態系統的微生物群落結構和多樣性是一種有力的工具。Curlevski等［17］使用T-ＲFLP方法研究了澳大利亞商業化混交林和單一種植南洋杉林場土壤真菌群落的不同，通過對真菌的ITS區域進行分析表明子囊菌門的豐度最高，其次是擔子菌門和接合菌門，但在不同類型的林場中它們的相對豐度存在差異。

2．4實時熒光定量PCＲ

（qPCＲ技術于1996年由美國AppliedBiosys-tems公司推出，是將熒光能量傳遞技術（Fluores-cenceresonanceenergytransfer，FＲET）應用于PCＲ，實現了PCＲ從定性到定量的飛躍。qPCＲ技術目前已得到廣泛應用。李曉然等在對汾酒發酵過程和汾酒酒曲制作過程中細菌和真菌多樣性的研究中，利用qPCＲ技術對整個過程中的細菌和真菌進行了定量，發現在汾酒發酵過程中真菌的數量保持相對穩定，在酒曲制作過程中真菌的數量整體上呈下降趨勢。Li等通過qPCＲ方法研究了老年人舌背的真菌多樣性，表明老年人口腔中的真菌多樣性極高，并不僅限于念珠菌屬，其多樣性與老年人的健康狀態也具有密切的關系。

2．5熒光原位雜交（FISH）

比起費時費力且難以展現全部微生物群落信息的依賴于培養的方法和難以實現定量分析的多種依賴于PCＲ擴增的分子生物學方法，使用探針雜交來研究微生物群落多樣性是一種更為快速的方法。熒光原位雜交是以熒光標記的寡核苷酸探針來探測生態系統中微生物細胞的一種技術，不僅能研究自然或人工環境中的微生物個體，并且可以對微生物群落進行評估。Lepère等使用酪胺信號放大技術與FISH結合的方法，用18SrDNA特異性的引物分析了湖水中的真核超微浮游生物的主要類群，獲得了真核浮游微生物的定量結果。雖然分子生物學方法目前是闡述微生物多樣性的強有力技術手段，并且在真菌多樣性研究中具有傳統培養法無法比擬的優勢，但是基于PCＲ擴增的各種方法及FISH等方法仍然存在著多種弊端，例如引物的偏向性、PCＲ存在的其他系統偏差以及FISH方法中由于引物的不匹配造成對分析結果的錯誤估計等。在實際的研究中，通常將多種技術綜合使用，以避免由于方法原理本身所帶來的不可避免的偏差，可提供更加全面準確的微生物多樣性變化的信息

2．6序列標簽標記的高通量測序

隨著測序技術的發展，被稱為“第二代測序（next-generationsequencing［NGS］）”技術在過去幾年中不斷涌現。其特點是：高通量，低成本，可以同時對多個單獨的DNA分子進行測序，這一改進比

起每條序列需要單獨分析的Sanger法具有巨大的優勢。第二代測序技術主要包括羅氏454公司的GS-FLX測序平臺、Illumina公司的SolexaGenomeAnalyzer測序平臺和ABI公司的Solid測序平臺［25］。自從Hamady等建立了在不同的樣品PCＲ引物上分別添加序列標簽（barcode）來作為高通量測序后根據序列區分不同樣品的標記，高通量測序技術越來越廣泛地應用到微生物群落多樣性的分析中。綜合比較二代測序平臺，在研究微生物多樣性方面應用較廣泛的是焦磷酸測序（Pyro-sequencing）。李曉然等［18］利用真菌ITS1的焦磷酸測序，研究了中國傳統汾酒發酵過程中的真菌群落多樣性，分析了在汾酒發酵過程中真菌的變化以及主要存在的真菌菌種，其中有60%的ITS序列屬于酵母菌科，豐度最高的是東方伊薩酵母，其次為啤酒酵母。Delhaes等利用焦磷酸測序的方法對囊泡纖維癥患者的真菌多樣性進行了研究，結果表明肺功能下降及臨床狀態不好的患者真菌多樣性明顯降低。Hoffmann等對人體腸道的真菌多樣性進行研究，通過焦磷酸測序表明人腸道中的真菌共66個屬，豐度較高的是子囊菌綱和擔子菌類。

3宏基因組學技術（Metagenomics）

利用基于rDNA的分子生物學方法研究微生物多樣性，對于龐大的微生物世界仍然是不足夠的，遠不能闡明微生物的生理生化代謝特征。1998年，Handelman等［29］首次提出宏基因組的概念，并第1次使用了Metagenomics這個詞。宏基因組學技術是通過提取某一環境樣品所有微生物的基因組DNA，或通過鳥槍法直接測序探究環境中微生物的群落結構和功能，或構建宏基因組文庫及對文庫進行篩選尋找和發現新的功能基因及活性代謝產物。通過這兩方面的研究，極大地豐富了我們對環境樣品微生物多樣性和其功能的認知。宏基因組學技術避開傳統的微生物分離培養方法，直接從樣品中提取總DNA來展開研究，理論上覆蓋了環境樣品中的全部微生物，在分析環境微生物復雜群落結構領域得到廣泛應用。該技術在微生物多樣性領域的研究，有關細菌方面的居多，而關于真菌群落多樣性的研究為數并不多。Il-leghems等利用宏基因組學技術研究了可可豆自然發酵過程中的真菌和細菌群落多樣性，研究結果表明，葡萄汁有孢漢遜酵母、仙人掌有孢漢遜酵母、啤酒酵母、發酵乳桿菌和巴氏醋桿菌是主要存在的菌種，并且確定了主要以乳桿菌為宿主的肌病毒科和長尾噬菌體的存在。這是第1篇利用宏基因組學技術并結合454焦磷酸測序研究自然發酵可可豆中群落多樣性種系發生分析的報道，顯示了宏基因組學技術相比于之前研究方法的優越性，能夠獲得更加全面的微生物群落信息。宏基因組學技術不僅在研究微生物群落結構方面蘊含巨大潛力，在發現新功能基因及活性物質方面也具有極大的優勢。Cardoso等 在對被蝸牛侵襲的農作物進行宏基因組學分析中，第1次對其微生物群落和參與生物化學通路的主要基因進行了研究，發現變形菌門是主要的細菌門，其次是擬桿菌門和硬壁菌門，而病毒、真菌及古細菌的多樣性稍低。另外，通過功能分析發現其中存在的大量微生物基因有助于宿主降解木質纖維素、對異生物質脫毒以及合成必需氨基酸和維生素，同時有利于蝸牛的適應性和廣泛攝食，并且檢測到2700多種編碼糖苷水解酶區域和碳水化合物結合結構域的基因。通過宏基因組學技術不僅能夠避免PCＲ擴增帶來的偏差，全面而準確的研究微生物群落多樣性，同時也為研究樣品中微生物生化代謝、發現新功能基因和活性物質提供了極大的便利。宏基因組學技術在分析群落多樣性中不可避免地也會存在一些弊端，例如測序產生的大量數據為后續的序列分析和處理帶來了挑戰，同時對計算機以及數據庫的要求也在不斷提高。盡管如此，宏基因組學技術本身所具有的巨大優勢是目前其他研究方法不可比擬的。近年來，宏基因組學技術已經開始影響真菌生物學，逐漸成為研究真菌多樣性的一個新的發展方向和研究熱點，也增加了獲得新生物活性物質的機會，顯示宏基因組學技術在此方面蘊含的巨大發展潛力。

前景與展望

近年來，隨著各種新技術的不斷完善與發展，對真菌多樣性的研究逐漸深入，利用這些新技術可以從不同的角度來研究真菌多樣性，為環境微生物多樣性和人體真菌病的診斷治療奠定堅實的基礎。值得一提的是，為了獲得更為全面的真菌多樣性信息，在條件許可的情況下可將幾種方法結合起來使用。目前對于真菌多樣性的研究是多方面的，不論是環境中、食品中還是定植于人體各部位的真菌，通過對其多樣性的研究必能為指導實踐提供理論基礎。因此，真菌多樣性研究方法的不斷完善必將推動真菌多樣性研究的快速發展。做生物的多樣性和微生物代謝產物的多樣性，永遠是發現新藥的無窮寶藏。隨著生命科學的發展，一些新的抗真菌藥物作用靶點的發現，必將有更多更有效的抗真菌抗生素被發現和應用。在過去的 20年間，刺白菌素類抗生素的發現和應用，更增強了從微生物代謝產物中尋找抗真菌抗生素的信心。在今后的若干年間，將會有更多的作用靶位用于抗真菌抗生素的篩選，并一定能夠由此獲得更多更有效的抗生素。

致謝

大學三年學習時光已經接近尾聲，在此我想對我的母校，我的父母、親人們，我的老師和同學們表達我由衷的謝意。感謝我的家人對我大學三年學習的默默支持;感謝我的母校安徽職業技術學院給了我我在大學三年深造的機會，讓我能繼續學習和提高;感謝生化班的老師和同學們三年來的關心和鼓勵。老師們課堂上的激情洋溢，課堂下的諄諄教誨;同學們在學習中的認真熱情，生活上的熱心主動，所有這些都讓我的三年充滿了感動。這次畢業論文設計我得到了很多老師和同學的幫助，其中我的論文指導老師劉磊老師對我的關心和支持尤為重要。每次遇到難題，我最先做得就是向劉磊老師尋求幫助，而劉磊老師每次不管忙或閑，總會抽空來找我面談，然后一起商量解決的辦法。

我做畢業設計的每個階段，從選題到查閱資料，論文提綱的確定，中期論文的修改，后期論文格式調整等各個環節中都給予了我悉心的指導。這幾個月以來，劉磊老師不僅在學業上給我以精心指導，同時還在思想給我以無微不至的關懷，在此謹向劉磊老師致以誠摯的謝意和崇高的敬意。

同時，本片畢業論文的寫作也得到了白楊，江雙雙等同學的熱情幫助。感謝在整個畢業設計期間和我密切合作的同學，和曾經在各個方面給予過我幫助的伙伴們，在此，我再一次真誠地向幫助過我的老師和同學便是感謝!

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第三篇：土壤石油污染綜合治理研究進展

土壤石油污染綜合治理研究進展

秦玉廣

（山東省淡水水產研究所，濟南 250013）

摘要：文章就土壤石油污染修復綜合治理問題，從法律法規、行政管理體制、政策措施、思想觀念、污染防治理念、修復治理技術、修復策略等進行了系統論證，并提出土壤石油污染治理需在政府主導下，統籌兼顧、標本兼治、綜合治理。

關鍵詞：土壤石油污染；政府主導；綜合治理

Comprehensive Control Strategy Study of Soil Petroleum

contamination

QIN Yu-guang(Shandong Fresh Water Fishery Institute of Provience, Jinan 250013)Abstract: This article was focused on the comprehensive control strategy of soil petroleum contamination.In order to gives out a comprehensive exposition, the correlate aspects such as the laws and regulations, the administrative system, the policy and measurement, the idea, the concept of prevention and remediation, the hot question of restoration technology, the recovery strategy etc.were all shed light on and systematically discussed.Even presented that to prevent from oil pollution and to restore the oil-contaminated soil, all factors should be taken into consideration and both the symptoms and root causes should be addressed, what’s more all should be conducted under the guidance of the government.Key words: soil petroleum contamination;guidance of the government;comprehensive control

石油號稱“工業的血液”，是重要的戰略資源我國石油企業每年約有7萬噸落地原油進入土壤[1]，有近10萬噸石油污染土壤有待修復 [2]。土壤是一個復雜的陸地生態系統，是人類賴以生存的主要資源之一，是國家最重要的自然資源 [3]。土壤中石油污染物對土壤生態[4]、食品安全[5]、人居環境和人類自身健康都有廣泛而持久的危害[6]。除陸域環境外，大連港和渤 海灣漏油致海域污染事件，再一次牽動了人們對環境的關注，也使人們更加認識到環境污染治理絕非單純技術層面問題。我國土地和礦產資源都歸國家所有，各級政府不可避免地成為礦產資源開采和土壤污染修復的雙重推手。土壤石油污染治理涉及多個社會層面如思想觀-------------------------作者簡介：秦玉廣（1970-)男,助研,從事漁業資源與環境研究（E-mail: qinyuguang888@126.com）

念、法律法規、政策措施、修復技術研究、檢驗評價等，并牽動各個利益攸關方，需要在各 級政府主導下，整合各種社會資源，統籌兼顧、標本兼治、綜合治理。本文以土壤石油污染 治理為切入點綜合論證，希望也能對其他類型的環境污染綜合整治有所助益。

1.積極推動包括石油污染在內的土壤污染防治法律、法規和體制建設

健全的法律法規是實施土壤污染綜合治理的先決和保障。土壤污染防治是環境保護三大任務（空氣、水、土壤）中最為薄弱的環節。

1.1我國土壤污染防治立法保護有待進一步完善[3, 7]

我國綜合性法律法規如《憲法》、《刑法》和專門性法律法規如《土壤環境質量標準》、等都對土壤污染進行了相關法律界定與解讀。但界定目標主要圍繞土地權屬、管理、規劃和利用，對污染防治和環境保護僅能提供點源上的法律支持，無力應對大面積的土壤質量下降和土壤退化問題，且對于石油污染涉及更少。伴隨著我國經濟和社會不斷發展和土壤污染狀況日益嚴峻，其不足之處逐步凸顯，主要表現為：

第一，綜合性法律法規對土壤污染防治多為原則性、概括性法律規范與解讀，對于土壤污染的防范，受污染土壤的治理、修復，缺乏可操作性的明確而具體的法律條文。

第二，現行土壤污染防治法律規范散見于各種綜合性、專門性法律處法規甚至部門規章中，而土壤污染防治需要一個整體、綜合的法律保護體系。

第三，現行土壤污染防治立法中許多基本的、具體的法律制度存在缺失現象，如土壤污染區域分級、防治規劃、責任認定、整治費用的承擔等，使得土壤污染防治工作無法有效展開。

第四，現行土壤污染防治法律沒有從土壤污染的隱蔽性、滯后性、累積性、不可逆轉性和難治理性等特點進行制度設計，缺乏針對性。例如，通過對較為直觀的廢物、廢水、廢氣的控制并不能達到對土壤污染控制的效果，土壤污染治理效果需要通過檢測土壤質量及其對人畜健康狀況的影響才能確定。

第五，土壤污染防治現行管理體制、政府職能、公眾參與、糾紛處理和責任認定等各項具體制度還缺乏明確的法律界定，還沒有形成有效的土壤污染防治綜合法律體系。

第六，現行法律體系中缺乏有關土壤污染防范、治理、修復措施的法律規范，未做到“防”、“治”結合，更沒有強調加強預防，源頭治理的重要性。

第七，現行《土壤質量標準》嚴重滯后，不能滿足經濟和社會發展的需要，亟待補充修訂。

1.2 借鑒發達國家經驗，建立健全我國土壤污染防治法制體系建設

（1）借鑒歐美、日本等發達國家的土壤污染法制建設成果，建立健全我國特色土壤污 2 染防治法制體系。

第一，明確立法目的，提高立法思維高度

土壤污染防治立法，除了為保障人民健康和公私財產安全、有利于土地資源的有效利用外，更應將防治土壤污染上升到立足民生、維護生態安全、建設生態文明的高度，注重對土壤生態功能的維護和修復。

第二，通過立法完善土壤污染防治行政管理體制，以法律的形式明確界定政府各相關部門的權責范圍，壓縮、堵塞部門間爭相管理或責任推諉的法律漏洞，形成即統一領導又各負其責的高效、有序的土壤污染防治和監管體制。

第三，建立和完善公眾參與制度和機制，在政府主導的總體框架下，吸納社會力量，鼓勵公眾參與包括石油污染在內的的土壤污染防治。（2）制定土壤石油污染防治細則。

以《中華人民共和國憲法》和《中華人民共和國環境保護法》為依據，以保護生態安全和公民環境權利為目標，關注民生，制定土壤石油污染防治細則，突出規范性、操作性和實用性。

1.3 推動土壤石油污染防治的地方性法規及體制建設

我國幅員遼闊，地區差異明顯，1995 年國家頒布《土壤質量環境標準》，對于土壤污染的認定具有決定性意義。業內專家普遍認為，該標準過分強調統一，并不適合我國土壤多樣化的特點，也需要相關地方性法規和行業標準的補充。各地應立足區域人文、經濟、社會發展現狀和土壤石油污染特征，并兼顧其他污染修復治理特點，在國家相關法律法規的總體框架內，制定可操作性強的地方性法律法規。以可持續發展思想為指導，科學規劃，防治結合，牢固樹立全局觀、人本觀、科學發展觀和新型政績觀，從思想認識、體制機制和法規建設等方面做文章。

隨著土壤污染問題越來越被普通民眾所重視，近年來一些發展較快、經濟實力較強的省市也推出地方性的污染土壤防治法規，并以此推動了國家土壤污染防治立法進程[8]。

2.樹立正確的思想觀念，堅持以防為主、防治結合的治理理念

2.1倡導樹立正確的思想觀念

土壤石油污染的治理是一項關乎經濟、社會和人的全面、健康、可持續發展的社會性行為，亟需扭轉生產、治理、監管各自為戰、自掃門前雪的片面認識，增強社會意識，積極引導、樹立以政府“主導”為主，全社會積極參與的整體治理觀念。

2.2堅持以防為主、防治結合的治理理念

土壤石油污染防治包括新污染事件的防范和對既成污染的修復兩個方面，應該確立以防為主，防治結合的治理理念，既要著重科學、實用修復方案的研究制定與貫徹實施，更要強調預防和減少污染事件的發生，預防污染勝過最好的污染修復措施。

（1）增強風險防范意識[9]

首先，思想上高度重視，充分認識土壤石油污染的危害性和全面治理的長期性、艱巨性和緊迫性，防止和克服“無所謂”、“與己無關”和“麻痹大意”等思想。作為污染源頭，石油企業項目職業健康安全管理應符合 HSE 目標，創造一個安全和健康的工作環境[10]。

其次，涉油企業要充分考慮發生事故，特別是人為因素引發事故的可能性，在油田開采以及輸油管道、油庫和加油站等設施建設之前，加強環境影響評價和環境風險評估工作，把事故發生的可能性降到最低，此外安全保衛部門亦需加強涉油案件污染防范意識。

第三，政府行政主管部門要切實履行監督職能，防患于未然。（2）健全應急處理機制

中石油2009年業已出臺企業應急預案編制通則[11]，政府也有相關應急機制出臺[12, 13]，會同相關單位，建立了聯動機制。但尚需進一步完善、強化，力圖將不可預測性污染災害降至最低。

3.建立合理賠償機制，確保土壤修復資金支持

既成土壤污染的修復治理離不開財政經濟支持，治理方案、治理范圍和力度均受制于成本收益比較，可以充分借鑒美國“棕色地塊法”又稱（超級基金法(Super-fund Act)）[14]。3.1設立專項基金

根據“政府的作用是提供公共物品”的觀點以及“誰污染誰付費”的原則，由政府和污染事故潛在責任人共同出資，設立石油污染專項基金，事故發生后先行對受害人進行賠付并支付污染治理費用。3.2保險公司介入

為分散風險、降低損失、保護受害人和責任人的利益，應強制規定污染潛在責任人每年應繳納的最低保額，一旦事故發生可由保險公司先行理賠。3.3適度引入市場機制

2010 年我國環保產業市場規模約130億美元[15]，石油污染土壤修復，盡管以政府為主導，并不是政府包攬一切，還需要社會參與，可以適度引入市場機制，形成產業化，讓政府 4 有限資金激活并充分利用民間資本，從而最大限度地發揮主導作用。

4.提高石油污染土壤治理的技術水平

4.1 復合、集成現有修復技術

根據不同污染類型、不同地塊用途，復合、集成利用現有物理、化學、生物修復技術，修復過程既突出資源化，注重資源的回收利用，又兼顧生態目標。4.2 因地制宜，結合區域原生態特點，實施生物修復

以黃河三角洲為例，石油污染土壤修復，應著重考慮本地先鋒植物蘆葦、堿蓬、檉柳等非飼用植物實施植物修復，或植物—微生物聯合修復，特別是充分利用蘆葦濕地的修復作用，蘆葦濕地生態工程凈化落地原油是保護油田開發地區土壤環境的有效方法。應用濕地植物(蘆葦、香蒲等)構建“濕地桶”模擬實驗證明[16]，濕地環境對土壤中的石油污染有明顯的降解作用，落地原油還可以改善蘆葦纖維素和木質素等品質指標，收獲的蘆葦可用于造紙，既可以移除石油污染，又充分利用廢棄物資源，且不進入食物鏈，既無二次污染，又可獲得可觀的經濟效益。此外，蘆葦濕地生態工程還可以恢復黃三角洲退化生態系統，凸顯生態效應和景觀效應。

4.3 推進生物修復熱點研究，提高生物修復技術水平

由于生物修復具有低碳化、設備簡單、成本低廉、應用范圍廣、處理方法多樣、形式靈活，并能充分轉化利用廢棄污染物等諸多優勢，越來越受到世界各國的關注，當前研究熱點有：高效石油降解菌株的選育[17]；強化生物修復技術研究[18]；生物表面活性劑的研究應用[19]；植物—微生物聯合修復、真菌——細菌協同修復研究[20]；通過基因工程技術，改造、構建高效降解菌株[21, 22]，環境基因組學研究應用；分子生態學技術研究應用[23] 等。

5.石油污染土壤的修復策略

為推進環境友好型社會和生態文明建設，石油污染土壤的修復需要兩手抓：一是加強突發性污染事故的應對能力；二是對既成污染土壤實施修復。5.1建立專業化、常態化污染災害事故應急處置機制

盡管從法規體制上重視加強事故災害預防，但仍需相關部門聯合，建立專業化、常態化應急處置機制，以應對不可預見性污染災害事故的發生，增強搶救性修復能力。力爭第一時間有序進入現場，既要做好現場參與處置人員的安全防護，又要及時遏制事故性污染的擴散蔓延，同時對事故區域內受污染危害的人員及野生動物及時進行轉移、搶救。5.2 對既成污染土壤的修復（1）政府出臺受污染土壤修復規劃

政府主管部門設立專項資金，組織社會資源進行調研，根據地區土壤石油污染歷史和現狀調研評估結果，充分考量土壤石油污染對環境和人類健康的生態風險，結合區域經濟和社會發展戰略目標，制定出臺相應的石油污染土壤中、長期修復規劃。（2）修復單位制定合理的修復方案

為解決環境問題，最終修復效果、修復時間和資金都是決定性因素[24]。有一定資質的修復單位，以政府中、長期土壤修復行政規劃為依據，按照受污染地塊不同用途和生態風險輕重緩急，申請專項經費，經充分調研論證、選擇合理的修復技術，經小范圍實驗驗證，按照科學的成本—效益數據分析，分塊、分階段、有針對性地制定詳盡的修復計劃方案，競投標或報請政府主管部門批復，并在政府有效監督之下，有序實施。

①調研

調研是制定合理修復方案的先決條件。首先，污染物性質、濃度、分布，理化修復、生物修復的可行性及其限制因素，現場地質、水文、氣象等環境條件。其次，科學制定調查方案。再次，按批準的方案認真組織調查，保證調查質量，如遇特殊情況確需變更方案的，要及時按規定報批。②優選修復方案

在調研的基礎上，本著兼顧資源、生態、經濟和效能的原則制定適宜的修復方案，并進行必要的室內實驗或小規模實地修復試驗，提出合理的工程設計、運行方案和費用預算。5.3政府對修復工程實施過程控制，對修復效果實施檢驗評價（1）對修復工程實施和資金使用情況實行有效監督

施工質量是保證修復效果的關鍵，修復承擔單位需嚴格按批準的方案組織實施，如需修改修復計劃需報請批復，不得擅自更改，切忌偷工減料，確保施工進度和質量。

政府實施質量同步監測，及時掌握工程進展，客觀評估施工質量、物料供應、設備運行狀況和費用效益比，確保工程順利運行。（2）組織修復效果檢驗評價

土壤石油污染修復效果的評價是一項復雜的技術工作，修復工作完成后，政府相關部門需組織土壤、石油石化和生態等領域的專家成立評估小組，運用恰當的技術方法，對修復后場地內污染物去除率、次生污染物的增加率和污染物毒性下降率等技術數據進行綜合分析，作出客觀和準確評價。

結論

我國東北、華北、華南、華東、西北等不同地理位置和氣候特征的油田區土壤均受到了不同程度的石油污染，含油率最高達23%，超過環境背景值的500-1000倍。經濟效益受生態效益制約，人類的經濟活動不能脫離一定量的生態環境物質要素的支持，經濟效益必須以生態效益為基礎[25]。隨著 “十二五”規劃的逐步貫徹，轉變經濟發展模式，大力發展循環經濟、低碳經濟、綠色經濟，淡化增速概念，明確效益導向，突出保障改善民生等指導思想的確立，在政策推動和政府主導下，采用先進科學技術和完善的法律法規體系“雙輪驅動”[15]，我國土壤石油污染修復綜合治理必將迎來新的明天。

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第四篇：大學校園空氣微生物污染調查

大學校園空氣微生物污染調查

了解校園四季空氣中微生物含量變化趨勢與污染情況。方法

采用撞擊式采樣器，在人員負荷最重、活動最頻繁時，對某大學校園空氣中細菌粒子和霉菌粒子含量進行檢測。結果

校園空氣微生物含量在季節間有很大不同，細菌含量在夏季最高，霉菌含量高峰在夏秋兩季。細菌濃度比較高的功能區有道路、寢室、食堂、超市、體育館、微機室和教室?？晌朊咕Ｗ诱济咕Ｗ涌倲档谋壤哂诩毦Ｗ?。結論

校園空氣微生物含量在多種因素的綜合影響下，季節間和不同功能區之間均表現出明顯的差異，存在一過性污染情況。

空氣中的微生物往往吸附在顆粒物上形成生物粒子，隨風飄蕩，其中小粒徑的生物粒子在疾病傳播方面具有更大意義。研究表明，空氣中微生物數量的多少與環境、清潔衛生狀況、人員密度和活動情況、空氣流通程度等因素有關[1，2]。高校校園是師生集中生活和學習的地方，普遍存在空氣微生物污染問題[3，4]。加強對高校校園空氣微生物的監測，對于了解校園衛生狀況，加強環境衛生管理有著非常重要的參考意義。采用空氣中生物粒子數(菌落總數，cfu)這一指示微生物指標對校園主要功能區空氣質量進行生物學評價。1.材料與方法

1.1 校園概況

沈陽市內某高校，2001年新遷校址，主要建筑物距離城市南北向主干道約150～1000m。

1.2采樣

為全面反映校園內師生主要活動區域空氣微生物狀況，按功能不同將校園分成12個不同的功能區，即操場、道路、綠地、食堂、宿舍、教室、圖書館、微機室、實驗室、超市、體育館和辦公室。參照《公共場所衛生監測技術規范》(GB/T 17220-1998)，共設采樣點126個。于2008-12，2009-03、2009-06、2009-09采樣，分別代表冬、春、夏和秋四季，在各功能區人員負荷最重、活動最頻繁時采樣。參照《公共場所空氣微生物檢驗方法》(GB/T18204.1-2000)，采用撞擊式采樣。JWL-2型采樣器有上、下兩級，上級收集粒徑及以上的微生物粒子，下面級收集以下粒徑的可吸入微生物粒子。采樣高度為1.2～1.5m，采樣時間1min，采樣流量28.3L/min。細菌在37℃培養48h，霉菌在26℃培養72h后，分別計數兩級采樣皿中的細菌菌落數和霉菌菌落數(cfu)，也即捕獲在采樣皿中的空氣細菌粒子數和霉菌粒子數。全年共采樣2016份。

1.3培養基

營養瓊脂培養基和高鹽查氏培養基購自北京奧博星生物技術有限責任公司。按使用說明配置、滅菌。使用Φ9cm平皿，每平皿傾注20ml培養基，冷卻備用。

1.4主要儀器

JWL-2 兩級篩孔型撞擊式空氣微生物采樣器，北京檢測儀器有限公司；DXC-280B型不銹鋼手提式滅菌器，上海申安醫療器械廠；YLN-30A菌落計數器，北京市亞力恩機電技術研究所；SHP-250型生化培養箱和MJP-250型霉菌培養箱，上海精宏實驗設備有限公司；DB-4A控溫電熱板，金壇市天竟實驗儀器廠，環境溫度在零度以下采樣時使用。

1.5 統計分析

菌落計數后，按照公式n=N×1000/(Q×t)計算受檢空氣中微生物含量。式中：N—平皿菌落計數，個；Q—空氣流量，L/min；t—采樣時間，min。

1.6質量評價

我國《室內空氣質量標準》(GB/T18883-2002)規定，室內細菌菌落總數≤2500cfu/m3為合格。2.結果

2.1空氣中細菌粒子濃度及其變化趨勢 結果見表1，圖1。

由表2可見，同樣在冬季，室外空氣中霉菌粒子含量明顯低于其它三個季節，而在室內表現為夏秋兩季高于冬春兩季?？諝庵锌晌朊咕Ｗ又饕趯嬍?、體育館、辦公室以及圖書館占比較高?？偟谋壤哂诩毦Ｗ?，為60.5%。兩者間相關系數為0.822，P<0.05。

3.討論

空氣中微生物采樣一般有兩種常用方法，即自然沉降法和氣流撞擊法。自然沉降法不易測得處于懸浮狀態的微小生物粒子，檢測結果的誤差較大。氣流撞擊法較好地克服了自然沉降法的弊端，能準確地測知空氣中微生物的含量[5，6]，我國《室內空氣質量標準》(GB/T18883-2002)也規定了空氣微生物采樣用撞擊法。因此，本研究中采用氣流撞擊法采樣以盡可能準確、真實反映校園空氣微生物狀況。關于空氣微生物采樣的時機一般有兩種選擇，一是選在一天中的某一固定時間，二是多個時段采樣，如早中晚三次。應該說第二種方式所得結果較具有代表性?？諝馕⑸飻盗孔儎邮芏喾N生態因子的影響，其中人員活動情況就是影響空氣微生物含量的重要因素之一，并且空氣微生物監測的目的就是為了保障最大多數人員的身體健康，所以我們選在各功能區人員負荷最重、活動最頻繁時采樣，使得對結果的評價更具生物學意義。

沈陽地區的氣候特點是，冬季氣溫很低，非常不利于微生物生存。3月氣溫偏低，草木沒有返青，空氣干燥，不利于微生物生存，但春季風沙大，空氣中顆粒物含量多，對微生物會起到一定庇護作用。3月和12月正處在采暖季節，室內溫度一般不低于20℃，門窗緊閉，室內外空氣交換率偏低，一定程度上利于空氣微生物生存。6月氣溫高，雨水多濕度大，云量偏多，這些都有利于微生物生存繁殖。9月氣溫最高，但秋高氣爽，云量稀少，紫外線強度最大，對室外空氣微生物有相當的殺滅作用。夏秋兩季大多數房間會經常開窗通風，室內空氣微生物含量會更多地受到室外條件的影響。

監測結果顯示，不同功能區、不同季節空氣中生物粒子含量有很大差別，霉菌粒子差異程度小于細菌粒子，且在有強紫外線輻射的9月濃度仍居高不下，這可能與霉菌孢子適應能力強有關；可吸入生物粒子與生物粒子總量間呈高度正相關關系，其中可吸入霉菌粒子比例更高；主要在寢室、食堂、超市、體育館、微機室和教室存在空氣生物粒子超標現象，因為是在人員負荷最大時采樣，有理由相信污染是一過性的。粒徑較小的懸浮粒子更易進入呼吸道深部造成嚴重危害，監測結果顯示可吸入粒子占比在50%以上，尤其霉菌性小粒子比例更高，與胡慶軒[7]等的監測結果基本一致。

總之，校園空氣微生物含量受到自然環境因素、社會環境條件、人員活動及自身生存能力等因素的綜合影響，在季節間和不同功能區之間表現出明顯的差異；在人員高峰時存在一過性空氣微生物污染，提醒我們仍需加強這方面的監測和管理工作。4 參考文獻

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第五篇：微生物污染防控實施方案

高校食堂餐飲微生物污染防控實施方案

在餐飲環節,由于交叉污染、加工不當、原料污染變質、存儲不當等原因導致的餐飲食品微生物污染是影響餐飲食品安全的主要因素之一，所以食品微生物控制是確保餐飲食品衛生質量、保證食品安全、預防和控制餐飲環節食源性疾病的重要手段之一。而高校食堂就餐人群聚集、社會影響面廣的特點，決定了高校食堂餐飲食品安全至關重要。因此為切實加強高校食堂餐飲食品安全監管工作，更加有效防控餐飲環節微生物污染，降低食品安全風險，預防微生物性食源性疾病的發生，結合實際，特制定如下實施方案：

一、工作目標

通過開展高校食堂餐飲微生物污染防控工作，徹底排查高校食堂存在的食品安全風險，有效預防因微生物污染而導致食源性疾病的發生，保障廣大師生的飲食安全。高校食堂是集各種餐飲經營模式于一體的綜合性餐飲服務單位，因此，通過開展高校食堂微生物污染防控工作，以點帶面，積極探索各種類型餐飲服務單位微生物污染防控方法，不斷推進，全面提升我市餐飲環節微生物污染防控能力，建立健全有效的微生物污染防控體系，進而形成長效機制，有效杜絕微生物污染引發的食品安全事件，維護社會穩定。

二、工作步驟

此次高校食堂微生物污染防控工作分四個步驟進行。

（一）宣傳動員

組織高校食堂負責人召開微生物污染防控工作會議，動員高校積 極配合，并明確此次工作目標、工作重點、防控措施及工作責任，督促高校積極開展自查自控工作，同時加大社會宣傳力度，動員社會力量積極參與。

（二）自查自控

嚴格要求各高校務必實行校長為食品安全第一責任人的食品安全管理制度，設立專職食品安全管理員，明確各崗位負責人，對食堂實行網格化管理，對食品加工操作各環節進行自查自糾，尤其是對易引起微生物污染的關鍵環節實施重點監督管理，全面提升高校食堂微生物污染防控能力，構建防控微生物污染第一道防線。

（三）集中監督防控

各監管單位要對轄區內高校食堂開展全面網格化的監督檢查，結合食品安全快速檢測、抽樣送檢及遠程視頻監控，對餐飲環節微生物污染關鍵控制點實施重點監督，強化檢查力度，并通過量化評分進行風險排序，全面排查微生物污染隱患，降低微生物污染風險。

（四）總結提高

對此次高校食堂微生物污染防控工作進行全面總結，查找不足，強化微生物污染防控手段及措施，進一步推動微生物污染防控工作在全市餐飲單位開展。

三、高校食堂微生物污染防控工作內容

（一）、設立專職食品安全管理員

鑒于高校食堂動態性、人為性極強的特點，要切實有效地提高高校食堂食品安全水平，有效防控微生物污染，僅靠執法人員的監督檢查是不夠的，還需各高校務必設立專職食品安全管理員，并明確食品 安全管理員責任，進一步強化高校食堂內部的監管力度。同時各高校將設立專職食品安全管理員情況報監管部門備案。

（二）、落實從業人員崗前必讀，規范從業人員的操作 餐飲微生物污染防控就是人的誠信、良心工程，對餐飲加工環節的監督檢查就要從“人”入手，各高校務必落實《從業人員崗前必讀》，真正使從業人員明確“什么人在什么地方（操作環節）做什么，怎么做、做得怎么樣”。

各高校應按要求將《從業人員崗前必讀》（附件1）懸掛于各功能間，并要求各操作環節從業人員每天必讀，操作完畢之后簽字確認是否按規定要求操作，食品安全管理員對從業人員操作情況進行監督檢查，并簽字確認（簽字確認記錄卡見附件2），同時將此納入到高校食堂日常管理之中，記錄內容應當真實，保存期限不得少于半年。真正落實工作責任制及責任追究制，做到有責任、有落實、有提高。

（三）、抓住關鍵點，深入自查

高校食堂負責人及專職食品安全管理員應按照《餐飲單位食品安全微生物污染防控自查表》（見附件3）的內容要求，對食堂進行全面深入的檢查，特別是對可能導致微生物污染的關鍵環節及關鍵點，要作為自查的重中之重來抓，同時對存在的食品安全風險及時整改予以排除。在日常自查中，尤其要做好以下幾個方面：

一是把好從業人員資質關和個人衛生關

從業人員持有效健康合格證明方可上崗；認真落實從業人員晨檢制度，嚴禁患有發熱、腹瀉、皮膚傷口或感染等有礙食品安全工作病癥的從業人員上崗工作，待病癥治愈后，方可重新上崗；從業人員應 統一穿著整潔工作服，戴工作帽，不得染指甲、不得配戴戒指、耳環等首飾；涼菜間、裱花間等專間從業人員須穿戴專用工作服、口罩和發帽；工作服應定期進行清洗，保持整潔；從業人員出入食品處理區應進行更衣；個人衣物及私人物品不得帶入食品處理區；從業人員保持手部清潔，防止交叉污染。接觸可直接食用食品的從業人員清洗手部后還應對手部進行消毒。

二是把好食品處理區環境衛生關

從業人員不得在食品處理區從事污染環境衛生的活動；及時對食品處理區進行日常環境衛生保潔，避免衛生死角的出現；定期對食品處理區進行徹底的衛生大掃除，不留衛生死角；餐廚垃圾及時清理，避免污染食品處理區的環境衛生。

三是把好食品原料關

所用食品原輔料應集中采購管理；落實進貨查驗制度；不得采購不符合《食品安全法》規定的食品原輔料；嚴格執行食品購進索證、索票制度，臺賬登記清晰完整；食品的貯存應保持食品庫房清潔、通風、防潮、防鼠，食品原輔料存放做到分類分架、隔墻離地、先進先出；貯存設施設備及時維護，運行正常；定期檢查、處理變質及超過保質期限的食品。

四是把好食品加工操作關

第一、粗加工環節：食堂不同檔口的食品粗加工應盡量在同一區域內進行，實行集中管理。粗加工時，認真檢查待加工食品，不得使用腐敗變質、感官性狀異常的食品；各種食品原料在使用前應清洗干凈，植物性、動物性和水產類食品必須分別在專用水池內進行清洗，各功能性水池不得混用，防止微生物交叉污染。

第二、烹調加工環節：不得加工使用腐敗變質的食品；需要熟制的食品必須燒熟煮透；不得在烹調加工場所進行粗加工；成品、半成品及原料應當分開存放，食品儲存柜要標識清晰明確，避免交叉污染。

第三、涼菜、裱花蛋糕等加工環節：必須嚴格遵守“五?！币?；嚴格落實洗手消毒、二次更衣制度，從業人員保持良好的個人衛生習慣；生肉和未經清洗的果蔬等食品原料不得進入專間內加工；專間內降溫、空氣及操作臺消毒等設施設備及時維護，運行正常。

第四、及時對食品原輔料進行檢查，清理過期產品。五是把好備餐供餐關

供餐前應認真檢查待供應的食品，不得供應腐敗變質或者其他感官性狀異常的食品；備餐時應避免食品受到污染；分配菜肴的工用具使用前應進行有效的消毒；烹飪后至食用前需較長時間（超過2小時）存放的食品應當在高于60℃或低于10℃的條件下存放；不得提供剩菜剩飯。

六是把好食品工用具及餐飲具清洗消毒關

清洗消毒人員要熟練掌握清洗消毒知識和方法，落實清洗消毒制度，規范清洗消毒行為，使清洗消毒效果達到標準；清洗消毒后的餐飲具應存放在專用的保潔設施內備用，工用具應做到分開使用、定位存放；定期對保潔設施進行清洗消毒，以免對消毒后的餐飲具造成二次污染；清洗消毒及保潔設施、設備運行良好，能正常使用。

為了強化高校食堂內部管理的風險意識，更為有效徹底地排除微生物污染風險，在日常自查工作中，高校依據《餐飲單位食品安全微 生物污染防控自查表》，對食堂食品加工進行綜合評分，綜合得分80分以上的屬存在食品安全風險較低，應及時整改，消除風險；綜合得分60分至80分的屬存在食品安全風險中等，應及時向監管部門上報相關信息，在執法監管人員的現場指導下進行有效整改，消除食品安全風險；綜合得分60分以下的屬存在食品安全風險較高，應立即自行停業整頓，在執法監管人員現場監督指導下徹底整改，待徹底排除風險后方可營業。

（四）、依托科技手段，完善內部防控

由于微生物具有肉眼不可見性，以及餐飲加工動態性、人為性極強等特點，因此，唯有應用有效的科技手段作為支撐，才能更加全面科學地預防和控制微生物污染。

第一、高校食堂應配備相應的食品安全快檢試劑及設備，積極開展食品安全快速檢測，尤其是微生物快速檢測，對購進原料、半成品、成品及餐飲具等進行快速檢測，及時發現可能導致微生物污染的風險所在，消除風險。

對配備食品安全快速檢測試劑及設備的高校，執法人員會對高校食堂快檢操作人員進行集中培訓，使其能夠熟練應用快檢試劑及設備開展工作。

第二、高校食堂應引入遠程視頻監控系統，對食堂各加工環節中易引起微生物污染的關鍵環節實施動態監控。

四、監管部門要創新監管模式，加大監管力度

（一）、強化格式化監管，做好風險排序

對高校食堂食品加工過程中易引起微生物污染的關鍵環節，實施 全面拉網式排查，及時發現存在的安全隱患，對存在違法違規的行為，加大處罰懲戒力度。在檢查過程中，嚴格按照《餐飲單位格式化監督檢查表》對高校食堂進行微生物污染風險評估，并給予綜合量化評分排序，各高校食堂的風險排名情況，不僅要在高校內部進行通報，而且要通報主管教育部門。對于得分較低、風險較大的單位，要增加監督檢查頻次，實施重點監管，將食品安全隱患降至最低。對于存在的違法行為、給予警告或多次責令改正但拒不改正的行為，要依法予以嚴肅查處。

（二）、建立健全遠程監控和檢驗為主的科技支撐體系 采用遠程監控的新型執法監管手段，不僅可以節約監管成本，提高監管效率，更可使執法監管人員及時有效地對其微生物防控工作的每個環節進行實時監管，促使其餐飲服務行為的規范。因此，對于容易導致微生物污染的關鍵環節，要安裝遠程監控設備，對關鍵控制點的具體操作情況實施動態監控，實現微生物防控的動態性，一旦發現從業人員違規操作，存在食品安全風險，即刻告知高校食品安全專職管理員，確保在第一時間排除各類可能引起微生物污染的隱患。

由于微生物的肉眼不可見性，依靠常規的監管手段無法對微生物污染做出科學判斷，因此，在監管過程中，應用食品安全快速檢測設備對食品及食品工用具進行檢測，對篩查出的可疑食品進行抽樣送檢。食品安全快檢及抽驗，不僅使得微生物污染防控更加科學合理，同時也是對日常監管及微生物防控效果的評估，能夠為微生物防控提供理論依據和數據支撐。

監管單位要依據監督檢查及抽驗結果對高校食堂進行風險排序，找出不同風險類別高校食堂微生物污染防控的關鍵環節和關鍵控制點，建立微生物污染防控預警體系，對安全風險較大的單位及易引起微生物污染的關鍵環節制定相應的監督檢查計劃，并實施重點監督檢查。

（三）建設記分制為主的微生物污染防控誠信體系

為了進一步提高轄區內高校食堂餐飲食品安全水平，更加有效預防和控制餐飲微生物污染，加強高校內部微生物防控的力度，監管單位應對轄區內高校食堂建立微生物污染防控誠信系統，采用記分管理手段，通過日常監督與專項檢查相結合的形式對轄區內高校食堂進行監督管理，對違規行為進行記分，在一個記分周期內，累計記分達到或超過某一限值，將采取有效措施進行重點監管。具體記分規則詳見附件4。

五、工作要求

（一）高度重視、認真抓好落實

餐飲微生物污染防控是有效預防食源性疾病的重要手段之 一，事關我市餐飲服務食品安全全局，各有關單位的一把手要把此項工作放在重要位臵上，要親自抓，督促各高校落實好自查自控工作，確保微生物污染防控取得實效。

（二）統籌安排，提高工作效率

將微生物污染防控工作與日常的監督檢查及各種專項檢查

工作相結合，要統籌安排執法力量，打包落實工作任務，明確責任，確保此次高校食堂微生物防控工作落實到位。

（三）信息報送，完善工作資料

要確定專人，負責收集、報送此次微生物污染防控工作信息，工作結束后，做好相關資料整理和歸檔工作。