第一篇：2013年度個人工作總結-馬瑞

2013年度個人工作總結

——馬瑞

一年的工作轉瞬又將成為歷史，辭舊迎新，2014年即將來

臨。新的一年意味著新的起點、新的機遇、新的挑戰。總結過去，展望未來是為了“決心再接再厲，更上一層樓”，在即將過去的一年，取得成績的同時，我也找到了工作中的不足。當然我還有許多需要領導批評指正的不足之處，有待進一步優化和解決。自動化東部試采維護班組的一員，在認真落實上級領導安排各項工作同時，結合平時維護的實際情況和運行中不斷發現眾多問題，現將這一年的工作總結如下：

一、日常重點工作：

1、響應上級冬防保溫，保證裝置平穩運行的工作方針，通過開展相關冬防保溫工作，總結工作經驗，完善冬防保溫工作，冬季運行工作。加密巡檢，確保儀表不凍堵，對未加電伴熱保溫不好的地方也及時跟催聯系電站盡快對其加電伴熱保證冬季能夠正常的成產運行。

2、自投產以來東部試采計量分離器LV閥出現大量的故障。給生產及自動計量帶來了很大的麻煩，影響了生產穩定和安全隱患，自項目部引進了便攜式超聲波流量計后每天對無法自動計量的單機進行手動計量，徹徹底底的解決了單井的計量問題。

3、每十天對東部集輸各單井進行一次日常檢查巡檢，對儀表的準確率、完好率、進行統計。及時上報整改存在的問題和隱患，提高生產事故的預見性。同時逐步形成自動化工作開展的指導思路，做到風險可控、隱患及時發現、及時防范、及時解決的工作模式。

二、年度檢修工作：

1、檢修工作，共有52口單井的700多臺儀表的拆裝及效驗其中包括壓力變送器、溫度變送器、溫度計、硫化氫氣體檢測儀、可燃氣體檢測儀。保證儀表的校驗率達到95%以上

2、自控閥的保養。

3、遠傳液位計與就地液位計共計90多臺的拆檢及清洗。

4、所有單井控制柜的吹掃及檢查

在此次檢修中由于站外單井分散、距離相對較遠等客觀因素，這就要求我們對人員的分配要合理，人員的調配要恰當、人員的分工要明確。我們仍然克服炎熱的夏日、工作的繁重、任務的緊迫等困難，歷時18天圓滿完的成了此次年度檢修工作。

三、重大問題整改工作

1、自處理廠投產以來東部試采大部分單井火炬無法點燃經過我們查看相關資料和分析后發現現場火炬點火燃料氣過大，經手動調試后能夠正常點火使用。

2、東部集輸大部分單井語音呼叫系統由主控室打往各個單井現場不能擴音，現場人員無法接收，經檢查處理后部分單井由于電話內主板已燒壞無法進行擴音。在與甲方領導協調及廠家技術人員溝通后，廠家予以更換后出現的問題都已解決能夠正常使用。

四、新單井投產調試工作：

1、新單井投產調試工作自2013-2014年度也不斷增加了新井其中包括：東部試采的ZG7-

1、ZG7-

2、ZG6、TZ26-H11、ZG6-

2、TZ721-

8、ZS1C、TZ62-TH、TZ62-H16、TZ62-H17、TZ62-H14、ZG541H、TZ721-H6、TZ62-H15、82-TH、等以上

單井系統調試及儀表日常維護與檢查工作。

回首過去，我們盡職盡責，任勞任怨。展望未來，我們胸有成竹，信心百倍。相信在全體員工的共同努力下，我們的業務水平將再現高點，公司的明天也會更加的美好、強大！我們自動化維護班組也會在不斷的學習中進步，不斷的工作中升華，圓滿順利的實現下一年的目標和計劃。我堅信：沒有比腳更長的路，沒有比肩更高的峰！努力造就實力，態度決定高度，這就是我們力量的源泉，沖鋒的戰旗，智慧的搖籃！

第二篇：馬瑞發言稿

尊敬的領導，老師們

大家好！我是寶雞寶雞高新區派往鳳縣支教的老師馬瑞。今天，我非常高興作為支教老師代表發言。首先，請允許我代表全體支教老師，感謝教育局和學校領導這一年來對我們在工作上的支持和信賴，在生活上的關心和幫助。

城區學校有優越的教學資源和先進的教育理念，教育局也常常給我們創造展示學習的機會，我有幸成為一名城區教師，今天的成長與進步與城區學校密不可分。因此，作為一名人民教師，我有責任，也有義務為教育的均衡發展，為社會的和諧，貢獻一點微小的力量。懷著教書育人的夢想，我來到了這里，即使路遠山遙，但還是擋不住我實現夢想的步伐。

初來黃牛埔中心小學時，一切都是那么陌生，但是領導和同事們的關心幫助，讓我感受到了家的感覺，這便讓我很快投入到工作學習中。

在黃小工作的一年中，我成長了許多。當然這要感謝黃小的領導對我的工作能力的信任和支持，給了我一個很好的歷練機會。在上一學年中，我擔任四年級一個班的班主任工作以及語文教學，六年級的數學教學。這些工作繁雜瑣碎，但我并沒有放棄，而是把它當成自己人生中的一筆寶貴財富。這一年，我認真工作，把自己融入到這個集體當中，按照學校規定嚴格要求自己，和同事們探討教育教學問題。借鑒身邊同事們的班級管理經驗，結合自己本班情況以及自己的創新想法，正確引導山區孩子們的學習生活。現在孩子們也漸漸長大了。除此之外，我也很注重自己專業素質的提高，堅持與同課頭老師互相聽評課，時刻關注教育新聞，注重教育理論的學習，將自己的教學想法大膽的在課堂上實施。工作的同時，我時刻記著自己還是一名學習者。學習鄉村教師在艱苦的辦公環境中無私奉獻教育事業的精神，他們的耐心，細心，愛心感化著我。讓我明白了一名合格的人名教師，無論在什么條件下都應該將愛崗敬業，無私奉獻作為自己的信念。

在工作的一年中，我曾經也因為各種原因想過放棄，但當我走進校園，聽到孩子們朗朗的讀書聲，下課圍著你問問題時，問我一聲聲“老師好”時，我為自己退縮的想法感到慚愧，我是一名老師，教書育人是我的職責，它是無條件的，我怎么能因為條件的好壞而選擇教育呢？

在工作的一年中，我深深的體會到了，鄉村學校的閉塞。這里不僅缺乏好的硬件設施，而且更缺乏先進的理念，信息來源比較狹窄。孩子們普遍缺乏應有的愛，缺乏科學的家庭教育。但是這里孩子也有求知的夢想，每周要走好多山路，尋求自己的求學之路。在知識的面前，他們如饑似渴。每當給他們講一些新東西時，他們的眼神讓我震驚。所以，我覺得這里需要我，需要更多優秀的老師。每個孩子都有求知的權利，作為老師更應該在求學之路助他們一臂之力。

參加工作不到三年，而我兩年的寶貴時間將在黃小度過，我感到很自豪，我相信這將成為我人生一種特殊的經歷。因此，在后面一年的工作當中，我繼續嚴格要求自己，盡職盡責，做到耐心細心搞教育，創新性工作，將愛的種子播撒在這里。

我的講話完畢，謝謝大家！

第三篇：瑞馬公司介紹

瑞馬公司介紹

一、公司簡介：

“瑞馬”品牌誕生于1886年的意大利都靈鎮，歷經200余年的發展，如今瑞馬己成為一個歷史悠久的品牌。瑞馬的熱能設備暢銷世界，享譽全球，成為歐洲熱能領域的領跑者。

瑞馬熱能技術設備(國際)有限公司旗下有多個生產基地，員工人數超過20000名，12家跨國公司及5個代表處，產品暢銷至60多個國家和地區。瑞馬熱能技術設備(國際)有限公司為提升服務，進一步打開亞洲國際市場，2009年瑞馬進駐中國，引進自己的先進生產技術，注入資金聯手建造了自己在中國的4S服務基地——中山羽順熱能技術設備有限公司，并于2010年8月份正式投產，從而大大提高了對中國客戶的銷售、服務能力。

瑞馬一貫重視技術創新及產品質量，投入大量資金用于燃燒、鍋爐和供熱等領域的技術研發。瑞馬重視節約能源和對環境的保護，大舉進軍熱電聯供、再生與新型能源領域(例如太陽能集熱板技術)，瑞馬一直致力于供熱系統的技術開發，使其完美無缺，并制定了能耗效率和節能環境保護方面的新標準。

瑞馬致力為客戶提供安全可靠，技術領先的解決方案，也可根據客戶需求量身定制我們的服務。我們有信心把產品與服務做到更優和更好，自信與能力是我們走向卓越的法寶。

二、公司發展歷程1、1799年，菲利普·魯本發明煤氣照明和取暖兩用裝置的專利產品； 2、1800年，魯本將這種設備用于飯店進行照明和取暖；

3、1822年，意大利米蘭理工大學阿斯·瑞馬先生改進了這種設備，改為立式，并在自己的餐館和旅館里安裝使用；

4、1824年，阿斯·瑞馬先生的這種立式采暖設備被詹姆斯·巴頓看中，采購100套用于自己的旅館，得到了用戶的贊美；

5、1825年，阿斯·瑞馬在意大利都靈鎮成立了自己的工廠，開始大批量生產； 6、1886年，阿斯·瑞馬以自己的名字命名給工廠起了新名，并組建了股份公司，同年10月“瑞馬”第一款壁掛式采暖爐出世；

7、1915年，“瑞馬”壁掛爐開始了全球事業性的拓展；

8、1980年，“瑞馬”壁掛爐進入亞洲市場，總部設在了中國香港；

9、2000年，“瑞馬”壁掛爐進入中國內陸市場，任命馬瑞先生為中國區執行總裁；

10、2006年，“瑞馬”暖通設備有限公司中國銷售公司在廣東順德成立，在中國西北、華北開始了戰略性的業務拓展；

11、2008年，應中國區銷售需要，決定在中國自產自銷，總部前往中國對壁掛爐廠家進行生產、檢測審核，12、2009年，瑞馬進駐中國，引進自己的先進生產技術，注入資金聯手建造了中山羽順熱能技術設備有限公司，13、2010年，進行了公司的改制和革新，同年8月，新型生產線安裝調試合格，第一臺合格產品成功下線；

14、2011年，意大利瑞馬熱能技術設備有限公司精心打造的中國制造基地廣東中山羽順熱能技術設備有限公司掛牌成立，并將意大利瑞馬壁掛爐的全套先進技術注入羽順公司，成功研發推出10余款新型壁掛式采暖爐和大型立式模塊采暖鍋爐；

15、2011年12月，根據年底統計，作為新的工廠第一年出貨量就達到15000余臺，在行業里受到贊揚。

第四篇：本科生畢業論文馬瑞 修正

本科生畢業論文（設計）

題

目

南四湖環棱螺基因組DNA的提取與鑒定

姓

名

馬瑞

學號

2008142463

院

系

生命科學學院

專

業

生物科學

指導教師

曲志才

職稱

教授

2012 年 5 月 20日 曲阜師范大學教務處制

目錄

摘要 ……………………………………………………………………………………1 關鍵詞 …………………………………………………………………………………1 Abstract …………………………………………………………………………………1 Key words ………………………………………………………………………………1 引言 ………………………………………………………………………………………1 1 實驗材料及方法 ………………………………………………………………………2 1.1 實驗材料 ……………………………………………………………………………2 1.2 實驗試劑 ……………………………………………………………………………2 1.3 實驗器具 ……………………………………………………………………………3 1.4 實驗方法 ……………………………………………………………………………3 1.4.1 從環棱螺肌肉組織中提取基因組DNA……………………………………………3 1.4.2 瓊脂糖凝膠電泳 …………………………………………………………………3 1.4.3 DNA濃度、純度及質量檢測………………………………………………………4 2 結果與分析 ……………………………………………………………………………4 2.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測結果…………………………………………………………4 2.2 紫外分光光度計檢測結果…………………………………………………………4 2.3 實驗結果分析………………………………………………………………………6 3 討論 ……………………………………………………………………………………6 3.1 DNA電泳沒出現條帶的原因…………………………………………………………6 3.2 DNase的來源以及防止DNase的措施………………………………………………6 3.3 肌肉組織的不同保存方法對實驗的影響……………………………………………7 3.4 實驗材料的不同研磨方法對實驗的影響……………………………………………7 3.5 檢測基因組DNA提取效果的方法……………………………………………………7 致謝 …………………………………………………………………………………………8 參考文獻 ……………………………………………………………………………………8

南四湖環棱螺基因組DNA的提取與鑒定

生物科學專業學生 馬瑞

指導教師 曲志才

摘要：基因組DNA的提取技術是分子生物學研究中經常應用的最重要的實驗技術。DNA作為遺傳信息的載體，是分子水平實驗操作的重要對象，純度高、濃度高、完整性好的基因組DNA為基因的下游操作可以提供良好的保證。本實驗采用經典的酚-氯仿抽提法，以南四湖環棱螺的腹足肌肉組織為材料分離提取高質量的基因組DNA, 用來進行以后的DNA克隆測序等實驗研究。實驗采用在-20℃條件下保存的肌肉組織為材料，利用SDS裂解細胞，蛋白酶K消化大部分蛋白質，最后用酚+氯仿+異戊醇除去剩余的蛋白質，通過異丙醇沉淀，得基因組DNA。利用瓊脂糖凝膠電泳可檢測所提取基因組DNA的濃度和質量。

關鍵詞：基因組DNA；田螺；肌肉組織；酚-氯仿-異戊醇

Extraction and identification of genomic DNA from Nansihu river snail

Student majoring in Biological science

Name MaRui

Tutor

Qu Zhicai Abstract：Genomic DNA extraction method in application of molecular biology research is often the most important experimental techniques.As the carrier of genetic information, DNA is an important object of genetic manipulation.High purity, high concentration, integrity, good genomic DNA for gene downstream operations can provide a good guarantee.In this study the phenol-chloroform-isoamyl alcohol method was used to extract genomic DNA from muscle tissue of Nansihu river snail, which will be used for the experimental study of the DNA sequencing.It was used the muscle tissue which was preserved in-20℃ refrigeration, using SDS to lyse cells.Most of the protein was digested by proteinase K and the remaining protein was removed by phenol-chloroform-isoamyl alcohol.Through using isopropanol, genomic DNA can be precipitated.Agarose gel electrophoresis can detect the concentration and quality of extracted genomic DNA.Key words: genomic DNA;river snail;Muscle tissue;phenol-chloroform-isoamyl alcohol

引言 在基因工程中，核酸分子是主要的研究對象，因此核酸的分離、提取是分子生物學研究中很重要的技術。DNA作為遺傳物質的載體，是分子水平實驗操作的重要對象，純度高、濃度高、完整性好的基因組DNA為基因的下游操作可以提供良好的保證。因此基因組DNA的提取是基因工程操作中最常用、最基本的實驗技術，獲得完整性良好的基因組DNA一直都是致力于基因工程研究的分子生物學者所面臨的挑戰性課題。盡管目前已經建立起許多基因組DNA分離提取方法并開發出若干DNA 分離提取試劑盒，但是，仍有不少實驗材料由于富含的DNA酶、多糖、多酚等物質或者降解DNA，或者與DNA 形成難溶物等方式嚴重干擾DNA 的提取，常常導致實驗的失敗。就目前應用較為廣泛的DNA提取方法而言，高鹽法提取DNA雖然便捷，但所提取的DNA純度較低，穩定性較差，影響基因下游操作。酚-氯仿抽提法已經廣泛用于提取多種動、植物組織和細胞的基因組DNA，是比較常用的方法。本實驗采用的就是酚-氯仿抽提法，原理是：SDS可以裂解組織細胞，使DNA從細胞中釋放出來，蛋白酶K可消化部分蛋白質，并使DNA與蛋白質分離。通過水浴加熱充分反應后，加入酚-氯仿-異戊醇等有機溶劑，DNA和變性的蛋白質分別位于整個體系的水層和中間層，從而分離。異丙醇能夠奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水，得以沉淀，從而得到純化的基因組DNA。

南四湖是山東省第一大淡水湖泊，其自然資源豐富，盛產魚、蝦等經濟動物，葦、蓮等多種水生植物。南四湖的田螺屬于軟體動物門，腹足綱，田螺科，環棱螺屬。環棱螺的分布廣泛、種群密度大，它與水產養殖、醫學寄生蟲、環境保護等方面的研究關系極為密切。多數淡水腹足類動物的個體小、數量多、耐污染性強，它們以水中的小型藻類、有機質等為食，其自身又是魚類的天然餌料，對于維持水體的生態平衡和治理水體的富營養化等方面都有著重要的作用，近些年來受到國內外學者的高度重視。因此,對于這樣一個與人類生活息息相關的物種,提取其基因組DNA是完全有必要的。同時，分離出純度高、濃度高、完整性好的基因組DNA可以為許多后備實驗做準備，如Southern雜交，PCR，基因定位，基因組文庫的構建，基因組測序等，而且在分子水平對環棱螺分類地位的研究成效在很大程度上取決于提取的基因組DNA 的質量。基于此，本實驗主要研究從南四湖環棱螺肌肉組織中快速有效地提取高純度的基因組DNA。本研究采用酚-氯仿抽提法,目的在于分析研究南四湖環棱螺基因組DNA適宜的提取條件,并且分離出純度高完整的基因組DNA，為分子生物學的深入研究奠定了基礎。材料與方法

1．1 實驗材料

實驗所采用的環棱螺取自南四湖，2011年采集的標本于95%的酒精中-20℃冷凍保存，2012年采集的標本進行活體解剖后，直接存放于-20℃冰箱中冷凍保存。根據所采集環棱螺標本的形態特征大致分為三種（詳見表1）

表1 三種不同環棱螺采集信息

銅銹環棱螺 梨形環棱螺 方形環棱螺

采集點 南四湖5號 南四湖18號 南四湖7號

采集時間 2012年4月 2011年7月 2012年4月

采集個數 14 17

1．2 實驗試劑

（1）分離緩沖液：10mmol/L Tris-HCl(PH 8.0)100mmol/L EDTA 100mmol/L NaCl（2）10%SDS：裂解組織細胞（3）蛋白酶K：消化部分蛋白質

（4）酚-氯仿-異戊醇（25:24:1）：除去少量蛋白質（苯酚：使蛋白質變性，蛋白質分子溶于酚相，DNA分子溶于水相。氯仿：一是使蛋白質變性，沉淀，通過離心除去：二是抽提水相里微量的苯酚，防止損傷核酸；三是除去樣品中的脂溶性雜質。異戊醇：一是減少蛋白質變形過程中產生的氣泡；二是有助于分相，使離心后上層含DNA的水相，中層變性蛋白質相，及下層有機溶劑相保持穩定）（5）氯仿-異戊醇（24:1）：除去少量蛋白質

（6）異丙醇：奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水，易于沉淀（7）70%乙醇：洗滌DNA（8）TE緩沖液：1×TE（9）瓊脂糖

（10）上樣緩沖液（溴酚藍）：電泳時跑在DNA前面，防止DNA跑出凝膠（11）電泳緩沖液（1x TAE）

（12）溴化乙錠：嵌合劑，顯示DNA位置 1.3 實驗器具

移液槍、槍頭、槍頭臺、EP管、離心管、試劑瓶、量筒、研缽、飯盒、大瓷鋼、三角燒瓶、電子天平、電泳儀、低溫離心機、DNA離心濃縮儀、蒸汽滅菌鍋、冰箱、滅菌箱、手套、口罩、錫箔紙等。

1.4 實驗方法

1.4.1 從環棱螺肌肉組織中提取基因組DNA（1）準備試驗：配置試劑，現配現用的試劑要當天配制，其余的放入冰箱內備用；槍頭、EP管等塑料試劑要用報紙包扎起來，放入高壓蒸汽滅菌器內，120-121℃高壓滅菌20min，再放入干燥箱內烘干備用；剪刀、鑷子等儀器用錫紙包扎好于滅菌箱內200℃大約6h，備用；

（2）實驗所用的環棱螺腹足肌肉組織材料，一部分取自95%的酒精中-20℃冷凍保存的肌肉組織，一部分取自剛解剖后立即-20℃冷凍的新鮮肌肉組織，取300-400mg組織進行實驗。對于肌肉組織的研磨，在實驗過程中采取三種不同的方式:第一，在研缽中用剪子將組織剪碎，分別放入4個1.5mL的離心管中；第二，用剪子將組織剪成小塊后，加入研磨器進行研磨，在研磨過程中加入無菌水，以保證研磨充分，分別倒入4個1.5mL的離心管中，離心1min，取上清，保留沉淀；第三，用剪子將組織剪成小塊后，在研缽中加入液氮，在冷凍的條件下迅速進行研磨，研磨成粉末狀后，用藥匙分裝到4個1.5mL的離心管中。每個管中約70-100mg組織。向每個管中依次加入540μL TE緩沖液，60μL SDS，50μL蛋白酶K，充分震蕩混勻；

（3）55℃水浴加熱2-4h后取出，加入等體積的酚-氯仿-異戊醇，輕輕顛倒混勻，4℃，12000r/min離心10min；

（4）將上清移至新的離心管中（這時EP管中已經分層，三層，中間為蛋白質，吸取上清是一定不能吸到中間層，以免混入雜質），加入等體積酚-氯仿-異戊醇，輕輕翻轉混勻，4℃，12000r/min離心10min（再次離心的目的主要是再一次去除雜質，使DNA充分溶解出來）；

（5）將上清移至新的離心管中，加入等體積氯仿-異戊醇，輕輕翻轉混勻，4℃，12000r/min離心10min；

（6）將上清移至新的離心管中，加入等體積異丙醇，顛倒混勻，4℃，12000r/min離心10min；

（7）棄上清，向沉淀中加入70%乙醇洗滌沉淀，12000r/min離心5min，棄上清保留沉淀，干燥5-10min，加入25μL TE緩沖液溶解，得到基因組總DNA。

1.3.2 瓊脂糖凝膠電泳

（1）用膠帶將膠板的兩端封好，插上梳子；（2）電泳膠的制備（1%）

瓊脂糖0.3 g，加入30mL TAE緩沖液，充分加熱到沸騰無泡沫，冷卻到大約60℃，再向膠中加入溴化乙錠 2?L；

（3）倒膠：將融化的凝膠倒入膠模中（不要出現氣泡），凝膠厚度大約在3-5 mm之間，在凝膠完全凝固后（室溫下30-40 min），撕去膠帶，輕輕拔出梳子；

（4）點樣：取5?L提取的基因組DNA溶液，與溴酚藍混合后，慢慢將混合物加入上樣孔中；

（5）小心地將玻璃板移至裝有電泳緩沖液TAE的電泳槽中，且使緩沖液沒過膠面。電泳槽中的緩沖液最好與制膠所用的緩沖液是同一批次的，若兩種緩沖液中的離子強度及pH不一致，將影響核酸的遷移率；

（6）通電，使DNA向陽極移動。采用80V電壓進行電泳；（7）當溴酚藍在凝膠中移出適當距離后（約1 h），切斷電流，取出玻璃板，在凝膠成像系統中觀察并記錄結果。

1.3.3 DNA濃度、純度及質量檢測

（1）取原液15μL，加TE緩沖溶液稀釋到750μL(稀釋50倍)，混勻，移至石英比色杯中，以750μL TE緩沖溶液為參比，用紫外分光光度計測定DNA在波長260nm、280nm處的吸收值。

（2）用以下公式進行計算：

DNA濃度(μg/μL)= D260×n(稀釋倍數)×50(μg/mL)÷1000； 得率(μg/g)=DNA 量(μg)/樣品量(g)； 根據OD260/ OD280判斷DNA的純度。

2、結果與分析

2.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測結果

圖1 三種不同環棱螺基因組DNA提取效果電泳圖

1.銅銹環棱螺基因組DNA；2.梨形環棱螺基因組DNA;3.方形環棱螺基因組DNA

三種環棱螺的肌肉組織均可以跑出較為清晰的條帶，即三種環棱螺均可以提出較為完整的基因組DNA。實驗結果顯示，酚-氯仿抽提法可以有效的進行南四湖環棱螺基因組DNA的提取，并可以為許多后備實驗做準備。但是各條帶均有或多或少的拖尾現象，說明在實驗過程中存在DNA的降解（圖1）。

2.2 紫外分光光度計檢測結果

用酚-氯仿抽提法提取三種不同環棱螺基因組DNA的紫外檢測結果見表2。

表2 三種不同環棱螺基因組DNA的紫外檢測結果 2 OD260 0.252 0.149

OD280 0.138 0.085

OD260/OD280 1.827 1.750

dsdsDNA濃度（μg/μL）dsDNA得率（μg/g）

0.6300 0.3725

189 111.75 3 0.371 0.203 1.828 0.9275 278.25 注：1.銅銹環棱螺基因組DNA；2.梨形環棱螺基因組DNA;3.方形環棱螺基因組DNA A

B

C

圖2 三種不同環棱螺基因組DNA的光譜掃描曲線 A為銅銹環棱螺基因組DNA的光譜掃描；B為梨形環棱螺基因組DNA的光譜掃描；

C為方形環棱螺基因組DNA的光譜掃描

從表2中可以看出，3種不同環棱螺基因組DNA的OD260/OD280比值都在1.70－1.85之間，說明提取的DNA純度較高，用相同的方法提取不同種環棱螺的基因組DNA，都能夠得到較高純度。然而所提取的基因組DNA仍然存在污染，銅銹環棱螺和方形環棱螺DNA的OD260/OD280比值大于1.8，說明存在RNA污染，而梨形環棱螺DNA的OD260/OD280比值小于1.8，說明存在蛋白質污染。即便如此，從表中的數據可以看出，所提取的基因組DNA的濃度和得率均較為理想，說明酚-氯仿抽提法適合不同種環棱螺基因組DNA的提取。

2.3 實驗結果分析

實驗結果顯示，酚-氯仿抽提法可以有效的進行南四湖不同種環棱螺基因組DNA的提取，并可以為許多后備實驗做準備，如PCR，基因組文庫的構建，基因組測序等。

實驗過程中，由于很多因素的影響，如外界污染源的污染，加入有機溶劑酚-氯仿-異戊醇或氯仿-異戊醇顛倒混勻時過于劇烈導致基因組DNA斷裂，水浴時間不充分使得細胞未能充分破裂釋放DNA，從而導致一直未能夠取得較滿意的結果。異丙醇沉淀的步驟時，絮狀沉淀有很多，但是不全部是DNA，還含有不少未除凈的蛋白質（留在點樣孔中）以及RNA（跑在前面），所以電泳的條帶沒有理想中的效果，會出現蛋白質雜質以及降解的DNA、RNA。然而目的條帶基因組DNA仍然能夠跑出來，可以繼續基因組文庫的構建以及基因的克隆、測序等后續操作。

3、討論

3.1 DNA電泳沒出現條帶的原因

（1）所提取的DNA樣品量太少或者樣品中DNA已經被內源性DNase降解。（2）操作時沒有嚴格按照提DNA的要求做，一般需要帶手套，最好帶上口罩，所有塑料用品需要高壓蒸汽滅菌，實驗的過程要在超凈臺上操作，盡量不讓外源的DNA酶降解DNA。（3）研磨不充分，或者加入分離緩沖液、SDS、蛋白酶K之后，水浴時間不足，細胞未能充分破裂釋放DNA。（4）加入有機溶劑酚-氯仿-異戊醇或氯仿-異戊醇后，顛倒混勻時過于劇烈，從而導致DNA斷裂。（5）DNA未能與蛋白質充分分離，當除去蛋白質時，DNA隨蛋白質一起被除去。（6）加入異丙醇沉淀離心10min后，DNA依然懸浮，未能沉淀到離心管底部，易隨著液體被倒掉。這時，可以用移液槍小心吸出液體，再加入70%的乙醇洗滌，離心后，DNA可以沉淀。（7）在用移液槍吸取上清液時，未用剪過的槍頭，從而在吸取時導致DNA鏈斷裂。

3.2 DNase的來源以及防止DNase的措施

要進行PCR，基因組文庫的構建以及基因組測序就需要得到完整的基因組DNA；而要得到完整的基因組DNA需要最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性DNase對DNA的降解。內源性DNase始終存在于肌肉組織中，最適pH值在7.0附近，活性在pH5～6區域穩定。外源性DNase穩定且廣泛存在，操作者的手、唾液等含有較豐富的DNA酶，實驗用試劑、器具等都含有DNase。DNase的活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端。依據DNase的這一性質，在Tris-HCl緩沖液中加入EDTA，EDTA可以螯合二價陽離子，抑制DNase的活性。

然而不能因為加入了EDTA就放松了防止外界環境中DNase污染的警惕性。需要嚴格控制實驗條件，避免任何可能的污染，是保證實驗成功的關鍵。為此，必須作到以下幾點：

1.實驗室應專門辟出操作區，離心機，移液器，試劑等均應專用。電泳槽、制膠板先用蒸餾水洗滌然后用70％的酒精處理，并且應保持清潔，定期行除菌。

2.操作過程中應戴一次性橡膠手套，并經常更換，以防止手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的DNA酶帶到試管或污染用具。避免在操作中說話聊天。也可以戴口罩以防止引起DNA酶污染。

3.盡量使用一次性的塑料制品，槍頭、EP管等都應該用新的，以防交叉污染。

4．在抽提過程中，若蛋白質含量或其它的雜質還較多，可以增加抽提次數。盡量在低溫下操作，如果條件不容許，在室溫下操作的時間要盡可能的短。

5.DNA電泳的電泳液和膠必須現配現用。

6.所用玻璃器皿、鑷子剪刀等需先置于高壓蒸汽滅菌鍋內進行高壓蒸汽滅菌。3.3 肌肉組織的不同保存方法對實驗的影響

本實驗所用的田螺肌肉組織材料實驗前進行了兩種不同的處理方式。

在第一種處理方式中，將采集的田螺標本浸泡于95%的乙醇中，并于-20℃的冰箱中冷凍保存一年。一年后取出田螺標本，解剖，取肌肉組織進行實驗，難以提出DNA。推測難以取得理想的實驗結果的原因是多方面的，而主要原因可能是經過長時間乙醇的處理，肌肉組織變得堅韌，剪成粉末并加入SDS，蛋白酶K，進行水浴后難以將細胞充分裂解釋放DNA，于是DNA則隨蛋白質一起被除去；另一個原因則可能是經過長時間的保存，肌肉組織中的DNA已經被降解。

第二種處理方式，是將剛采集的新鮮田螺進行活體解剖，取其肌肉組織于-20℃的冰箱中冷凍保存，并在短期內進行實驗。-20℃冷凍保存的原因是防止DNA被DNase降解（最好是在-70℃保存，由于實驗條件限制，采取-20℃冷凍保存）。新鮮的田螺肌肉組織較軟，進行充分研磨后加入SDS，蛋白酶K進行水浴，短時間內就可以使得細胞充分裂解，為后續的實驗步驟做了充分的準備。從而使取得理想的實驗結果成為可能。3.4 實驗材料的不同研磨方法對實驗的影響

本實驗，采取了三種方式對環棱螺肌肉組織進行研磨，具體的操作與實驗效果如下： 第一種方式，是用鑷子和剪子在研缽中將肌肉組織剪碎，盡量剪成粉末，來保證與SDS蛋白酶K的充分反應。然而，新鮮的肌肉組織較濕潤，難以剪成粉末狀，達到理想效果。從而在除去蛋白質時，由于DNA未充分釋放，使得不少DNA隨蛋白質一起被除去，造成實驗材料的浪費，從而跑出的電泳條帶顏色較淺，甚至無法跑出條帶。

第二種方式是采用玻璃研磨器，將已經剪成小塊的肌肉組織進行充分研磨，并加入無菌水將其研磨成漿，分裝入離心管中后離心1min，研磨好的組織沉淀到管底，將水吸出，加入后續藥品。這個方式可以使組織細胞與SDS，蛋白酶K充分反應，DNA得以充分釋放，從而為跑出理想的條帶做準備。但是這個方法步驟復雜，耗時較長，并且易在研磨過程中受到DNase的污染。

第三種方式是在研缽中將肌肉組織剪碎的基礎上，加入液氮，在液氮冷凍下將實驗材料迅速研磨成粉末，分裝入離心管中，加入后續藥品。采用液氮是實驗中最常用也是最為正規的方式，在保證了研磨充分從而使得組織與藥品充分反應的同時，也加快了研磨速度，有效的避免了DNase的污染。

3.5 檢測基因組DNA提取效果的方法

對于實驗中所提取的基因組DNA的提取質量，一般可采取三種方法進行檢測。除了本實驗中所采用的瓊脂糖凝膠電泳的方法和紫外分光光度法以外，還有PCR擴增法：PCR反應條件為95℃預變性5min后，按照94℃變性30s，48℃退火30s，72℃延伸1min的循環參數進行30個循環，最后72℃延伸10min終止反應。反應體系的組成為：dNTP混合物，10×PCR buffer，正向引物，反向引物（根據所擴增的區域選擇引物），模板DNA，Taq酶，最后用雙蒸水補足20μL。PCR產物在含溴化乙錠的瓊脂糖凝膠中電泳分離，用凝膠成像系統記錄產物條帶。

致謝

從開始寫作至本論文最終定稿，總共花費了我一個月以來所有的業余時間。雖說在繁忙的工作之余要完成這樣一篇論文的確不是一件很輕松的事情，但我內心深處卻滿含深深的感激之情。論文是在導師曲志才教授的悉心指導下完成的。導師淵博的專業知識，嚴謹的治學態度，精益求精的工作作風，誨人不倦的高尚師德，嚴以律己、寬以待人的崇高風范，樸實無華、平易近人的人格魅力對我影響深遠。不僅使我樹立了遠大的學術目標、掌握了基本的研究方法，還使我明白了許多待人接物與為人處世的道理。是曲導師讓我能夠靜靜地坐下來，在知識的海洋里吸取更多的營養，從而能夠為自己進一步地加油充電。本論文從選題到完成，每一步都是在導師的指導下完成的，傾注了導師大量的心血。在此，謹向導師表示崇高的敬意和衷心的感謝！由于本理論水平比較有限，論文中的有些觀點以及對企業示例的歸納和闡述難免有疏漏和不足的地方，歡迎老師和專家們指正。

本論文的順利完成，離不開各位老師、同學、朋友和學校的關心和幫助。在此感謝師姐陳思、師妹焦玉蓮、師弟呂甲強、丁吉順同學等等的指導和幫助；感謝實驗室的所有老師和同志的指導和幫助；感謝曲阜師范大學的支持和幫助。沒有他們的幫助和支持是沒有辦法完成我的學位論文的，同窗之間的友誼永遠長存！參考文獻

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第五篇：2012個人工作總結(王瑞)

2011個人工作總結

尊敬的所領導、各位同事

大家好!來到單位快有一年半了，光陰似箭，在所領導的正確領導下，在各位同事的關心指導和幫助下，本人認真履行職責、勤奮學習、扎實工作，團結同事，圓滿的完成了各項工作任務。回首望，雖沒有轟轟烈烈的戰果，但也算經歷了一段不平凡的考驗和磨礪。從原本我對這里的不了解，慢慢的變成了了解熟悉。在這段時間的相處中，我感覺到了這里的同事都很好相處，而且大家都很是熱情，也善于幫助他人。我來到這里。同事們給我的幫助特別大，每次不懂的、不知道的、不會的，都是他們在幫助我，教我如何去做，如何去解決問題，就是這樣，慢慢在同事的幫助和引領下，我熟悉了這里的環境，熟悉了工作流程。從一開始的彷徨，到現在的自信，經過這一年多的磨練，我獲益匪淺。現將我個人一年來學習情況總結如下：

一、加強理論學習，不斷提高自身的理論修養和業務素質

理論知識的學習是立身之本，在工作繁雜的情況下，只有通過學習、提高認識才能把握關鍵，增強研究問題和解決問題的能力。一年中，我能夠積極參加所內組織的政治、業務學習，認真做好學習筆記，撰寫學習心得體會。通過政治學習，進一步堅定吃苦在前、享受在后，嚴以律己、寬以待人的理想信念。通過業務知識的學習，進一步熟悉了單位各項工作流程和崗位所需的部分業務知識。同時，在各位同事的悉心指導幫助下，學到了書本上學不到的業務知識，學到了做人的道理和做事的規矩，自身素質和業務知識都有了一定的提高。

二、認真履行職責，努力完成各項工作任務

我到所內被安排在檢定二戰學習壓力表的檢定工作，作為一個新人，我對計量檢定工作純屬“門外漢”，可以說是一竅不通，剛來的時候覺得很迷茫，也很惆悵，總怕干不好，影響了全站的正常工作。于是我認真學習和理解檢定規程，虛心向站長，向站內同事請教，不懂就問，不會就學，一點一滴積累檢定技巧和工作經驗，在站長和站內同事的耐心教導幫忙下，我逐漸掌握了壓力表的檢定項目和工作程序，學會了簡單的維修技術，工作也由開始的力不從心轉變為現在的得心應手。壓力表涉及安全防護，屬于精密的計量器具，加上所內十分重視檢測工作的規范，因此我也堅持嚴格按照檢定過程開展檢定工作，嚴格按照所內制度規定實施檢測，工作期間未發生違反計量法規和所內制度規定的現象。壓力表檢定工作可以說是很臟、很累、也很枯燥，有時候工作量也比較大，加上自己比較年輕，有時候心浮氣躁，不能靜下心來認真工作，此時，站內同事總是能及時洞察到我的變化，及時提醒我要正確認識自身工作能力，正確處理苦與樂、得與失、個人利益與集體利益的關系，誠實敬業。我也能及時調整心態，安下心，撲下身子，認真做好自己的本質檢定工作。在西氣東輸和西部管道秋季檢定期間，我和站長、李建國一起穿越茫茫戈壁，深入工作現場開展檢定工作。這對我來說是很大的挑戰，出遠門二十幾天回不了家，一天工作十幾個小時，沒有休息日，吃飯不能按時按點，這些都給我了莫大的考驗，在站長和同事的關系、鼓舞、幫助下，我挺了過來。經受住了考驗，也圓滿地完成了工作任務，經過這次“洗禮”，我感覺自己成熟了很多，同時也深深感受到了同事們的熱心幫助和集體的溫暖，在此，我要感謝大家，謝謝。

一年來。我認真工作，服從領導工作調度，全年共參與完成壓力表檢定1849塊。同時能夠嚴格遵守所內的各項規章制度，做到了不遲到、不早退；尊重領導，團結同事，工作任勞任怨；做到了學他人之長，補己之短。在履行工作過程中，做到了努力向優秀同志和經驗豐富的同志學習，樸素做人，嚴以律己，積極維護單位形象。

三。、存在的不走和今后努力的方向

今年來，盡管自己在工作、學習、生活等方面學到了不少好的東西，尤其在思想方面也取得了一些進步，但在單位、領導的要求還有很大差距。在這一年多里，由于工作經驗的欠缺，我在實踐中暴露出了一些問題，主要表現在理論學習和業務學習不夠勤奮、不夠深入；專業知識掌握不夠全面，目前只掌握了壓力表檢定；工作不夠主動，不夠細心，不能積極大膽的開展工作；工作方式、方法簡單單一；在思想上有時出現惰性傾向，靈活性、創造性不夠。雖然因此遭遇到了挫折，但與此同時也得到了不少鍛煉和磨礪的機會，這些機會對于我來說則是最為珍貴的。有了這些寶貴經驗，和剛開始工作的業務水平比較起來，現在的我工作起來明顯感覺到輕松了許多，工作效率自然也提高了。所謂的厚積薄發就是每天都要盡可能的累積一點進步，時間久了這也將是一筆極大的財富。在以后的工作中，我要認真加以改進，通過虛心學習，不斷改進工作方法，提高工作效率。

1、進一步加強政治理論和業務學習，不斷提高自身的理論修養和業務素質。積極克服自我滿足、畏堅怕難等惰性問題，大膽開展工作，勇于實踐，不斷積累，力爭在其他專業上多學多練，在深鉆細研，融會貫通上下功夫，虛心學習，努力掌握更多的專業檢定技術，為本所的發展貢獻更多的力量。

2、愛崗敬業，認真做好各項工作。積極克服畏難情緒，自我加壓、任勞任怨、不計得失、勤奮工作，確保各項工作領導滿意、同事滿意、服務對象滿意。

3、嚴格遵守紀律。在工作過程中嚴格遵守所內制定的各項規章制度，真心和同事相處，扎實認真做好各位領導和同事們交辦的各項工作任務。

以上總結不妥之處，請各位領導和同事批評指正，謝謝大家!

總結人 2012年11月21日