第一篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作

一、驗(yàn)室的常規(guī)儀器、設(shè)備(一)溫度控制系統(tǒng)：

1.冰箱: 根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級(jí)別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。

4℃適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等。

-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。

-80℃適合某些長(zhǎng)期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。

0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗(yàn)。2．液氮罐：有些實(shí)驗(yàn)材料、某些器官組織、細(xì)胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長(zhǎng)期保存在超低溫環(huán)境下，就需要一個(gè)液氮罐（-196℃）具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好地保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)。

3．培養(yǎng)箱：37℃恒溫箱用于細(xì)菌的固體培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細(xì)胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用來(lái)維持培養(yǎng)液的酸度（pH值）。

37℃恒溫空氣搖床可進(jìn)行液體細(xì)菌的培養(yǎng)。4.水浴鍋：用于保溫。

25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗(yàn)，各種生物化學(xué)酶反應(yīng)等試驗(yàn)的保溫。

25-100℃水浴箱用于常規(guī)試驗(yàn)。

5.烘箱：主用于烘干實(shí)驗(yàn)器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實(shí)驗(yàn)用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進(jìn)行烘干。

（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多實(shí)驗(yàn)對(duì)水純度的要求越來(lái)越高。1.蒸餾水皿：?jiǎn)握羲ｋy以滿足實(shí)驗(yàn)要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實(shí)驗(yàn)要去離子水。

多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì)，不能完全除去水中溶解的氣體雜質(zhì)（Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ)）。

2.離子交換器：去離子水—用離子交換法制取的水，稱去離子水。

去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質(zhì)，其中常含有微量的有機(jī)物（樹(shù)脂等）。

3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測(cè)序、酶反應(yīng)、組織和細(xì)胞培養(yǎng)等。

（三）菌消毒設(shè)備：分子生物學(xué)所用大部分試劑，而且實(shí)驗(yàn)用具都應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌。

1．蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時(shí)消毒。大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時(shí)進(jìn)行消毒

2.紫外線：75%乙醇、0.1%SDS（消毒劑）

一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關(guān)，且產(chǎn)生臭氧污染安全，用于無(wú)菌室，超凈臺(tái)和塑料用具的消毒。

3.濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。4.煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時(shí)采用。

（四）計(jì)量系統(tǒng)：

1.稱量系統(tǒng)：（各種天平）臺(tái)秤、托盤(pán)天平、鈕力擺動(dòng)天平、光電分子天平、精密電子分析天平

2.液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器，粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶

3.pH值測(cè)量：

pH計(jì)：測(cè)定溶液中H+的直接電位的儀器，主要通過(guò)一對(duì)電極，在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動(dòng)勢(shì)用pH值表示出來(lái)。pH試紙：只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計(jì)。而大部分試劑的配制要求嚴(yán)格的pH值，需精確度高（小數(shù)點(diǎn)后兩位）的pH計(jì)。

4.OD值測(cè)量：光密度、分光光度計(jì)是利用物質(zhì)在可見(jiàn)光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來(lái)鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測(cè)量?jī)x表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標(biāo)之一，通過(guò)所產(chǎn)生的單色光而測(cè)定某一溶液對(duì)該單色光的吸收值，利用它可進(jìn)行核酸溶液定量和純度的初步判斷。

（五）離心機(jī)：離心技術(shù)是研究生物的結(jié)構(gòu)和功能中不可缺少的一種物理技術(shù)手段。因?yàn)楦鞣N物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等方面有差異，可利用強(qiáng)大的離心力場(chǎng)，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機(jī)。可供少于0.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術(shù)應(yīng)用廣泛，包括收集和分離細(xì)胞、細(xì)胞器和生物大分子等。據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同，可分為以下幾種類型：

1.普通離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速6000 r/m，最大離心力6000g ①醫(yī)用或臺(tái)式離心機(jī)：是離心機(jī)中最簡(jiǎn)單而廉價(jià)的，最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì)，如紅細(xì)胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細(xì)菌等。

②低速冷凍離心機(jī)：主要用于細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞膜和細(xì)菌的沉淀和收集等。

2.高速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速25000 r/m，最大離心力89000g 有冷凍和常溫兩種，多用于制備和手收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。

3.超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速9000 r/m，最大離心力694000g。4.臺(tái)式超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速12000r/m，最大離心力625000g。

（六）超凈工作臺(tái)：內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備，是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣，經(jīng)過(guò)低、中效的過(guò)濾器后，通過(guò)工作臺(tái)面，使實(shí)驗(yàn)操作區(qū)域成為無(wú)菌的環(huán)境。超凈臺(tái)按氣流方向的不同大致有幾種類型： ①側(cè)流式：凈化后氣流，從左側(cè)或右側(cè)通過(guò)工作臺(tái)面，流向?qū)?cè)，或者從上往下或從下往上流向?qū)?cè)，他們都能形成氣流屏障而保障臺(tái)面無(wú)菌。

缺點(diǎn)：在凈化氣流和外邊氣體交界處，可因氣體的流向而出現(xiàn)負(fù)壓，使少量的未凈化氣體混入，而造成污染。

②外流式：氣流是面向操作人員的方向流動(dòng)，從而保證外面氣體不能混入。

缺點(diǎn)：在進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)操作人員不利，但可采用有機(jī)玻璃把上半部分遮擋起來(lái)，使氣流往下方流出。

（七）電泳系統(tǒng)：電泳技術(shù)是檢測(cè)、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征，甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。核酸和蛋白質(zhì)等都帶有電荷，當(dāng)它們被置于電場(chǎng)中時(shí)，能夠移動(dòng)。

電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置。

① 電泳裝置：電源需經(jīng)穩(wěn)流通過(guò)穩(wěn)壓器，既能提供穩(wěn)定的直流電，又能輸出穩(wěn)定的電壓。可用于三種：

常度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA 中度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓400-1000v 高度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓1000以上的電源裝置。② 電泳槽裝置：分兩種

水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號(hào)水平式電泳槽 垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置。

（八）PCR儀：Polymerase Chain Reaction儀，也稱DNA熱循環(huán)儀，基因擴(kuò)增，它是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)百萬(wàn)倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行的DNA變性，引物復(fù)性，DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)三個(gè)過(guò)程。

（九）凝膠成像分析系統(tǒng): 對(duì)電泳后含溴乙錠（EB）核酸樣品的觀察分析。

（十）干燥設(shè)備：

1.真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用于雜交實(shí)驗(yàn)。

2.電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進(jìn)行脫水干燥的儀器，一般可將凝膠干燥到一些玻璃紙上，干燥后的凝膠易于保存。

3.液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質(zhì)樣品的干燥與結(jié)晶。4.真空泵：許多實(shí)驗(yàn)都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸樣品的干燥，電泳凝膠的干燥等。

（十一）其他

1.微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。

2.制冰機(jī)：用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作所需的低溫環(huán)境，以減少核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解。

3.層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。

真空印記系統(tǒng)，DNA合成/測(cè)序儀：這些都是對(duì)核酸進(jìn)行深入研究的必備儀器。

4.磁力攪拌器：多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器：用于混合儀器。

5.組織勻漿器：超聲組織及細(xì)胞破碎器，用其進(jìn)行樣品的分離提純實(shí)驗(yàn)。

6.通風(fēng)櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備柜，放射性試驗(yàn)還要有有機(jī)玻璃屏蔽。

7.玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機(jī)溶劑的蒸餾。8.Tip頭、Eppendorf管：

微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒后反復(fù)使用。對(duì)一些要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)，如RNA的提取、保存等操作，應(yīng)使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細(xì)胞培養(yǎng)塑料平板等。9.小型設(shè)備、用具：

定時(shí)器、濾膜、保鮮膜、防護(hù)眼鏡鴨嘴鑷、常規(guī)的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號(hào)筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）

二、本期實(shí)驗(yàn)所用主要儀器、設(shè)備的功能及操作 1.酚的重蒸餾裝置：空氣冷凝式玻璃蒸餾器。

一般酚是無(wú)色透明的結(jié)晶，如呈粉色或黃色，表明其中含有酚的氧化產(chǎn)物，如醌、二酸等，變色的酚不能用于實(shí)驗(yàn)，因其中的酚氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵，并引起DNA鏈的交聯(lián)。使用前必須在160℃-180℃重蒸餾以去除能引起RNA和DNA斷裂和交聯(lián)的污染雜質(zhì)，從而得到純凈的酚。

2.磁力攪拌器：81-2型恒溫磁力攪拌器

將導(dǎo)電溫度表用導(dǎo)線與二芯插頭連接，插入后面的溫度表孔內(nèi)，當(dāng)溫度上升到預(yù)先調(diào)整好的度數(shù)時(shí)即自動(dòng)停止加熱（控溫?cái)嚢瑁Ｖ饕糜谖镔|(zhì)的快速攪拌、溶解和混勻。如配制試劑，制備酚的水飽和液等。4 3.蒸餾水器：1810B自動(dòng)雙重純水蒸餾器，石英管加熱式，本器的一次及二次蒸餾均有保護(hù)裝置，使用安全可靠，熱繼電器當(dāng)冷卻水突然中斷或缺水的情況下，即自動(dòng)切斷電源。干簧繼電器控制二次蒸餾瓶?jī)?nèi)的水位，其高度應(yīng)以在水位降低時(shí)能自動(dòng)切斷電源為準(zhǔn)，從而達(dá)到自動(dòng)控制水位的目的。

該儀器主要用于制備雙蒸水和三蒸水。

4.離心機(jī)：TGL-16G臺(tái)式高速離心機(jī)，最大轉(zhuǎn)速20000rpm，主要用于核酸提取時(shí)蛋白質(zhì)的沉淀和有機(jī)相與水相的分層，PCR檢測(cè)的瞬時(shí)離心。

5.微量取液器：主要用于精確量取微量液體體積和核酸水相的轉(zhuǎn)移。

6.勻漿器：5ml、10ml玻璃勻漿器。主用于組織細(xì)胞的破碎。7.凝膠成像分析系統(tǒng) 主用于核酸樣品瓊脂糖凝膠和PCR電泳結(jié)果的紫外觀察和照像。8.PCR儀：PTC-200基因擴(kuò)增儀 體外擴(kuò)增核酸的儀器

9.蒸汽消毒鍋：用于實(shí)驗(yàn)用試劑、器皿、用具等的滅菌清毒 有電加熱式、電爐加熱式兩種。

10.超凈臺(tái)：JJT-1300型潔凈工作臺(tái)，側(cè)流式。

原理：吸進(jìn)氣經(jīng)過(guò)初、中級(jí)過(guò)濾皿（無(wú)紡布濾過(guò)）后，再通過(guò)風(fēng)機(jī)經(jīng)高級(jí)過(guò)濾器（超細(xì)玻璃纖維濾紙制成）而形成潔凈空氣。主要是在局部空氣造成潔凈空氣環(huán)境，以使工作區(qū)域中的懸浮粒子及微生物控制在最低限度內(nèi)。

本臺(tái)操作壓為垂直層流壓，因此出風(fēng)面與操作位置不應(yīng)放置多余的物品，以免妨礙氣流的正常流動(dòng)，影響潔凈度，臺(tái)面板上的孔作為通風(fēng)孔，使用時(shí)避免有液體或其他物品漏入空中，以免影響內(nèi)部構(gòu)件。風(fēng)速可調(diào)。

使用：75%乙醇消毒2-3次，擺放好實(shí)驗(yàn)用品。插上電源，紫外消毒30分鐘，啟動(dòng)風(fēng)機(jī)5m后關(guān)燈，關(guān)燈后10分鐘打開(kāi)照明燈，即可使用。

11.電泳系統(tǒng)：

①電泳儀：HV-3000型高度三恒多用電泳儀（恒壓、恒流、恒功率）

②電泳槽：水平式兩種。

12．微波爐：主要用于瓊脂糖的快速溶解。

第二篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備

(一)溫度控制系統(tǒng)：

1.冰箱: 根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級(jí)別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等。

-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。-80℃適合某些長(zhǎng)期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗(yàn)。

2．液氮罐：有些實(shí)驗(yàn)材料、某些器官組織、細(xì)胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長(zhǎng)期保存在超低溫環(huán)境下，就需要一個(gè)液氮罐（-196℃）具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好地保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)。

3．培養(yǎng)箱：37℃恒溫箱用于細(xì)菌的固體培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。

CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細(xì)胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用來(lái)維持培養(yǎng)液的酸度（pH值）。

37℃恒溫空氣搖床可進(jìn)行液體細(xì)菌的培養(yǎng)。4.水浴鍋：用于保溫。

25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗(yàn)，各種生物化學(xué)酶反應(yīng)等試驗(yàn)的保溫。25-100℃水浴箱用于常規(guī)試驗(yàn)。5.烘箱：主用于烘干實(shí)驗(yàn)器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實(shí)驗(yàn)用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進(jìn)行烘干。

（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多實(shí)驗(yàn)對(duì)水純度的要求越來(lái)越高。1.蒸餾水皿：?jiǎn)握羲ｋy以滿足實(shí)驗(yàn)要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實(shí)驗(yàn)要去離子水。多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì)，不能完全除去水中溶解的氣體雜質(zhì)（Mn2、Cu2、Zn2、Fe3、Mo(Ⅵ)）。

2.離子交換器：去離子水—用離子交換法制取的水，稱去離子水。

去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質(zhì)，其中常含有微量的有機(jī)物（樹(shù)脂等）。3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測(cè)序、酶反應(yīng)、組織和細(xì)胞培養(yǎng)等。

（三）菌消毒設(shè)備：分子生物學(xué)所用大部分試劑，而且實(shí)驗(yàn)用具都應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌。1．蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時(shí)消毒。大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時(shí)進(jìn)行消毒

2.紫外線：75%乙醇、0.1%SDS（消毒劑）

一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。

紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關(guān)，且產(chǎn)生臭氧污染安全，用于無(wú)菌室，超凈臺(tái)和塑料用具的消毒。

3.濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。4.煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時(shí)采用。

（四）計(jì)量系統(tǒng)： 1.稱量系統(tǒng)：（各種天平）臺(tái)秤、托盤(pán)天平、鈕力擺動(dòng)天平、光電分子天平、精密電子分析天平

2.液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器 粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶 3.pH值測(cè)量：

pH計(jì)：測(cè)定溶液中H 的直接電位的儀器，主要通過(guò)一對(duì)電極，在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動(dòng)勢(shì)用pH值表示出來(lái)。

pH試紙：只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計(jì)。而大部分試劑的配制要求嚴(yán)格的pH值，需精確度高（小數(shù)點(diǎn)后兩位）的pH計(jì)。4.OD值測(cè)量：光密度、分光光度計(jì)是利用物質(zhì)在可見(jiàn)光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來(lái)鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測(cè)量?jī)x表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標(biāo)之一，通過(guò)所產(chǎn)生的單色光而測(cè)定某一溶液對(duì)該單色光的吸收值，利用它可進(jìn)行核酸溶液定量和純度的初步判斷。

（五）離心機(jī)：離心技術(shù)是研究生物的結(jié)構(gòu)和功能中不可缺少的一種物理技術(shù)手段。因?yàn)楦鞣N物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等方面有差異，可利用強(qiáng)大的離心力場(chǎng)，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機(jī)。可供少于0.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術(shù)應(yīng)用廣泛，包括收集和分離細(xì)胞、細(xì)胞器和生物大分子等。據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同，可分為以下幾種類型：

1.普通離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速6000 r/m，最大離心力6000g ①醫(yī)用或臺(tái)式離心機(jī)：是離心機(jī)中最簡(jiǎn)單而廉價(jià)的，最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì)，如紅細(xì)胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細(xì)菌等。

②低速冷凍離心機(jī)：主要用于細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞膜和細(xì)菌的沉淀和收集等。2 2.高速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速25000 r/m，最大離心力89000g 有冷凍和常溫兩種，多用于制備和手收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。

3.超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速9000 r/m，最大離心力694000g。

4.臺(tái)式超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速12000r/m，最大離心力625000g。

（六）超凈工作臺(tái)：內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備，是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣，經(jīng)過(guò)低、中效的過(guò)濾器后，通過(guò)工作臺(tái)面，使實(shí)驗(yàn)操作區(qū)域成為無(wú)菌的環(huán)境。超凈臺(tái)按氣流方向的不同大致有幾種類型： ①側(cè)流式：凈化后氣流，從左側(cè)或右側(cè)通過(guò)工作臺(tái)面，流向?qū)?cè)，或者從上往下或從下往上流向?qū)?cè)，他們都能形成氣流屏障而保障臺(tái)面無(wú)菌。

缺點(diǎn)：在凈化氣流和外邊氣體交界處，可因氣體的流向而出現(xiàn)負(fù)壓，使少量的未凈化氣體混入，而造成污染。

②外流式：氣流是面向操作人員的方向流動(dòng)，從而保證外面氣體不能混入。

缺點(diǎn)：在進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)操作人員不利，但可采用有機(jī)玻璃把上半部分遮擋起來(lái)，使氣流往下方流出。

（七）電泳系統(tǒng)：電泳技術(shù)是檢測(cè)、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征，甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。核酸和蛋白質(zhì)等都帶有電荷，當(dāng)它們被置于電場(chǎng)中時(shí)，能夠移動(dòng)。

電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置。

① 電泳裝置：電源需經(jīng)穩(wěn)流通過(guò)穩(wěn)壓器，既能提供穩(wěn)定的直流電，又能輸出穩(wěn)定的電壓。可用于三種： 常度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA 中度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓400-1000v 高度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓1000以上的電源裝置。② 電泳槽裝置：分兩種

水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號(hào)水平式電泳槽 垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置。

（八）PCR儀：Polymerase Chain

Reaction儀，也稱DNA熱循環(huán)儀，基因擴(kuò)增，它是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)百萬(wàn)倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行的DNA變性，引物復(fù)性，DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)三個(gè)過(guò)程。

（九）凝膠成像分析系統(tǒng): 對(duì)電泳后含溴乙錠（EB）核酸樣品的觀察分析。

（十）干燥設(shè)備： 3 1.真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用于雜交實(shí)驗(yàn)。

2.電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進(jìn)行脫水干燥的儀器，一般可將凝膠干燥到一些玻璃紙上，干燥后的凝膠易于保存。

3.液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質(zhì)樣品的干燥與結(jié)晶。

4.真空泵：許多實(shí)驗(yàn)都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸樣品的干燥，電泳凝膠的干燥等。

（十一）其他

1.微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。

2.制冰機(jī)：用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作所需的低溫環(huán)境，以減少核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解。3.層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。

真空印記系統(tǒng)，DNA合成/測(cè)序儀：這些都是對(duì)核酸進(jìn)行深入研究的必備儀器。4.磁力攪拌器：多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器：用于混合儀器。5.組織勻漿器：超聲組織及細(xì)胞破碎器，用其進(jìn)行樣品的分離提純實(shí)驗(yàn)。

6.通風(fēng)櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備柜，放射性試驗(yàn)還要有有機(jī)玻璃屏蔽。7.玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機(jī)溶劑的蒸餾。8.Tip頭、Eppendorf管： 微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒后反復(fù)使用。對(duì)一些要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)，如RNA的提取、保存等操作，應(yīng)使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細(xì)胞培養(yǎng)塑料平板等。9.小型設(shè)備、用具：

定時(shí)器、濾膜、保鮮膜、防護(hù)眼鏡鴨嘴鑷、常規(guī)的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號(hào)筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）

第三篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)介(精)

實(shí)驗(yàn)一 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室主要儀器，設(shè)備的簡(jiǎn)介及使用方法 微量移液器

微量移液器是連續(xù)可調(diào)的、計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。

微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)調(diào)節(jié)讀數(shù)。移液器常見(jiàn)的四種規(guī)格分別是：

0.5～10μl(讀數(shù)窗顯示0.5～10.0,每轉(zhuǎn)1檔為0.1μl);10～100μl(讀數(shù)窗顯示10.0～100, 每轉(zhuǎn)1檔為1μl);20～200μl(讀數(shù)窗顯示20～200, 每轉(zhuǎn)1檔1μl);100～1000μl(讀數(shù)窗顯示100～1000, 每轉(zhuǎn)1檔為5μl).量液的操作步驟：

1． 將微量移液器裝上吸頭（不同規(guī)格的移液器用不同的吸頭）2． 將微量移液器按鈕輕輕壓至第一停點(diǎn)； 3． 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液樣面下幾毫米，千萬(wàn)不要將吸嘴直接插到液體底部； 4． 緩慢、平穩(wěn)地松開(kāi)控制按鈕，吸上樣液。否則液體進(jìn)入吸嘴太快，導(dǎo)致液體倒吸入移液器內(nèi)部，或吸入體積減少； 5． 等一秒鐘后將吸嘴提離液面

6．平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點(diǎn)，再把按鈕壓至第二停點(diǎn)以排出剩余液體； 7． 提起微量移液器，然后按吸嘴彈射器除去吸嘴。

量液操作注意問(wèn)題：

1． 未裝吸嘴的微量移液器絕對(duì)不可用來(lái)吸取任何液體。

2． 一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬(wàn)不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會(huì)造成損壞。

3． 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4． 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。

5.移液器使用完后，將刻度調(diào)到最大刻度，收藏。低溫臺(tái)式高速離心機(jī) 離心機(jī)的分類

低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn)

高速：每分鐘1 ~ 3萬(wàn)轉(zhuǎn)

超速：每分鐘3萬(wàn)轉(zhuǎn)以上

離心機(jī)的功能：

分離，純化 低速：細(xì)胞等大分子

高速：DNA，蛋白等

超速: 病毒，蛋白等，根據(jù)用途又可分為分析超速離心 機(jī)和制備超速離心機(jī)。

低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中必不可少的手段 基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中都離不開(kāi)低溫離心技術(shù)

本實(shí)驗(yàn)室所用離心機(jī)為臺(tái)式高速離心機(jī)（IBM），配有角式轉(zhuǎn)頭：24×1.5ml；極限轉(zhuǎn)速20000rpm

臺(tái)式高速離心機(jī)使用步驟

1、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺(tái)上，目測(cè)使之平衡，用手輕搖一下離心機(jī)，檢查離心機(jī)是否放置平衡。

2、打開(kāi)門蓋，將離心管放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，離心管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入，且要事先平衡，完畢用手輕輕旋轉(zhuǎn)一下轉(zhuǎn)子體，使離心管架運(yùn)轉(zhuǎn)靈活。

3、關(guān)上門蓋，注意一定要使門蓋鎖緊，完畢用手檢查門蓋是否關(guān)緊。

4、插上電源插座，按下電源開(kāi)關(guān)（電源開(kāi)關(guān)在離心機(jī)背面，電源座上方）。

5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、時(shí)間：

在停止?fàn)顟B(tài)下時(shí)，用戶可以設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、時(shí)間，此時(shí)離心機(jī)處于設(shè)置狀態(tài)，停止燈亮、運(yùn)行燈閃爍；按下啟動(dòng)離心開(kāi)始（常用，最高轉(zhuǎn)速為13000r/min，時(shí)間最長(zhǎng)為20分鐘）；

注意：對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)子一定要設(shè)置在相應(yīng)的轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，不可超速使用，否則對(duì)試管或轉(zhuǎn)子有損壞。

6、離心機(jī)時(shí)間倒計(jì)時(shí)到“0”時(shí)，離心機(jī)將自動(dòng)停止，當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，打開(kāi)門蓋取出離心管，關(guān)斷電源開(kāi)關(guān)。注意事項(xiàng)：

1、離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)，不要打開(kāi)門蓋。

2、安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。

3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過(guò)大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入。

4、若運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。

5、離心機(jī)徹底停止后，才可開(kāi)蓋，取樣 恒溫氣浴搖床 使用及性能：

搖床（振蕩器）為實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備。廣泛用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體搖勻，微生物、細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)。

SHK-99-Ⅱ型臺(tái)式空氣恒溫?fù)u床，采用微電腦控制系統(tǒng)，溫度范圍：室溫＋5℃～60℃，精度±0.5℃；時(shí)間范圍：1分鐘～99小時(shí)59分鐘；轉(zhuǎn)速范圍：60RPM～250RPM 操作程序：

1）樣品瓶牢固放入彈簧夾中

2）接通電源開(kāi)關(guān)，儀器進(jìn)入準(zhǔn)備狀態(tài)

3）參數(shù)設(shè)定，（設(shè)定溫度、時(shí)間、轉(zhuǎn)速等參數(shù)）

4）按啟動(dòng)鍵儀器開(kāi)始工作，按暫停鍵可暫停托盤(pán)的旋轉(zhuǎn)；

5）按下控制面板的電源鍵兩秒，顯示屏顯示消失，關(guān)閉電源總開(kāi)關(guān) 超凈工作臺(tái) 使用及性能：

超凈工作臺(tái)為分子生物學(xué)無(wú)菌操作提供可能，分為垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)兩種。

超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，功率145～260W左右，將空氣通過(guò)由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級(jí)濾清器”后吹送出來(lái)，形成連續(xù)不斷的無(wú)塵無(wú)菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，它除去了大于0.3μm的塵埃、真菌和細(xì)菌孢子等等。超凈空氣的流速為24～30m/min，這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無(wú)菌條件下操作，保持無(wú)菌材料在轉(zhuǎn)移接種過(guò)程中不受污染。

操作程序：

1）使用工作臺(tái)時(shí)，先經(jīng)過(guò)清潔液浸泡的紗布擦拭臺(tái)面，然后用消毒劑擦拭消毒。

2）接通電源，提前30分鐘打開(kāi)紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺(tái)表面積累的微生物，15分鐘后，關(guān)閉紫外燈，開(kāi)啟送風(fēng)機(jī)。

3）工作臺(tái)面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。

4）操作結(jié)束后，清理工作臺(tái)面，收集各廢棄物，關(guān)閉風(fēng)機(jī)及照明開(kāi)關(guān)，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。

5）最后開(kāi)啟工作臺(tái)紫外燈，照射消毒30分鐘后，關(guān)閉紫外燈，切斷電源。

注意事項(xiàng)：

操作時(shí)一定注意關(guān)掉紫外，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害 滅菌鍋

使用及性能：

細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌；應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器械，試劑等進(jìn)行高壓消毒。對(duì)于經(jīng)過(guò)導(dǎo)入DNA重組分子的菌株，操作后必須進(jìn)行嚴(yán)格的高壓消毒滅活處理 ；大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基等可以使用大型消毒器進(jìn)行消毒。一些不能經(jīng)受高壓、高溫消毒的試劑可用濾器濾膜除菌，器皿可用紫外線照射、75%乙醇或0.1%的十二烷基硫酸鈉（SDS）浸泡消毒。所有的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)菌培養(yǎng)的操作，都應(yīng)在紫外線消毒后的超凈工作臺(tái)中進(jìn)行

操作程序：

1）開(kāi)蓋：轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，使鍋蓋離開(kāi)密封圈，添加蒸餾水剛沒(méi)至板上

2）通電：將控制面板上電源開(kāi)關(guān)按至ON處，若水位低（LOW）紅燈亮

3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過(guò)200mm×100mm×100mm為宜，各包裝之間留有間隙，堆放在金屬框內(nèi)，這樣有利于蒸汽的穿透，提高滅菌效果，滅菌時(shí)間： 121℃，20min，；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，且不可裝滿，2/3即可，121℃，18-20min 3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，使鍋蓋下壓，充分壓緊

4）設(shè)定時(shí)間和溫度，開(kāi)始滅菌

5）滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣 注意事項(xiàng)：

如是手動(dòng)的滅菌鍋，在滅菌過(guò)程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會(huì)影響滅菌效果，達(dá)不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開(kāi)滅菌鍋鍋蓋；

由于高壓蒸汽滅菌時(shí)，要使用溫度高達(dá)120℃、兩個(gè)大氣壓的過(guò)熱蒸汽，操作時(shí)，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。

PCR儀

PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬(wàn)倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行DNA變性、引物復(fù)性、DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個(gè)過(guò)程

PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等等 操作步驟

1、開(kāi)機(jī)：打開(kāi)開(kāi)關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后，顯示RUN-ENTER菜單

準(zhǔn)備執(zhí)行程序。

2、放入樣品管，關(guān)緊蓋子。

3、如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲(chǔ)存的程序，按《Proceed》，則屏幕顯示

按《Proceed》選擇ENABLE，則開(kāi)始執(zhí)行程序。

4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》，1）命名新的程序，最多8個(gè)字母，輸入后按《Proceed》確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字)。

2）輸入程序步驟：名字輸入后，確認(rèn)，然后輸入相關(guān)程序

5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開(kāi)始運(yùn)行。

6、其它：用《pause》可以暫停一個(gè)運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)程序。

用《stop》或《Cancel》可停止運(yùn)行的程序。

如何設(shè)置一個(gè)PCR程序：

一般分為8步：

1、預(yù)變性：可用94～95℃，2～10min,一般用 5min。

2、變性：一般用95℃，30s~2min,一般 45s~1min。

3、退火：溫度自定，30s~2min。

4、延伸：72℃，對(duì)于〈1kb=1min,每增加 1kb加1min。

5、循環(huán)數(shù)：一般25～35個(gè)循環(huán)(2,3,4步循環(huán)）。

6、最終延伸：72℃，5～15min。

7、保存：4℃，時(shí)間設(shè)為0。

8、END。

電泳儀

電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳

應(yīng)用電泳法可以對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組份分析或單個(gè)組份提取制備。

實(shí)驗(yàn)室所用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）操作程序：

1． 首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。2．按電源開(kāi)關(guān)，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀…”等字樣后，同時(shí)系統(tǒng)初始化，蜂鳴4聲，設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。

3．確認(rèn)各參數(shù)無(wú)誤后，按“啟動(dòng)”鍵，啟動(dòng)電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start!并蜂鳴4聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，注意安全。之后逐漸將輸出電壓加至設(shè)置值。同時(shí)在狀態(tài)欄中顯示“Run”，并有兩個(gè)不斷閃爍的高壓符號(hào)，表示端口已有電壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實(shí)際的工作時(shí)間（精確到秒）

4．電泳結(jié)束，儀器顯示：“END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。此時(shí)按任一鍵可止鳴 注意事項(xiàng)

1． 電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。

2． 儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。

3． 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時(shí)所通過(guò)的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。4.使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事故。

作業(yè)

列出分子生物學(xué)常用儀器的名稱，用途及操作時(shí)的注意事項(xiàng)。一，微量移液器

微量移液器是連續(xù)可調(diào)的、計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。量液操作注意問(wèn)題

1． 未裝吸嘴的微量移液器絕對(duì)不可用來(lái)吸取任何液體。

2． 一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬(wàn)不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會(huì)造成損壞。

3． 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4． 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。

5.移液器使用完后，將刻度調(diào)到最大刻度，收藏。二，離心機(jī)的功能：

分離，純化 注意事項(xiàng)：

1、離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)，不要打開(kāi)門蓋。

2、安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。

3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過(guò)大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入。

4、若運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。

5、離心機(jī)徹底停止后，才可開(kāi)蓋，取樣 三，恒溫氣浴搖床 使用及性能：

搖床（振蕩器）為實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備。廣泛用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體搖勻，微生物、細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)。四超凈工作臺(tái) 使用及性能：

超凈工作臺(tái)為分子生物學(xué)無(wú)菌操作提供可能，分為垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)兩種。注意事項(xiàng)：

操作時(shí)一定注意關(guān)掉紫外，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害 五．滅菌鍋 使用及性能：

細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌；應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器械，試劑等進(jìn)行高壓消毒 注意事項(xiàng)：

如是手動(dòng)的滅菌鍋，在滅菌過(guò)程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會(huì)影響滅菌效果，達(dá)不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開(kāi)滅菌鍋鍋蓋；

由于高壓蒸汽滅菌時(shí)，要使用溫度高達(dá)120℃、兩個(gè)大氣壓的過(guò)熱蒸汽，操作時(shí)，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。六．PCR儀

PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬(wàn)倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行DNA變性、引物復(fù)性、DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個(gè)過(guò)程

PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等等 七．電泳儀

電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳

注意事項(xiàng)

1． 電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。

2． 儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。

3． 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時(shí)所通過(guò)的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。

4.使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事故。

實(shí)驗(yàn)二

瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測(cè)

帶電荷的物質(zhì)在電場(chǎng)中的趨向運(yùn)動(dòng)稱為電泳。電泳的種類多，應(yīng)用非常廣泛，它已成為分子生物學(xué)技術(shù)中分離生物大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的操作。實(shí)驗(yàn)原理

瓊脂糖是一種天然聚合長(zhǎng)鏈狀分子，沸水中溶解，45℃開(kāi)始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。

DNA分子在堿性環(huán)境中帶負(fù)電荷，在外加電場(chǎng)作用下向正極泳動(dòng)。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。不同DNA，其分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時(shí)的泳動(dòng)率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應(yīng)，遷移速度與分子量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系。

溴化乙錠（EB）為扁平狀分子，在紫外照射下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復(fù)合物，其發(fā)射的熒光強(qiáng)度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強(qiáng)度大10倍以上，且熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比。用肉眼觀察，可檢測(cè)到5 ng以上的DNA。1．影響DNA在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素：

1)DNA分子大小

遷移速率U與logN成反比（N為堿基對(duì)數(shù)目）。分子大小相等，電荷基本相等（DNA結(jié)構(gòu)重復(fù)性）。分子越大，遷移越慢。等量的空間結(jié)構(gòu)緊密的電泳快（超螺旋>線性DNA）2)瓊脂糖濃度：不同的凝膠濃度，分辨不同范圍的DNA Agarose： 0.5%： 1-30 kb；

0.7%： 0.8-12 kb

1.2%： 0.4-7 kb；

1.5%： 0.2-3 kb.3)DNA構(gòu)象：一般遷移速率超螺旋環(huán)狀>線狀DNA>單鏈開(kāi)環(huán)。

4)所加電壓：低電壓時(shí)，線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。使分辨效果好，凝膠上所加電壓不應(yīng)超過(guò)5V/cm

5)堿基組成與溫度：一般影響不大4-30 ℃

6)嵌入染料的存在：降低線性DNA遷移率，(不提倡加在電泳液中)7)電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的遷移率，無(wú)離子存在時(shí)，核酸基本不泳動(dòng)，離子強(qiáng)度過(guò)大產(chǎn)熱厲害，熔化凝膠并導(dǎo)致DNA變性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA pH8.0）。

2．溴化乙錠（EB）為致癌劑，操作時(shí)應(yīng)戴手套，盡量減少臺(tái)面污染。

3．電泳指示劑：核酸電泳常用的指示劑有兩種，溴酚藍(lán)（bromophenol blue, Bb）呈藍(lán)紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈藍(lán)色，它攜帶的電荷量比溴酚藍(lán)少，在凝膠中的遷移率比溴酚藍(lán)慢。儀器和試劑 儀器

微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐

試劑

瓊脂糖：1.0%；

電泳緩沖液（50 × TAE 電泳緩沖液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA(pH8.0)20ml，加蒸餾水至100ml）

EB：5 μl / 100 ml TBE 電泳材料：標(biāo)準(zhǔn)分子量核酸（DL2000）操作步驟

（1）制膠（以20 mL為例）

a.稱取0.2 g 瓊脂糖，加入20 ml 的1XTAE緩沖液（pH 8.0），搖勻；

b.微波爐加熱，至瓊脂糖完全溶解（要防止過(guò)熱溢出三角瓶）；

c.將制膠板放入制膠槽中，插入適當(dāng)?shù)氖嶙樱瑢⑷芙獾沫傊牵s50℃）加入2ul EB后，混均勻，倒入其中，直至厚度為4～6 mm（如有氣泡要把氣泡趕出），在室溫下冷卻凝固(約30~ 45 min)；

d.小心垂直向上拔出梳子,以保證點(diǎn)樣孔完好,將膠板置于電泳槽中。（2）點(diǎn)樣

用微量移液器將5 μl含藍(lán)色染液的 DL2000 加入點(diǎn)樣孔下部。（3）電泳

打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至3~5 V/cm(約100 V)，可見(jiàn)到溴酚藍(lán)條帶由負(fù)極向正極移動(dòng)，約30-40分鐘后即可觀察結(jié)果。（4）觀察

將電泳好的膠置于紫外透射檢測(cè)儀上，打開(kāi)紫外燈，可見(jiàn)到橙紅色核酸條帶，根據(jù)條帶粗細(xì)，可粗略估計(jì)該樣品DNA的濃度。如同時(shí)有已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)DNA進(jìn)行電泳，則可通過(guò)線性DNA條帶的相對(duì)位置初步估計(jì)樣品的分子量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果不是很理想，可能的原因是小組間的點(diǎn)樣間隔時(shí)間太長(zhǎng)以至于樣品擴(kuò)散造成結(jié)果的不理想另一個(gè)人原因是點(diǎn)樣沒(méi)有到位造成的，第二種原因的可能性大一點(diǎn)。作業(yè)

做瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)注意哪些問(wèn)題。

答：1，溴化乙錠（EB）為致癌劑，操作時(shí)應(yīng)戴手套，盡量減少臺(tái)面污染 制瓊脂糖凝膠時(shí)在特定的操作區(qū)操作。

2，微波爐加熱使瓊脂完全溶解要防止過(guò)熱溢出三角瓶，要在瓶上加一張紙。

3，制膠時(shí)插入適當(dāng)?shù)氖嶙樱?dāng)瓊脂糖冷卻凝固后，要小心垂直向上拔出梳子，小心樣孔被弄破

4，點(diǎn)樣時(shí)，要把樣品點(diǎn)入點(diǎn)樣孔下部，電泳時(shí)條帶平整明亮。5，要正確使用微量移液器，等器材視點(diǎn)用后的結(jié)果不致出現(xiàn)錯(cuò)誤。

第四篇：實(shí)驗(yàn)一 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)介.

實(shí)驗(yàn)一 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)介

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

熟悉分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器并熟練使用

二、實(shí)驗(yàn)原理

1、恒溫氣浴搖床：用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)，發(fā)酵，雜交，生化反應(yīng)及酶和組織研究等。

2、超凈工作臺(tái)：用于分子生物學(xué)無(wú)菌操作。

3、低溫臺(tái)式高速離心機(jī)：用于分離純化DNA和蛋白質(zhì)等，如基因片段的分離，蛋白酶的沉淀和回收等。

4、微量移液管：是連續(xù)可調(diào)的，計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。有多種規(guī)格：①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。

5、電泳儀：用于確定大分子物質(zhì)的分子量以及鑒定物種親緣關(guān)系的儀器。

6、PCR儀：用于目的基因的擴(kuò)增，是一對(duì)寡糖核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬(wàn)倍的靶序列DNA片段。主要用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等領(lǐng)域。

7、滅菌鍋：用于細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)使用的試劑，器皿及實(shí)驗(yàn)用具的嚴(yán)格滅菌。

三、實(shí)驗(yàn)儀器

恒溫氣浴搖床、超凈工作臺(tái)、低溫臺(tái)式高速離心機(jī)、微量移液管、滅菌鍋、PCR儀、電泳儀。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

（一）、恒溫氣浴要穿的使用：

1、樣品瓶牢固放入彈簧夾中

2、接通電源開(kāi)關(guān)，儀器進(jìn)入準(zhǔn)備狀態(tài)

3、參數(shù)設(shè)定，（設(shè)定溫度、時(shí)間、轉(zhuǎn)速等參數(shù)）

4、按啟動(dòng)鍵儀器開(kāi)始工作，按暫停鍵可暫停托盤(pán)的旋轉(zhuǎn)；

5、按電源鍵，顯示屏顯示消失，關(guān)閉電源總開(kāi)關(guān)

（二）、超凈工作臺(tái)的使用

1、使用工作臺(tái)時(shí)，先經(jīng)過(guò)清潔液浸泡的紗布擦拭臺(tái)面，然后用消毒劑擦拭消毒。

2、接通電源，提前30分鐘打開(kāi)紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺(tái)表面積累的微生物，15分鐘后，關(guān)閉紫外燈，開(kāi)啟送風(fēng)機(jī)。

3、工作臺(tái)面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。

4、操作結(jié)束后，清理工作臺(tái)面，收集各廢棄物，關(guān)閉風(fēng)機(jī)及照明開(kāi)關(guān)，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。

5、最后開(kāi)啟工作臺(tái)紫外燈，照射消毒30分鐘后，關(guān)閉紫外燈，切斷電源。

（三）、低溫臺(tái)式高速離心機(jī)的使用

1、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺(tái)上，目測(cè)使之平衡，用手輕搖一下離心機(jī)，檢查離心機(jī)是否放置平衡。

2、打開(kāi)門蓋，將離心管放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，離心管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入，且要事先平衡，完畢用手輕輕旋轉(zhuǎn)一下轉(zhuǎn)子體，使離心管架運(yùn)轉(zhuǎn)靈活。

3、關(guān)上門蓋，注意一定要使門蓋鎖緊，完畢用手檢查門蓋是否關(guān)緊。

4、插上電源插座，按下電源開(kāi)關(guān)（電源開(kāi)關(guān)在離心機(jī)背面，電源座上方）。

5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、時(shí)間：

在停止?fàn)顟B(tài)下時(shí)，用戶可以設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、時(shí)間，此時(shí)離心機(jī)處于設(shè)置狀態(tài)，停止燈亮、運(yùn)行燈閃爍；按下啟動(dòng)離心開(kāi)始

（常用，最高轉(zhuǎn)速為13000r/min，時(shí)間最長(zhǎng)為20分鐘）；

注意：對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)子一定要設(shè)置在相應(yīng)的轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，不可超速使用，否則對(duì)試管或轉(zhuǎn)子有損壞。

6、離心機(jī)時(shí)間倒計(jì)時(shí)到“0”時(shí)，離心機(jī)將自動(dòng)停止，當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，打開(kāi)門蓋取出離心管，關(guān)斷電源開(kāi)關(guān)。

（四）、微量移液管的使用

1． 將微量移液器裝上吸頭（不同規(guī)格的移液器用不同的吸頭）2． 將微量移液器按鈕輕輕壓至第一停點(diǎn)；

3． 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液樣面下幾毫米，千萬(wàn)不要將吸嘴直接插到液體底部；

4． 緩慢、平穩(wěn)地松開(kāi)控制按鈕，吸上樣液。否則液體進(jìn)入吸嘴太快，導(dǎo)致液體倒吸入移液器內(nèi)部，或吸入體積減少； 5． 等一秒鐘后將吸嘴提離液面

6．平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點(diǎn)，再把按鈕壓至第二停點(diǎn)以排出剩余液體； 7． 提起微量移液器，然后按吸嘴彈射器除去吸嘴。

（五）、PCR的使用

1、開(kāi)機(jī)：打開(kāi)開(kāi)關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”。

2、放入樣品管，關(guān)緊蓋子。

3、如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲(chǔ)存的程序，按《Proceed》，則開(kāi)始執(zhí)行程序。

4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》，1）命名新的程序，最多8個(gè)字母，輸入后按《Proceed》確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字)。2）輸入程序步驟：名字輸入后，確認(rèn)，然后輸入相關(guān)程序

5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開(kāi)始運(yùn)行。

6、其它：用《pause》可以暫停一個(gè)運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)程序。用《stop》或《Cancel》可停止運(yùn)行的程序。

（六）、電泳儀的使用

1． 首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。2．按電源開(kāi)關(guān)，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀…”等字樣后，同時(shí)系統(tǒng)初始化，蜂鳴4聲，設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。3．確認(rèn)各參數(shù)無(wú)誤后，按“啟動(dòng)”鍵，啟動(dòng)電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start!并蜂鳴4聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，注意安全。之后逐漸將輸出電壓加至設(shè)置值。同時(shí)在狀態(tài)欄中顯示“Run”，并有兩個(gè)不斷閃爍的高壓符號(hào)，表示端口已有電壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實(shí)際的工作時(shí)間（精確到秒）

4．電泳結(jié)束，儀器顯示：“END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。此時(shí)按任一鍵可止鳴

（七）、高壓滅菌鍋

1、開(kāi)蓋：轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，使鍋蓋離開(kāi)密封圈，添加蒸餾水剛沒(méi)至板上

2、通電：將控制面板上電源開(kāi)關(guān)按至ON處，若水位低（LOW）紅燈亮

3、堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過(guò)200mm×100mm×100mm為宜，各包裝之間留有間隙，堆放在金屬框內(nèi)，這樣有利 于蒸汽的穿透，提高滅菌效果，滅菌時(shí)間： 121℃，20min，；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，且不可裝滿，2/3即可，121℃，18-20min

4、密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，使鍋蓋下壓，充分壓緊

5、設(shè)定時(shí)間和溫度，開(kāi)始滅菌

6、滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣

五、思考題

1、列出分子生物學(xué)常用儀器的名稱，用途及操作時(shí)的注意事項(xiàng)。

答：①恒溫氣浴搖床：常用于液體搖勻以培養(yǎng)微生物、細(xì)菌和細(xì)胞等。注意要依據(jù)不同的用途設(shè)置不同的參數(shù)。②超凈工作臺(tái)：常用于為微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)提供無(wú)菌操作環(huán)境。注意操作時(shí)關(guān)掉紫外燈，避免給人類帶來(lái)傷害。③低溫臺(tái)式高速離心機(jī)：常用于分離純化蛋白、病毒、細(xì)胞等。使用時(shí)不能隨便移動(dòng)離心機(jī)或打開(kāi)蓋子；離心機(jī)運(yùn)行時(shí)要處于鎖定狀態(tài)；離心管的放置要處于平衡狀態(tài)。④微量移液管：用于計(jì)量和轉(zhuǎn)移微量液體的專用儀器。操作時(shí)注意避免槍頭的污染；調(diào)節(jié)刻度時(shí)不宜超過(guò)最大量程；使用完后將刻度調(diào)到最大收藏。⑤電泳儀：可對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組分分析或單個(gè)組分的提取制備。操作時(shí)不可把導(dǎo)線極性接反；當(dāng)電泳儀進(jìn)入工作狀態(tài)后，避免人體與其各部分的接觸，不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行；若使用時(shí)出現(xiàn)異常，要立刻切斷電源。⑥PCR儀：用于擴(kuò)增DNA片斷。操作時(shí)應(yīng)注意蓋子要蓋緊，按正確步驟進(jìn)行。⑦高壓高溫滅菌鍋：用于殺菌消毒。使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)程操作，避免發(fā)生安全事故。

實(shí)驗(yàn)二 瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測(cè)

一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;

2、學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的操作。二.實(shí)驗(yàn)原理

瓊脂糖是一種天然聚合長(zhǎng)鏈狀分子，沸水中溶解，45℃開(kāi)始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。

DNA分子在堿性環(huán)境中帶負(fù)電荷，在外加電場(chǎng)作用下向正極泳動(dòng)。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。不同DNA，其分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時(shí)的泳動(dòng)率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應(yīng)，遷移速度與分子量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系。溴化乙錠（EB）未扁平狀分子，在紫外照射下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復(fù)合物，其發(fā)射的熒光強(qiáng)度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強(qiáng)度大10倍以上，且熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。

三、儀器和試劑

儀器： 微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐

試劑： 瓊脂糖：1.0%；電泳緩沖液（50 × TAE 電泳緩沖液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA(pH8.0)20ml，加蒸餾水至100ml）EB：5 μl / 100 ml TBE 電泳材料：標(biāo)準(zhǔn)分子量核酸（DL2000）四.操作步驟

（1）制膠（以20 mL為例）

a.稱取0.2 g 瓊脂糖，加入20 ml 的1XTAE緩沖液（pH 8.0），搖勻； b.微波爐加熱，至瓊脂糖完全溶解（要防止過(guò)熱溢出三角瓶）；

c.將制膠板放入制膠槽中，插入適當(dāng)?shù)氖嶙樱瑢⑷芙獾沫傊牵s50℃）加入2ul EB后，混均勻，倒入其中，直至厚度為4～6 mm（如有氣泡要把氣泡趕出），在室溫下冷卻凝固(約30~ 45 min)；

d.小心垂直向上拔出梳子,以保證點(diǎn)樣孔完好,將膠板置于電泳槽中。（2）點(diǎn)樣

用微量移液器將5 μl含藍(lán)色染液的 DL2000 加入點(diǎn)樣孔下部。（3）電泳

打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至3~5 V/cm(約100 V)，可見(jiàn)到溴酚藍(lán)條帶由負(fù)極向正極移動(dòng)，約30-40分鐘后即可觀察結(jié)果。（4）觀察

將電泳好的膠置于紫外透射檢測(cè)儀上，打開(kāi)紫外燈，可見(jiàn)到橙紅色核酸條帶，根據(jù)條帶粗細(xì)，可粗略估計(jì)該樣品DNA的濃度。如同時(shí)有已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)DNA進(jìn)行電泳，則可通過(guò)線性DNA條帶的相對(duì)位置初步估計(jì)樣品的分子量。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

點(diǎn)樣時(shí)效果較好的照片點(diǎn)出的白色熒光線比較亮，條帶粗細(xì)均勻；條帶沒(méi)有出現(xiàn)兩端粗中間細(xì)的情況

六、思考題

1、做瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)注意哪些問(wèn)題。

答：①EB為強(qiáng)致癌劑，使用時(shí)一定要戴手套，避免造成傷害。EB廢液要進(jìn)行正確的處理。②制膠過(guò)程中要注意細(xì)節(jié)，用微波爐加熱時(shí)要分三步，每步只加熱十秒，且要用不戴手套的那只手開(kāi)微波爐，以免污染。③拔梳子時(shí)要垂直向上拔出，以防破壞點(diǎn)樣孔。④點(diǎn)樣時(shí)要小心，既要將樣品點(diǎn)到樣孔里，又不至于將點(diǎn)樣孔戳破。⑤接電源時(shí)不可把正負(fù)極接反。

第五篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室（P2設(shè)計(jì)）

1.功能：進(jìn)行分

組織培養(yǎng)前實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

標(biāo)簽：產(chǎn)經(jīng)/公司實(shí)驗(yàn)室 微生物 潔凈室 設(shè)計(jì)說(shuō)明 通風(fēng)柜 實(shí)驗(yàn)臺(tái) 家俱

組織培養(yǎng)前實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)工作之前，首先應(yīng)對(duì)工作中需要哪些最基本的設(shè)備條件有個(gè)全面的了解，以便因地制宜地利用現(xiàn)有房屋，或新建、改建實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室的大小取決于工作的目的和規(guī)模。以工廠化生產(chǎn)為目的，實(shí)驗(yàn)室規(guī)模太小，則會(huì)限制生產(chǎn)，影響效率。

在設(shè)計(jì)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)按組織培養(yǎng)程序來(lái)沒(méi)計(jì)，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂。植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的。要做到無(wú)菌的條件，需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。

實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則：保證無(wú)菌操作，達(dá)到工作方便，防止污染。

實(shí)驗(yàn)室組成：化學(xué)實(shí)驗(yàn)室、洗滌菌室、無(wú)菌操作室（接種室）、培養(yǎng)室、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室、其他小型儀器設(shè)備。

1)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室（準(zhǔn)備室）：完成所使用的各種藥品的貯備、稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝等。主要設(shè)備：藥品柜、防塵櫥（放置培養(yǎng)容器）、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計(jì)及常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器.2)洗滌、滅菌室：完成各種器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。

主要設(shè)備：水池、操作臺(tái)、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器（如烘箱）等。

3)無(wú)菌操作室（接種室）：主要用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進(jìn)行無(wú)菌操作的技術(shù)程序。

主要設(shè)備：紫外光源、超凈工作臺(tái)、消毒器、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）等。

接種室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒。配置拉動(dòng)門，以減少開(kāi)關(guān)門時(shí)的空氣擾動(dòng)。接種室要求干爽安靜，清潔明亮。在適當(dāng)位置吊裝1～2盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。最好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門窗緊閉，減少與外界空氣對(duì)流。接種室應(yīng)設(shè)有緩沖問(wèn)，面積1m2為宜。進(jìn)入無(wú)菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進(jìn)出時(shí)帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。

4)培養(yǎng)室：培養(yǎng)室是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定。其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。