第一篇：實驗一分子生物學實驗室的安全規范,常規儀器設備及有關操作,常.

實驗一分子生物學實驗室的常規儀器設備及有關操作 【實驗目的】

(1了解實驗室規則與安全;(2了解分子生物學實驗室的常規儀器、設備、耗材;槍頭,離心管的滅菌(3掌握本實驗所用儀器的功能和使用方法,尤其是移液槍的使用。(4學會常用溶液的配置。【實驗原理】

生物技術實驗不可避免地需要與各種有毒化學藥品、廢氣廢液以及病原微生物等打交道,所以安全工作是實驗工作中的重中之重。忽視生物安全可導致實驗室工作人員的感染,有毒物質的泄漏可造成嚴重后果,因此實驗室生物安全問題已越來越受關注,并且已成為全世界共同關注的問題。

溶液的配置和用具的滅菌是實驗的第一步,也是很實驗成功與否很關鍵的一步。

【實驗器具、藥品試劑】

一、實驗器具

1L 藍蓋瓶4個,500mL 藍蓋瓶1個,精細天平,1L量筒2個,500mL量筒2個, 1L燒杯2個,移液槍2套,高壓滅菌鍋, 白色槍頭1袋,黃色槍頭1袋,藍色槍頭1袋,槍頭盒3種各5個,離心管3種規格各1袋,鋁飯盒,PH試紙

二、藥品試劑

Tris,HCl,NaCl,EDTA,NaOH,ddH2O,無水乙醇 【實驗內容】

一、實驗室常見事故分析及若干安全管理對策

二、常規儀器設備的使用

(一溫度控制系統:冰箱,液氮罐,培養箱,水浴鍋,烘箱(二水的凈化裝置:蒸餾水皿,離子交換器,超純水

(三菌消毒設備:蒸汽消毒鍋,紫外線、75%乙醇、0.1%SDS(消毒劑,濾器濾膜, 煮沸消毒

(四計量系統:稱量系統,液體體積的度量,pH值測量,OD值測量,(五離心機:普通離心機,高速離心機,超速離心機,臺式超速離心機(六電泳系統:(七PCR儀:電泳裝置,電泳槽裝置,(八凝膠成像分析系統:(九干燥設備:真空加熱干燥箱,電泳凝膠干燥箱,液氮冷凍干燥,真空泵(十其他:微波爐,制冰機,磁力攪拌器,Tip頭、Eppendorf管,常規的玻璃或塑 料器皿

(十一移液器的使用

三、常用儲液的配置 1.1 L 滅菌雙蒸水 2.1 L 1 M Tris HCl pH 8.0

取121.1 g Tris加入到700 ml H2O中,用HCl調PH值到8.0(大約需要50 ml HCl, 定容到1 L。

高溫高壓滅菌后,室溫保存。

注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。

3.500 mL 0.5 M EDTA(pH 8.0 取98.06g EDTA,加入到350 ml H2O中,用NaOH調節pH值至8.0(約10 g NaOH。

注意:pH值至8.0時,EDTA才能完全溶解。定容至1 L。

適量分成小份后,高溫高壓滅菌。室溫保存。4.1×TE Buffer 10 ml 1 M Tris HCl pH 8.0 2 ml 0.5 M EDTA 定容至1 L。5.1 L 5 M NaCl 取292.2 g NaCl到700 ml H2O溶解(不要一次加入所有的NaCl,這樣很難溶解 定容至1 L。

高溫高壓滅菌后,4℃保存。

6.70% EtOH(乙醇

7.5 ×TBE 配方1L(Tip: 5 ×TBE較10 ×TBE更穩定 54g Tris +27.5g硼酸+20mlEDTA(0.5M,PH8.0 ddH2O定容至1L 8.10%APS:1g 過硫酸銨溶于10ml 的ddH2O。臨用前配制,盛于棕色瓶,存放在4℃冰箱,長時間不用的應棄掉,重新配制。

四、儲液,槍頭,離心管的滅菌 1.儲液的滅菌

試劑1,2,3,4,5在高壓滅菌鍋中滅菌15-20min。冷卻至室溫后放入4度冰箱中保存待用。(注意:滅菌時瓶蓋不要擰太緊

2.槍頭的滅菌: 槍頭裝入槍頭盒中濕熱滅菌。121度,15-20分。

為了避免水蒸氣困擾,可以在槍頭盒外包上報紙,或者滅菌后置于溫箱中干燥。3.離心管: 離心管用報紙包好或放于鋁飯盒中,121度滅菌15-20分鐘,滅菌后置于溫箱中干燥。【思考題】

1、如何處理對環境有污染的試劑?

2、如何正確使用微量移液器?使用中應特別注意哪些事項?

3、如何改變微量移液器的移液量?應自大調到小,還是自小調到大?為什么?

4、哪些試劑需要高溫高壓滅菌?哪些試劑不能采用高溫高壓滅菌?對于不能采用高溫高壓方式滅菌的試劑如何滅菌?滅菌后試劑如何保存?是否需要分裝?

第二篇：分子生物學實驗室的常規儀器設備及有關操作

分子生物學實驗室的常規儀器設備及有關操作

一、驗室的常規儀器、設備(一)溫度控制系統：

1.冰箱: 根據藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。

4℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。

-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質樣品等。

-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。

0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實驗。2．液氮罐：有些實驗材料、某些器官組織、細胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長期保存在超低溫環境下，就需要一個液氮罐（-196℃）具有經濟、省力和較好地保持細胞生物學特性的優點。

3．培養箱：37℃恒溫箱用于細菌的固體培養和細胞培養。CO2培養箱適用于培養各種細胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用來維持培養液的酸度（pH值）。

37℃恒溫空氣搖床可進行液體細菌的培養。4.水浴鍋：用于保溫。

25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗，各種生物化學酶反應等試驗的保溫。

25-100℃水浴箱用于常規試驗。

5.烘箱：主用于烘干實驗器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實驗用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘干。

（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學的飛速發展，許多實驗對水純度的要求越來越高。1.蒸餾水皿：單蒸水常難以滿足實驗要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實驗要去離子水。

多次蒸餾水可除去水中揮發性雜質，不能完全除去水中溶解的氣體雜質（Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ)）。

2.離子交換器：去離子水—用離子交換法制取的水，稱去離子水。

去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質，其中常含有微量的有機物（樹脂等）。

3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測序、酶反應、組織和細胞培養等。

（三）菌消毒設備：分子生物學所用大部分試劑，而且實驗用具都應嚴格消毒滅菌。

1．蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時消毒。大批實驗物品、試劑、培養基可使用大型消毒且定時進行消毒

2.紫外線：75%乙醇、0.1%SDS（消毒劑）

一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關，且產生臭氧污染安全，用于無菌室，超凈臺和塑料用具的消毒。

3.濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。4.煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時采用。

（四）計量系統：

1.稱量系統：（各種天平）臺秤、托盤天平、鈕力擺動天平、光電分子天平、精密電子分析天平

2.液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器，粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶

3.pH值測量：

pH計：測定溶液中H+的直接電位的儀器，主要通過一對電極，在不同的pH溶液中產生不同的電動勢用pH值表示出來。pH試紙：只適用于培養液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計。而大部分試劑的配制要求嚴格的pH值，需精確度高（小數點后兩位）的pH計。

4.OD值測量：光密度、分光光度計是利用物質在可見光和紫外線區域中的吸收光譜來鑒定該物質的性質及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測量儀表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質定量的方便指標之一，通過所產生的單色光而測定某一溶液對該單色光的吸收值，利用它可進行核酸溶液定量和純度的初步判斷。

（五）離心機：離心技術是研究生物的結構和功能中不可缺少的一種物理技術手段。因為各種物質在沉淀系數、浮力、和質量等方面有差異，可利用強大的離心力場，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機。可供少于0.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術應用廣泛，包括收集和分離細胞、細胞器和生物大分子等。據其轉速的不同，可分為以下幾種類型：

1.普通離心機：最大轉速6000 r/m，最大離心力6000g ①醫用或臺式離心機：是離心機中最簡單而廉價的，最常用于收集快速沉降系數的物質，如紅細胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細菌等。

②低速冷凍離心機：主要用于細胞、細胞核、細胞膜和細菌的沉淀和收集等。

2.高速離心機：最大轉速25000 r/m，最大離心力89000g 有冷凍和常溫兩種，多用于制備和手收集微生物、細胞碎片、細胞、大的細胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。

3.超速離心機：最大轉速9000 r/m，最大離心力694000g。4.臺式超速離心機：最大轉速12000r/m，最大離心力625000g。

（六）超凈工作臺：內有紫外燈、照明燈、還應有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設備，是一種提供局部潔凈度的設備。其原理是鼓風機驅動空氣，經過低、中效的過濾器后，通過工作臺面，使實驗操作區域成為無菌的環境。超凈臺按氣流方向的不同大致有幾種類型： ①側流式：凈化后氣流，從左側或右側通過工作臺面，流向對側，或者從上往下或從下往上流向對側，他們都能形成氣流屏障而保障臺面無菌。

缺點：在凈化氣流和外邊氣體交界處，可因氣體的流向而出現負壓，使少量的未凈化氣體混入，而造成污染。

②外流式：氣流是面向操作人員的方向流動，從而保證外面氣體不能混入。

缺點：在進行有害物質實驗時，對操作人員不利，但可采用有機玻璃把上半部分遮擋起來，使氣流往下方流出。

（七）電泳系統：電泳技術是檢測、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征，甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。核酸和蛋白質等都帶有電荷，當它們被置于電場中時，能夠移動。

電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置。

① 電泳裝置：電源需經穩流通過穩壓器，既能提供穩定的直流電，又能輸出穩定的電壓。可用于三種：

常度穩壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA 中度穩壓電泳儀：輸出電壓400-1000v 高度穩壓電泳儀：輸出電壓1000以上的電源裝置。② 電泳槽裝置：分兩種

水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號水平式電泳槽 垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置。

（八）PCR儀：Polymerase Chain Reaction儀，也稱DNA熱循環儀，基因擴增，它是使一對寡核苷酸引物結合到正負DNA鏈上的靶序列兩側，從而酶促合成拷貝數百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環包括在三種不同溫度進行的DNA變性，引物復性，DNA聚合酶催化的延伸反應三個過程。

（九）凝膠成像分析系統: 對電泳后含溴乙錠（EB）核酸樣品的觀察分析。

（十）干燥設備：

1.真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用于雜交實驗。

2.電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進行脫水干燥的儀器，一般可將凝膠干燥到一些玻璃紙上，干燥后的凝膠易于保存。

3.液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質樣品的干燥與結晶。4.真空泵：許多實驗都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸樣品的干燥，電泳凝膠的干燥等。

（十一）其他

1.微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。

2.制冰機：用于制造大多數核酸、蛋白質的實驗操作所需的低溫環境，以減少核酸酶或蛋白質酶的水解。

3.層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。

真空印記系統，DNA合成/測序儀：這些都是對核酸進行深入研究的必備儀器。

4.磁力攪拌器：多角度旋轉混勻器、快速振蕩混合器：用于混合儀器。

5.組織勻漿器：超聲組織及細胞破碎器，用其進行樣品的分離提純實驗。

6.通風櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備柜，放射性試驗還要有有機玻璃屏蔽。

7.玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機溶劑的蒸餾。8.Tip頭、Eppendorf管：

微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒后反復使用。對一些要求嚴格的實驗，如RNA的提取、保存等操作，應使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應備有常用規格的離心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細胞培養塑料平板等。9.小型設備、用具：

定時器、濾膜、保鮮膜、防護眼鏡鴨嘴鑷、常規的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）

二、本期實驗所用主要儀器、設備的功能及操作 1.酚的重蒸餾裝置：空氣冷凝式玻璃蒸餾器。

一般酚是無色透明的結晶，如呈粉色或黃色，表明其中含有酚的氧化產物，如醌、二酸等，變色的酚不能用于實驗，因其中的酚氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵，并引起DNA鏈的交聯。使用前必須在160℃-180℃重蒸餾以去除能引起RNA和DNA斷裂和交聯的污染雜質，從而得到純凈的酚。

2.磁力攪拌器：81-2型恒溫磁力攪拌器

將導電溫度表用導線與二芯插頭連接，插入后面的溫度表孔內，當溫度上升到預先調整好的度數時即自動停止加熱（控溫攪拌）。主要用于物質的快速攪拌、溶解和混勻。如配制試劑，制備酚的水飽和液等。4 3.蒸餾水器：1810B自動雙重純水蒸餾器，石英管加熱式，本器的一次及二次蒸餾均有保護裝置，使用安全可靠，熱繼電器當冷卻水突然中斷或缺水的情況下，即自動切斷電源。干簧繼電器控制二次蒸餾瓶內的水位，其高度應以在水位降低時能自動切斷電源為準，從而達到自動控制水位的目的。

該儀器主要用于制備雙蒸水和三蒸水。

4.離心機：TGL-16G臺式高速離心機，最大轉速20000rpm，主要用于核酸提取時蛋白質的沉淀和有機相與水相的分層，PCR檢測的瞬時離心。

5.微量取液器：主要用于精確量取微量液體體積和核酸水相的轉移。

6.勻漿器：5ml、10ml玻璃勻漿器。主用于組織細胞的破碎。7.凝膠成像分析系統 主用于核酸樣品瓊脂糖凝膠和PCR電泳結果的紫外觀察和照像。8.PCR儀：PTC-200基因擴增儀 體外擴增核酸的儀器

9.蒸汽消毒鍋：用于實驗用試劑、器皿、用具等的滅菌清毒 有電加熱式、電爐加熱式兩種。

10.超凈臺：JJT-1300型潔凈工作臺，側流式。

原理：吸進氣經過初、中級過濾皿（無紡布濾過）后，再通過風機經高級過濾器（超細玻璃纖維濾紙制成）而形成潔凈空氣。主要是在局部空氣造成潔凈空氣環境，以使工作區域中的懸浮粒子及微生物控制在最低限度內。

本臺操作壓為垂直層流壓，因此出風面與操作位置不應放置多余的物品，以免妨礙氣流的正常流動，影響潔凈度，臺面板上的孔作為通風孔，使用時避免有液體或其他物品漏入空中，以免影響內部構件。風速可調。

使用：75%乙醇消毒2-3次，擺放好實驗用品。插上電源，紫外消毒30分鐘，啟動風機5m后關燈，關燈后10分鐘打開照明燈，即可使用。

11.電泳系統：

①電泳儀：HV-3000型高度三恒多用電泳儀（恒壓、恒流、恒功率）

②電泳槽：水平式兩種。

12．微波爐：主要用于瓊脂糖的快速溶解。