第一篇：實驗三 根莖葉顯微觀察與徒手切片

實驗三 根莖葉顯微觀察與徒手切片

一、目的要求

1、學習植物的徒手切片技術

2、了解植物細胞的多樣性，積累植物組織的知識，建立組織與功能協調一致的概念。

二、基本原理

根莖葉是植物的營養器官，都是由各種細胞和組織組成的。通過切片，我們可以在不同的切片中分別看到保護組織、機械組織、營養組織、輸導組織、分生組織等。

徒手切片法是指手拿刀片把植物新鮮材料切成薄片，制成臨時的水裝片用于觀察的植物組織制片技術之一。所作的切片通常不經染色或經簡單染色，也可以通過脫水與染色制成永久制片。徒手切片的優點是簡單、方便，不要復雜的設備，不經化學藥物的處理，基本上保留了植物活體的狀態。其操作要點是：在培養皿中放入清水。用左手大拇指、食指、中指等拿住材料，拇指略低于食指，且拇指要伸直呈反彎狀態，中指等在下部穩定材料。材料切面要高于拇指，但略低于食指，雙面刀片放在食指上，只有給它略加一個向下的力時，刀刃才能接觸到材料。右手用食指和大拇指捏住雙面刀片的一角，留出所有的刀刃部分，使刀刃近手指的一端首選接觸到材料，然后讓刀刃在材料上斜切下去，如果把材料切面看作是一個長方形的活，那么刀刃在材料上拉的是長方形的一條對角線，即從左前方向右后方拉切，注意不是垂直切向材料，一片，一片??，輕松、快速地切，估計有滿意的了，再一起放入盛有清水的培養皿中，挑選最薄的一片，裝片觀察。不要試圖每一片都很薄，也不要追求切片形狀的完整。其次，一定要注意，切片時不論是站著還是坐著，都要挺胸、放松地進行，是整個手臂在用力，也就是你在切片時，是肩關節在動，而不是肘關節，更不是腕關節。另外，切片時水是潤滑劑，你的手指上、材料上、刀片上隨時都應該有水。

三、實驗材料、試劑與儀器設備

生物顯微鏡、載玻片、蓋玻片、雙面刀片、培養皿、滴管、吸水紙、毛筆，根莖葉結構的相關切片、鳶尾Iris tectorum的根、某種合適的雙子葉植物的根、蠶豆Vicia faba的莖、蠶豆的葉、南瓜Cucurbita moschata莖、大葉黃楊 Euonymus japonicus的嫩莖、芹菜Apium graveoiens的葉柄、海桐Pittos-porum tobira或大葉黃楊的葉、小麥Triticum aestivum或其他禾本科小草的葉、蘿卜的肉質直根，清水、I2-KI水溶液、0.1%番紅染液

四、實驗步驟(一)根的顯微結構

1、根尖的內部結構

取玉米或洋蔥根尖縱切永久制片，置于顯微鏡下，由根的最先端逐漸向上觀察根尖的各區，注意各區細胞的特點。

①根冠 在根尖的最先端，由薄壁細胞組成，像一個套在分生區前面的帽子，在根冠的外側，可見到某些正在脫落的細胞。

②分生區 根冠之內，緊接根冠的一段區域。由排列緊密的等徑細胞組成，其細胞壁薄、核大、細胞質濃厚。細胞分裂能力強，常可以見到正在有絲分裂的細胞。

③伸長區 位于分生區的上方，從靠近分生區略微伸長的細胞到接近成熟區的長形細胞，細胞逐漸伸長并液泡化，向成熟區過渡。伸長區的細胞仍具有分裂的能力，邊分裂，邊分化，可以見到正在分裂的細胞，并有了初步的組織分化。在伸長區如何區分原表皮、基本分生組織和原形成層?在制片上常可見到寬大的成串長細胞，想想這些細胞將來分化成根的什么結構? ④成熟區（根毛區）位于伸長區上方，表面密生根毛的區域。在根毛區細胞分裂停止，分化成各種成熟組織時，可見到成熟的環紋、螺紋導管。注意根毛的起源以及結構特點。

2、單子葉植物根的結構

取鳶尾根2-5cm進行徒手橫切(此根有一定的硬度，且較細，橫切面一般低于1mm2，不適于初學切片，可以在芹菜葉柄和蠶豆莖切片之后再切此片)，并制成臨時裝片，不染色或用0.1％番紅染色后在顯微鏡下觀察，由外向內分為表皮、皮層和維管柱三部分： ①表皮 根的最外層細胞，排列整齊，有根毛。

②皮層 外皮層細胞1-2層，細胞小，排列整齊。在較老的根中，外皮層細胞壁增厚，木質化或栓質化。內皮層細胞幼時與一般雙子葉植物結構差不多，有凱氏帶加厚。隨著發育的進行，內皮層細胞出現五面加厚，并栓質化，僅外切向面為薄的，在橫切面上呈馬蹄形。注意內皮層通道細胞的位置。

③維管柱 由中柱鞘、初生木質部和初生韌皮部組成。中柱鞘為緊貼內皮層的一層薄壁細胞。初生木質部和初生韌皮部相間排列，木質部脊數目較多，為多原型。維管柱中央是薄壁細胞組成的髓。

3、雙子葉植物根的結構

⑴取蠶豆或向日葵幼根永久制片，也可以取其幼根的成熟區做徒手切片，置于顯微鏡下，由外向內觀察雙子葉植物根的初生結構。①表皮 幼根的最外層細胞，是徑向扁平、排列整齊的一層細胞，外壁具有角質膜，有些細胞向外突起形成根毛。

②皮層 表皮之內的多層薄壁細胞。緊接表皮之下的是一層排列緊密的薄壁細胞叫外皮層，皮層的最內層細胞稱為內皮層，也是一層排列緊密的細胞。在其徑向壁和上、下壁上常有局部木質或栓質的加厚，彼此聯結成環帶狀，這就是凱氏帶。由于在徑向壁上觀察凱氏帶僅為一個小點，亦稱為凱氏點。想想外皮層的作用是什么?凱氏帶在根中的作用是什么? ③維管柱 幼根的中央部分是維管柱，由中柱鞘、初生木質部和初生韌皮部構成。中柱鞘是中柱的最外層，緊接內皮層，是1～2層排列整齊而緊密的薄壁細胞，在根的進一步發育過程中有著重要作用。初生木質部位于維管柱的中央，呈星芒狀，主要由導管和管胞組成，這些管狀分子的孔徑大小不同，觀察不同孔徑管狀分子的分布規律，找出原生木質部和后生木質部的位置，想想根的初生木質部屬于何種發育方式?觀察木質部脊的數目想想雙子葉植物常為幾原型?初生韌皮部位于初生木質部兩個輻射角之間，由篩管和伴胞構成。在初生木質部和初生韌皮部之間，有1～2層薄壁細胞，想想其來源如何?在蠶豆幼根的中心部分，有一群薄壁細胞，如何解釋這個現象? ⑵取毛茛根橫切永久制片置于顯微鏡下，同樣從外向內觀察，注意其與蠶豆或向日葵根的區別。特別注意內皮層細胞壁的加厚情況，其細胞壁為全面加厚。內皮層中不加厚的細胞是通道細胞，根的物質交換通過內皮層的通道細胞進入維管柱。

⑶形成層的發生 取蠶豆根橫切永久制片，觀察形成層的發生。首先在初生木質部和初生韌皮部之間出現形成層，呈圓弧型（觀察其數目與木質部脊的數目是否一致，想想它們起源于什么細胞?），以后這些圓弧型的形成層向兩側擴展，同時在木質部脊的中柱鞘細胞，也恢復分裂的能力，兩者互相連接形成一個波浪狀的形成層環，其形狀與木質部脊相似。形成層細胞進行切向分裂，在初生木質部和初生韌皮部之間的形成層細胞分裂較多，最終形成層環呈圓形。

⑷根的次生結構 取棉老根橫切永久制片，在顯微鏡下由外向內進行觀察，分別為周皮、次生韌皮部、形成層、次生木質部和初生木質部。(二)莖的顯微結構

1、莖的頂端分生組織

取丁香或大葉黃楊莖尖縱切制片，置于顯微鏡下，從莖尖的最先端往后觀察。頂端分生組織明顯地分成原體與原套兩部分，注意原體和原套的特點，以及識別莖尖的芽原基和葉原基。在原分生組織之下是已開始分化的初生分生組織，原表皮是最外面的一層細胞，原形成層為細胞質濃厚并縱向伸長的細胞，縱切面上分布在器官的兩側。基本分生組織細胞近乎等徑，分布在器官的中央以及原表皮和原形成層之間。

2、莖的初生結構

⑴雙子葉植物莖的初生結構

觀察向日葵幼莖橫切永久制片，由外向內分辨表皮、皮層和維管柱。①表皮 表皮細胞一層，排列緊密，外壁具有角質層。細胞具核，但缺少葉綠體。有些表皮細胞形成表皮毛（有單細胞毛和多細胞毛）。表皮細胞中常可見到兩個較小的細胞和兩個細胞之間的縫隙，這就是保衛細胞和氣孔，氣孔之下是孔下室。②皮層 表皮以內、維管柱以外的細胞。緊接表皮之下是幾層厚角組織，細胞相對較小。其內是數層薄壁細胞，薄壁細胞中散布有小型的分泌腔。③維管柱 維管束在莖的橫切面上排成一環，將皮層和髓分隔開。韌皮部在維管束外方，木質部在內方，兩者之間是束中形成層（無限維管束）。髓在莖的中央，由薄壁組織構成，細胞排列疏松，有貯藏的功能，常可見到含有晶體或單寧的細胞。在維管束之間的薄壁組織是髓射線，連接皮層和髓，想想它的作用是什么?觀察時注意比較莖的初生韌皮部和初生木質部的組成成分與發育方式、束中形成層來源與根有什么異同。

⑵單子葉植物莖的初生結構

取玉米或小麥莖橫切永久制片進行觀察。注意單子葉植物莖與雙子葉植物莖的區別。①表皮 莖的最外層細胞，排列整齊，外壁具有較厚的角質膜。氣孔的兩邊除了兩個較小的保衛細胞外，還有兩個稍大的副衛細胞。②維管束 玉米莖中維管束散生分布。靠近邊緣部分維管束小、數日較多，在莖中部的維管束大，但數目較少。由于維管束的散生分布，因此沒有皮層和髓的界限。仔細觀察一個維管束，其外圍有一圈厚壁細胞組成的維管束鞘，鞘內只有外方的初生韌皮部和內方的初生木質部，兩者間沒有形成層（有限維管束）。在初生韌皮部最外方的原生韌皮部有時被擠毀，失去了輸導的功能，內側的后生韌皮部由排列規則的篩管和伴胞組成。初生木質部由3-4個導管組成，在橫切面上呈V形。V形的底部是原生木質部，由1-3個較小孔徑的導管和薄壁細胞組成。常由于莖的伸長將導管拉破，在V形底部形成一個空腔（氣腔或胞間道）。V形上半部兩側各有一個孔徑較大的導管，是后生木質部，這兩個大導管之間有一些管胞分布。在小麥莖中維管束呈兩輪分布，外輪維管束小，分布在厚壁組織細胞中，與含有葉綠體的同化組織相間排列。內輪維管束大，分布在薄壁細胞中。維管束的結構與玉米相似。③基本組織 表皮和維管束之間的所有細胞稱之為基本組織（因沒有皮層和髓的界限）。玉米中，靠近表皮的數層細胞體積小，排列緊密，細胞壁增厚并木質化，是厚壁組織，稱外皮層。維管束之間的細胞為薄壁細胞，細胞較大，排列疏松，有胞間隙。越靠近中央，細胞的個體越大。小麥中，靠近表皮有數層厚壁細胞，除有維管束分布外，還有與其相間排列的成群同化組織。厚壁細胞之內是較大的薄壁細胞。在小麥莖干的中央形成髓腔。

3、莖的次生結構

⑴雙子葉植物草本莖的次生結構 取向日葵老莖橫切永久制片，觀察莖的次生結構。向日葵莖次生生長的變化主要表現在維管柱。在初生韌皮部的外方，出現成堆的厚壁細胞，為韌皮纖維。束中形成層細胞有3-5層，向外分裂形成韌皮部的各種細胞，向內分裂分化出本質部的細胞。還可觀察到由部分束間形成層活動形成的小型維管束。

⑵雙子葉植物木本莖的次生結構 取椴樹（3-4年生）莖橫切永久制片，由外向內依次觀察雙子葉植物木本莖的次生結構。

①表皮 基本脫落，留下部分殘片。

②周皮 觀察木栓層、木栓形成層和栓內層三部分所組成的周皮，并注意各層細胞特點。注意周皮是否有皮孔形成及皮孔的結構如何?試想木栓形成層的來源。

③皮層 在周皮和維管柱之間所保留的數層厚角組織和薄壁組織。

④韌皮部 主要是次生韌皮部。形狀呈梯形，與喇叭口狀的韌皮射線在圓周方向相間排列。韌皮纖維與韌皮部的其他成員沿半徑方向相間排列。注意識別篩管、伴胞和韌皮薄壁細胞。初生韌皮部僅在最外側留下韌皮纖維（亦稱中柱鞘纖維）。

⑤形成層 理論上為一層細胞，但觀察時可見到3～5層細胞，試想這是為什么? ⑥木質部 主要是次生木質部，在靠近髓的部分有幾束初生木質部。注意年輪和年輪線，并分辨早材和晚材。

⑦髓 位于莖的中心，多為薄壁細胞，雜有少數石細胞。外圍是一圈小型細胞，稱環髓帶。髓細胞除含有淀粉外，還包含有一些異細胞，在這些異細胞中，可見到簇晶、單寧和粘液。

⑧髓射線 內連髓外接皮層的薄壁細胞。在木質部為l～2列細胞，稱之為木射線。在韌皮部細胞變大，并沿切向方向擴展呈喇叭口狀，稱之為韌皮射線。

⑨維管射線 短于髓射線。不能同時連接髓和皮層。與髓射線一樣，在木質部叫木射線，在韌皮部叫韌皮射線。

⑶裸子植物莖的次生結構 裸子植物莖的次生結構與雙子葉植物木本莖的結構相似，所不同的只是細胞的組成類型。它們的次生木質部形成了木材。其結構可通過橫切面、徑向縱切面和切向縱切面3個切面來觀察各種細胞的特點。①橫切面 可觀察木材的年輪、早材和晚材、邊材和心材的特征。在裸子植物（縱向系統主要由管胞組成）的橫切面上見到的是管胞的橫斷面觀，細胞的孔徑比較均勻，細胞的組成比較簡單。木射線展示的是長和寬。

②徑向縱切面 可見到長形的管胞及壁上的具緣紋孔。木射線像一堵磚墻，展示的是長和高。

③切向縱切面 木射線展示的是高和寬，有時在較大的木射線中，可見到橫向的樹脂道。

4、徒手切片觀察不同植物莖的結構

①蠶豆莖橫切，主要可以觀察莖表皮細胞，莖薄壁細胞及其細胞的結構、原生質流動等，莖中的形成層，維管束結構，等。

②南瓜莖橫切或斜切，斜切可以看到螺紋導管。

③大葉黃楊的嫩莖橫切，為雙子葉木本植物莖的徒手切片代表。以上切片均可以不染色或用0.1%番紅染色在顯微鏡下觀察。(三)葉的顯微結構

1葉片的顯微結構

⑴取大葉黃楊或海桐葉作徒手切片，方法是：先將葉片中間葉脈兩側各留下2-3mm后切去，再切去剩下部分的遠葉柄端，使切面呈近似的長方形，然后讓葉正面貼向食指，材料、刀、手指均用清水濕潤后，進行徒手切片，并做成臨時裝片。顯微鏡下觀察，分清上下表皮、葉肉和葉脈三部分。

①表皮 一層排列整齊而又緊密的細胞。橫切面上呈長方形，外壁較厚，其外有角質層。在表皮細胞中有成對、較小的細胞即保衛細胞，兩個保衛細胞之間的縫隙是氣孔。在表皮上還可以見到表皮毛。注意觀察細胞中是否有葉綠體，以及上下表皮氣孔的數目的差異。

②葉肉 注意觀察柵欄組織和海綿組織的細胞特點，以及孔下室的分布位置。試想這些特點與環境及功能有什么關系? ③葉脈 葉肉中的維管組織，主脈較大，由主脈進行分支形成側脈。主脈包埋在基本組織中，上方表皮下有厚角組織，下方基本組織中有厚壁細胞分布。葉脈維管束的木質部在近軸面，而韌皮部在遠軸面。在較大葉脈的木質部與韌皮部之間有一層形成層細胞。側脈維管束的組成趨于簡單，木質部和韌皮部只有少數幾個細胞，但一般具有薄壁細胞形成的維管束鞘。在切片中可以見到各種走向的葉脈，試想其原由。

⑵小麥葉的結構 用小麥葉進行徒手切片后觀察。小麥葉的徒手切片要用蘿卜條作為夾持物才可以。方法是用水果刀將蘿卜切成約3×4×40(mm)的蘿卜條，再在一端沿小長方形的長邊方向的中央切一10-20mm 的縫，并將小麥葉的一段夾進去，捏緊，修切，作徒手切片。或 取小麥葉橫切永久制片，置于顯微鏡下逐項觀察。

①表皮 細胞一層，其外壁具有較厚的角質層。在表皮中有成對的保衛細胞，體積較小。在保衛細胞的兩側是略大一些的副衛細胞。上表皮中還有一些較大的細胞，常幾個連在一起，在橫切 面上略成扇形，叫泡狀細胞，因其與葉片的卷曲有關，也被稱為運動細胞。此外，還可見到表皮毛。

②葉肉 無柵欄組織和海綿組織的分化，細胞比較均一。葉肉細胞均富含葉綠體。若將葉肉細胞解離，可發現每個細胞的長壁呈有峰和谷之分的深的波浪狀。

③葉脈 維管束與莖中一樣都為有限維管束，木質部位于近軸面，而韌皮部在遠軸面。維管束外有兩層維管束鞘，外層細胞較大，壁薄，含有葉綠體；內層細胞小，壁厚。維管束的上下兩側具有厚壁細胞，一直延伸到表皮之下。試想這些厚壁細胞的作用是什么? ⑶玉米葉的結構 觀察玉米葉的橫切永久制片，并與小麥葉比較。玉米的維管束鞘只有一層大的薄壁細胞，含有大的葉綠體。維管束鞘與其外側相鄰的一圈葉肉細胞共同形成“花環狀”結構，這是C4植物的結構特征。葉柄的顯微結構

取芹菜葉柄，作徒手切片進行觀察。主要可以見到表皮細胞、薄壁組織、厚角組織、維管束等。芹菜葉柄是最易進行徒手切片的實驗材料之一。松針葉的顯微結構

取松針葉橫切永久制片，由外向內觀察。

①表皮 細胞一層，排列緊密。細胞壁厚，胞腔小，外壁覆蓋有厚的角質層。②下皮層 由1至多層厚壁細胞構成。氣孔下陷到下皮層，由一對保衛細胞和一對副衛細胞組成。保衛細胞側壁與下皮層細胞相連。副衛細胞在保衛細胞的上方，拱蓋著保衛細胞，側壁與表皮細胞相連。二者的胞壁都有不均勻的加厚，氣孔下是下陷的孔下室。

③葉肉 位于下皮層以內，葉肉細胞的細胞壁內折，胞質內富含葉綠體。在葉肉組織中有樹脂道分布。樹脂道由兩層細胞圍成，外層是厚壁的鞘細胞，內層是薄壁的上皮細胞。樹脂道的數目與分布的不同可作為種的鑒別特征。

④內皮層 葉肉細胞里面的一圈排列整齊的細胞，其徑向壁上有類似凱氏帶的加厚。⑤維管組織 位于針葉的中央，內皮層以內，有1～2個外韌維管束。木質部在近軸面，韌皮部在遠軸面。木質部和韌皮部的細胞均成徑向排列，木薄壁細胞與管胞各自成行，相間排列；篩管和韌皮薄壁細胞排列也是如此。韌皮部外側有幾個成堆分布的細胞，含有濃厚的細胞質，是蛋白細胞。內皮層和維管柱之間排列緊密的細胞是傳輸組織，包括常含有鞣質的生活薄壁細胞和壁稍厚略為木質化且壁上有具緣紋孔的管胞狀細胞，前者占傳輸組織的大部分。

取雪松或黑松的葉作徒手切片觀察。4 不同生態環境下生長的植物葉結構特點

⑴旱生植物夾竹桃葉橫切永久制片

①表皮 細胞排列緊密，壁厚，外壁上有厚的角質層。下表皮有一部分細胞構成下陷的窩，窩內有表皮細胞形成的表皮毛，毛下有氣孔分布。表皮細胞2～3層形成復表皮。

②葉肉 上、下表皮之內都有柵欄組織，柵欄組織由多層細胞構成，細胞排列非常緊密。海綿組織位于上、下柵欄組織之間，細胞層數較多，胞間隙不發達。在葉肉細胞中常含有簇晶。

③葉脈 維管束發達。主脈很大，為雙韌維管束。⑵水生植物睡蓮和眼子菜葉橫切永久制片

①睡蓮葉橫切永久制片觀察 上表皮有氣孔。葉肉的柵欄組織和海綿組織的分化明顯，柵欄組織在上方，細胞含有較多的葉綠體；而海綿組織在下方，有十分發達的氣腔和一些分支石細胞分布。維管組織特別是木質部不發達。

②眼子菜葉橫切永久制片觀察 表皮無氣孔，也沒有角質層，但表皮細胞中含有葉綠體，試想這是為什么?葉肉細胞不發達，有1至幾層細胞組成。在靠近主脈處，葉肉細胞形成大的氣腔。葉脈的木質部導管和機械組織都不發達

五、注意事項

1本實驗項目的實施需要學生具有一定的理論基礎，計劃學時為6學時。2 徒手切片技術非常簡單和實用，一定要掌握其操作要領。

六、思考題

1繪鳶尾根的橫切面圖（四分之一部分），并注明各部分名稱。

2繪玉米莖或小麥莖橫切面輪廓圖，詳繪一個維管束，并注明各部分結構的名稱。3 繪大葉黃楊(或海桐)葉橫切面圖或小麥葉的橫切片圖。

第二篇：實驗六ABO血型鑒定、血涂片的制作與血細胞顯微觀察(精)

實驗六：ABO血型鑒定、血涂片的制作與血細胞顯微觀察

一、實驗目的.了解 ABO 和 Rh 血型分類系統的背景知識和遺傳學原理 2.掌握微量采血及血涂片的制作方法

3.學習使用光學顯微鏡觀察和區分紅細胞與各種白細胞

二、實驗材料

1.實驗材料 ：醫用采血針、酒精棉球、載玻片、血推片、消毒牙簽 2.實驗試劑： 瑞氏染液、抗 B 血清、抗 A 血清、生理鹽水、蒸餾水 3.儀器設備： Motic 光學顯微鏡

三、實驗內容和方法 ABO 血型鑒定

1.1 取一塊清潔玻片，用記號筆標上記號。

1.2 用小滴管吸 A 型標準血清（抗 B）一滴加入左側，用另一小滴管吸 B 型標準血清（抗 A）一滴加入右側

1.3 以穿刺法自左手無名指指尖取血，在玻片的每側各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。

1.4 靜置室溫下 10—15min 后，觀察有無凝集現象，并據此判斷血型。2 血涂片的制作及血細胞觀察

2.1 取末捎血一滴置于玻片的一端 , 左手持載玻片 , 右手以邊緣平滑的推片的一端從血滴前方后移接觸血滴，血滴即沿推片散開。然后便推片與載片夾角保持 30-45 度平穩地向前移動 , 載片上保留下一薄層血膜

2.2 血涂片制成后可手持玻片在空氣中揮動 , 使血膜迅速干燥 , 以免血細胞皺縮.2.3 用蠟筆在血膜兩側劃線 , 以防染液溢出 , 然后將血膜平放在染色架上.加瑞氏

染液 2-3 滴 , 使覆蓋整個血膜 , 固定 0.5-1.0 分鐘.滴加等量或稍多的新鮮蒸餾水 , 與染料混勻染色 5-10 分鐘.2.4 用清水沖去染液 , 待自然干燥后或用吸水紙吸干 , 即可置血涂片于顯微鏡下進行鏡檢。

2.5 白細胞分類計數: 選擇涂片的體尾交界處染色良好的區域 , 在油鏡下計數 100 個紅細胞 , 按其形態特征進行分類計數 , 求出各類細胞所占比值。

注：

1.瑞氏染液 : 瑞氏染料 1g 加甲醇(AR)600ML。將瑞氏染料放在清潔干燥乳缽中 , 加少量甲醇 , 充分研磨使染料溶解.將已完全溶解的部分倒入棕色試劑瓶中 , 未溶解部分再加少量甲醇研磨 , 直至染料完全溶解于甲醇為止.新配制的染料偏堿 , 須在室溫和 37℃ 下一定時間待染料成熟 , 主要美藍逐漸增多為天青 B 后才能使用.貯存時間越久染色效果越好 , 因此 ,Deamgilliland 等采用吸光度比值(rA)作為瑞氏染料的質量規格.rA 測定方法如下 : 取瑞氏染液 15-25ul(視染液濃度而定)加甲醇 10ml 稀釋 , 混勻后以甲醇為空白管分別以波長 650nm,525nm 比色 ,rA=A650/A525。因為美藍吸收峰為波長 650nm, 伊紅吸收峰波長為 525nm, 天青 B 吸收峰也為 650nm, 但吸光度 A 約為美藍的一半.所以新配制染料的 RA 接近2, 隨著美藍逐漸氧化為天青 B,RA 也相應下降 ,RA 下降達 1.3±0.1 即可使用.瑞氏染料在貯存過程中必須塞嚴 , 以防甲醇揮發和氧化為甲酸.有人主張配方中加入 30ml 甘油 , 防止甲酸揮發 , 并可使細胞染色清晰.甲醇必須純凈 , 如甲醇中丙酮含量過多 , 染色偏酸 , 使細胞著色不良.2.磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)：磷酸二氫鉀 0.3g 加磷酸氫二鈉 0.2g 再加蒸餾水至 1000ml, 配制成磷酸鹽緩沖液調整 PH, 如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替.3.白細胞分類計數正常參考值 細胞類別 成人

桿狀核 0.01-0.05 分葉核 0.50-0.70

嗜酸性粒細胞 0.005-0.05 嗜堿性粒細胞 0-0.01 淋巴細胞 0.20-0.40 單核細胞 0.03-0.08

四、注意事項

1)玻片的清洗：新玻片常有游離堿質 , 因此應用清洗液或 10% 鹽酸浸泡 24 小時 , 然后再徹底清洗。用過的玻片可放入適量肥皂水或合成洗滌劑的清水中煮沸 20 分鐘 , 再用熱水將肥皂和血膜洗去 , 用自來水反復沖洗 , 必要時再置 95% 乙醇中浸泡 1 小時 , 然后擦干或烤干備用。使用玻片時只能手持玻片邊緣 , 切勿觸及玻片表面;, 以保持玻片清潔 , 干燥 , 中性、無油膩。

2)細胞染色對氫離子濃度十分敏感 , 在染色過程中玻片必須化學清潔 , 配制瑞氏染液必須用優質甲醇 , 稀釋染液必須用緩沖液 , 沖洗用水應近中性 , 否則各種細胞染色反應異常 , 致使細胞的識別困難 , 甚至造成錯誤。

3)一張良好的血片 , 要求厚薄適宜 , 頭體尾分明 , 分布均勻 , 邊緣整齊 , 兩側留有空隙。血片制好后最好立即固定染色 , 以免細胞溶解和發生退行性變。

4)血膜未干透 , 細胞尚未牢固附在玻片上 , 在染色過程中容易脫落 , 因此血膜必需充分干燥.5)染色時間與染液濃度 , 室溫高低 , 細胞多少有關.染液越淡 , 室溫越低 , 細胞越多 , 所需染色時間越長或應適當增加染液量 , 因此染色時間應視具體情況而定.特別是更換新染料時必須經試染 , 摸索最佳染色條件.6)染液不可過少 , 以防蒸發干燥染料沉著于血片上難沖洗干凈.7)沖洗時應用流水將染液沖去.不能先倒掉染液 , 以免染料沉著于血片上.8)染色過深可用甲醇或酒精適當脫色 , 最好不復染 , 必須復染時 , 可將染液先稀釋好再復染.9)染色時應注意保護血膜尾部細胞 , 不能劃掉.因為體積較大細胞常在此處出現.染色結果 : 在正常情況下血膜外觀為粉紅色 , 在顯微鏡下紅細胞呈肉紅色；白細胞胞漿能顯示各種細胞的特有色彩 , 細胞核染紫紅色 , 染色質清楚 , 粗細松緊可辨。染色結果偏酸 , 則紅細胞和嗜酸性粒細胞顆粒偏紅 , 白細胞核呈淺藍色或不著色；染色結果偏堿 , 則所有細胞染成灰藍色 , 顆粒深暗，嗜酸性顆粒可染成暗褐色 , 甚至紫黑色或藍色。嗜中性顆粒偏粗 , 偏堿(紫黑色).血片原處呈綠色.五、思考題

(1)如何區別血液的凝集和凝固？其機理有何差別？

(2)根據你的血型，判斷你能接受何種血型并且能夠給何種血型供血？

(3)O 型血人又被稱為“萬能供血者”，試根據 ABO 血型分型作出你對這一說法的理解(4)試根據父母的血型，寫出后代的可能血型：

第三篇：組織學與胚胎學實驗 組織切片的典型圖片

編輯

考試重點：以下切片的名稱、取材、主要結構等

照片名稱：主細胞與壁細胞

照片名稱：中動脈2副本

照片名稱：有髓神經纖維2副本

照片名稱：血細胞

照片名稱：未角化復扁

照片名稱：胃粘膜層

照片名稱：心肌閏盤

照片名稱：心肌閏盤細胞核縱切

照片名稱：疏松結締組織（膠原纖維、彈性纖

照片名稱：生精小管

照片名稱：腎上腺1

照片名稱：神經元1

照片名稱：脾臟

照片名稱：子宮分泌期2

照片名稱：蒲肯野纖維

照片名稱：氣管壁結構

照片名稱：潘氏細胞

照片名稱：門管區-2

照片名稱：骨骼肌（骨骼肌纖維細胞核）縱切

照片名稱：睪丸低倍

照片名稱：單層柱狀上皮（杯狀細胞柱狀細胞

照片名稱：肺的呼吸部jpg

照片名稱：復層扁平未角化jpg

照片名稱：肝臟巨噬細胞

照片名稱：垂體遠側部細胞副本

照片名稱：次級卵泡2

照片名稱：大動脈1

照片名稱：單層立方

照片名稱：平滑肌縱切

第四篇：觀察酵母菌與霉菌實驗教案

《觀察酵母菌與霉菌》實驗教案

一.實驗目的

1.觀察酵母菌的形態與結構并掌握其特征。

2.觀察霉菌的菌落特征，學會霉菌的一般制作方法。3.觀察并掌握各種霉菌的個體形態及生長繁殖方式。4.進一步熟悉顯微鏡的使用。二.實驗原理

酵母菌是一類單細胞真菌，一般呈圓形、橢圓形，無性繁殖以芽孢為主，也有少數是裂殖，有些酵母菌能產生囊孢子，有的能形成假菌絲。酵母菌的菌落似細菌菌落，但較大且厚，多呈白色，少數為紅色。酵母菌在液體中生長可形成菌膜、菌環、沉淀和渾濁。酵母菌的細菌結構較完善，即有壁、膜、質、核等結構。酵母菌的細胞形態、繁殖方式和培養特征均為菌種鑒定的依據。

酵母活細胞新陳代謝旺盛，活力強，還原力也強，若無毒的染料進入細胞，既被還原脫色，但死細胞及代謝作用緩慢的老弱細胞無此還原力。美蘭是無毒染料，且能被活細胞還原成無色，故可用來區別細胞的死活。

霉菌是一些小型絲狀真菌、單細胞（根霉、毛霉）或多細胞（曲霉、青霉），其細胞結構與酵母類似，同屬真核細胞。

霉菌形態較復雜，個體較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。其菌絲分為氣生菌絲與營養菌絲（菌絲比放線菌粗得多）觀察時請注意菌絲是否具有橫膈膜、有無假根、無性繁殖時形成何種孢子，孢子著生方式以及孢子頭的構造等，以區別各種不同霉菌的形態。

霉菌菌落由分枝狀菌絲組成，較疏松，呈毛狀、棉絮狀、絨毛狀或氈狀。由于不同霉菌形成的孢子均有不同顏色、構造、性狀，故菌落表面呈現出不同的結構和色澤特征。菌絲一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌絲較老，先產生孢子，故常形成同心圓。三.實驗器材

1.菌種：面包酵母、根霉、曲霉、青霉。2.儀器：顯微鏡。

3.其它：生理鹽水、乳酸酚棉蘭染液、載玻片、蓋玻片、接種環、酒精燈、美蘭、鑷子、大頭針。四.步驟與方法

1.酵母菌細胞形態觀察

（1）制片：用接種環挑取一環面包酵母菌種于載玻片上的一滴美蘭染液中混勻，蓋上蓋玻片靜置4~5分鐘。蓋時先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然后慢慢放下，避免產生氣泡。

（2）鏡檢：用高倍鏡觀察，光線弱些，繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況，并觀察死活酵母情況。2.霉菌的形態觀察（1）制片方法：在潔凈的載玻片加一滴乳酸酚棉蘭染液，用大頭針或鑷子從菌落的不同部位菌絲體少許（連同培養基），放入載玻片上的乳酸酚棉蘭染液中，使菌絲在染液中展開，加上蓋玻片。（2）載片培養法制作霉菌標本片。（3）鏡檢。

（4）觀察毛霉、根霉、曲霉、青霉的菌落。五.結果記錄

1.酵母菌的形態觀察

繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況。2.霉菌的形態觀察

繪制鏡檢圖并描繪霉菌菌落特征。六.思考題

1.試比較酵母和細菌的形態。

2.為什么在觀察霉菌個體形態時要連同培養基一起挑起？

第五篇：實驗三 植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

實驗三 植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

一、實驗目的

了解細胞骨架的結構特征及其制備技術。

二、實驗器具及試劑 1．器具

普通光學顯微鏡、50ml燒杯、玻璃滴管、容量瓶、試劑瓶、載玻片、蓋玻片、鑷子、小剪刀、吸水紙、擦鏡紙。2．試劑

M-緩沖液：咪唑、KCL、MGCL2、EGTA【乙二醇雙醚四乙酸】、EDTA、疏基乙醇或DTT(二硫蘇糖醇)；（PH6.8）磷酸緩沖液（用NaHCO3調PH值）；Triton X-100，用M-緩沖液配制；考馬斯亮藍R250,其溶劑為：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5ml；戍二醛、乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性樹膠等。3.實驗材料 洋蔥鱗莖

三、實驗內容

細胞骨架事由蛋白質絲組成的復雜網狀結構，根據其組成成分和形態結構可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細胞形態的維持，細胞的生長、運動、分裂、分化，物質運輸，能量轉換，信息傳遞，基因表達等起到重要作用。當用適當濃度的Triton X-100處理細胞時，可經細胞質膜中和細胞質中的蛋白質和全部脂質被溶解抽提，但細胞骨架系統的蛋白質不受破壞而被保存，經用戊二醛固定，考馬斯亮藍R250染色后，可在光學顯微鏡下觀察到由微絲組成的微絲束為網狀結構，就是細胞骨架。

（一）溶液配制（1）M-緩沖液配制：

M-緩沖液(10×原液)：咪唑34.04g，氯化鎂(MgCl2?6H2O)1.02g，EGTA（乙二醇雙醚四乙酸）3.8g，EDTA(乙二胺四乙酸)0.29g，巰基乙醇0.78g(0.7ml)蒸餾水加至1 000 ml。使用時，取100 ml(10×原液)加900 ml蒸餾水。（2）6mmol/L（PH6.5）磷酸緩沖液配制： 甲液：NaH2PO4?2H2O，0.938g 溶于蒸餾水中，最后稀釋至1 000ml。乙液：Na2HPO4 ?12H2O，2.15g加蒸餾水溶解，最后加水至1 000ml。取甲液685ml，乙液315ml加蒸餾水1000ml即成6mmol/LPH6.5的磷酸緩沖液。

（3）1%Triton X-100，用M-緩沖液配制： 取22ml Triton X-100液加M-緩沖液至200ml。（4）0.2%考馬斯亮藍R250：

考馬斯亮藍R250為0.2g，甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5ml（5）3%戍二醛，用磷酸緩沖液配制。

（二）實驗方法與步驟

（1）撕取洋蔥鱗莖內表皮（約1cm2大小若干片）置于裝有PH6.8磷酸緩沖液的50ml燒杯中，使其下沉。

（2）吸去磷酸緩沖液，用1% Triton X-100處理20~30min。（3）吸去Triton X-100，用M-緩沖液洗3次，每次10min。（4）3%戊二醛固定0.5~1h。

（5）PH6.5磷酸緩沖液洗三次，每次10min。（6）0.2%考馬斯亮藍R250染色20~30min。

（7）用蒸餾水洗1~2次，細胞置于載破片上，加蓋玻片，于普通光學顯微鏡下觀察。

（8）如觀察效果好，可制作成永久切片。

在有樣品的50ml燒杯中，順序通過如下藥物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2V95%乙醇+1/2V叔丁醇、叔丁醇（每級5-10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每級5-10min），然后撈取樣品，平展于載玻片上，經鏡檢，效果好的，可加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片，即成永久片。

四、實驗報告

1．繪出植物細胞骨架微絲結構圖。

2．分析在光學顯微鏡下觀察到的細胞骨架的形態特征。