第一篇：九江學院 儀器分析仿真實驗-教案

儀器分析仿真實驗

實驗一

紅外光譜實驗

一、實驗概述

光源發(fā)出的連續(xù)波長的紅外光經干涉儀、樣品室到達檢測器，檢測到的紅外干涉圖包含了光源全部頻率和強度的信息。計算機將干涉圖函數進行付里葉變換就可以計算出光信號的強度按頻率的分布，即單光光譜。測試樣品的單光光譜與背景單光光譜的比值就是我們所需要的百分透過率紅外光譜圖。

實驗分為教學模式和考核模式兩種情況，在教學模式下顯示全部的幫助信息，在考核模式下則把幫助信息隱藏掉。

本實驗包含紅外光譜實驗的基礎知識，實驗儀器自帶軟件的仿真模擬，實驗操作部分的仿真模擬等內容，用director+平臺的開發(fā)工具，即統(tǒng)一了公司內部實驗開發(fā)的模式，又能使實驗不失生動的界面。

二、實驗目的

1、了解紅外光譜儀的原理和結構。

2、在模擬系統(tǒng)上學習紅外光譜儀的操作。

三、重點和難點：紅外光譜儀的原理和操作方法。

四、實驗裝置

1.370紅外光譜儀技術參數 ：

1)DSP動態(tài)調整干涉儀，調整頻率可達130,000次/秒； 2)光學臺底板一體化，主部件對針定位，無需調整； 3)光譜范圍：7,800-350cm-1；

4)分辨率：標準0.9cm-1，0.5cm-1； 5)信噪比：1.7×10-5 吸光度單位(峰－峰值),大于24,000:1； 2.主要特點

1)專利Ever-Glo空冷紅外光源，能量高，壽命長；

2)專利無磨損電磁驅動干涉儀，動態(tài)調整可達130,000次/秒； 3)永久準直光路，無需用戶人工調整； 4)智能附件即插即用；

5)智能附件自動識別，儀器參數自動調整；光學臺底板整體鑄模成型，密封性好，穩(wěn)定性高。主要部件均采用預校準對針定位，用戶可方便地自行更換而無需任何調整。智能附件(ATR,漫反射等)即插即用，光路永久準直，系統(tǒng)自動進行性能檢驗并自動調整參數。

堅固的無磨損電磁式驅動干涉儀，采用數字化連續(xù)動態(tài)調整技術(D.S.P.)，具有極高的穩(wěn)定性，Auto-tune功能自動進行系統(tǒng)優(yōu)化,確保干涉儀始終處于最佳工作狀態(tài)。

五、實驗操作 一． 實驗啟動和界面介紹

1． 啟動Ad500u.exe，選擇單機運行還是網絡運行。

2． 在培訓項目頁選擇要進行培訓的項目，點擊左上方的啟動培訓單元按鈕。本實驗是把不同形態(tài)的樣品設成不同的培訓項目。如下圖：

3． 在考試模式下，無任何提示信息；在練習模式下，有評分幫助和提示信息

4． 下圖是實驗的起始界面：

5． 下圖是實驗的流程圖界面的介紹：

6． 點擊流程圖界面上計算機下方的綠色字，可以設置相關參數，點擊右上角圖標返回流程圖界面。(注意:輸入完數據后，必須敲擊主鍵盤上的回車鍵，數據才能有效)界面如下：

四

樣品制作

1． 固態(tài)樣品制作，按照圖片上的信息提示步驟來操作：

2． 液態(tài)樣品制作，按照圖片上的信息提示步驟來操作：

3． 氣態(tài)樣品制作，按照圖片上的信息提示步驟來操作：

五

軟件操作

4． 打開參數設置的界面

5． 下面就是“Experiment Setup”窗口。當鼠標移動到“No.of scans:”和“Resolution:” 字上面的時候，會出現(xiàn)這兩個參數所表示的含義。輸入數據(注意:輸入完數據后，必須敲擊主鍵盤上的回車鍵，數據才能有效)。界面如下：

6． 開始收集樣品。

7． 輸入此次實驗的名稱。

8． 出現(xiàn)提示框，提醒用戶開始背景收集。

9． 背景收集的過程。

10． 提示開始樣品的收集。

11． 樣品收集的過程。

12． 提示樣品收集完畢。

13． 點擊“Full Scale”菜單可以將譜圖完全的顯示在窗口內，如下圖：

14．。“Clear”、“Absorb”和“%Trans”三個工具欄中的按鈕可以應用，當鼠標移動到它們上面的

時候，在練習模式下，會出現(xiàn)如下提示：

15． 調出譜庫搜索界面。

16． 譜庫搜索界面如下：

17． 選中需要搜索的譜庫：

18． 點擊“Add〉〉”按鈕，將相應的譜庫名稱添加到右邊：

19． 點擊“Search”按鈕，開始譜庫搜索：

20． 下圖為譜庫搜索的結果：

六

譜圖練習

21． 點擊主界面上的“譜圖”按鈕，進入到譜圖練習界面。在此界面下，用戶選擇相應的官能團拖動到相應的波峰位置，正確的話，此官能團就停留在相應的方框呢，否則就自動回到原來的位置，效果如下圖：

22． 第二張譜圖：

23． 第三張譜圖：

24． 第四張譜圖：

25． 第五張譜圖：

26． 第六張譜圖：

點擊“結束”返回到流程圖界面。

實驗二

紫外-可見光分光光度計仿真實驗

一、實驗概述：

在分之中，除了電子相對于原子核的運動之外，還有原子核之間振動和轉動引起的相對位移。這三種運動能量都是量子化的，對應有一定的能級。分子的能量是這三種能量的總和。當用一定頻率（波長）的電磁波（光）照射分子，其能量恰好等于分子的兩個能級差時，則分子就會吸收光的能量而由較低的能級躍遷到較高的能級，同時光的強度（能量）變小。吸光度符合吸收定律：

A=lg（I0/I）=KcL

根據這一關系可以用工作曲線法來測定未知溶液中吸光物質的濃度。

二、實驗目的：

1、掌握紫外-可見分光光度計的原理和結構

2、掌握紫外可見分光光度計的操作方法

三、重點和難點：

學習和掌握紫外可見分光光度計的操作方法。

四、實驗裝置：

Agilent 8453紫外-可見分光光度計使用最新的二極管陣列技術，符合歐洲藥典（EP）和美國藥典（USP）所有規(guī)范要求。Agilent8453具備二極管陣列的優(yōu)勢，氘、鎢雙燈設計，波長范圍190-1100nm，分辨率小于 2 納米，并且標準雜散光強度低于 0.03%，配有安捷可見光化學工作站軟件。

五、實驗操作步驟

第一步：啟動系統(tǒng)平臺，選擇實驗儀器

首先啟動軟件運行平臺，鼠標左鍵點擊“單機運行”，如果配有教師站，也可以點擊“網絡運行”。

在實驗內容選擇界面，如上圖所示，用鼠標左鍵雙擊要進行的實驗儀器。然后進入實驗項目選擇界面。

選擇要進行的實驗項目，然后點擊左上角的“啟動培訓單元”按鈕，進入仿真實驗。每個實驗項目都有練習和考試兩種模式，其區(qū)別在于練習模式的實驗界面上有文字說明和步驟提示，評分模塊中也有步驟提示，而在考試模式當中則沒有。第二步：進入到起始界面

在界面上鼠標左鍵點擊，進入流程圖界面。第三步：進入流程圖界面，進行實驗準備工作

流程圖界面是一個對儀器進行了簡化和抽象的界面，可能各個學校的儀器不盡相同，但是對于一種儀器來說，其原理和功能模塊都是相同的，我們設計這個界面，就是為了學生能夠對于儀器的結構和各個功能模塊有直觀的認識，而不受具體儀器的限制。注意，在實驗過程中看到“標志，都可以點擊回到流程圖界面。流程圖界面，如下圖所示：

”

在進行實驗之前，首先要進行實驗前的準備工作，用鼠標左鍵點擊流程圖界面右上角的“實驗準備”按鈕，進入實驗準備工作。第四步：實驗準備工作

實驗之前的準備工作很多，也很重要，但是仿真實驗以儀器操作為主，準備工作簡化，以文字說明代替。

用鼠標左鍵點擊界面下方的“確定”按鈕返回流程圖界面。第五步：啟動工作站軟件

在流程圖界上，鼠標左鍵點擊流程圖界面右上角的“啟動工作站”按鈕，進入啟動化學工作站軟件的仿真流程。

Agilent的化學工作站，在操作系統(tǒng)啟動的時候，會啟動CAG Bootp Server程序，用以對儀器進行檢測和通信，我們可以看到其中顯示的檢測信息。

這個程序不能關閉，否則工作站軟件就無法和儀器進行通信了，所以首先把這個程序最小化。然后用鼠標左鍵雙擊桌面上的“Instument 1 online”快捷方式，啟動工作站軟件，“online”的意思是與儀器相連。

軟件啟動后，會讀取配置信息，不同用戶可以有不同的配置。

再次需要輸入用戶名和密碼，這里密碼設置為空，用鼠標左鍵點擊“OK”按鈕繼續(xù)。然后軟件就會進行一系列初始化工作，最后啟動完成。如下圖所示：

至此工作站啟動完成，用鼠標左鍵點擊界面右上角的“第六步：確定工作波長

”回到流程圖界面。

在流程圖界面上，用鼠標左鍵點擊右上角的“軟件操作”按鈕，進入操作化學工作站軟件的仿真流程。

Agilent 8453紫外-可見分光光度計確定工作波長的方法主要有兩種，分別是“Fixed Wavelengths”和“Spectrum/Peaks”。下面分別介紹：

在Task工具欄的下拉菜單中的“Fixed Wavelengths”模式下，首先點擊左下角的“Blank”按鈕掃描背景。（注意：左下角有兩個按鈕，分別是“Blank”和“Sample”，其中“Sample”按鈕因為平臺的原因，不能看到全部，但是按鈕是可用的。）

用鼠標左鍵點擊右上角的“x”關閉背景噪聲窗口。然后點擊左下角的“Sample”按鈕掃描樣品，儀器掃瞄以后，會給出樣品的紫外吸收光譜，如下圖所示：

此時，可以拖動紅色的線選擇最大吸光度的波長作為工作波長。但是這種方法精度比較差，不推薦使用。

第二種方法是“Spectrum/Peaks”，這種方法是在一定波長范圍內，自動搜尋波峰和波谷。在Task工具欄的下拉菜單中選擇“Spectrum/Peaks”模式，這時系統(tǒng)會給出一個對話框，在這個對話框中，可以輸入要搜尋的波峰和波谷的數量，波長范圍等等，然后點擊“OK”按鈕繼續(xù)。

然后系統(tǒng)就會自動搜尋出波峰和波谷，在吸收光譜圖上標示，并在下面列表中一一列出，以最大的吸收波長為工作波長

確定波長以后，可以在此波長下，建立工作曲線。第七步：建立工作曲線

在確定波長以后，在在Task工具欄的下拉菜單中選擇“Quanlification”模式。

點擊左下角的“Blank”按鈕掃描背景。（注意：此時左下角有三個按鈕，分別是“Blank”，“Standard”和“Sample”，其中“Sample”按鈕因為平臺的原因，不能看到全部，但是按鈕是可用的。）

然后最小化背景噪聲窗口。

如上圖所示，點擊左下角的“Standard”按鈕，開始掃描1號標準樣品，等待大約3秒建立1號標準樣品工作曲線。然后再次點擊“Standard”按鈕，開始掃描2號標準樣品，再等待大約3秒建立2號標準樣品工作曲線，重復五次分別掃描五個標準樣品的工作曲線，吸收光譜會被顯示在左側窗 24

口中，數據點會顯示在右側的窗口中，并在下面列表。

此時工作曲線已經基本完成，但是一般情況下，工作曲線和數據點的線性不是太好，此時可以進行線性優(yōu)化，點擊Task工具欄的“Setup”按鈕：

在Calibration curve type選項的下拉菜單中選擇LineOffSet，然后點擊“OK”按鈕繼續(xù)。經過優(yōu)化以后，工作曲線就更加完美了。

第八步：測試待測樣品 建立工作曲線以后，可以開始測試待測樣品，如上圖所示，點擊左下角的“Sample”按鈕（注意： “Sample”按鈕因為平臺的原因，不能看到全部，但是按鈕是可用的。）系統(tǒng)會自動掃描，并自動計給出結果：

實驗三

原子吸收仿真實驗

原子吸收分光光度計仿真實驗

一、實驗概述：

原子吸收分光光度分析法又稱原子吸收光譜分析法，是根據物質產生的原子蒸氣對特定波長的光的吸收作用來進行定量分析的。

與原子發(fā)射光譜相反，元素的基態(tài)原子可以吸收與其發(fā)射波長相同的特征譜線。當光源發(fā)射的某一特征波長的光通過原子蒸氣時，原子中的外層電子將選擇性地吸收該元素所能發(fā)射的特征波長的譜線，這時，透過原子蒸氣的入射光將減弱，其減弱的程度與蒸氣中該元素的濃度成正比，吸光度符合吸收定律：

A=lg（I0/I）=KcL 根據這一關系可以用工作曲線法或標準加入法來測定未知溶液中某元素的含量。

在火焰原子吸收光譜分析中，分析方法的靈敏度、準確度、干擾情況和分析過程是否簡便快速等，除與所用儀器有關外，在很大程度上取決于實驗條件。因此最佳實驗條件的選擇是個重要的問題。本實驗在對鈉元素測定時，分別對燈電流、狹縫寬度、燃燒器高度、燃氣和助燃氣流量比（助燃比）等因素進行選擇。

二、實驗目的：

1、了解原子吸收光譜儀的原理和結構。

2、在模擬系統(tǒng)上學習原子吸收光譜儀的操作。

三、重點和難點：

原子吸收光譜儀的原理和操作方法。

四、實驗裝置：

本實驗仿真的設備是AA320型原子吸收分光光度計，主要設備參數如下： 波長范圍：190.0~900.0 nm 光柵刻線：1200 條/mm 閃躍波長：250 nm 線色散倒數：2.38 nm/mm 狹縫寬度1~6檔對應的nm數分別為：0.2，0.4，0.7，1.4，2.4，5.0 原子吸收分光光度計的放大圖：

五、實驗操作： 第一步：選取實驗

啟動實驗后，點擊“培訓項目”，選取實驗內容：

第二步：打開電源

在主界面上用鼠標點擊原子吸收分光光度計，會出現(xiàn)原子吸收分光放大圖，用鼠標點擊右下角的總電源開關打開電源。

第三步：打開空氣壓縮機電源開關

打開原子吸收分光光度計的總電源開關后，用鼠標點擊窗口右下角的“返回”按鈕回到主界面，然后點擊空氣壓縮機，會出現(xiàn)空氣壓縮機窗口，如圖所示：用鼠標點擊空氣壓縮機電源開關打開電源，電源上面的指示燈會亮起來。

打開電源開關后，關閉空氣壓縮機的窗口回到主界面。第四步：選擇陰極燈 回到主界面后，點擊原子吸收分光光度計出現(xiàn)原子吸收分光光度計放大圖，用鼠標點擊左上的陰極燈箱，會出現(xiàn)陰極燈窗口。

做實驗時要根據待測元素的不同選擇相應的元素燈。用鼠標左鍵點擊左上角的陰極燈的種類，會出現(xiàn)陰極燈選擇畫面：

用鼠標左鍵點擊要選的陰極燈，然后點擊陰極燈電源開關接通電源，燈被點亮。關閉此窗口回到原子吸收分光光度計畫面，然后進行下一步。第五步：粗調節(jié)陰極的燈電流

點擊原子吸收分光光度計上的陰極燈電流指示位置，會出現(xiàn)陰極燈電流調節(jié)窗口：

在調節(jié)旋鈕上點擊鼠標左鍵增大電流，點擊右鍵減小電流。根據實驗要求，調節(jié)電流再8~11mA之間。然后關閉電流表調節(jié)窗口，回到原子吸收分光光度計畫面。第六步：波長掃描

用鼠標點擊原子吸收分光光度計右下的波長掃描按鈕，左邊白色的按鈕是在一定范圍內自動從大到小掃描，灰色按鈕是在一定范圍內自動從小到大掃描，系統(tǒng)會自動掃描找到最合適的波長。

第七步：調節(jié)多功能面板

用鼠標點擊原子吸收分光光度計右上的多功能面板，出現(xiàn)多功能面板的放大圖。

多功能面板上的調節(jié)旋鈕用鼠標左鍵點擊逆時針旋轉，用鼠標右鍵點擊順時針旋轉。調節(jié)“方式”到“調整”檔，然后關閉多功能面板窗口回到原子吸收分光光度計畫面。第八步：調節(jié)陰極燈位置

用鼠標步左鍵點擊原子吸收分光光度計右下的能量表，會出現(xiàn)能量表的放大圖，用鼠標點中能量表窗口的藍色標題欄，然后按住左鍵移動鼠標，窗口就會跟隨鼠標的軌跡移動，按照此方法把能量表窗口移動到屏幕靠邊上的位置。然后用鼠標點擊原子吸收分光光度計的陰極燈箱，出現(xiàn)陰極燈調節(jié)窗口。此時應調節(jié)窗口的位置，使得在調節(jié)陰極燈位置的時候可以看到能量儀表。

分別在垂直和水平方向上調節(jié)陰極燈的位置，使得獲得的能量最大，調節(jié)的時候一定要反復多試幾次，如果在最大點位置附近移動一兩下不好調準，可以先移動到最大點位置比較遠的地方再向回調，如此反復幾次，找準最大能量的位置。如果調整到最大能量后能量表指針偏出了紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。調節(jié)好以后，關閉陰極燈窗口。不要關閉能量表窗口。第九步：微調波長

用鼠標點擊原子吸收分光光度計的波長微調旋鈕，左鍵增加，右鍵減小，使獲得最大的能量輸出。如果調整到最大能量后能量表指針偏出了紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。不要關閉能量儀表，進入下一步。第十步：調節(jié)狹縫寬度

點擊原子吸收分光光度計右上的多功能面板，調整多功能面板窗口和能量窗口的位置，使得再多功能面板上操作的時候能夠看見能量窗口。

用鼠標點擊狹縫調節(jié)旋鈕，左鍵點擊順時針旋轉，右鍵點擊逆時針旋轉，調節(jié)需要的狹縫寬度，一般情況下狹縫越小，能量越小，太小的能量不利于測定，狹縫越大，能量越大，但是可能會引起光譜通帶的增加而產生其他共振線的吸收而影響實驗結果，因此狹縫的寬度要根據具體實驗來定。選擇好狹縫寬度后，如果能量表的指針偏出紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。調節(jié)好以后，關閉多功能面板和能量表，然后在原子吸收分光光度計畫面上點擊右下角的“返回”按鈕返回到主界面。

第十一步：打開乙炔鋼瓶

在主界面上點擊乙炔鋼瓶，會出現(xiàn)乙炔鋼瓶的放大窗口。

先打開乙炔總閥，用鼠標左鍵點擊乙炔總閥，總閥會自動打開，再次用鼠標左鍵點擊后自動關閉。然后調節(jié)乙炔支閥，左鍵點擊增加開度，右鍵點擊減小開度，調節(jié)支壓力表的壓力到足夠大。在真實實驗中，如果支閥壓力太小，可能造成火焰無法點燃，建議壓力不小于0.15Mpa。調節(jié)完成后，關閉乙炔鋼瓶窗口，回到主界面。第十二步：接通氣路、點火

在主界面上點擊原子吸收分光光度計，出現(xiàn)原子吸收分光光度計放大圖。用鼠標左鍵點擊原子吸收分光光度計中間下部的氣路開關部分，出現(xiàn)氣路開關放大的窗口，從左到右依次點擊打開各個開關，然后關閉窗口。

打開氣路開關以后，關閉氣路開關窗口回到原子吸收分光光度計畫面，用鼠標左鍵點住點按鈕幾秒鐘，火焰即被點燃。

注：真實實驗中，點火前要先進行室內排風，本實驗忽略了這一環(huán)節(jié)。第十三步：調零

打開原子吸收分光光度計右上的多功能面板，點擊“方式”旋鈕使調整到“吸光度”位置后，關閉多功能面板。點擊主界面右下的溶液燒杯選取溶液

選中您要選擇的溶液，下面會出現(xiàn)選取溶液的濃度等參數，選取“空白樣液”，然后點擊窗口下部的“確定”按鈕，系統(tǒng)會將所選的溶液自動噴入霧化器。

點擊原子吸收分光光度計右下的調零按鈕進行調零，左右兩個鍵功能相同。第十四步：調節(jié)燃燒器位置

任意選取一份在線性范圍的標準對比樣液

點擊“確定”按鈕自動噴入霧花器后，儀器會顯示一定的吸光度值，此時點擊原子分光光度計中下部的燃燒器位置調節(jié)旋鈕，兩個旋鈕中上面的是調垂直位置，左鍵點擊燃燒器向下移動，右鍵點 34

擊向上移動，下面的旋鈕是調水平位置，左鍵點擊向右移動，右鍵點擊向左移動，調整的同時密切注意吸光度的變化，找到吸光度最大的位置。

第十五步：微調陰極燈電流

同時打開能量表和陰極燈電流表，調整兩個窗口的位置，使得在調節(jié)電流表的時候可以看到能量表和吸光度值

微調陰極燈電流的原則是：在保證有足夠且穩(wěn)定的光強輸出條件下，選擇低的工作電流，沒有特別的數量限制，根據實驗要求而定，一般是先選定大致的測量條件，然后選定一個大致的燈電流的范圍，然后噴入標準溶液，在選定的燈電流范圍內每隔1~2mA測量一次，計算平均值和標準偏差，并繪制吸光度與燈電流的關系曲線，選取靈敏度高、穩(wěn)定性好的條件為工作條件。對于本實驗，10mA為最佳值，省略了選擇的過程。如果調整電流后能量表指針偏出了紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。調節(jié)好以后，關閉能量表和陰極燈電流表。

注：在實驗中調節(jié)陰極燈的電壓、電流以及能量增益按鈕都可以改變能量輸出值的大小；實際上，在新式的陰極燈中，一般沒有電壓調節(jié)鈕，它的能量增益鈕能自動控制電壓。第十六步：調節(jié)空氣和乙炔的流量

用鼠標點擊原子吸收分光光度計左下的空氣和乙炔流量調節(jié)位置出現(xiàn)空氣和乙炔的流量調節(jié)窗口，調整窗口位置，使得在調節(jié)空氣和乙炔流量的時候可以看到吸光度數值，35

左邊的轉子流量計指示空氣的流量，右邊的轉子流量計指示乙炔的流量，左邊的旋鈕調節(jié)空氣的流量，右邊的旋鈕調節(jié)乙炔的流量。首先固定空氣流量（具體值由實驗確定），改變乙炔流量，使當前液指示吸光度最大。接著固定乙炔流量，改變空氣流量，使當前液指示吸光度最大。第十七步：樣品測試和數據記錄

前面已經把儀器調節(jié)好，不要在改變實驗條件，打開多功能面板，把“信號”旋鈕轉到“積分”位置（由于吸光度的值一直在變化，旋轉“信號”旋鈕到“信號積分”位置，這可使變化速率變慢）。點擊左邊菜單的“溶液選取”或者燒杯選擇溶液，依次測量各標準溶液和未知溶液，且在每次測試前都要用空白樣液校零。每測量一種溶液后，點擊“記錄數據”按鈕記錄數據。

測量并記錄完最后一組數據。第十八步：數據處理

記錄完最后一組數據后，點擊“繪制曲線”按鈕，出現(xiàn)繪制曲線界面：

此時就可以根據實驗數據確定待測元素的濃度。（提示：每次實驗所得到的未知物質的濃度都是不同的）

第十九步：實驗完畢（仿真實驗不作要求）

實驗結束后，吸入去離子水2~3min，先關乙炔，再關空氣。

關閉燈電源開關及總電源開關，將儀器上各旋鈕轉至零位，最后關閉通風裝置電源。

實驗四

氣相色譜試驗手冊

一、實驗概述

氣相色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在流動相和固定相中具有不同的溶解和解析能力，或不同的吸附和脫附能力。當兩相作相對運動時，樣品各組分在兩相中受上述各種作用力的反復作用，從而使混合物中的組分得到分離。色譜廣泛用于物質的分離，分析、濃縮、回收、純化和置備。

實驗分為教學模式和考核模式兩種情況，在教學模式下顯示全部的幫助信息，在考核模式下則把幫助信息隱藏掉。

二、實驗目的：

1、了解氣相色譜儀的原理和結構。

2、在模擬系統(tǒng)上學習氣相色譜儀的操作。

三、重點和難點：

氣相色譜儀的原理和操作方法。

四、實驗裝置

6890氣相色譜儀，第四代模塊化十三路EPC控制，數字化設定所有氣路參數，流量和壓力精確穩(wěn)定，壓力精度0.01psi，保留時 間和峰面積高度重復。

通過精確EPC氣路控制，快速柱箱升溫速率，超速FID、NPD和ECD響應，高速數據采集處理系統(tǒng)，可得到與原譜圖分離度相同而速度可快2-10倍的結果。柱箱溫度穩(wěn)定性：0.02%

載氣流速穩(wěn)定性：0.31％

ECD檢測器檢測限：6.31×10-15g/ml FPD檢測限：3.40×10-13g/s 基線漂移:滿刻度的3%／h

五、實驗操作

1．啟動Ad500u.exe，在培訓項目頁選擇要進行培訓的項目，點擊左上方的啟動培訓單元按鈕。本實驗是把不同的樣品設成不同的培訓項目。每個項目又分為“練習模式”和“考試模式”，在考試模式下，無任何提示信息；在練習模式下，有評分幫助和提示信息。如下圖：

2． 進入初始界面。在單機版里，初始界面上有整套氣相色譜設備的簡要示意圖，點擊設備進入下一步操作。

3． 首先進入一個實驗原理分析的簡圖，此界面為實驗的主界面，通過此界面，可進入到試驗各個主要步驟里。點擊實驗前的準備，進行實驗前的實驗預習操作

4． 實驗對操作的流程進行練習，將操作的正確步驟依次排序后點擊確認。

正確的順序是“開機”-“方法編輯”-“進樣”-“數據采集”-“數據分析”

除了熟悉正確的工作站操作外，還應了解在實際操作中應注意的準備工作，如樣品和試劑的選擇，要掌握色譜試劑的選擇，在不同的條件下選擇不同檔次的試劑，如“分析純”“色譜純”等等，試劑的選用關系到實驗的成敗。

5． 進入開機步驟的介紹。讓學生了解氣相色譜的開機準備過程及相關化學站的使用，可以點擊“Top view窗口”和“Instrument Control 儀器控制窗口”進入兩個分支介紹，也可點擊右上角圖標返回主界面。

開機之前一般要檢查氣路的氣密性，尤其是在使用易燃氣體做載氣的情況下，檢查完氣密性后先通氣后開機，注意鋼瓶輸出壓比柱前壓要高0.05MP.開機后要檢查檢測器及恒溫室的穩(wěn)定性，確保實驗在可靠的環(huán)境下進行可以提高實驗的再現(xiàn)性。

點擊“Top view窗口”按鈕，進入Top view界面；點擊“Instrument Control儀器控制窗口”，進入儀器控制窗口。這里是對平臺與其它分析聯(lián)用時的接口算法，用于數據庫的查找和檢測，常用與氣質聯(lián)用時。

如下兩副圖。

Top view

Instrument Control儀器控制窗口

6． 點擊上圖的“返回”按鈕，返回上級界面。點擊右上角圖標返回實驗主界面。在此我們返回實驗的主界面。

7． 主界面的各個設備如有與實驗參數關聯(lián)的情況，可以在鼠標移動到它的熱區(qū)時顯示

出來，此時可以點擊參數進入設置頁面,設置參數以紅色突出顯示，輸入數字后按回車，再點擊右上角圖標回主界面。

8． 按照上圖進行的步驟可以將所有參數進行設置，回到主頁面后也可點“切換至方法編輯”進行部分參數設定。

實驗參數的設定是氣相色譜實驗中重要的環(huán)節(jié)，在實驗預習時就應當了解和掌握，每次實驗前應了解實驗需要設置的參數，并掌握了解不同參數的設置對實驗結果的影響，便于在重復實驗和分析結果時得到客觀的答案。

9． 點擊主界面的“方法編輯”進入方法編輯界面。

10． 單擊Method菜單。

11． 在Instrument control窗口的標題欄中應顯示當前的方法“*.M”。如果沒有，從Method菜單中選Load…。單擊“*.M”并單擊OK。

12． 點擊進入Method/Edit Entire Method…窗口。確認三個選項都選定，然后單擊OK。

13． 確認Data Acquisition（數據采集）和Data Analysis（數據分析）已被選定。單擊OK。

14． 選擇Ｍanul作為進樣源(本實驗采用手動進樣，如果有自動進樣器的話，選擇GC ALS)。確認Use MS已被選定。單擊OK。

15． 出現(xiàn)Instrument Edit Inlets(儀器編輯入口)，單擊Options（選項）圖標，確認壓力單位為psi。

16． 設置載氣類型、進樣口溫度和分流比三個參數。用鼠標點擊閃動的文字，出現(xiàn)選項，用鼠標點擊選擇正確答案。

17． 設置載氣平均速度參數。用鼠標點擊閃動的文字，出現(xiàn)選項，用鼠標點擊選擇正確答案。

18． 設置載氣初始溫度和柱箱升溫過程。用鼠標點擊閃動的文字，出現(xiàn)選項，用鼠標點擊選擇正確答案。

19．20．21．46 單擊OK按鈕完成設置。

此窗口因為沒有選擇Show選項，所以其他參數不可用。單擊OK。

選擇檢測器，實驗不同要求不同的檢測器，點擊ok。

檢測器可以分為濃度型和質量型，濃度型檢測器的響應取決于組分濃度的瞬間變化，質量型的響應值取決于單位時間內進入檢測器的組分質量，熱導（濃度型）、電子捕獲（濃度型）、氫火焰（質量型）是檢測器中運用的最廣泛的三個檢測器。

22． 只選擇Percent Report。單擊OK。

23． 設定屏幕為輸出裝置。單擊OK。

24． 提醒您保存方法。完成它并單擊OK。返回到主界面。

25． 點擊“開始進樣”按鈕，進入進樣步驟界面。

26．27．28．48 點擊紅色字“觀看進樣錄像”，演示進樣過程。

點擊界面上的“進入自動進樣”，進入到到自動進樣界面。

打開進樣器的蓋子，放入樣品。如下圖

第二篇：《儀器分析》仿真實驗

儀器分析實驗仿真實驗

紫外分光光度計仿真實驗

一、實驗概述：

在分之中，除了電子相對于原子核的運動之外，還有原子核之間振動和轉動引起的相對位移。這三種運功能量都是量子化的，對應有一定的能級。分子的能量是這三種能量的總和。當用一定頻率（波長）的電磁波（光）照射分子，其能量恰好等于分子的兩個能級差時，則分子就會吸收光的能量而由較低的能級躍遷到較高的能級，同時光的強度（能量）變小。吸光度符合吸收定律：

A=lg（I0/I）=KcL 根據這一關系可以用工作曲線法來測定未知溶液中吸光物質的濃度。

二、實驗裝置：

儀器調節(jié)面板：

本實驗仿真的設備是UV-754C紫外可見光風光光度計，它具有鹵鎢燈（30W）、氘燈（2.5A）兩種光源，分別適用于360～850nm和200～360nm波段，采用平面光柵作色散元件，GD33光電管作接受器。

三、實驗操作： 第一步：選取實驗

點擊主菜單上的“實驗選取”，會出現(xiàn)如下的對話框：

用鼠標左鍵點中你要做的實驗，此文件名會出現(xiàn)在對話框的“文件名”一欄的文本框中，在此實驗文件上面雙擊左鍵或者點擊“打開”按鈕打開實驗文件。

第二步：打開電源、預熱

用鼠標點擊紫外分光光度計上的暗箱蓋，暗箱蓋會自動打開，如下圖所示：

１

然后用鼠標點擊儀器右下角的紅色電源開關接通電源，這是儀器調節(jié)面板會自動顯示，并進入開機自檢狀態(tài),此狀態(tài)大約持續(xù)10秒左右,在這段時間里計算機出現(xiàn)停滯現(xiàn)象是正常的.隨后計算機進入預熱期, 時間大約為1分鐘（真實儀器為20分鐘）。預熱結束時會聽見蜂鳴聲,并且會看見預熱按鈕上方的燈熄滅此時儀器就進入工作狀態(tài)了。

關狀態(tài)：

開狀態(tài)：

第三步：配置試液

用鼠標點擊主菜單中的“配置試液”按鈕，出現(xiàn)配置試液窗口：

２

用鼠標點擊下面5個容量瓶，選擇每個容量瓶要加入的蒽醌標準溶液量，系統(tǒng)會自動稀釋到刻度線：

5個容量瓶的溶液都配置好以后，點擊窗口右下角的箭頭進入下一步。

第四步：確定吸收波長

點擊試液配置窗口右下角的箭頭后，系統(tǒng)會顯示如下窗口，自動測量完成了吸收光譜圖: ３

點擊文字中的“吸光度——波長曲線”到吸收光譜圖窗口，再點擊“繪制吸收光譜”按鈕就可以看到蒽醌的紫外吸收光譜圖：

記錄下最大的吸收波長，關閉此窗口，然后進行下一步

第五步：調節(jié)吸收波長

用鼠標點擊紫外分光光度計上的波長調節(jié)位置，出現(xiàn)波長調節(jié)窗口，用鼠標左鍵或者右鍵點擊波長調節(jié)旋鈕來增大或者減小波長到剛才記錄的最大波長。

４

第六步：儀器調節(jié)面板

點擊調出儀器調節(jié)面板

點擊按鈕打開氘燈，依次點擊、、按鈕關閉鎢燈，點擊到T，然后按下 按鈕，等待數字顯示平穩(wěn)后，點擊到A。

調節(jié)完成后的面板如下圖：

５

第七步：將樣品裝入吸收池架

點擊主界面上的吸收池架調出吸收池畫面：

吸收池架有四個位置，在測量時分別對應儀器調節(jié)面板的上的“參考”、“1#”、“2#”、“3#”四個指示位置。把鼠標停留在上面6個容量瓶上，下面會顯示相應的說明。點擊每個位置選擇要加入的溶液：

加入溶液后，窗口右下角會出現(xiàn)箭頭提示放入暗箱，點擊系統(tǒng)會將吸收池架自動放入。

第八步：測量

點擊調出儀器調節(jié)面板以便讀取吸光度數據，然后前后拉動拉桿將不同的溶液放進光路中，從儀器調節(jié)面板上讀取吸光度數據，系統(tǒng)會自動記錄。

６

按照以上方法把六組數據測試完畢。

第八步：實驗數據處理

六組數據測試完畢后，點記主菜單上的“實驗數據”按鈕，調出數據處理窗口，在工作曲線頁點擊“繪制工作去先”按鈕，系統(tǒng)會自動繪制工作曲線，并根據工作曲線給出待測溶液的濃度。

如果計算機安裝了打印機，可以點擊右上角“打印報表”按鈕打印實驗報告。

第十步：實驗完畢

取出暗箱中的吸收池，關閉暗箱，關閉電源。然后清洗吸收池、整理現(xiàn)場。

７

原子吸收分光光度計仿真實驗

一、實驗概述：

原子吸收分光光度分析法又稱原子吸收光譜分析法，是根據物質產生的原子蒸氣對特定波長的光的吸收作用來進行定量分析的。

與原子發(fā)射光譜相反，元素的基態(tài)原子可以吸收與其發(fā)射波長相同的特征譜線。當光源發(fā)射的某一特征波長的光通過原子蒸氣時，原子中的外層電子將選擇性地吸收該元素所能發(fā)射的特征波長的譜線，這時，透過原子蒸氣的入射光將減弱，其減弱的程度與蒸氣中該元素的濃度成正比，吸光度符合吸收定律：

A=lg（I0/I）=KcL

根據這一關系可以用工作曲線法或標準加入法來測定未知溶液中某元素的含量。

在火焰原子吸收光譜分析中，分析方法的靈敏度、準確度、干擾情況和分析過程是否簡便快速等，除與所用儀器有關外，在很大程度上取決于實驗條件。因此最佳實驗條件的選擇是個重要的問題。本實驗在對鈉元素測定時，分別對燈電流、狹縫寬度、燃燒器高度、燃氣和助燃氣流量比（助燃比）等因素進行選擇。

二、實驗裝置：

本實驗仿真的設備是AA320型原子吸收分光光度計，主要設備參數如下： 波長范圍：190.0~900.0 nm 光柵刻線：1200 條/mm 閃躍波長：250 nm 線色散倒數：2.38 nm/mm 狹縫寬度1~6檔對應的nm數分別為：0.2，0.4，0.7，1.4，2.4，5.0 ８

原子吸收分光光度計的放大圖：

三、實驗操作： 第一步：選取實驗

點擊主菜單上的“試驗選取”，會出現(xiàn)如下的對話框：

用鼠標左鍵點中你要做的實驗，此文件名會出現(xiàn)在對話框的“文件名”一欄的文本框 中，在此實驗文件上面雙擊左鍵或者點擊“打開”按鈕打開實驗文件。

選取實驗后回到實驗主界面，窗口上面的標題欄會顯示實驗名稱+實驗文件名稱。第二步：打開電源

在主界面上用鼠標點擊原子吸收分光光度計，會出現(xiàn)原子吸收分光放大圖，用鼠標點擊右下角的總電源開關打開電源。

９

第三步：打開空氣壓縮機電源開關

打開原子吸收分光光度計的總電源開關后，用鼠標點擊窗口右下角的“返回”按鈕回到主界面，然后點擊空氣壓縮機，會出現(xiàn)空氣壓縮機窗口，如圖所示：用鼠標點擊空氣壓縮機電源開關打開電源，電源上面的指示燈會亮起來。

打開電源開關后，關閉空氣壓縮機的窗口回到主界面。

第四步：選擇陰極燈 回到主界面后，點擊原子吸收分光光度計出現(xiàn)原子吸收分光光度計放大圖，用鼠標點擊左上的陰極燈箱，會出現(xiàn)陰極燈窗口。

１０

做實驗時要根據待測元素的不同選擇相應的元素燈。用鼠標左鍵點擊左上角的陰極燈的種類，會出現(xiàn)陰極燈選擇畫面：

用鼠標左鍵點擊要選的陰極燈，然后點擊陰極燈電源開關接通電源，燈被點亮。關閉此窗口回到原子吸收分光光度計畫面，然后進行下一步。

１１

第五步：粗調節(jié)陰極的燈電流

點擊原子吸收分光光度計上的陰極燈電流指示位置，會出現(xiàn)陰極燈電流調節(jié)窗口：

在調節(jié)旋鈕上點擊鼠標左鍵增大電流，點擊右鍵減小電流。根據實驗要求，調節(jié)電流再8~11mA之間。然后關閉電流表調節(jié)窗口，回到原子吸收分光光度計畫面。

第六步：波長掃描

用鼠標點擊原子吸收分光光度計右下的波長掃描按鈕，左邊白色的按鈕是在一定范圍內自動從大到小掃描，灰色按鈕是在一定范圍內自動從小到大掃描，系統(tǒng)會自動掃描找到最合適的波長。

第七步：調節(jié)多功能面板

用鼠標點擊原子吸收分光光度計右上的多功能面板，出現(xiàn)多功能面板的放大圖。

１２

多功能面板上的調節(jié)旋鈕用鼠標左鍵點擊逆時針旋轉，用鼠標右鍵點擊順時針旋轉。調節(jié)“方式”到“調整”檔，然后關閉多功能面板窗口回到原子吸收分光光度計畫面。

第八步：調節(jié)陰極燈位置

用鼠標步左鍵點擊原子吸收分光光度計右下的能量表，會出現(xiàn)能量表的放大圖，用鼠標點中能量表窗口的藍色標題欄，然后按住左鍵移動鼠標，窗口就會跟隨鼠標的軌跡移動，按照此方法把能量表窗口移動到屏幕靠邊上的位置。然后用鼠標點擊原子吸收分光光度計的陰極燈箱，出現(xiàn)陰極燈調節(jié)窗口。此時應調節(jié)窗口的位置，使得在調節(jié)陰極燈位置的時候可以看到能量儀表。

１３

分別在垂直和水平方向上調節(jié)陰極燈的位置，使得獲得的能量最大，調節(jié)的時候一定要反復多試幾次，如果在最大點位置附近移動一兩下不好調準，可以先移動到最大點位置比較遠的地方再向回調，如此反復幾次，找準最大能量的位置。如果調整到最大能量后能量表指針偏出了紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。調節(jié)好以后，關閉陰極燈窗口。不要關閉能量表窗口。

第九步：微調波長

用鼠標點擊原子吸收分光光度計的波長微調旋鈕，左鍵增加，右鍵減小，使獲得最大的能量輸出。如果調整到最大能量后能量表指針偏出了紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。不要關閉能量儀表，進入下一步。

第十步：調節(jié)狹縫寬度

點擊原子吸收分光光度計右上的多功能面板，調整多功能面板窗口和能量窗口的位置，使得再多功能面板上操作的時候能夠看見能量窗口。

１４

用鼠標點擊狹縫調節(jié)旋鈕，左鍵點擊逆時針旋轉，右鍵點擊順時針旋轉，調節(jié)需要的狹縫寬度，一般情況下狹縫越小，能量越小，太小的能量不利于測定，狹縫越大，能量越大，但是可能會引起光譜通帶的增加而產生其他共振線的吸收而影響實驗結果，因此狹縫的寬度要根據具體實驗來定。選擇好狹縫寬度后，如果能量表的指針偏出紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。調節(jié)好以后，關閉多功能面板和能量表，然后在原子吸收分光光度計畫面上點擊右下角的“返回”按鈕返回到主界面。

第十一步：打開乙炔鋼瓶

在主界面上點擊乙炔鋼瓶，會出現(xiàn)乙炔鋼瓶的放大窗口。

先打開乙炔總閥，用鼠標左鍵點擊乙炔總閥，總閥會自動打開，再次用鼠標左鍵點擊后自動關閉。然后調節(jié)乙炔支閥，左鍵點擊增加開度，右鍵點擊減小開度，調節(jié)支壓力表的壓力到足夠大。在真實實驗中，如果支閥壓力太小，可能造成火焰無法點燃，建議壓力不小于0.15Mpa。調節(jié)完成后，關閉乙炔鋼瓶窗口，回到主界面。

第十二步：接通氣路、點火

在主界面上點擊原子吸收分光光度計，出現(xiàn)原子吸收分光光度計放大圖。用鼠標左鍵點擊原子吸收分光光度計中間下部的氣路開關部分，出現(xiàn)氣路開關放大的窗口，從左到右依次點擊打開各個開關，然后關閉窗口。

１５

打開氣路開關以后，關閉氣路開關窗口回到原子吸收分光光度計畫面，用鼠標左鍵點住點按鈕幾秒鐘，火焰即被點燃。

注：真實實驗中，點火前要先進行室內排風，本實驗忽略了這一環(huán)節(jié)。

第十二步：調零

打開原子吸收分光光度計右上的多功能面板，點擊“方式”旋鈕使調整到“吸光度”位置后，關閉多功能面板。點擊主窗體左邊的菜單中的“溶液選取”按鈕或者右下角的溶液燒杯選取溶液

點擊“溶液選取”框內的下拉條，選取“空白樣液”，然后點擊窗口下部的“選取”按鈕，系統(tǒng)會將所選的溶液自動噴入霧化器。

１６

點擊原子吸收分光光度計右下的調零按鈕進行調零，左右兩個鍵功能相同。

第十三步：調節(jié)燃燒器位置

任意選取一份在線性范圍的標準對比樣液

點擊“選取”按鈕自動噴入霧花器后，儀器會現(xiàn)實一定的吸光度值，此時點擊原子分光光度計中下部的燃燒器位置調節(jié)旋鈕，兩個旋鈕中上面的是調垂直位置，左鍵點擊燃燒器向下移動，右鍵點擊向上移動，下面的旋鈕是調水平位置，左鍵點擊向右移動，右鍵點擊向左移動，調整的同時密切注意吸光度的變化，找到吸光度最大的位置。

１７

第十四步：微調陰極燈電流

同時打開能量表和陰極燈電流表，調整兩個窗口的位置，使得在調節(jié)電流表的時候可以看到能量表和吸光度值

微調陰極燈電流的原則是：在保證有足夠且穩(wěn)定的光強輸出條件下，選擇低的工作電流，沒有特別的數量限制，根據實驗要求而定，一般是先選定大致的測量條件，然后選定一個大致的燈電流的范圍，然后噴入標準溶液，在選定的燈電流范圍內每隔1~2mA測量一次，計算 １８

平均值和標準偏差，并繪制吸光度與燈電流的關系曲線，選取靈敏度高、穩(wěn)定性好的條件為工作條件。對于本實驗，10mA為最佳值，省略了選擇的過程。如果調整電流后能量表指針偏出了紅色區(qū)域，可以用增益旋鈕調節(jié)使指針回到紅色范圍。調節(jié)好以后，關閉能量表和陰極燈電流表。

注：在實驗中調節(jié)陰極燈的電壓、電流以及能量增益按鈕都可以改變能量輸出值的大小；實際上，在新式的陰極燈中，一般沒有電壓調節(jié)鈕，它的能量增益鈕能自動控制電壓。

第十三步：調節(jié)空氣和乙炔的流量

用鼠標點擊原子吸收分光光度計左下的空氣和乙炔流量調節(jié)位置出現(xiàn)空氣和乙炔的流量調節(jié)窗口，調整窗口位置，使得在調節(jié)空氣和乙炔流量的時候可以看到吸光度數值，左邊的轉子流量計指示空氣的流量，右邊的轉子流量計指示乙炔的流量，左邊的旋鈕調節(jié)空氣的流量，右邊的旋鈕調節(jié)乙炔的流量。首先固定空氣流量（具體值由實驗確定），改變乙炔流量，使當前液指示吸光度最大。接著固定乙炔流量，改變空氣流量，使當前液指示吸光度最大。

第十四步：樣品測試和數據記錄

前面已經把儀器調節(jié)好，不要在改變實驗條件，打開多功能面板，把“信號”旋鈕轉到“積分”位置（由于吸光度的值一直在變化，旋轉“信號”旋鈕到“信號積分”位置，這可使變化速率變慢）。點擊左邊菜單的“溶液選取”或者燒杯選擇溶液，依次測量各標準溶液和未知溶液，且在每次測試前都要用空白樣液校零。每測量一種溶液后，要記錄數據，點擊左邊菜單的“試驗數據”按鈕打開數據記錄窗口，按照所列的項目依次讀取數據并寫入數據，然 １９

后點即“取消”按鈕關閉記錄窗口。

測量并記錄完最后一組數據后，點擊數據記錄窗口上的“試驗報告”按鈕進入實驗數據處理。

第十五步：數據處理

記錄完最后一組數據后，點擊“試驗報告”按鈕，出現(xiàn)實驗報告界面：

２０

此時就可以根據實驗數據確定待測元素的濃度。如果計算機安裝了打印機，可以點擊右上角“打印報表”按鈕打印實驗報告。

第十六步：實驗完畢

實驗結束后，吸入去離子水2~3min，先關乙炔，再關空氣。

關閉燈電源開關及總電源開關，將儀器上各旋鈕轉至零位，最后關閉通風裝置電源。

２１

氣相色譜仿真實驗

一、實驗概述：

實現(xiàn)色譜分離的先決條件是必須具備固定相和流動相。固定相可以是一種固體吸附劑，或為涂漬于惰性載體表面上的液態(tài)薄膜，此液膜可稱作固定液。流動相可以是具有惰性的氣體、液體或超臨界流體，其應與固定相和被分離的組分無特殊相互作用（若流動相為液體或超臨界流體可與被分離的組分存在相互作用）。

色譜分離能夠實現(xiàn)的內因是由于固定相與被分離的各組分發(fā)生的吸附（或分配）系數的差別，其微觀解釋就是分子間的相互作用力（取向力、誘導力、色散力、氫鍵力、絡合作用力）的差別。

實現(xiàn)色譜分離的外因是由于流動相的不斷流動。由于流動相的流動使被分離的組分與固定相發(fā)生反復多次（達幾百、幾千次）的吸附（或溶解）、解吸（或揮發(fā)）過程，這樣就使那些在同一固定相上吸附（或分配）系數只有微小差別的組分，在固定相上的移動速度產生了很大的差別，從而達到了各個組分的完全分離。

二、實驗裝置：

本實驗仿真的設備是GC102型氣相色譜儀，該產品為實驗室用的填充相氣相色譜儀，具有熱導、氫焰二種檢測器，定溫控制恒溫槽及氣流控制裝置。主要設備參數如下： 檢測器靈敏度：熱導池：S≥1000mVml/mg；載氣H2樣品C6H6

－氫焰：Mt≤1×1010g/sec；載氣N2樣品C6H6

檢測器穩(wěn)定性：基線漂移：≤0.05mV/h 層析柱恒溫室：室溫＋40℃－300℃ 恒溫精度：±0.3℃

２２

有效區(qū)最大溫差：2℃ 氣化室：最高400℃

氣相色譜儀各部分介紹：

三、實驗操作： 第一步：選取實驗

點擊主菜單上的“實驗選取”，會出現(xiàn)如下的對話框：

用鼠標左鍵點中你要做的實驗，此文件名會出現(xiàn)在對話框的“文件名”一欄的文本框 中，在此實驗文件上面雙擊左鍵或者點擊“打開”按鈕打開實驗文件。

選取實驗后回到實驗主界面，窗口上面的標題欄會顯示實驗名稱+實驗文件名稱。

第二步：確認操作條件

點擊主菜單上的“操作條件”，會出現(xiàn)如下的操作條件列表：

２３

在實驗調節(jié)過程中，請以此列表內的條件為準進行調節(jié)，否則不能正確輸出色譜峰。

第三步：開載氣

用鼠標點擊實驗主界面上三個氣體鋼瓶中的載氣鋼瓶，出現(xiàn)鋼瓶的調節(jié)閥畫面：

當閥關閉時，用鼠標左鍵點擊打開，當閥打開時，用鼠標左鍵點擊關閉。打開總閥和減壓閥，注意開關閥門的順序。

第四步：檢查柱前壓力

點擊氣相色譜儀上的柱前壓力表，查看柱前壓力是否符合操作條件。

２４

注意：在仿真實驗中，柱前壓力都默認是正確值，在真實實驗中，應該根據實驗的具體要求用鋼瓶的減壓閥調節(jié)柱前壓力。

第五步：調節(jié)載氣流量

點擊氣相色譜儀上的流量調節(jié)部分，會出現(xiàn)流量調節(jié)器和皂膜流量計。

一般氣相色譜儀的流量調節(jié)部分都有三個調節(jié)器，分別控制載氣、氫氣、空氣（后兩者用于FID檢測氣），但是轉子流量計的指示都不是很準確，因此都要加一個皂膜流量計來進行精確的測定。界面上的三個流量調節(jié)旋鈕，左鍵點擊增加流量，右鍵點擊減小流量，調節(jié)到一定開度后，轉子流量計中的轉子上升到了一定的高度，此時用鼠標左鍵點擊皂膜流量計的橡皮頭，產生一個皂膜，被載氣推動由下向上運動，記錄皂膜通過一定體積的時間就可以求出載氣的流量，載氣的精確流量在上面自動計算顯示出來。在仿真實驗中，為了簡便，用皂膜流量計測量過一次以后，以后再調節(jié)流量調節(jié)旋鈕時，精確流量就會自動顯示，不用反復測量，在真實實驗當中，是每次都重新測量的。

調節(jié)載氣流量到實驗操作條件要求的數值，然后進行下一步。

第六步：打開電源

用鼠標點擊打開氣相色譜儀上的電源開關。

關的狀態(tài)：

開的狀態(tài)：

第七步：調節(jié)溫度

用鼠標點擊氣相色譜儀的溫度調節(jié)步部分，出現(xiàn)溫度調節(jié)詳細畫面。

２５

調節(jié)溫度時，用鼠標點擊相應數字位上的“+”或者“—”，該數字位就會加1或者減1。按照實驗操作條件要求分別調節(jié)柱室（柱溫）、進樣器（氣化室溫）、離子室（離子室溫）的溫度，注意：柱室的溫度是X1的，而進樣器和離子室的溫度是X10的。

第八步：調節(jié)TCD參數（如果用FID檢測器，此步應該調節(jié)FID參數）

用鼠標點擊氣相色譜儀上的TCD調節(jié)面版。

首先用鼠標點擊電源開關接通電源，指示燈亮。然后根據實驗的要求選擇橋電流和衰減比。如果電流表指示的電流稍有偏差，可以用“電流微調”旋鈕調節(jié)。“零調”旋鈕可以用來調節(jié)記錄筆在記錄紙上的位置，粗調位置變化大，細調位置變化小。然后點擊落筆開始走基線。

調節(jié)好各項參數，基線走平穩(wěn)后，可以進行下一步——“進樣”。

注意：對于使用FID檢測器的實驗，此步應該調節(jié)FID參數，如下圖：

２６

然后還要開氫氣、壓縮空氣（助燃氣），點火等步驟。

第九步：進樣

所有的實驗參數調節(jié)好之后，點擊主界面上的注射進樣器，出現(xiàn)如下對話框：

輸入實驗操作條件規(guī)定的進樣量，然后點擊“開始進樣”按鈕。系統(tǒng)會自動注射進樣，記錄儀開始畫出色譜圖。

當色譜峰輸出完成后，會出現(xiàn)如下對話框：

點擊“確定”按鈕關閉對話框。

第十步：數據處理

２７

點擊主界面上的“實驗數據”按鈕，出現(xiàn)實驗報告界面：

根據得出的保留時間、峰高、半峰寬等實驗數據，可以計算分離度等相關參數。如果計算機安裝了打印機，可以點擊右上角“打印報表”按鈕打印實驗報告。

第十一步：實驗完畢

在真實實樣當中，實驗完畢半小時后，按開機步驟反方向關機：

1、關閉記錄儀電源，臺起記錄筆

2、將橋電流關至最小，關閉熱導電源和氫火焰離子放大器電源

3、依次將柱室、進樣器、離子室的溫度調節(jié)至常溫

4、關閉總電源

5、打開柱室，等柱溫接近室溫時，關閉載氣。

6、最后清洗進樣器。

２８

高效液相色譜仿真實驗

一、實驗概述：

以液體做流動相的色譜稱為液相色譜。人們把已經比較成熟的氣相色譜理論應用于液相色譜，使液相色譜得到了迅速的發(fā)展。隨著其他科學技術的發(fā)展，出現(xiàn)了新型的高壓輸液泵、高效的固定相和柱填充技術、高靈敏度的檢測器，加上計算機的應用，使得液相色譜實現(xiàn)了高效率和高速度。這種分離效率高、分析速度快的液相色譜稱為高效液相色譜（High performance liquid chromatography, HPLC）。

二、實驗裝置：

Agilent(安捷倫)1100系列液相色譜系統(tǒng)簡介：

Agilent1100系列HPLC組件和系統(tǒng)，將Agilent長期的化學分析經驗與領先的計算機技術結合，把網絡技術引入了實驗室。從1996年以來，在全球已經安裝了超過130,000臺1100組件和55,000多套化學工作站數據處理系統(tǒng)，成為目前單一型號市場占有率最高的液相色譜系統(tǒng)。

本仿真軟件是模擬用Agilent化學工作站的數據處理系統(tǒng)進行樣品分析和數據采集（色譜圖）的過程。

注：本軟件只是模擬分析的過程和內容，并不涉及其原理，所以實驗中的參數調節(jié)對結果并沒有影響，而真實實驗結果是隨參數的變化而變化的，這一點需要特別注意！

實驗主界面：

２９

化學工作站界面：

三、實驗操作： 第一步：選取實驗

點擊主菜單上的“實驗選取”，會出現(xiàn)如下的對話框：

用鼠標左鍵點中你要做的實驗，此文件名會出現(xiàn)在對話框的“文件名”一欄的文本框 中，在此實驗文件上面雙擊左鍵或者點擊“打開”按鈕打開實驗文件。

３０

第二步：確認操作條件

點擊主菜單上的“操作條件”，會出現(xiàn)如下的操作條件列表：

第三步：加入試劑

點擊儀器上的自動進樣器部分（當鼠標移到儀器的各部分時會出現(xiàn)相應的說明），出現(xiàn)如下畫面：

在實驗調節(jié)過程中，請以此列表內的條件為準進行調節(jié)，否則不能正確輸出色譜峰。

點擊下面的試劑小瓶，會自動放置到自動進樣器的托盤中。

完成后，點擊主界面上的電腦啟動化學工作站。

第四步：編輯方法

擊主界面上的電腦啟動化學工作站開始編輯方法。

所謂方法就是一個參數集，它包括分析一個樣品所需要的所有的參數：數據采集參數、數據分析參數和命令行或者宏指令。

點擊菜單“方法→編輯方法”開始編輯方法（注意：此時不可以改變方法的參數，可改變的參數將在下面特別說明）：

３１

然后會出現(xiàn)下面的窗口讓你選擇編輯方法的內容：

用鼠標點擊復選框選擇要編輯的方法的內容，然后點擊“確定”按鈕開始方法編輯，點擊“取消”按鈕終止方法編輯。

開始方法編輯后，系統(tǒng)會根據你選擇的內容分別依次顯示每一部分的具體內容，點擊“確定”按鈕進入下一部分，點擊“取消”按鈕終止方法編輯。

完成方法編輯后，系統(tǒng)會回到主操作界面，此時色譜柱已經開始升溫，在圖形界面中會有顯示，如下圖中紅色圓圈標示區(qū)域所示：

３２

特別說明：

對于本實驗要改變的參數，可以點擊化學工作站軟件界面中央的圖示的進樣器、溶劑系統(tǒng)、色譜柱、檢測器等部分，會彈出各部分參數窗口，此時可以按照實驗要求的參數進行調節(jié)（實驗參數可以點擊主界面上左邊菜單中的“實驗數據”按鈕察看）。進樣器：

溶劑系統(tǒng)：

３３

色譜柱：

檢測器：

編輯方法完成后，在啟動系統(tǒng)之前，請返回液相色譜儀，打開二元泵系統(tǒng)，調節(jié)Purge閥，觀察使回路無汽泡。

第五步：調節(jié)Purge閥

點擊儀器上的二元泵系統(tǒng)部分（當鼠標移到儀器的各部分時會出現(xiàn)相應的說明），出現(xiàn)如下畫面：

３４

圖中藍色方框部分就是Purge閥，此時是關閉的，用鼠標點擊藍色方框部分，會出現(xiàn)Purge閥的放大畫面，然后點擊Purge閥會自動逆時針方向旋轉打開Purge閥。

打開Purge閥后，右邊的試劑瓶的導管當中會有氣泡流出，待沒有氣泡再流出之后，再次點擊Purge閥會自動逆時針方向旋轉關閉Purge閥。然后進行下一步“啟動系統(tǒng)”。

第六步：啟動系統(tǒng)

完成方法編輯后，點擊菜單“設備→系統(tǒng)開”或者圖中紅色圓圈指示的按鈕“開啟系統(tǒng)”:

３５

啟動系統(tǒng)后，在圖形界面中會有顯示，如下圖中紅色圓圈標示區(qū)域所示：

同時在色譜峰顯示區(qū)域開始走基線，開始的時候系統(tǒng)不穩(wěn)定，基線變化很厲害，等到基線走平穩(wěn)表示系統(tǒng)穩(wěn)定后，可以開始進樣運行方法。

第七步：進樣、運行方法

等到狀態(tài)指示欄顯示“Ready”后，表明系統(tǒng)已經準備完畢。點擊菜單“運行控制→運行方法”開始進樣和分析，或者點擊圖中紅色圓圈所指示的“Start”按鈕或者按“F5”鍵：

３６

開始進樣后，在圖形界面中會有顯示，如下圖中紅色圓圈標示區(qū)域所示：

３７

待色譜圖出完后，樣品分析完畢。

第八步：完成實驗報告

樣品分析完成后，點擊化學工作站界面上的紅色方框部分，或者點擊主界面左邊菜單中的“實驗數據”調出實驗報告：

３８

根據得出的保留時間、峰高、半峰寬等實驗數據，可以計算分離度等相關參數。如果計算機安裝了打印機，可以點擊右上角“打印報表”按鈕打印實驗報告。

３９

第三篇：《儀器分析實驗》復習題

《儀器分析實驗》復習題

1、單光束和雙光束紫外吸收光譜儀的結構有什么特點？

2、紅外光譜法中，對試樣有哪些要求？

3、pH玻璃電極的原理，如何測定pH值

答：玻璃電極法測定水樣的PH值是以飽和甘汞電極為參比電極，以玻璃電極為指示電極，與被測水樣組成工作電池，再用PH計測量工作電動勢，由PH計直接讀取PH值。

4、為什么熒光光度計使用的比色皿是四面透光的？ 答：如果在一條直線上 那是測吸光度的

熒光分光光度計入射光源和檢測器的方向是垂直的 這樣在垂直方向上 就不可能有入射光

而激發(fā)的熒光在四個方向上都有 在垂直方向上檢測 干擾最小 所以四面透光

不是四面透光，只有倆面透光，透光面是為了不同波長的激發(fā)光穿透比色皿與比色皿內的待測物質發(fā)生物理作用而測定物質的濃度等，不透光的倆面是為了方便實驗操作人員用手抓取放置比色皿

5、在極性、非極性色譜柱上的出峰順序是如何確定的？

答：對于同分異構體來說，極性柱上是極性弱的組份先出峰，極性強的組份后出峰。其它情況下不一定。對于同系物來說，非極性柱上是沸點低的先出峰，沸點高的后出峰。其它情況不一定。

6、在原子吸收光譜法中，峰值吸收代替積分吸收的條件是什么？

7、簡述火焰原子化器（包括霧化器）的工作原理。

8、從速率理論可以看出有哪些因素可以影響色譜的柱效？在什么情況下應采用相對分子質量較大的載氣，什么情況下應采用相對分子質量較小的載氣？如何確定最佳流速？

9、原子吸收分析中，若產生下述情況而引致誤差，應采用什么措施來減免之？

（１）光源強度變化引起基線漂移，（２）火焰發(fā)射的輻射進入檢測器（發(fā)射背景），（３）待測元素吸收線和試樣中共存元素的吸收線重疊．

10、在電導滴定過程中，為什么溶液的電導會發(fā)生連續(xù)變化，解釋鹽酸、醋酸的電導滴定曲線。設計電導法測定鹽酸、醋酸混合液的實驗方案。

第四篇：《儀器分析實驗》指導書

編寫

劉開敏

化學工程與技術系

2008年3月

《儀器分析實驗》指導書

目

錄

鄰菲羅啉分光光度法測定鐵??????????????????????1 電位法測定水溶液的pH值??????????????????????4 醋酸的電位滴定和酸常數測定?????????????????????6 水中氟化物的測定－離子選擇電極法??????????????????8 氣相色譜定量分析?????????????????????????10 紫外分光光度法測定苯甲酸含量???????????????????11 熒光法測定維生素B2????????????????????????13 水質 鉀和鈉的測定 火焰原子吸收分光光度法?????????????15 原子吸收分光光度法測定自來水中鎂的含量??????????????19 苯、萘、聯(lián)苯的高效液相色譜分析及柱效能的測定???????????21

鄰菲羅啉分光光度法測定鐵

一、實驗內容：

1.吸收曲線的制作。

2.標準曲線的制作。

3.未知水樣的鐵含量的測定。

二、準備工作 1、722S型分光光度計20臺（二人一臺）。

2、通知儀器室準備20套儀器：

(1)50ml容量瓶7只。

(2）1ml刻度吸管1支。

(3）吸球1只。

(4）洗瓶1只。

(5）400ml燒杯（廢液杯）1只。3.準備好公用儀器：

(l）1ml刻度吸管（發(fā)樣品用）1支。

(2）100ml小燒杯（發(fā)標準Fe3+）20只。

(3）自動加液器二套（6只），盛放HAc－NaAc緩沖溶液，1％鹽酸羥胺及0.1％鄰菲羅啉。

4.試劑：

（1）100μg／mlFe3+標準溶液：準確稱取1.9gNH4Fe(SO4)2·12H2O于100ml燒杯中，加入1：1HCl20ml及少量水，溶解后，轉移到1L容量瓶中，用水稀釋到刻度、搖勻。

（2）0.10％鄰菲羅啉水溶液：將0.100g鄰菲羅啉溶于加有2～3滴濃HCl的蒸餾水100ml中，貯于棕色瓶內。

（3）HAc－NaAc緩沖溶液：取12.9mlC.P.級HAc及34gC.P.級NaAc·3H2O溶于水中，稀釋至1000ml。

（4）1％鹽酸羥胺水溶液：取1g鹽酸羥胺溶于水中，稀釋至100ml。

5.未知樣品

不另配制，直接將標準Fe3+液發(fā)于同學交上來的容量瓶中，發(fā)放體積應介于0.2～1.0ml間，可為0.3，0.5，0.7，0.9ml。未知樣品體積以1ml計。

三、提問內容：

1.在本實驗中，那些試劑加入量要比較準確，哪些試劑則可不必？為什么？

2.要使分光光度測定結果的誤差盡可能小一些，吸光度的最佳讀數范圍為多少？如何控制？

比色皿壁被有機試劑染上顏色，用水不易洗去，可試用HCl－C2H5OH（1：2）洗滌液浸泡，然后水洗，應避免使用毛刷或鉻酸洗滌液。

（3）比色皿的盛液量：比色皿內所裝溶液量不宜太少，致使光線無法照射到溶液上，也不宜太多，以使溶液灑出流入光度計內，一般以裝至比色皿高度的2/3～4/5為宜。

7.實驗中如用配制過久的鹽酸羥胺溶液，對分析結果將有何影響？

如鹽酸羥胺配制過久，則因其還原能力減弱，而無法將試樣中的Fe3+完全還原成Fe3+，并與鄰菲羅啉定量形成橙紅色絡合物，這樣將使測定結果偏低。

8.吸收曲線的制作：

吸取1.0ml 100μg／ml標準Fe3+溶液，注入50ml容量瓶中，加入5ml 1％鹽酸羥胺溶液，5mlHAc—NaAc緩沖液及3ml 0.10％鄰菲羅啉溶液，以水稀釋至刻度、搖勻。

在722S型分光光度計上，用1cm比色皿，采用試劑空白，在440～560nm間，每隔10nm測定一次吸光度，然后繪制A—λ吸收曲線，以選擇最適當的測定波長。

9.標準曲線的制作：

在5只容量瓶中，分別加入100μg／ml標準Fe3+液0.20ml，0.40ml，0.60ml，0.80ml及1.0ml（可利用上述那個，不必再配）。再各加入5ml 1％鹽酸羥胺溶液，5ml HAc-NaAc緩沖溶液和3ml 0.10％鄰菲羅啉溶液（次序不能顛倒），以水稀釋至刻度搖勻，在所選擇的波長下，用1cm比色皿，采用試劑空白，測定各溶液的吸光度，作出A－C工作曲線。

10.未知試樣中鐵含量的測定：

用洗凈的50ml容量瓶一只向教師領取1ml未知試樣（貼上標簽，寫上學號），按與標準溶液完全相同的步驟配成有色溶液，并搖勻，然后在與制作標準曲線完全相同的測試條件下測出其吸光度。由該吸光度值即可從工作曲線上查得相應的鐵含量。

五、計算公式

未知試樣含鐵量（p.p.m．）＝

六、評分標準

≤5‰

≤10‰

≤15‰

＞15‰

5分

4分

3分

2分

（1）選用儀器“pH”檔，將清洗干凈的電極浸入欲測標準pH緩沖溶液中，按下測量按鈕，轉動定位調節(jié)旋鈕，使儀器顯示的pH值穩(wěn)定在該標準緩沖溶液pH值；（2）松開測量按鈕，取出電極，用蒸餾水沖洗幾次，小心用濾紙吸去電極上水液；（3）將電極置于欲測試液中，按下測量按鈕，讀取穩(wěn)定值pH，記錄。松開測量按鈕，取出電極，按（2）清洗，繼續(xù)下個樣品溶液測量。測量完畢，清洗電極，并將玻璃電極浸泡在蒸餾水中。

2．雙標準pH緩沖溶液法測量溶液pH值

為了獲得高精度的pH值，通常用兩個標準pH緩沖溶液進行定位校正儀器，并且要求未知溶液的pH值盡可能落在這兩個標準pH溶液的pH值中間。

（1）按單位標準pH緩沖溶液方法步驟（1）﹑（2），選擇兩個標準緩沖溶液，用其中一個對儀器定位；

（2）將電極置于另一個標準緩沖溶液中，調節(jié)斜率旋鈕（如果沒設斜率旋鈕，可使用溫度補償旋鈕調節(jié)），使儀器顯示的pH讀數至該標準緩沖溶液的pH值；

(3)松開測量按鈕，取出電極，用蒸餾水沖洗幾次，小心用濾紙吸去電極上水液；再放入第一次測量的標準緩沖溶液中，按下測量按鈕，其讀數與該試液的pH值相差至多不超過0.05pH單位，表明儀器和玻璃電極的響應特性均良好。往往要反復測量﹑反復調節(jié)幾次，才能使測量系統(tǒng)達到最佳狀態(tài)；

(4)當測量系統(tǒng)調定后，將洗干凈的電極置于欲測試樣溶液中，按下測量按鈕，讀取穩(wěn)定pH值，記錄。松開測量按鈕，取出電極，沖洗凈后，將玻璃電極浸泡在蒸餾水中。

五﹑問題討論

1． 在測量溶液的pH值時，為什么pH計要用標準pH緩沖溶液進行定位？ 2． 使用玻璃電極測量溶液pH值時，應匹配何種類型的電位計？

3．為什么用單標準pH緩沖溶液法測量溶液pH值時，應盡量選用pH與它相近的標準緩沖溶液來校正酸度計？

用吸液管取1.00、3.00、5.00、10.00、20.00 mL氟化物標準溶液，分別置于5只50 mL容量瓶中，加入10mL總離子強度調節(jié)緩沖溶液，用水稀釋至標線，搖勻。分別移入100 mL聚乙烯杯中，放入一只塑料攪拌子，按濃度由低到高的順序，依次插入電極，連續(xù)攪拌溶液，讀取攪拌狀態(tài)下的穩(wěn)態(tài)電位值(E)。在每次測量之前，都要用水將電極沖洗凈，并用濾紙吸去水分。在半對數坐標紙上繪制E-lgcF-標準曲線，濃度標于對數分格上，最低濃度標于橫坐標的起點線上。

4．水樣測定

用無分度吸液管吸取適量水樣，置于50 mL容量瓶中，用乙酸鈉或鹽酸溶液調節(jié)至近中性，加入10mL總離子強度調節(jié)緩沖溶液，用水稀釋至標線，搖勻。將其移入100 mL聚乙烯杯中，放入一只塑料攪拌子，插入電極，連續(xù)攪拌溶液，待電位穩(wěn)定后，在繼續(xù)攪拌下讀取電位值(Ex)。在每次測量之前，都要用水充分洗滌電極，并用濾紙吸去水分。根據測得的毫伏數，由標準曲線上查得試液氟化物的濃度，再根據水樣的稀釋倍數計算其氟化物含量。

5．空白試驗

用去離子水代替水樣，按測定樣品的條件和步驟測量電位值，檢驗去離子水和試劑的純度，如果測得值不能忽略，應從水樣測定結果中減去該值。

當水樣組成復雜時，宜采用一次標準加入法，以減小基體的影響。其操作是：先按步驟4測定出試液的電位值(E1)，然后向試液中加入與試液中氟含量相近的氟化物標準溶液(體積為試液的1/10～1/100)，在不斷攪拌下讀取穩(wěn)態(tài)電位值(E2)，按下式計算水樣中氟化物的含量：

式中：Cx—水樣中氟化物(F-)濃度(mg/L)；

Vx—水樣體積(mL)；

cs—F-標準溶液的濃度(mg/L)；

Vs—加入F-標準溶液的體積(mg/L)；

△E—等于E1

氣相色譜定量分析

一、實驗目的

用苯作標準物，測定己烷、環(huán)己烷、甲苯的定量校正因子，根據色譜圖，用歸一法測定混合物中各組分的含量；用外標法測定混合物中甲苯的含量。學習定量校正因子的測定和氣相色譜常用的定量方法。

二、儀器與試劑

氣相色譜儀、熱導池檢測器、10微升注射器3支、色譜柱：不銹鋼色譜柱（長2米，內徑4毫米）

15%聚乙二醇—1000：6201擔體（60—80目）、苯、甲苯、己烷、環(huán)己烷（都為分析純）、混合物樣品

三、實驗步驟

1.色譜條件：

柱溫80oC；載氣，氮氣或氫氣15—20毫升/分鐘（柱后），檢測器溫度100℃，汽化室溫度120—150℃，橋電流130毫安。2.測定相對重量校正因子

在分析天平上，于5毫升中，按重量比大約2 :1的比例，稱取己烷和苯配制二元混合物。待色譜儀基線穩(wěn)定后，進樣分析二元混合物，重復3—5次。量取己烷和苯的峰面積，按公式求出己烷對苯的相對重量校正因子。以此為例，測定并求出環(huán)己烷對甲苯的相對重量校正因子。

3.定量測定各組分含量

（1）歸一化法

如果被測樣品中只含有己烷、環(huán)己烷和甲苯，并且三者相對重量校正因子均已求出，即可進被測樣品進行色譜分析，按歸一化法求出各組分的含量。（2）外標法

如果被測試樣中含有微量苯，預測定其含量，則可以甲苯為溶劑，配制已知濃度的苯標準溶液，用外標法測定試樣中苯的含量，具體方法如下：準確量取10毫升苯于100毫升容量瓶中，用甲苯稀至刻度，搖勻，作為標準儲備液（體積百分數，v/V）。準確分別量取1，2，3，4，5，6毫升儲備液于5個10毫升容量瓶中，用甲苯稀釋定容，搖勻，作為系列標準溶液。

將六個標準溶液分別進樣，每次1微升，測量各自的峰高（或峰面積）。以峰高（或峰面積）對苯濃度繪制工作曲線。取1微升被測樣品注入色譜分析，重復3次，取峰高（或峰面積）平均值，由工作曲線查出被測樣品中苯的濃度。

四、問題討論

1.在氣相色譜定量分析中，峰面積為什么要用校正因子校正？ 2.試說明歸一化法定量的適用范圍。

0

苯甲酸吸收曲線(10ug/mL)1.6001.4001.200吸光度1.0000.8000.6000.4000.2000.0002002052102************3103***335340345350波長

3.3 標準曲線的繪制

準確吸取苯甲酸標準溶液若干體積，稀釋成一系列不同濃度的標準溶液（0～16ug/mL），于最大吸收波長分別測出其吸光度。然后以濃度為橫坐標，以相應的吸光度為縱坐標繪制出標準曲線。3.4 樣品測定

由步驟3.2的測量結果，從標準曲線查出樣品的濃度。

五、結果計算

根據未知液的稀釋倍數，可求出未知溶液的濃度。

三、儀器與試劑

1.儀器

930 型熒光光度計（附液槽一對，漏光片一盒）容量瓶

毫升6個 吸量管

5毫升l支

棕色試劑瓶（500 mL）洗瓶（500 mL）冰箱 2.試劑

（1）100.0 mg·L1 －維生素B2標準貯備液準確稱取0.1000 g維生素B2,將其溶解于少量的1%乙酸 中，轉移至1 L容量瓶中，用1%乙酸稀釋至刻度，搖勻。（2）5.00 mg·L－1

－維生素B2工作標準溶液準確移取5.00 mL 100.0 mg·L1

維生素B2標準貯備液于1L容量瓶中，用1%乙酸稀釋至刻度，搖勻。

（3）待測液取市售維生素B2一片，用1%乙酸溶液溶解，在1 L容量瓶中定容。以上溶液均應裝于棕色試劑瓶中，置于冰箱冷藏保存溶液應保存在棕色瓶中，置于陰涼處。

四、實驗步驟

1．標準系列溶液的配制

在五個干凈的50 mL容量瓶中，分別加入1.00 mL，2.00 mL，3.00 mL，4.00 mL和5.00 mL 5.00 mg·L－1維生素B2工作標準溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。

2．標準系列溶液的測定

開啟儀器電源，預熱約10min。用蒸餾水作空白，從稀到濃測量標準系列溶液的熒光強度。

3．未知試樣的測定

取2.50 mL待測液置于50 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。用測定標準系列溶液時相同的條件，測量其熒光強度。

五、數據及處理

1．用標準系列溶液的熒光強度繪制標準曲線。2．根據待測液的熒光強度，從標準曲線上求得其濃度。3．計算藥片中維生素B2的含量，用mg/片表示。

六、思考題

1.在熒光測量時，為什么激發(fā)光的入射與熒光的接收不在一直線上，而呈一定角度？ 2.為什么要使用兩塊濾光片，其選擇的根據是什么？

參考資料

[1]H.H.Willard,L.L.Merritt and J.A.Dean,《Instrumental Methods ofAnalysis》，5th ed.,p.145,Nostrand,New York,1974。

[2]廈門大學化學系分祈化學教研室編，陳國珍主編，《螢光分析法》，第248頁，科學出版社，1975。

43.5.5 鈉標準使用溶液I，含鈉100.00mg／L：吸取鈉標準貯備溶液(3.5.2)10.00mL于100mL容量瓶中，加2mL硝酸溶液(3.2)，以水稀釋至際線，搖勻。此溶液可保存3個月。3.5.6 鈉標準使用溶液Ⅱ，含鈉10.00mg／L：吸取鈉標準使用溶液Ⅰ(3.5.5)10.00mL于100mL容量瓶中，加2mL硝酸溶液(3.2)，以水稀釋至標線，搖勻。此溶液可保存一個月。儀器

4.1 原子吸收分光光度計：儀器操作參數可參照廠家說明書進行選擇。

4.2 鉀和鈉空心陰極燈：靈敏吸收線為鉀766.5nm，鈉589.0nm；次靈敏吸收線為鉀404.4nm，鈉330.2nm。

4.3 乙炔的供氣裝置：使用乙炔鋼瓶或發(fā)生器均可，但乙炔氣必須經水和濃硫酸洗滌后，方可使用。

4.4 空氣壓縮機：均應附有過濾裝置，由此得到無油無水凈化空氣。

4.5 對玻璃器皿的要求：所用玻璃器皿均應經硝酸溶液(3.2)浸泡，用時以去離子水洗凈。采樣和樣品

水樣在采集后，應立即以0.45μm濾膜(或中速定量濾紙)過濾，其濾液用硝酸(3.2)調至pH1～2，于聚乙烯瓶中保存。分析步驟

6.1 試料的制備

如果對樣品中鉀鈉濃度大體已知時，可直接取樣，或者采用次靈敏線測定先求得其濃度范圍。然后再分取一定量(一般為2～10mL)的實驗室樣品于50mL容量瓶中，加3.0mL硝酸艷溶液(3.3)，用水稀釋至標線，搖勻。此溶液應在當天完成測定。6.2 校準溶液的制備 6.2.1 鉀校準溶液

取6只50mL容量瓶，分別加入鉀標準使用溶液(3.5.4)0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL，加硝酸艷溶液(3.3)3.00mL，加硝酸溶液(3.2)1.00mL，用水稀釋至標線，搖勻。其各點的濃度分別為：0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mg／L。本校準溶液應在當天使用。6.2.2 鈉校準溶液

取6只50mL容量瓶，分別加入納標準使用溶液Ⅱ(3.5.6)0，1.00，3.00，5.00，7.50，10.00mL，加3.00mL硝酸銫溶液(3.3)，加1mL硝酸溶液(3.2)，用水稀釋至標線，搖勻。其各點的濃度分別為0，0.20.0.60，1.00，1.50，2.00mg／L。本校準溶液應在當天使用。6.3 儀器的準備

將待測元素燈裝在燈架上，經預熱穩(wěn)定后，按選定的波長，燈電流，狹縫，觀測高度，空氣及乙炔流量等各項參數進行點火測量。

注意：在打開氣路時，必須先開空氣，再開乙炔；當關閉氣路時，必須先關乙炔，后關空氣，以免回火爆炸。

當點火后，在測量前，先以硝酸溶液(3.3)噴霧5min，以清洗霧化系統(tǒng)。

6對于鉀和鈉濃度較高的樣品，在使用本標準時會因稀釋倍數過大，降低測定的精密度、同時也給操作帶來麻煩。因一般的地表水中鉀和鈉的濃度都比較高，可使用次靈敏線鉀440.4nm、鈉330.2nm測定，濃度范圍可擴大到鉀為200mg／L以內，鈉為100mg／L以內。

附加說明：

本標準由國家環(huán)境保護局規(guī)劃標準處提出。本標準由黃河水資源保擴監(jiān)測中心站負責起草。本標準主要起草人馮榮周。

本標準委托中國環(huán)境監(jiān)測總站負責解釋。

83、濃鹽酸 優(yōu)級純，稀鹽酸溶液1 mol·L

4、純水 去離子水或蒸餾水

1四、實驗步驟

1、配制標準溶液系列

（1）標準溶液系列 準確吸取2.00、4.00、6.00、8.00、10.0mL上述鈣標準使用液，分別置于5只25mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻備用。該標準溶液系列鈣的濃度分別為8.00、16.0、24.0、32.0、40.0μg ·L-1。

（2）鎂標準溶液系列 準確吸取1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL上述鎂標準使用液，分別置于5只25mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻備用。該標準溶液系列鎂地濃度分別為2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg ·L-1。

2、配制自來水樣溶液 準確吸取適量（視未知鈣、鎂的濃度而定）自來水置于25mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

3、根據實驗條件，將原子吸收分光光度計按儀器操作步驟（見本章8.3.4節(jié)）進行調節(jié)，待儀器電路和氣路系統(tǒng)達到穩(wěn)定，記錄儀基線平直時，即可進樣。測定各標準溶液系列溶液的吸光度。

4、在相同的實驗條件下，分別測定自來水樣溶液中鈣、鎂的吸光度。

五、思考題

1、簡述原子吸收分光光度分析的基本原理。

2、原子吸收分光光度分析為何要用待測元素的空心陰極燈作光源？能否用氫燈或鎢燈代替，為什么？

3、如何選擇最佳的實驗條件？

4、原子化器有何作用？

5、樣品預處理的目的是什么？

0－

1－1

四、操作步驟

1．測定條件的選擇

（1）色譜柱長 250 mm，內徑 4.6 mm，裝填 C-18 烷基鍵合相，顆粒度 10μm 的固定相

（2）流動相 甲醇:水（83:17），流量 1.0 mL· min1

－（3）紫外光度檢測器 測定波長 254 nm（4）進樣量 20μL 2．儀器操作

（1）將配置好的流動相于超聲波發(fā)生器上，脫氣 15 min。

（2）將儀器按照儀器的操作步驟調節(jié)至進樣狀態(tài)，待儀器液路和電路系統(tǒng)達到平衡，基線平直時，吸取 60μL 標準工作液，進樣 20μL，記錄色譜圖，重復進樣兩次。

（3）吸取 60μL 樣品，進樣 20μL，記錄色譜圖，重復進樣兩次。

五、數據處理

1．記錄實驗測定條件

（1）色譜柱與固定相

（2）流動相及其流量

（3）檢測器

（4）進樣量

2．測量各色譜圖中苯、萘、聯(lián)苯等的保留時間tR及相應色譜峰的半峰寬Y1/2，計算各對應理論塔板n，并將數據列表。已知組分的出峰順序為苯、萘、聯(lián)苯。

3．求樣品中各組分的含量。

六、思考題

1．由計算得到的各組分理論塔板數說明了什么？

2．高效液相色譜采用 5~10 μm 粒度的固定相有何優(yōu)點？為什么？

第五篇：儀器分析教案

第三節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及其分離原理

【教學目標】

1.掌握液-液分配色譜法及化學鍵合相色譜法的分離原理，分配系數、固定相的類型和特點 2.熟悉高效液相色譜法的主要類型 3.熟悉高效液相色譜法的主要類型

4.了解各類高效液相色譜法的特點及應用 【教學重點】

液-液分配色譜法及化學鍵合相色譜法；分離原理；分配系數 【教學難點】

分配系數；分配系數與組分流出順序的關系 【復習題】

1.氣相色譜法有哪幾種類型？各類氣相色譜法的固定相與流動相的類型是什么？ 2.各類氣相色譜法的分離原理是什么？ 3.分配系數的定義是什么？意義是什么？

【講授新課】

與氣相色譜一樣，液相色譜分離系統(tǒng)也由兩相——固定相和流動相組成。液相色譜的固定相可以是固定液、吸附劑、化學鍵合固定相（或在惰性載體表面涂上一層液膜）、離子交換樹脂或多孔性凝膠；流動相是各種溶劑。被分離混合物由流動相液體推動進入色譜柱。根據各組分在固定相及流動相中的吸附能力、分配系數、離子交換作用或分子尺寸大小的差異進行分離。色譜分離的實質是樣品分子（以下稱溶質）與溶劑（即流動相或洗脫液）以及固定相分子間的作用，作用力的大小，決定色譜過程的保留行為。

根據其分離原理不同，高效液相色譜法可分為幾種類型：

一． 液-液分配色譜法及化學鍵合相色譜法

（一）液-液分配色譜法

1.固定相：將液體固定液涂漬在擔體上作為固定相。

流動相：液體。

且要求，流動相液體與固定相液體互不相溶。

2．分離原理：溶解——溶解分配平衡過程（組分溶解在固定相中—組分溶解在流動相中），類似于液液萃取機理。

溶質在兩相間進行分配時，在固定液中溶解度較小的組分較難進入固定液，在色譜柱中向前遷移速度較快；在固定液中溶解度較大的組分容易進入固定液，在色譜柱中向前遷移速度較慢，從而達到分離的目的。

3.分配系數：

當樣品中的被測定組分在固定相和流動相中達到動態(tài)平衡時，可以用分配系數來描述這個分配平衡過程：

其中，（1）分離的順序決定于分配系數的大小：

固定相對某組分的溶解力大于溶劑對某組分的溶解力，K↑，后流出色譜柱 固定相對某組分的溶解力小于溶劑對某組分的溶解力，K↓，先流出色譜柱

（2）某色譜條件下，兩組分分配系數差值為零，則代表兩組分在該色譜條件下不能分離。4.分類：

正相液-液色譜法：固定相極性＞流動相極性，極性較小組分先出峰，極性較大組分后出峰 適于分離極性較強的物質

反相液-液色譜法：固定相極性＜流動相極性

極性較大組分先出峰，極性較小組分后出峰 適于分離非極性至中等極性的物質

（二）化學鍵合相色譜法：

（1）固定相：將固定液通過化學反應共價鍵合到擔體（硅膠）表面作為固定相。

流動相：液體。

（2）分離原理：同液-液分配色譜法。（3）分配系數：同液-液分配色譜法。（4）分類：同液-液分配色譜法。

（三）液-液分配色譜法與化學鍵合相色譜法的對比

液-液分配色譜法 化學鍵合相色譜法 與擔體結合方式 涂漬 共價鍵合

柱效對比 較低 較高

固定液是否流失 是 否

能否進行梯度洗脫 否 能

另外，化學鍵合固定相表面固定液一般多為單分子層，因此無液坑，液層薄，傳質速度快；且有載樣量大，化學性能穩(wěn)定，重現(xiàn)性高，色譜柱壽命長等優(yōu)點。目前已經逐漸取代了傳統(tǒng)的液液分配色譜，成為液相色譜法中使用最廣泛的方法。

二．液-固吸附色譜法

1.固定相：液固吸附色譜法的固定相是固體吸附劑。吸附劑是一些多孔的固體顆粒物質，在它的表面通常存在吸附中心點，可以有效地從氣體或液體中吸附其中某些成分。流動相：液體

2.分離原理：吸附——吸附競爭平衡過程（組分吸附在固定相上—流動相吸附在固定相上）

流動相中的溶質分子X（流動相）被流動相S帶入色譜柱后，在隨流動相流動的過程中，發(fā)生如下交換反應：

其作用機制是被分離組分（溶質分子X）與流動相（溶劑分子S）爭奪吸附劑表面吸附活性中心的結果（競爭吸附）。在這個過程中，交換能力較強的溶質分子會競爭得到更多的吸附中心點，從而在色譜柱中移動較慢，從而達到分離的目的。3.分配系數：

其中，（1）分離的順序決定于分配系數的大小：

吸附劑對某組分的吸附力越強，K↑，后流出色譜柱 吸附劑對某組分的吸附力越弱，K↓，先流出色譜柱

（2）某色譜條件下，兩組分分配系數差值為零，則代表兩組分在該色譜條件下不能分離。

4.應用：

液固色譜法適用于分離分子量中等，能溶于有機溶劑的非離子性化合物，此外，液固色譜法對于分離具有不同官能團的結構相似的化合物、異構體有較高的選擇性。

三．離子交換色譜法

1.固定相：是一種帶電荷的官能團的固定基質，稱為離子交換劑。為保證交換劑的電中性，基質上還存在帶相反電荷的離子，稱為反離子。

目前常用的三大類離子交換劑基質：合成樹脂、纖維素、硅膠。流動相：具有一定pH和鹽濃度的緩沖溶液

2.分離原理：吸附——吸附競爭平衡過程（反離子吸附在固定相上—組分離子吸附在固定相上）

在離子交換過程中，流動相中存在的被分析離子（M+）與樹脂上吸附的反離子（Y-）之間發(fā)生競爭吸附，可用下列平衡表示：

陽離子交換： 陰離子交換：

被分離樣品中不同離子對交換劑具有不同的親和力，在發(fā)生競爭吸附時，不同的樣品離子交換反離子的能力也不同。對交換劑親和力較強的樣品離子，交換反離子的能力較強，從而在色譜柱中遷移速度較慢，從而達到分離的目的。3.分配系數：

以陰離子交換平衡過程為例，分配系數：

其中，（1）分離的順序決定于分配系數的大小：

溶質中某離子與離子交換劑的相互作用越強，K↑，后流出色譜柱 溶質中某離子與離子交換劑的相互作用越弱，K↓，先流出色譜柱

（2）某色譜條件下，兩組分分配系數差值為零，則代表兩組分在該色譜條件下不能分離。

4.應用：

離子交換色譜法特別適用于分離離子化合物、有機酸和有機堿等能電力的化合物和能與離子基團相互作用的化合物。它不僅廣泛地應用于有機物質，而且廣泛地應用于生物物質的分離，如氨基酸、核酸、蛋白質等生物分子，還能用于維生素的混合物、食品防腐劑、血清等的分離。5.分類：

陽離子交換色譜和陰離子交換色譜

【小結】

1． 固定相：

液-液分配色譜法 將液體固定液涂漬在擔體上作為固定相

化學鍵合相色譜法 將固定液通過化學反應共價鍵合到擔體（硅膠）表面作為固定相 液-固吸附色譜法 吸附劑 離子交換色譜法 離子交換劑 2．分離原理

液-液分配色譜法 溶解——溶解分配平衡過程（組分溶解在固定相中—組分溶解在流動相中）化學鍵合相色譜法 溶解——溶解分配平衡過程（組分溶解在固定相中—組分溶解在流動相中）液-固吸附色譜法 吸附——吸附競爭平衡過程（組分吸附在固定相上—流動相吸附在固定相上）離子交換色譜法 吸附——吸附競爭平衡過程（反離子吸附在固定相上—組分離子吸附在固定相上）3．各種色譜法的分配系數表示方法雖各不相同，但分配系數與組分流出順序的關系均可表述為，組分K↑，后流出色譜柱；組分K↓，先流出色譜柱。

【作業(yè)】

課后習題 2、6、9。

第九節(jié) 高效液相色譜法在食品檢測中的應用

【教學目標】

1.了解高效液相色譜法在食品檢測中的具體應用實例

2.能夠通過實例系統(tǒng)地了解之前所學關于高效液相色譜法的具體內容 3.了解食品高效液相色譜法前處理知識 【教學重點】

外標法定量的運用 【教學難點】

不同定量方法的運用 【復習題】

1.液相色譜法的主要定量方法包括哪幾種？

【講授新課】

5.動物源食品呋喃唑酮殘留量的測定

呋喃唑酮（痢特靈）是一種抗菌效果非常好的廣譜抗生素藥物，曾被廣泛應用于家禽、家畜、水產品中的疾病預防和治療。近年的研究表明，呋喃唑酮及其代謝物具有致基因突變和致癌性。美國1993年禁止呋喃唑酮作為獸藥，歐盟將其列為違禁藥品，我國農業(yè)部第235號公告中也規(guī)定動物性食品中呋喃唑酮檢出限為不得檢出。

（一）原理：反相色譜法

（二）色譜條件：

固定相：C18柱

流動相：乙腈—磷酸溶液 檢測器：Uv-vis檢測器 檢測波長：367nm 流速：1.0ml/min 進樣量：20ul

（三）測定方法： 1．試樣前處理：

固體試料破碎→混合→初分離→濃縮→再分離→過濾→供試樣液

2．測定方法（外標法）：

（1）標準對照品溶液的配制與測定：精密稱取呋喃唑酮標準對照品適量，配制成一定濃度的溶液Cs。在上述色譜條件下得到色譜流出曲線，呋喃唑酮的保留時間在4.5min附近，得到呋喃唑酮峰的峰面積As。

（2）樣品溶液測定：試樣溶液在上述色譜條件下分離得到試樣的色譜流出曲線，得到試樣中呋喃唑酮的峰面積Ax。

（3）外標法計算：利用下式即可計算的出樣品中的呋喃唑酮含量

二．高效液相色譜測定保健食品中的黃芪甲苷

黃芪是多年生草本豆科植物，藥用歷史悠久、廣泛。皂苷是黃芪中的主要有效成分之一，而黃芪皂苷以黃芪甲苷為主。黃芪甲苷具有增強機體免疫力、抗氧化、促進細胞生長，抑制內毒素等作用。所以在一些保健食品中，黃芪甲苷作為功能性添加劑成分有添加。例如，蜂膠黃芪軟膠囊、蟲草雞精口服液。

（一）原理：反相色譜法

（二）色譜條件：

固定相：C18柱 流動相：乙腈—水

檢測器：二極管陣列檢測器 檢測波長：227nm 流速0.8ml/min 進樣量：10ul

（三）測定方法（外標法峰面積標準曲線法）： 1．試樣前處理：

蟲草雞精口服液試樣→濃縮→定容→過柱（大孔吸附樹脂）→濃縮→過濾→供試樣液 2．測定方法：

（1）標準對照品溶液的配制與測定：精密稱取黃芪甲苷標準對照品適量，配制為濃度從低到高的一系列溶液C1……C5（5.0，10.0，20.0，40.0，50.0μg/mL）。在上述色譜條件下依次得到相應色譜流出曲線，并得到峰面積A1……A5。

（2）標準曲線的繪制：以峰面積A對濃度進行線性回歸，得線性回歸方程，即為標準曲線。

（3）樣品溶液測定：在標準曲線的線性范圍內，加載供試樣液，得到樣品色譜流出曲線，測量其中黃芪甲苷對應峰的峰面積。

將樣品黃芪甲苷峰的峰面積帶入線性回歸方程，利用標準曲線法即可算出樣品中的黃芪甲苷含量。

三．高效液相色譜法同時進行測定食品中安賽蜜、糖精、苯甲酸、山梨酸和咖啡因

食品添加劑若使用不當，添加過量，就會對人體產生毒副作用。

（一）原理：反相色譜法

（二）色譜條件：

固定相：C18柱

流動相：甲醇—檸檬酸銨 檢測器：Uv-vis檢測器 檢測波長215nm 流速1.0ml/min 進樣量20μL 柱溫40℃

（三）測定方法： 1．試樣前處理：

（1）乳狀液體樣品（果奶、冰淇淋等）：

試樣→沉淀蛋白質→過濾、脫氣→供試樣液

（2）澄清液體樣品（汽水、可樂等）：

試樣→脫氣→稀釋→過濾→供試樣液

（3）固狀樣品（肉制品、醬脆菜等）：

試樣→搗碎→加入溶劑→沉淀蛋白質→過濾、脫氣→供試樣液

2．測定方法（外標法峰高標準曲線法）：

（1）標準溶液配制：使用流動相配制安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、咖啡因標準溶液（1mg/mL），將各標準液按照安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、咖啡因比例依次為5.0、4.0、5.0、5.0、5.0μg/mL混合，得到混合標準溶液。將混合標準溶液用水稀釋成6個濃度C1……C6

（2）確定成分峰位置：首先用各自的標準溶液稀釋，在色譜條件下進行分析，定性確定每個峰對應的成分。

（3）標準曲線：在上述色譜條件下，6個濃度的混合標準溶液分別得到相應色譜流出曲線，并得到峰高h1……h(huán)6。以峰高h對含量進行線性回歸，得各種標準物質的線性回歸方程，即為標準曲線。

（4）樣品溶液測定：在標準曲線的線性范圍內，加載供試樣液，得到每種樣品的色譜流出曲線，測量其中添加劑對應峰的峰高。

將樣品添加劑相關峰的峰高帶入線性回歸方程，利用標準曲線法即可算出樣品中各種添加劑的含量。

四．反相高效液相色譜法測定巧克力中香蘭素

香蘭素是重要的食用香料之一，是食用調香劑，具有香莢蘭豆香氣及濃郁的奶香，是食品添加劑行業(yè)中不可缺少的重要原料，廣泛運用在各種需要增加奶香氣息的調香食品中，香蘭素是國家允許添加的食品添加劑，按國標添加不會對身體造成傷害。但大劑量食用可導致頭痛、惡心、嘔吐、呼吸困難，甚至損傷肝腎等。

（一）原理：反相色譜法

（二）色譜條件：

固定相：C18柱 流動相：甲醇—水 檢測器：Uv-vis檢測器 檢測波長：280nm 流速：1.0ml/min 進樣量：10μL 柱溫：35℃

（三）測定方法： 1．試樣前處理：

巧克力樣品→加水加溫溶解→定容→離心取上層清液→過濾→供試樣液

2．測定方法：

外標法峰面積標準曲線法定量

參見實驗二．高效液相色譜測定保健食品中的黃芪甲苷中的標準曲線測定方法

【小結】

1．樣品預處理：根據樣品狀態(tài)不同采用不同的預處理方法，再利用相似相溶粗提取要測的成分。2．分析實例中用的是反相色譜，其固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠，極性小于流動相（乙腈-水；乙腈-磷酸鹽；甲醇-水；甲醇-檸檬酸）。且分析的樣品都是弱極性、中等極性的樣品。3．含量測定：外標法（標準曲線法、峰面積法、峰高法）

【作業(yè)】

課后題 10。