第一篇：細胞實驗教案1（最終版）

細胞生物學實驗教案

實驗一細胞核與線粒體的分級分離

一、實驗目的

了解差速離心法分離細胞器的原理，以及練習使用差速離心法分離哺乳動物的細胞核與線粒體。

二、實驗原理

細胞內不同結構的比重和大小都不相同，在同一離心場內的沉降速度也不相同，根據這一原理，常用不同轉速的離心法，將細胞內各種組分分級分離出來。分離細胞器最常用的方法是將組織制成勻漿，在均勻的懸浮介質中用差速離心法進行分離，其過程包括組織細胞勻漿、分級分離和分析三步，這種方法已成為研究亞細胞成分的化學組成、理化特性及其功能的主要手段。勻漿(Homogenization)低溫條件下，將組織放在勻漿器中，加入等滲勻漿介質(即0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣)進行破碎細胞使之成為各種細胞器及其包含物的勻漿。分級分離(Fractionation)由低速到高速離心逐漸沉降。先用低速使較大的顆粒沉淀，再用較高的轉速，將浮在上清液中的顆粒沉淀下來，從而使各種細胞結構，如細胞核、線粒體等得以分離。由于樣品中各種大小和密度不同的顆粒在離心開始時均勻分布在整個離心管中，所以每級離心得到的第一次沈淀必然不是純的最重的顆粒，須經反復懸浮和離心加以純化。分析 分級分離得到的組分，可用細胞化學和生化方法進行形態和功能鑒定。

三、細胞核的分離提取(一)操作步驟

1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結締組織)盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。

2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。

3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉動研磨3～5次，用3層紗布過濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標記，自然干燥。

4．將裝有濾液的離心管配平后，放入普通離心機，以2500rpm，離心15分鐘；(1)緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中，待分離線粒體用；(2)同時涂一張上清液片②做好標記，自然干燥；(3)余下的沉淀物進行下一步驟。5．用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液懸浮沉淀物，以2500rpm離心15分鐘棄上清，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上，涂片③，自然干燥。

6．將①、②、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。

(二)結果

分別于高倍鏡下觀察三張涂片，描述鏡下所見。

四、高速離心分離提取線粒體(一)操作步驟

1．將裝有上清液的高速離心管，從裝有冰塊的燒杯中取出，配平后，以17000rpm離心20分鐘，棄上清，留取沉淀物。

2．加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化鈣液lml，用吸管吹打成懸液，以17000rpm離心20分鐘，將上清吸入另一試管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液混勻成懸液(可用牙簽)。

3．取上清液和沉淀物懸液，分別滴一滴于干凈載玻片上(分別標記④、⑤涂片)，各滴一滴0.02％詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鐘。(二)結果

油鏡下觀察，顆粒狀的線粒體被詹納斯綠B染成藍綠色。作業

光鏡或油鏡下觀察制備的細胞核與線粒體樣本。

實驗二細胞膜的通透性觀

一、實驗目的

1.掌握細胞膜通透性的實驗方法。

2.觀察并掌握相對分子量、脂溶性大小、電解質和非電解質對細胞膜通透性的影響。

二、實驗原理

細胞膜在不斷變化的環境中必須保持自身的穩定狀態才有生存。細胞膜允許一些物質通透，又能降低甚至阻止另一些物質的通透，所以細胞膜具有選擇通透性。

水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質濃度梯度從滲透壓低的一側通過細胞膜向滲透壓高的一側擴散，這種現象就是滲透。將紅細胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細胞內，可使細胞脹破，血紅蛋白釋放到介質中，由不透明的紅細胞懸液變為紅色透明的血紅蛋白溶液，這種現象稱為溶血。將紅細胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細胞膜對各種溶質的通透性不同，膜兩側的滲透壓平衡會發生改變，也會發生溶血現象。

在不同相對分子量、脂溶性大小以及電解質和非電解質等各種溶液中，紅細胞質膜對各種溶質的滲透性不同。由于溶質透入速度不同，溶血時間也不同。因此，發生溶血現象所需時間長短可作為測量物質進入紅細胞速度的一種指標。本實驗通過觀察紅細胞溶血現象時間的不同來記錄滲入速度，從而測量各種物質通透性的差別。

三、實驗用品

1.實驗材料

血液（兔血或雞血，含適量肝素）2.儀器

50mL燒杯、10ml試管、試管架、移液槍及槍尖，標簽紙、吸水紙等。

3.主要試劑

0.17 mol/L氯化鈉

0.17 mol/L氯化銨

0.17 mol/L醋酸銨

0.17 mol/L硝酸鈉

0.17 mol/L草酸銨

0.12 mol/L硫酸鈉 0.32 mol/L葡萄糖

0.32 mol/L甘油

0.32 mol/L乙醇 蒸餾水

四、實驗方法與步驟

1.制備10%血紅細胞懸液：把一份動物血液和10份0.17M氯化鈉溶液加入到50ml燒杯中即為稀釋的血紅細胞懸液（不透明的紅色液體）。

2.溶血實驗：取0.3ml動物紅細胞懸液加入到3ml蒸餾水的試管中，晃動試管使之混合均勻，注意觀察溶液的顏色變化，溶液由不透明 的紅色變為透明的紅色，紅細胞發生破裂，造成100%紅細胞溶血，使光線比較容易透過溶液。記錄發生溶血（可以通過試管壁看清實驗指導上的字為標準）的時間（自加入稀釋血液到溶液變成紅色透明澄清所需的時間）。

3.紅細胞的滲透性：取10支試管，分別加入3ml不同的等滲溶液，做好標記后，分別加入0.3ml紅細胞懸液，輕輕振蕩，仔細觀察是否發生溶血并記錄發生溶血的時間。

五、實驗結果

將不同等滲溶液下的溶血現象列表，分析（是否發生溶血以及溶血發生的時間、原因）。

六、思考

脂溶性與水溶性、小分子與大分子、極性與非極性、帶電荷與不帶電荷物質，分別是哪一種更容易穿過質膜？

七、注意事項

1.溶血現象可用一張有字的白紙來輔助識別，能夠清楚地透過溶液看到溶液后方紙上清晰的字跡時，為完全溶血。

2.因相對分子質量大小對膜通透性有影響，所以將溶血時間適當地延長至15min，15min時仍然不溶即判斷為不溶血。3.注意同組實驗過程的同步性，尤其滴加血液的操作要迅速。4.試管中有紅細胞和測試溶液時，不要強力搖晃，以免造成人為的紅細胞破裂。

5.各試管中加入的試劑量一致，血量也要一致。

實驗三 細胞形態結構與幾種細胞器的觀察

一,實驗目的

在普通光學顯微鏡下識別細胞和細胞器的形態結構,掌握生物繪圖的方法.二,實驗原理

細胞在形態上是多種多樣的,有球形,橢圓形,扁平形,立方形,梭形,星形等.雖然細胞的形狀各異,但是它們卻有共同的基本結構特點,都由細胞膜(動物),細胞壁(植物),細胞質和細胞核組成.細胞中的各種細胞器,如線粒體,高爾基體,中心體,核仁,染色體等,一般經過一定固定染色處理后,大多數在光學顯微鏡下是可以看見的.細胞器的形態結構在普通光學顯微鏡下與電子顯微鏡下所看到的結構有很大的差別.三,實驗材料

洋蔥根尖切片 小白鼠肝切片 兔神經節切片 馬蛔蟲受精卵切片 四,實驗內容

(1)洋蔥根尖切片細胞的觀察

先用低倍鏡觀察根尖的縱切面,注意分生區,伸長區,成熟區細胞的異同,然后再仔細觀察細胞的形態結構,特別要注意細胞的形狀,大小,以及細胞壁,細胞核,核仁,細胞質,液泡的形態結構.(2)兔神經節細胞切片高爾基體的觀察

先在低倍鏡下找到兔神經節細胞,然后轉用高倍鏡觀察,可看到細胞內淡黃色的背景上有黃褐色或者透明的細胞核,核的周圍分布著許多深褐色的(硝酸銀鍍染)高爾基體,呈彎曲的線狀,顆粒狀,少量分散在細胞質.(3)小白鼠肝細胞切片線粒體的觀察

先用低倍鏡后用高倍鏡觀察,可見到許多肝小葉,每小葉有許多緊密排列成索狀的多角形的肝細胞,細胞中央有大而圓的細胞核.這時,轉用油鏡觀察,可見到細胞質內分布著許多被蘇木精染成深紫色的線粒體,呈顆粒狀和線狀.(4)馬蛔蟲受精卵切片中心體的觀察

取馬蛔蟲受精卵切片,在顯微鏡下找到充滿子宮腔的受精卵,每個馬蛔蟲受精卵外圍有一層較厚的卵膜,膜內有寬大的圍卵腔,各圍卵腔內有處在不同分裂期的卵細胞.找到分裂中期的細胞,在細胞中央被染成藍色條狀或棒狀的結構,這就是染色體.在染色體兩側可見各有一個較小的,亦被染成藍色的小粒,稱中心粒.在中心粒的周圍可見呈放射狀的星絲.作業

圖一, 洋蔥根尖細胞圖

圖二, 兔的神經細胞中高爾基體 圖三, 小白鼠肝細胞切片示線粒體

圖四, 馬蛔蟲受精卵切片示中心體

生物繪圖應注意的問題

1.繪圖前,先要把顯微鏡下的圖象觀察清楚,再根據繪圖的要求,安排好圖紙的布局,必須養成兩眼打開觀察的習慣.2.繪圖時要注意科學性和真實性,看到什么繪什么,不要隨意增多或減少,圖的各部分比例要恰當.3.要保持圖面的清潔,整齊,盡量少用橡皮擦.圖的各部分標記要清楚,要用細的直線標示在圖的右邊,字體要端正.細胞中的生活部分或明暗部分可用疏密圓點表示.生物繪圖是不能涂的.實驗四細胞的無絲分裂與有絲分裂 一.實驗目的

1.通過實驗掌握無絲分裂和有絲分裂的基本過程和生物學意義，并比較它們兩者有何不同。

2.通過觀察洋蔥根尖的有絲分裂標本，掌握細胞有絲分裂前、中、后、末期的染色體形態變化特點。

3.通過觀察馬蛔蟲受精卵的有絲分裂標本，比較植物細胞和動物細胞有絲分裂過程的不同點。二.實驗物品

1.材料：草履蟲無絲分裂裝片、洋蔥根尖切片、馬蛔蟲裝片，洋蔥根尖。2.器材：

每組配備：眼科鑷和眼科剪各2把，皮頭吸管1支，5ml燒杯2個，載玻片（每人一片），蓋玻片，擦鏡紙，吸水紙，擦鏡液。

3.試劑：1mol/L HCl（60℃預熱），Carnoy固定液（甲醇3∶1冰醋酸），95%、85%、70%酒精。蒸餾水、改良苯酚品紅染液。三.實驗步驟

(一)草履蟲無絲分裂切片觀察

草履蟲可進行無性生殖（無絲分裂）和有性生殖（接合生殖）。在無性生殖時，可在顯微鏡下看到草履蟲胞體被染成粉紅色，細胞核染成紫紅色。分裂時草履蟲大核向胞體兩端伸長，進而在核的中部向內凹陷，呈啞鈴形。然后斷開形成兩個細胞核，同時胞體也隨之延伸，中部出現分裂溝，最后完全分裂成兩個子細胞。(二)洋蔥根尖有絲分裂觀察

1.材料發根：待根長達2厘米時，切下根尖，浸入Carnoy固定液中4h，分別在95%和85%酒精中各浸泡30 min，最后在70%酒精中保存。（此項實驗前準備）

2.水解：取出根尖放在載玻片上，滴加1mol/L HCl（60℃）于根尖上，水解8 min，蒸餾水水洗3次（將酒精洗去，以利于染色）。

3.染色：切取根尖的乳白色的分生區，用鑷子輕輕地搗碎，滴一滴改良苯酚品紅染液，染色20 min后，蓋上蓋玻片。

4.壓片：在蓋玻片上面覆蓋一張吸水紙，用拇指垂直壓下，再用鉛筆橡皮頭輕輕敲打，使細胞壓成均勻的薄層（敲打時，勿使蓋玻片移動）。5.觀察：

先在低倍鏡下找出根尖末端，從根尖末端往上依次為根的根冠區、生長區和伸長區（圖18-1）。選擇生長區的細胞觀察，可見這一部位的細胞染色較深，緊密排列成一行行的四方形。小心移動標本，選擇處于分裂狀態最多的部位轉高倍鏡觀察，便可見許多處于不同分裂時期的細胞。

間期：間期細胞較小，可清晰看到染色均勻的細胞核，核內有一個染色較深的圓形小體為核仁。

前期：細胞從間期進入前期時，細胞核膨大，染色質逐漸螺旋形成細線狀的染色體。隨著染色體不斷螺旋縮短變粗，可見每條線狀的染色體是由兩條姐妹染色單體組成。前期末，核仁解體，紡綞絲出現，核膜、核仁完全消失。

實驗 雞血細胞的體外融合 【實驗目的】

了解乙二醇（PEG）誘導體外細胞融合的基本原理。

通過PEG誘導雞血細胞之間的融合實驗，初步掌握細胞融合的基本方法?！緦嶒炘怼? 細胞融合（cell fusion）又稱體細胞雜交，是指用人工方法使兩個或兩個以上的體細胞融合成異核體細胞，隨后，異核體同步進入有絲分裂，核膜崩潰，來自兩個親本細胞的基因組合在一起形成只含有一個細胞核的雜種細胞（hybrid cell）。細胞融合技術是研究細胞遺傳、基因定位、細胞免疫、病毒和腫

瘤的重要手段。依據融合過程采用的助融劑不同，細胞融合可分為：①病毒誘導的細胞融合，如仙臺病毒（hemagglutinating virus of Japan,HVJ）;②化學因子誘導的細胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）;③電場誘導的細胞融合；④激光誘導的細胞融合。

PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子質量的多聚體。PEG可改變各類細胞的膜結構，是兩細胞接觸點處脂類分子發生疏散和重組，引發細胞融合。該方法應用相對分子質量為400～6000的PEG溶液引起細胞的聚集和粘連，產生高頻率的細胞融合。融合的頻率和活力與所用PEG的相對分子質量、濃度、作用時間、細胞的生理狀態與密度等有關?！緦嶒瀮x器、材料和試劑】

儀器、用具：注射器、刻度離心管、離心機、血細胞計數板、水浴鍋、滴管、顯微鏡、燒杯、容量瓶、凹面載玻片、蓋玻片、酒精燈等。

材料：成年家雞。試劑

1）0.85%NaCl溶液。

2）GKN液：8.0g NaCl，0.4g KCl，1.77g Na2HPO4·2H2O,0.69g NaH2PO4·H2O,2.0g 葡萄糖，0.01g 酚紅，溶于1000ml重蒸水中。

3）50%（m/V）PEG溶液：

①取50g PEG(相對分子質量=4000)放入100ml瓶中，高壓滅菌20min。

②讓PEG冷卻至50～60℃，勿讓其凝固。

③加入50ml預熱至50℃的GKN液，混勻，置37℃備用。4）Hanks原液（10×）：

NaCl 80.0g Na2HPO4·12H2O 1.2g

KCl 4.0g KH2PO4 0.6g MgSO4·7H2O 2.0g 葡萄糖 10.0g CaCl2 1.4g 稱取1.4g的CaCl2，溶于30～50ml的重蒸水中。取1000ml的燒杯及容量瓶各一個，先放重蒸水800ml于燒杯中，然后按上述配方順序，逐一稱取藥品。必須在前一藥品完全溶解后，方可加入下一藥品，直到葡萄糖完全溶解后，再將已溶解的CaCl2溶液加入，最后加水至1000ml。5）Hanks液：

Hanks原液 100ml 重蒸水 896ml 0.5%酚紅 4ml 配好的Hanks液，分裝包扎貼上標簽，經過滅菌后，4℃保存。6）詹納斯綠染液?！痉椒ㄅc步驟】 雞血細胞的獲得

從家雞的翼根靜脈用注射器采血，注入試管后，迅速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制成抗凝全血。雞血細胞儲存液的制備

在抗凝全血的試管中，加入4倍體積的0.85%NaCl溶液，制成紅細胞儲備液，置于4℃冰箱內可供一周內使用。雞血細胞懸液的制備

取雞血細胞儲備液200μl，加入800μl 0.85%NaCl溶液，混勻后，1200r/min離心5min，棄去上清液，再加入1000μl 0.85%NaCl溶液按上述條件離心一次。最后，棄去上清液，加入2000μl的GKN溶液制成雞血細胞懸液。計數

取100μl雞血細胞懸液，加700μl的GKN溶液進行稀釋，在血細胞計數板上計數。若細胞濃度過大，用GKN溶液稀釋至177×107個/ml 左右。雞血細胞的收集

吸取200μl雞血細胞懸液放入離心管中，加入800μl Hanks液混勻，1000r/min離心5min。棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細胞團塊松散。PEG誘導細胞融合 吸取100μl 37℃的50%PEG溶液，慢慢沿著離心管壁逐滴加入，邊加邊輕搖離心管，使PEG與細胞混勻，然后在37℃水浴中靜置2min。終止PEG作用

緩慢加入1mlHanks液，輕輕吹打混勻，于37℃水浴中靜置5min。制備細胞懸液

用吸管輕輕吹打細胞團數次使細胞團分散，1000r/min離心5min，使細胞完全沉降。棄去上清液，加Hanks液，再離心一次，棄多數上清，留少許溶液，混勻。滴片、染色和鏡鑒

用鑷子取預先冰凍的干凈載玻片，迅速滴上2—3滴細胞懸浮液，用玻片從載玻片的一邊推到另一邊，使細胞分散均勻，然后置酒精燈上微微加熱干燥。

將晾干的玻片放在潔凈的玻板上，用Giemsa染液[Giemsa原液用10倍體積的1/15mol/L磷酸緩沖液（PH7.4）稀釋]染色30min，自來水沖洗，空氣干燥。在顯微鏡下觀察細胞融合的情況。

計算細胞融合率

細胞融合率是指在顯微鏡的視野內，已發生融合的細胞其細胞核總數與視野內所有細胞（包括已融合細胞）的細胞核總數之比，通常以百分比表示，而且要進行多個視野測定；進行統計

分析。

【注意事項】

本實驗中，用0.85%NaCl液代替了Alsver液。實驗證實，用Alsver液保存的紅細胞時間較短，而改用生理鹽水則明顯延長紅細胞的保存時間且不影響細胞融合率。高Ca2+濃度能夠提高細胞融合率。有些抗凝劑中含有和Ca2+結合的化合物，比如Alsver液中檸檬酸鈉的酸根與血液中的Ca2+形成難解離的可溶性絡合物，導致血液中的Ca2+濃度降低，故起抗凝血作用，同時會造成細胞的融合率較低。

必須嚴格控制PEG的作用時間，通常處理細胞1～2min。PEG和二甲基亞砜（DMSO）并用，可以提高細胞的融合率。

融合細胞繼續培養就變成了一個雜種細胞，它的染色體不是兩核的倍數，因為一些染色體會逐漸的消失。【作用】

畫出觀察到的融合細胞，并計算融合率。試說明細胞融合的關鍵。

第二篇：《實驗四 細胞的有絲分裂》教案

《實驗四 細胞的有絲分裂》教案

一、實驗目的

1.學習植物根尖細胞有絲分裂裝片的制作方法

2.觀察植物細胞有絲分裂過程，掌握有絲分裂各期的主要特征

二、材料與用品

洋蔥頭、洋蔥根尖縱切片標本、蛙胚細胞有絲分裂切片標本；普通光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、恒溫培養箱、小刀、小試劑瓶、培養皿、酒精燈、火柴、FAA固定液、1摩爾/升鹽酸或濃鹽酸、醋酸洋紅染液、蒸餾水

三、實驗過程

1.檢查裝片制作過程的預習情況（1）取材

將洋蔥頭置于盛水的小燒杯上，使其鱗莖浸入水中，放在25℃恒溫箱中培養。待根長到2厘米左右時，于夜晚12時至1時切取長約1厘米左右的根尖。

（2）前處理

將材料浸入蒸餾水內，放置冰箱（0～4℃）中24小時。（3）固定

將材料從前處理的藥物中取出，用水沖洗2～3次，放入卡諾氏或FAA固定液中，固定24小時，固定液用量應為材料體積的15倍以上。

如固定的材料當時不用，可以先在90%酒精中泡半小時，然后在70%酒精泡半個小時，再換入70%酒精中，置0～4℃冰箱內可保存半年。經過較長時間保存的材料，進行觀察前再用固定處理一次，效果較好。

（4）解離

將固定后的根尖用清水漂洗數次，用1摩爾/升鹽酸在60℃恒溫箱內處理6～20分鐘后，清水漂洗。

（5）染色和壓片

將解離后的根尖，切取1～2毫米長的分生組織，放在載玻片上，加1滴醋酸洋紅染液，放置約10分鐘。然后在酒精燈上緩慢往復3～4次，微微加熱（不可煮沸），隨即用解剖針將材料撥碎，蓋上蓋玻片，覆以吸水紙，對準蓋玻片下的材料，用鉛筆的橡皮頭在蓋玻片上輕輕敲擊，再用拇指適當用力下壓，但注意勿使蓋片滑動。壓好的片子中，材料鋪展成均勻的、單層細胞的薄層。

2.學生按實驗步驟制作裝片

3.學生觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂裝片 先在低倍鏡下找到根尖分生區，再轉高倍鏡，選擇較典型的有絲分裂各期圖象，仔細觀察。（1）間期

細胞形態無明顯變化，體積有所增大。核仁核膜較清楚，核內染色質呈細網狀。

（2）前期 細胞核脹大，核內染色質最初表現為極細盤曲的染色絲，以后染色絲逐漸縮短變粗形成染色體。染色體形態逐漸清楚，著絲點逐漸明顯。在前期結束時，核仁核膜消失。

（3）中期

紡錘體形成。染色體排列在細胞中央的赤道面上，從細胞極端觀察，可同時看到全部染色體；從側面觀察，則染色體排列成“一”字形。此時染色體變短變粗，其形態和數目都較清楚。

（4）后期

染色體著絲點分裂，每一染色體的二條單體成為二條獨立的子染色體。全部染色體分為兩組，分別向細胞的兩極移動。

（5）末期

兩組子染色體分別到達兩極，染色體逐漸伸長變粗，分散在核內成為染色質；紡錘體逐漸消失，核仁核膜重新出現，形成兩個新核。在兩新核之間赤道面上，出現細胞板，并逐漸形成細胞壁，最后分成兩個子細胞。

4.教師示范觀察動物細胞有絲分裂裝片

在高倍鏡下觀察動物細胞有絲分裂切片標本，比較動物植物細胞有絲分裂過程中的特點。

四、作業

1、繪出你所觀察到的植物細胞有絲分裂各期的圖象。

2、細胞有絲分裂過程中哪一時期是觀察染色體形態和進行染色體記數的最好時期？

3、動物細胞與植物細胞的有絲分裂過程有什么不同的特點？

第三篇：實驗教案1

實驗教案（課時備課）

課程名稱：獸醫學實驗

課程類型：必修

第2次課

學時：4

上課日期：第5周

1、實驗內容：血液常規檢驗

2、實驗目的：掌握血液常規的檢查技術，掌握動物血液化驗的正常值以及病理變化的意義。本實驗為驗證性實驗。

3、實驗重點和難點：白細胞分類中各種白細胞的區分

4、主要參考資料：《獸醫臨床實驗指導》，東北農業大學主編，中國農業出版社，1999

5、實驗內容：

（1）血液沉降速度測定，利用血沉管測量牛血的沉降速度

1．原理

紅細胞沉降速度（erythrocyte sedimentation rate ,ESR）與紅細胞串錢狀的形成、紅細胞數目的多少、血漿蛋白的組成以及測定時室溫的變化、血沉管傾斜的程度等因素有關。

2．操作方法

魏（Westergren）氏法：魏氏血沉管長30cm，內徑為2.5mm，管壁有200個刻度，每個刻度之間距離為1.0mm，附有特制的血沉架。測定方法如下：（1）取3.8％枸櫞酸鈉液0.4ml置于小試管中。

（2）自頸靜脈采血，沿管壁加入上述試管，輕輕混合。

（3）用血沉管吸取抗凝血至刻度0外，用棉花擦去管外血液，直立于血沉架上。（4）經15、30、45、60 min，分別記錄紅細胞沉降的刻度數，用分數形式表示（分母代表時間，分子代表沉降mm數）。

（2）紅細胞計數，用計數板計算牛血的紅細胞數

1．原理

血液經稀釋后，充入血細胞計數板，用顯微鏡觀察，計數一定容積內的紅細胞數并換算成每μl內的數目。 2．方法

試管稀釋法：用5ml吸管吸取紅細胞稀釋液3.98ml（或4ml亦可）置于試管中。用沙利氏吸血管吸取全血樣品至20μl刻度處（或吸血至刻度10處，紅細胞稀釋液用2ml）。擦

去吸管外壁多余的血液，將此血液吹入試管底部，再吸、吹數次，以洗出沙利氏管內粘附的血細胞，然后試管口加塞，顛倒混合數次，再用毛細吸管（或玻棒）吸取已稀釋好的血液，放于計數室與蓋玻片接觸處，即可自然流入計數室中。注意充液不可過多或過少，過多則溢出而流入兩側槽內，過少則計數池中形成氣泡，致使無法計數。計數時，先用低倍鏡，光線要稍暗些，找到計數室的格后，把中央的大方格置于視野之中，然后轉用高倍鏡。在此中央大方格內選擇四角與最中的五個中方格（或用對角線的方法數五個中方格），每個中方格有16個小方格，所以共計數80個小方格。計數時注意壓在左邊雙線上的紅細胞計在內，壓在右邊雙線上的紅細胞則不計數在內；同樣，壓在上線的計入，壓在下線的不計入，此所謂“數左不數右，數上不數下”的計數法則

（3）白細胞計數，用計數板對牛的白細胞進行計數

1．原理

用稀釋液將紅細胞破壞后，計算出每微升血中白細胞數。 2．方法

試管稀釋法：用1ml吸管吸取白細胞稀釋液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20μl處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，反復吸吹數次，以洗凈管內所粘附的白細胞，充分振蕩混合，再用毛細吸管或沙管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計數室內，靜置1～2min，低倍鏡檢查。

將計數室四角四個大方格內的全部白細胞依次數完，注意壓在左線和上線的計入，壓在右線和下線的不計入。

（4）血紅蛋白測定（鹽酸比色法）

1．原理

血液與鹽酸作用后，釋放出血紅蛋白,并被酸化后變為褐色的鹽酸高鐵血紅蛋白，與標準柱相比，求出每百毫升血液中血紅蛋白的克數或百分數。2．方法

（1）向沙利氏比色管內加入N/10鹽酸5滴。

（2）用沙利氏吸血管吸血至20μl刻度處，擦去管外沾附的血液。

（3）徐徐吹入沙利氏比色管內，不要產生氣泡，再反復吸、吹數次，以洗出沙利氏吸血管中的血液。輕輕振動比色管，使血液與鹽酸充分混合。

（4）靜置10min，待血液變成褐色后，緩緩滴加蒸餾水，每加1滴，用細玻璃棒攪動一次，直到顏色與標準色柱完全相同為止。液柱凹面所指的刻度數，即為每百毫升血液中血紅蛋白的克數，用g％表示。

（5）白細胞分類計數，1．制作血涂片后：在載波片上滴一滴血液，之后用蓋玻片以45度角勻速進行推片，血片要有頭有尾，并且血膜要薄。2．姬姆薩液染色后進行分類

重點難點的解決：通過演示結合講解予以解決

6、實驗報告內容：

（1）寫出每項測定的過程及結果（2）分析異常結果的原因（3）血液常規化驗的臨床意義

實驗教案（課時備課）

課程名稱：獸醫學實驗

課程類型：必修

第3次課

學時：4 上課日期：第6周

1、實驗內容：藥物敏感性實驗

2、實驗目的：掌握抗菌素藥物的敏感性測定方法，從而為臨床選用敏感適當的抗菌素打下基礎。另一方面認識細菌的耐藥性現象。

3、實驗重點和難點：藥物敏感實驗前所用細菌濃度測定

4、主要參考資料： 《獸醫藥理學實驗指導》，林艷春主編，校內教材，2003 《獸醫微生物實驗指導》，胡桂學主編，中國農業大學出版社，2006

5、實驗內容：

（1）無菌操作制作營養培養基；藥敏試驗最好用專用Mueller-Hinton 培養基。

（2）涂布已知細菌；細菌經純培養后接種到肉湯中進行搖床培養，一般用肉眼觀察比較混濁即可。將菌液用曲波棒均勻地涂布到培養基上，之后于37℃烘干培養基表面的水分。（3）稀釋藥液，制作藥敏紙片，并貼到培養基表面；將藥液按不同細菌所需的濃度進行配置，之后制作藥敏紙片，將藥敏紙片烘干后貼到培養基表面，各藥敏紙片間距一般應距離24mm，每一個平板大約可以貼4～6種藥敏片。貼紙片時可輕壓，以保證與培養基密切接觸，紙片貼上后不可以再移動，因為抗菌素會自動擴散到培養基內。

（4）37℃，培養24小時，觀察結果。觀察含藥紙片周圍有無抑菌環，并量其直徑（包括紙片直徑）大小，用毫米為單位記錄。抑菌圈直徑在20 mm 以上為極敏，15~20 mm 為高敏，10~14 mm 為中敏，10 mm 以下為低敏，0為不敏。極高、高敏，以該抗菌素的適當劑量治療試驗菌株所引起的感染有效；中敏，表示試驗菌株對該種抗菌素的較高劑量才有敏感性；不敏，該抗菌素的治療劑量完全不能抑制試驗菌。試驗重點難點解決：通過示范和講解予以解決

6、實驗報告內容：

（1）藥敏實驗的操作過程；

（2）繪圖顯示出藥物敏感性實驗結果，并以文字說明；

（3）對實驗結果進行解釋。

第四篇：細胞教案

第二節

細胞

【教學目標】1.認識細胞的基本結構及功能

2.知道動物細胞和植物細胞的區別

3.了解細胞的形狀和化學組成

【教學重點】光學顯微鏡水平上的細胞結構和功能 【教學難點】細胞基本結構

功能，識別動植物細胞 【教學準備】鴨蛋、鵪鶉蛋、解剖器具、薄塑料袋

引入：自然界的生物千奇百態，多種多樣。構成它們的細微結構是什么呢？ 學生：是細胞。

那么你們看到過細胞嗎？世界上第一個看到細胞的人是誰呢？

介紹羅伯特·虎克和他發明的顯微鏡，以及他所看到的軟木的結構。出示一個動物細胞的結構示意圖，并顯示各部分的結構名稱。

一、細胞的形態結構和功能

1.動物細胞：細胞膜：保護，控制物質的進出

細胞質：生命活動的場所

細胞核：遺傳物質

（細胞膜的第二個功能應引導學生思考后得出?？梢詮募毎顒有枰裁?，會產生什么著手，并回憶海水淡化中的淡化膜的作用，學生很容易理解細胞膜的功能）【活動】觀察鵪鶉蛋的結構 出示鴨蛋和鵪鶉蛋，學生先議論蛋的結構，在大家都錯了的情況下，更有興趣聽老師的介紹。教師在投影儀上解剖蛋的結構，使學生認識到世界上最大的細胞和最小的細胞之間有很大 的差異。

2.植物細胞：細胞膜：保護，控制物質的進出

細胞質：生命活動的場所

細胞核：遺傳物質

細胞壁：保護，支持

葉綠體：光合作用的場所（葉綠素）

液泡：細胞液

（在介紹細胞壁的支持功能時，可以用一個薄的塑料袋裝一些水，表示細胞膜和細胞質，不能有一定的形狀。然后把它放入一個方的紙盒中或紙杯中，它就呈現出一定的形狀，紙盒和紙杯就相當于細胞壁。）

【議一議】1.植物為什么一般都很高大？這與細胞的什么結構有關？

2.植物的葉子為什么大都是綠色的？

3.葉綠體和葉綠素有什么區別？（在討論這個問題時要求學生用剛才老師所用的杯子來作比喻說明葉綠體和葉綠素之間的關系）3.比較動物細胞和植物細胞之間的異同點

【畫一畫】請根據學過的知識，發揮你的想象，畫出一個動物細胞和一個植物細胞，要求最好和老師畫的不一樣

【作品展示】展示過程中及時指出錯誤的和不好的地方

【分組討論】出示各中形態的細胞圖，討論他們的形態結構與什么功能相適應。

各組匯報討論結果 4.細胞的形態與功能相適應（板書）5.細胞的化學組成：水，無機鹽，有機物 【課堂小結】見PPT 【課堂鞏固】見PPT 【布置作業】1.作業本

2.用橡皮泥捏各種形狀的細胞

第五篇：6.2《細胞的分化》教案1

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《細胞的分化》教案

西南大學

朱杰 一．導入 復習導入：

師：前面我們學習了細胞的增殖，是不是所有的細胞都有細胞周期？（不是。）

怎樣的細胞才有細胞周期？（進行有絲分裂的細胞。）

師：對。有些細胞不進行有絲分裂就沒有細胞周期，比如休眠的細胞、高度分化的細胞。今天我們就來學習細胞的分化。二．學習新知

讓學生閱讀書上內容，勾畫細胞分化概念。（“在個體發育中，由一個或一種細胞增殖產生的后代，在形態結構和生理功能上發生穩定性差異的過程，叫做細胞分化?！保?/p>

（一）師：（一邊講解一邊畫圖，紅字不用板書）多細胞生物，一般個體發育的起點是？——受精卵。

受精卵進行細胞增殖，數目越來越多，同時結構也相似。

分裂到一定程度，細胞開始逐漸向不同方向發展，結構上出現了不同的變化，這時候，細胞一邊增殖，一邊分化，分化程度較低。

最后，細胞分化程度高，不進行增殖了，只進行分化，最終形成了具有特定結構和功能的細胞。這些細胞構成成了不同的組織和器官，具有不同的功能，維持著正常生命活動的進行。（這就好比同學們雖然現在在一個教室里學習成長，在同一條起跑線上，可是以后你們會走上不同的道路，擁有不同的工作，為社會做出不同的貢獻。）

師：舉個例子，大家看到書上圖6-8，紅細胞和心肌細胞的圖，它們的形態不同，功能上，紅細胞可以合成血紅蛋白運輸氧氣，心肌細胞可以合成肌動蛋白和肌球蛋白，維持心臟的正常代謝?？墒牵鼈冊趧游锱咛グl育中，是從同一胚層發育而來的，這就是細胞分化的結果。

（二）師：那紅細胞和心肌細胞為什么合成不一樣的蛋白質，是不是它們的遺傳物質不同？（不是，體細胞的具有一套相同的遺傳物質。）對，細胞之所以會形成不同的分化，其根本原因是由于基因的選擇性表達。比如在紅細胞中，合成血紅蛋白的基因是活躍的，而合成肌

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動、肌球蛋白的基因是關閉的。

（三）師：那么形成的紅細胞和心肌細胞，可逆嗎？（不可逆。）對。大家把概念中“穩定性差異”勾畫下來，它的意思就是說細胞的分化一般條件下是持久的、不可逆的。

（四）但是，奇跡也能發生。只要有適宜的條件，高度分化的植物細胞也能重新發育成一個完整的植物個體。

讓學生閱讀書上關于植物組織培養的部分，勾畫細胞全能性的概念。（“細胞的全能性，是指已經分化的細胞，仍然具有發育成完整個體的潛能?！保?/p>

（概要講解植物組織培養極其作用。）

大家想想，為什么它會有這種潛能？（因為細胞內有全套遺傳物質。）對。大家注意，這里與細胞的分化的不可逆并不矛盾，細胞的全能性強調了細胞具有一套完整的遺傳物質，有發育成完整個體的潛能，它必須是離體的組織或器官。

（五）動物細胞的全能性受到了抑制，科學家還沒能利用已分化的動物細胞來合成一個完整的生物個體。但是他們用已分化的細胞的細胞核和卵細胞的細胞質結合形成的細胞培育出了新個體，克隆羊多利就是這樣誕生的，這個實驗也說明了已分化的動物細胞從整體細胞水平來看，全能性受到抑制，但細胞核仍是具有全能性的。（再補充干細胞知識。）

（六）那么生物體內的細胞的全能性一樣嗎？體細胞、生殖細胞、受精卵，它們的全能性高低如何？

對體細胞而言，分化程度越低、全能性越高。

對受精卵而言，它是個體發育的起點，未分化，全能性最高。

對生殖細胞如卵細胞、花粉而言，它們并非個體發育起點，分化程度高，但全能性也高。

主要板書：

細胞的分化

一、細胞分化

產生穩定性差異：基因的選擇性表達

二、細胞全能性

1，植物細胞全能性 2，動物細胞核全能性 3，分化與全能性的關系

全能性：受精卵>生殖細胞>體細胞

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沁園春·雪

北國風光，千里冰封，萬里雪飄。望長城內外，惟余莽莽； 大河上下，頓失滔滔。

山舞銀蛇，原馳蠟象，欲與天公試比高。

須晴日，看紅裝素裹，分外妖嬈。江山如此多嬌，引無數英雄競折腰。惜秦皇漢武，略輸文采； 唐宗宋祖，稍遜風騷。

一代天驕，成吉思汗，只識彎弓射大雕。

俱往矣，數風流人物，還看今朝。

克

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