第一篇:放線菌霉菌的制片觀察
實驗三 放線菌霉菌的制片觀察
實驗目的:
1.學會用印片法制作臨時裝片
2.掌握用顯微鏡觀察放線菌個體形態特征的方法 3.掌握霉菌的觀察方法和觀察霉菌的形態特征 實驗原理:
1.放線菌是產生抗生素的重要微生物種類之一,其形態特征含有3個部分,基內菌絲、氣生菌絲和孢子絲。基內菌絲:升展于培養基的表面和內部,菌絲色淡、較細。氣生菌絲:在基內菌絲上,升展于空間,顏色較深,菌絲較粗。孢子絲:菌絲成熟時,大部分氣生菌絲分化成孢子絲,孢子絲形態多樣,由成串分生孢子組成。
2.霉菌是真核生物主要有基內菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲。基內菌絲:升展于培養基的表面和內部。氣生菌絲:在基內菌絲上,升展于空間。繁殖菌絲:產生孢子。材料和儀器:
1. 菌種:細菌鏈霉菌、霉菌 2. 培養基:高氏一號瓊脂培養基
3. 器皿:培養皿、蓋玻片、載玻片、鑷子、顯微鏡等 4. 染液:呂氏美蘭染液、乳酸石碳酸棉蘭染液 實驗步驟:
1.配制培養基滅菌后倒平板,待起冷卻后劃線接種,在培養箱內培養5-7天
2.取蓋玻片印于放線菌菌體處,輕輕敲打后取出置于有呂氏美蘭染液的載玻片上,無菌操作
3.用鑷子夾取少量霉菌菌體于有乳酸石碳酸棉蘭染液的載玻片上,用大頭針打散菌體,蓋上蓋玻片吸取多余的染液,無菌操作
4.取制作好的臨時裝片于顯微鏡下,鏡檢,觀察放線菌和霉菌的形態特征 實驗結果:
1.放線菌所獲臨時裝片材料較少,只有幾個視野可以觀察的到菌體,菌體疏松。因為放線菌長勢不好,只有少數生長于培養基上,故取材時只取到少部分,但不影響觀察,可以清晰的看到菌絲體和孢子絲,說明放線菌有菌絲體和孢子絲組成,孢子絲呈串珠狀。2.霉菌制作了兩塊臨時裝片,第一個觀察到的都是圓形小顆粒的孢子,說明取材時,僅僅只取了培養基表面的一層菌體,沒有深入培養基中取菌體,操作有誤。第二塊可以清晰的看見霉菌菌體,其中有分生孢子梗、頂囊、小梗、分生孢子,說明霉菌由這幾部分組成,孢子著生于小梗上,呈串珠狀。霉菌菌體比放線菌菌體大很多。
第二篇:3.霉菌、放線菌的形態觀察 4學時
實驗三
一、實驗目的
霉菌、放線菌的形態觀察
1.學習并掌握觀察放線菌、霉菌形態的基本方法。2.初步了解放線菌和四類常見霉菌的基本形態特征。
二、實驗原理
1.霉菌(真核微生物):
霉菌是一類可產生菌絲體的真核微生物的統稱。霉菌的菌落形態較大,質地疏松,外觀干燥,不透明,菌落與培養基間連接緊密,不易挑取,菌落正反面,邊緣與中心的顏色、構造通常不一致,有霉味。霉菌的菌絲體分基內菌絲和氣生菌絲,氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲,由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及包子的形態特征是識別不同種類霉菌的重要依據。
菌絲的孢子較大,在低倍鏡下即可清晰觀察到有隔或無隔菌絲和孢子及巨大的孢子囊。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比放線菌粗的多,常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍。霉菌菌絲較粗大,細胞易收縮變形,而且孢子很容易飛散,所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片特點是:(a)細胞不變形;(b)具有殺菌防腐作用,且不易干燥,能保持較長時間;(c)溶液本身呈藍色,有一定染色效果。霉菌的菌絲、分生孢子梗和分生孢子的形態常作為分類的重要依據。
曲霉形態特征:表面灰綠色,菌體有許多復雜的分枝菌絲構成。營養菌絲具有分隔;氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗,頂端產生燒瓶形或近球形頂囊,表面產生許多小梗,小梗上著生成串的表面粗糙的球形分生孢子。
根霉形態特征:匍匐菌絲弧形,無色,向四周蔓延。
放線菌形態特征:呈菌絲狀生長,以孢子繁殖。顯微鏡下呈紫紅色。青霉形態特征:菌絲初期白色,顏色逐漸由白轉變為綠或藍,菌絲有隔膜。氣生菌絲特化成子實體,子實體類型為分生孢子頭。
霉菌的培養和觀察方法:
(1)載玻片培養觀察法:無菌操作將培養基薄層置于載玻片上,接種后蓋上蓋玻片培養,霉菌即在載玻片和蓋玻片之間有限的空間內沿蓋玻片橫向生長。培養一定時間后,將載玻片上的培養物置于顯微鏡下觀察,這種方法既可以保持霉菌自然生長狀態,還便于觀察不同發育期的培養物。
(2)玻璃紙培養觀察法:與放線菌的玻璃紙培養觀察方法相似,這種方法用于觀察不同生長階段霉菌的形態,也可獲得良好的效果。
(3)直接制片觀察法:用解剖針挑取少量培養物置于預先滴加乳酸石炭酸棉藍染色液中,制成霉菌制片鏡檢。2.放線菌(原核微生物)
放線菌是由不同長短、纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分,即潛入培養基中的營養菌絲(或稱基內菌絲,簡稱基絲)和生長在培養基以上的氣生菌絲(簡稱氣絲)。有些氣生菌絲分化成孢子絲,呈螺旋形、波浪形或分枝狀等,孢子常呈圓形、橢圓形或桿狀。能否產生氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為放線菌分類鑒定的重要依據。
放線菌的菌落形態特征為:形成干燥、不透明、表面呈致密絲絨狀,上有一層彩色“干粉”的菌落。菌落與培養基連接緊密,難以挑取,菌落正反面顏色不一致,在菌落邊緣的瓊脂平板上有變形的現象,有泥腥味。
放線菌只產生基絲而無氣絲。放線菌的培養和觀察方法:
放線菌在顯微鏡下一般氣絲在上,基絲在下,氣絲色暗,基絲較透明。有的(1)扦片法:在放線菌平板上扦上蓋玻片后培養,使放線菌菌絲沿著培養基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。觀察時用鑷子拔出蓋玻片,擦去背面培養物,將有菌的一面朝上置于載玻片上,直接鏡檢。
宜用略暗光線觀察,低倍鏡—高倍鏡;染色后觀察效果更好。
(2)玻璃紙法:玻璃紙是一種透明的半透膜,將滅菌的玻璃紙覆蓋在平板表面,接種放線菌,經培養,放線菌在玻璃紙上形成菌苔。觀察時先在載玻片上滴一小滴水,取下玻璃紙,使菌面朝上,使玻璃紙平貼于載玻片上。
優點:可觀察到放線菌自然生長狀態下的特征和不同生長期的形態。注意:整過程勿觸動菌面培養物。
(3)印片法:將要觀察的放線菌的菌落或菌苔直接印在載玻片上,經染色后觀察。該方法主要用于觀察孢子絲的形態,孢子的排列及其形狀等,但形態特征可能有所改變。
用接種鏟或解剖刀將平板上的菌苔連同培養基一起切下,菌面朝上。另取一載玻片,微熱后,輕輕按壓菌苔,固定,染色后鏡檢。
三、實驗器材
1.菌種
放線菌劃線平板28℃,3~5天后培養物;曲霉(Aspergillus sp.)、根霉(Rhizopus sp.)和青霉(Penicillium sp.)劃線平板28℃,2~3天后培養物。
2.儀器
顯微鏡、培養皿、載玻片、牙簽、擦鏡紙、吸水紙、染色缸等。3.試劑
乳酸石炭酸棉藍染色液,石炭酸復紅染液,生理鹽水。
四、實驗步驟(一)霉菌觀察:
1.霉菌自然生長狀態下的觀察:將培養3—4天的霉菌培養皿打開,放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣,直接觀察菌絲,分生孢子梗和分生孢子。
2.直接制片染色觀察:于潔凈載玻片上,加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液,用牙簽從霉菌菌落的邊緣外(培養基平面下方一點兒)取少量帶有孢子的菌絲置染色液中,再細心地將菌絲挑散開,然后小心地蓋上蓋玻片,注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,必要時再換高倍鏡。
注:挑菌和制片時要細心,盡可能保持霉菌自然生長狀態;加蓋玻片時勿壓入氣泡,以免影響觀察。
可先將挑取的菌絲置于50%乙醇中浸一下以洗去脫落的孢子,然后置于染液中。(二)放線菌觀察:
1.放線菌自然生長狀態下的觀察
將培養3—4天的放線菌培養皿打開,放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣,直接觀察菌絲,孢子絲和孢子。
2.印片法染色觀察
(1)用接種鏟或解剖刀(或牙簽)將平板上的菌苔連同培養基切下一小塊,菌面朝上放在載玻片中央。
(2)用另一潔凈載玻片置火焰上微熱后,蓋在菌苔上,輕輕垂直按壓,將其壓碎,使培養物(氣絲、孢絲或孢子)粘附在后一塊載玻片中央,棄去培養基,制成涂片,將有印跡的一面朝上,通過火焰2~3次固定。
注:不能壓碎培養基,也不能將孢子或菌絲壓入培養基。
(3)用石炭酸復紅染液或呂氏堿性美藍染液覆蓋印跡,染色0.5~1分鐘后水洗。
(4)干燥后,用油鏡觀察營養菌絲,孢子絲及孢子的形態。
五、實驗結果
繪圖說明所觀察到的青霉和放線菌主要形態特征。六 思考題
1.鏡檢時,如何區分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲?
2.顯微鏡下,細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的主要區別是什么? 補充材料:
1.霉菌對人類生活和生產能產生哪些積極作用和消極作用?
答:霉菌分布極其廣泛,只要存在有機物就有它們的蹤跡。它們在自然界扮演者最重要的有機物分解者的角色,從而把其他生物難分解利用的數量巨大的復雜有機物如纖維素和木質素徹底分解轉化,稱為綠色植物可以重新利用的養料,促進了整個地球上生物圈的繁榮發展。
積極作用:(1)工業上的檸檬酸、葡萄糖酸、淀粉酶、蛋白酶等酶制劑,青霉素、頭孢霉素等抗生素,核黃素等維生素,麥角堿等生物堿,真菌多糖、赤霉素等產物的發酵生產;利用Absidia(犁頭霉)等對茲體化合物的生物轉化以生產茲體激素類藥物;以及利用霉菌在生物防治、污水處理和生物測定等方面的應用;(2)在食品制造方面,如醬油的釀造和干酪的制造等(3)在基礎理論研究方面,霉菌是良好的實驗材料
消極作用:(1)大量真菌可引起工農業產品霉變(2)是植物最主要的病原菌,引起各種植物的傳染性病害,如馬鈴薯晚疫病,稻瘟病和小麥銹病等(3)引起動物和人體傳染病,如皮膚廯病癥等;另有少部分霉菌可產生毒性很強的真菌毒素,如黃曲霉毒素。
2.在自然界和實際應用中放線菌有什么作用?
答:實際應用:(1)產生抗生素;
(2)近年來篩選到的許多新的生化藥物多數是放線菌的次生代謝產物,包括抗癌劑、酶抑制劑、抗寄生蟲劑和農藥殺蟲劑等;
(3)放線菌還是許多酶、維生素的產生菌;
自然界:放線菌在茲體轉化、石油脫蠟和污水處理中也有重要作用。由于很多放線菌有極強的分解纖維素、石蠟、角蛋白、瓊脂和橡膠等的能力,故它們在環境保護、提高土壤活力和自然界物質循環中起著重大作用。
第三篇:實驗五 細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的制片和簡單染色
實驗五
細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的制片和簡單染色
一.實驗器材 1.菌種
枯草芽孢桿菌12—18h。金黃色葡萄球菌24h牛肉膏蛋白胨瓊脂泄密安培養物等。1.溶液和試劑
草酸銨結晶紫染液,齊氏碳酸復紅染液,呂氏堿性美藍染液,革蘭氏染色用典液,乳酸碳酸棉藍染液。
2.儀器和其他用品
酒精燈,載玻片,蓋玻片,顯微鏡,雙層瓶,擦鏡紙,接種環,接種鏟,接種針,鑷子,載玻片夾子,載玻片支架,玻璃紙,平皿v型玻璃棒,滴管,解剖針,解剖刀,生理鹽水,50%乙醇,20%甘油,高氏1號培養基平板。二.目的要求
1.學習并掌握微生物的制片及簡單染色的基本技術 2.初步了解細菌,放線菌,酵母菌及霉菌的形態特征 3.鞏固顯微鏡操作技術及無菌操作技術 三.基本原理
放線菌菌體由基內菌絲,氣生菌絲和孢子絲組成,制片時不采用涂片法以免破壞細胞及菌絲體形態。通常采用插片法或玻璃紙法并結合菌絲體簡單染色進行觀察,在插片中首先將滅菌蓋玻片插入接種有放線菌的平板,使放線菌沿蓋玻片和培養基接觸生長而附著在蓋玻片上,取除蓋玻片上,取出蓋玻片可直接在顯微鏡下觀察放線菌在自然生長狀態下的形態特征,而且有利于對不同生長時期的放線菌形態進行觀察。利用單一染料對菌體進行染色的方法稱為簡單染色。用于染色的染料是一類苯環上帶有發色基因的有機化合物。常采用堿性染料進行簡單染色,原因在于微生物細胞在堿性、中性及弱酸性溶液中通常帶負電荷,而染料電離后染料部分帶正電荷,很容易與細胞結合使其著色;當細胞處于酸性條件下,所帶正電荷增加時,可采用酸性染料染色。
四、操作步驟
(一)細菌制片及簡單染色。
1、涂片。
2、干燥。
3、固定。
4、染色。
5、水洗。
6、干燥。
7、鏡檢。
(二)酵母菌制片及簡單染色。
水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍后,滴加一滴于載破片中央,無菌操作取少許菌體置于染色中混勻,蓋上破片后鏡劍。
五、思考題。
第四篇:觀察酵母菌與霉菌實驗教案
《觀察酵母菌與霉菌》實驗教案
一.實驗目的
1.觀察酵母菌的形態與結構并掌握其特征。
2.觀察霉菌的菌落特征,學會霉菌的一般制作方法。3.觀察并掌握各種霉菌的個體形態及生長繁殖方式。4.進一步熟悉顯微鏡的使用。二.實驗原理
酵母菌是一類單細胞真菌,一般呈圓形、橢圓形,無性繁殖以芽孢為主,也有少數是裂殖,有些酵母菌能產生囊孢子,有的能形成假菌絲。酵母菌的菌落似細菌菌落,但較大且厚,多呈白色,少數為紅色。酵母菌在液體中生長可形成菌膜、菌環、沉淀和渾濁。酵母菌的細菌結構較完善,即有壁、膜、質、核等結構。酵母菌的細胞形態、繁殖方式和培養特征均為菌種鑒定的依據。
酵母活細胞新陳代謝旺盛,活力強,還原力也強,若無毒的染料進入細胞,既被還原脫色,但死細胞及代謝作用緩慢的老弱細胞無此還原力。美蘭是無毒染料,且能被活細胞還原成無色,故可用來區別細胞的死活。
霉菌是一些小型絲狀真菌、單細胞(根霉、毛霉)或多細胞(曲霉、青霉),其細胞結構與酵母類似,同屬真核細胞。
霉菌形態較復雜,個體較大,具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。其菌絲分為氣生菌絲與營養菌絲(菌絲比放線菌粗得多)觀察時請注意菌絲是否具有橫膈膜、有無假根、無性繁殖時形成何種孢子,孢子著生方式以及孢子頭的構造等,以區別各種不同霉菌的形態。
霉菌菌落由分枝狀菌絲組成,較疏松,呈毛狀、棉絮狀、絨毛狀或氈狀。由于不同霉菌形成的孢子均有不同顏色、構造、性狀,故菌落表面呈現出不同的結構和色澤特征。菌絲一般呈白色或灰白色,菌落中心的菌絲較老,先產生孢子,故常形成同心圓。三.實驗器材
1.菌種:面包酵母、根霉、曲霉、青霉。2.儀器:顯微鏡。
3.其它:生理鹽水、乳酸酚棉蘭染液、載玻片、蓋玻片、接種環、酒精燈、美蘭、鑷子、大頭針。四.步驟與方法
1.酵母菌細胞形態觀察
(1)制片:用接種環挑取一環面包酵母菌種于載玻片上的一滴美蘭染液中混勻,蓋上蓋玻片靜置4~5分鐘。蓋時先將蓋玻片的一邊與液滴接觸,然后慢慢放下,避免產生氣泡。
(2)鏡檢:用高倍鏡觀察,光線弱些,繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況,并觀察死活酵母情況。2.霉菌的形態觀察(1)制片方法:在潔凈的載玻片加一滴乳酸酚棉蘭染液,用大頭針或鑷子從菌落的不同部位菌絲體少許(連同培養基),放入載玻片上的乳酸酚棉蘭染液中,使菌絲在染液中展開,加上蓋玻片。(2)載片培養法制作霉菌標本片。(3)鏡檢。
(4)觀察毛霉、根霉、曲霉、青霉的菌落。五.結果記錄
1.酵母菌的形態觀察
繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況。2.霉菌的形態觀察
繪制鏡檢圖并描繪霉菌菌落特征。六.思考題
1.試比較酵母和細菌的形態。
2.為什么在觀察霉菌個體形態時要連同培養基一起挑起?
第五篇:霉菌毒素總結
霉菌毒素
蘇圣華
霉菌毒素是毒性很強的霉菌次生代謝產物,這些霉菌主要屬于曲菌屬,青霉菌屬以及鐮孢菌屬(Fusarium,Aspergillus,Penicillium及Alternaria species)。據估計,至少有300 種這類真菌代謝物對人類和動物具有潛在毒性,但是為大眾熟知并被廣泛研究的只有黃曲霉毒素B1(AFB1),玉米赤霉烯酮(ZON),嘔吐毒素(DON),T-2 毒素,赭曲霉毒素(OTA)以及伏馬毒素/煙曲霉毒素(FUM)。全球范圍內動物飼料、飼料原料和人類食品中都廣泛存在霉菌毒素,根據世界糧農組織的調查,世界上每年有25%的糧食受到已確認的霉菌毒素的污染。這些霉菌毒素可以通過被污染的谷物、飼料和由這些飼料喂養的動物所提供的動物性食品(奶、肉、蛋)進入我們的食物鏈。
一、黃曲霉毒素 1.黃曲霉毒素特點
黃曲霉毒素(Aflatoxin 簡稱AFT)是一類結構相似的衍生物的總稱。目前已發現的AFT 及其衍生物有20 多種,除了AFT B1、B2、G1、G2 是天然產生的毒素外,其余的都為它們的衍生物。在上述4 種天然毒素中,以B1 的毒性最強,在食品和動物飼料的AFT 檢測中,一般以B1 作為主要檢測指標。
黃曲霉毒素主要是在倉儲過程中感染感染產生的。黃曲霉生長繁殖需要一定溫度和濕度條件,溫度25 ℃ ~30 ℃、相對濕度80%~90% 是黃曲霉最適生長條件。一般南方地區黃曲霉發生率要高于北方,因南方氣溫和濕度更適于黃曲霉生長繁殖,特別在梅雨季節;因玉米、麥類、稻谷等谷物水分含量為17%~18% 時是黃曲霉生長繁殖最適條件。黃曲霉毒素耐熱,只有通過長時間高溫(100—120℃)作用,如高壓消毒和灼燒才能使其大部分失活;對強酸和強堿較敏感。在提煉油時,用氫氧化鈉萃取游離脂肪酸的工藝可以進一步破壞毒素的活性。
黃曲霉毒素以肝臟含量最高,腎、脾、腎上腺亦可檢出,有極微量存在于血液中,肌肉中一般不能檢出。AFT如不連續攝入,一般不在體內蓄積,一次攝入后約經一周即可經呼吸或由尿糞等將大部分排出。AFB1 在沒有經過代謝活化之前的母體化合物是無致癌性的,因此AFB1 被稱為前致癌物,因為它必須通過體內的生物轉化即“代謝激活或生物激活” 形成活性中間體才具有致癌性。
2、黃曲霉毒素脫毒
AFT 污染糧食的防治原則是以防為主,污染嚴重的糧食和飼料應該廢棄,對于輕度污染的糧食和飼料,則必須認真地進行脫毒處理。霉菌毒素的脫毒可有物理、化學以及生物降解等方法。2.1 化學方法
氨化法
此法是利用塑料薄膜密封被霉菌污染的飼料,然后加氨封閉一定時間,氨與AFTB1 結合后發生脫羥作用,致使AFTB1的內酯環發生裂解,達到去毒效果。一般來說,,對于含毒量在0.2 mg/ kg 以下的飼料采用0.2 %~0.4 %的氨劑量,含毒量在0.2 ~0.5mg/ kg 含毒量的飼料采用0.5 %~0.7 %氨劑量,含毒量0.6 mg/ kg 以上的飼料常用0.7 %~1.0 %的氨劑量,如果密閉時間延長,劑量可相應降低。氨化作用對黃曲霉毒素的降解作用比較顯著,但這種方法對其他霉菌毒素的作用效果較差,同時可能因氨在飼料中的殘留而影響動物的健康。另外,堿煉法也對其脫毒有效果,但用于飼料脫毒不夠方便。2.2 機械脫毒
機械脫毒是指用人工或機械的方法,將谷物和飼料中的發霉顆粒剔除,或通過機械的碾軋除去毒素含量較高的外皮而降低毒素的含量。機械脫毒主要利用霉菌毒素在谷物和飼料中的分布特點而進行,所以該方法能在一定程度上除掉因蟲鼠害、破損等霉粒。但由于該方法費時費力,而且效力很低,在現代化大規模飼料生產中很少應用。
2.3 物理脫毒
物理脫毒法主要有吸附法、水洗法、剔除法、脫胚去毒法、溶劑提取法、加熱去毒法、輻射法等。物理方法主要是通過在飼料或谷物中添加各種吸附劑,降低霉菌毒素在胃腸道的吸收,即在飼料中添加可以吸附霉菌毒素的物質,使毒素在經過動物腸道時不被動物所吸收,直接排出動物體外。在這其中吸附法是現代飼料中霉菌毒素脫毒最為有效的方法。
2.3.1 活性炭
對毒素有一定的吸附作用,但沒有選擇性,對某些營養元素及藥物也有吸附作用,因此臨床效果不佳。
2.3.2 鋁硅酸鹽類
天然鋁硅酸鹽,如沸石、蒙脫石、硅藻土、高嶺土等,天然鋁硅酸鹽礦物吸附力小,效率低,占飼料容量大,對營養物質有一定吸附,因而直接用于飼料效果不好。對天然的鋁硅酸鹽進行改性后可以改善它對霉菌毒素的選擇性吸附能力。鋁硅酸鹽類吸附劑對黃曲霉毒素有良好的吸附能力,并且有不少體內(喂養)試驗結果證實了這類吸附劑的實際效,但它們存在對玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、單端孢菌素等毒素吸附能力不足的問題。不過通過適當的改性有可能使它具有更廣泛的吸附能力。這類吸附劑的另一個缺點是,它們表現出了對維生素及礦物鹽的非選擇性吸附能力。2.3.3 酵母細胞壁提取物
從酵母培養物細胞壁中提取的甘露糖(MOS),這類新型抗原活性物質,在調整動物腸道微生態區系,在對抗有害微生物的過程中發揮重要作用。MOS 對AFT 的總結合率可達100 % ,具有添加量少,作用顯著以及結合的霉菌毒素種類范圍廣等特點。
酯化的葡甘露聚糖(EGM)是一種新型的霉菌毒素吸附劑,是從酵母細胞中提取出的功能性碳水化合物。EGM有很大的表面區域,1 kg的EGM有相當于2.2萬 m2的表面區域。其表面富含不同孔徑的孔穴,用以大面積地撲捉不同種類的霉菌毒素。而且酯化葡配甘露聚糖與霉菌毒素結合后,霉菌毒素不易被解離。所以,酯化葡配甘露聚糖對多種霉菌毒素具有較強的吸附作用,而且對飼料中其他營養成分無顯著的負作用,同時還可能對動物的其他生理功能有著積極的作用,是一種廣譜的,具有很大潛力的霉菌毒素吸附劑。
除上述方法,還有在飼料中添加營養元素,如蛋白質、氨基酸以及硒可提高肝臟的解毒能力,以轉化毒素;酶制劑高效地催化、降解AFT 為無毒物質。
二、玉米赤霉烯酮
1、玉米赤霉烯酮基本特性
一種鐮孢菌毒素,該毒素主要來源于玉米,濕度22%-25%為其產生適宜條件。熔點161 ℃~163 ℃,不溶于水,溶于堿性溶液、乙醚、苯及甲醇、乙醇等。
ZEN 可由胃腸道持續吸收, 肝腸循環可使ZEN在胃腸道滯留時間延長, ZEN主要隨糞便排出, 少量ZEN 可由乳汁排泄。豬攝入Z E A 后,其劑量的67% 在48h內被排出,尿中含45%,糞中含22%。ZEN 在動物體內主要有兩條代謝途徑,一個是經3α和3β羥基類固醇脫氫酶催化形成α和β-玉米赤霉烯醇(Zearaleno l, ZEL);另一個途徑是與葡萄糖醛酸結合。研究表明,ZEN 在不同動物肝臟轉化的主要代謝物不同,豬主要轉化為α-玉米赤霉烯醇,而奶牛主要代謝為β-玉米赤霉烯醇。α-玉米赤霉烯醇對大鼠的雌激素活性大約比ZEN 高400%,α-玉米赤霉烯醇對豬子宮內膜的雌激素受體具有較高的親和力,通過和雌激素競爭目標組織細胞上的受體發揮作用。
2、玉米赤霉烯酮的脫毒
對于玉米赤霉烯酮等霉菌毒素的解脫毒研究主要集中在吸附法和生物降解法上。2.1 物理脫毒法
研究結果表明,消除ZEN 污染最實際、有效的方法是在飼料中添加霉菌毒素吸附劑,在腸道內選擇性地吸附ZEN,使其經過消化道排出體外。研究較多的吸附劑主要有硅鋁酸鹽類和甘露聚糖。其中以硅鋁酸鹽類吸附劑研究應用最為廣泛。
未經修飾的硅鋁酸鹽類對ZEN的吸附能力不佳,經十六烷基吡啶鎓或十六烷基三甲基銨溴化物等對硅鋁酸鹽類吸附劑進行化學改性,以增強硅鋁酸鹽表面的疏水性,從而增加對ZEN的吸附能力。
消膽胺具有顯著降低ZEN 腸吸收的作用,尤其是2% 組使ZEN的小腸吸收率由32% 顯著降低到16%。經試驗證實,消膽胺可以作為一種飼料添加劑防止母豬的雌激素過多癥。
研究表明,通過酶解的方法從酵母的細胞壁提取出的葡甘露聚糖可以結合飼料、谷物中大部分的ZEN。胞壁上的β葡聚糖等多糖是細胞壁吸附的主體,疏水作用在其中起著重要作用。熱處理或酸處理時,細胞壁多聚糖和肽聚糖的糖苷鍵或者肽鍵斷裂,使肽聚糖結構變薄而孔徑增大,菌體對真菌毒素的吸附能力增加。試驗結果表明,酵母細胞壁可以吸附ZEN 2.7 mg/kg,并且這種吸附平衡可以在10 min 內達到。甘露聚糖由酵母細胞內壁提取而得,對ZEN 有一定的吸附作用。Swamy 等進行的體內試驗結果表明,甘露聚糖可使豬避免ZEN 造成的生產性能下降。
2.2生物降解
應用微生物生成的特殊酶來分解或使ZEN 變性。此類脫毒法條件溫和,可將毒素徹底分解而不會有毒性物質殘留,只針對ZEN 起作用而不會破壞飼料和原料中的其他成分。
三、單端孢霉烯族毒素
1、單端孢霉烯族毒素含有特征性的12,13-環氧-單端孢霉-9-烯環結構,根據它們的化學結構的不同,分成4 種類型:目前已經鑒定了超過200 種單端孢霉烯族毒素,但是主要污染食品和飼料的單端孢霉烯族毒素是A(T-2 毒素、HT-2 毒素)、B(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、雪腐鐮刀菌烯醇(NIV))型單端孢霉烯族毒素。
潮濕、溫和多雨的氣候有利于DON生長。有研究認為9天以上的陰雨天和21℃的平均氣溫為其生長最適條件。
2、單端孢霉烯族毒素的脫毒
對于DON、T-2等單端孢霉烯族毒素的脫毒研究,物理處理的效果常常不太理想,并且往往會改變營養成分。雖然許多化學處理能顯著降低單端孢霉烯族毒素的濃度,但可能會降低食物和飼料中的營養價值,也有可能殘留有害物質,這些副作用限制了它們的應用。目前,能有效轉化單端孢霉烯族毒素的微生物不多,它們主要來源于動物腸道、土壤、植物等自然環境中。生物方法通過脫環氧化、羰基化、羥基化、水解及葡萄糖苷酸化等反應,在溫和的條件下,將單端孢霉烯 族毒素轉化成低毒或無毒產物。
2.1 牛瘤胃液中分離得到菌株BBSH 797,主要的作用是在體內和體外將DON 轉化成DOM-1。后來證明,菌株BBSH797 也能轉化A 型單端孢霉烯族毒素,脫環氧作用,例如將SCP 轉化成脫環氧SCP,或者脫乙酰作用,將T-2 毒素轉化成HT-2 毒素。后者毒性均明顯小于前者。
2.2 從雞腸道消化物中分離純化和鑒定了細菌菌株LS100(IDAC180507-1)和SS3,檢驗了它們對12 種單端孢霉烯族毒素的轉化能力。轉化的類型與它們的分子結構有關。對無乙酰化的單端孢霉烯族毒素例如DON、NIV 和疣孢霉素,脫環氧代謝物是主要的的轉化產物。但是,單乙酰單端孢霉烯族毒素3-ADON,15-ADON 和鐮刀菌烯酮X 主要轉化成脫乙酰產物。二乙酰單端孢霉烯族毒DAS 和NEO僅表現出脫乙酰作用。T-2 毒素也僅有脫乙酰作用,而HT-2 毒素和T-2 三醇普遍的反應是脫環氧作用。大鼠腸道微生物將T-2 毒素轉化成脫環氧產物,脫環氧HT-2,脫環氧T-2 三醇,進一步轉化成T-2 四醇和SCP。
除此以外,單端孢霉烯族毒素是谷類農作物中比較常見的真菌毒素,它們具有很強的物理化學穩定性,但是它們在自然環境中并沒有蓄積,這表明自然環境中可能存在著DON 生物轉化降解作用。土壤、水體等自然環境被作為篩選單端孢霉烯族毒素轉化微生物的來源。植物病原物微生物也可通過脫環氧化以及脫乙酰化來降解毒素。
四、赭曲霉毒素